Se publica con permiso de The Royal Society of Chemistry (RSC) a nombre del Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) y RSC. Fuente: http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2012/cc/c2cc90157a/unauth#!divAbstract Ciclofanos: receptores selectivos para el reconocimiento de moléculas de interés biológico Nelson Núñez Dallos Ciclofanos: receptores selectivos para el reconocimiento de moléculas de interés biológico Nelson Núñez Dallos M. Sc., estudiante de doctorado en Química en la Universidad de los Andes [email protected] El diseño y desarrollo de nuevos receptores para el reconocimiento selectivo de iones metálicos y moléculas biológicamente importantes, han adquirido importancia en los últimos años debido a sus aplicaciones en biología y medicina. Entre estos receptores se destacan los ciclofanos, que son sistemas cíclicos con una cavidad bien definida, y actúan como anfitriones con la capacidad de encapsular iones y moléculas huésped en su interior. En este artículo se presentan avances recientes del uso de ciclofanos solubles en agua como quimiosensores selectivos para el reconocimiento y detección de glucosa, con posible aplicación en el monitoreo de glucosa en personas diabéticas. También se muestra el potencial de estos sistemas como moléculas quelantes en el tratamiento de enfermedades asociadas a la acumulación localizada de metales, tales como el Parkinson y el Alzheimer, entre otros ejemplos. Las moléculas presentan dos tipos de interacciones, principalmente: interacciones covalentes y no covalentes. Las covalentes corresponden a los enlaces fuertes que existen entre los átomos para formar la estructura de las moléculas, y las no covalentes, a las interacciones débiles que existen entre las moléculas. Estas últimas se conocen como interacciones intermoleculares, y constituyen el campo de estudio de la química supramolecular. En los últimos años, la química supramolecular se ha enfocado en el diseño y síntesis de nuevos receptores moleculares útiles para el reconocimiento selectivo de moléculas de importancia biológica y química. Este reconocimiento molecular selectivo está regido por fuerzas no covalentes entre una molécula anfitriona y una molécula huésped, y es llamado reconocimiento anfitrión-huésped. Entre los receptores moleculares útiles para la química del reconocimiento anfitrión-huésped se destacan los ciclofanos. Por tener una estructura rígida con una cavidad bien definida, estos actúan como anfitriones que pueden encapsular y estabilizar moléculas huésped por medio de diversas interacciones no covalentes. El reconocimiento molecular corresponde a la interacción entre dos moléculas, y generalmente está regido por una sola fuerza o una combinación de fuerzas no covalentes, tales como puentes de hidrógeno, enlaces de coordinación con metales, interacciones hidrofóbicas, apilamiento π, Van der Waals, e interacciones electrostáticas [1]. El entendimiento de la importancia del reconocimiento molecular en diversos procesos biológicos que involucran enzimas, ácidos nucleicos y anticuerpos, entre otros, ha ayudado a los químicos a diseñar sistemas sintéticos análogos con propiedades interesantes [2]. El diseño de receptores para una molécula huésped específica requiere un conocimiento de las características 76 Hipótesis, Apuntes científicos uniandinos, núm. 18, 2015 estructurales, así como de las interacciones intermoleculares favorecidas para dicha molécula. Aunque las interacciones no covalentes son más débiles que los enlaces covalentes, el efecto cooperativo de varias de estas interacciones ayudará a reforzar el proceso de reconocimiento selectivo. Por lo tanto, los receptores que tengan distintas posibilidades de unión a la molécula de interés mediante interacciones no covalentes serán sondas moleculares selectivas y eficientes [1, 2]. En los últimos años el diseño y desarrollo de receptores moleculares