1. No category

Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Escuela Académico Profesional de Farmacia Y Bioquímica
Departamento Académico de Bioquímica
ENCUENTRO CIENTÍFICO INTERNACIONAL 2015 DE VERANO
"FRANÇOIS PIUZZI"
“EFECTO DE Corryocactus brevistylus
SOBRE LAS RATAS CON ESTRÉS OXIDATIVO INDUCIDO
CON ADMINISTRACIÓN POR VÍA ORAL DE GRASA DE
RES"
Autores:
 Alderete Espejo Hattie
Chuco Sutta Luis Alberto
 Dominguez Parco Sandy Teresa
 Hualán Sandoval Luis Félix
Olazabal Espinoza Gloria Eliana
 Quintana Luyo Rubby
 Quispe Falcón Rebeca Ana
INTRODUCCIÓN
Todos los organismos que utilizan
O2 producen EROs
EROs provoca Estrés
oxidativo
Enzimáticos
SOD, Glut-px,
catalasa
No
enzimáticos
Se, Zn, vit. A y
E
Causa daño a biomoléculas
promoviendo enfermedades.
Antioxidantes
Vegetales,
frutas.
OBJETIVO GENERAL:
• Demostrar la capacidad antioxidante de Corryocactus brevistylus frente al estrés
generado por grasa termo-oxidada.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
• Evaluar la capacidad antioxidante del sanky mediante el ensayo DPPH.
• Lograr generar estrés oxidativo en ratas Holztman empleando grasa de res termooxidada.
• Determinar las concentraciones enzimáticas del sistema de defensa antioxidante
endógeno en tejido hepático (GPx) para valorar el impacto de la administración del
extracto de Corryocactus brevistylus sobre la producción de enzimas antioxidantes
después de sufrir situación de estrés oxidativo.
¿PORQUÉ USAR GRASA DE CARNE DE RES
COMO INDUCTOR DE ESTRÉS OXIDATIVO?
La grasa sufre
cambios
perjudiciales
Luego pasan a
formar parte de
la dieta
pudiendo ser
nocivos para la
salud
El consumo de
grasas termooxidadas puede
afectar los niveles
de oxidación
fisiológica como
una extensión de lo
ocurrido en los
alimentos
• Preparación de la grasa de
carne:
• Se licuó la grasa sólida,
Empleando el calor, así se
obtuvo la grasa termooxidada
Preparación
Dosis
•
•
•
•
•
•
Dosis: 450 g de grasa  3400 cal.
5g de grasa  37,7 cal
¿Cuánto consumió la rata?
Persona 60 Kg  2400 cal.
60000 2400 cal
4oog  16 cal
• Se les administró
por vía oral con
sonda
nasogástrica
Vía de
administración
Propiedades
Oriundo de los
beneficiosas
Andes del Perú
(antioxidante
Posee betaleínas, que con comp.
fenólicos, incrementa natural)
act. Antiox.
Posee
de de
Gran cantidad
dealtas concentraciones
Gran cantidad
Ca y P (ideal paracomp. fenólicos
Vit. C (contra
dietas)
escorbuto)
Ayuda a combatir otras
enfermedades
Gran cantidad de K
(más del doble que
Posee escasa utilidad
plátano)
La dosis se calculó con respecto al consumo humano
Una persona de aproximadamente 70 kg consume:
DOSIS DE
SANKY
0.3 Kg -------------- 70 kg
X --- 0.4 kg (peso de rata)
X = 1.7142 g
A esta cantidad de sanky se agregó agua, obteniéndose 5 mL en
total
Los cuales se le administraron a un grupo de ratas por 5 días
Mediante el uso de un catéter
Se preparó una
solución de DPPH 1mg
en 50 mL de metanol.
Luego se preparó la de
“Sanky”, en una
concentración de 300 μg/mL,
(Diferentes concentraciones
de 50, 75, 100 ug/mL)
El Blanco de muestra se
prepara con 0.2 mL. de
muestra (solución del
extracto) y 0.4 mL. de
metanol
GRUPO CONTROL (6)
Dieta comercial estándar y agua
corriente.
