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Hormona Antimülleriana (AMH) como predictor del potecial reproductivo en bovino (Brangus)
Anduaga Marchetti Iván1,2, Lambrechts Pablo3, Genesio Karina2, Grunwaldt Mercedes4,
Cano Natalia1, Rautenberg Gisela1, Avendaño Conrado2 y Vautier Ricardo4
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ZYVOT, Córdoba 5000. [email protected].
2
NASCENTIS, Córdoba 5000.
3
EL
BAGUAL, Formosa 3600. 4 BIOTECNA, Corrientes 3400.
RESUMEN: The concept of ovarian reserve (OR) refers to the pool of antral follicles in the
ovary available for procreation. AMH is secreted by the granulosa cells in the ovary and has
been used recently to assess the OR in both, human and bovine. We have evaluated in this
work the possible correlation between serum AMH concentrations with the number of
retrieved oocytes and cleaved embryos. Samples were divided in two groups: Group A
15
retrieved oocytes and Group B > 15 retrived oocytes. There was a significant difference in
the AMH concentration between groups, p=0.016. On the other hand there was a significant
correlation between AMH and retrieved oocytes, p=0.0001. However, we did not find
correlation with the number of cleaved embryos. Our results have shown that AMH is a good
biomarker of ovarian reserve and can be used to predict the reproductive potential of the
animal.
INTRODUCCION: El concepto de reserva ovárica (RO) hace referencia al pool de folículos
antrales en el ovario disponibles para la procreación. Evaluar la RO nos brinda información
sobre el potencial reproductivo (PR) del animal y se estima con el recuento ecográfico de
folículos y/o determinación de la Hormona Antimülleriana (AMH). Esta hormona fue
empleada en reproducción humana (de Vet et al., 2002) y en bovinos (Batista et al., 2014).
La AMH es una glicoproteína dimérica de 140 KDa. En la mujer, es producida por las células
de la granulosa y se expresa desde el nacimiento hasta la menopausia (Kumar et al., 2010),
está implicada en la inhibición del reclutamiento folicular y en reducir la sensibilidad de
folículos a la FSH (Durlinger et. al., 2001). La AMH es un biomarcador endócrino,
independiente del ciclo estral en mamíferos, que depende del pool de folículos remanentes
en el ovario. En humanos su concentración se asocia con el número de folículos antrales (de
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Vet et al., 2002) y es indicador del estado funcional del ovario, mejor que otros marcadores
como la inhibina B, FSH, LH y estradiol, (Fanchin et. al., 2003).
En bovinos la AMH ha sido propuesta como predictor del número de folículos antrales
(Batista et al., 2014), de la producción de embriones (Monniaux et al., 2011) y se ha
determinado la concentración de AMH en ciclo natural y sincronizado (Pfeiffer et al., 2014).
El objetivo del siguiente estudio fue demostrar el valor predictivo de la AMH como
biomarcador efectivo del potencial reproductivo de vacas y consecuente producción de
ovocitos y embriones, de forma independiente del ciclo estral del animal.
MATERIALES Y METODOS: Se estudiaron 22 vacas de raza Brangus entre noviembrediciembre de 2014. Todos los animales fueron sincronizados: el día cero con benzoato de
estradiol 4mg (Sintex SA, Argentina), prostaglandina 500µg (Ciclase DL, Sintex SA,
Argentina), progesterona 0,5 g (DIB 0,5, Sintex SA, Argentina), el día cinco se retiró el DIB,
el día seis se realizó la aspiración folicular (OPU) y recolección de muestras de sangre, el
cual fueron refrigeradas a 4ºC, centrifugadas 20 minutos a 3000 g, y el plasma conservado a
-20 ºC hasta su análisis.
Los ovocitos fueron madurados in vitro por 24 hs. La inseminación y cultivo in vitro de
embriones se realizó bajo protocolos del laboratorio, en incubadora bi-gas Thermo Scientific.
La concentración de AMH sérica fue determinada con el kit AMH GEN ELISA II (Beckman
Coulter Inc., Brea, USA), con una sensibilidad de 0.002 ng/ml (Kumar et al., 2010).