selectivos de moléculas biológicamente importantes, tales como aminoácidos, proteínas, carbohidratos, nucleótidos y ácidos nucleicos, han adquirido mucha importancia debido a sus posibles aplicaciones en biología y medicina [2, 3]. Entre esos estudios se destaca el uso de diversos ciclofanos funcionalizados para el reconocimiento selectivo de biomoléculas importantes. Los ciclofanos se pueden definir como una clase de compuestos cíclicos que constan de unidades aromáticas unidas entre sí a través de puentes adecuados y grupos espaciadores (figura 1). El tamaño de la cavidad y las propiedades exhibidas por estos sistemas se pueden modificar variando la parte aromática, la unidad de puente o los grupos espaciadores. Estos sistemas cíclicos tienen una cavidad de tamaño definido y son eficientes en la encapsulación y la estabilización de moléculas huésped en el interior de la cavidad mediante diversas interacciones no covalentes. Esta propiedad característica de los ciclofanos ha sido ampliamente estudiada para desarrollar sondas selectivas de una variedad de moléculas huésped [2, 4]. Debido a la facilidad de funcionalización, los ciclofanos se han utilizado como receptores de aniones, cationes y moléculas neutras, pero también de biomoléculas tales como aminoácidos, proteínas, carbohidratos, nucleósidos, nucleótidos y ácidos nucleicos. La presencia de una cavidad bien definida y una alta solubilidad en agua hacen a los ciclofanos ideales para el reconocimiento biomolecular. Sin embargo, aunque varios derivados Unidad puente Favorece interacciones electrostáticas de ciclofanos se han utilizado con eficacia en la formación de complejos anfitrión-huésped, el diseño de ciclofanos solubles en agua que retienen la capacidad de reconocimiento en medio acuoso ha sido difícil [4,5]. A continuación se muestran algunas aplicaciones de los ciclofanos como receptores selectivos para el reconocimiento de moléculas de interés biológico. LECTINA SINTÉTICA: CICLOFANO PARA EL RECONOCIMIENTO Y DETECCIÓN DE GLUCOSA Una aplicación clave de los receptores selectivos de glucosa es el monitoreo de glucosa en personas diabéticas. El reconocimiento de carbohidratos en solución acuosa es un desafío para la química supramolecular. Los carbohidratos son especies hidrofílicas, y por lo tanto difíciles de extraer del agua. Por tener varios grupos hidroxilos, los carbohidratos no pueden ser distinguidos fácilmente por los receptores naturales o sintéticos, ya que se confunden con las moléculas de agua. En un estudio reciente se reportó la obtención de una lectina sintética para el reconocimiento y detección de glucosa. Esta nueva lectina sintética soluble en agua consiste en un receptor molecular cíclico tipo ciclofano (figura 2) [3]. Se encontró que la lectina sintética se une a la glucosa con excelente selectividad, en comparación con otros monosacáridos comunes (por ejemplo, 50:1 frente a la galactosa), y tiene la afinidad suficiente para detectar glucosa en concentraciones encontradas en la sangre. Este nuevo receptor también presenta características convenientes de emisión de fluorescencia, que responden a la unión con el sustrato y proveen un sistema de señalización para la detección de glucosa. La estructura tridimensional de este macrociclo y su complejo con metil β-Dglucósido se muestra en la figura 3. En el complejo, el receptor forma cuatro puentes de hidrógeno intermoleculares NH---O con cuatro oxígenos del sustrato; también se presentan seis contactos CH-π entre el sustrato y el receptor (figura 3b) [3]. Grupo espaciador Controla el tamaño de la cavidad y la rigidez NH2 H2N O PFPO PFPO i.Alta dilución ii.CF3CO2H luego NaOH O Y O Y = NHC(CH2OCH2CH2CO2t Bu)3 PFP = Pentafluorofenil O NH O −O O O O O −O O −O Parte aromática Facilita apilamiento π e interacciones π-catión Cavidad Estabiliza los complejos de inclusión Figura 1. Representación esquemática de los sitios de unión en