Revista Científica de Investigaciones en OVINOS TECNICAS DE RECOLECCION DE SEMEN EN OVINOS HANPSHIRE Y CORRIEDALE EN EL CEHM TECNICAS DE RECOLECCION DE SEMEN EN OVINOS (Ovies aries) EN DOS RAZAS CORRIEDALE Y HAMPSHIRE DOWN EN EL CEHM **Julio N Calizaya Saravia *Juan Carlos Canqui V Palabras claves Plasma seminal, concentración, glucosa, potasio, sodio 1.- INTRODUCCIÓN Bolivia es un País de diversos pastos nativos o naturales que son favorables para la cría de ovinos, muchas de las familias campesinas tienen pequeños rebaños de ovino su lana es para la producción de su vestimenta la carne para el consumo, venta, también la leche para la producción de queso, para el sustento económico de sus familias. Los niveles de producción y mejoramiento ovino puede lograrse por dos vías: Una es mejorando las condiciones en que se desarrolla la actividad productiva de los animales ajustando el manejo sanitario, nutricional y reproductivo. La otra es a través del mejoramiento genético actuando sobre las características que aportan los carneros mejorados como la selección, como los futuros padres y madres o borregas. Donde ambos caminos llevaran al objetivo del centro de ganadería que es el mejoramiento de la producción pecuaria . El nivel tecnológico en las comunidades campesinas es muy bajo, el manejo del ganado es un componente poco trabajado en la mayoría de los pequeños productores, con la asimilación de practicas ganaderas adecuadas, de alimentación, sanidad, manejo y mejoramiento genético, quienes no disponen de recursos suficientes para inversiones que sirvan para la mejora de sus rebaños o la construcción de instalaciones ganaderas que sirvan para proteger de los factores climatológicos. RESUMEN: La obtención de semen en ovinos en las razas Hampsire Down y la Corriedale no es un procedimiento que se a estudiado a fondo como en otras especies, y presenta una serie de complicaciones asociadas principalmente a las características propias del semen, sin embargo los niveles de productividad son bajos en niveles de tecnología, Lo que nos permite investigar y mejorar las técnicas de recolección de semen y su respectivo análisis químico en las diferentes razas para intensificar el sistema de producción. El análisis estadístico que se empleo en el presente estudio, se utilizó el diseño completamente al azar, en un arreglo trifactorial. Los factores considerados en el presente estudio fueron: Métodos (Vagina artificial y Pipeteo), Razas (Hampshire y Corriedale) y Turno (Mañana y Tarde). Los volúmenes obtenidos por los métodos de la Vagina Artificial Modificada (V.A.M.) con un objeto inanimado presenta un promedio de 1.16 cc. en comparación al método del pipeteo que registro 0.58 cc. en el turno de la mañana con la vagina artificial fue un promedio de 1.13 cc y 0.58 cc.en el turno de la tarde, el mayor volumen registrado fue por la mañana ya que los animales por la noche descansan , ya que en el día solo se ocupan de satisfacer su hambre y a si mismo el cansancio la insolación y el frió son las causas de que por la tarde su libido sexual sea muy pobre. recolección de semen en las razas hampshire down y corriedale en el C.E.H.M. Determinar el método más óptimo para la recolección de semen del carnero. Evaluar las características físicas del semen en las dos técnicas. Valorar las propiedades microscópicas del eyaculado con los dos métodos. 2.-OBJETIVOS Sintetizar un calendario de manejo y sanidad animal. Manejo de reproductores machos en ovinos, evaluar las dos técnicas de 57 Revista Científica de Investigaciones en OVINOS TECNICAS DE RECOLECCION DE SEMEN EN OVINOS HANPSHIRE Y CORRIEDALE EN EL CEHM Periodo de recolección Una vez concluido el periodo de adiestramiento de los reproductores se inició con la recolección de semen, durante los meses de diciembre a mayo en la época húmeda. 