1. Ciencia

ISBN: 978-9974-0-1136-6
Libro de resúmenes del
3er Congreso Uruguayo de Química Analítica
6 al 9 de octubre de 2014
Montevideo – Uruguay
Octubre 2014, Montevideo, Uruguay
ISBN: 978-9974-0-1136-6
Editores:
C. Alvarez, I. Dol, M. Pistón, I.Viera
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Comité Organizador
Isabel Dol
Mariela Pistón
Alicia Mollo
Cristina Alvarez
Alejandra Rodríguez
Verónica Cesio
Mariela Medina
Cecilia Geisenblosen
Inés Viera
Alexandra Sixto
Comité Científico
Verónica Cesio, Uruguay
Andrea De Nigris, Uruguay
Eduardo Dellacassa, Uruguay
Isabel Dol, Uruguay
Rosario Durán, Uruguay
Moisés Knochen, Uruguay
Érico M. M. Flores, Brasil
Horacio Heinzen, Uruguay
Nelly Mañay, Uruguay
Eduardo Méndez, Uruguay
Diana Miguez, Uruguay
Joaquim A. Nóbrega, Brasil
Alejandro Olivieri, Argentina
Mariela Pistón, Uruguay
María H. Torre, Uruguay
Pablo Richter, Chile
Mónica Rosadilla, Uruguay
Patricia Smichowski, Argentina
Marco A. Zezzi Arruda, Brasil
Renato Zanella, Brasil
Editores
C. Alvarez, I. Dol, M. Pistón, I. Viera
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Índice
Conferencias...................................................................................................................................................... 6
Mesas Redondas............................................................................................................................................. 14
Presentaciones orales ..................................................................................................................................... 19
Posters............................................................................................................................................................. 40
Índice de autores ........................................................................................................................................... 139
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Conferencias
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Conferencia Inaugural
Instrumentación analítica: una historia de fotones y electrones
Moisés Knochen
Área de Química Analítica, DEC, Facultad de Química
Universidad de la República
Montevideo, Uruguay
La instrumentación analítica ha experimentado un desarrollo formidable en los últimos 100 años, y muy
especialmente a partir de la década de 1950. No parece exagerado afirmar que ese desarrollo es
responsable en buena medida de la consolidación de la Química Analítica como disciplina científica, así
como de su actual proyección económica y social.
Tomando como centro la evolución experimentada por la instrumentación espectroscópica, en esta
presentación se discutirán las características más salientes de ese proceso, y la influencia determinante que
tuvieron algunos descubrimientos e invenciones.
Asimismo se esbozará una reflexión sobre algunos de los factores tecnológicos y culturales que han incidido
sobre el mismo.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
C 01
Análisis de polvo de la calle fraccionado por tamaño de partícula, colectado en
Buenos Aires. El antimonio como un elemento relacionado el tránsito vehicular
1,2
1
2
1
1
Smichowski, Patricia ; Fujiwara, Fabián ; Rebagliati, Raúl Jiménez ; Marrero, Julieta , Gómez, Darío
1
Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia Química, Av. Gral Paz 1499, B1650KNA- San Martín, Buenos Aires, Argentina.
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Av. Rivadavia 1917, C1033AAJ-Buenos Aires, Argentina.
2
El creciente interés en la opinión pública sobre los temas relacionados con la contaminación ambiental,
especialmente en las grandes ciudades, nos llevó a investigar los niveles de antimonio, un metaloide
relacionado con el tránsito vehicular, en el polvo de la calle de la ciudad de Buenos Aires. Se colectaron 200
muestras en 19 sitios con diferentes características de tránsito y perfiles poblacionales durante dos meses.
Las muestras se fraccionaron por tamaño de partícula (F1 < 37 µm, F2 < 55 µm, F3 < 75 µm y F4 < 100 µm)
y una vez puestas en solución utilizando una digestión ácida se determinó la concentración de Sb por ICP
OES y/o FI-HG-AAS.
El Sb fue detectado en el 67% de las muestras analizadas con concentraciones que variaron entre < 0,05 y
41,1 µg g-1. Se encontró muy enriquecido en las muestras, especialmente en las fracciones de menor
tamaño de partícula, con factores de enriquecimiento (FE) que variaron de la siguiente forma: 272 (A) > 160
(B) > 50 (C) > 23 (D).
Las concentraciones de Sb se correlacionaron con otros elementos relacionados con el tránsito vehicular
como Cd, Cu, S y Pb y se encontró una buena correlación entre Sb y estos elementos. Las mayores
concentraciones de Sb se detectaron en zonas de alta densidad de tránsito, lo que confirma que el tránsito
es la principal fuente de este elemento tóxico en el polvo de la calle de la ciudad de Buenos Aires.
Agradecimientos
PS agradece a CONICET (Proyecto PIP 486) y a ANPCyT (Proyecto PICT 1195) por el financiamiento.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
C 02
Desafíos en la determinación de contaminantes en el aire ambiente (cuando la
muestra es única e irrepetible)
I.Q. Andrea De Nigris
Unidad Calidad Aire, Servicio de Evaluación de la Calidad y Control Ambiental, Intendencia de Montevideo
La determinación de contaminantes en el aire ambiente está orientada a conocer la concentración de
diferentes parámetros que afectan la calidad de vida. Si bien hay siete u ocho que son indicadores del
deterioro de la calidad del aire ambiente y se determinan en todas las redes de monitoreo, hay mas de 200
que están indicados como peligrosos en las listas de algunos organismos internacionales. Ellos son
contaminantes físicos, sustancias químicas y distintas fracciones de material particulado. Para determinar la
calidad del aire, se utilizan múltiples procesos y técnicas analíticas.
El aire como matriz analítica presenta particularidades. La atmósfera es un reactor donde la concentración
de los componentes varía constantemente. Es necesario conocer la variación de la concentración con
frecuencias horarias, acumulados de varias horas, mensuales o anuales.
Sin embargo a pesar de la diversidad de situaciones, en general se presentan dificultades similares
asociadas a las bajas concentraciones de la mayoría de los parámetros de interés, y la complejidad a la
hora de establecer las cifras de mérito en estos análisis.
A pesar de que muchos de los procesos analíticos culminan en un procedimiento más que conocido en
otras matrices, es necesario integrar en el análisis las características particulares del muestreo, y desarrollar
estrategias diferentes para expresar e interpretar los resultados obtenidos en cada caso.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
C 03
Recientes avances en la determinación de residuos y contaminantes en muestras
de alimentos y ambientales
Zanella, Renato
Laboratório de Análises de Resíduos de Pesticidas (LARP), Departamento de Química, Universidade Federal de Santa Maria (UFSM),
97105-900 Santa Maria - RS, Brasil
Los residuos químicos y contaminantes pueden presentarse en los alimentos y el medio ambiente a partir de
diversas fuentes, lo que representa un riesgo importante para la salud en general. Estos contaminantes
pueden estar presentes como residuos de plaguicidas y medicamentos veterinarios utilizados en la
producción o el almacenamiento, procedentes de la elaboración de alimentos, generados por migración de
los materiales de envase o por el uso indebido de aditivos no permitidos. Los contaminantes ambientales,
tales como productos farmacéuticos, productos de cuidado personal, pesticidas persistentes, bifenilos
policlorados, dioxinas, furanos y los hidrocarburos aromáticos policíclicos, pueden llegar a la cadena
alimentaria afectando el ciclo de la vida. La determinación de la concentración de estos compuestos es de
gran importancia para la seguridad alimentaria y la protección del medio ambiente. Técnicas analíticas
modernas permiten determinar adecuadamente niveles muy bajos de contaminantes químicos en matrices
complejas con alta selectividad y sensibilidad. Con la ayuda de detectores espectrométricos de masas de
alta resolución es posible identificar contaminantes no previstos, ampliando el control. El creciente desarrollo
de la instrumentación analítica ha permitido grandes avances en la determinación de contaminantes
químicos. El aumento significativo en la selectividad y detectabilidad de los instrumentos actuales ha
facilitado la etapa de preparación de la muestra, lo que permite análisis más amplios y rápidos con
minimización del consumo de materiales. Por lo tanto, los recientes avances en la determinación de
residuos y contaminantes químicos en alimentos y muestras ambientales serán presentados, destacando
las principales aplicaciones disponibles en la actualidad.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
C 04
Interacción entre nanosistemas analíticos y matrices biológicas
Méndez, Eduardo
Laboratorio de Biomateriales, Facultad de Ciencias, UdelaR
Los sistemas analíticos que involucran nanopartículas metálicas, principalmente deplata y oro, están
usualmente optimizados para responder al analito en soluciones diseñadas. Cuando estos sistemas se
encuentran en medios reales, se enfrentan a una variedad de iones inorgánicos, ligandos orgánicos,
biomoléculas, y en particular, proteínas que pueden producir una falla en la determinación analítica. Las
principales interferencias son debidas al incremento de la fuerza iónica (que conduce a la desestabilización
del sistema coloidal), cambios en el pH, presencia de ligando tiolados, que forman fuertes enlaces con los
átomos de Oro y de Plata, proteínas, que estabilizan a las nanopartículas por efecto estérico, impidiendo
que reaccionen con el analito.
Se expondrán los distintos diseños de nanosensores y las posibles interferencias que se producen en
plasma sanguíneo y orina, con particular énfasis en la formación de la corona proteica en la superficie de las
nanopartículas, y en la interacción con biotioles.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
C 05
Aplicações de ICP OES e ICP-MS em demandas analíticas exigidas pela legislação
Nóbrega, Joaquim A.
Grupo de Análise Instrumental Aplicada, Departamento de Química,
Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, SP, Brasil
Inúmeros aspectos da vida em sociedade são criticamente dependentes de medições e as ciências
analíticas desempenham um papel crucial para a execução de medidas confiáveis. Resultados analíticos
confiáveis possibilitam estabelecer parâmetros de saúde pública, controle ambiental, exposição
ocupacional, segurança alimentar, controle de combustíveis e em tantos outros setores. A evolução da
instrumentação e de procedimentos analíticos possibilita o aperfeiçoamento da legislação em todas essas
múltiplas áreas das atividades humanas e, por sua vez, a proposição de legislações cada vez mais
restritivas requer a contínua evolução das estratégias analíticas. Mesmo sendo difícil concluir qual a
principal força motriz em diferentes contextos, i.e. progressos em química analítica proporcionam evolução
de aspectos legais ou restrições legais exigem a evolução de procedimentos analíticos, é notório que há
uma forte interação entre esses dois amplos campos que certamente se retroalimentam. Esses aspectos
serão discutidos considerando-se a espectrometria de emissão óptica com plasma acoplado indutivamente
(ICP OES) e a espectrometria de massas com plasma acoplado indutivamente (ICP-MS) e o impacto
dessas técnicas instrumentais no atendimento às demandas analíticas requeridas pelas legislações em
diferentes setores de atividade humana. Nesse contexto serão discutidas aplicações analíticas para
amostras ambientais, medicamentos, alimentos, águas potáveis e combustíveis. Para os tipos de amostras
selecionados e respectivas legislações a discussão abordará se os procedimentos analíticos disponíveis
usando ICP OES e ICP-MS atendem aos requisitos impostos pela legislação e quais as demandas
emergentes para desenvolvimento analítico.
Agradecimentos: Comitê Organizador do 3er CUQA, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e
o.
o.
Tecnológico (Processo n 303107/2013-8) e INCTAA (CNPq Processo n 573894/2008-6 / FAPESP)
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
C 06
Desafíos Analíticos en la Detección de Micotoxinas y Micotoxinas Modificadas
Alejandra Rodríguez-Haralambides
Instituto Polo Tecnológico de Pando, Facultad de Química
Las micotoxinas son un grupo de sustancias químicamente diverso, producidas como metabolitos
secundarios de hongos que contaminan el trigo, la cebada, el maíz y otros cereales, así como café, uvas,
manzanas y otros alimentos. La presencia de micotoxinas en alimentos humanos y animales es controlada
cada vez más en detalle debido a los efectos nocivos agudos y crónicos que pueden tener sobre la salud
(daño hepático, inducción de tumores, teratogenia y otros efectos genéticos).
Los métodos analíticos más recientes permiten detectar menores concentraciones de micotoxinas libres en
diversas matrices, así como detectar las formas modificadas de las micotoxinas. Estas formas modificadas
incluyen los metabolitos de las mismas producidos en algunos casos incluso como forma de detoxificación
por plantas, animales y microorganimos, pero también las sustancias que se producen por procesos de
fabricación de alimentos (calentamiento, extrusión, reacciones químicas, etc). Ejemplos de estas sustancias
son los epóxidos, glucósidos, glucurónidos, sulfatos, sulfonatos e isómeros de las toxinas libres DON, ZEN,
OTA, Aflatoxina B1, y HT2.
La toxicidad de las micotoxinas modificadas requiere nuevos estudios que por el momento son muy
escasos, en parte por la falta de métodos analíticos estandarizados que abarquen todo el espectro de
sustancias. Las estrategias analíticas para detectar micotoxinas abarcan los métodos directos (que incluyen
los métodos tradicionales, donde se requieren los estándares de cada sustancia -- y los de las micotoxinas
modificadas no están disponibles aún), los métodos indirectos (en los que las formas modificadas de las
micotoxinas son hidrolizadas enzimática o químicamente, y luego se analizan las micotoxinas libres), y por
último los métodos de análisis “no dirigidos”, en una aproximación que generalmente utiliza espectrometría
de masa de alta resolución para detectar sustancias desconocidas.
Los nuevos métodos analíticos permitirán profundizar en el estudio de las “micotoxinas modificadas”, y su
toxicidad en humanos y animales. Por otro lado, el poder detectar en forma confiable las micotoxinas
modificadas puede tener consecuencias en un futuro cercano en la regulación de los límites legales de la
presencia de las micotoxinas en alimentos. En esta presentación, haremos énfasis en las diferentes
estrategias analíticas disponibles actualmente y en los nuevos enfoques regulatorios que están en
consideración.
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Mesas Redondas
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Mesa Redonda 1
Gestión integral de los riesgos en el laboratorio analítico
Coordinadora: M. Lic. Qca. Mónica Rosadilla
Departamento de Normalización
Instituto Uruguayo de Normas Técnicas (UNIT), Uruguay
Las organizaciones de todo tipo y tamaño enfrentan influencias y factores internos y externos que tornan
incierto el logro de sus objetivos. El efecto que esa incertidumbre tiene sobre los objetivos de la
organización se llama "riesgo".
Actualmente las Normas Internacionales de gestión (ISO 9001, ISO 14001, ISO/IEC 17025, etc) están
siendo revisadas, y uno de los cambios más importantes es la incorporación de los requisitos con respecto a
la gestión del riesgo. Y los laboratorios no podrán escapar de estos requisitos.
Es conveniente que dentro del laboratorio, el proceso de gestión del riesgo se integre en los procesos de
toma de decisión. La gestión del riesgo puede aplicarse en todo el laboratorio con una visión integral, en sus
diferentes áreas y niveles, en cualquier momento, pero también a funciones, actividades y proyectos
específicos.
Quizás estemos acostumbrados a hablar de peligros y riesgos sólo en el ámbito de la seguridad, pero este
concepto de “riesgo” es igualmente válido con otros enfoques como son el “aseguramiento de la calidad”, “
la planificación del negocio”.
Durante el desarrollo de la Mesa realizaremos una presentación general del tema y contaremos con la
presencia de expositores que presentarán sus experiencias con distintos enfoques.
I.Q. Milton Vázquez
Facultad de Ingeniería -UdelaR, Uruguay
Si bien no es nuevo el tema de gestión del riesgo con un enfoque en Seguridad y Salud Ocupacional en los
laboratorios, es sabido la dificultad de concientizar al personal de los laboratorios en todos sus niveles de la
necesidad de una cultura preventiva.
Desde el año 2014. con la aprobación de la Ley de Responsabilidad Penal, en la cual se considera un delito
el no prevenir, es imperioso que los laboratorios se “ocupen” realmente de este tema. Esta exposición
pretenderá ser un contribución más a la toma de conciencia de la importancia de gestión la prevención en
materia de Seguridad y Salud laboral.
Q.F. Mónica Trías
Laboratorio Tecnológico del Uruguay (LATU)
Facultad de Química, Universidad de la República, Uruguay
Muchas veces se tiende a pensar que la gestión del riesgo sólo aplica a la planificación estratégica de las
organizaciones. Sin embargo para cumplir con los requisitos técnicos de las normas de gestión de calidad
aplicables a los laboratorios, es imprescindible que en cada decisión se evalúen los riesgos.
Desde la evaluación de la competencia del personal, la decisión en cuanto al nivel de supervisión necesario;
hasta para determinar las actividades de aseguramiento de la calidad.
-¿Por qué establecer los controles de calidad con mayor o menor frecuencia?
- ¿Cada cuánto participar en un ensayo de aptitud? ¿En cuál?
Todas estas decisiones deberían estar basadas en análisis de los riesgos asociados.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Qco. Mauricio Roldán
Organismo Uruguayo de Acreditación (OUA)
Uruguay
La Norma ISO/IEC 17025 ya se encuentra en proceso de revisión a nivel internacional. Se espera que se
incorpore la gestión de los riesgo como un requisito de forma explícita.
¿Qué le implicaría este cambio a los laboratorios? ¿Qué evidencia deberían tener?