un ciclofano funcionalizado. Fuente: ilustración del autor. O O NH NH NH NH O O O O− O− O O O O O− O NH O Figura 2. Síntesis y estructura de una lectina sintética para el reconocimiento y detección de glucosa. Fuente: adaptada con permiso de Macmillan Publishers Ltd.: Nature Chemistry, referencia [3], copyright (2012). Universidad de los Andes, Facultad de Ciencias 77 Figura 3. a) Estructura tridimensional más estable de la lectina sintética. Las cadenas laterales que hacen al compuesto soluble en agua se omiten para mayor claridad. b) Estructura del complejo de lectina sintética con metil β-D-glucósido. Fuente: adaptada con permiso de Macmillan Publishers Ltd.: Nature Chemistry. Referencia [3], copyright (2012). Convención para el color de los átomos N: azul, O: rojo, C: negro, H: blanco CICLOFANOS PARA EL RECONOCIMIENTO DE NUCLEÓSIDOS Y NUCLEÓTIDOS Recientemente, se sintetizó una serie de nuevos ciclofanos solubles en agua que contienen unidades de antraceno conectadas entre sí por diferentes unidades puente y grupos espaciadores. En ese estudio se investigó la interacción de los ciclofanos con diversos nucleósidos y nucleótidos bajo condiciones de pH fisiológico, y se encontró que uno de los ciclofanos forma complejos estables únicamente con 5’-ATP (adenosín trifosfato) y 5’-GTP (guanosín trifosfato), mediante múltiples interacciones no covalentes (figura 4) [2, 6]. Para la detección selectiva de 5’-ATP y 5’-GTP en buffer y en fluidos biológicos se realizó un ensayo de desplazamiento del indicador de fluorescencia (en inglés, FID: fluorescence indicator displacement), usando 8-hidroxi-1,3,6-pireno trisulfonato (HPTS) como indicador fluorescente. El ensayo de desplazamiento del indicador de fluorescencia permite que un indicador se una reversiblemente a un receptor, seguido por el desplazamiento del indicador a través de una competencia con el analito. En este proceso las propiedades ópticas del indicador cambian notablemente. Cuando se realizó la titulación del ciclofano con N HPTS se observó una desaparición completa de la intensidad de fluorescencia de HPTS. El complejo no fluorescente formado (ciclofano•HPTS) se tituló con varios nucleósidos y nucleótidos. Esto llevó al desplazamiento de HPTS del complejo y provocó la reactivación de la intensidad de fluorescencia (figura 5). Se observó que 5’-GTP produjo el máximo desplazamiento de HPTS del complejo Ciclofano•HPTS, con un aumento 150 veces mayor en la intensidad de fluorescencia, mientras que el incremento en la intensidad fue 45 veces mayor con el nucleótido 5’-ATP, que es estructuralmente similar a 5’-GTP [2, 7]. Los resultados del estudio de la interacción de estos ciclofanos con varios nucleósidos y nucleótidos indicaron que la rigidez y tamaño de la cavidad, la superficie aromática y la naturaleza de unidades puente dictan la estabilidad del complejo supramolecular, y por lo tanto dirigen las propiedades de reconocimiento biomolecular de estos ciclofanos [4]. AMINOÁCIDOS MACROCÍCLICOS: CICLOFANOS COMO RECEPTORES DE IONES METÁLICOS Los ciclofanos también se describen como macrociclos por tratarse de moléculas cíclicas con tres o más potenciales átomos donadores de electrones (por ejemplo, N, O), que pueden enla- Interacciones electrostáticas N Apilamiento π Cavidad PO44− ° 10,35 A 4CI N N Base NH2 O O P O O O P O N O O P N O O N Azúcar N Antraceno O 5'-ATP OH OH 4,4'-bipiridina Figura 4. Representación esquemática del reconocimiento de 5’-ATP por un ciclofano soluble en agua que contiene unidades de antraceno como parte aromática y 4,4’-bipiridina como unidad puente. Fuente: adaptada con permiso de los autores (referencia [6]). Copyright 2005, American Chemical Society. 