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Efectos Biológicos del propóleos en líneas
celulares beta pancreática, tumorales y
fibroblastos
Sergio Wehinger Wehinger
Línea Alimentación y Envejecimiento
Sub Línea Enfermedades Cardiovasculares, Dislipidemias y E.O.
Tercera Jornada PIEI-ES, noviembre 2015
Toreti V. et al 2013
PROPÓLEOS
Barrientos, Herrera et al. 2013, Kurek-Górecka,
Rzepecka-Stojko et al. 2013
Producto resinoso
recolectado por las abejas.
Lo obtienen a partir de
yemas, brotes y heridas de
arboles de hoja caduca y se
mezcla con secreciones de la
glándula mandibular
Algunos compuestos fenólicos y
flavonoides típicos presentes en
el propóleos
EFECTO DEL CONSUMO DE PROPÓLEOS SOBRE
STRESS OXIDATIVO EN ADULTOS DE TALCA
Objetivo general
Evaluar el efecto de Propóleos sobre marcadores de estrés oxidativo en
adultos de la ciudad de Talca
Investigadores: Elba Leiva, Verónica Mujica, Roxana Orrego, Luis Guzmán, Sergio Wehinger
Alumnos: Paula Romero, Felipe Muñoz, Jorge Pérez, Jeanette San Martín
Proyecto FIC-Región del Maule 2013-2016
Métodos
Muestra voluntaria a 80 sujetos de 30 a 60 años. Selección aleatoria doble ciego:
Propóleos-Placebos. Consumo durante 90 días, 30 gotas diarias
Evaluaciones 45 y 90 días : Parámetros Metabólicos: Glicemia, HbA1c y lípidos.
PCR y Stress Oxidativo.
Análisis estadístico :Test de Shapiro-Wilk para distribución normal de las variables.
T test paread o para variables paramétricas . Mann-Whitney test para variables
no paramétricas. Se consideró un valor p<0,05 como estadísticamente significativo.
El estudio contó con aprobación del Comité de Ética de la Universidad de Talca.
Propóleos
n = 35
Placebo
n= 33
Edad (años)
48+12
44+14
Peso (kg)
73,8+16,6
74,1+14,5
IMC
27,9+4,8
28,3+4,7
CC (cm)
91,7+13,9
92,8+12,2
PAS (mmHg)
125,2+10,6
123,1+13,1
PAD (mmHg)
79,6+10,1
77,8+8,1
Voluntarios
Lípidos
(mg/dl)
Pretratamiento
Posttratamiento
Valor p
Col T
187,8+33,1
198,6+41,9
0,0051
Col LDL
108,1+41,63
113,8+33,2
0,0820
Triglicéridos
116,7+58,5
126,5+71,6
0,1704
Col HDL
56,4+16,4
60,7+19,5
0,0064
Propóleos indujo un aumento significativo del cHDL
Propóleos
Placebo
Propóleos
Propóleos redujo los niveles de TBARS y
aumentó
el
GSH,
sugiriendo
una
disminución en el estrés oxidativo en los
voluntarios
Placebo
Efecto protector del propóleos sobre la
célula beta pancreática sometida a estrés
oxidativo
Fisiopatología DIABETICA
Giacco, F. and M. Brownlee, Oxidative stress and diabetic complications. Circulation
research, 2010. 107(9): p. 1058-1070.
Baynes, J.W. and S.R. Thorpe, Role of oxidative stress in diabetic complications: a new
perspective on an old paradigm. Diabetes, 1999. 48(1): p. 1-9.
Baynes, J.W. and S.R. Thorpe, The role of oxidative stress in diabetic complications.
Current Opinion in Endocrinology, Diabetes and Obesity, 1996. 3(4): p. 277-284.
Obesidad
Ácidos grasos libres
La oxidación excede las
defensas antioxidantes
Yoshikawa and Naito 2002
↑ROS
β
Lipotoxicidad
Adipoquinas
Inflamación
Estrés oxidativo
Insulinoresistencia
Maritim,
Sanders et al.
2003
Hiperglicemia
↓Antiox
Glucotoxicidad
Lenzen 2008
Otros factores
Objetivo general
Evaluar el efecto de un extracto de propóleos frente al
estrés oxidativo inducido por H2O2 y t-BOOH en células β
pancreáticas de la línea MIN-6 y β TC-6.
Investigadores: Sergio Wehinger, Elba Leiva
Alumno: Sebastián Zagmutt
RESULTADOS
VIABILIDAD
CELULAR
A
B
Los EP protegen a las células β frente al E.O. in vitro
Ensayo de Viabilidad en células MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.
En A se presentan los resultados de viabilidad celular de la línea celular MIN-6 (barras negras) y β TC-6 (barras grises)
utilizando H2O2 como oxidante y en B se presenta los resultados de la viabilidad celular de la línea MIN-6 (barras negras) y
β TC-6 (barras grises) utilizando t-BOOH como oxidante . Los resultados se presentan como promedio ± DS. (n = 3).
ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001
LIPOPEROXIDACIÓN
A
B
La incubación con EP disminuyen la lipoperoxidación en células β expuestas a E.O. in vitro
Concentración de TBARs en la línea MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.
