1. No category

CORTISOL
Inmunoensayo de la Enzima para la Determinación Cuantitativa
de la Concentración de Cortisol Total en
Suero Humano
Solo para diagnóstico In Vitro
Para uso exclusivo de laboratorios clínicos o de gabinete
Conservar entre 2°C a 8°C
NOMBRES COMUNES Y DE PROPIEDAD
Inmunoensayo de la Enzima de Cortisol
INTRODUCCIÓN
El Cortisol ( hidrocortisona, compuesto F ) es el glucocorticol más potente sintetizado a partir de Colesterol. El Cortisol es encontrado en la
sangre como Cortisol Libre, ó unido al Corticoesteriode Globulina (CBG).
La producción de Cortisol tiene un ritmo cíclico con niveles máximos al
inicio del día y con los niveles más bajos por la noche. Se desconoce a la
fecha el factor que controla estos cambios de ritmo. Los niveles de suero
son mayores por la mañana y decrecen a lo largo del día. En el aspecto
metabólico, el Cortisol promueve la Gluconeogenesis, la deposición glicogénica del hígado y la reducción de la utilización de Glucosa. Inmunológicamente el Cortisol juega un papel importante como anti-inflamatorio, en la Hipersensibilidad, Inmunosupresión y genera resistencia ante
las enfermedades. También se ha detectado niveles elevados de Cortisol
en respuesta al estrés. Los niveles anormales de Cortisol se observan en
diferentes condiciones, como son los tumores adrenales, en cáncer prostático, depresión y esquizofrenia. De igual manera se ha encontrado que
altos niveles de variación diurna de Cortisol se identifican con pacientes
con presencia de la Enfermedad de Cushing.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
La metodología ELISA ha mostrado ser una alternativa sensible y confiable para la medición de Cortisol. Las muestras y la enzima conjugada
de Cortisol son agregadas a los micropozos impregnados con anticuerpo
monoclonal anti-Cortisol. El Cortisol contenido en la muestra del paciente
se une con la enzima conjugada, las cuales son lavadas con una solución
buffer y posteriormente se adiciona un sustrato, que provoca una coloración. La intensidad del color generado es proporcional a la cantidad de
Cortisol en la muestra. Los resultados generan una curva estándar son
interpretados por un lector de Micro Elisa.
REACTIVOS
Materiales abastecidos con el equipo de prueba
1. Doce x Ocho tiras cubiertas con Cortisol MAb. (96 Pruebas)
2. Estándares de Cortisol: 7 viales
3. Enzima Conjugada (20x)
4. Sustrato TMB 1 vial. Listo para su uso
5. Solución de Frenado. 1 vial. listo para su uso
6. 20X Solución de Lavado concentrado. 1 vial
7. Solución diluyente del ensayo
Materiales requeridos pero no abastecidos
1. Pipetas de precisión.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Cat. DA-6101
VER.1
Agua destilada.
Puntas de pipeta desechables.
Mezclador Vórtex ó equivalente.
Papel absorbente ó toalla de papel.
Lector Microelisas con lente a 450nm de longitud de onda con una
banda de amplitud de 10nm ó menor y un rango de densidad óptica
de 0-2 OD. ó mayor
Papel cuadriculado.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Almacene el equipo a 2° - 8° C. Mantenga las tiras de pocillos selladas en
la bolsa de aluminio. Todos los compuestos son estables hasta su fecha
de expiración siempre y cuando las condiciones de almacenaje sean estrictamente llevadas a cabo como aquí se indica.
PRECAUCIONES
1. Utilice como material biopeligroso. Los callibradores y controles contienen componentes de origen humano, los cuales han sido evaluados y no son reactivos a Hepatitis B ni anticuerpos de HIV. Sin
embargo, no hay un método que ofrezca total certidumbre respecto
a su seguridad, por lo que se recomienda su manejo bajo preceptos
de Bioseguridad tipo 2.
2. Este equipo es para uso de Investigación.
3. No pipetee con la boca, no fume, coma ó beba en áreas de trabajo.
4. Los componentes de este equipo se usan de manera integral, No
mezcle estos componentes con otros de algún otro equipo.
RECOLECCION DE LA MUESTRA
Recolecte sangre por venopunción. Separe el suero por centrifugación.
EVITE AGREGAR ANTI-COAGULANTES A LA MUESTRA. En caso de
no hacer el examen inmediatamente, refrigere la muestra 2° - 8° C ó
congele. Evite ciclos de congelación y regreso a temperatura ambiente.
No use muestras lipémicas. Antes de su uso el suero congelado deberá
estar a temperatura ambiente perfectamente mezclado.
PREPARACION DE REACTIVO
Permita que todos los reactivos alcancen la temperatura ambiente
(18°-25 C) antes de su uso.
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
1. Separe la cantidad de micropozos que vaya a requerir.
2. Pipetee 25 μL de Estándares de Cortisol, controles y suero del paciente.
3. Agregue 200 μL de Enzima Conjugada Cortisol a Los pocillos.
4. Mezcle por 10 segundos.
5. Incube por 60 minutos a temperatura ambiente de ( 18 - 26º C )
6. Remueva el líquido de los micropozos. Lave por 3 ocasiones con
300 μL de 1X Buffer de Lavado. Seque con papel.
7. Agregue 100 μL de sustrato TMB a los micropozos.
8. Incube a Temperatura Ambiente por 15 minutos.
9. Agregue 50 μL de Solución de Frenado a todos Los micropozos.
Agite para mezclar la solución.