GRUPO ESTRÉS OXIDATIVO
Tratamiento
igual
al
GC
más
administración por vía oral de grasa de
carne de res. 5.3 mg /g peso corporal/día
durante los últimos 5 días de tratamiento.
24 ratas de cepa
albina Holtzman
macho de 2,5 meses
GRUPO OXIDATIVO Y
ANTIOXIDANTE (6)
Administración por vía oral la grasa de
carne de res y administración por vía
nasogástrica de sanky durante los últimos 5
días
GRUPO ANTIOXIDANTE (6)
Dieta comercial estándar con el agregado
de administración por vía oral de sanky
previamente licuado.
Se anotó el peso del animal y se saturó una cámara con éter, luego se introdujo al
animal.
Se cortó con el bisturí el cuello del animal y se colocó sobre bolsas con hielo
SACRIFICIO
DEL ANIMAL
Se procedió a la apertura longitudinal del abdomen y reconocimiento de
órganos.
Se extrajo el hígado y se lavó con solución de KCl 0.154 M; se procedió a
secar y pesar.
Se picó 1.5g de tejido y se trasladó al homogenizador. Se agregó 13.5mL de
sucrosa 0.25M.
Se centrifugó el homogenizado a 4000 rpm por 10 minutos y se
el sobrenadante.
trabajó con
2
._
O2
FUNDAMENTO
+2H
+
H2O2 + O2
KIT
RANSOD
FORMACIÓN DE RADICALES SUPERÓXIDO
._
Xantina
Ácido úrico + O2
REACCIÓN CON CLORURO DE 2-(4-YODOFENIL)-3-(4NITROFENOL)-5- FENILTETRAZOLIO (INT)
._
INT + O2
Colorante formazán
ACTIVIDAD SOD = GRADO DE INHIBICIÓN DE LA RX
(formación del colorante)
._
2 O2 + 2 H
+
H2O2 + O2
MP:
Sobrenadante
obtenido
del
homogenizado de higado de rata por
centrifugación diferencial.
BLANCO
DILUYENTE
Buffer Fosfato 0,01
mol pH 7,0
ESTÁNDAR
MUESTRA
SUSTRATO MIXTO
(Xantina 0.05
mmol/L + I.N.T.
0.025 mmol/L)
ESTÁNDAR
PROCEDIMIENTO
EXPERIMENTAL
MUESTRA
30 µL
-
-
-
30 µL
-
30 µL
1000 µL
1000 µL
1000 µL
Mezclar bien y añadir
XANTINA
OXIDASA (80U/L)
150 µL
150 µL
150 µL
• Condiciones de
trabajo:
• Longitud de onda:
505 ηm
• Cubeta: 1cm
espesor
• Temperatura 37
°C
• Se mezcló y leyó la
absorbancia al cabo de 30
segundos y se empezó a
cronometrar el tiempo
simultáneamente.
• Se leyó las absorbancias
cada 30 segundos hasta
cumplir los 150 segundos.
Act. x 30 seg = Abs 150 seg – Abs0 seg
5
Una
vez
obtenidas
las
absorbancias a los distintos
tiempos por cada animal de
experimentación
 Restar la última absorbancia
obtenida (a los 150 segundos)
con la primera absorbancia (a los
0 segundos) y dividir el resultado
entre 5 (intervalos cada 30
segundos) para así obtener la
actividad de la enzima SOD cada
30 segundos.
Act. x min = (Act. x 30 seg) x 2
X = Act. x min1+ Act. x min2 + Act. x min3 + Act. x
min4 + Act. x min5 + Act. x min6
6
FUNDAMENTO
Kit de Reactivos para Glutatión Peroxidasa
En un tubo agregar 0.05 ml del sobrenadante del
homogenizado.
Incluyendo 1 ml del agente diluyente.