En A se presentan la concentración de TBARs en la línea celular MIN-6 a las 24 (barras blancas) y 48 (barras grises) horas
de incubación y en B se presenta presentan la concentración de TBARs en la línea celular β TC-6 a las 24 (barras blancas) y
48 (barras grises) horas de incubación, bajo las condiciones de estudio. Los resultados se presentan como promedio ± DS. (n
= 3). ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001
GLUTATIÓN REDUCIDO
A
B
La incubación con E.P. restablecen los niveles de GSH en células β expuestas a E.O. in vitro
Concentración de GSH reducido en la línea MIN-6 y β TC-6 expuestas a H2O2, t-BOOH y EP.
En A se presentan los resultados de la concentración de GSH reducido en la línea celular MIN-6 expuestas a H2O2, (barras oscuras)
y t-BOOH (barras grises) y en B la línea celular β TC-6 expuestas a H2O2, (barras oscuras) y t-BOOH (barras grises). Los
resultados se presentan como promedio ± DS. (n = 3) ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test *** = p < 0,001
ENSAYO DE APOPTOSIS POR ANEXINA V
A
Viables
B
Apoptóticas
C
Necróticas
Propóleos inhibe la apoptosis inducida por estrés oxidativo in vitro en células β-TC6
Porcentaje de células β TC-6 marcadas con Anexina V y Yoduro de propidio
En A se presentan las células β TC-6 viables (anexina V y IP negativas) en B se presentan el porcentaje de células β TC-6 anexina V
positivas (apoptóticas) y en C se presentan las células IP positivas (necróticas). Las barras negras representan la incubación con H2O2 y
las barras plomas representan la incubación con t-BOOH Los resultados se presentan como el porcentaje promedio ± DS. (n = 3)
ANOVA una vía, p < 0,0001, Dunnett’s post hoc test * p < 0,05, *** = p < 0,001
RESUMEN
t-BOOH
H2O2
Lipoperoxiación
MDA
APOPTOSIS
t-BOOH
2 GSH
H2O2
GS-SG
PROPÓLEOS
Efecto de extractos de propóleos
sobre la migración y proliferación de
fibroblastos in vitro
Investigadores: Sergio Wehinger, Elba Leiva
Alumno: Felipe Romero
INTRODUCCIÓN
CICATRIZACIÓN DE HERIDA
Existen efectos anómalos en la cicatrización de herida, los cuales son
provocados por desórdenes fibroproliferativos en la dermis. (8)
 Formación de queloide (Tejido fibroso de color rosado)
 Cicatrización hipertrófica (Lesión fibrosa eritematosa)
QUELOIDE
CICATRIZACIÓN HIPERTRÓFICA
PROLONGACIÓN FASE INFLAMATORIA
Factor de crecimiento transformador β 1 y β 2 (TGF β 1 y β 2)
Factor de crecimiento epidérmicos (EGF)
PROPÓLEOS EN CICATRIZACIÓN ANÓMALA
 Actúa restableciendo la acción del Interferón I y II (INF I y II), produciendo una inhibición en la
proliferación y migración de fibroblastos evitando una formación excesiva de colágeno. (9)
Objetivo general
Evaluar los efectos cicatrizantes de extractos de propóleos a través de ensayos de cierre de
herida y proliferación en una línea celular de fibroblastos de ratón NIH-3T3 in vitro.
Proliferación de fibroblastos NIH-3T3 en presencia de extractos de
propóleos
Absorbancia a 570 nm
(veces el tiempo inicial)
4,5
4
3,5
E1
Series1
2,5
Series2
E2
2
Series3
Control
1,5
de
la
velocidad
de
proliferación de las células NIH-3T3 en
presencia de extractos de propóleos.
1
0,5
0
Velocidad de proliferación (pendiente)
Comparación
3
20 μg/ml
31h
24 2h
3 h
48
Proliferación Celular de Fibroblastos NIH3T3 mediante el ensayo de MTT.
20 μg/ml
Ensayo de cierre de
herida in vitro
RESULTADOS
Los extractos de propóleos inhibieron la
proliferación y migración de fibroblastos
*p<0,05
**p<0,001
***p<0,001
Evaluación del Efecto antitumoral de
dos Extractos de Propóleos de la
Región Centro Sur en Líneas Celulares
de Cáncer
Investigadores: Sergio Wehinger, Elba Leiva
Alumno: César Sepúlveda
Objetivo general
Evaluar los efectos citotóxicos y pro-apoptóticos de extractos de propóleos en células de líneas
celulares tumorales humanas de colon HT-29 y de mama MCF-7

Líneas Tumorales
•
•
MCF-7
Carcinoma de células
epiteliales de glándula
mamaria
Sobreexpresión oncogén
WNT7B
•

Líneas tumorales
•
•
HT-29
Adenocarcinoma de
colon
Sobreexpresión de p53
no funcional
•
Viabilidad en presencia de propóleos
HT-29
MCF-7
*p<0,05
**p<0,001
***p<0,001
Los extractos de propóleos disminuyeron la viabilidad
HT29 y MCF-7 de manera significativa desde los 30 μg/ml
Proliferación celular en presencia de propóleos
HT-29
MCF-7
vs tiempo 3 h
*p<0,05
**p<0,001
***p<0,001
•vs E1
p<0,05
20 μg/ml
#vs E2
p<0,05
Los extractos de propóleos inhibieron la proliferación de
HT29 y MCF-7 de manera significativa
20 μg/ml
GRACIAS