Quizás el cambio no sea tan significativo, pues hoy en día los laboratorios realizan una análisis de riesgos al
momento de evaluar a sus proveedroes o al establecer sus programas de auditorías. Quizás sea sólo
cuestión de estar conciente de esta actividad y generar la documentación necesaria.
Q.F. Horacio Giudice
Laboratorio Industrial Montevideo (LIMSA)
Uruguay
Es importante visualizar al laboratorio como una unidad de negocio, que tiene que ser sostenible a lo largo
del tiempo. Con este motivo cada inversión en nuevos proyectos, tiene que ser cuidadosamente analizada
tomando en cuenta todos los riesgos asociados a la misma. La compra de un nuevo equipo, el ofrecer un
nuevo servicio, la contratación de más personal, la solicitud de la acreditación; son todas decisiones que se
deberían tomar teniendo en consideración tanto los riesgos positivos como negativos.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Mesa Redonda 2
Herramientas analíticas en Biotecnología
Coordinadora: Dra. Sonia Rodríguez
Cátedra de Microbiología
Facultad de Química, Universidad de la República, Uruguay
La Biotecnología abarca una enorme diversidad de procesos, productos o servicios en los que se
encuentran involucrados sistemas biológicos. Es así que en el área industrial abarca desde la producción de
bebidas fermentadas, hasta los más recientes biofármacos (proteínas recombinantes de utilidad
terapéutica). El área de energías alterenativas también encuentra mucho sustento en procesos
biotecnológicos, ya sea en la producción de bioetanol como biodiesel. En muchos casos el proceso es
biológico y el producto final no, en otros el producto final es un microorganismo o una proteína. En el área
de servicios también se han incorporado muchos proceso biotecnológicos. Como ejemplo de ello podemos
citar herramientas biotecnológicas que permiten la detección de enfermedades, la cuantificación de carga
viral en un paciente, o el análisis de calidad e un producto final o una materia prima.
Así como las aplicaciones son diversas, son múltiples también las técnicas que pueden utilizarse en el área
de Biotecnología. En esta mesa redonda se pretende abordar diferentes aspectos de la biotecnología, y la
contribución del área analítica en el desarrollo de cada una de ellas.
Métodos basados en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)para detección y cuantificación de
organismos en muestras diversas
Dra. Maria Julia Pianzzola
Cátedra de Microbiología
Facultad de Química, Universidad de la República, Uruguay
La Química Analítica nos permite detectar y/o cuantificar un analito presente en una muestra de interés.
Cuando el analito en estudio es un organismo, el target a detectar o cuantificar es muchas veces el ADN. En
los últimos años se han desarrollado muchos métodos moleculares de detección y cuantificación dirigidos a
secuencias específicas de ADN. Dentro de ellos, han adquirido gran desarrollo por su sencillez, sensibilidad,
rapidez y robustez, aquellos que se basan en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En la
actualidad estos métodos son muy utilizados para detección de organismos específicos en muestras de
agua, alimentos, clínicas, ambientales, entre otras. Estos métodos permiten desde la detección de un
patógeno en una muestra compleja, como puede ser un alimento, la determinación de la presencia de
organismos genéticamente modificados en material prima o producto terminado, hasta la detección de la
presencia de virus en fermentos utilizados en la industria láctea.
Utilización de la Py GC MS en el seguimiento de deslignificación de residuos lignocelulosicos
Dra. Pilar Menéndez
Laboratorio de Biocatálisis y Biotransformaciones, DQO
Facultad de Química, Universidad de la República, Uruguay
El agotamiento de los combustibles fósiles ha llevado a búsqueda -cada día más intensa- de fuentes
renovables de energía y en especial la investigación sobre la producción de combustibles líquidos a partir
de biomasa. Uno de los posibles combustibles que se pueden obtener de fuentes renovables es el bioetanol
lignocelulósico. El proceso de producción de este combustible requiere distintas etapas como, la molienda,
el pretratamiento del material a los efectos de hacerlo accesible a las enzimas hidrolíticas, hidrólisis de los
carbohidratos, fermentación, destilación y deshidratación. Una de las etapas clave del proceso es el
pretratamiento para el cual existen distintas opciones siendo una de ellas el pretratamiento biológico. Este
puede ser efectuado por hongos de la pudrición blanca de la madera (Basidiomycetes), los cuales se
caracterizan por ser capaces de metabolizar la lignina del material lignocelulósico. Una técnica que
caracteriza el cambio en la estructura de esta es la Pirolisis-Cromatografía de gas- Espectrometría de
Masas (Py-GC-MS).
En esta charla se expondrán las características del método y como se aplica al análisis de la biodegradación
de la lignina de la corteza de Eucalyptus
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Medicamentos Biotecnológicos: ¿cómo asegurar su calidad?
Dra. Alejandra Rodríguez
Instituto Polo Tecnológico de Pando
Facultad de Química, Universidad de la República, Uruguay
El auge de los medicamentos biotecnológicos y la reciente aparición de productos biosimilares han
generado un importante desafío analítico para asegurar su calidad, seguridad y eficacia. A diferencia de los
fármacos de moléculas pequeñas, los biotecnológicos no pueden ser producidos como copias exactas del
original, debido a las variaciones en los métodos de fabricación y el origen de los clones celulares utilizados;
variaciones que ocurren incluso lote a lote para un mismo fabricante.
Las proteínas terapéuticas (como los anticuerpos monoclonales y proteínas recombinantes) son moléculas
heterogéneas de alto peso molecular con una gran complejidad estructural derivada de las modificaciones
post-traduccionales y modificaciones que pueden sufrir durante su producción y conservación. Entre los
parámetros a determinar para la caracterización de las proteínas terapéuticas se encuentran su peso
molecular, secuencia aminoacídica, grado de glicosilación, modificaciones post-traduccionales, pureza, perfil
de impurezas, entre otros.
En esta mesa redonda, se presentarán los métodos analíticos más utilizados actualmente para la
caracterización de péptidos y proteínas terapéuticas y se discutirá la situación nacional en cuanto a
regulación y control de calidad de estos productos.
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Presentaciones orales
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O ALI 01
Propiedades nutracéuticas de infusiones de hojas y frutos de alcachofa (Cynara
cardunculus L. subsp. Cardunculus)
1
2
2
1
Machado, Ignacio ; Heinzen, Horacio ; Cesio, María Verónica ; Pistón, Mariela
1
2
Química Analítica, DEC, Facultad de Química, UdelaR.
Farmacognosia y Productos Naturales, DQO, Facultad de Química, UdelaR.
[email protected]
La alcachofa (Cynara cardunculus L. subsp. Cardunculus) es una reconocida fuente de compuestos
bioactivos. El fruto es consumido como alimento y las hojas utilizadas en infusiones y como materia prima
base de productos fitoterápicos, dado su alto contenido de cinarina, compuesto con capacidad para
aumentar la secreción biliar, hidrocolerético e hipocolesterolemiante.
En este trabajo se plantea una evaluación global de las propiedades nutracéuticas de infusiones obtenidas a
partir de hojas y frutos de cultivares de alcachofa empleados con fines alimentarios, estudiando algunos de
los principios activos con beneficios para la salud. Las infusiones se prepararon según protocolos estándar
[1].
Por un lado se determinó en infusiones de hojas y frutos la concentración de metales traza esenciales, que
forman parte de centros activos de enzimas que catalizan procesos vitales (Cu, Zn) o participan en el
transporte de electrones (Fe, Ni). Las muestras fueron provenientes de un cultivo familiar. Las técnicas
empleadas fueron espectrometría de absorción atómica de llama (Cu, Fe y Zn) y con atomización
electrotérmica (Ni).
Los resultados promedio obtenidos se resumen en la siguiente tabla:
Elemento
Concentración (mg/kg de material vegetal)
Fruto
Hoja
Cobre
0,27
6,05
Hierro
0,27
12,2
Níquel
0,01
0,93
Zinc
1,36
48,2
Por otra parte se evaluó en infusiones obtenidas de las hojas el contenido de compuestos polifenólicos,
relevantes por su capacidad secuestrante (antioxidante) frente a especies reactivas de oxígeno (ROS) y de
nitrógeno (RNS) a nivel fisiológico. Los mismos fueron determinados mediante LC-DAD-MS/MS. El ácido
clorogénico fue el compuesto fenólico mayoritario, seguido por la cinarina y la luteolina-7-rutinósido. El
contenido fenólico total fue de 108 mg/g.
Para el estudio de actividad antioxidante se utilizó un lector de microplacas con detección colorimétrica,
fluorimétrica o quimioliminiscente dependiendo de la especie en estudio. La misma en la infusión de hojas
resultó ser muy buena, obteniéndose valores de IC50 dentro del rango 3,5 - 34 µg/mL. [2]
Estos hallazgos demuestran que la infusión de las hojas de alcachofa es una potencial fuente de
antioxidantes naturales. Por otro lado, la infusión de las hojas en comparación con la del fruto sería una
mayor fuente de elementos traza esenciales para la salud en niveles de concentración que pueden
contribuir a la ingesta diaria recomendada.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Referencias:
[1] Cañigueral, S., Wichtl, M., Vila, R. Plantas Medicinales y Drogas Vegetales para infusión y tisana. Milán:
OEMF International, 1998, ISBN: 88-7076-216-5.
[2] Pistón, M. et al. Infusion, decoction and hydroalcoholic extracts of leaves from artichoke (Cynara
cardunculus L. subsp. cardunculus) are effective scavengers of physiologically relevant ROS and RNS. Food
Res Int; 2014; 64; 150-156.
Agradecimientos: Agencia Nacional de Investigación e Innovación – ANII (Beca de Posgrado
POS_NAC_2013_1_11407). A la familia Bianco por proporcionar las muestras de alcachofa.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O AMB 01
Combinação da radiação micro-ondas e ultravioleta para a decomposição de coque
de petróleo e posterior determinação de Ni, V e S por ICP OES
1
Oliveira, J. S. S. ; Picoloto, R. S.; Bizzi, C. A.; Mello, P. A.; Barin, J. S.; Flores, E. M. M.
Universidade Federal de Santa Maria, Brasil
A concentração de impurezas inorgânicas no coque de petróleo, tais como Ni, V e S, é um fator decisivo
para seu uso em processos industriais [1]. A determinação dessas impurezas pode ser feita empregando o
método descrito na norma oficial da American Society for Testing and Materials (ASTM). O método descrito
na norma ASTM 5600-98 envolve a combustão da amostra e fusão com tetraborato de sódio, seguida da
determinação por espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES). Neste
trabalho é proposta a combinação da radiação micro-ondas e ultravioleta para a decomposição de coque de
petróleo e posterior determinação de Ni, V e S por ICP OES. A decomposição de coque de petróleo por via
úmida assistida por radiação micro-ondas e ultravioleta (MW-UV) foi feita utilizando lâmpada de descarga
sem eletrodos, inserida dentro do frasco de quartzo para decomposição, ativada pela radiação micro-ondas
[2]. Para a decomposição de coque de petróleo por MW-UV foram avaliadas as seguintes condições:
concentração da solução de HNO3 (1 - 14,4 mol L-1), volume de H2O2 (30%, 1 e 3 mL), massa de amostra
(100 - 500 mg) e o uso das lâmpadas de emissão de radiação UV. A eficiência de decomposição nas
diferentes condições estudadas foi avaliada através da determinação do teor de carbono nos digeridos por
ICP OES. Os resultados obtidos para a decomposição de 100 mg de amostra, empregando solução diluída
de HNO3, pelo menos 4 mol L-1, apresentaram concordância superior a 98% em relação aos valores de
referência para todos os elementos estudados. Com o uso da lâmpada de emissão de radiação UV e
-1
solução de HNO3 4 mol L com 3 mL H2O2, foi possível decompor até 500 mg de coque de petróleo (60 min
de aquecimento, teor de carbono residual - RCC < 21%). Os resultados obtidos apresentaram concordância
superior a 96% em relação aos valores de referência, para todos analitos estudados. As decomposições
feitas com a lâmpada de emissão de radiação UV apresentaram menor RCC em relação àquelas obtidas
sem a lâmpada. A exatidão do método proposto foi avaliada pela decomposição de material de referência
certificado (NIST 2718, Green Petroleum Coke), sendo obtidas concordâncias acima de 96% para Ni, V e S.
Em relação ao método recomendado pela ASTM, o método proposto apresenta vantagens, dentre elas, o
-1
menor limite de detecção (0,22, 0,12 e 8,7 µg g para Ni, V e S, respectivamente), o emprego de ácido
diluído e de menores quantidades de reagentes, além do menor tempo de decomposição, adequado para a
rotina de análise.
Agradecimentos: LAQIA, UFSM e CNPq.
Referências:
[1] Speight, J. G. Handbook of Petroleum Product Analysis. New Jersey: John Wiley & Sons, 2002, 351-362.
[2] Florian, D., Knapp, G. High-Temperature, Microwave-Assisted UV Digestion: A Promising Sample
Preparation Technique for Trace Element Analysis, Anal. Chem., 2001; 73; 1515-1520.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O AMB 02
Desarrollo de una metodología multirresiduo para el análisis de pesticidas en polen
colectado por abejas por LC-MS/MS
1
1
1
1,2
1,2
Niell, Silvina ; Jesús, Florencia ; Pérez, Cecilia ; Cesio, María Verónica ; Heinzen, Horacio
1
Universidad de la República, CENUR Noroeste, Centro Universitario Paysandú, DQL, Paysandú, Uruguay
2
Universidad de la República, Facultad de Química, Cátedra de Farmacognosia, Montevideo, Uruguay
Las abejas realizan vuelos de hasta 2000 m o más buscando néctar y polen para alimentar la colmena. Al
polen, una vez que lo ingresan a la colmena, lo preparan para su almacenamiento en celdas de cera que
destinan para este fin. En el polen ingresan a la colmena diversos contaminantes presentes en los cultivos
que han visitado, particularmente agroquímicos. Es por esto que se plantea que el polen colectado y
almacenado por abejas constituye una de las muestras a partir de la cual se puede conocer la calidad
ambiental del agroecosistema en el que se encuentra la colmena. Para poder testear esta hipótesis se
necesita contar con una metodología para el análisis de residuos de pesticidas en polen validada con un
bajo límite de cuantificación. Se evaluó la metodología reportada [1] basada en QuEChERS comparando
dos cantidades de solvente de extracción: 10 y 15 mL. Luego se validó el método cuyas cifras de mérito
mejor ajustaban según el documento SANCO/12571/2013. El método de extracción con menor cantidad de
solvente fue el que arrojó los mejores valores de los parámetros evaluados y bajos límites de cuantificación
(LOQs). Estos se fijaron como la menor concentración de analito validada con exactitud aceptable aplicando
el método analítico completo. Para 16 de los 18 pesticidas evaluados fue 0,01 mg/kg. La metodología
desarrollada se evaluó a dos niveles de concentración: 0,01 y 0,05 mg/kg a los que se obtuvieron
porcentajes de recuperación entre 73 y 116% con RSDs < 19%. Así mismo se evaluó linealidad, LOD, LOQ,
precisión intermedia y efecto matriz. Para testear la metodología validada se analizaron muestras de
colmenas ubicadas en diferentes agroecosistemas del país. De estas muestras genuinas de polen
analizadas, se han detectado y confirmado mediante LC-MS/MS residuos de tebuconazol, piraclostrobina,
carbaril, carbendazim y azoxistrobina a concentraciones bajas, del orden de 0,01 mg/kg cercanas a sus
límites de cuantificación. De estos residuos encontrados sólo carbaril es insecticida; los demás son
fungicidas sistémicos que se aplican muchas veces de forma preventiva y durante la floración del cultivo. El
desarrollo y validación de este método permitirá evaluar la hipótesis planteada buscando demostrar que la
colmena puede servir como bioindicador del estado ambiental de los diferentes ecosistemas.
