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Universidad de San Carlos de Guatemala
Centro Universitario de Occidente
División de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina
Lic. José Manuel Arriaga Romero, Q.B.
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
CURSO DE BIOQUÍMICA
AÑO 2016
LABORATORIO No. 9
DETERMINACIÓN DE CREATININA Y NITRÓGENO DE UREA
INTRODUCCIÓN
La creatinina es una molécula de desecho que se genera a partir del metabolismo muscular. La creatinina
proviene de la creatina, una molécula muy importante para la producción de energía muscular.
Aproximadamente el 2% de la creatina del cuerpo se convierte en creatinina cada día. La creatinina se
transporta desde los músculos por medio de la sangre hacia el riñón. Los riñones filtran la mayoría de la
creatinina y la eliminan en la orina.
Aunque es una sustancia de desecho, la creatinina es una prueba diagnóstica esencial, ya que se ha
observado que su concentración en sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la función renal. Si los
riñones no funcionan bien, no eliminan bien la creatinina y por lo tanto ésta se acumula en la sangre. Por esto
la creatinina puede avisar de una posible disfunción o insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten
síntomas. Por eso la creatinina suele figurar en los análisis de sangre que se realizan comúnmente.
La determinación de creatinina es un indicador útil para evaluar la función glomerular renal,
teniendo en cuenta el prerrequisito que la producción de creatinina y su excreción sean iguales. Esto se
cumple en individuos sanos con dieta normal. Las variaciones intra individuales en estas condiciones son
mínimas mientras que las interindividuales son muy fluctuantes debido a:


Diferencia en la masa muscular y por tanto de producción de creatinina en distintos individuos.
Diferencia en la ingesta de carne. Un Kg de carne contiene de 2 a 5 g de creatina que se convierte
en creatinina en el proceso de cocción. Del 15 al 30% de la creatinina excretada diariamente es de
origen alimentario.
La creatinina en suero no es un buen indicador de la tasa de filtración glomerular (FGR) ya
que su valor se encuentra aumentado solamente cuando ésta ha disminuido a valores de 60-40 mL/min/1.73
m2.
La utilidad clínica de la determinación de creatinina es el diagnóstico y pronóstico de las nefropatías,
obstrucciones urinarias por afección de próstata, vejiga y uréteres. También anurias transitorias por litiasis.
Su medición está sujeta a diversas variables pre analíticas; así, por ejemplo, se ve aumentada en casos de
lipemia, hemólisis y ejercicio físico excesivo, y disminuye por hiperbilirrubinemia y el embarazo. También
algunas enfermedades pueden alterar su concentración sérica, entre ellas, la diabetes, cualquier enfermedad
que comprometa la función renal, ya sea aguda o crónica, así las hemorragias, hipotensión, rabdomiolisis,
acromegalia y gigantismo, en los que se aumenta su concentración. Mientras que la caquexia por reducción
de la masa muscular la reduce.
Su excreción en orina está disminuida por insuficiencia renal, miopatías, leucemias y anemias.
Algunas drogas también aumentan su concentración sanguínea: gentamicina, meticilina, cimetadina,
trimetoprima, espirinolactona, amilorida, ácido salicílico, ácido ascórbico, metildopa, levodopa, fructosa, drogas
nefrotóxicas, etc.
La urea es un residuo de la descomposición de las proteínas y por lo tanto está directamente relacionada con
la cantidad de proteínas que comemos. Normalmente, los riñones filtran la urea de la sangre, pero cuando los
riñones no funcionan bien, la cantidad de urea filtrada es menor y aumenta en la sangre.
El aumento de urea puede producir malestar digestivo (náuseas y vómitos) y cuando los niveles son muy
altos, alteraciones en el nivel de conciencia (uremia).
La urea se forma en el hígado, es filtrada y absorbida por los riñones. Constituye la fracción de nitrógeno no
proteico más importante en la mayoría de los líquidos biológicos.
En el hombre, es el principal producto final del metabolismo proteico. Representa el 85% del nitrógeno
urinario, por lo que no resulta sorprendente el papel fundamental que juega el riñón en la regulación sistémica
de los niveles de urea. Un aumento de la concentración sérica de urea se interpreta como una posible
disfunción renal.
La reabsorción renal de urea es mayor cuando el flujo es lento y menor cuando aumenta la diuresis. Los
niveles séricos de urea están relacionados con la dieta y el metabolismo proteico.
Su utilidad clínica se basa en su importancia en la evaluación de la función renal. Entre las variables
preanalíticas que incrementan su valor sérico están el sexo –es mayor en hombres que en mujeres-, la edad,
alcalosis, amonio, bilirrubina, creatina, creatinina, hemoglobina, ácido úrico, plomo y la hemólisis. Mientras
que entre los que lo disminuyen están el embarazo, la ingesta inadecuada de proteínas, la ingesta de agua y
el tabaco.
Enfermedades como nefroesclerosis, tuberculosis renal, necrosis cortical, gota crónica, malignidad,
hiperparatiroidismo y el síndrome de Reye disminuyen sus niveles séricos; mientras que la acromegalia,
fibrosis quística, cirrosis hepática, falla hepática, hepatitis tóxica, preeclampsia, eclampsia, síndrome nefrótico
y enfermedad celíaca los disminuyen.
Entre las drogas que aumentan su concentración sérica están alopurinol, aminoácidos, aspirina, cisplatino,
ciclosporina, furosemida, gentamicina, neomicina, tetraciclina, hidroclorotiazida, interleukina 2, pentamidina,
tertratolol, ketoprofeno, anfotericina B, captopril, carbamacepina, cimetidina, etc; y entre las que la disminuyen
están la hormona del crecimiento, prednisona, ácido ascórbico, heparina, amikacina, iodoacetato,
parametasona, fenotiazinas, etc.
