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Microbiología Clínica: Tema 1
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INTRODUCCIÓN A LA
MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
Microbiología Clínica: Tema 1
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PROCESO DE APRENDIZAJE
• Conocimientos---------SABER.
• Microbiología Medica.
Microorganismos productores
• Hábitos---------------- SABER HACER.
Microbiología Clínica. Pacientes con síndromes
de etiologia microbiana
• Actitudes--------------- SABER SER MEDICO.
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MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
• Diagnósticos etiológicos preliminares.
• Utilización racional de las técnicas
diagnósticas.
• Correcta obtención de muestras.
• Fundamentos de técnicas y métodos
diagnósticos.
• Evaluación correcta de los resultados.
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FASES EN EL DIAGNOSTICO
MICROBIOLOGICO
• Clasificación inicial. Tiene una infección ?
•
•
•
•
•
Clasificación sindrómica.
Que muestras tomar ?
Cuando tomarlas ?
Como tomarlas ?
Diagnósticos simultáneos o sucesivos
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FASES DEL DIAGNÓSTICO
MICROBIOLÓGICO
• Fase pre analítica:
– Proveer información sobre recogida/transporte y
conservación de las muestras.
– Interpretación de los resultados.
– Utilización de la prueba.
• Fase analítica:
– Producir resultados de calidad.
• Fase post analítica:
– Revisar exactitud del resultado.
– Evaluar la relevancia clínica.
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RELEVANCIA CLÍNICA
• Modificación de nuestra actitud con el
paciente:
– Gravedad del proceso
– Otras actividades derivadas
• Declaración obligatoria
• Aislamiento del paciente
• Indicación de profilaxis
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MISIONES DE UN SERVICIO DE
MICROBIOLOGÍA
• Información necesaria para tomar una decisión
clínica y adopción de medidas preventivas.
• Normas de obtención de muestras para un
correcto diagnóstico microbiológico.
• Identificación de microorganismos.
• Estudio de sensibilidad a antimicrobianos.
• Facilitar recepción de muestras.
• Envío rápido de resultados.
• Valoración de las técnicas diagnósticas.
• Puesta al día de los conocimientos.
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UTILIZACIÓN DE UNA TÉCNICA
DIAGNÓSTICA
NO PIDAS NADA QUE SI ES
POSITIVO NO SEPAS QUÉ
HACER
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UTILIZACIÓN DE UNA TÉCNICA
DIAGNÓSTICA
• Valoración previa de que un paciente
presente o no la enfermedad.
• Planteamiento inicial antes de solicitar una
prueba diagnóstica de cual va a ser
nuestra actitud y decisión después del
resultado de la misma.
• Conocimiento de la eficacia de una prueba
a utilizar.
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PARÁMETROS DE UNA TÉCNICA
DIAGNÓSTICA
•
•
•
•
•
•
Sensibilidad
Especificidad
V.P.Positivo
V.P.Negativo
Eficiencia
Relevancia clínica
•
•
•
•
Verdadero positivo
Verdadero negativo
Falso positivo
Falso negativo
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SENSIBILIDAD (S)
Verdadero positivo (VP)
S=
X 100
(VP) + Falso negativo (FN)
ESPECIFICIDAD (E)
E=
Verdadero negativo (VN)
(VN) + Falso positivo (FP)
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X 100
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EFICIENCIA
VP + VN
Total
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X 100
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VALOR PREDICTIVO POSITIVO
(VPP)
(VP)
VPP =
(VP) + (FP)
X 100
VALOR PREDICTIVO NEGATIVO
(VPN)
VPN =
(VN)
(VN) + (FN)
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X 100
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ERRORES DIAGNÓSTICOS
• Falso Positivo: Diagnóstico microbiológico de
un paciente que no padece la enfermedad
infecciosa. I.T.U.
• Falso Negativo: Descartar una patología
infecciosa en un paciente infectado. Meningitis
meningocócica.
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VALOR PREDICTIVO DE UNA PRUEBA CON UN 95% DE S. Y UN
95% DE E. VARIACIONES EN FUNCIÓN DE LA PREVALENCIA DE
LA ENFERMEDAD
Prev. Enfermedad (%)
Valor Predictivo (%)
16’1
27’9
50
67’9
77
82’6
86’4
95
1
2
5
10
15
20
25
50
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NORMAS GENERALES DE TOMA DE
MUESTRAS CLÍNICAS PARA EL DIAGNÓSTICO
DE LAS EE.II.