Referencia
[1] Stoner KA, Eitzer BD. Using a Hazard Quotient to Evaluate Pesticide Residues Detected in Pollen
Trapped from Honey Bees (Apis mellifera) in Connecticut. PLoS ONE 2013; 8(10); e77550.
doi:10.1371/journal.pone.0077550
23
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O AMB 03
Ocorrência de agrotóxicos, fármacos e produtos de cuidado pessoal em amostras
de águas de abastecimento público e de superfície
1
1
1
1
1
Primel, Ednei ; Arias, Jean Lucas ; Rombaldi, Caroline ; Cerqueira, Maristela ; Paulista, Marcos ; Martins,
Ayrton2
1
Universidade Federal do Rio Grande (FURG), Escola de Química e Alimentos (EQA), Laboratório de Análises de Compostos
Orgânicos e Metais (LACOM), Rio Grande, RS, Brasil
2
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Departamento de Química, Santa Maria, RS, Brasil
O uso abusivo, a disposição inadequada, e a carência de tratamento eficiente para contaminantes
orgânicos, pode acarretar na detecção de compostos como os fármacos e produtos de cuidado pessoal
(PPCPs) e os agrotóxicos em diversos compartimentos ambientais, dentre eles, a água. Estes compostos
podem apresentar toxicidade, causando impactos para o meio ambiente e para os seres humanos. A
extração simultânea destes resíduos em água é dificultada pelas diferentes propriedades físico-químicas
que estes compostos apresentam e por estarem em baixas concentrações. A técnica de extração em fase
sólida (SPE) tem sido amplamente empregada para extração destes compostos de amostras de água [1]. O
objetivo deste trabalho foi a determinação de 18 PPCPs e 33 agrotóxicos em amostras de água de
superfície e de abastecimento na cidade de Rio Grande, durante 3 anos, empregando extração por SPE e
determinação por Cromatografia Líquida acoplada a Espectrometria de Massas (LC-MS/MS). As amostras
(1 L) foram coletadas mensalmente na estação de tratamento de água do município de Rio Grande. As
amostras foram divididas em 2 grupos, acidificadas a pH 3 e não acidificadas. Os cartuchos de C18 foram
condicionados, as amostras (replicatas de 250 mL) foram percoladas, e a eluição foi realizada com duas
alíquotas de 1000 µL de metanol. A determinação dos compostos no LC-MS/MS foi realizada empregando
coluna Kinetex C18 (50 x 30 mm, 2,6 µm) e fase móvel composta por metanol e água acidificada com
CH3COOH 0,1% com modo de eluição por gradiente [2]. Nesse período, foram detectados agrotóxicos e
-1
PPCPs em concentrações de µg L . Entre os agrotóxicos mais encontrados estão inclusos atrazina,
azoxistrobina, bentazona, carbendazim, carbofurano, ciproconazol, diuron, epoxiconazol, propanil,
quincloraque e tebuconazol. Entre os PPCPs detectados, podemos citar metilparabeno e triclocarban.
[1] Primel, et al. Multi-residue analytical methods for the determination of pesticides and PPCPs in water by
LC-MS/MS: a review. Central European Journal of Chemistry, 2012, 10, 876-899.
[2] Caldas, et al. Determination of pharmaceuticals, personal care products and pesticides in surface and
treated waters: method development and survey. Environmental Science and Pollution Research, 2013, 20,
5855-5863.
Agradecimentos: CNPq, CORSAN, FAPERGs, FURG.
24
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O AMB 04
Avances en el desarrollo de una metodología para la determinación de la
bioconversión de Quinclorac: hacia una producción de arroz sustentable
1
1
3
1
1,2
Diana, María Laura ; Gérez, Natalia ; Rivero, Anisleidy ; Cerdeiras, María Pía ; Heinzen, Horacio ; Cesio,
María Verónica1
2
1
Facultad Química, Universidad de la República
Polo Agroalimentario Agroindustrial Paysandú – Centro Universitario Paysandú – UdelaR
3
Laboratorio Tecnológico del Uruguay (LATU), Fray Bentos, Uruguay.
[email protected]
Uruguay se ubica en la séptima posición mundial como exportador de arroz, siendo este cultivo una de las
principales actividades agrícolas del país, con una superficie cercana a las 190.000 hectáreas. Frente a un
escenario mundial que asigna una creciente importancia a la sustentabilidad ambiental, cobra relevancia
desarrollar técnicas que permitan evaluar nuevos métodos para reducir el impacto sobre el ambiente que
causa el empleo indiscriminado de agroquímicos. Dentro del paquete tecnológico empleado para el arroz, se
destaca el uso del herbicida quinclorac (QNC). Su uso está prohibido para la agricultura en Europa desde
2008, dado que se ha demostrado genera efectos adversos en hidrófitas y animales acuáticos [1]. Sin
embargo, aún se emplea en otros países, incluido el nuestro. A pesar de esto, existen pocos estudios sobre
el impacto ambiental de Quinclorac y técnicas que permitan remediarlo. La biotransformación de
compuestos xenobióticos constituye una solución para la disminución o desaparición de compuestos que no
pueden ser químicamente degradados. Particularmente, los hongos de la podredumbre blanca han
demostrado ser capaces de degradar xenobióticos, como el endosulfán [2]. La posibilidad de contar con una
técnica analítica para el monitoreo y evaluación de la bioconversión a escala de laboratorio de QNC,
constituye un gran avance. El crecimiento del basidiomicete en el medio de cultivo Yeast Nitrogen Base
(YNB) con 1% de glucosa, demuestra su capacidad de crecer a elevadas concentraciones de QNC,
mostrando la versatilidad metabólica que presentan estos microorganismos y su potencial como
biorremediador. En esta comunicación se presentan los avances del ajuste y la puesta a punto de una
metodología analítica desarrollada para la determinación de QNC. Este desarrollo representa un valioso
avance dadas las grandes dificultades analíticas que ofrece este compuesto que van desde su insolubilidad
en agua, así como en la mayoría de los solventes tanto orgánicos como inorgánicos, hasta su naturaleza
zwiterionica que favorece su protonación en medio ácido dificultando su resolución cromatográfica. Dicha
metodología está basada en una extracción con acetona, asistida por Stomacher y ultrasonido, y
determinación por UHPLC-DAD, obteniéndose porcentajes de recuperación aceptables a 40 mgkg-1. Las
cifras de mérito evaluadas: linealidad en el intervalo de trabajo, precisión de repetibilidad y reproducibilidad,
LOD y LOQ, cumplen los requerimientos de la Guía Eurachem. Los LOQs obtenidos permitirán monitorear
los porcentajes de disipación del compuesto en estudio. La metodología resultó ser rápida, sencilla y
aplicable para la evaluación de los ensayos de biorremediación de QNC en placa. Ensayos a futuro
permitirán optimizar la metodología hasta implementarla a campo, con el fin de contribuir con la remediación
del ecosistema del arroz.
Referencias:
[1] dos Santos. M. et al. Effects of the herbicides clomazone, quinclorac, and metsulfuron methyl on
acetylcholinesterase activity in the silver catfish (Rhamdia quelen) (Heptapteridae). Ecotoxicol Environ Saf
2005; Volumen 61, 398–403.
[2] Rivero A. et al. Analytical methodology for the study of endosulfan bioremediation under controlled
conditions with white rot fungi. J Chromatogr B Biomed SciAppl, 2012; Volumen 907, 168–172.
Agradecimientos: PEDECIBA QUÍMICA, GACT, UdelaR
25
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O BIO 01
Relación entre los niveles de elementos traza, concentración basal de superóxido y
capacidad antioxidante y los parámetros de calidad in vitro de semillas de soja
1
2
3
4
2
Cardoso, Josefina ; Machado, Ignacio ; Irigoyen, Juan Octavio ; Arruda, M.A.Z. ; Pistón, Mariela ; Viera,
Inés1; Torre, María H.1
1
Química Inorgánica, DEC, Facultad de Química, UdelaR.
Química Analítica, DEC, Facultad de Química, UdelaR.
3
Agropecuaria Valdense S.R.L., Colonia, Uruguay
4
UNICAMP, Instituto de Química, Departamento de Química Analítica e Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Bioanalitica,
Campinas-SP, Brasil
[email protected]
2
La soja se ha convertido en el principal cultivo agrícola en los últimos 10 años en Uruguay, cubriendo más
del 85% del área de cultivo de verano. Condiciones adversas durante la cosecha y almacenamiento de las
semillas de soja pueden provocar una reducción de la calidad de las mismas lo que puede afectar
desfavorablemente el valor de mercado del cultivo siguiente. El deterioro de las semillas se debe
principalmente a condiciones inadecuadas de humedad, temperatura, microorganismos, suelo y salinidad
del agua y los niveles de metales traza (deficiencia o exceso). Estas condiciones pueden dar lugar a la
producción de semillas en estado de estrés y por lo tanto se produce una disminución de la capacidad de
germinación de las mismas. Una viabilidad menor al 80% es criterio para el rechazo del lote impidiendo su
comercialización.
Como parte de nuestros estudios, se evaluaron sistemas antioxidantes, tanto enzimáticos como no
enzimáticos, en semillas de soja de buena y mala viabilidad, con el objetivo de observar una posible
correlación entre los ensayos in vitro de calidad y la capacidad antioxidante. Esto permitiría contar con
nueva información sobre las semillas de soja regionales. También se determinaron los niveles de Fe, Cu,
Zn, Mn y Ni en las semillas y los resultados se correlacionaron con pruebas de vigor y viabilidad.
La determinación de la actividad superóxido dismutasa (SOD) se realizó utilizando el método basado en el
efecto inhibidor de la SOD sobre la reducción de NBT (azul de tetrazolio) por el O2 generado por el sistema
xantina/xantina oxidasa. El nivel del anión superóxido basal se determinó mediante métodos
espectrofotométricos, midiendo la reducción de NBT mediante medidas de absorbancia a 560 nm, en el
mismo extracto [1]. La actividad antioxidante total se determinó utilizando DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo)
como indicador y se expresa como IC50. Los metales traza se determinaron por medio de espectrometría de
absorción atómica de llama y también con atomización electrotérmica.
Los resultados de actividad SOD estuvieron en el rango de 20-63 % de inhibición, sin diferencias
significativas entre semillas con buena o mala viabilidad. Los niveles de superóxido basal fueron superiores
en las semillas de mala viabilidad, lo que podría explicar el mal desempeño de estas semillas. La actividad
antioxidante total no mostró correlación con la actividad SOD. Los niveles de metales traza en las semillas
con buena viabilidad presentaron los siguientes rangos de concentración: 47,0 -90,6 mg kg-1, 10,7-15,0 mg
-1
-1
-1
-1
kg , 33,9 -51,5 mg kg , 19,5-24,1 mg kg , 3,09 a 5,08 mg kg para el Fe, Cu, Zn, Mn y Ni respectivamente.
Estos resultados están de acuerdo con los rangos reportados en la literatura para las semillas de soja. No
se observó diferencia significativa para los niveles de metales entre las semillas con mala y buena
viabilidad, a excepción de los niveles de Zn que eran más altos en las primeras.
Estos estudios integrados mostraron que la concentración de radicales superóxido y el nivel de Zn podrían
ser buenos indicadores para el diagnóstico de semillas de soja de mala viabilidad. Esta investigación podría
dar lugar a la utilización de alguno de estos ensayos para diagnóstico preliminar del desempeño de las
semillas en cultivo.
[1] Cardozo, J.; Machado, I.; Irigoyen, J.O; Pistón, M.; Viera, I.; Torre, M. H.
Preliminary study of superoxide dismutase activity in soybean seeds with good and poor in vitro viability used
in Uruguay, XII International Symposium on Metal Ions in Biology and Medicine, Montevideo 2013, 190.
26
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O DME 01
Determinación de Fe y Zn en fórmulas infantiles de base láctea mediante el uso de
la ozonización como estrategia de preparación de la muestra
Martínez, María Cristal; Dol, Isabel; Pistón, Mariela
Química Analítica, DEC, Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.
[email protected]
Los alimentos para niños contienen elementos esenciales en concentraciones tales que garantizan el
cumplimiento de los niveles de dichos oligoelementos según la ingesta diaria requerida. Estos alimentos son
fortificados con los elementos antes mencionados y se debe controlar la concentración de los mismos
mediante análisis químicos rápidos y confiables para satisfacer la demanda de la industria.
Los procesos de oxidación que involucran la generación in situ de especies químicas oxidantes se han
reportado como tecnologías emergentes para acelerar el proceso de degradación de la materia orgánica, a
temperatura ambiente, en ciertas matrices. Estos procesos se han usado combinados con el sonicado [1].
El ozono es un poderoso oxidante, con un potencial de oxidación de 2,07 V y tiene muchas aplicaciones
comerciales e industriales. También puede oxidar metales y puede ser usado para eliminar materia orgánica
que de otra manera es difícil de remover por ejemplo de aguas o efluentes [2].
Se desarrolló un método de preparación de muestra para la determinación de hierro (Fe) y zinc (Zn) que
consistió en el ozonizado (no combinado con otras tecnologías) de la muestra en suspensión con un ácido
mineral diluido.
La muestra utilizada para la optimización y validación del método fue un material de referencia certificado de
una fórmula infantil en polvo de base láctea (NIST 1846 Infant Formula). 0,3 g de la muestra se colocaron en
un recipiente de vidrio con 25 mL de HNO3 25 % (v/v) a continuación se introdujo un dispositivo de vidrio,
construido en el laboratorio, que permite barbotear ozono. Se dejó pasar ozono durante 15 minutos. El
proceso comienza a temperatura ambiente y una vez finalizado el mismo la temperatura de la suspensión
resultante es de 9°C. Estas condiciones experimentales fueron optimizadas mediante un diseño multivariado
(2 variables: tiempo de ozonizado y concentración de HNO3 a 3 niveles).
El gas ozono fue generado a partir de oxígeno con un rendimiento de 1,6 gh-1 con un generador de ozono
(OZOX-OG 75-A, Montevideo, Uruguay). Luego de este tratamiento, la suspensión obtenida se centrifugó
durante 5 minutos a 3000 rpm. La solución sobrenadante se utilizó para las determinaciones analíticas de
Fe y Zn mediante espectrometría de absorción atómica de llama (FAAS).
Las cifras de mérito obtenidas fueron: precisión mejor a 5% para ambos metales (RSD %, n=5) y
recuperaciones de 98,1 % (Fe) y 99,3 % (Zn) considerando 100% el valor certificado (n=5).
El método propuesto resulta adecuado para la determinación de Fe y Zn en la muestra de alimento lácteo
con las ventajas de ser rápido, simple y con la utilización de ácido diluido lo que está en acuerdo con los
principios de la Química Verde. Se trata además de un método novedoso y promisorio para ser utilizado con
otras matrices similares.
[1] Capelo, J.L.; Maduro, C.; Mota, A.M. Advanced oxidation process for degradation of organomercurials:
determination of inorganic and total mercury in urine by FI-CV-AAS J.Anal. At. Spectrom. 2003, 19, 414-416.
[2] Kim, M.J. and Nriagu, Oxidation of arsenite in groundwater using ozone and oxygen. The Science of the
Total Environment.J. The Science of the Total Environment, 2000, 247,71 -79.
27
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O DME 02
Microextração por emulsificação assistida por ultrassom para a pré-concentração
de níquel
de Jesus Ferreira, Vanessa; Alves Barreto, Jeferson; Alves Meira, Lucilia; Azevedo Lemos, Valfredo
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Laboratório de química analítica, Jequié Bahia Brasil.
[email protected]
O interesse na quantificação da concentração de elementos metálicos em diversas matrizes nos últimos
anos tem aumentado consideravelmente, devido à necessidade de monitoramento da exposição humana a
esses elementos e seus compostos. Uma vez que a intoxicação por metais pesados podem causar sérios
problemas de saúde. O níquel é um elemento essencial para os seres vivos, pois possui função fisiológica
no organismo, agindo em sítio ativos de algumas enzimas hidrogenases ativando a sua ação. No entanto, o
seu excesso ocasiona riscos à saúde humana, como graves problemas pulmonares, dores abdominais e
câncer [1,2]. O monitoramento de elementos-traço em diversas matrizes requer técnicas analíticas de
separação e pré-concentração que possibilitem eficientes extrações, alta sensibilidade e seletividade [3].
Neste trabalho, foi desenvolvido um método baseado na microextração por emulsificação assistida por
ultrassom (USAEME) para a determinação de níquel por espectrometria de absorção atômica com chama
(FAAS). Esse método baseia-se na utilização do solvente extrator tricloroetileno e o 2,2-tiazolilazo-p-cresol
(TAC) como reagente quelante em uma solução contendo íons níquel. Após emulsificação por ultrassom, a
mistura é centrifugada para a separação das fases. Posteriormente, o sobrenadante é descartado e a fase
rica é diluída com ácido nítrico. O teor de níquel nesta nova mistura é dosado por FAAS. As seguintes
variáveis foram otimizadas: tipo de solvente extrator (tricloroetileno), tipo de reagente quelante (TAC),
volume do extrator (100 µL), concentração do reagente quelante (0,015% m/v), pH (8,0), tempo de
sonicação (5,0 minutos) e tempo de centrifugação (4,0 minutos). Os limites de detecção e quantificação,
calculados sob condições otimizadas foram, respectivamente, 0,2 e 0,8 µg L1. O fator de enriquecimento
obtido foi de 190. O método proposto é simples, rápido e eficiente para a determinação de níquel por FAAS.
[1] LEE, J.D. Química inorgânica não tão concisa – tradução da 5ª edição inglesa. São Paulo, Edgard
Blücher, 1999, 544 Páginas.
2
[ ] EATON, D. L.; KLAASSEN, C. D. TOLERANCE. Principles of toxicology. McGraw-Hill Companies, 2001,
p. 11 – 3
[3] DOS SANTOS, S. E; LEMOS, V. A. Sensitive determination of trace molybdenum in natural waters using
dispersive liquid-liquid microextraction and electrothermal atomic absorption spectrometry. Analytical
Methods v. 5, p. 2098-2103, 2013.
28
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O DME 03
Método multirresiduo tipo screening para la determinación de residuos de
Sulfonamidas en hígado y leche por HPLC MSMS
Baccino, M.; Rampoldi, O.