Preparación de
las Muestras
diluidas
Incubar durante 5 minutos y añadir 1 ml del reactivo de
Drabkin.
Mezclar bien se recomienda que las muestras sean utilizadas
20 minutos después de la aplicación del reactivo de Drabkin.
Grupo Estrés
Grupo control
Grupo Antioxidante
Estrés + Antioxidante
% Captación R.L.
% Captación de Radicales Libres de la
Vitamina C
93.450
100.000
93.865
% Captación de Radicales libres del SANKY
120
IC 56.74
100
65.974
% CAPTACION
R.L.
Promedio
Abs
Conc.
ug/ml
80
50.000
Series1
60
40
0.000
50
75
100
Concentración µg/mL
20
0
"Sanky"
Patrón de
Blanco
R.
Tabla 2. % Captación de radicales libres del Sanky
Tabla 1. % Captación de radicales libres de Vitamina C
MUESTRA
CONC. µg/mL
50
VITAMINA C
75
100
Absorbancia
0.1026
0.0200
0.0185
% CAPTACIÓN
R.L.
65.974
93.450
93.865
Conc.
ug/ml
Promedio
Abs
% CAPTACION
R.L.
50
0.561
63.2
75
0.372
8.1
100
0.308
10.3
IC
"Sanky"
Patrón de
R.
Blanco
56.74
GRUPO CONTROL
TIEMPO (segundos)
RATA
0
30
60
90
120
150
1
2
3
4
5
6
0.20538
0.26358
0.22308
0.22778
0.20768
0.22948
0.21518
0.26418
0.22628
0.21768
0.21118
0.22598
0.20798
0.26568
0.22828
0.22028
0.20978
0.22688
0.20928
0.26738
0.23128
0.22318
0.21098
0.22818
0.21048
0.26778
0.22918
0.22198
0.21188
0.22818
0.21018
0.26778
0.23148
0.22278
0.21298
0.22998
act. X 30
seg
0.00096
0.00084
0.00168
-0.001
0.00106
0.0001
act. X min
0.00192
0.00168
0.00336
-0.002
0.00212
0.0002
S=0.1917825
PROMEDIO: 0.001856
GRUPO ESTRÉS OXIDATIVO
TIEMPO (segundos)
RATA
0
30
60
90
120
150
1
2
3
4
5
6
0.28198
0.24758
0.16178
0.19318
0.49708
0.31268
0.28328
0.24758
0.16408
0.19508
0.49638
0.31428
0.28548
0.24808
0.16518
0.19508
0.49998
0.31918
0.28618
0.24928
0.16658
0.19628
0.50108
0.31978
0.28758
0.25088
0.16778
0.19688
0.50128
0.32028
0.28888
0.25158
0.16898
0.19808
0.50158
0.32168
act. X 30
seg
0.00138
0.0008
0.00144
0.00098
0.0009
0.0018
act. X min
0.00276
0.0016
0.00288
0.00196
0.0018
0.0036
PROMEDIO: 0.002433
S=0.1100342
GRUPO EST. OXIDATIVO +
ANTIOXIDANTE
TIEMPO (segundos)
RATA
0
30
60
90
120
150
1
2
3
4
5
6
0.57568
0.37578
0.38208
0.51308
0.39658
0.34418
0.57408
0.37528
0.38348
0.51168
0.40078
0.34128
0.57768
0.37618
0.38578
0.51268
0.39918
0.34198
0.57548
0.37688
0.38458
0.51128
0.39868
0.34048
0.57558
0.37818
0.38618
0.51448
0.39978
0.34348
0.57708
0.37918
0.38778
0.51238
0.40028
0.34148
act. X 30
seg
act. X min
0.00028
0.00068
0.00114
-0.00014
0.00074
-0.00054
0.00056
0.00136
0.00228
-0.00028
0.00148
-0.00108
S=0.08446498
PROMEDIO: 0.00142
GRUPO ANTIOXIDANTE
TIEMPO (segundos)
RATA
0
30
60
90
120
150
1
2
3
4
5
6
0.58758
0.29518
0.28028
0.29418
0.23658
0.26888
0.57838
0.28978
0.28048
0.29338
0.23648
0.27028