Se determinó el valor de AMH sérico y su correlación con: i) número de ovocitos
recuperados y ii) número de embriones clivados a día 3. Se comparó el valor medio de AMH
en dos grupos: A)
15 y B) >15 ovocitos recuperados. Estadísticamente se empleó una
regresión lineal mediante ANOVA, U-test y Spearman, el nivel de significancia fue p 0.05.
RESULTADOS: Las concentraciones de AMH fueron: mínima 0,067 ng/ml y máxima 1,39
ng/ml. Existe una correlación positiva y significativa entre la concentración de AMH y el
número de ovocitos recuperados (p=0,0001, r=0,72 y r2=0,52) (gráfico). Existe una diferencia
significativa (p=0,016) en la concentración de AMH: 0,24 ng/ml ± 0,16 (n=10) vs 0,54 ng/ml ±
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0,34 (n=12) para los grupos A y B respectivamente. No existen correlación significativas
entre la concentración de AMH y el número de embriones clivados a día 3.
DISCUSION: Este estudio representa el primer reporte que evalúa la concentración de AMH
sérica en Argentina, para la raza Brangus y su correlación con el número de ovocitos y
embriones. Los datos demuestran que la AMH correlaciona con el número de ovocitos
obtenidos para esta raza, r=0,72, y que las concentraciones difieren cuando el número de
ovocitos recuperados es menor o mayor a 15, sin embargo estas concentraciones no
representan valores de corte o referencia. La AMH tiene ventajas por sobre otras hormonas
para predecir el PR del animal, puede dosarse en cualquier día del ciclo estral ya que no
depende de él, tiene mejor correlación que la FSH, LH, estradiol e inhibina B (Fanchin et. al.,
2003), y no difiere su valor en ciclos naturales respecto a sincronizados (Pfeiffer et. al.,
2014). Así mismo, puede emplearse el recuento folicular como estudio complementario.
Contrariamente a lo hallado por otros autores (Monniaux et. al, 2011), en este estudio no se
ha observado una correlación significativa entre el número de embriones producidos y el
dosaje de AMH. Probablemente el tamaño de muestra es insuficiente para validar esta
correlación, más aun teniendo en cuenta que el número de embriones obtenidos es inferior
al número de ovocitos recolectados. Es necesario ampliar este estudio con el fin de
determinar un valor de corte para la AMH y el número de ovocitos.
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CONCLUSIONES: La concentración de AMH sérica correlaciona positivamente con el
número de ovocitos obtenidos tras una OPU. La AMH es un buen biomarcador endócrino y
puede emplearse como herramienta diagnostica del potencial reproductivo del animal.
AGRADECIMIENTOS: Immunotech y Bio Analytical SRL por aportar el kit Beckman Coulter
AMH GEN ELISA II.
REFERENCIAS
Batista EO; Macedo GG; Sala RV; Ortolan MD; Sa Filho MF; Del Valle TA; Jesus EF; Lopes
RN; Renno FP; Baruselli PS., 2014. Plasma Antimullerian Hormone as a Predictor of
Ovarian Antral Follicular Population in Bos indicus(Nelore) and Bos taurus (Holstein) Heifers.
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Durlinger AL; Gruijters MJ; Kramer P; Karels B; Kumar TR; Matzuk MM; Rose UM; de Jong
FH; Uilenbroek JTJ; Grootegoed JA; Themmen AP., 2001. Anti-Mullerian hormone
attenuates the effects of FSH on follicle development in the mouse ovary. Endocrinology.
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Fanchin R; Schonauer LM; Righini C; Guibourdenche J; Frydman R; Taieb J., 2003. Serum
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Kumar A; Kalra B; Patel A; McDavid L., 2010. Roudebush WE. Development of a second
generation anti-Müllerian hormone (AMH) ELISA. J. Immunol Methods. 362,71–79.
Manniaux D; Baril G; Laine A; Jarrier P; Poulon N; Cognie J; Fabre S., 2011. Antimullerian
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Pfeiffer ke; Jury LJ; Larson JE. 2014. Determination of anti-Müllerian hormone at estrus
during a synchronized and a natural bovine estrous cycle. Domestic Animal Endocrinology.
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