3.-MATERIALES Y METODOS El trabajo de experimentación fue desarrollado en el “Centro Experimental Huajra Muntuna”, localizado a 79 km. al nor.-oeste de la ciudad de Oruro. Se encuentra ubicado a una altura de 3737 m.s.n.m. Material biológico Para el presente ensayo fueron utilizados dos razas de ovinos 4 carneros de la raza Hampshire Down y 4 carneros de la raza Corriedale, los cuales fueron seleccionados tomando en cuenta las característica raciales de cada raza, así como la edad reproductiva en la que se encontraban. Preparado de la vagina artificial La parte interior de la V.A.M. se fijó una funda látex que se utiliza para la recolección de semen, en el extremo de la funda se acomoda el tubo recolector graduado, y para la sujeción de la funda látex con una cinta de goma a los extremos para a si no dejar escapar el agua atemperada. Con la ayuda de una jeringa de 20 ml. se procedió a llenar agua atemperada entre 38 a 40°C, por la válvula también se introdujo aire para dar presión al interior de la vagina artificial y simular una vagina natural. FASE PRELIMINAR Construcción del objeto inanimado En la primera parte se procedió a realizar la zoometría de los animales (hembras), a partir de lo cual se construyó el armazón de madera (objeto inanimado), en la parte caudal de este armazón se realizó la apertura de un orificio con un diámetro de 5 cm, en el cual se alojó la vagina artificial de polietileno. Asimismo el armazón fue cubierto con el cuero de una hembra para que los reproductores puedan oler el olor de la hembra y así tener confianza para la monta y la recolección de semen. Así también, se realiza la monta donde se controlo la introducción del pene a la vagina artificial, en el caso de no intromisión, se manipulo el pene hasta tener la certeza de que estuviera dirigido dentro de la vagina artificial. FASE DE EVALUACIÓN DEL TRABAJO En el presente trabajo de investigación se evaluaron las siguientes variables: Selección de machos Los animales seleccionados para el presente trabajo fueron 12 animales de distintas edades de ½ a 3 años con un peso promedio de 40 a 55 kg. para corriedale. Para hampshire down de 50 a 60 kg., posteriormente se hizo la selección, y se tomo en cuenta la conformación y desarrollo corporal para futuros donadores de semen y reproductores, acorde a los estándares de las razas como ser: Que el ovino tenga todas las características de la raza. Ovinos sin braquigmatismo. Cola (defectuosos y congénitos de mal conformación). Aplomos y alzadas de cuerpo. Conformación de la cara y orejas Volumen El volumen se determino, mediante el vaso recolector graduado o una pipeta en ml. o cm3, los volúmenes recolectados varían de acuerdo a las razas y edades, se tuvo eyaculado de 0,5 ml. a 2 ml. de semen en la época húmeda. El dato recolectado se toma en cuestión de segundos para no matar al espermatozoide, para así realizar y observar en el microscopio la motilidad y el pH y el color. Evaluación del pH La lectura del pH de cada muestra, fue realizada con (PAPEL pH) y la ayuda de laminas las cuales son introducidas en la muestra y luego son comparadas con una tabla en la cual se tiene los valores asignados. Adiestramiento de machos al objeto inanimado Los animales seleccionados fueron sometidos a un periodo de adiestramiento por dos meses, antes de la colección de las muestras de semen. Y a los animales que rechazaron el objeto inanimado se les estimularon a la monta con una hembra (borrega) vacía acomodada al alto del maniquí. Motilidad masal Habiendo homogenizado el eyaculado por agitación del tubo de recolección, se retira una gota de semen con una pipeta pasteur entibiada y se coloca sobre porta objetos templados bajo observación microscópica con 100X aumento. 