CALDO DE ENRIQUECIMIENTO PARA LISTERIA LISTERIA ENRICHMENT BROTH (7398) Propósito de Uso El Caldo de Enriquecimiento para Listeria es utilizado para el enriquecimiento selectivo de Listeria spp. Resumen y Explicación del Producto La Listeria monocytogenes, descrita por primera vez en 1926 por Murray, Webb y Swann,1 está considerada como un problema extenso que afecta la salud pública y a la industria alimentaria. Este organismo posee la habilidad de causar enfermedades en humanos e inclusive la muerte, particularmente en personas con sistema inmunológico comprometido y mujeres embarazadas.2 La evidencia epidemiológica obtenida luego de brotes de listeriosis han indicado que la principal ruta transmisión es a través del consumo de alimentos contaminados con Listeria monocytogenes.3 Los vehículos de transmisión incluyen salchicha de pavo4, ensalada de repollo picado, leche pasteurizada, queso tipo mexicano y el paté. Las Listeria spp. son de naturaleza ubicua, se encuentran presentes en una amplia variedad de alimentos no procesados, en el suelo, aguas residuales, aguas de alcantarillado y en aguas de río.5 El Caldo de Enriquecimiento de Listeria está basado en la fórmula desarrollada por Lovett et al.6 en la cual El Caldo de Soja Tríptico es suplementado con Extracto de Levadura para un crecimiento óptimo. Las Listeria spp. crecen en un rango de pH entre 5,0–9,6 y puede sobrevivir en productos alimenticios con niveles de pH por fuera de este rango.7 Las especies de Listeria spp. son microaerófilas, Gram-positivas, no formadoras de esporas, no-encapsuladas, no ramificadas con flagelos cortos y móviles. La motilidad es pronunciada a 20°C. La identificación de Listeria en el aislamiento exitoso del organismo, su caracterización bioquímica y su confirmación serológica. Principios del Procedimiento El Digerido Enzimático de Caseína, Digerido Enzimático de Harina de Soja y el Extracto de Levadura suministran nitrógeno, vitaminas y minerales en el Caldo de Enriquecimiento para Listeria. La Dextrosa es una fuente de carbohidratos. El Cloruro de Sodio mantiene el balance osmótico del medio de cultivo. El Fosfato Dipotásico es el agente de tamponado. El Ácido Nalidíxico inhibe el crecimiento de organismos Gram-negativos. La Acriflavina inhibe las bacterias Gram-positivas. La Cycloheximida es usada para inhibir el crecimiento de hongos saprofitos. Fórmula / Litro Digerido Enzimático de Caseína............................................. 17 g Digerido Enzimático de Harina de Soja .................................... 3 g Extracto de Levadura ................................................................ 6 g Dextrosa................................................................................. 2,5 g Cloruro de Sodio ...................................................................... 5 g Fosfato Dipotásico ................................................................. 2,5 g Ciclohexamida ..................................................................... 0,05 g Acriflavina .......................................................................... 0,015 g Ácido Nalidíxico ................................................................... 0,04 g pH Final: 7,3 ± 0,2 at 25°C La fórmula puede ser ajustada y/o suplementada de acuerdo a los requerimientos para cumplir con las especificaciones de rendimiento o desempeño. Precauciones 1. Para uso en el laboratorio. 2. TÓXICO. Tóxico si es ingerido, inhalado o absorbido a través de la piel. Irritante para los ojos, piel y sistema respiratorio. Posibles riesgos de daños en el feto. Posible carcinógeno. Procedimiento 1. Disuelva 36,1 g del medio en un litro de agua purificada. 2. Mezcle completamente. 