0.57988
0.29798
0.28238
0.29488
0.23568
0.26928
0.58208
0.28878
0.28438
0.29238
0.23728
0.27168
0.58098
0.28978
0.28358
0.29438
0.23758
0.27478
0.58098
0.29138
0.28428
0.29388
0.23708
0.27158
act. X 30
seg
-0.00132
-0.00076
0.0008
-0.000060
0.00010
0.00054
act. X min
-0.00264
-0.00152
0.0016
-0.00012
0.0002
0.00108
PROMEDIO: 0.00096
S= 0.1174184
GRUPO ESTRÉS OXIDATIVO
GRUPO CONTROL
0.004
0.004
0.003
0.003
0.002
Series1
0.002
0.001
0.001
0
0
Rata 1
Rata 2
Rata 3
Rata 5
Series1
Rata 1 Rata 2 Rata 3 Rata 4 Rata 5 Rata 6
Rata 6
GRUPO ANTIOXIDANTE
GRUPO ESTRÉS + ANTIOXIDANTE
0.003
0.002
0.002
0.0015
Series1
0.001
0
Series1
0.001
0.0005
Rata 1
Rata 2
Rata 3
Rata 5
0
Rata 3
Rata 5
Rata 6
0.0025
0.002
CONTROL
0.0015
ESTRÉS
EST.- ANTIOX
ANTIOX.
0.001
0.0005
0
CONTROL
ESTRÉS
EST.- ANTIOX
ANTIOX.
COMPARACIÓN DE LOS PROMEDIOS DE LA ACTIVIDAD DE
LA ENZIMA SUPERÓXIDO DISMUTASA EN LOS DIFERENTES
GRUPOS
0.0025
0.002
CONTROL
0.0015
ESTRÉS
EST.- ANTIOX
0.001
ANTIOX.
0.0005
0
CONTROL
ESTRÉS
EST.- ANTIOX
ANTIOX.
0.114766667
COMPARACIÓN DE LOS PROMEDIOS DE LA ACTIVIDAD
DEL GLUTATION PEROXIDASA EN LOS DIFERENTES
GRUPOS
PROMEDIO DE ABSORBANCIAS
0.12
0.1
0.08
0.06
0.026733333
0.04
0.014375
0.00625
0.02
0
GRUPOS
Control
Estrès
Antioxidante
Antioxidante + Estrès
La alimentación de ratas Hotlztman con grasa de res sometida a
tratamiento térmico influye sobre la peroxidación lipídica, induciendo a
Estrés oxidativo.
El Sanky presentó una buena actividad antioxidante, ya que presentó una
buen porcentaje de capacidad de captación de radicales libres muy
cercano al de la vitamina C.
La administración de un antioxidante, el Sanky, disminuye la actividad de
la SOD frente a Estrés oxidativo.
El Sanky promueve el aumento de la actividad de la glutation peroxidasa.
En función de los resultados, el uso del Sanky como antioxidante es útil para la
prevención y tratamiento del Estrés oxidativo.
• Es recomendable seguir realizando estudios adicionales del Sanky, ya que
ha presentado una gran capacidad antioxidante y en el Perú, esta fuente
alimenticia posee escasa utilidad.
Si bien las recomendaciones alimentarias para disminuir los riesgos inherentes al estrés
oxidativo se fundamentan en privilegiar el consumo de alimentos que tengan un alto contenido
en nutrientes protectores, no hay que olvidar que así como existen diversos factores que
inciden en la capacidad antioxidante de los alimentos como las modificaciones por
tratamientos térmico o mecánicos, también existe un riesgo potencial por el consumo de
grasas termo-oxidadas que pueden afectar los niveles de oxidación fisiológica como una
extensión de lo ocurrido en los alimentos.