78 Hipótesis, Apuntes científicos uniandinos, núm. 18, 2015 N N N N NaO3S OH NaO3S SO3Na Aumento de fluorescencia (%) 150 4CI A 100 HPTS A 5'-GTP FID HPTS 50 [A-HPTS] [A-5'-GTP] OFF ON Fluorescencia ON 0 5'-AMP 5'-ADP 5'-CTP 5'-UTP 5'-ATP 5'-GTP Figura 5. Reconocimiento selectivo de 5’-GTP por un ciclofano soluble en agua mediante el ensayo de desplazamiento del indicador de fluorescencia. Fuente: adaptada con permiso de los autores (referencia [7]). Copyright 2006, American Chemical Society. zarse a iones metálicos. En este tipo de compuestos las modificaciones estructurales modulan la selectividad de la cavidad para la formación de complejos (quelatos) con iones metálicos divalentes [8]. La búsqueda de pequeñas moléculas quelantes es un área de investigación interesante, ya que se constituyen en una de las futuras estrategias para el tratamiento de enfermedades asociadas a la acumulación localizada de metales, tales como el Parkinson y el Alzheimer. Entre estas moléculas se encuentran como candidatos los aminoácidos macrocíclicos. En un estudio reciente, se publicó que ciertos aminoácidos macrocíclicos tipo ciclofano forman complejos estables con cationes como Cu(II), Zn(II), y Ni(II). En estos macrociclos, con átomos electrodonores (N, O), se observa que la presencia del grupo carboxilato es importante en la coordinación con el ión metálico (figura 6) [8]. Teniendo en cuenta la capacidad de los ciclofanos para llevar huéspedes dentro de su cavidad, el diseño y síntesis de sondas moleculares específicas y selectivas, así como de sistemas de liberación controlada de fármacos basados en ciclofanos es un campo de investigación de gran interés en la actualidad [9-12]. • O HO REFERENCIAS [1] Steed JW, Atwood JL. Concepts. En: Supramolecular Chemistry. Chichester: John Wiley & Sons, Ltd; 2009. [2] Ramaiah D, Neelakandan PP, Nair AK, Avirah RR. Functional cyclophanes: Promising hosts for optical biomolecular recognition. Chemical Society Reviews 2010; 39(11): 4158-4168. [3] Ke C, Destecroix H, Crump MP, Davis AP. A simple and accessible synthetic lectin for glucose recognition and sensing. Nature Chemistry 2012; 4(9): 718-723. [4] Neelakandan PP, Nandajan PC, Subymol B, Ramaiah D. Study of cavity size and nature of bridging units on recognition of nucleotides by cyclophanes. Organic & Biomolecular Chemistry 2011; 9(4): 1021-1029. [5] Diederich F. Molecular recognition studies with cyclophane receptors in aqueous solutions. En: Gleiter R, Hopf H, eds. Modern cyclophane chemistry. Weinheim: Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA; 2005. [6] Neelakandan PP, Hariharan M, Ramaiah D. Synthesis of a novel cyclic donor-acceptor conjugate for selective recognition of ATP. Organic Letters 2005; 7(26): 5765-5768. [7] Neelakandan PP, HariharanM, Ramaiah D. A Supramolecular ON-OFF-ON fluorescence assay for selective recognition of GTP. Journal of the American Chemical Society 2006; 128(35): 11334-11335. [8] Pellico D, Gomez-Gallego M, Escudero R, Ramírez-López P, Olivan M, Sierra MA. C-Branched chiral (racemic) macrocyclic amino acids: structure of their Ni(II), Zn(II) and Cu(II) complexes. Dalton Transactions 2011; 40(36): 9145-9153. [9] Kotha S, Mandal K. Suzuki-Miyauracross-coupling and ringclosing metathesis: a strategic combination for the synthesis of cyclophane derivatives. European Journal of Organic Chemistry 2006; 2006(23): 5387-5393. [10] Davis F, Higson S. Cyclophanes. En: Macrocycles: construction, chemistry and nanotechnology applications. Chichester: John Wiley & Sons, Ltd.; 2011. [11] Núñez-Dallos N, Reyes A, Quevedo R. Hydrogen bond assisted synthesis of azacyclophanes from L-tyrosine derivatives. Tetrahedron Letters 2012; 53(5): 530-534. [12] Gulder T, Baran PS. Strained cyclophane natural products: macrocyclization at its limits. Natural Product Reports 2012; 29(8): 899-934. O HN NH O OH Ni(II) O Figura 6. Estructura del complejo formado entre el catión Ni(II) y un aminoácido macrocíclico tipo ciclofano. Se omiten los átomos de hidrógeno para mayor claridad. Fuente: [8]. Editado por el autor Universidad de los Andes, Facultad de Ciencias 79
© Copyright 2024