10. Lea la Absorbancia con lector de Micro Elisa a 450 nm despúes de
Distribuido por:
DIAGNÓSTICA INTERNACIONAL S.A. de C.V.
Rudyard Kipling 4886 Col. Jardines de la Patria
CP 45110 Zapopan, Jalisco, México
Lada sin costo: 01 800 440 0404 c/ 10 líneas
Tel: 01 (33) 3770 1940 c/ 10 líneas
1
transcurridos 20 minutos del último paso.
EL PUNTO DE LAVADO DE MICROPOZOS ES CRITICO YA QUE UN
POBRE LAVADO DARA COMO RESULTADO IMPRECISION Ó LECTURA ELEVADA FALSA DE LA PRUEBA.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
La curva estándar se construye como sigue:
1. Revise el valor de Cortisol Estándar para cada vial. Dicho valor puede variar entre lote y lote. Ejemplo:
2.
3.
OD 450 nm
Conc. ng/mL
Std 1
2.36
0
Std 2
1.75
25
Std 3
1.10
50
Std 4
0.65
100
Std 5
0.29
200
Std 6
0.13
400
Std 7
0.08
800
•
Suero
Replicas
Media
SD
CV %
1
16
40.1
2.54
6.3
2
16
59.4
5.57
9.4
3
16
165.5
10.23
6.2
Ensayos inter-ensayos con 10 replicas con tres diferentes tipos de
suero: Bajo, Normal y Alto.
Suero
Replicas
Media
SD
CV %
1
10
52
7.6
15
2
10
87
8.9
10.2
3
10
156
13.5
8.6
SENSIBILIDAD
La sensibilidad fue determinada calculando la media mas dos desviaciones estándar a partir del punto cero evaluado 20 veces en la misma corrida.
Para construir su Curva Estándar grafique la Absorbancia de los Estándares de Cortisol en el eje vertical contra las concentraciones Estándar de Cortisol en el eje horizontal utilizando un papel graficador.
Dibuje una curva uniendo Los puntos.
Lea la Absorbancia para controles y cada muestra desconocida de la
curva. Guarde los valores para cada control y muestra desconocida.
Suero
Replicas
Media
SD
Media + SD
(Sensibilidad)
Estándar
cero
20
1.38
0.06
1.5 ng/mL
ESPECIFICIDAD
ESTEROIDE
VALORES ESPERADOS
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de
rangos normales basados un su población local. Los siguientes valores
para Cortisol puden ser utilizados como una guía inicial:
CLASIFICACIÓN
ng/mL
8:00 - 10:00 am
50 - 230
4:00 pm
30 - 150
100%
Prednisolona
5.1%
11-Deoxycortisol
0.5%
Corticoesterona
˂0.1%
11-Deoxycorticoesterona
˂0.1%
progesterona
˂0.1%
17OH Progesterona
˂0.1%
Estradiol
˂0.1%
Testosterona
˂0.1%
LIMITACIONES DE LA PRUEBA
1. Los resultados de la prueba obtenida utilizando este equipo sirven
únicamente como apoyo en el diagnóstico y deberán ser interpretados en relación con la historia clínica del paciente, síntomas y otros
diagnósticos.
2. No utilice Azida de Sodio como preservativo, ya que inhibe la actividad enzimática.
REFERENCIAS
CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO
CORRELACIÓN
Un total de 86 muestras fueron evaluados con Cortisol Elisa y un equipo
de referencia. Estos son los resultados:
4.
1.
REACCION CRUZADA
Cortisol
Charnow B, Alexander R, Smallridge RC, Thompson WR, Cook D, Beardaley D, Fink MP, Lake R, Fletcher JR, Hormonal responses to graded surgical
stress. Arch. Intern Med. 147: 1273-1277, 1989
2.
Crapo L: Crushing´s sydrome: Areview of diagnostic tests. Metabolism 28:
955-977, 1979
3.
Lee PHK, Winter RJ, Green OC, Virilizing adrenocortical tumors in childhood,
Eight cases and a review of the literature. Pediatrics 76; 437,444, 1985
Correlación
Inclinación
Intercepción
0.95
0.95
0.5
Leisti S, Ahonen P, Perheentupa Jr, The diagnosis and staging of hipocortisolismo en un proceso autoimmune de adrenalitis. Pediatric Rev. 17: 851-867
1983
5.
Stewart PM, Secki JP Corrie J. Edwards CRW, Pedfield Pt, A rational approach
for assessing the hypothalamo-pituitaryadrenal axis. Lancet 5: 1208-1210
1988
6.
Walts NB, Tindall GT Rapid assessment of corticotrophin reserve after pituitary
surgery. JAMA 259, 708-711 1988
PRECISIÓN
• Ensayos intra-ensayos con 16 replicas con tres diferentes tipos de
suero: Bajo, Normal y Alto.
7.
Schlaghacke R, Komely E. santern RT, Didderskamp, P: The effect of long
term glucocorticol on ptuitary adrenal responses to exogenus corticotropin releasing hormone. New England J Med. 326: 226- 230 1992
8.
Tiertz, N. W., Text book of Clinical Chemestry, Saunders, 1968
FABRICADO POR:
MONOBIND INC.
100 NORTH POINTE DRIVE
LAKE FOREST, CA 92630 USA
2