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S0001ties-002
ab B-Nr. 14750
Biosorb® Absorbentes
16.01.2017
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Instrucciones de empleo BIOSORB® ABSORBENTES
Aislamiento de IgM e IgA separando el IgG utilizando IgG de antisuero anti-humano apto para todas las determinaciones de IgM o IgA.
Biosorb® Absorbente IgG, 48 separaciones, Cat.No. 90-1048
Biosorb® Absorbente IgG, 120 separaciones, Cat.No. 90-1120
Separación de anticuerpos específicos al grupo de las espiroquetas utilizando Treponema phagedenhis homogenizado apto para determinaciones de Borrelia y
Leptospira IgG
Biosorb® Absorbente Reiter, Cat.No. 36-6105
PROPÓSITO
Los Absorbentes Biosorb® eliminan las inmunoglobulinas que alteran tanto los tests de IgM o IgA o tests de anticuerpos de espiroquetas en suero humano. Solo para
el uso en el diagnostico in vitro.
INTRODUCCION
Aislamiento de IgM e IgA
El analisis directo de IgM o IgA en el suero tiene varias desventajas si el IgG del patógeno especifico también está presente. Esto es especialmente cierto si las
concentraciones del antígeno especifico de IgM e IgA son bajas comparadas con el antígeno específico de IgG. El IgG puede interferir con la interacción del antígeno
de IgM e IgA compitiendo en la fijación del antígeno (impedimento estérico). De ello puede resultar la disminución o inhibición de la fijación del IgM/IgA y dar por ello
resultados falso-negativos. Por otro lado, los factores reumatoides IgM presentes en el suero del paciente pueden producir en los tests IgM falsos positivos. El factor
reumatoide IgM es un auto-anticuerpo que está dirigido contra anticuerpos IgG (en complejos inmunológicos). Cuando se fija el IgG especifico al antígeno IgM los
factores reumatoides pueden fijarse a los IgG “activados” y detectarse con el conjugado IgM especifico. Como analogía, los factores reumatoides IgA pueden afectar
los tests de IgA.
Para eliminar estos problemas el IgG deberá ser eliminado de la muestra. El IgM y/o IgA aislados pueden entonces ser testados a los patógenos específicos. El
tratamiento de las muestras con antisuero IgG anti-humano (Biosorb® Absorbente IgG Cat.No. 90-1048 y 90-1120) proporciona un método simple, rápido y eficiente.
Las moléculas de IgG humano son fijadas en complejos inmunológicos estables (no se necesita centrifugar para eliminar estos complejos) que ya no bloquean los sitios
de enlace de IgM/IgA, y con ello se evitan resultados de falsos-negativos. Asimismo la presencia indirecta de factores reumatoides ya no provocarán resultados falsopositivos.
Serología de Espiroquetas
La serología de las Espiroquetas (Treponema pallidum, Borrelia burgdorferi, Leptospira interrogans) es compleja. Los sueros de pacientes infectados con uno de estos
patógenos o que solo hayan estado en contacto con miembros de la familia de espiroquetas apatogénicas muestran muchas veces reacciones cruzadas (incluso con
titulos elevados) cuando son testadas a un antígeno heterólogo del grupo de las espiroquetas. Obviamente, la reacción cruzada (común) de los antígenos de espiroqueta
(epitopes) son inmuno-genes fuertes, es decir, los anticuerpos generalmente se forman especialmente contra estos antígenos / epitopes. La diferenciación de los
patógenos implicados solo a través de la serología es muy difícil o imposible.
Para incrementar la especificidad de los test serológicos de anticuerpos de espiroquetas en las muestras del paciente, estas deberán ser pre-tratadas con un absorbente
(Biosorb® Reiter Absorbente Cat.No. 36-6105) que elimina en gran medida los anticuerpos que producen una reacción cruzada. No obstante, con esta medida se
reduce la sensibilidad en los tests de anticuerpos de espiroquetas. Los titulos de los anticuerpos específicos serán más bajos tratando el suero con espiroquetas Reiter.