• La muestra debe ser representativa del cuadro
clínico.
• Debe obtenerse antes de la instauración del
tratamiento antimicrobiano.
• En determinados procesos infecciosos (p. ej.
septicemia) el momento de la obtención puede
ser importante.
• Debe transportarse rápida y adecuadamente al
laboratorio.
• Debe
rotularse
correctamente
y
venir
acompañada de una orientación o juicio clínico
que permita realizar las técnicas adecuadas al
microorganismo sospechado.
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MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO
MICROBIOLÓGICO: TIPOS
• Muestras de obtención directa de localizaciones
estériles. Alta rentabilidad.
• Muestras
de
obtención
indirecta
de
localizaciones
estériles.
Rentabilidad
dependiente de la flora saprofita.
• Muestras obtenidas de localizaciones con flora
microbiana.
• Muestras para el diagnóstico virológico. Alta
rentabilidad , si no es flora viral habitual.
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PRINCIPALES MUESTRAS CLÍNICAS
PARA AISLAMIENTO DE VIRUS
Cuadro clínico
Exudado
faríngeo
LCR
Orina
Heces
Vesículas
(++++)
(+++)
(+/-)/(++++)
(++)
(++)
(+/-)
(+)
(-)
(-)
(-)
(+++)
(-)
(-)
(-)
(+)
(++++)
(-)
(-)
(-)
(-)
(++++)
(-)
(-)
(+++)
(-)
Otros
Meningitis y Encefalitis
V. de la parotiditis
Enterovirus
Herpes simple
Respiratorios:
Gripe y V.
parainfluenzae
Adenovirus
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Biopsia
(++++)
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MÉTODOS DIAGNÓSTICOS
• Métodos directos:
– Visualización del microorganismo.
– Aislamiento del microorganismo.
– Detección de antígenos.
– Detección de metabolitos, componentes y
ácidos nucleicos.
• Métodos indirectos:
– Detección de anticuerpos: Diag. Serológico.
– Detección Respuesta Inmune Celular.
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PRINCIPALES TÉCNICAS MICROSCÓPICAS
USADAS PARA LA VISUALIZACIÓN DE
MICROORGANISMOS EN MUESTRAS CLÍNICAS
Técnica
Utilidad
Microscopía óptica: Fresco
Microscopía óptica: Tinción
Hongos, parásitos y virus (efecto
citopático)
Microscopía campo oscuro
Bacterias, hongos y parásitos.
Microscopía contraste de fases
Treponemas (chancro sifilítico)
Microscopía luz ultravioleta
Hongos y parásitos (poca utilidad
diagnóstica)
Microscopía electrónica
Inmunofluorescencia(bacterias,
hongos y parásitos.
Virus (poca utilidad diagnóstica)
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VISUALIZACIÓN DEL
MICROORGANISMO
• Microscopía: diferentes
tipos
• Examen en fresco
• Tinciones:
– Tinción de Gram
– Tinción de Ziehl-Neelsen
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TINCIÓN DE GRAM:
APLICACIONES
• LCR y otros fluidos
estériles
• Esputo
• Exudado uretral
• Exudado vaginal
• Exudados inflamatorios
• Orina
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INFORMACIÓN QUE APORTA UNA TINCIÓN DE
GRAM EN MUESTRAS CLÍNICAS (EXUDADOS
INFLAMATORIOS Y FLUIDOS ESTÉRILES)
• Permite evaluar la calidad de la muestra.
Presencia de:
– Células inflamatorias → muestra adecuada
– Células epiteliales → posible contaminación
• Permite visualizar la morfología, su disposición y
localización intra o extracelular de las bacerias
• Permite diferenciar bacterias: Gram + y Gram –
• Permite detectar la presencia de flora
contaminante
• Permite cuantificar el número de bacterias.