57 Revista Científica de Investigaciones en OVINOS TECNICAS DE RECOLECCION DE SEMEN EN OVINOS HANPSHIRE Y CORRIEDALE EN EL CEHM y ijkl = µ + α i + β j + αβ ij + δ k + αδ ik + βδ jk + Se podrá tener una idea de la calidad seminal por la velocidad con que se hacen y deshacen las ondas (motilidad masal). La motilidad se estima por el vigor del movimiento de los espermatozoide de ondas de una escala subjetiva entre 0 y 5 (0, mínimo; 5, máximo). αβδ ijk + ξ ijkl Donde: i = Vagina Artificial y Pipeteo j = DL, 2D y 4D k = Mañana y Tarde y ijkl = Obtención de semen afectada por el i- Concentración espermática Para realizar este análisis las células espermáticas estuvieran muertas para su conteo. La concentración espermática se realizo por medio de la cámara de neubauer. esimo método, la j-esima categoría y el k-esimo turno. µ = Media general. α i = Efecto fijo del i-esimo método. Color El color del semen es el primer factor a ser examinado inmediatamente después de la colección de semen. El semen de carnero varia de blanco lechoso a cremoso pálido, no pudiendo variar la tonalidad de acuerdo a la concentración; cuando la misma baja considerablemente el semen aparece como un líquido ligeramente lechoso y cuando los espermatozoides están ausentes totalmente azoopermia el mismo es incoloro. β j = Efecto fijo de la j-esima categoría. αβ ij = Efecto fijo de la interacción entre el i-esimo método y la j-esima categoría. δ k = Efecto fijo del k-esimo turno. αδ ik = Efecto fijo de la interacción entre el iesimo método y el k-esimo turno. βδ jk = Efecto fijo de la interacción entre la jesima categoría y el k-esimo turno. αβδ ijk = Efecto fijo de la interacción entre el i- Descripción del experimento La presente investigación fue llevada a cabo con el propósito de determinar el método más apropiado para la obtención de semen en carneros, para lo cual, se evaluaron dos métodos: vagina artificial y pipeteo. Por las características del trabajo y además porque no se contaba con material experimental homogéneo, fue necesario realizar dos experimentos. En el primero, el trabajo fue desarrollado en dos razas: Hampshire y Corriedale, con animales de una sola edad (4 dientes). En el segundo experimento, solamente se trabajó con carneros de la raza Corriedale, con animales de distintas edades: dientes de leche, dos dientes y cuatro dientes. esimo método, la j-esima categoría y el k-esimo turno. ξ ijkl = Efecto aleatorio de los residuales ≈ NIID 2 (O, σ e ). Analsiis estdistico.Los datos obtenidos en cada una de las variables fueron sometidos a un Análisis de Varianza (ANVA de Fisher y los promedios de los tratamientos fueron contrastados mediante el test Multicomparativo de Duncan a un nivel de probabilidad del 5%. Asimismo, dicho análisis fue efectuado en el Programa Estadístico SAS (Statistical Analsisi System) Diseño experimental Para el presente estudio, de acuerdo a las características del experimento, se utilizó el diseño completamente al azar, en un arreglo trifactorial. Los factores considerados en el presente estudio fueron: Métodos (Vagina artificial y Pipeteo), Categorias (DL, 2D y 4D) y Turno (Mañana y Tarde). Asimismo, se utilizaron 3 repeticiones por tratamiento. 