Laboratorio de Residuos Biológicos, Departamento de Protección de Alimentos, DI.LA.VE, Ministerio de Ganadería, Agricultura y Pesca
- URUGUAY
[email protected]
Las sulfonamidas son compuestos antimicrobianos que han sido ampliamente utilizadas como drogas
veterinarias con fines terapéuticos. De no ser administradas adecuadamente, se pueden encontrar residuos
de sulfonamidas en alimentos de origen animal, ya sea en productos lácteos como cárnicos. La presencia
de estas drogas por encima del límite máximo de residuo (LMR= 100 µg/kg-l) en alimentos hace que la
muestra sea no conforme (desencadenando acciones posteriores), además del peligro para los
consumidores, entre otras cosas por la posible generación de resistencia. Se implementó una metodología
de análisis multirresiduo tipo screening para monitorear residuos de Sulfathiazole, Sulfamethoxine,
Sulfadiazine, Sulfacetamide, Sulfaquinoxaline, Sulfametazine, Sulfametoxipyradizine, Sulfadimetoxine,
Sulfamerazine, Sulfachlorpradizine, Sulfametoxazole. En el caso de detectar presencia de alguno de estos
analitos, se identifica el compuesto para realizar luego la etapa de confirmación y cuantificación del mismo
[1]. Muestras de leche e hígado bovino se sometieron a una etapa de extracción con acetonitrilo y posterior
lavado del extracto con hexano, para luego ser analizado por HPLC MSMS (MRM). La validación se realizó
según la normativa “European Commission Decision 657/2002/EC” [2] y “Guidelines for the validation of
screening methods for residues of veterinary medicines 20/1/2010”[3]. El valor de CCβ obtenido para los
diferentes analitos varió entre 10-20µg/kg-l, el porcentaje de falsos negativos fue menor al 5% en un nivel de
concentración correspondiente al CCβ, la precisión obtenida (CV%) estuvo entre 7-20% así como también
se constató la robustez de la metodología empleada y el nivel de cut-off. La aplicabilidad del método
desarrollado fue demostrado a través del análisis de muestras de hígado y leche que se analizan en el
marco del Plan Nacional de Residuos Biológicos, lo que permitió disminuir el número de muestras que
deben ser analizadas por métodos confirmatorios.
[1] Food Additives & Contaminants: Part A, vol. 26, no. 11, 1459-1471, 2009
[2] Commission Decision 2002/657/EC, Off. J. Eur. Communities L221 (2002) 8.
[3] “Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines 20/1/2010”
COMMUNITY REFERENCE LABORATORIES RESIDUES (CRLs) 20/1/2010
29
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O DME 04
Estudo de método empregando Microextração líquido-líquido dispersiva com
emprego de solvente de-emulsificante para extração de 58 compostos orgânicos de
amostras de água
Caldas, Sergiane1; Arias, Jean Lucas1; Rombaldi, Caroline1; Marube, Liziane1; Martins, Ayrton2; Primel,
Ednei1
1
Universidade Federal do Rio Grande (FURG), Escola de Química e Alimentos (EQA), Laboratório de Análises de Compostos
Orgânicos e Metais (LACOM), Rio Grande, RS, Brasil
2
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Departamento de Química, Santa Maria, RS, Brasil
O avanço das técnicas de extração e, principalmente das técnicas de detecção possibilitou a quantificação
de diversos tipos de contaminantes em amostras ambientais. Com isso, além de compostos já estudados,
como os agrotóxicos, novas pesquisas relacionadas à presença de fármacos e produtos de higiene pessoal
(PPCPs) são necessárias. Estes compostos estão presentes nas amostras em concentrações da ordem de
nanogramas por litro, o que requer métodos sensíveis, seletivos, rápidos e eficientes [1]. O objetivo deste
trabalho foi estudar um método empregando Microextração Líquido-Líquido Dispersiva com emprego de
solvente de-emulsificante (SD-DLLME) [2], para a pré-concentração e extração simultânea de 58
agrotóxicos e PPCPs com determinação por Cromatografia Líquida acoplada a Espectrometria de Massas
em série (LC-MS/MS) em amostras de água. Os parâmetros de extração (tipo e volume de solvente extrator
e dispersor, pH, adição de sal e massa de sal, e tipo de solvente de-emulsificante) foram estudados. Após
otimização, foram obtidos limites de quantificação (LOQ) na faixa de 0,0125 a 1,25 µg L−1. A linearidade foi
-1
estudada do LOQ de cada compostos até 25 µg L , e coeficientes de correlação maiores que 0,99 foram
atingidos. As recuperações ficaram entre 61 e 147% com desvio padrão relativo (RSD) menores que 29%.
O método proposto demonstrou pela primeira vez que o uso da SD-DLLME juntamente com LC-MS/MS
pode ser empregado satisfatoriamente para extração de multiresíduos. Além disso, o método proposto é
rápido, consume baixo volume de solventes e utiliza solventes menos tóxicos que os tradicionalmente
empregados na DLLME.
[1] Primel, et al. Multi-residue analytical methods for the determination of pesticides and PPCPs in water by
LC-MS/MS: a review. Central European Journal of Chemistry, 2012, 10, 876-899.
[2] Chen, H. et al. Low-density extraction solvent-based solvent terminated dispersive liquid–liquid
microextraction combined with gas chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of
carbamate pesticides in water samples. Journal of Chromatography A, 2010, 1217, 1244-1248.
30
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O DME 05
Determinación espectrofluorimétrica de mercurio en matrices acuosas utilizando un
quimiodosímetro formado por nanopartículas de oro y FC1
1
1
1
1
1
Onaindia, M. Celeste ; Culzoni, M. Julia ; Brasca, Romina ; Goicoechea, Héctor ; Muñoz de la Peña,
Arsenio2
Laboratorio de Desarrollo Analítico y Quimiometría (LADAQ), Cátedra de Química Analítica I, Universidad Nacional del Litoral, Ciudad
Universitaria, CC 242 (S3000ZAA), Santa Fe, Argentina
2
Departamento de Química Analítica, Universidad de Extremadura, Badajoz, España
El mercurio es un contaminante altamente tóxico, pudiendo ser incorporado por el ser humano a través de
productos pesqueros (CH3Hg+) y a través del agua (Hg2+). Por lo tanto, su detección resulta de gran
importancia. Los métodos habituales para la determinación de mercurio son de elevado costo, involucran
instrumentación compleja y requieren pretratamientos engorrosos de la muestra. Tanto la disminución (turnoff) como el aumento de la señal (turn-on) de fluorescencia se pueden utilizar para detectar un analito de
interés de forma sencilla. El FC1 (derivado de la rodamina 6G) es un sensor fluorescente y colorimétrico que
reacciona con el Hg2+ con una estequiometria 1:1. Como resultado de esta reacción se genera un
compuesto que tiene un máximo de emisión de fluorescencia a 555 nm [1,2].
Por otra parte, las estructuras a escala nanométrica han acaparado el interés científico debido a sus
propiedades especiales y sus posibles aplicaciones. Las nanopartículas de oro (AuNPs) poseen
propiedades ópticas únicas, con un pico de absorción característico a 520 nm. Al interaccionar las AuNPs
con el FC1 tiene lugar un proceso de transferencia de energía denominado RET (Resonance Energy
Transfer), que disminuye la señal de base del fluoróforo y aumenta la sensibilidad del método hacia la
detección de iones Hg2+ [3].
Con el fin de generar un sensor espectrofluorimétrico el tipo turn-on para la determinación de Hg2+ en
matrices acuosas, se sintetizaron AuNPs por reducción con citrato y se caracterizaron por
espectrofotometría UV-vis y DLS (Dynamic Light Scattering). El posterior acoplamiento de las AuNPs con el
FC1 permitió detectar de manera satisfactoria Hg2+ en concentraciones entre 0 y 10 ppb.
Referencias
[1]Y-k Yang, K-J Yook, J Tae. A rhodamine-based fluorescent and colorimetric chemodosimeter for the rapid
detection of Hg2+ ions in aqueous media. J. Am. Chem. S., 2005, 127, 16760-16761.
[2] D. Bohoyo Gil, M. I. Rodriguez-Cáceres, M. del C. Hurtado-Sánchez, A. Muñoz de la Peña. Fluorescent
Determination of Hg2+ in Water and Fish Samples Using a Chemodosimeter Based in a Rhodamine 6G
Derivative and a Portable Fiber-Optic Spectrofluorimeter. Applied Spectroscopy, 2010, 64520-527.
[3] J. R. Lakowicz. Principles of Fluorescence Spectroscopy, Nueva York, 2006. Springer, 3 ed.
31
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O DME 06
Foto-generación de derivados volátiles de selenio
Mollo, Alicia; Knochen, Moisés
Química Analítica, Facultad de Química, Universidad de la República
La generación de especies volátiles para la determinación de elementos a nivel de concentración traza
reviste gran importancia en Química Analítica ya que a la vez que se separa la fase gaseosa del resto de la
muestra, aumenta la sensibilidad del análisis y disminuye la interacción con la misma mejorando el control
de las interferencias.
Generalmente, el selenio es determinado a partir de Se (IV) en medio ácido con tetrahidroborato de sodio
por espectrometría de absorción atómica mediante generación de hidruros [1].
Recientemente, se ha propuesto la formación de derivados volátiles metálicos de ácidos de cadena corta
que se forman al irradiar la solución que los contiene con radiación ultravioleta. De esta forma, se evita el
empleo de tetrahidroborato de sodio, reactivo de alto costo, ecotoxicidad y baja estabilidad así como
también los medios fuertemente ácidos [2].
En el presente trabajo se foto-generaron especies volátiles de selenio en solución de ácido fórmico 4,6 M.
Para eso, se construyó un reactor UV en flujo al cual se introdujeron las soluciones de medida mediante una
bomba peristáltica y se irradiaron durante 30 segundos.
En primera instancia, se verificó la formación de la especie volátil determinando el selenio en las soluciones
de estudio antes y después de ser irradiadas, mediante espectrometría de absorción atómica electrotérmica
de horno de grafito (GF-AAS). Se observó una disminución en la señal del 75%.
Para la determinación, se recogieron las muestras a la salida del reactor en viales cerrados con septo. A
través de éste se suspendió una gota de solución ácida de paladio, que se expuso a los vapores de la
solución [3]. Se determinó el selenio extraído en la gota mediante GF-AAS. La solución de paladio cumple la
doble función de ser la solución de extracción de la especie gaseosa y el modificador químico para la
determinación de selenio mediante GF-AAS. Se optimizaron las condiciones de la determinación mediante
curvas de pirólisis y atomización en esas condiciones.
Se realizó la foto-generación y micro extracción para soluciones de 10 a 100 µg L-1. Se evaluó el área de
pico en función de la concentración encontrándose una relación lineal, Ap = 0,006.C–0,020 (Ap = área de
-1
2
pico, C concentración en mg L ), r =0,9999.
La generación fotoquímica de especies volátiles de selenio con micro extracción en gota de paladio y
determinación por GF-AAS, es una promisoria alternativa a la generación de hidruros convencional.
[1] Dedina, J.; Tsalev, D.L., Hydride generation Atomic Absorption Spectrometry. Chichester: John Wiley &
Sons Ltd, 1995,127, 308.
[2] Guo, X.; Sturgeon, R.E.; Mester, Z.; Gardner, G. J., Vapor generation by UV irradiation for sample
introduction with Atomic Spectrometry. Anal Chem; 2004; 76; 2401-2405.
[3] Fragueiro, S.; Lavilla, I.; Bendicho, C. Hydride generation-headspace single-drop microextractionelectrothermal atomic absorption spectrometry method for determination of selenium in waters after
photoassisted prereduction. Talanta; 2006; 68; 1096-1101.
32
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O DME 07
Determinação rápida e simples de N-P-K em misturas fertilizantes usando
espectrometria de absorção atômica de alta resolução e fonte contínua
Bechlin, Marcos André; Fotunato, Felipe Manfroi; Silva, Ricardo Moutinho; Ferreira, Edilene Cristina; Gomes
Neto, José Anchieta
UNESP – Univ. Estadual Paulista, Departamento de Química Analítica
Nitrogênio (N), fósforo (P) e potássio (K) são nutrientes essenciais para plantas sendo, portanto,
constituintes de várias misturas fertilizantes. A proporção N-P-K em fertilizantes (normalmente escritas como
N-P2O5-K2O) é frequentemente determinada utilizando Kjeldahl ou espectrofotometria para N,
espectrofotometria ou gravimetria para P e espectrometria de emissão atômica em chama para K. Assim, as
análises de rotina de misturas fertilizantes N-P-K demandam a utilização de três técnicas ou métodos
distintos, o que torna morosa a rotina de trabalho e a obtenção de resultados analíticos. No presente
trabalho é proposta a determinação de N, P e K em misturas fertilizantes por espectrometria de absorção
atômica de alta resolução e fonte contínua (HR-CS F AAS), a partir da análise de uma única alíquota de
amostra. Para esse propósito, um espectrômetro de absorção atômica de alta resolução, Analytik Jena
ContrAA 300 equipado com uma lâmpada de arco curto de xenônio operando no modo “hot-spot” foi
empregado. As linhas de absorção para as moléculas diatômicas de NO a 215,360 nm e de PO a 247,620
nm, e uma linha alternativa para K a 404,722 nm foram monitoradas. As chamas utilizadas para obtenção
das espécies analisadas foram produzidas por fluxos de ar de 434 L h-1 e fluxos de acetileno (gás
combustível) de 45 L h-1 para NO, 100 L h-1 para PO e 80 L h-1 para K. Misturas fertilizantes foram
adquiridas no comércio local e os procedimentos utilizados para o preparo das amostras foram os descritos
pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) e o método oficial de análise da AOAC.
Sob condições otimizadas foram obtidas curvas de calibração no intervalo de concentração de 500 - 5000
mg L-1 para N (r= 0,9991), 100 - 2000 mg L-1 para P (r=0,9985), e 100 - 2500 mg L-1 para K (r= 0,9993). As
misturas fertilizantes comerciais analisadas pelo método proposto apresentaram concentrações de N, P e K
estatisticamente concordantes, ao nível de confiança de 95%, com as determinadas pelo método de
Kjeldahl, espectrofotometria e espectrometria de emissão atômica em chama.
33
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O DME 08
Determinação de metais e halogênios em amostras de piche após Combustão
Iniciada por Micro-ondas (MIC)
1
1
1
2
3
Pereira, Letícia S. F. ; Iop, Gabrielle D. ; Nascimento, Mariele S. ; Pereira, Juliana S. F. ; Mesko, Márcia F. ;
Flores, E. M. M.1
2
1
Universidade Federal de Santa Maria, Departamento de Química, Santa Maria, RS, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Departamento de Química Inorgânica, Porto Alegre, RS, Brasil.
3
Universidade Federal de Pelotas, Instituto de Química e Geociências, Pelotas, RS, Brasil.
O uso de piche de petróleo tem sido uma alternativa para a produção de materiais de alto valor comercial
como fibras de carbono e eletrodos de grafite. Na indústria do petróleo, a presença de metais define a
qualidade da matéria prima [1]. A determinação de metais em piche requer uma etapa prévia de
decomposição da amostra. No entanto, esta etapa pode ser considerada crítica devido à possibilidade de
decomposição incompleta da amostra, principalmente quando matrizes complexas são utilizadas, como por
exemplo, o piche. A combustão iniciada por micro-ondas (MIC) [2] foi desenvolvida recentemente e possui
diversas vantagens sobre os métodos clássicos de combustão, principalmente para amostras de dificil
decomposição, como petróleo e produtos relacionados, para posterior determinação de metais e halogênios
em nível de traço. No presente trabalho, a MIC foi utilizada para a decomposição de amostra de piche para
a posterior determinação de metais e halogênios. A amostra foi pesada e aquecida até fusão parcial e
formação de uma pastilha. A pastilha formada foi posicionada na base de um suporte de quartzo sobre um
-1
disco de papel de filtro. Após a adição de NH4NO3 6 mol L ao papel, o suporte contendo a amostra foi
colocado no interior do frasco de quartzo contendo 6 mL de solução absorvedora. Os frascos foram
pressurizados com 20 bar de oxigênio e o programa de aquecimento utilizado foi 5 min a 1400 W e 20 min
de resfriamento. Como solução absorvedora, foi utilizado NH4OH 50 mmol L-1 e HNO3 14 mol L-1 para a
retenção de halogênios (F, Cl, Br e I) e metais (Al, Ba, Cd, Fe, Mg, Mn, Pb, Sr e Zn), respectivamente.
Materiais de referência certificados (CRM) de carvão (BCR 40 e SARM 19) foram usados para avaliação da
exatidão. A determinação de metais foi feita por espectrometria de emissão óptica com plasma
indutivamente acoplado (ICP OES), Br e I foram determinados por espectrometria de massa com plasma
indutivamente acoplado (ICP-MS), Cl foi determinado por cromatografia de íons e F foi determinado por
eletrodo íon-seletivo (EIS). De acordo com os resultados obtidos, foi possível observar que o procedimento
de MIC foi eficiente para a decomposição de até 400 mg de amostra e posterior determinação de metais e
halogênios. A concordância com os valores certificados foi superior a 95% para os CRM de carvão,
mostrando a excelente exatidão obtida.
[1] Zhao, S., Xu, Z., Xu, C., Chung, K. H., Wang, R., Systematic characterization of petroleum residua based
on SFEF, Fuel, 2005, 84, 635-645.
[2] Flores, E. M. M., Mesko, M. F., Moraes, D. P., Pereira, J. S. F., Mello, P. A., Barin, J. S., Knapp, G.,
Determination of Halogens in Coal after Digestion Using the Microwave-Induced Combustion Technique,
Analytical Chemistry, 2008, 80, 1865-1870.
