Diseño: Elihu C. Pérez Autores Dra. María Isabel García Peláez Dr. César Eduardo Montalvo Arenas Colaboradores Dra. Sandra Acevedo Nava Dra. Adriana Elizabeth González Villalva Dra. Martha Luz Ustarroz Cano MPSS Sinai Andrea Pineda Flores Prefacio La asignatura de Biología Celular e Histología Médica tiene como objetivos generales el examinar, analizar e integrar la estructura microscópica y las funciones básicas de las células, tejidos, órganos y sistemas del cuerpo humano. La asociación de este conocimiento con los de las otras asignaturas básicas es fundamental para el entendimiento del cuerpo humano en su totalidad e imprescindible en la formación del médico. En el proceso del aprendizaje de esta asignatura se requiere de la lectura y comprensión de textos especializados y la integración de este conocimiento teórico con la observación y análisis visual microscópico de una serie de preparaciones histológicas que ofrecen, al estudiante de medicina, imágenes de células, tejidos y órganos debidamente procesados a través de técnicas histológicas específicas; todo ello con la finalidad que adquiera el aprendizaje significativo de la estructura microscópica de los componentes morfológicos del cuerpo humano. El presente manual de prácticas tiene como objetivo orientar en la observación microscópica de las preparaciones histológicas mediante una breve descripción de los campos histológicos e indicaciones precisas de las estructuras a identificar. El manual está en formato digital en la página web del Departamento de Biología Celular y Tisular. Los alumnos pueden trabajar el manual en el mismo formato digital o imprimirlo para tenerlo en un formato físico. En el formato impreso pueden dibujar las observaciones a través del microscopio y en el formato digital pueden pegar las imágenes capturadas por los alumnos a través de sus dispositivos. También los alumnos pueden buscar imágenes en el Atlas Digital del Departamento o en los bancos de imágenes de internet e incorporarlas en el manual físico o digital. Los profesores de acuerdo a su experiencia y estilo de enseñanza pueden utilizar el manual en la forma que mejor consideren. Este manual está a su consideración y todas las observaciones son bien recibidas. Su colaboración va a permitir tener un manual que nos facilite a todos, profesores y alumnos, la realización de la actividad práctica de la asignatura. María Isabel García Peláez Jefa del Departamento de Biología Celular y Tisular Todo lo que se desarrolla comienza por ser pequeño. Es al alimentarse gradualmente como, con constantes progresos, llega a hacerse grande. Ruy Pérez Tamayo ÍNDICE Práctica Página PRÁCTICA 1. Conocimiento, manejo y uso del microscopio fotónico 1 PRÁCTICA 2. Técnica histológica 4 PRÁCTICA 3. Biología celular I. Organelos celulares 5 PRÁCTICA 4. Biología celular II. Inclusiones citoplasmáticas 9 PRÁCTICA 5. Tejido epitelial de revestimiento 11 PRÁCTICA 6. Tejido epitelial secretor o glandular 17 PRÁCTICA 7. Tejido conjuntivo 20 PRÁCTICA 8. Tejido adiposo 25 PRÁCTICA 9. Tejido cartilaginoso 26 PRÁCTICA 10. Tejido óseo 29 PRÁCTICA 11. Tejido muscular 33 PRÁCTICA 12. Tejido y sistema nervioso 36 PRÁCTICA 13. Sistema nervioso central y sistema nervioso periférico 42 PRÁCTICA 14. Ojo (globo ocular) 48 PRÁCTICA 15. Tejido sanguíneo (sangre) 54 PRÁCTICA 16. Tejido y órganos linfoides 56 PRÁCTICA 17. Sistema cardiovascular I. Corazón y sistema de conducción cardiaca 62 PRÁCTICA 18. Sistema cardiovascular II. Vasos sanguíneos 66 BLOQUE 1 PRÁCTICA 1. Conocimiento, manejo y uso del microscopio fotónico Objetivos 1. Conocer los 10 pasos para el buen uso del microscopio fotónico del aula- laboratorio: PASO 1. Preparar el espacio físico para el uso del microscopio. PASO 2. Preparar el material de trabajo para la realización de la práctica. PASO 3. Revisar que el microscopio esté en condiciones aptas para el trabajo* PASO 4. Solicitar la preparación histológica al responsable de sección. PASO 5. Realizar la práctica indicada. PASO 6. Regresar la preparación histológica al responsable de sección** PASO 7. Revisar que el microscopio se deje en condiciones aptas para que pueda ser utilizado por otros compañeros*** PASO 8. Limpiar el área donde se realizó la práctica. PASO 9. Entregar la práctica en el tiempo y forma que que el profesor le indique. PASO 10. Guardar la práctica siguiendo las instrucciones del profesor. *Si el microscopio no está en condiciones aptas para su uso (limpieza y funcionalidad) se deberá reportar inmediatamente a los profesores responsables de la práctica en el aula-laboratorio. **Los pasos 4, 5 y 6 se realizarán el número de veces que sea necesario hasta cumplir los objetivos de la práctica y con la observación del total de preparaciones histológicas asignadas en cada una de ellas. ***Si el microscopio no está en condiciones aptas para su uso posterior, se deberá reportar inmediatamente a los profesores responsables de la práctica en el aula-laboratorio. 1 2. Identificar los componentes del microscopio fotónico de campo claro. Tomar una fotografía o hacer un dibujo del microscopio e indicar sus componentes. 2 3. Analizar las características de la imagen observada a través del microscopio fotónico de campo claro. Preparación histológica: Letras Observe la preparación histológica de letras al microscopio utilizando los objetivos de 4x, 10x y 40x. Las letras se ven invertidas. En el mismo campo identifique cómo el área observada se va reduciendo a medida que aumenta la imagen y ofrece una mejor resolución. Objetivo de 4x Objetivo de 10x Objetivo de 40x 3 PRÁCTICA 2. Técnica histológica Objetivo: Reconocer la importancia de la fijación e identificar la tinción. Preparación histológica: Riñón fijado y no fijado. Observar las diferencias en coloración y estructura morfológica entre las dos muestras de riñón . Tinción: Riñón fijado Objetivo de 10x Objetivo de 40x Riñón no fijado Objetivo de 10x Objetivo de 40x 4 PRÁCTICA 3. Biología celular I. Organelos celulares Objetivo: Identificar la ultraestructura de cada organelo celular. Actividad sin preparación histológica. Tomar una fotografía o hacer un dibujo de los organelos celulares que se mencionan en los siguientes recuadros. 