4. RESULTADOS Y DISCUSIONES.VOLUMEN (ml) Al analizar los resultados presentados en el cuadro 1, observamos claramente que dicha variable (volumen) se vio afectada significativamente (P ≤ 0,01) al utilizar diferentes métodos de extracción de semen. De igual forma, como puede observarse también, las distintas razas empleadas en el experimento afectaron significativamente (P ≤ 0,05) al comportamiento de esta variable, lo cual significa, que el volumen Modelo estadístico 57 Revista Científica de Investigaciones en OVINOS TECNICAS DE RECOLECCION ION DE SEMEN EN OVINOS OVIN HANPSHIRE Y CORRIEDALE EN EL CEHM Cuadro 11. Análisis de varianza para la variable del volumen (ml) del semen FUENTE GL SC CM F Value Pr > F Método 1 2.205 2.205 53.10 ** <.0001 Raza Turno 1 1 0.240 0.451 0.240 0.451 5.78 * 10.87 ** 0.0243 0.0030 Método*Raza Método*Turno Raza*Turno Método*Raza *Turno 1 1 1 0.135 0.101 0.004 0.135 0.101 0.004 3.25 ns 2.44 ns 0.01 ns 0.0840 0.1315 0.9210 1 0.050 0.050 1.21 ns 0.2815 24 31 0.996 4.180 0.041 Error Total CV = 22.64 % Prom. general = 0.90 ml Grafico 3. Efecto de diferentes métodos de extracción de semen sobre la variable volumen (ml) 1,5 1,16 0,64 0,9 0,6 A 0,95 1,0 0,75 0,8 0,6 A B 0,4 0,2 0,0 Hampshire Corriedale Razas En el grafico 4 se muestran las variaciones del volumen de semen eyaculado por carneros de distintas razas (Hampshire y Corriedale). En donde se observa que hubo un eyaculado mucho mayor en los carneros de la raza Hampshire, con un promedio de 0.95 ml. A su vez, el volumen eyaculado por los carneros de la raza Corriedale fue de 0.75 ml, promedio bastante aceptable, aunque no tan bueno como el de la raza Hampshire. Estas diferencias, se deben principalmente a las características reproductivas de ambas razas, las cuales son diferentes. Esta explicación es respaldada por Hafez, E. (2000), quien señala que el volumen eyaculado por los animales depende de distintoss factores, entre los que se encuentra la raza. Simonetti, L. (1998), indica que cada raza produce unn semen cuyas características(volumen (volumen eyaculado, concentración espermática, motilidad, etc) son muy diferentes a otras razas. B 0,3 Figura 8. Efecto de diferentess categorías de carneros sobre la variable volumen (ml (ml) 0 Vagina artificial Pipeteo Métodos extracción 1,10 1,2 0,83 1,0 Los resultados obtenidos nos muestran claramente que hubo una mejor respuesta al emplear el método de la vagina artificial, puesto que con el mismo se obtuvo un eyaculado promedio de 1.16 ml. Por otra parte, como puede observarse, al emplear el método del pipeteo no se obtuvieron muy buenos resultados, ya que el volumen eyaculado apenas alcanzó a 0.64 ml. Grafico 4. Efecto de diferentes razas de carneros sobre la variable volumen (ml) Volumen (ml) Volumen (ml) 1,2 1,2 Volumen (ml) de semen extraídoo de ambas razas fue estadísticamente diferente. Igualmente, se pudo constatar también, que el horario de extracción del semen influyó significativamente (P ≤ 0,01) sobre el comportamient de dicha variable, lo cual, desde todo punto de vista ista es bastante positivo. 0,78 0,8 A 0,6 B 0,4 B 0,2 0,0 4D 2D Categorías DL Revista Científica de Investigaciones en OVINOS TECNICAS DE RECOLECCION ION DE SEMEN EN OVINOS OVIN HANPSHIRE Y CORRIEDALE EN EL CEHM En la presente figura 8 observamos claramente que el volumen de semen varió de acuerdo a la edad (categoría) de los animales. Los mejores resultados fueron alcanzados en los carneros categorizados como mo 4 dientes, con un eyaculado promedio de 1.10 ml. La otras dos categorías, como puede observarse, produjeron volúmenes estadísticamente similares, con promedios de: 0.83 ml en los carneros categorizados como 2 dientes y 0.78 ml en los carneros categoriza categorizados como dientes de leche. Grafico 5. Efecto del horario de extracción de semen sobre la variable volumen (ml). (ml) emplear ambos métodos de extracción de semen (vagina artificial y pipeteo). De igual forma, se puede observar también, que el horario de extracción del semen tampoco influyó sobre esta variable. Sin embargo, a diferencia de los dos anteriores, se puede apreciar que las distintas razas empleadas en el ensayo afectaron significativamente (P ≤ 0,01) al comportamiento de esta variable. Respecto a las demás fuentes de variación (de segundo y tercer orden), la totalidad de éstas registraron valores no significativos, lo cual significa, que no afectaron el comportamiento de esta variable (motilidad masal). 