34
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O EDU 01
Uso de la plataforma de hardware/software libre Arduino para el control de
dispositivos y sensores, así como la adquisición de datos en sistemas de análisis
en flujo
González, Pablo; Knochen, Moisés
Universidad de la República, Facultad de Química. DEC – Área de Química Analítica.
Av. Gral. Flores 2124. 11800 Montevideo, Uruguay.
Exceptuando a los más simples sistemas FIA (que pueden ser operados manualmente); la mayoría de las
metodologías de análisis en flujo requieren un control y una sincronización precisa de varios dispositivos
como actuadores (bombas peristálticas, bombas de jeringa, válvulas solenoide, bombas solenoide, etc.),
sensores (electrodos, fotodiodos, etc.) así como el procesamiento de los datos entregados por el sistema de
detección (digitalización de la señal analógica, realización de cálculos, generación de archivos, etc.).
Utilizando una interfaz de hardware y un software adecuados, una computadora puede realizar todas esas
tareas acorde a las necesidades del usuario. Lamentablemente, esas interfaces de hardware así como el
software para utilización en análisis en flujo pueden no estar disponibles, tener altos costos o no ser
suficientemente flexibles sobre todo en las etapas de experimentación, desarrollo y optimización de nuevas
metodologías de análisis en flujo o de mejora de las ya existentes.
En la actualidad, sobre todo en ámbitos como la robótica y la automatización de procesos, se han
popularizado los recursos de fuente abierta (tanto a nivel de hardware como de software) gracias al
desarrollo de microcontroladores de fuente abierta, los cuales son de bajo costo y con entornos de
programación de dominio público. La plataforma Arduino (www.arduino.cc) es un excelente ejemplo del uso
de este tipo de recursos.
Una de las placas más simples de la plataforma es la Arduino UNO. Emplea un microcontrolador ATmega
328 de 8 bits de la firma Atmel. Este permite la adquisición de señales analógicas (posee 6 entradas
analógicas de 10 bits de resolución) y la posibilidad de controlar actuadores y sensores gracias a sus 13
puertos digitales que pueden operar como entradas o salidas. Posee un puerto USB y además un puerto
serial para realizar comunicación serie con otros dispositivos. Otras placas Arduino (como la MEGA o la
DUE) presentan procesadores más potentes, más memoria, mayor cantidad de puertos digitales y entradas
y salidas analógicas de mayor resolución (12 bits). Sin embargo la UNO permite realizar el control completo
de un dispositivo sin dificultad.
El entorno de programación Arduino es muy sencillo a tal punto que personas con poca experiencia pueden
programarla. Al ser de fuente abierta no hay que adquirir ningún tipo de licencia independientemente de la
aplicación para la que se destine.
En este trabajo se presentan algunos ejemplos del uso de esta plataforma en un laboratorio en el área del
análisis en flujo:
∗
Manejo de dispositivos:
o Bomba de jeringa
o Válvulas de inyección
o Válvulas solenoide
∗
Adquisición de señales analógicas
∗
Control completo de un sistema multiconmutado para la determinación de hierro en agua con tiocianato.
La plataforma Arduino UNO resulta adecuada para la operación de todos los dispositivos que pueden estar
presentes en un sistema en flujo (actuadores y sensores), permite la adquisición y digitalización de las
señales obtenidas con una aceptable resolución, es versátil y de sencilla programación y por ser de fuente
abierta es de bajo costo y fácil obtención.
35
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O PRO 01
Desarrollo de una estrategia analítica para la identificación de interactores de
quinasas de M. tuberculosis: PknG como modelo
1
1
1
2
1,3
4
1
Gil, Magdalena ; Lima, Analía ; Denicola, Ana ; Batthyány, Carlos ; Alzari, Pedro ; Durán, Rosario
Unidad de Bioquímica y Proteómica Analíticas, Institut Pasteur de Montevideo/Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente
Estable
2
Laboratorio de Fisicoquímica Biológica, Facultad de Ciencias, Universidad de la República
3
Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, Universidad de la República
4
Unité de Microbiologie Structurale & CNRS URA 2185, Institut Pasteur, 75724 Paris Cedex 15, Francia
Mycobacterium tuberculosis, el agente etiológico de la tuberculosis, constituye un grave problema de salud
pública a escala global. La aparición de cepas resistentes y la baja eficiencia de las drogas actuales, en
casos de infecciones crónicas o subclínicas, hace imprescindible la identificación de nuevas moléculas que
permitan el desarrollo de terapias alternativas. El estudio de factores de virulencia y su mecanismo de
acción a nivel molecular es una de las estrategias para el diseño racional de drogas [1]. En los últimos años
ha cobrado gran relevancia el estudio de PknG, una quinasa de proteínas que regula procesos críticos del
metabolismo micobacteriano así como vías de señalización en los macrófagos infectados [2,3]. En base a lo
anteriormente expuesto nos propusimos buscar interactores proteicos de PknG tanto en el macrófago como
en la micobacteria. Para abordar la identificación de estos blancos moleculares se utilizó una estrategia
experimental del tipo purificación por afinidad/espectrometría de masa. Brevemente, se inmovilizó PknG
sobre un soporte sólido y la resina con la proteína unida se incubó con un extracto total de macrófagos
murinos J774A.1 o con un extracto citosólico de Mycobacterium smegmatis (organismo estrechamente
emparentado con M. tuberculosis). Una vez inmovilizadas las proteínas, se ensayaron condiciones de
elución secuencial y diferencial con el fin de recuperar específicamente sustratos y/o proteínas blanco, para
las distintas etapas de elución se consideraron la clase de interacciones que podrían establecerse con los
diferentes dominios de la quinasa. De esta manera fue posible eluir en forma específica en una primera
etapa posibles sustratos fosforilables de la quinasa, en una segunda etapa interactores con afinidad por los
residuos autofosforilados en la enzima, y en una tercera etapa el resto de las proteínas retenidas por posible
interacción con otros dominios de PknG. Las proteínas eluídas se identificaron por espectrometría de masa
utilizando una trampa iónica de alta sensibilidad acoplada a un nano-LC y usando una aproximación de tipo
shotgun. A partir del análisis bioinformático se generó una lista de posibles interactores de PknG, se
seleccionaron algunos candidatos de interés y se comenzó recientemente con la validación in vitro.
[1] Dorman, S. E. and Chaisson, R. E. (2007) From magic bullets back to the magic mountain: the rise of
extensively drug-resistant tuberculosis. Nat Med. 13, 295-298.
[2] Walburger, A., Koul, A., Ferrari, G., Nguyen, L., Prescianotto-Baschong, C., Huygen, K., Klebl, B.,
Thompson, C., Bacher, G. and Pieters, J. (2004) Protein kinase G from pathogenic mycobacteria promotes
survival within macrophages. Science. 304, 1800-1804
[3] O'Hare, H. M., Duran, R., Cervenansky, C., Bellinzoni, M., Wehenkel, A. M., Pritsch, O., Obal, G.,
Baumgartner, J., Vialaret, J., Johnsson, K. and Alzari, P. M. (2008) Regulation of glutamate metabolism by
protein kinases in mycobacteria. Mol Microbiol. 70, 1408-1423
36
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O QYC 01
Empleo de modelos lineales y no lineales en la determinación de norisoprenoides
por espectroscopía en infrarrojo cercano
1
1
1
2
2
Boido, Eduardo ; Fariña, Laura ; Carrau, Francisco ; Disegna, Edgardo ; Coniberti, Andrés ; Dellacassa,
Eduardo3
1
3
Sección Enología, CYTAL
2
INIA-LAS Brujas
Farmacognosia y Productos Naturales, DQO, Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay
[email protected]
En los vinos el aroma depende de factores como variedad de uva, vinificación y crianza, siendo los
metabolitos secundarios de la uva los responsables del carácter varietal de los vinos. Estos metabolitos
pueden estar glicosilados en las uvas y ser hidrolizados durante la vinificación. Para uvas no aromáticas,
como Vitis vinifera Tannat, los norisoprenoides glicosilados provocan aromas diferenciales en el vino luego
de la crianza. Conocer el contenido de norisoprenoides glicosilados permite clasificar la fruta según su
calidad y determinar la madurez óptima para la vendimia, por lo cual es relevante disponer de técnicas
rápidas para su determinación.
La espectroscopia en el infrarrojo cercano (NIR) es una técnica rápida, no destructiva, aplicable a
cantidades y preparación mínima de la muestra. Sus aplicaciones cuantitativas requieren para su
interpretación modelos qumiométricos. Los modelos lineales, como la regresión por mínimos cuadrados
parciales (PLS), son los más utilizados. Sin embargo, las redes neuronales (RNs) son un modelo no lineal
utilizado con ventajas.
En este trabajo se utilizaron las técnicas de NIR-PLS y NIR-RNs para la cuantificación de norisoprenoides
en uvas, realizando la calibración con los norisoprenoides glicosidados, determinados por GC-MS,
presentes en uva Tannat muestreada en diferentes etapas de maduración y cosecha. Los resultados
obtenidos demuestran que es posible utilizar estas técnicas rápidas para cuantificación de norisoprenoides
en uvas, presentando los mejores resultados (error cuadrático medio 270 µg/L) la calibración con RNs
utilizando un modelo de perceptrón multicapa con dos capas ocultas y como método de aprendizaje un
algoritmo de gradiente descendiente.
37
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
O TOX 01
Determinación de arsénico en orina: Desarrollo de una metodología de screening
para el análisis de rutina mediante espectrometría de absorción atómica con
atomización electrotérmica (ET-AAS)
1
Bühl, Valery2; Alvarez, Cristina1; Pistón, Mariela2; Mañay, Nelly1
CEQUIMTOX. Toxicología, Departamento Estrella Campos. Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay
2
Química Analítica, Departamento Estrella Campos, Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.
[email protected]
En Uruguay el biomonitoreo de trabajadores expuestos a arsénico (As) mediante su análisis en orina es
obligatorio para el control de exposición. Debido a la diferente toxicidad que presentan las especies
arsenicales, es necesario desarrollar herramientas analíticas locales, para evaluar los niveles de As total y
sus especies toxicológicamente relevantes en esta matriz. Una de las técnicas analíticas recomendadas
para especiación (HPLC-ICP-MS) no está disponible en Uruguay para estos fines, por lo que el objetivo fue
desarrollar y optimizar métodos analíticos sencillos y rápidos para determinar As (III), As (V) y los
metabolitos metilados mayoritarios (MMA y DMA) en la orina, mediante detección con espectrometría de
absorción atómica con atomización electrotérmica (ET-AAS). El consumo de alimentos marinos es poco
frecuente en Uruguay por lo que la contribución de As no tóxico, proveniente del pescado (arsenobetaína),
en la orina humana, puede no representar un valor significativo.
El análisis del perfil urinario del As puede proporcionar un índice de la capacidad de metilación de los
individuos expuestos. Los estudios que actualmente evalúan la asociación entre los perfiles urinarios y
enfermedades humanas miden principalmente el arsenato y arsenito inorgánico así como los dos
metabolitos metilados mayoritarios en orina, el ácido monometilarsónico (MMA) y el ácido dimetilarsínico
(DMA) menos tóxico.
Las determinaciones analíticas se realizaron con un equipo Thermo iCE 3000 Series, con corrección de
fondo Zeeman. Se evaluó la efectividad de tres modificadores de matriz: Pd, Ni y Pd-K2S2O8 obteniéndose
-1
los mejores resultados con este último, preparado mezclando partes iguales de una solución de Pd 6,0 gL
-1
en ácido nítrico (15 % v:v) y de una solución acuosa de persulfato de potasio 20 gL . La estrategia en ese
caso consistió en combinar la digestión “in situ” con K2S2O8 de la orina diluida (1:5) y el uso de Pd como
modificador de matriz clásico [1]. Las condiciones operativas se presentan en la siguiente tabla:
-1
Temperatura (°C)
Tiempo (s)
Rampa (°C/s)
Flujo gas (L min )
100
10
10
0,2
200
30
35
0,2
1200
15
20
0,2
1800
4
0
Apagado
1900
3
0
0,2
Las muestras de orina utilizadas fueron diluidas 1:5 con ácido nítrico 1% v:v y Tritón 1% m:v.
El límite de detección obtenido fue de 0,6 µgL-1, el límite de cuantificación fue de 2,0 µgL-1 y la precisión fue
-1
mejor que 6% expresada como RSD. La metodología presenta un rango lineal hasta 100 µgL . Se
adicionaron muestras de orina de población no expuesta con las diferentes especies toxicológicamente
relevantes obteniéndose recuperaciones en el rango de 80 a 130 %.
Los resultados obtenidos son adecuados para las determinaciones de las especies toxicológicamente
relevantes de As en orina, ya que en base a las recomendaciones internacionales y reglamentación
38
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
uruguaya: As orina <35 µgL-1 para los trabajadores expuestos ocupacionalmente [2] y 10-20 µgL-1 para la
población en general [3].
[1] Nixon DE, Mussmann, GV, Eckdahl, SJ, Moyer, TP. Total arsenic in urine: Palladium-persulfate vs nickel
as a matrix modifier for graphite furnace atomic absorption spectrometry"; Clin Chem; 1991; 37; 1575-1579.
[2] American Conference of Governmental Industrial Hygienists (ACGIH),TLVs© and BEIs©, 2011.
[3] American Public Health Association (APHA). Standard Methods for the Examination of Water and
Wastewater, 20th Ed, 1998, 3114 A.
Agradecimientos: Agencia Nacional de Investigación e Innovación, Proyecto Fondo María Viñas,
FMV_3_2013_1_100439
39
Posters
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 01
Cuantificación de Variaciones Anuales en el Perfil Lipídico de Leche por
Espectroscopía de Resonancia Magnética Nuclear
1
1
1
2
2
Larroque, Gabriela ; López, Andrés *; Fernández, Paula ; Grille, Lucia ; Piedrabuena, Laura ; Moyna,
Guillermo1*
1
Departamento de Química del Litoral, CENUR Noroeste, Universidad de la República
2
Consorcio Regional de Innovación Lechero
*[email protected], [email protected]
1
1
Se presenta la aplicación de la espectroscopía de resonancia magnética nuclear de H (RMN H) al
seguimiento de las variaciones anuales en el perfil lipídico de leche.[1] Entre los parámetros evaluados
están el porcentaje de ácidos grasos saturados (SFA), monoinsaturados (MUFA), y poliinsaturados (PUFA).
Las determinaciones se llevaron a cabo para un total de 360 muestras, que corresponden a un muestreo
mensual de 30 productores locales. El trabajo discute la metodología de preparación de muestra, y presenta
correlaciones entre las variaciones de los perfiles lipídicos y diferentes parámetros, incluyendo por ejemplo
el tipo de alimentación, estación del año, y estado sanitario de los animales.
1
1) Brescia, M. A.; Mazzillia, V.; Sgaramella, A.; Ghelli, S.; Fanizzi, F. P.; Sacco. A. H NMR Characterization
of Milk Lipids: A Comparison Between Cow and Buffalo Milk, J. Am. Oil Chem. Soc. 2004, 81, 431-436.
41
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 02
Metales esenciales traza en infusión de yerba mate (Ilexparaguariensis A. St. Hil):
Aportes nutricionales
Pistón, Mariela; Mollo, Alicia; Machado, Ignacio; Knochen, Moisés
Química Analítica, Departamento Estrella Campos, Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.
[email protected]
Los organismos vivos, necesitan de elementos inorgánicos para su supervivencia en condiciones
saludables. Se considera elemento esencial a aquel cuya ausencia o deficiencia produce disturbios en la
salud los cuales se revierten una vez incorporados.
Las funciones de los elementos mayoritarios en seres vivos han podido ser determinadas y evaluadasdesde
hace mucho tiempo, sin contar con metodologías analíticas muy sensibles y específicas. Las metodologías
capaces de alcanzar menores límites de detección, han puesto de manifiesto más recientemente la
presencia de elementos traza en determinados órganos de los seres vivos, permitiendo evaluar sus
funciones. Algunos de estos elementos forman parte de los centros activos de enzimas que catalizan
procesos vitales (Cu, Zn) o participan en el transporte de electrones (Fe, Mo, Ni).
Para evaluar los aportes nutricionales de los alimentos se compara la concentración de un determinado
nutriente en dicho alimento con los valores de referencia de ingesta diaria recomendada (IDR) establecidos
por organismos internacionales. La IDR es la ingesta diaria promedio que cumple con los requerimientos
nutricionales de casi todas las personas saludables en una categoría específica de edad y género [1].
Se realizó en este trabajo la determinación de hierro, cobre, níquel, molibdeno y cinc en infusiones
obtenidas a partir de yerba mate (Ilexparaguariensis A. St. Hil) de venta en comercios locales. En la infusión
estos elementos esenciales se encuentran bioaccesibles para el consumidor de mate.
La infusión se obtuvo a partir de 35 g de yerba mate en contacto con 500 mL de agua a 80 ºC [2], simulando
la cebadura, hinchamiento de la yerba y posteriormente se realizó una percolación con una bomba de
vacío.La determinación analítica fue realizada mediante espectrometría de absorción atómica. Para la
determinación de Cu y Zn se utilizó un espectrómetro Perkin-Elmer AAnalyst 200 con llama aire-acetileno.