1. Membrana celular o plasmalema con microscopía electrónica de transmisión Espacio extracelular Glucocálix Lámina electrondensa externa Lámina electronlúcida central Lámina electrondensa interna Espacio citoplasmático 2. Esquema de la membrana celular mostrando sus componentes moleculares. Proteínas integrales Moléculas de carbohidratos Cabezas de fosfolípidos Moléculas de colesterol Colas de fosfolípidos Proteínas periféricas 5 3. Retículo endoplásmico rugoso (RER) con microscopía electrónica de transmisión Citoplasma Ribosomas Cisternas membranales Espacios de las cisternas 4. Retículo endoplásmico liso (REL) con microscopía electrónica de transmisión Citoplasma Túbulos anastomosados Luz de túbulos anastomosados 6 5. Aparato de Golgi con microscopía electrónica de transmisión Gránulos de secreción Red trans de Golgi Cisternas trans Cisternas mediales Cisternas cis Red cis Golgi Vesículas de transferencia 6. Mitocondria con microscopía electrónica de transmisión Membrana mitocondrial externa Espacio interrmembranal Membrana mitocondrial interna Crestas mitocondriales Matriz mitocondrial Cuerpos densos 7 7. Lisosomas y cuerpos residuales con microscopía electrónica de transmisión Lisosoma: - Membrana lisosomal - Contenido lisosomal Cuerpo residual: - Contenido del cuerpo residual 8. Peroxisomas con microscopía electrónica de transmisión Membrana del peroxisoma Contenido del peroxisoma Cristales de urato-oxidasa 8 PRÁCTICA 4. Biología celular II.Inclusiones citoplasmáticas Objetivo: Identificar los diferentes tipos de inclusiones citoplasmáticas. 1. Preparación histológica: Hígado con glucógeno Observar el glucógeno en el citoplasma de los hepatocitos. Tinción: Hepatocitos Presencia de núcleos y posición en las células Presencia de partículas de glucógeno Objetivo de 40x 2. Preparación histológica: Ganglio linfático intertraqueobronquial Observar pigmento exógeno fagocitado (carbón) en el interior de macrófagos. Tinción: Macrófagos con partículas de carbón Objetivo de 40x 9 3. Preparación histológica: Mesencéfalo Observar el pigmento endógeno de neuromelanina (partículas de color negro) en el citoplasma de las neuronas situadas en la sustancia nigra. Tinción: Neuromelanina en el citoplasma de las neuronas Objetivo de 40x 4. Preparación histológica: Miocardio Observar el pigmento de lipofucsina o pigmento de desgaste, de color pardo amarillento o rojo magenta, en las células musculares (miocardiocitos) del corazón. Se sitúa preferentemente en los espacios relacionados con los polos de los núcleos. Tinción: Miocardiocitos en sección longitudinal Núcleos Pigmentos de lipofucsina Objetivo de 40x 10 PRÁCTICA 5. Tejido epitelial de revestimiento Objetivo: Identificar las características histológicas de cada epitelio: número de estratos, formas celulares, forma y posición del núcleo, así como las especializaciones de membrana. 1. Preparación histológica: Vejiga urinaria Observar el epitelio de transición o transicional, mixto, polimorfo, globoso o urotelio. Las células superficiales son de mayor tamaño, algunas de ellas poseen dos núcleos y muestran un contorno superficial ligeramente convexo. Debajo de la superficie apical celular se distingue una pequeña zona más coloreada que corresponde a la presencia de las placas membranales. Tinción: Pliegues tisulares de la vejiga vacía Epitelio mixto o urotelio Tejido conjuntivo subepitelial Objetivo de 10x Capa superficial de células globosas Célula superficial binucleada Membrana basal Tejido conjuntivo subepitelial Objetivo de 40x 11 2. Preparación histológica: Piel gruesa Observar el epitelio plano estratificado con estrato córneo. Está formado por numerosas capas de células de diferentes formas. En el estrato más superficial se observan células que carecen de núcleos. Tinción: Epitelio plano estratificado con estrato córneo Tejido conjuntivo subepitelial Objetivo de 10x 3. Preparación histológica: Esófago o vagina Observar elepitelio plano estratificado sin estrato córneo. Las células epiteliales más superficiales aún conservan los núcleos ya que carece de estrato córneo. Tinción: Epitelio plano estratificadosin estrato córneo Membrana basal Tejido conjuntivo subepitelial Objetivo de 40x 12 4. Preparación histológica: Tráquea Observar el epitelio pseudoestratificado cilíndrico ciliado con células caliciformes. Todas las células se apoyan sobre la membrana basal pero no todas ellas llegan a la superficie apical por lo que los núcleos se disponen en diversos niveles dando el aspecto de un epitelio estratificado. En la superficie del epitelio se observan los cilios. Tinción: Cilios en la superficie apical Posición media o basal de los núcleos Células epiteliales Células caliciformes Membrana basal Tejido conjuntivo subepitelial Objetivo de 40x 13 5. Preparación histológica: Intestino delgado Observar epitelio cilíndrico simple con microvellosidades y células caliciformes. La altura de las células predominan sobre el ancho y grosor de las mismas. El núcleo es ovalado y ocupa una posición media o basal. En el borde apical se observan microvellosidades.Las células caliciformes son redondeadas con citoplasma claro y núcleo basal. Tinción: Microvellosidades en la superficie apical Células cilíndricas Células caliciformes Membrana basal Tejido conjuntivo subepitelial Objetivo de 40x 14 6. Preparación histológica:Plexos coroides Observarel epitelio cúbico simple en la superficie de las vellosidades coroideas. Dicho epitelio está formado por células cúbicas con un núcleo esférico de posición central o ligeramente basal. En el interior de la vellosidad se observan capilares y vénulas revestidos de epitelio plano simple, rodeados de tejido conjuntivo. Las células de este epitelio son delgadas con núcleos alargados y ovalados que sobresalen del grosor de las células. Tinción: Epitelio cúbico simple: - Núcleos Capilares: -Epitelio plano simple con núcleos alargados - Eritrocitos Tejido conjuntivo laxo Objetivo de 40x 15 7. Cuello uterino o cérvix Observar en la superficie una transición de epitelios, de plano estratificado sin estrato córneo (exocérvix) a un epitelio cilíndrico simple secretor (endocérvix). Tinción: Epitelio plano estratificado sin estrato córneo Zona de transición de epitelios Epitelio cilíndrico simple secretor Membrana basal Tejido conjuntivo subepitelial Objetivo de 40x 16 PRÁCTICA 6. Tejido epitelial secretor o glandular Objetivo: Reconocer las unidades epiteliales secretoras o glandulares que identifican las diversas modalidades morfológicas y funcionales del tejido epitelial secretor. 