1,02 0,78 Volumen (ml) 1,0 0,8 0,6 A B 0,4 0,2 0,0 Mañana Tarde Turno El horario de extracción del semen como puede verse en la grafico 5 también influyó sobre el volumen de semen. Determinándose, de acuerdo a los resultados, que el mejor momento para la extracción del semen fue por la mañana, ya que en ese horario se obtuvo un mayor eyaculado, con un promedio de 1.02 ml. Por otro lado, cuando la extracción xtracción del semen fue realizada en el horario de la tarde no se obtuvieron muy buenos resultados, ya que el volumen de semen eyaculado apenas alcanzó a 0.78 ml. El bajo volumen de eyaculado obtenido en el horario de la tarde puede deberse a distintas causas, usas, pero principalmente los animales presentaban un bajo libido sexual al momento de la extracción del semen, producto esto del desgaste de energía que habían efectuado al recorrer grandes extensiones de terreno en busca de alimento (pastoreo). MOTILIDAD MASAL En el cuadro 13, se presentan los resultados correspondientes a la motilidad masal, donde se observa claramente que dicha variable tuvo un comportamiento estadísticamente similar al Cuadro 13. Análisis de varianza para la variable motilidad masal FUENTE GL SC CM F Value Pr > F Método Raza Turno Méto*Raza 1 1 1 1 0.0528 1.7876 0.5778 0.1276 0.052 1.7876 0.5778 0.1276 0.29 ns 9.75 ** 3.15 ns 0.70 ns 0.5965 0.0046 0.0886 0.4124 Méto*Turno Raza*Turno 1 1 0.0153 0.0759 0.0153 0.0759 0.08 ns 0.41 ns 0.7751 0.5260 Método*Ra za*Turno 1 0.0234 0.0234 0.13 ns 0.7239 24 31 4.4016 7.0621 0.1834 Error Total CV = 9.34 % Prom. general = 4.58 Grafico 6. Efecto de diferentes razas de carneros sobre la variable motilidad masal. 4,72 4,18 5 4 Motilidad masal 1,2 3 A B 2 1 0 Hampshire Corriedale Razas En el grafico 6 se presentan los promedios de motilidad masal del semen de carneros de distintas razas (Hampshire y Corriedale). De Revista Científica de Investigaciones en OVINOS TECNICAS DE RECOLECCION DE SEMEN EN OVINOS HANPSHIRE Y CORRIEDALE EN EL CEHM acuerdo a estos valores, el semen obtenido de los carneros de la raza Hampshire presenta mejores características, puesto que según los parámetros de clasificación está catalogado como muy bueno, con más de un 90 % de espermatozoides activos. A su vez, el semen obtenido de los carneros de la raza Corriedale presenta características algo inferiores al primero, y de acuerdo a estos mismos parámetros de clasificación están catalogados como buenos, con un 70 a 85 % de espermatozoides activos. similar en presencia de distintos factores (raza, método de recolección, edad del animal, etc). 5.-CONCLUSIONES.- Que el semen recolectado tiene una diferencia en el volumen en los dos métodos obtenidos en la vagina artificial, y el pipeteo. Pero el mayor volumen recolectado fue con la V.A.M. que de 1.5 cc en la raza hampshire down y 1cc.en corriedale. pH DEL SEMEN Como ya se dijo anteriormenete, el pH del semen es un indicativo para saber si este es de buena calidad o no, en los carneros el rango varía aproximadamente entre 6.2 a 6.9. La lectura del pH de cada muestra, no tiene una diferencia significativa en las diferentes muestras de recolección. Siendo un promedio de 6.2 a 6.9 de pH teniendo a ser básico. Los reportes obtenidos en el análisis de la presente variable (cuadro 15), nos muestran claramente que la misma no presenta diferencias estadísticas al 0.05 de probabilidad por el efecto de los