En el caso de Fe, Mo y Ni se utilizó un espectrómetro ThermoiCE 3500 con atomización electrotérmica
(horno de grafito).
-1
-1
-1
-1
-1
Los resultados promedio obtenidos fueron: 0,25 mg L , 0,49 mg L , 0,18 mg L , 0,015 mg L y 2,7 mgL
paraFe, Cu, Ni, Mo y Zn respectivamente (RSD≤10%, n=5). Se analizaron muestras de 7 diferentes marcas
comerciales, cada una por duplicado.
Comparando el valor promedio de las determinaciones con la IDR de estos elementos, se concluye que si
se ingiere 1 L de mate, según la forma tradicional de consumo cebado con agua caliente, el aporte
nutricional diario porcentual, tomando como ejemplo una mujer entre 31 y 50 años, es del 1,4, 54, 33 y 34%
para Fe, Cu, Mo y Zn respectivamente. Para Ni no existe aún un valor de IDR establecido.
Estos estudios contribuyen a conocer el aporte nutricional de la infusión de mate en la dieta mostrando
además que es una buena fuente de Cu, Mo y Zn.
[1] Nutrient recommendations: dietary reference intakes (DRI) U.S. Department of
HumanServices.National
Institutes
of
http://ods.od.nih.gov/Health_Information/Dietary_Reference_Intakes.aspx (acceso 2/05/2014)
Health &
Health.
[2]Heinrichs, R., Malavolta, E.Composição mineral do produto comercial da erva-mate (Ilexparaguariensis
St. Hil.). Ciência Rural, Santa Maria, 2001. v. 31, n. 5, p. 781-785.
42
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 03
Validación de un método analítico para la determinación de cadmio en músculo de
pescado mediante absorción atómica con atomización electrotérmica (ETAAS)
1
1
1
2
2
Mondutey, Sebastián ; Pastorino, Natalia ; Pistón, Mariela ; Machado, Ignacio
Laboratorio de Bromatología de la Intendencia de Montevideo, Sector Análisis de Contaminantes Inorgánicos, Montevideo, Uruguay.
2
Química Analítica, DEC, Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.
E-mail: [email protected]
Los organismos de regulación sanitaria tienen como fin primordial garantizar la genuinidad e inocuidad de
los alimentos comercializados y por tanto sus laboratorios deben contar con procedimientos analíticos
validados.
El reglamento Mercosur vigente MERCOSUR/GMC/RES. No 12/11 (reglamento técnico Mercosur sobre
límites máximos de contaminantes inorgánicos en alimentos), indica que el límite máximo (LM) admitido de
-1
cadmio (Cd) en músculo de atún es 0,1 mgkg .
La validación de la determinación de Cd en músculo de atún se realizó mediante la técnica de absorción
atómica con atomización electrotérmica (ETAAS), utilizando un equipo Perkin Elmer modelo AAnalyst 400
con horno de grafito modelo HGA900. Los modificadores de matriz utilizados fueron nitrato de magnesio y
nitrato de paladio, la temperatura de pirolisis fue de 350ºC y la de atomización de 1500ºC. Para el
tratamiento de la muestra, se realizó una digestión asistida por microondas con un equipo Anton Paar
Multiwave 3000 usando como agentes oxidantes ácido nítrico concentrado y peróxido de hidrogeno
30%(w/w) [1]. Se utilizó material de referencia certificado (CRM) DORM 4 (proteína de pescado) y como
matriz blanco se utilizó músculo de merluza comercializado en Montevideo.
El método presentó ajuste lineal en el rango de trabajo de 0,5-10 µgkg-1 (r2≥ 0,995), la curva de calibración
se construyó con 6 puntos (7 réplicas de cada punto), se verificó homocedasticidad y mediante el estudio de
residuales se obtuvieron residuos normales.
Se estudió la existencia de efecto matriz como interferencia del método a 2 niveles de concentración: 20
µgkg-1 (20% del LM permitido en la reglamentación vigente) y 100 µgkg-1 (valor de LM). Comparando los
resultados obtenidos a partir de muestras adicionadas con patrones acuosos de igual concentración no se
observó diferencia significativa en los resultados (para un nivel de confianza de 95%) por lo que no existió
evidencia de que exista un efecto matriz.
La veracidad se evaluó utilizando el material certificado DORM 4 con una concentración de Cd declarada de
306 ± 15 µgkg-1 habiéndose obtenido recuperaciones en el rango 100,6%-104,6% respecto al valor
certificado (en 7 replicas).
La repetibilidad fue evaluada en los 2 niveles de concentración antes mencionados, obteniéndose en cada
nivel valores de Horrat menores a 1 (0,97 en nivel 20% de LM y 0,15 en el LM).
Los límites de detección (3s) y cuantificación (10s) obtenidos fueron 0,88 y 2,75 µgkg-1 respectivamente.
-1
La precisión intermedia fue evaluada en un nivel de concentración (3 µgkg ), en un periodo de tiempo de 6
meses y con distintos operarios utilizando CRM. Se obtuvo una desviación estándar relativa de 4,1% con 14
replicas (7 replicas por operario).
La reproducibilidad fue evaluada realizando el análisis utilizando el CRM a un nivel de concentración de 3
-1
µgkg en dos laboratorios diferentes, obteniéndose un resultado de Horrat de 0,23, con 7 réplicas por
laboratorio.
Se concluye que el método presenta un límite de cuantificación adecuado al uso, linealidad en el rango de
aplicación, adecuada repetibilidad y reproducibilidad, por lo que puede ser realizado en forma confiable para
el control sanitario.
[1] Bilandžić. N, Đokić. M, Sedak. M, Food Chem. 2011, 124(3), 1005-1010.
43
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 04
Optimización de condiciones experimentales para la determinación de Cd, Pb y Cr
en material vegetal por espectrometría de absorción atómica con atomización
electrotérmica (GFAAS)
Mollo, Alicia; Tissot, Florencia; Machado, Ignacio; Sixto, Alexandra; Dol, Isabel; Knochen, Moisés
Cátedra de Química Analítica. Facultad de Química. Universidad de la República. Montevideo, Uruguay.
Introducción:
El interés en la determinación de la composición de diversos materiales vegetales ya sea como alimento o
hierba medicinal ha crecido en los últimos años.Diversos factores afectan el contenido mineral de los
mismos entre ellos la composición del suelo, las condiciones climáticas y las prácticas agrícolas de cultivo.
Monitorear los niveles de metales pesados se ha hecho necesario básicamente por el aumento de la
contaminación ambiental con estos metales (las fuentes de esta contaminación son variadas, desde las
emisiones industriales y de tránsito, desechos agrícolas que contienen cadmio, fungicidas orgánicos de
mercurio e insecticidas con plomo). Recientemente el Mercosur ha aprobado su “Reglamento Técnico
MERCOSUR sobre Límites Máximos de Contaminantes Inorgánicos en Alimentos” [1] estableciendo límites
máximos permitidos para el contenido de diversos metales para té, yerba mate, y otros vegetales usados
para infusión.
El objetivo del presente trabajo es la optimización de las condiciones experimentales para la determinación
de cadmio, cromo y plomo en centella asiática, cola de caballo, toronjil y yerba mate por GFAAS.
Metodología:
El tratamiento de muestra se basa en métodos normalizados [2,3]. Se optimizan para cada matriz y para
cada analito, tiempo y temperatura de secado, de pirolisis y de atomización en función de obtener la máxima
sensibilidad analítica y recuperación adecuada.
Resultados:
La repetibilidad (sr %) para todos los casos fue mejor que 12%.
Las recuperaciones obtenidas del metal adicionado previo al tratamiento de muestra fueron de 76-118%.
Para el caso del Cd y Pb se emplea como material de referencia certificado para metales traza hoja de
espinaca (NIST1570a) y se obtienen recuperaciones de 80 y 85% respectivamente.
Conclusiones:
La precisión y recuperaciones obtenidas indican que las propuestas son adecuadas para la determinación
de Cd, Pb y Cr en las matrices vegetales ensayadas.
Referencias:
[1] Reglamento Mercosur:
http://www.aladi.org/nsfaladi/normasTecnicas.nsf/09267198f1324b64032574960062343c/13da2f42f7b7219b
032579e6005d0fb6/$FILE/Resoluci%C3%B3n%20N%C2%B0%2012-2011.pdf
[2] World Health Organization. Working document QAS/05.131/Rev.1 2005.
[3] Official Method of Analysis of AOAC International. 16th Edition. P. Cunnif, (Ed.), Maryland, USA, 1995.
AOAC Official Method 973.75.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 05
Desarrollo de un método para la determinación de mercurio total en granos de arroz
de Uruguay
Belluzzi, Marcelo; Carballal, Martín; Pistón, Mariela; Dol, Isabel
Química Analítica, Departamento Estrella Campos, Facultad de Química, UdelaR, Montevideo, Uruguay
[email protected]
El arroz es uno de los principales productos de exportación de Uruguay en los últimos años. Se ubica en el
séptimo lugar de los exportadores del cereal a nivel mundial según la base de datos de la Asociación de
Cultivadores de Arroz del Uruguay. En las búsquedas realizadas no se han encontrado publicaciones
disponibles sobre los niveles de mercurio (Hg) en arroz en nuestro país.
Se desarrolló y validó una metodología analítica para la determinación de mercurio total en granos de arroz
utilizando un dispositivo simple y de bajo costo construido en el laboratorio. La detección de mercurio se
realizó mediante espectrometría de absorción atómica de vapor frío (CV-AAS).
Una de las propiedades del analito es su elevada volatilidad; esto conlleva la necesidad de extremar
precauciones cuando se consideran las condiciones para la preparación de la muestra.
Las muestras de arroz se obtuvieron en el mercado local y para su tratamiento se molieron hasta obtener un
polvo fino y homogéneo (harina) del cereal.
Para evaluar la influencia de los parámetros críticos en la preparación de la muestra se realizó un diseño
experimental multivariado de tipo central compuesto de 4 variables (masa de muestra, volumen de mezcla
digestora, tiempo y temperatura de digestión) en 3 niveles. En base a los resultados obtenidos, las
condiciones óptimas fueron: volumen de mezcla digestora HNO3:H2SO4: 6mL; masa de muestra: 100 mg;
tiempo de digestión: 40 minutos (a presión atmosférica en bloque digestor) y temperatura de digestión 60ºC.
En los ensayos realizados en muestras de granos de arroz comercial, se encontró una interferencia en la
etapa de tratamiento de muestra que conduce a la pérdida del analito cuando se trabaja con masas
mayores a 100 mg. Esta interferencia se debería a la presencia de azúcares reductores (glucosa, maltosa e
isomaltosa) que se generan en el proceso de digestión por hidrólisis ácida del almidón, constituyente
mayoritario de esta matriz; esto se puso en evidencia mediante el ensayo de Tollens.
Para la validación se obtuvieron las siguientes cifras de mérito: ajuste lineal desde 9,5 ng hasta 100 ng,
límite de detección (3σ): 26,8 µg.Kg-1; repetibilidad del proceso analítico: RSD < 20% (n=6); la veracidad se
evaluó analizando material de referencia certificado (CRM’s Mussel Tissue, Dogfish Liver, Lobster
Hepatopancreas, n=3): los porcentajes de recuperación estuvieron en el rango de 70-130%.
La metodología resultó adecuada para la determinación de mercurio total en concentraciones a nivel de
trazas en granos de arroz y puede utilizarse para screening de los niveles de este metal en arroz de
Uruguay.
Referencias:
[1] Massart, D. L., Vandeginste, B. G. M., Buydens, L. M. C., De Jong, S., Lewi, P.J., Smeyers-Verbeke, J.,
Handbook of Chemometrics and Qualimetrics: Part A, Amsterdam, Elsevier Science, 1997, 711-716.
[2] Qiu, G. L.; Feng, X. B.; Li, P.; Wang, S. F.; Li, G. H.; Shang, L. H.; Fu, X. W. Methylmercury accumulation
in rice (Oryza sativa L.) grown at abandoned mercury mines in Guizhou, China. J. Agric.Food Chem. 2008,
56 (7), 2465–2468.
[3] Feng, X. B.; Li, P.; Qiu, G. L.; Wang, S.; Li, G. H.; Shang, L. H.; Meng, B.; Jiang, H. M.; Bai, W. Y.; Li, Z.
G.; Fu, X. W. Human exposure to methylmercury through rice intake in mercury mining areas, Guizhou
Province, China. Environ. Sci. Technol.2008, 42 (1), 326–332.
Agradecimientos: PEDECIBA Química. Prof. Dr. Érico M. M. Flores de la Universidade Federal de Santa
María, Brasil, por la donación del material de referencia certificado.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 06
Determinação do teor de Ca, Fe, K, Mg, Mn, P e Zn em molhos de pimenta
industrializados comercializados na cidade de Jequié, Bahia, Brasil
*
Honorato Santos Neto, João ; Batista Peixoto, Leandro; Alves Meira, Lucilia; Pinto Alves Guarino, Maria
Elizabeth; Oliveira da Silva, Valéria Maria; Galvão Novaes, Cleber
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Laboratório de Química Analítica, Campus de Jequié, 45206-190, Jequié, Bahia, Brasil
*
E-mail: [email protected]
No Brasil, o emprego da pimenta como condimento alimentar é habitual. Este produto é utilizado seco, em
conserva, in natura ou em molhos industrializados. Devido à praticidade e fácil acesso em muitos
estabelecimentos comerciais, os molhos de pimenta industrializados se destacam entre os demais.
Considerando-se estes fatores, este trabalho tem como objetivo determinar os teores de alguns elementos
importantes ao metabolismo humano, como Ca, Fe, K, Mg, Mn, P e Zn em molhos de pimenta
industrializados comercializados na cidade de Jequié, Bahia, Brasil, por espectrometria de emissão óptica
com plasma indutivamente acoplado (ICP OES). O preparo das amostras baseia-se na digestão com uma
mistura de HNO3 e H2O2. A mistura ácida é, então, submetida ao aquecimento em bomba de digestão ácida
sob a temperatura de 160°C por um período de 3,0 horas. Após resfriamento, o volume do digerido foi
completado com água ultrapura até 10,0 mL. As medidas foram realizadas em espectrômetro de emissão
óptica com plasma indutivamente acoplado com visão axial (Optima 7000 DV, Perkin Elmer, Norwalk, USA).
Os dados foram avaliados usando análise de componentes principais (PCA). A Figura 1 apresenta o gráfico
dos escores com as PCs mais significativas (PC1 e PC2) e a Figura 2 apresenta o gráfico dos loadings para
os dados obtidos na análise de 9 marcas diferentes de molhos de pimenta. As três PCs juntas explicam
79,41 % da variação dos dados.
Figura 1. Gráfico dos escores para PC1 e PC2.
Figura 2. Gráfico dos loadings para PC1 e PC2.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Na Figura 2 observa-se a formação de três grupos de variáveis responsáveis pelo agrupamento das
amostras. O grupo formado pelas variáveis Ca, K, Mg e P (explicada pela PC1), o grupo formado pelas
variáveis Fe e Zn (explicada pela PC2), e o grupo formado por uma única variável, o Mn (explicada pela
PC3). A partir da analise realizada é possível considerar que as concentrações de K, Mg, Ca, P, Mn, Zn e
Fe estão dentro dos padrões estabelecidos pela Agencia Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) sendo
estes, 3510, 400, 1000, 1000, 2, 15, 18 mg/dia respectivamente [1]. Além disso, o pequeno número de
amostras trabalhadas e sua similaridade nos compostos adicionados a esta matriz em seu processo de
fabricação, como corantes, conservantes e extratos, podem ter contribuído para a falta de distinção clara
entre os grupos observados.
Palavras chave: Determinação de metais, molhos de pimenta, ICP OES.
Referências bibliográficas
[1] ANVISA. Alimentos Semi-Prontos ou Prontos para o Consumo. Resolução - RDC nº 273, de 22 de
setembro de 2005. http://e-legis.anvisa.gov.br/leisref/public/showAct.php?id=18832&word=, acessada em
julho de 2014.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 07
El arroz es menos inocuo de lo que parece Determinación de cuatro especies de
As en arroz por HPLC-HG-AFS
1
1
2
2
Farías, Silvia Sara ; Londonio, Agustín ; Befani, Romina; Díaz, Eduardo ; Quintero, César ; Smichowski,
Patricia1,3
1
Comisión Nacional de Energía Atómica, Avenida General Paz 1450 (B1650KNA)-San Martín, Pcia. Buenos Aires, Argentina
Instituto de Investigación e Ingeniería Ambiental (3iA), Universidad de San Martín, Campus Miguelete, 25 de Mayo y Francia, San
Martín, Pcia. de Buenos Aires, Argentina.
3
Facultad de Ciencias Agropecuarias. Ruta Prov. 11 Km.10 Oro Verde-Dpto. Paraná ((E3100XAD) - Entre Ríos, Argentina
4
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas, Av. Rivadavia 1917 (C1033AAJ) - Ciudad Autónoma de Buenos Aires,
Argentina
2
El arroz concentra naturalmente en sus granos especies arsenicales, lo que constituye para los seres
humanos una ruta de exposición a ese tóxico. En ese marco es de fundamental importancia conocer la
distribución de esas especies en la planta de arroz para determinar su incorporación y transformación con el
propósito de delinear estrategias para minimizar su presencia. La química del As es la responsable de los
elevados niveles de sus especies en los granos. En las condiciones de cultivo establecidas, el arsenito
(AsIII-especie más tóxica) es fácilmente absorbido por la raíz.