1. Preparación histológica: Páncreas Observar las unidades secretoras serosas en las cuales las células que las integran muestran una forma piramidal, con un núcleo esférico situado en el tercio basal. Distinguir la basofilia basal rodeando al núcleo y la presencia de gránulos de secreción acidófila en la porción apical. Tinción: Acinos pancreáticos Acidofilia apical (secreción serosa) Basofilia basal Núcleos Objetivo de 40x 17 2. Preparación histológica: Piel de axila Observar las glándulas sudoríparas tubulares glomerulares ecrinas o merocrinas y sus conductos de secreción con epitelio cúbico estratificado. La luz de la porción secretora es pequeña. Los núcleos son esféricos y de posición central. Tinción: Glándulas sudoríparas ecrinas o merocrinas Secciones del conducto de secreción Secciones transversales y oblicuas de laporción secretora Células mioepiteliales Objetivo de 40x Observar las glándulas sudoríparas tubulares glomerulares apocrinas y/o sus conductos de secreción con epitelio cúbico estratificado. La luz de la porción secretora es amplia. Las células con secreción apocrina se distinguen porque el borde apical muestra una serie de evaginaciones esféricas u ovaladas. Los núcleos son esféricos y de posición en el tercio medio. Tinción: Glándulas sudoríparas apocrinas Secciones del conducto de secreción Secciones transversales y oblicuas de laporción secretora Superficie apical con secreción apocrina Células mioepiteliales Objetivo de 40x 18 Observar las glándulas saculares holocrinas. Muestran un límite basal formado por células germinativas con algunas figuras de mitosis; el sáculo está ocupado por células poliédricas cuyo citoplasma presenta una serie de vesículas ocupadas por lípidos y núcleos en diversas etapas de picnosis, cariorrexis y cariolisis. Tinción: Conducto de la glándula sacular holocrina Porción secretora del sáculo Células productoras de sebo (en picnosis, cariorrexis y cariolisis) Epitelio basal o germinativo Objetivo de 40x 3. Preparación histológica: Esófago o glándula sublingual Observar las unidades (adenómeros) mucosas formadas por células piramidales truncas, con los núcleos aplanados rechazados a la base de la célula y el resto del citoplasma ocupado por la secreción mucosa de aspecto espumoso. Tinción: Adenómeros mucosos Contenido mucoso citoplasmático Forma y posición de los núcleos Objetivo de 40x 19 PRÁCTICA 7. Tejido conjuntivo Objetivo: Identificar las características histológicas básicas del tejido conjuntivo, así como reconocer las diversas células fijas y migrantes o móviles integrantes del mismo. 1. Preparación histológica: Piel con granuloma Observar fibroblastos y fibrocitos que son células alargadas fusiformes con núcleos alargados. Fibras de colágena aisladas o formando haces. Células adiposas uniloculares aisladas o integrando lobulillos. Células gigantes de reacción a cuerpo extraño: son células multinucleadas, formadas por la fusión de pocos o numerosos macrófagos con diámetros de 30 a 50 micrómetros de diámetro. Tinción: Fibroblastos y fibrocitos Fibras de colágena formando haces Células adiposas (adipocitos) Células gigantes de reacción a cuerpo extraño Objetivo de 40x 20 2. Preparación histológica: Tumor cutáneo con células plasmáticas Observar células plasmáticas o plasmocitos. Son células redondeadas u ovaladas, con núcleo excéntrico y grumos cromatínicos dispuestos radialmente y citoplasma basófilo. En un polo del núcleo se visualiza la imagen negativa del aparato de Golgi. Tinción: Célula plasmática Citoplasma basófilo Imagen negativa del aparato de Golgi Núcleo excéntrico con cromatina radiada Objetivo de 40x o 100x 21 3. Preparación histológica: Cordón espermático Observar haces de fibras de colágena, fibroblastos y células cebadas o mastocitos, que se identifican por su citoplasma granular. Tinción: Haces de fibras de colágena Fibroblastos y fibrocitos Células cebadas o mastocitos Objetivo de 40x o 100x 4. Preparación histológica: Aorta Observar las fibras elásticas en secciones longitudinales y/o transversales. Distinguir su recorrido sinuoso u ondulante (secciones longitudinales), de color negro o morado y como pequeños puntitos de color negro o morado (secciones transversales) dependiendo de la tinción. Tinción: Fibras elásticas en corte longitudinal Fibras elásticas en corte transversal Objetivo de 40x 22 5. Preparación histológica: Hígado o ganglio linfático Observar las fibras reticulares (colágena tipo III) de grosor muy delgado, dispuestas en todas las direcciones del espacio e integrando redes sumamente finas (estroma fino) que sirven de soporte a las células parenquimatosas. Tinción: Fibras reticulares (forman redes) Objetivo de 40x 6. Preparación histológica: Piel delgada Observar los diversos componentes tisulares del tejido conjuntivo laxo y denso irregular que integran la dermis de la piel. Diferenciar la presencia y cantidad de las células conjuntivas (fibroblastos y fibrocitos), de la matriz amorfa y la matriz fibrilar, principalmente haces de fibras de colágena. Tinción: Tejido conjuntivo laxo Células conjuntivas Tejido conjuntivo denso irregular Objetivo de 40x 23 7. Preparación histológica: Tendón Observar la disposición longitudinal y paralela de los haces de fibras de colágena cuya presencia es notoriamente mayor que las células (fibrocitos o tenocitos) y de la sustancia amorfa, casi inexistente, del tejido conjuntivo denso regular, modelado o tendinoso. Tinción: Haces de fibras longitudinales Núcleos de los fibrocitos o tenocitos Objetivo de 40x 24 PRÁCTICA 8. Tejido adiposo Objetivo: Identificar las diferencias morfológicas entre grasa parda y grasa blanca. 