PRINCIPIO DEL TEST
Biosorb® Absorbente IgG:
Sistema basado en IgG Anti-humano: Dilución de la muestra tras el tratamiento 1:5. Indicado para todas las separaciones IgG/IgM o IgG/IgA de todos los métodos
(IFA, Elisa, Blot, etc.)
Cat.No. 90-1048: para 48 muestras (separaciones), listo para usar; 2 ml.
Cat.No. 90-1120: para 120 muestras (separaciones), listo para usar; 5 ml.
Tratando las muestra del paciente con reactivo Biosorb® humano las moléculas IgG de la muestra de suero formarán un complejo con antisuero anti-IgG . Las
moleculas IgG fijadas no alteran la reactividad de IgM o IgA en el analisis. Tras el tratamiento con Biosorb® Absorbente IgG el suero puede emplearse directamente o
diluido hasta la dilucion final con PBS.
Biosorb® Absorbente Reiter Cat.No. 36-6105:
Sistema basado en Treponema phadedenis homogenizado; listo para usar; 1 ml.
La dilución de la muestra tras la aplicación del absorbente debe ser de 1:5.
Tratar el suero con Biosorb® Absorbente Reiter elimina los anticuerpos dirigidos contra los antígenos comunes de espiroquetas. Este Treponema phagedenis ultra
sonicate es tambien adecuado para todos los analisis de IgG en la serología de espiroquetas independiente del metodo (IFA, Elisa, borron etc.) o fabricante (Borrelia,
FTA-ABS, Leptospira).
MATERIALES Y EQUIPO NECESARIOS ADICIONALMENTE
Recipientes adecuados para realizar la absorción
Pipetas de precisión y tubos de reacción (rango 1-1000 µl)
Mezclador Vortex
Tampón PBS
Cronometro
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Almacenar los absorbentes a una temperatura de 5-10 ºC. Los absorbentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada y cumpliendo estrictamente con las
recomendaciones. No emplear los absorbentes transcurrida la fecha de caducidad.
INDICACIONES DE SEGURIDAD
1. Los absorbentes son solo para el diagnostico in vitro.
2. Los absorbentes contienen 0,09% azida de sodio. Azida sódica es toxico. No inhalar y evitar cualquier contacto con la piel y mucosas. Los reactivos que contengan
azida sódica no deben entrar en contacto con objetos tubos de plomo o cobre ya que puede formar azidas metálicas explosivas
3. Se deben cumplir todas las disposiciones de seguridad establecidas.
4. Tener en cuenta las regulaciones actuales de “Good Laboratory Practice”s (GLP guide lines)
5. Tras la realización de los tests deben eliminarse los materiales y reactivos empleados según las disposiciones legales correspondientes.
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TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS
Tanto el suero como el plasma son aptos para la determinación. Las muestras son estables durante 1 semana a una temperatura de 5-10ºC. Para un almacenamiento
más prolongado y un empleo múltiple deberán prepararse alícuotas (>50 µl) y congelarse a –20ºC. Una congelación y descongelación repetitiva de cantidades mayores
de sueros puede favorecer la formación de agregaciones proteínicas así como la merma de componentes del suero o plasma y por lo tanto debe evitarse. Las muestras
de suero o plasma deben estabilizarse con 0,09% de azida sódica. Sin embargo puede interferir en los análisis a realizar con el suero (como sucede lamentablemente
con la peroxidasa en ELISA). Este tipo de muestras pueden conservarse por periodos prologados (hasta 1 año) en refrigerador a una temperatura de 5-10 ºC sin
pérdida de propiedades analíticas.
CONTROL DE CALIDAD Y BÚSQUEDA DE ERRORES
Los Sorbentes no deben calentarse para alcanzar la temperatura.