Este estudio demanda la cuantificación de especies de forma exacta y confiable para que puedan tomarse
decisiones acerca de la optimización de prácticas agrícolas, mejoramiento genético y aptitud para el
consumo de arroz.
En este contexto, se colectaron 60 muestras de arroz (cv Cambá) de campos localizados en la Provincia de
Entre Ríos, Argentina. Se secaron a 103±2 ºC y se digirieron con HNO3 0,28 M a 95±2 ºC en baño de arena
durante 90 minutos. Las especies arsenicales en solución se separaron utilizando un sistema acoplado en
línea (HPLC-HG-AFS). Se empleó para la separación una columna cromatográfica Hamilton PRP- X100
termostatizada.
Los patrones se prepararon a partir de soluciones estándar de AsIII y AsV, y de sales de MMA y DMA. Las
soluciones de trabajo se prepararon a partir de diluciones apropiadas de soluciones madre en el buffer
utilizado para su elusión. Para evaluar el sesgo se utilizó el material de referencia certificado de matriz NIST
SRM 1568a “Rice Flour”.
Se aplicó un protocolo de validación completo, considerando la importancia de proveer resultados
confiables, exactos y trazables. Esto incluyó la evaluación de la linealidad, límite de detección (LOD) (0,020
µg g-1 para AsIII; 0,025 µg g-1 para la otras tres especies), precisión (precisión intermedia) (2% para AsIII y
DMA; y hasta 10% para las otras dos especies), veracidad (sesgo) (4% para AsIII y hasta 9% para las otras
3 especies) e incertidumbre (obtenida de los resultados de validación) que varió entre 9,5 para AsIII y 19%
para AsV.
El método optimizado y validado permitió la separación y cuantificación de cuatro especies arsenicales de
manera adecuada y rápida a nivel de ultra-trazas. El tiempo de análisis fue de ∼ 9 minutos por muestra, lo
que permitió analizar ∼30 muestras/día. Los límites de cuantificación fueron compatibles con los contenidos
de las especies arsenicales presentes en el cultivar estudiado. La precisión y la veracidad calculadas
permitieron la obtención de incertidumbres compatibles con los requerimientos impuestos por autoridades
regulatorias para el análisis de residuos en alimentos.
En las muestras analizadas pudo observarse que ∼ 86% contenía < 40% de AsIII (la especie más tóxica) y
un 93% de ellas, más de un 40% de DMA (especie prácticamente inocua).
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 08
Comparación de estrategias de extracción y clean-up para el desarrollo de métodos
de análisis multirresiduo de pesticidas en Peumus boldus
1
1
1
1
1,2
1
Bojorge, Alejandra ; Gérez, Natalia ; Pérez, Andrés ; Heinzen, Horacio ; Cesio, María Verónica
Grupo de Análisis de Contaminantes Traza - Cátedra de Farmacognosia y Productos Naturales, Facultad de Química, UDELAR.
2
Polo Agroalimentario Agroindustrial Paysandú – Centro Universitario Paysandú – UdelaR.
El mercado de las plantas medicinales y aromáticas esta en pronunciado crecimiento, producto de una
demanda cada vez mayor por parte de los consumidores. Esta demanda solo puede ser abastecida a través
de su cultivo. Las técnicas de cultivo de plantas medicinales, aun aplicando buenas prácticas agrícolas,
conlleva al uso de insumos agropecuarios, los cuales pueden llegar al consumidor.
En el presente trabajo se evaluaron diferentes métodos de extracción y clean-up, basados en el esquema
QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) para el análisis de más de 20 pesticidas
representativos de cada una de las familias de agroquímicos empleadas comúnmente, en Peumus boldus,
planta medicinal conocida como boldo, muy empleada en todo el mundo. El boldo presenta, como matriz
analítica para el análisis de contaminantes traza, una gran dificultad por el alto contenido en metabolitos
secundarios, que poseen propiedades fisicoquímicas similares a los pesticidas en estudio, interfiriendo con
su extracción, detección y análisis. En el caso del boldo, la presencia de aceites esenciales, alcaloides,
polifenoles y clorofilas debe minimizarse para evitar efecto matriz excesivo. A los efectos de minimizar el
contenido de estos metabolitos secundarios, que además pueden descomponerse y ensuciar el sistema
cromatográfico, se abordó un estudio sistemático con el fin de minimizar el contenido de coextractivos,
basado en los nuevos métodos de preparación de muestras. El concepto de QuEChERS permite, a través
de un clean-up dispersivo, la combinación de diversos absorbentes, reactivos y métodos físicos de
separación para minimizar el contenido de coextractivos que interfieran en la determinación de los residuos.
Se emplearon entonces, diferentes combinaciones de absorbentes/reactivos y se compararon los distintos
métodos oficiales de QuEChERS, AOAC 2007.1 y el CEN 15662, su versión original y variantes de los
mismos. La eficiencia de estos métodos de clean-up fue evaluada por cromatografía en capa fina (TLC). Se
evaluó el efecto de alúmina, GCB, C18 y la influencia del pH en el medio de extracción. Los métodos de
determinación empleados fueron cromatografía gaseosa acoplada a detectores de captura electrónica,
espectrometría de masas y cromatografía liquida acoplada a masas/masas. De acuerdo al estudio de
coextractivos realizado, el empleo de GCB y C18 es imprescindible así como el uso de QuEChERS con el
pH controlado. El estudio permitió seleccionar el método con el menor perfil de coextractivos lo que asegura
la obtención de recuperaciones de los pesticidas evaluados dentro de los porcentajes exigidos.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 09
Comparación de métodos de estimación de incertidumbre en determinación
multirresiduo de pesticidas por el método de acetato de etilo con detección LCMS/MS
1
Alonso, Beatriz1; Burgueño, Anna1; Rodríguez, Cintia1; Pérez, Andrés1; Gérez, Natalia; Bazzurro, Paula1;
Bojorge, Alejandra1; Diana, Laura1; Rodríguez, Agustina2; Niell, Silvina2; Besil, Natalia2; Souza, Rodrigo2;
Pareja, Lucía2; Colazzo, Marcos2; Cesio, María Verónica1; Heinzen, Horacio1,2
Grupo de Análisis de Compuestos Traza (GACT) – Cátedra de Farmacognosia y Productos Naturales, Facultad de Química - UdelaR
2
Polo Agroalimentario Agroindustrial Paysandú – Centro Universitario Paysandú – UdelaR
La incertidumbre es un parámetro de validación que caracteriza la dispersión de los valores que pueden ser
atribuidos razonablemente a un mensurando. En particular para el análisis de residuos de pesticidas en
alimentos, al momento de verificar el cumplimiento de límites máximos de residuos (MRL), la estimación de
la incertidumbre es fundamental para determinar el cumplimiento de estos límites con el fin de proporcionar
seguridad a los consumidores.
La forma de evaluar la incertidumbre facilita la comparación de resultados entre laboratorios, siendo de
interés para armonizar los métodos de ensayo y los criterios empleados para mejorar la confiabilidad de los
resultados y el comercio [1,2].
Aplican a este propósito varias guías para estimar la incertidumbre de una medida: Eurachem, Nordtest,
Eurolab y SANCO, que entre otras plantean dos grandes estrategias: las denominadas “top-down” y las
“bottom-up”. En la primera estrategia es posible basarse en supuestos que simplifican el proceso y asumir
valores por defecto; por ejemplo la guía SANCO tradicionalmente considera para laboratorios acreditados
ISO 17025:2005 una incertidumbre expandida (U) del 50% del valor del mensurando [1]. Asimismo este
documento pretende que los laboratorios estimen su incertidumbre por un método alternativo haciendo uso
de datos obtenidos de la validación de métodos, la reproducibilidad intralaboratorio y una componente de
incertidumbre asociada al sesgo obtenido en participación en ensayos interlaboratorio (PTs) [1].
En este estudio se buscó identificar las principales fuentes y comparar la incertidumbre obtenida mediante
ambas estrategias para 12 pesticidas: azoxystrobin, carbendazim, clorpirifos, difenoconazole, fenhexamid,
imidacloprid, iprodione, kresoxim-metil, pyraclostrobin, pyrimetanil, tebuconazole y fludioxonil en uva blanca.
El método multirresiduo emplea extracción con acetato de etilo y la detección fue realizada mediante LCMS/MS. Participaron en el experimento 12 analistas que realizaron en conjunto la extracción de 33 muestras
fortificadas empleados como replicados genuinos a 0,1 mg/kg utilizando dos blancos diferentes de uva
blanca. Se emplearon como guías de referencia la EURACHEM/CITAC [3] como ejemplo de estrategia
bottom-up; y la SANCO 12571/2013 [1] utilizando datos de participación interlaboratorio (organizados por el
EURL-FV y la Comisión Europea) del GACT desde el año 2012 a la fecha (en total 4 ensayos
interlaboratorio).
El valor de incertidumbre estimado por ambos métodos resultó considerablemente diferente. Mientras que la
incertidumbre expandida estimada por el método EURACHEM para los pesticidas en estudio (contribuciones
estudiadas: reproducibilidad, factor de dilución, estimación de concentración y masa de muestra) está
comprendido en el entorno 10-15% para los analitos estudiados, el método SANCO arroja U>50% lo cual
puede deberse a que el desempeño del laboratorio no ha sido constante en el tiempo.
Referencias
[1] Document N° SANCO/12571/2013.Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide
Residues Analysis in Food and Feed 2011.
[2] Medina-Pastor, P., Valverde, A., Pihlström, T., Masselter, S., Gamon, M., Mezcua, M., RodríguezTorreblanca, C., & Fernández-Alba, A. R. (2011). Journal of Agricultural and Food Chemistry, 59(14), 76097619.
[3] EURACHEM/CITAC, Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. 2000.
Agradecimientos
PEDECIBA QUÍMICA, EURL-FV (European Reference Laboratory for Fruits and Vegetables)
50
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 10
Determinação de Mn, Ni e Zn em amostras de leite longa vida comercializados na
cidade de Jequié-Ba empregando F AAS
1
1
1
1
Santos, Mirela de Jesus ; Costa, Silvana de Matos ; Nunes, Leane Santos ; Silva, Douglas Gonçalves da
1
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Laboratório de Química Analítica, Campus de Jequié-Ba
[email protected]
Palavras chave: Determinação de metais, Leite longa vida, F AAS.
A ingestão de leite é essencial para saúde devido as suas proteínas, vitaminas e minerais que auxilia na
construção dos tecidos e na preservação dos músculos, cabelos e unhas. Além disso, o leite combate a
anemia, fortalece os ossos e o sistema imunológico, por isso a sua ingestão nas diferentes fases da vida
contribui para o desenvolvimento físico e intelectual [1]. A Associação Brasileira do Leite Longa Vida (ABLV)
em 2013 estimou um aumento nas vendas de leite no país que atingirão cerca de 6,13 bilhões de litros por
ano [2]. Como o leite é um produto perecível merece atenção especial na sua produção, beneficiamento,
comercialização e consumo, pois estará sempre sujeito a uma série de alterações [3]. Desta forma, faz-se
necessário conhecer a concentração de elementos químicos presentes no leite consumido diariamente pela
população brasileira. Assim, este trabalho propõe a determinação de Mn, Ni e Zn em quatro amostras de
diferentes marcas de leite longa vida comercializados na cidade de Jequié-Ba empregando a espectrometria
de absorção atômica com chama (F AAS). O procedimento é baseado na mistura de 1,0 mL de leite, 1,0 mL
de H2O2 30% (v/v) e 2,0 mL de HNO3 concentrado. Essa mistura foi digerida em um bloco digestor por três
horas a temperatura de 150 °C. O digerido foi transferido para balões volumétricos de 10 mL e o volume
ajustado com água deionizada. A curva analítica com padrões dos elementos determináveis indicou
coeficiente de correlação maior que 0,9960. Os limites de detecção para Mn, Ni e Zn foram de 0,036, 0,041
e 0,006 mg L-1, respectivamente. Os resultados obtidos mostraram que as concentrações (mg L-1) de Mn
variaram de (0,109 ± 0,03 a 0,199 ± 0,05), Ni (1,18 ± 0,2 a 2,16 ± 0,4) e Zn (4,55 ± 0,2 a 5,96 ± 0,3). Os
desvios padrão relativos (RSDs) variaram de 0,32 a 0,82%, de 0,36 a 1,98% e de 0,52 a 0,91% para Mn, Ni
e Zn, respectivamente.
Referências
[1] Solis, C.; Isaac-Olive, K.; Mireles, A.; Vidal-Hernandez, M. Determination of trace metals in cow's milk
from waste water irrigated areas in Central Mexico by chemical treatment coupled to PIXE. Elsevier Science,
Microchemical Journal 91 (2009) 9-12.
[2] ABLV - Associação Brasileira do Leite Longa Vida. Disponível em http://www.ablv.org.br. Acesso em 28
de junho de 2014.
[3] Domareski, J. L.; Bandiera, N. S.; Sato, R. T.; Aragon-Alegro, L. C.; Santana, E. H. W. Avaliação físicoquímica e microbiológica do leite UHT comercializado em três países do Mercosul (Brasil, Argentina e
Paraguai). Archivos Latinoamericanos de Nutricion (2010) Vol. 60, Nº 3, 261-269.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 11
Determinação de elementos traço e majoritários em leite por ICP-Q-MS
1
2
2
M. Siqueira, Bruno ; McSheehy, Ducos ; D. Wills, Julian ; Rottman, Lothar
2
1
2
Nova Analítica Imp. Exp., São Paulo, Brasil
Thermo Fischer Scientific, Bremem, Alemanha
Introdução: O leite e seus derivados formam uma grande parte de uma dieta alimentar saudável. O FDA
(Food Drug and Administration) recomenda o consumo de 2 e 3 copos de leite para crianças e adultos
respectivamente. Uma análise multielementar pode determinar se o leite está compatível com o valor
nutricional esperado, ou incompatível seja por uma deficiência do solo, no caso de leite bovino, ou seja por
conta de uma dieta pobre, no caso de leite materno. Alternativamente a avaliação de elementos traços pode
nos alertar a respeito de uma possível contaminação no leite. Como única fonte de nutrição para bebês
recém-nascidos, o leite também precisa ser avaliado com relação à biodisponibilidade de seus elementos
majoritários.
Método: Para os ensaios executados foram utilizados 3 tipos de amostras: leite bovino, leite materno, e
fórmula de leite para recém nascidos. As amostras foram preparadas de diferentes formas: por digestão
total em micro-ondas; extração de iodo total com amônia; e para análise de especiação foi executado uma
diluição de 25 vezes do leite em pó.
O espectrômetro de massa iCAP Qc, Thermo Fiscer Scientific foi utilizado para aquisição de dados. O iCAP
Q foi operado no modo single KED para todas a medidas.
O cromatográfo iônico ICS-5000 foi acoplado ao iCAP Q para análise de especiação de iodo. A eluição foi
isocrática com 10 a 100mM NaOH (14min). O software Q-Tegra foi utilizado para todas as análises
executadas.
Resultados: Foram determinadas a concentração das 3 amostras e do material de referência BCR-063. Os
resultados foram satisfatórios, de forma que houve boa recuperação para os valores de matérias de
referência, e também boa recuperação para amostras de leites industrializados (resultados esperado obtido
a partir do rótulo do fabricante).
52
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Com relação aos resultados de especiação, as espécies de iodeto foram encontradas em um tempo de
retenção de 700 segundos. Enquanto a espécie de iodato foi encontrada em 220 segundos de tempo de
retenção.
Conclusão: As concentrações encontradas para o BCR-065 ficaram entre 90% e110% dos valores
certificados, com excessão de Zn e Pb. Os valores de concentração para o leite industrializado também foi
compatível, em geral, com os valores reportados no rótulo do fabricante. Tanto o leite bovino quanto o leite
materno tiveram seus valores de concentração semelhantes aos reportados na literatura.
Na análise de especiação apenas o CRM e o leite industrializado tiveram boa recuperação. As outras duas
amostras apresentaram duas outras espécies de iodo desconhecidas.
Referências
[1] Santos, M.D.; Pedroso, M. M.; Costa, L. M.; Nogueira, A. R. A; Nóbrega, J.A., Talanta. 2005, 65, 505.
[2] Nóbrega, J. A.; Gélinas, Y.; Krushevska, A.; Barnes, R. M.; J. Anal. At. Spectrom. 1997, 12, 1243.
53
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 12
Determinação de metais em carnes por AAS
1
2
Garcia, Mariana Ortega ; Gadzhieva, Anastasia
1
2
Nova Analítica LTDA
Thermo Fisher Scientific
Introdução
Os minerais encontrados na dieta humana podem ser classificados de acordo com a quantidade que o
corpo requer de cada um deles: essencias, como Mg, Na e K e minerais traço, como Fe, Cu e Zn. As doses
diárias de ingestão recomendadas são avaliadas continuamente pelos órgãos de regulamentação de acordo
com as pesquisas na área nutricional(1).