1. Preparación histológica: Grasa parda Observar en la grasa perirrenal los dos tipos de tejido adiposo: unilocular o grasa blanca y multilocular o grasa parda. Los adipocitos uniloculares se distinguen por ser células voluminosas, de 50 a 100m, esféricas y totalmente vacías con un núcleo dispuesto en la periferia. Los adipocitos de grasa parda se reconocen por exhibir formas poliédricas, de menor tamaño, de 30 a 40 m, con un núcleo esférico y central. El citoplasma es acidófilo debido a la presencia de numerosas mitocondrias, con pequeños espacios redondeados vacíos. Tinción: Adipocitos de grasa blanca o uniloculares: - Espacio en el citoplasma que ocupaba la gota de grasa - Núcleo periférico Objetivo de 40x Adipocitos de grasa parda o multiloculares: - Espacios en el citoplasma que ocupabanlasgotitas de grasa - Núcleo central Objetivo de 40x 25 PRÁCTICA 9. Tejido cartilaginoso Objetivo: Identificar las diferencias entre el cartílago hialino, elástico y fibroso con base en a los diferentes componentes de la matriz extracelular. 1. Preparación histológica: Tráquea Observar los diversos componentes tisulares y celulares del cartílago hialino: pericondrio, condroblastos, condrocitos y grupos isógenos. En la matriz amorfa, distinguir la matriz territorial e interterritorial. Tinción: Pericondrio Condroblastos Condrocitos Matriz territorial Grupos isógenos Matriz interterritorial Objetivo de 10x 26 2. Preparación histológica: Epiglotis Observar en el cartílago elástico el pericondrio que contiene fibras elásticas. Los condroblastos, condrocitos y grupos isógenos son más abundantes, por unidad de superficie, que en el cartílago hialino. La matriz fibrilar posee abundantes haces de fibras elásticas. Tinción: Pericondrio con fibras elásticas Matriz amorfa con abundantes fibras elásticas Condrocitos Grupos isógenos Objetivo de 10x 27 3. Preparación histológica: Columna vertebral Observar el cartílago fibroso uniendo a dos cuerpos vertebrales. Identificar el núcleo pulposo rodeado de cartílago fibroso que se observa formado por haces paralelos de fibras de colágena tipo I y entre ellas la presencia de condrocitos alargados, situados unos detrás de otros. Tinción: Núcleo pulposo Cartílago fibroso: - Haces paralelos de colágena tipo I - Núcleos de los condrocitos - Escasa presencia de matriz amorfa Cartílago hialino Objetivo de 10x 28 PRÁCTICA 10. Tejido óseo Objetivo: Identificar los componentes histológicos del hueso compacto y del hueso esponjoso, así como las diferencias histológicas entre osificación intramembranosa y endocondral. 1. Preparación histológica: Hueso lijado (hueso compacto). Observar secciones transversales y longitudinales de las osteonas o sistemas de Havers constituidos por laminillas concéntricas de matriz ósea y entre ellas espacios de forma estrellada o “lagunas óseas” que alojan a los osteocitos. En la parte central de la osteona se distinguen los conductos de Havers. Entre dos conductos de Havers se disponen los conductos de Volkman. Tinción: Osteonas o sistemas de Havers: - Laminillas de las osteonas - Lagunas óseas - Canalículos óseos - Conducto de Havers Conductos de Volkman Objetivo de 40x 29 2. Preparación histológica: Cara o fosas nasales de feto Observar las características de la osificación intramembranosa y su contenido: tejido mesenquimatoso, células osteógenas sintetizando y liberando matriz amorfa y fibrilar (osteoide) y la transformación de las células osteógenas en osteoblastos localizados en los bordes del osteoide. En el interior de este esbozo, trabécula ósea en formación, se observan los osteocitos en su laguna y rodeados de matriz orgánica. El tejido circundante alberga abundantes vasos sanguíneos. Tinción: Tejido mesenquimatoso Células osteógenas Vasos sanguíneos Trabécula: - Osteoide - Osteoblastos - Osteocitos Objetivo de 40x 30 3. Preparación histológica: Pie o mano de feto Observar secciones longitudinales de los moldes cartilaginosos de los huesos carpales (mano) o tarsales (pie) para distinguir los procesos iniciales de osificación cartilaginosa o endocondral. Se visualiza el endostio atravesado por vasos sanguíneos y el punto de osificación endocondral en la parte media del molde cartilaginoso. Tinción: Centro deosificación Pericondrio Molde de cartílago Vasos sanguíneos Zona de cartílago hipertrófico Objetivo de 40x 31 4. Preparación histológica: Tibia de feto Observar la placa o disco epifisiario de un hueso largo. Diferenciar las cinco zonas de la osificación endocondral: zona de reserva, zona de cartílago de proliferación, zona de maduración o hipertrofia, zona de calcificación y zona de osificación o resorción. Tinción: Tejido epifisiario Placa o disco epifisiario Tejido óseo diafisiario Objetivo de 10x Zona de reserva Zona de proliferación Zona de hipertrofia Zona de calcificación Zona de osificación o resorción Objetivo de 40x 32 BLOQUE 2 PRÁCTICA 11. Tejido muscular Objetivo: Distinguir las características morfológicas y estructurales de cada variedad de tejido muscular. 1. Preparación histológica: Lengua Observar secciones longitudinales, oblicuas y transversales de las fibras musculares estriadas esqueléticas; distinguir las estriaciones claras y oscuras y el número de núcleos dispuestos en la periferia de las fibras (multinucleadas). Tinción: Haces de fibras musculares Fibras musculares en secciones longitudinales Fibras musculares en secciones transversales Fibras musculares en secciones oblicuas Tejido conjuntivo (perimisio) Núcleos Objetivo de 10x Fibras musculares en cortes longitudinales: - Estriaciones claras y oscuras - Núcleos - Endomisio Fibras musculares en cortes transversales: Objetivo de 40x - Endomisio - Núcleos - Miofibrillas 33 2. Preparación histológica: Miocardio Observar la disposición de las fibras musculares estriadas cardiacas en secciones longitudinales integrando un sincitio tridimensional y reticular. Distinguir la unión terminoterminal de los miocardiocitos