3. Autoclave a 121°C durante 15 minutos. PI 7398 Rev 4 diciembre 2015 Especificaciones de Control de Calidad Apariencia del Deshidratado: Polvo suelto homogéneo, de color beige claro. Apariencia del Preparado: El medio preparado es transparente a ligeramente nublado, de color dorado a naranja-ámbar con la parte superior de color verde opalescente, y posiblemente con un precipitado ligero. Respuesta Esperada del Cultivo: Respuesta esperada en Caldo de Enriquecimiento para Listeria incubado aeróbicamente a 30± 2°C y examinado para determinar crecimiento después de 18–48 horas de incubación. Microorganismo Escherichia coli ATCC 25922 Listeria monocytogenes ATCC 7644 Listeria monocytogenes ATCC 15313 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inóculo Aproximado (UFC) 1000 10 – 300 10 – 300 10 – 300 Resultado Inhibido Buen crecimiento Buen crecimiento Crecimiento suprimido a las 24 horas; Ninguno a justo crecimiento a las 48 horas Los organismos listados son los mínimos que deben ser evaluados para propósitos de análisis y pruebas de control de calidad. Procedimiento de la Prueba Para aislamientos de Listeria, refiérase a los procedimientos de laboratorio adecuados recomendados para muestras alimentarias. Resultados Consulte las referencias y procedimientos adecuados para obtener resultados confiables. Almacenamiento Almacene el envase conteniendo el medio de cultivo deshidratado sellado firmemente y a una temperatura entre 2–30°C. Una vez abierto y cerrado nuevamente, coloque el envase en un ambiente con baja humedad a la misma temperatura de almacenamiento. Proteja el producto de los efectos de la humedad y de la luz manteniendo el envase firmemente cerrado. Expiración Referirse a la fecha de expiración estampada en el envase. El medio de cultivo deshidratado debe ser desechado si no fluye libremente, o si su apariencia ha cambiado a partir del color original. La expiración aplica para el medio de cultivo que haya sido almacenado en su recipiente intacto, original y bajo las condiciones indicadas. Limitaciones del Procedimiento 1. Debido a variaciones nutricionales algunas cepas pueden tener un pobre crecimiento o presentar ausencia de crecimiento en este medio. 2. Listeria spp., que no sea Listeria monocytogenes, pueden crecer en medios de aislamiento. La identificación de Listeria monocytogenes debe ser confirmada a través de análisis bioquímicos y pruebas serológicas.8 PI 7398 Rev 4 diciembre 2015 Empaque Caldo de Enriquecimiento para Listeria – Listeria Enrichment Broth Código No. 7398A 500 g 7398B 2 kg 7398C 10 kg Referencias 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Murray, E. G. D., R. A. Webb, and M. B. R. Swann. 1926. A disease of rabbits characterized by large mononuclear leucocytosis caused by ahitherto undescribed bacillus Bacterium monocytogenes. J. Path. Bact. 29:407-439. Monk, J. D., R. S. Clavero, L. R. Beuchat, M. P. Doyle, and R. E. Brackett. 1994. Irradiation inactivation of Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus in low and high fat, frozen refrigerated ground beef. J. Food Prot. 57:969-974. Bremer, P. J., and C. M. Osborne. 1995. Thermal-death times of Listeria monocytogenes in green shell mussels prepared for hot smoking. J. Food Prot. 58:604-608. Grau, F. H., and P. B. Vanderlinde. 1992. Occurrence, numbers, and growth of Listeria monocytogenes on some vacuumpackaged processed meats. J. Food Prot. 55:4-7. Patel, J. R., C. A. Hwang, L. R. Beuchat, M. P. Doyle, and R. E. Brackett. 1995. Comparison of oxygen scavengers for their ability to enhance resuscitation of heat-injured Listeria monocytogenes. J. Food Prot. 58:244-250. Lovette, J., D. W. Frances, and J. M. Hunt. 1987. Listeria monocytogenes In raw milk: detection, incidence and pathogenicity. J. Food Prot. 50:188-192. Vanderzant, C., and D. F. Splittstoesser (eds.). 1992. Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 3rd ed. American Public Health Association, Washington, D.C. Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (eds.). 1995. Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. Información Técnica Para preguntas relacionadas con la preparación o el rendimiento de los medios de cultivo deshidratados o para contactar al Departamento de Servicios Técnicos, comuníquese con Acumedia Manufacturers, Inc. al teléfono (517) 372-9200 o al fax (517) 3722006. PI 7398 Rev 4 diciembre 2015
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