Actualmente es más común expresar las concentraciones de urea en términos de nitrógeno de urea (BUN).
MATERIALES
 Suero para las determinaciones químicas
 Reactivo para la determinación de creatinina por el método de Jaffe
 Reactivo enzimático colorimétrico para la determinación de urea
 Soluciones estándar de:
o Creatinina
o Urea
 Cubetas
 Micropipetas
 Puntas para micropipetas
 Fotómetro
 Reloj
PROCEDIMIENTOS
1. Creatinina
a) Tomar dos tubos limpios
b) Identificar los dos tubos de la siguiente forma: uno como St (de estándar) y uno como M (de muestra)
c) Colocar en los dos tubos 1000 µl de reactivo de Jaffe y pre incubar por dos minutos a 37°C
d) Programar el espectrofotómetro a 505 nm y ponerlo en cero con blanco de agua destilada
e) Agregar al tubo St 100 µl (microlitros) de solución estándar de creatinina, activar inmediatamente el
cronómetro y transferir a la cubeta de lectura
f) Introducir la cubeta al espectrofotómetro y a los 30 segundos leer la primera absorbancia del estándar
y anotarla como Ast1
g) Leer la segunda absorbancia del estándar 60 segundos después de la primera y anotarla como ASt2
h) Sacar la cubeta del fotómetro, descartar su contenido y golpearla sobre papel absorbente para
eliminar el exceso de líquido remanente
i) Repetir los pasos 5, 6 y 7 utilizando el suero del paciente en vez del estándar, anotando las
absorbancias correspondientes como AM1 (a los 30 segundos) y AM2 (60 segundos después de la
primera lectura)
j) Calcular las diferencias de absorbancia del estándar (ΔSt) y de la muestra (ΔM):
ΔASt = ASt2 ASt1
ΔAM = AM2 –
AM1
k) Determinar la concentración de creatinina utilizando ΔS y ΔM en la ecuación de BeerLambert Concentración de Creatinina en la muestra =ΔAM ÷ ΔASt
× Concentración del
estándar
l)
Los valores de referencia de creatinina son: Hombres: 0.7 – 1.3 mg/dl
Mujeres: 0.6 – 1.1 mg/dl
2. Nitrógeno de urea
a) Tomar dos tubos limpios
b) Identificar los dos tubos de la siguiente forma: uno como St (de estándar) y uno como M (de muestra)
c) Colocar en los dos tubos 1000 µl de reactivo para la determinación de Nitrogeno de Urea
d) Programar el espectrofotómetro a 340 nm y ponerlo en cero con blanco de agua destilada
e) Agregar al tubo St 10 µl (microlitros) de solución estándar de BUN, activar inmediatamente el
cronómetro y transferir a la cubeta de lectura
f) Introducir la cubeta al espectrofotómetro y a los 30 segundos leer la primera absorbancia del estándar
y anotarla como Ast1
g) Leer la segunda absorbancia del estándar 60 segundos después de la primera y anotarla como ASt2
h) Sacar la cubeta del fotómetro, descartar su contenido y golpearla sobre papel absorbente para eliminar
el exceso de líquido remanente
i) Repetir los pasos 5, 6 y 7 utilizando el suero del paciente en vez del estándar, anotando las
absorbancias correspondientes como AM1 (a los 30 segundos) y AM2 (60 segundos después de la
primera lectura)
j) Calcular las diferencias de absorbancia del estándar (ΔSt) y de la muestra (ΔM):
k) ΔASt = ASt2 - ASt1
l) ΔAM = AM2 – AM1
m) Determinar la concentración de creatinina utilizando ΔS y ΔM en la ecuación de Beer-Lambert
Concentración de BUN en la muestra =ΔAM ÷ ΔASt × Concentración del estándar
n) Los valores de referencia son: 4.7 -23.4 mg/dl
RESULTADOS
Calcule las concentraciones de cada uno de los parámetros químicos ensayados y preséntelos en una tabla
de resultados.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Compare los resultados obtenidos con los valores de referencia correspondientes
Profundice, en forma ordenada, sobre las condiciones clínicas en las que se podrían obtener valores fuera de
lo normal de cada uno de ellos, estableciendo las causas probables.
CONCLUSIONES
Saque sus propias conclusiones sobre la práctica realizada.
TRABAJO ESPECIAL
Desarrolle los siguientes temas:
1. Creatinina
a. Creatinina sérica elevada
b. Creatinina sérica disminuida
c. Filtración glomerular
d. Depuración de creatinina
2. Nitrógeno de urea
a. Urea alta (hiperazoemia)
i. Extra renales por aumento de producción de urea
ii. Por eliminación renal deficiente
1. Origen prer renal
2. Origen parenquimatoso
3. Origen pos renal
b. Urea baja (hipoazoemia)
CUESTIONARIO
1) ¿Cuál es el origen de la creatinina?
2) ¿Qué significado clínico tiene la determinación del nitrógeno de urea?
3) ¿Cuál es la diferencia entre BUN y Urea?
4) ¿Qué diferencia hay entre creatina y creatinina?
5) Don Antonio llegó al laboratorio en el que se le realizó determinación de creatinina sérica, obteniéndose los
siguientes datos: ASt1= 0,345, ASt2=0.383, AM1=0.415 y AM2=0.459. Si el estándar tiene una concentración de 2.0
mg/dL:
a. ¿Cuál es la concentración de creatinina sérica de Don Antonio?
b. ¿Tiene algún desorden orgánico Don Antonio?
c. Si su respuesta anterior fue afirmativa, ¿cuál podría ser este desorden?
d. ¿Qué información le es útil para decidir si un resultado es patológico o no?
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Liste las referencias utilizadas para fundamentar su discusión de resultados.