factores; método, categoría y turno, como también sus respectivas interacciones. El porcentaje de motilidad en semen de ovinos se registro en las dos razas: en la hampshire down 4.72 % que es diferente a la corriedale de 4.18 % de motilidad como promedio. Cuadro 15. Análisis de varianza para la variable pH del semen FUENTE GL SC CM F Value Pr > F Método 1 0.6666 0.6666 2.92 ns 0.1133 Categoría Turno 2 1 0.3337 0.2016 0.1668 0.2016 0.73 ns 0.88 ns 0.5020 0.3660 Métod*Categ Método*Turno 2 1 0.2020 0.4266 0.1010 0.4266 0.44 ns 1.87 ns 0.6527 0.1968 Categoría*Tur Método*Categ *Turno Error 2 0.2004 0.1002 0.44 ns 0.6549 2 0.0520 0.0260 0.11 ns 0.8932 12 2.7416 0.2284 23 4.8250 Total CV = 7.62 % Prom. general = 6.28 Por otra parte el volumen de extracción de semen por categorías varia significativamente en carneros de 4 dientes de 1.10 % de semen recolectado, mientras que las otras dos categorías produjeron volúmenes de 0.83 % y 0. 78 % el motivo por lo cual es el crecimiento y la maduración. En cuanto a las técnicas de recolección, el método de la vagina artificial modificada (V.A.M.) presenta un mayor volumen de semen colectado, con un promedio de 1 a 2 cc. en comparación al método del pipeteo de 0.2 a 0.5 cc. El mejor recolectado es en horas de la mañana con un promedio de 1.5 a 2 cc., mientras que en el turno de la tarde no son buenas que alcanzo 0.7 ml. El coeficiente de varianza para este análisis alcanzó el valor de 7.62 %, encontrándose dicho valor muy por debajo del rango admitido para un estudio de tales características, por lo tanto, los resultados obtenidos en esta variable son confiables. Los mejores donadores de semen colectado fue la raza Hampshire Down. que la raza Corriedale. 6.- BIBLIOGRAFIA CONSULTADA.- Estos resultados son ratificados por diversos investigadores (Córdova, A. 2006; Aguilar, E. 2005; Sepúlveda, N. 2001), quiénes en experimentos similares encontraron que esta variable mantuvo casi siempre un comportamiento ACLO, 1988. Crianza de Ovejas. 2da Ed. Sucre - Bolivia, “QORI LLAMA”. pp. 5 , 8 13 , 48 - 49 , 75 57 Revista Científica de Investigaciones en OVINOS TECNICAS DE RECOLECCION DE SEMEN EN OVINOS HANPSHIRE Y CORRIEDALE EN EL CEHM AGUILAR. E. 2005. Variaciones estaciónales de características seminales, circunferencia escrotal y comportamiento sexual de carneros de las razas Hamsphire, Corriedale y Suffolk. Tesis de Maestría. Universidad de Buenos Aires. Buenos Aires Argentina. p. 78. ALENCASTRE DELGADO ROLANDO 1997. Producción de ovinos Ed. primera Puno - Perú. ALVARADO, J. 1994. Alimentación y Nutrición Animal. SENTA. La Paz - Bolivia ALZERRECA A., H. 1987. Diagnostico y prioridades de Alto Andino de Bolivia. In I Reunión Nacional de Praderas Nativas de Bolivia PAC ABOPA - CIAT - IBTA Oruro Bolivia. p 33 - 38 ALZERRECA, H. A. 1989. Diagnostico y prioridades de investigación de Praderas y pasturas del Altiplano y Altiplano Alto Andino de Bolivia. En: I Reunión Nacional de Praderas Nativas, Oruro - Bolivia. ALZERRECA A., H; y A. CARDOZO. 1991. Valor de los Alimentos para la Ganadería Andina. Serie Técnica IBTA / SR - CRSP. La Paz - Bolivia. ALZERRECA A., H. 1992. Producción y Utilización de los Pastizales de la Zona Andina de Bolivia, La Paz - Bolivia “Papiro”, pp. 87. 57 Revista Científica de Investigaciones en OVINOS TECNICAS DE RECOLECCION DE SEMEN EN OVINOS HANPSHIRE Y CORRIEDALE EN EL CEHM GALERIA DE FOTOGRAFIAS FOTO Nº 1 Infraestructura Centro Experimental Huajra Muntuna FOTO Nº 2 Sala de recolección e inseminación FOTO Nº 3 Evaluación del Volumen seminal FOTO Nº 4 Evaluación del Color seminal FOTO Nº 5 Recolección de semen por método del Maniqui FOTO Nº 6 Armazón de maniquí de ovino 8
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