constituyendo los discos intercalares y, en algunos casos, la disposición “apantalonada” que exhibe la relación de dos o tres miocardiocitos unidos por sus extremos. Observar las estriaciones de bandas claras y oscuras y la presencia de un núcleo de posición central. En las secciones transversales diferenciar las miofibrillas como puntos acidófilos y el núcleo central. Es probable observar el pigmento de lipofucsina en el citoplasma cerca de los polos nucleares. Tinción: Haces de miocardiocitos en secciones longitudinales Tejido conjuntivo interfascicular Haces de miocardiocitos en secciones transversales Objetivo de 10x Miocardiocitos o células “apantalonadas” Núcleos centrales en secciones longitudinales y transversales Estriaciones claras y oscuras Discos intercalares Capilares interfasciculares Miofibrillas en secciones transversales Objetivo de 40x o 100x 34 3. Preparación histológica: Intestino delgado o uréter Observar las formas ahusadas de las fibras musculares lisas en secciones longitudinales del tejido. En el centro de la fibra, cuyo diámetro es mayor que el resto de la misma, se localiza el núcleo alargado de bordes sinuosos. Esta diferencia en grosores se distingue con nitidez en secciones transversales de varias fibras. Tinción: Fibras musculares lisas en secciones longitudinales: - Núcleos centrales alargados Fibras musculares lisas en secciones transversales: - Núcleos centrales de contorno redondeado Objetivo de 10x Fibras musculares lisas Núcleos centrales 0 Objetivo de 40x 35 PRÁCTICA 12. Tejido y sistema nervioso Objetivo: Observar en impregnaciones metálicas las características morfológicas de los principales tipos celulares del tejido nervioso: somas neuronales, prolongaciones neuronales (dendritas y axón) y células gliales. Preparaciones con impregnaciones metálicas. En la colección de laminillas se encuentran estas preparaciones, pero no en el número suficiente, por lo que se recomienda dejar campos fijos en los microscopios y/o utilizar el microscopio virtual o atlas. En estas laminillas se pueden reconocer algunas formas de neuronas como las piramidales de la corteza cerebral, las neuronas de Purkinje en el cerebelo o las neuronas motoras de la médula espinal. También se pueden utilizar estas preparaciones para diferenciar e identificar las células de la glia: astrocitos fibrosos y protoplasmáticos, oligodendrocitos y células de la microglia. 1. Preparación histológica: Médula espinal. Neurona motora multipolar (laminillas 3 y 4) Observar en las astas anteriores o ventrales la forma estrellada de las neuronas motoras con sus prolongaciones truncas dendríticas y axónica. Tinción: Somas de neuronas multipolares Prolongaciones dendríticas Prolongación axónica Objetivo de 40x 36 2. Preparación histológica: Corteza cerebral. Neuronas piramidales (laminilla 6) Reconocer el contorno triangular de la neurona y sus prolongaciones dendríticas y observar el axón que se desprende de la base celular. A mayor aumento distinguir en las ramificaciones dendríticas las espinas dendríticas (lugar de las sinapsis). Tinción: Neuronas piramidales: - Dendritas - Somas - Axones Objetivo de 10x Dendritas de las neuronas piramidales: - Espinas - Ramificaciones Objetivo de 40x o 100x 37 3. Preparación histológica: Corteza cerebelosa. Neurona piriforme de Purkinje Observar el soma piriforme de las neuronas de Purkinje en la segunda capa de la sustancia gris del cerebelo; del soma se originan abundantes ramificaciones dendríticas que se proyectan hacia la capa molecular, pero solamente en un plano. El axón se forma en la base de la neurona y se dirige hacia la capa granulosa. Tinción: Neuronas de Purkinje: - Somas - Ramificaciones dendríticas - Axones Objetivo de 10x Ramificaciones dendríticas Espinas dendríticas Objetivo de 40x 38 4. Preparación histológica: Cerebro de perro. Astrocitos fibrosos (laminillas 1 y 2) Cerebro de humano. Astrocitos fibrosos (laminilla 15) Observar los astrocitos fibrosos ubicados en la sustancia blanca del sistema nervioso los cuales poseen prolongaciones largas y poco ramificadas. También se puede apreciar el estrecho contacto de los pies perivasculares de sus largas prolongaciones con los capilares continuos (barrera hematoencefálica). Tinción: Prolongaciones de los astrocitos fibrosos Somas de los astrocitos fibrosos Pie perivascular Capilares sanguíneos Objetivo de 40x 39 5. Preparación histológica: Cerebro de humano. Astrocitos fibrosos y protoplasmáticos (laminilla 15) Observar tanto los astrocitos protoplásmaticos ubicados en la sustancia gris, como los astrocitos fibrosos ubicados en la sustancia blanca. A diferencia de los astrocitos fibrosos, los astrocitos protoplasmáticos poseen prolongaciones cortas y muy ramificadas. También se pueden apreciar los componentes de la barrera hematoencefálica. Tinción: Astrocitos protoplasmáticos Astrocitos fibrosos Pie perivascular Capilar sanguíneo Objetivo de 40x 40 6. Preparación histológica: Mesencéfalo. Oligodendrocitos y microglia (laminilla 18) Observar los oligodendrocitos los cuales poseen un cuerpo poligonal del cual emergen prolongaciones cortas y escasas. Por otra parte, la microglia presenta un cuerpo celular ovalado y alargado, y de sus vértices se extienden una serie de prolongaciones ramificadas que se dirigen casi en línea recta y terminan en pequeños ganchos. Tinción: Oligodendrocito: - Soma - Prolongaciones Microglia: - Soma - Prolongaciones Objetivo de 40x 41 PRÁCTICA 13. Sistema nervioso central y sistema nervioso periférico Objetivo: Reconocer en tinciones anilínicas las características histológicas de los principales órganos y estructuras del sistema nervioso central y periférico. 