El tratamiento del suero con Absorbente Reiter elimina los anticuerpos que reaccionan cruzadamente (anticuerpos a antígenos genero-especificos de espiroquetas).
La especificidad del test se incrementa con este tratamiento pero disminuye la sensibilidad. Esto debe tenerse en cuenta cuando se comparan los resultados de suero
absorbido con suero no absorbido. Para la dilución apropiada se debe tener en cuenta la dilución anterior de la muestra seguida a la absorción. La sensibilidad y
especificidad son continuamente controlados en los laboratorios de Bios® asegurando así el funcionamiento del test. Bios® aplica en sueros y controles todos los
estándares de control disponibles de WHO u otras instituciones oficiales para la estandarización de los tests. Los controles positivos y negativos Biognost®
suministrados son calibrados de acuerdo con los estándares o con sueros de pacientes clínicamente comprobados o de donantes de sangre disponibles.
PROCEDIMIENTO DE LA ABSORBCION
Antes de realizar la absorción deben dejarse los reactivos y muestras alcancen la temperatura ambiente por sí solos.
Empleo de Absorbente IgG Biosorb® para eliminar el IgG en muestras IgM o IgA en ELISA, IFA o BLOT
1. Diluir la muestra clínica 1:5 con reactivo Biosorb® (p. Ej. mezclar 10 µl de suero con 40µl Biosorb®).
2. Mezclar con cuidado con ayuda del Vortex.
3. Incubar la mezcla a temperatura ambiente durante 10-15 minutos.
4. Tras la incubación, la mezcla (IgM/IgA fracción, dilución suero dilución 1:5) debe utilizarse inmediatamente para el análisis de IgM/IgA o diluir con tampón PBS
para una dilución final. No se necesita centrifugar.
5. No aplicar Biosorb® en controles IgM/IgA positivos. Nuestros controles positivos ya han sido suficientemente pre-tratados en nuestro laboratorio.
6. Si se prevén diluciones del suero, debe tenerse en cuenta la predilución de la muestra en el paso de absorbición.
Empleo de Absorbente Reiter Biosorb® para la absorbición de los anticuerpos genero-especificos de espiroquetas en determinaciones IgG, p. Ej. En
ELISA o IFA (Ej. Borrelia , Leptospira, Treponema):
1. Diluir la muestra clínica 1:5 con Absorbente Reiter Biosorb® (p. Ej. Mezclar 10 µl de suero con 40 µl Absorbente Reiter Biosorb®).
2. Mezclar con cuidado con ayuda del Vortex.
3. Incubar la mezcla a temperatura ambiente durante 10-15 minutos.
4. La mezcla debe diluirse con PBS hasta la dilución final y utilizar esta para su análisis. No se necesita centrifugar.
5. No emplear Biosorb® Reiter Absorbente en controles positivos de espiroquetas de Bios. Nuestros controles positivos ya han sido suficientemente pre-tratados en
nuestro laboratorio.
6. Si se prevén diluciones del suero, debe tenerse en cuenta la predilución de la muestra en el paso de absorbición.
En caso de realizar una separación de IgG/IgM, IgA utilizando Absorbente IgG Biosorb® previamente a la absorbición (de la fracción IgM/IgA) con absorbente Reiter
se requiere una cantidad menor de Absorbente Reiter Biosorb® (p. Ej. 1 parte de fracción IgM y 1 parte de Absorbente Reiter). La concentración total del anticuerpo
en la muestra es ya es rebajado con la absorción primera. La dilución (1.5 y 1:2) de la muestra tras ambas absorciones es de 1:10.
BIBLIOGRAFÍA
1. Feldner J.: RF-Absorbens: IgM-Antikörperbestimmung ohne Rheumafaktor-Interferenz. Lab.med. 14, 1990, 283-288
2. Hunter E.F., Deacon W.E., Meyer P.F.: An Improved Test for Syphilis, the Absorption Procedure (FTA-ABS). Publ. Health Rep. 79, 1964, 410-412
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