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AISLAMIENTO DEL
MICRORGANISMO
• Cultivo en medios artificiales:
– Nutritivos
– Selectivos
– Diferenciales
• Cultivos celulares:
– C. de órgano
– C. Secundarios
C. primarios
Línea celular
• Inoculación animal
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CARACTERÍSTICAS UTILIZADAS PARA
LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
• Crecimiento en distintos medios de
cultivo
• Características bioquímicas
• Producción de toxinas
• Estructura antigénica
• Estructura genómica
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DETECCIÓN DIRECTA DE ANTÍGENOS
MEDIANTE TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN
• Antígenos bacterianos
– H. influenzae
– S. pneumoniae
– N. meningitidis
• Antígenos fúngicos
– C. neoformans
• Antígenos víricos
– Rotavirus
– Adenovirus
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DETECCIÓN DIRECTA DE ANTÍGENOS
MEDIANTE TÉCNICAS DE ELISA
• Antígenos
bacterianos
–
–
–
–
• Antígenos víricos
S. pyogenes
L. pneumophila
C. trachomatis
C. difficile (toxina)
• Antígenos fúngicos
– C. neoformans
– A. fumigatus
–
–
–
–
Adenovirus
Herpesvirus
V. respiratorio sincitial
Rotavirus
• Antígenos
parasitarios
– G. lamblia
– C. parvum
– E. histolytica
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VENTAJAS DE LAS TÉCNICAS
DE AMPLIFICACIÓN
• Sensibilidad extrema (detectan hasta 1-10
microorganismos)
• Alta especificidad (diseño de cebadores
en función de secuencias específicas del
microorganismo)
• Rapidez de realización (máximo 24 horas)
• Detección de microorganismos viables y
no viables
• Automatizables
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INCONVENIENTES DE LAS
TÉCNICAS DE AMPLIFICACIÓN
• Posibles falsos positivos
• Acondicionamiento especial del
laboratorio
• Alto nivel de entrenamiento del
personal
• Elevado coste inicial
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DIAGNÓSTICO MEDIANTE
BIOCHIPS-MICROARRAYS
• Se fundamenta en una técnica de afinidad
utilizando sondas de ácidos nucleicos para
hibridación soportadas en un chip.
• Es una aplicación de la Bioinformática.
• Un microarray es una herramienta para analizar
la expresión genética que consiste en una
pequeña membrana o un portaobjetos de vidrio
que contienen muestras de muchos genes
organizados según un petrón determinado.
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Experimento con un Microarray de
ADN
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VENTAJAS DE LA DETECCIÓN RÁPIDA DE LA
RESISTENCIA MEDIANTE TÉCNICAS
MOLECULARES
• Reducir el tiempo requerido para
instauración tratamiento definitivo
• Evitar tratamientos incorrectos
• Detección de portadores infectados con
microorganismos resistentes
• Reducción de costes y tiempo de estancia
hospitalaria
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INCONVENIENTES DE LAS TÉCNICAS
MOLECULARES DEN LA DETECCIÓN DE
RESISTENCIAS
• Desconocimiento de la secuencia del
gen/es implicados
• Casos con múltiples genes implicados
• Diferente grado de expresión de los genes
en condiciones ambientales diferentes
• Los microorganismos de la flora saprofita
poseen también genes de resistencia
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DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO:
UTILIZACIÓN
• Agente causal:
– No cultivable
– Peligroso su cultivo
– Crecimiento lento
•
•
•
•
Cambiar el diagnóstico o el tratamiento
Comprender el proceso de la enfermedad
Estado inmunológico del paciente.
Datos para Epidemiología.
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DETERMINACIONES SEROLÓGICAS
• Inmunofluorescencia
– Directa
– Indirecta
• Radioinmunoanálisis
• Enzimainmunoanálisis
– ELISA tipo1
– ELISA tipo2
– ELISA tipo3 (captura)
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DETERMINACIONES SEROLÓGICAS
• Precipitación
– Medio sólido
– Medio líquido
• Aglutinación
– Directa
– Hemaglutinación
– Látex
• Fijación de complemento
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Interpretación de la Serologia
• Parejas de sueros
- Seroconversion. Negativo a Positivo
- Serorefuerzo.
Titulo .inicial x 4 o más.
Infecciones cronicas.
-Deteccion IgM.
- Acs frente a diversos antigenos.
Periodo Ventana
Diag. Serológico. Infecciones
1) Valoración de IgG E IgM
específica.
2) Valoración de IgG. Avidez.
3) Diagnóstico de Primoinfección.
Diag. Serológico. Objetivos
• Diag. Etiológico por la Respuesta
Inmune Humoral.
• Determinar Protección Frente a
Infecciones.
• Determinar Prevalencia de
Infecciones.
DETECCIÓN DE RESPUESTA
INMUNE CELULAR
•
•
•
•
Pruebas cutáneas
Activación linfocitaria
Inhibición de los macrófagos
Linfotoxicidad.
Actualmente NO se usan
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