1. Preparación histológica: Corteza cerebral Observar la sustancia gris con su estructura en capas que se diferencia de la sustancia blanca en la que no se localizan somas neuronales. En la corteza se pueden identificar las neuronas piramidales. Tinción: Sustancia gris Sustancia blanca Objetivo de 10x Neuronas piramidales Objetivo de 40x 42 2. Preparación histológica: Cerebelo Observar las tres capas de la sustancia gris del cerebelo y la relación que guarda con la sustancia blanca. Con el objetivo de 10x se distingue en un corte transversal del cerebelo uno o dos pliegues u hojas del árbol cerebeloso. Se visualiza la piamadre muy vascularizada recubriendo la superficie de cada pliegue u hoja. En la parte central de cada una de ellas se distinguen las fibras mielinizadas de la sustancia blanca. En el objetivo de 40x se observan las tres capas de la corteza cerebelosa: molecular, de Purkinje y granulosa. Tinción: Pliegue del cerebelo Piamadre Sustancia gris Sustancia blanca Objetivo de 10x Corteza cerebelosa: - Capa molecular - Capa de las neuronas de Purkinje - Capa granulosa Sustancia blanca Objetivo de 40x 43 3. Preparación histológica: Médula espinal A simple vista se observa en el centro de la muestra la sustancia gris en forma de “H”. Observar con el objetivo de 4x o 10x los componentes de las envolturas meníngeas, los cordones de la sustancia blanca y las astas sensitivas y motoras de la sustancia gris de la médula espinal. En el centro de la estructura localizar el conducto del epéndimo. Distinguir el surco ventral y el septo dorsal de la sustancia blanca recubiertos por piamadre. Observar la forma de las neuronas del asta sensitiva y motora, la posición del núcleo y la distribución de la sustancia de Nissl en ambos tipos de neuronas de las astas. Tinción: Meninges Septo dorsal Septo ventral Sustancia gris: - Astas ventrales - Astas dorsales Sustancia blanca Conducto ependimario Objetivo de 4x o 10x Neuronas sensitivas (astas dorsales) Epitelio del conducto ependimario Objetivo de 40x 44 Tinción: Neuronas motoras (astas ventrales) Objetivo de 40x 4. Preparación histológica: Ganglio raquídeo En el ganglio raquídeo (ganglio de la raíz dorsal) se distinguen el soma redondeado de las neuronas monopolares (seudounipolares), las células satélite o anficitos rodeando el soma de las neuronas, las fibras nerviosas y el tejido conjuntivo. Tinción: Células satélites o anficitos Neuronas monopolares: - Soma Núcleos Fibras nerviosas Tejido conjuntivo Objetivo de 40x 45 5. Preparación histológica: Ganglio simpático En el gánglio simpático se distinguen el soma de las neuronas multipolares, las células satélite (anficitos) rodeando el soma de las neuronas, las fibras nerviosas y el tejido conjuntivo que es más abundante que en el ganglio raquídeo. Tinción: Células satélites o anficitos Somas neuronales Núcleos de las neuronas Fibras nerviosas Tejido conjuntivo Objetivo de 40x 6. Preparación histológica: Esófago o intestino delgado Observar los componentes del ganglio visceral, intramural o parasimpático entre las dos capas de la túnica muscular externa. Tinción: Células satélites o anficitos Somas de neuronas multipolares Núcleos de las neuronas Fibras nerviosas Objetivo de 40x 46 7. Preparación histológica: Nervio periférico Observar las envolturas conjuntivas que integran un nervio: epineuro, perineuro y endoneuro en un corte transversal, así como las prolongaciones nerviosas: axones rodeados por las vainas de mielina. En el corte longitudinal observar las fibras nerviosas onduladas y los núcleos alargados de las células de Schwan. Tinción: Epineuro Perineuro Endoneuro Axones Vainas de mielina Nécleos de células de Schwan Objetivo de 40x 8. Preparación histológica: Plexos coroides Observar el epitelio cúbico simple y el tejido conectivo en el que se localizan los capilares sanguíneos Tinción: Epitelio cúbico simple Capilares Endotelio de los capilares Tejido conjuntivo laxo Objetivo de 40x 47 PRÁCTICA 14. Ojo (globo ocular) Objetivo: Reconocer las estructuras básicas y compartimientos del globo ocular desde el punto de vista histológico. 1. Preparación histológica: Ojo (córnea) La córnea forma parte de la túnica fibrosa o externa y se encuentra ubicada en la parte anterior del mismo. Observar los componentes epiteliales y conjuntivos de la córnea. Tinción: Epitelio plano estratificado sin estrato córneo Membrana de Bowman Estroma corneal Membrana de Descement Endotelio corneal Cámara anterior y posterior Objetivo de 40x 48 2. Preparación histológica: Ojo (limbo esclerocorneal) Observar la transición del epitelio corneal que es plano estratificado sin estrato córneo, al epitelio conjuntival que es cilíndrico estratificado; en ese lugar existen células madres corneales. Debajo del epitelio conjuntival se sitúa una lámina propia o corion de tejido conjuntivo denso con abundantes capilares. Tinción: Epitelio conjuntival Limbo esclerocorneal Epitelio corneal Tejido conjuntivo escleral Capilares esclerales Objetivo de 40 x 3. Preparación histológica: Ojo (procesos ciliares y cuerpo ciliar) Es otro componente de la coroides. Se localiza entre la raíz del iris y la ora serrata. Posee tres grupos de fibras musculares lisas y un conjunto de evaginaciones, los procesos ciliares. Tinción: Cuerpo ciliar Epitelio pigmentario Procesos ciliares Fibras musculares lisas Tejido conjuntivo laxo Región vascular interna Vasos sanguíneos Objetivo de 40x 49 4. Preparación histológico: Ojo (iris) Se origina a partir de la superficie anterior del cuerpo ciliar. El iris se adhiere a la esclerótica a unos 2 mm del límite esclero-corneal. Limita la cámara anterior y posterior, ambas cámaras contienen al humor acuoso. Posee dos superficies y, entre ellas, se sitúa un tejido conjuntivo laxo muy vascularizado. La superficie posterior posee dos epitelios, el pigmentario posterior con abundantes gránulos de melanina y el epitelio anterior consta de células mioepiteliales contráctiles: forman el músculo dilatador de la pupila; alrededor de la pupila existen fibras musculares lisas, de origen ectodermal, que integran el músculo constrictor o esfínter de la pupila. Tinción: Estroma conjuntivo laxo Músculo constrictor o esfínter del iris Epitelio anterior: - Fibras mioepiteliales dilatadoras Epitelio pigmentario posterior Objetivo de 40x 50 5. Preparación histológica: Ojo (ángulo iridocorneal) Observar la parte periférica de la córnea–esclerótica con sus componentes tisulares conjuntivos: red o malla trabecular, espacios