Sensibilidad antimicrobiana. Combinación de antimicrobianos. Técnica del tablero Área Microbiología Lic. Andrea Arismendi Permite evaluar combinaciones de agentes antimicrobianos frente a un determinado microorganismo Los tubos o pocillos que se utilizan forman un tablero (como el de ajedrez) con las múltiples diluciones seriadas de los antimicrobianos Se usan placas de multipocillos Se utiliza cepas de microorganismos cuyos CIM para ambos antimicrobianos sean conocidos (calculados con anterioridad). Antimicrobiano A En el eje de las X se coloca concentraciones crecientes del antimicrobiano A, desde menor a mayor concentración. Las columnas poseen las mismas concentraciones. En el eje de las Y se colocan las concentraciones del antimicrobiano B. Las filas poseen las mismas concentraciones La primera casilla corresponde al 0 de CIM. Quedan considerada todas las posibles combinaciones de diluciones. Antimicrobiano B 1 A B C D E F G H 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Preparación del inóculo Calcular el volumen de suspensión para adicionar a 25 ml de agua y tener una concentración final del microorganismo de 3x105 a 5x105 UFC/ml en cada well. Aislado de un cultivo puro, la suspensión se ajusta a escala McFarland 0,5 de turbidez ( = 1,5x108 UFC/ml). Se hace dilución 1:31 para alcanzar una concentración 4x106 a 5x106 UFC/ml → 1,5x108 / 31 = 4x106 UFC/ml. C1.V1=C2.V2 → 1,5x108 UFC/ml.V1 = 5x106 UFC/ml.25 ml V1= 0,8 ml Como cada well posee 100 µl de caldo + ATB, al agregar 100 µl de la suspensión se diluye al doble, por ende se tiene en cada well una concentración de 4x104 a 5x104 UFC o 4x105 a 5x105 UFC/ml (se diluye a la mitad) Cálculos Para ver los efectos de los antimicrobianos juntos hay que calcular la Concentración Inhibitoria Fraccionaria (FIC) FIC del agente A = CIM del agente A en combinación CIM del agente A solo FIC del agente B = CIM del agente B en combinación CIM del agente B solo ƩFIC = FIC de A + FIC de B Interpretación de la sumatoria Los efectos de la actividad combinada pueden ser: Indiferencia: la actividad de los antimicrobianos no difieren de los efectos solos. 0,5 < X ≤ 4 Sinergismo: La actividad de los dos antimicrobianos es mayor que la actividades separados de los mismos. X ≤ 0,5 Antagonismo: La actividad de los antimicrobianos es menor. X > 4 Sinergismo parcial: se define cuando ƩFIC = 0,5 < X < 1. Su designación es controversial. Indiferente Amicacina (µG/ml) Azlocilina (µG/ml) • FIC Az = 128/128 =1 • FIC Am= 1/32 = 0,03125 • ƩFIC = 1,03 • Indiferencia: 0,5 < X ≤ 4 • Sinergismo: X ≤ 0,5 • Antagonismo: X > 4 • Sinergismo parcial: 0,5 < X < 1 Sinergismo Amicacina (µG/ml) Azlocilina (µG/ml) • FIC Az = 32/128 = 0,25 • FIC Am= 4/32 = 0,125 • ƩFIC = 0,375 • Indiferencia: 0,5 < X ≤ 4 • Sinergismo: X ≤ 0,5 • Antagonismo: X > 4 • Sinergismo parcial: 0,5 < X < 1 Pseudosinergismo Amicacina (µG/ml) Azlocilina (µG/ml) • FIC Az = 2/128 = 0,016 • FIC Am= 16/32 = 0,5 • ƩFIC = 0,516 • Indiferencia: 0,5 < X ≤ 4 • Sinergismo: X ≤ 0,5 • Antagonismo: X > 4 • Sinergismo parcial: 0,5<X<1 Antagonismo Amicacina (µG/ml) Azlocilina (µG/ml) • FIC Az = 512/128 = 4 • FIC Am= 1/32 = 0,031 • ƩFIC = 4,031 • Indiferencia: 0,5 < X ≤ 4 • Sinergismo: X ≤ 0,5 • Antagonismo: X > 4 • Sinergismo parcial: 0,5<X<1
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