de Fontana confluyendo en el conducto de Schlemm y la relación existente con el inicio o nacimiento del iris, componente de la coroides. Tinción: Límite córnea-esclerótica Red o malla trabecular Conducto de Schlemm Tejido conjuntival escleral Objetivo de 40x 6. Preparación histológica: Ojo (retina y coroides) Observar los diversos componentes tisulares: conjuntivos, vasculares y epiteliales de la coroides y de la retina. Reconocer las 10 capas de las cuales consta la retina con el objetivo de 40x. Tinción: Coroides: - Células pigmentarias (coroides) - Vasos sanguíneos (coroides) Retina Objetivo de 10x 51 Tinción: Epitelio pigmentario Capa de conos y bastones Membrana limitante externa Capa nuclear externa Capa plexiforme externa Capa nuclear interna Capa plexiforme interna Capa ganglionar Capa de los axones del nervio óptico Membrana limitante interna Objetivo de 40x 52 7. Preparación histológica: Ojo (nervio óptico/punto ciego) Observar la leve invaginación o depresión producida en la retina, coroides y la esclerótica al penetrar el conjunto de axones que constituyen el nervio óptico. Esta zona corresponde a la papila óptica Tinción: Esclerótica Coroides Retina Axones Nervio óptico Objetivo de 40 x 8. Preparación histológica: Ojo (cristalino) El cristalino se ubica entre la cámara posterior y la cámara vítrea y se sostiene a partir del ligamento suspensorio del cristalino o zónula de Zinn que emerge de los procesos ciliares del cuerpo ciliar. Rodeando a todo el cristalino se encuentra la cápsula. En el polo anterior se localiza el epitelio del cristalino. El cristalino se encuentra constituido en su mayor parte por fibras que son células que se originan del epitelio situado en la zona del ecuador. Tinción: Cápsula del cristalino Epitelio superficial cúbico simple Fibras del cristalino Núcleos de las fibras del cristalino Ligamento suspensorio del cristalino Objetivo de 40x 53 PRÁCTICA 15. Tejido sanguíneo (sangre) Objetivo: Identificar las diferentes células del tejido sanguíneo circulante, sangre periférica, por sus características morfológicas: tamaño, contenido y coloración del citoplasma, y la forma de los núcleos; así como las plaquetas. Preparación histológica: Frotis de sangre periférica Tinción: Plaquetas Eritrocitos Neutrófilo: - Núcleo multilobulado - Gránulos específicos del neutrófilo Objetivo de 40x o 100 x Eritrocitos Eosinófilo: - Núcleo bilobulado - Gránulos específicos del eosinófilo Objetivo de 40x o 100x 54 Tinción: Eritrocitos Basófilo: - Núcleo multilobulado - Gránulos específicos del basófilo Objetivo de 40x o 100 x Eritrocitos Linfocito: - Núcleo esférico y grande - Reborde citoplasmático Objetivo de 40x o 100x Eritrocitos Monocito: - Núcleo excéntrico, con hendidura central (arriñonado) Objetivo de 40x o 100 x 55 PRÁCTICA 16. Tejido y órganos linfoides Objetivo: Identificar en el microscopio óptico las características histológicas de la amígdala y el apéndice, así como de los órganos linfoides encapsulados: timo, bazo y ganglios linfáticos o linfonodos. 1. Preparación histológica: Amígdala palatina Observar que el parénquima carece de cápsula. Los componentes tisulares linfoides están recubiertos por un epitelio plano estratificado sin estrato córneo. Existe una lámina propia de tejido conjuntivo denso, invadido por cantidades variables de linfocitos. El epitelio y la lámina propia se invaginan para constituir las criptas tonsilares o amigdalinas. El parénquima subepitelial está integrado por folículos linfoides secundarios y tejido linfoide denso interfolicular. En las zonas más profundas suelen observarse glándulas seromucosas y/o fibras musculares estriadas esqueléticas. Tinción: Epitelio plano estratificado sin estrato córneo Criptas tonsilares Lámina propia con linfocitos Folículos linfoides secundarios: - Centro germinativo - Zona del manto Tejido linfoide interfolicular Tejido conjuntivo y vasos Sanguíneos Objetivo de 10x 56 2. Preparación histológica: Apéndice humano Observar epitelio cilíndrico simple con abundantes células caliciformes que se invagina para formar glándulas intestinales (tubulares rectas), lámina propia escasa y en la submucosa se visualizan varios folículos linfáticos secundarios y tejido linfático difuso. Tinción: Epitelio intestinal Células caliciformes Glándulas tubulares rectas Folículos linfáticos secundarios: - Centro germinativo - Zona del manto Tejido linfático difuso Objetivo de 4x o 10x Secciones de glándulas intestinales Folículos linfáticos secundarios: - Centro germinativo - Zona del manto Tejido linfático interfolicular Objetivo 40x 57 3. Preparación histológica: Ganglio linfático Observar las principales características de una sección longitudinal o trasversal de un ganglio linfático. Distinguir el parénquima de la corteza y la médula. Reconocer la cápsula y trabéculas conjuntivas densas irregulares, los senos linfáticos subcapsulares y los senos linfáticos trabeculares. En la corteza identificar los folículos linfoides secundarios y el tejido linfoide de la paracorteza. En la médula el tejido linfoide en cordones y difuso; y los senos linfáticos medulares. Tinción: Cápsula y trabéculas Corteza Paracorteza Nódulos o folículos linfoides Médula Objetivo de 4x o 10x Cápsula Corteza linfática: - Vasos linfáticos aferentes - Seno linfático marginal / subcapsular - Trabéculas conjuntivas corticales - Seno linfático trabecular - Folículos linfoides secundarios: Centro germinativo Zona del manto Objetivo 40x 58 4. Preparación histológica: Timo Observar la cápsula muy fina de tejido conjuntivo laxo que emite trabéculas delgadas que individualizan parcialmente a un conjunto de lobulillos tímicos integrados por una corteza basófila y una médula ligeramente acidófila. En la corteza se observan abundantes linfocitos. En la médula existe menos cantidad de linfocitos, en comparación con la corteza. En ella se observan los corpúsculos tímicos o de Hassall muy acidófilos, con algunas células que exhiben signos de queratinización por la presencia de gránulos basófilos de queratohialina. Tinción: Cápsula tímica Tabiques conjuntivos Lobulillos Corteza Médula Objetivo de 4x o 10x Médula: - Corpúsculo de Hassall Objetivo 40x 59 5. Preparación histológica: Bazo Observar los componentes tisulares y celulares del parénquima esplénico. El órgano muestra una cápsula gruesa y muy acidófila. Distinguir el origen, desde la cápsula, de trabéculas que ingresan y se distribuyen entre el parénquima. En un inicio se visualizan las trabéculas gruesas, las cuales conforme penetran al parénquima se ramifican hasta culminar, de manera general, en el retículo fibrocelular linfático. En el interior de las trabéculas se visualizan vasos sanguíneos arteriales y venosos, y vasos linfáticos. Diferenciar los componentes del parénquima esplénico: pulpa roja con eritrocitos en el interior de senos venosos y capilares sinusoidales; y pulpa blanca, constituida por folículos linfoides secundarios y las vainas linfáticas periarteriales. Distinguir, en la capa del manto de los folículos, la presencia de la arteriola folicular o arteriola central. Tinción: Cápsula Trabéculas con vasos sanguíneos Pulpa blanca Pulpa roja Objetivo de 4x o 10x 60 Tinción: Pulpa blanca: - Folículos linfoides: - Vainas periarteriales: - Centro germinativo Arteriola folicular o central Capa del manto Ramas de la arteria esplénica Linfocitos T Pulpa roja: Capilares sinusoidales Eritrocito Objetivo de 10x o 40x 61 PRÁCTICA 17. Sistema cardiovascular I. Corazón y sistema de conducción cardiaca Objetivo: Identificar las características histológicas del sistema de conducción: nodo sinoatrial, nodo atrioventricular y fibras de Purkinje. En la preparación de fibras de Purkinje observar las características histológicas del epicardio, miocardio, endocardio. 1. Preparación histológica: Nodo atrioventricular Observar y diferenciar, a menor aumento o a simple vista, el tabique interatrial y el tabique interventricular; entre ambos conglomerados musculares se distingue una zona menos coloreada, es el tabique conjuntivo atrio-ventricular. En el centro del tabique se visualiza una zona ligeramente acidófila con las fibras musculares modificadas del nodo atrioventricular con las características microscópicas de fibras musculares más pequeñas y con menos cantidad de miofibrillas por lo que se ven más pálidas. Tinción: Miocardiocitos atriales Miocardiocitos ventriculares Tejido conjuntivo denso Nodo atrioventricular: - Miocardiocitos nodales Objetivo de 10x o 40x 62 2. Preparación histológica: Nodo sinoatrial Observar la pared cardiaca del atrio derecho. Se distinguen: la pared de la vena cava y su relación con el epicardio del atrio. A menor aumento, se diferencian las fibras musculares atriales de los miocardiocitos modificados del nodo porque las atriales se colorean con mayor intensidad que las del nodo. Así mismo el diámetro de las fibras atriales es ligeramente mayor que los del nodo. Con el objetivo de 40 x, se observa que las fibras nodales poseen un núcleo central, voluminoso, rodeado por un espacio en el cual no se observan miofibrillas, las cuales se disponen solamente en la periferia de las fibras. Tinción: Pared de la vena cava Epicardio atrial Miocardiocitos modificados del nodo Miocardiocitos atriales Objetivo de 4x o 10x Miocardiocitos modificados del nodo Miocardiocitos atriales Objetivo 40x 63 3. Preparación histológica: Red de Purkinje Observar en el epicardio el mesotelio, el tejido conjuntivo, los vasos vasculares y los adipocitos. En el miocardio distinguir las características morfológicas de secciones longitudinales y transversales de las fibras musculares estriadas cardiacas o miocardiocitos. En el endocardio observar el endotelio y el tejido conjuntivo en el cual se identifican las fibras de Purkinje que corresponden a células musculares cardiacas modificadas que poseen de cinco a seis veces mayor volumen que las fibras miocárdicas. Poseen un núcleo esférico y central, el citoplasma es pálido por la presencia de miofibrillas escasas y dispuestas en la periferia. El resto del citoplasma está ocupado por abundante cantidad de glucógeno. También se bifurcan y se unen a otras fibras de Purkinje mediante discos intercalares. Tinción: Epicardio: - Mesotelio - Tejido conjuntivo laxo y adipocitos - Vasos sanguíneos (ramificaciones coronarias) Miocardio: - Vasos sanguíneos - Tejido conjuntivo - Miocardiocitos Endocardio: Objetivo de 4x o 10x - Endotelio - Tejido conjuntivo subendotelial 64 Tinción: Endocardio: - Endotelio - Tejido conjuntivo subendotelial - Fibras de Purkinje Objetivo de 40x 65 PRÁCTICA 18. Sistema cardiovascular II. Vasos sanguíneos Objetivo: Identificar en el microscopio óptico las características histológicas de las arterias, venas y capilares. 1. Preparación histológica: Aorta Observar las tres capas o túnicas vasculares de la aorta (gran arteria, arteria elástica o de conducción): íntima o interna, media y adventicia. Reconocer en la íntima el endotelio, el tejido conjuntivo subendotelial. En la túnica media, la gran cantidad de membranas onduladas elásticas fenestradas y núcleos alargados de las fibras musculares lisas. En la túnica externa o adventicia, el tejido conjuntivo laxo y la presencia de vasos arteriales y venosos. Tinción: Túnica íntima: - Endotelio - Tejido conjuntivo Túnica media: - Membranas elásticas - Fibras musculares lisas Túnica adventicia: - Tejido conjuntivo laxo - Arteriolas y vénulas Objetivo de 10x 66 2. Preparación histológica: Cordón espermático Observar varios componentes vasculares: a) arterias medianas o musculares o de distribución en la cuales observamos una luz regular (circular), la túnica media muestra abundantes fibras musculares lisas, limitadas por las láminas elásticas interna y externa; b) venas medianas en las que se oberva una luz irregular, con la pared delgada con respecto a las arterias, con una adventicia muy notoria; y c) arteriolas y capilares. Tinción: Venas medianas: - Túnica íntima - Túnica media - Túnica adventicia Arterias medianas o musculares: - Túnica íntima - Túnica media - Túnica adventicia Arteriolas Capilares Objetivo de 40x 67
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