Objetivo
O objetivo do presente trabalho é avaliar a aplicabilidade da espectrometría de absorção atómica na
quantificação de metais essenciais e traço em productos cárneos.
Materiais e Metodologia
Para o desenvolvimento deste trabalho foram escolhidos o magnésio e o ferro como elementos alvo da
avaliação.
Foram utilizadas três diferentes amostras de carne (frango, bovina e suína) e as mesmas foram digeridas
com ácido nítrico utilizando um sistema de digestão assistido por radiação microondas.
Foi utilizado um programa de aquecimento de 25 min e temperatura máxima foi 180 oC.
O espectrômetro de absorção atômica modelo iCE3300 da Thermo Fisher Scientific foi utilizado para a
determinação quantitativa dos elementos-alvo.
Resultados
Foram construidas curvas de calibração para o magnésio (em 248,3 nm) e ferro (em 285,2 nm), ambas com
2
R superior a 0,999. Foram feitos spikes nas amostras, afim de avaliar a precisão da metodologia e em
ambos os casos, a recuperação obtida foi de 100%±10.
Os resultados obtidos para a análise de ferro e magnésio podem ser observados na tabela abaixo. Em
todos os casos os valores obtidos ficaram abaixo da dose diária recomendada.
Carne
Concentração de Fe (mg/kg)
Concentração de Mg (mg/kg)
Bovina
1,865
17,353
Frango
0,436
19,579
Suína
1,387
16,395
Conclusão
Tanto a técnica de absorção atómica por chama quanto a metodologia desenvolvida mostraram-se
eficientes na quantificação de metais em produtos cárneos. O sistema iCE 3300 da Thermo Fisher Scientific
permitiu a medição em amostra de matriz complexa sem afetar a qualidade dos resultados obtidos.O
background foi eficientemente corrigido pelo sistema de correção de fundo com lâmpada de D2.
Bibliografia
(1) Nutritional Metals in Foods by AAS, Atomic Absorption Spectroscopy” by Dr. Muhammad Akhyar Farrukh
(Ed.), Mary Millikan (2012).
(2) Understanding Nutrition” by Whitney, E.N, and S.R Rofles, eds. 2002, edited by Thomas Learning, Inc.
54
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 13
Optimización de las condiciones de atomización para la determinación de níquel en
aceite de oliva por ETAAS
1
1
2
2
Larrea, Nadia ; Mollo, Alicia ; Knochen, Moisés
2
Estudiante de Facultad de Química. Universidad de la República. Montevideo, Uruguay.
Cátedra de Química Analítica. Facultad de Química. Universidad de la República. Montevideo, Uruguay.
La presencia de metales pesados en aceites comestibles tiene una gran importancia por la influencia que
ellos pueden tener sobre ciertas cualidades de los mismos, tales como estabilidad frente a la oxidación [1].
En este estudio se determinó el contenido de Ni directamente en aceite de oliva extra virgen mediante
espectrometría de absorción atómica electrotérmica (ETAAS) según método IUPAC [2].
El trabajo se desarrolló mediante espectrometría de absorción atómica con atomización electrotérmica
mediante horno de grafito y corrección de fondo mediante efecto Zeeman. Esta técnica requiere una
optimización del programa de temperaturas utilizado. El método indica volumen de muestra (inyección
manual), temperaturas y tiempos de pirolisis y atomización sin especificar las condiciones de la etapa de
secado. Dado que se inyecta el aceite directamente en el tubo de grafito (previamente termostatizado a
60ºC) sin digestión de muestra previa, se encontró que la etapa de secado es determinante para obtener
una buena atomización con una relación entre la señal del analito y señal de fondo adecuada.
Para la curva de calibración se empleó un estándar de níquel en aceite mineral. Las diluciones se realizaron
con aceite de girasol. El rango de trabajo fue de 0 mgkg-1 a 0,50 mgkg-1.
Se encontró que el tipo de aceite condiciona el programa de temperaturas a emplear ya que tanto blancos
(aceite de girasol), estándares (aceite mineral en aceite de girasol) y muestra (aceite de oliva extra virgen)
requieren distintos programas de secado; de lo contrario se desarrollan fondos de magnitud tal que no
pueden ser corregidas por el corrector Zeeman.
Como el programa optimizado para la curva de calibración es distinto al de la muestra, se evaluó la
determinación de níquel por calibración simple y adiciones estándar.
La curva de adiciones estándar se diseñó de modo que predominara la cantidad de aceite de oliva, por lo
que se utilizó el mismo programa que para la muestra.
Se encontró que el resultado de la concentración de níquel en el aceite de oliva que se obtiene por
calibración simple es el mismo que el obtenido por el método de adiciones estándar a pesar de que en el
primero, las condiciones en las que se atomiza la muestra son distintas a aquellas en las que se atomizan
los estándares; al resultar indistinto trabajar de ambas formas se eligió la calibración simple por su sencillez,
menor incertidumbre y menor consumo de muestra.
[1]Morales, M.T.; Przybylski, R.. Olive oil oxidation. En: Handbook of olive oil. Analysis and properties.
Second edition. Aparicio, R., Harwood, J.. New York. Springer, 2013, 479-522.
[2]Dieffenbacher, A.; Pocklington, W.D..Determination of copper, iron and nickel by direct graphite furnace
atomic absorptionspectrometry. En: Standard Methods forthe Analysis ofOils, Fats and Derivatives1St
Supplement to the7th Revised and Enlarged Edition. Oxford. BlackwellScientificPublications, 1992, 2.631/12.631/4.
55
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ALI 14
Determinação de elementos tóxicos em erva-mate por ICP OES após decomposição
por via úmida em sistema fechado
Pardinho, R. B.; Krzyzaniak, S. R.; Mello, P. A.; Duarte, F. A.; Muller, E. I.; Flores, E. M. M.
1
Universidade Federal de Santa Maria, Brasil
Erva-mate (Ilex paraguariensis) é uma planta nativa das regiões subtropicais da América do Sul,
amplamente utilizada na forma de infusão a quente, conhecida popularmente no Brasil como chimarrão [1].
Além de uma variedade de compostos bioativos presentes na erva mate, macronutrientes como Ca, Cu, K,
Fe, Mg, entre outros, também estão presentes e podem contribuir de forma benéfica à saúde humana, por
exemplo, atuando como antioxidante, diurético e estimulante do sistema nervoso central [1,2]. Entretanto, a
presença de contaminantes inorgânicos tais como Cd e Pb, considerados potencialmente tóxicos mesmo
em baixas concentrações, pode ser prejudicial à saúde. Nesse contexto, ressalta-se a necessidade do
controle de qualidade da erva-mate destinada ao consumo humano e é preconizado, através do
-1
Regulamento Técnico Mercosul (MERCOSUL/GMC/Res. 12/11), um limite máximo de 0,40 µg g para Cd e
-1
0,60 µg g para Pb. No presente trabalho Cd e Pb foram determinados em amostras de erva-mate
comercializadas no Brasil e no Uruguai. A decomposição das amostras foi feita por via úmida assistida por
®
radiação micro-ondas em sistema fechado, empregando frascos de PTFE (Multiwave 3000, Anton Paar ,
Aústria). O programa de aquecimento consistiu de uma rampa de aquecimento de 10 min até atingir a
temperatura de 210 °C, com 30 minutos de permanência a 210 °C e 30 min de arrefecimento. Foi avaliada a
necessidade da utilização de HF (0-0,5 mL) juntamente com HNO3 (14,4 mol L-1) para a decomposição de
100 a 500 mg de amostra, bem como a necessidade de uso de sistema fechado. A determinação de Cd e
Pb, foi feita por espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES, Perkin
Elmer®, modelo Optima 4300 DV, EUA), com nebulizador pneumático do tipo GemCone e câmara de
nebulização de duplo passo. As vazões de argônio foram de 0,70 L min-1 para o gás de nebulização, 0,2 L
-1
-1
min para o gás auxiliar e 15 L min para o gás principal, com o emprego da potência de RF de 1400 W. As
linhas de emissão selecionadas foram: 214,440 e 228,802 nm para Cd e 217,000 e 220,353 nm para Pb.
Interferências causadas pela presença de Al na determinação por ICP OES foram investigadas. Para as
amostras estudadas, foi observada a necessidade da adição de HF para a decomposição completa. Os
resultados obtidos para treze amostras de erva-mate do Brasil e do Uruguai para Pb foram inferiores ao
-1
-1
limite de quantificação do método (0,60 µg g ). Para Cd os valores obtidos variaram de 0,25 a 0,40 µg g .
Agradecimentos: LAQIA, UFSM e CNPq.
Referências:
[1] Marcelo, M.C.A et al. Classification of yerba mate (Ilex paraguariensis) according to the country of origin
based on element concentrations, Microchemical J., 2014, 117; 164-171.
[2] Heck, C.I., Meija, E. G. Yerba Mate tea (Ilex paraguariensis): a comprehensive review on chemistry,
health implications, and technological considerations, J. Food Sci., 2007, 9; R138- R151.
56
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 01
Destoxificação do hidrolisado de casca de arroz para fermentação
Pedroso, Giovanni Bressiani; Martins, Ayrton Figueiredo
Departamento de Química, Universidade Federal de Santa Maria (UFSM),
Santa Maria/RS – Brasil; [email protected]
Introdução e objetivo
No processo de hidrólise da casca de arroz (CA) para a subsequente fermentação com vistas à produção de
ácidos orgânicos estratégicos (ex. ácido itacônico, levulínico e outros), importantes block buildings da
síntese orgânica industrial, há a formação concomitante de produtos indesejáveis e tóxicos (ex. ácidos
acético e fórmico), fortes inibidores do processo fermentativo. Neste trabalho investigou-se o emprego de
reagentes químicos, em especial, do óxido de cálcio, como reagente de remoção de toxicidade do
hidrolisado ácido da CA.
Metodologia
A CA foi hidrolisada em reator de bancada provido de vaso de Teflon® TFM de 250 mL com catalisador HCl
(0,8%, v/v) e pressão de 50-60 bar; o hidrolisado resultante foi tratado com carvão ativado (2,5%, m/v), sob
agitação e aquecimento (50 ºC), por 60 min (RAMBO et al., 2013), e, alternativamente, pela adição, sob
agitação, de quantidade de CaO suficiente para atingir pH 6,0, mantendo-se o hidrolisado igualmente a 50
ºC por 60 min. Ao final, removeu-se o precipitado formado passando-se o hidrolisado através de filtro
membrana de 0,45 µm, conservando-se a solução assim tratada sob refrigeração (4-8 ºC).
As determinações analíticas de acompanhamento foram feitas com auxílio de equipamento de HPLC-RID
conforme as condições constantes na Tabela 1.
Tabela 1: Condições cromatográficas utilizadas para o sistema HPLC-RID.
Coluna
Aminex HPX-87H (300 x 7,8 mm – 9 µm partícula)
Temperatura
40 °C
Fase móvel
Água ultrapura contendo 5 mmol L de H2SO4
Vazão
0,4 mL min
Modo de Eluição
Isocrático
Volume de injeção
20 µL
Tempo de retenção
22,2 min (Ácido acético) e 23,9 min (Ácido Fórmico)
-1
-1
Resultados
A metodologia analítica desenvolvida demonstrou sensibilidade e seletividade adequadas, obtendo-se LD e
-1
LQ para ácido acético de 10 e 35 mg L (r² = 0,970 – y = 155808x - 28382,4), e, para ácido fórmico, de 30 e
-1
100 mg L (r² = 0,996 – y = 71111,9x – 4199,0), respectivamente.
As faixas lineares da curva de calibração, em ambos os casos, alcançaram 10 g L-1, livre de interferência
matricial – confirmado pela comparação das curvas de calibração levantadas com padrões externos, adição
de padrões e adição na matriz isenta. Um cromatograma característico dos hidrolisados pode ser visto na
Figura 1. A adição de carvão ativado e CaO ao hidrolisado reduziu a concentração de inibidores,
suficientemente.
57
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Figura 1: Cromatograma HPLC-RID do hidrolisado de CA antes da destoxificação.
-1
-1
Usando-se apenas tratamento com carvão ativado cerca de 500 mg L de ácido acético e 800 mg L de
ácido fórmico remanescem, com forte ação inibidora da ação fúngica. Com o tratamento de adição de CaO,
a concentração de ambos os inibidores ficou abaixo do LD do método.
Conclusão
O tratamento de destoxificação do hidrolisado com CaO foi eficiente na remoção dos principais
interferentes, ao contrário do carvão ativado. Esta medida, eficiente e de baixo custo, dispensa o emprego
de outra operação unitária prévia à fermentação.
Referências
RAMBO, M.K.D.et al. Xylitol from rice husks by acid hydrolysis and Candida yeast fermentation. Quimica
Nova; 2013; v.36; n.6, p.634-639.
58
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 02
Degradação de HPAs em amostras de água e de efluente hospitalar
Da Silva S., Daiane; Martins F., Ayrton
Universidade Federal de Santa Maria – RS - Brasil
Introdução
A ocorrência de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) no ambiente representa risco à saúde
humana e aos ecossistemas. Além de tóxicos, costumam ser recalcitrantes à processos convencionais de
tratamento e de remediação [1]. Neste contexto, os Processos Avançados de Oxidação (PAOs) se
apresentam como uma das melhores alternativas para o tratamento de matrizes complexas contaminadas
com HPAs, como p.ex., efluente hospitalar.
Objetivos
Investigar a degradação fotocatalítica dos HPAs antraceno, naftaleno, fluoreno, fenantreno e 1metilnaftaleno em amostras de água e efluente hospitalar, empregando-se catalisador TiO2 suportado em
material polimérico (polidimetilsiloxano, PDMS) e reator tanque agitado home made (Figura 1).
Metodologia
A otimização das variáveis, pH da amostra e temperatura, foi feita por meio de planejamento fatorial DCCR.
Como fonte de radiação UV, lâmpada de vapor de mercúrio de média pressão e tempo de irradiação de 60
min.
Para avaliar a degradação de HPAs empregou-se técnica de HPLC-FLD. A metodologia foi validada (n=6),
-1
-1
com coeficientes de correlação de 0,999, LDs de 0,3 a 6 µg L , LQs de 1 a 20 µg L .
Figura 1 - (1) Reator tanque agitado home made utilizado para fotocatálise heterogênea. (2) Barras
poliméricas, com TiO2 suportado. (3) Esquema do sistema fotocatalítico: (a) reator – vista interna; (b) barras
poliméricas com TiO2 suportado; (c) lâmpada UV com tubo protetor de quartzo; (d) termômetro digital; (e)
bomba dosadora; (f) reservatório com água gelada; (g) entrada e (h) saída; (i) agitação magnética; (j) orifício
para coleta de amostras; (k) rolha de silicone.
Devido à baixa solubilidade dos HPAs foi necessária a adição de modificador orgânico (solvente): para
amostras aquosas adicionou-se 5% de acetonitrila e, para amostras de efluente hospitalar, 10%.
Planejamento fatorial: as variáveis temperatura e pH apresentaram efeito significativo para a degradação
dos HPAs antraceno e fluoreno. Para 1-metilnaftaleno, apenas a temperatura foi significativa. Para
fenantreno nenhuma das variáveis apresentou efeito.
As melhores condições para a degradação de HPAs em solução aquosa foram: pH 9 e 35 °C.
59
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Para amostras de efluente hospitalar, pH e temperatura apresentaram efeitos estatisticamente significativos
para as taxas de degradação de antraceno e naftaleno. Para 1-metilnaftaleno e fenantreno, a temperatura
foi significativa. Para fluoreno, nenhuma das variáveis apresentou efeito. As melhores condições para a
degradação de HPAs em amostras de efluente hospitalar foram diferentes das de amostras aquosas: pH 7 e
30 °C.
Conclusões
Com o mesmo sistema fotocatalítico, o catalisador TiO2 imobilizado em PDMS induz maior formação de
radicais (hidroxil) do que em suspensão, promovendo completa degradação dos HPAs em 60 min de
tratamento; também elimina a complicada e cara etapa de microfiltração, indispensável quando se usa TiO2
em suspensão. Além do baixo custo dos materiais de construção, o processo fotocatalítico heterogêneo
desenvolvido permite o reuso das barras poliméricas em vários ciclos de degradação (~20 ciclos), sem
perda apreciável de eficiência.
Referências
1) ZHANG, W. et al. The behaviors and fate of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in a coking
wastewater treatment plant. Chemosphere, 88, 174–182, 2012.
60
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 03
Estudio preliminar de metales en muestras de lodos utilizando digestión por MW y
posterior análisis por FAAS, GFAAS e ICP-MS
1
1
1
2
2
Gerpe, Alejandra ; Muslera, Alejandro ; Lavanca, Rosario ; Caggiani, Andrés ; Cagiao, Alejandro ; Bonari,
Gianella3; Caristo, Rita3
1
Area Trazas de Metales. 2 División Aguas Residuales, 3Gerencia de Gestión de Laboratorios-OSE. [email protected]
El objetivo primario del presente estudio es la puesta a punto de una metodología para la determinación de
metales en la matriz Lodos de Plantas de Tratamiento de Aguas Residuales (PTAR)
Cumplido este objetivo, la metodología se aplicará a la caracterización de Lodos de PTAR para evaluar la
posible utilización de los mismos como mejoradores de suelos.
La determinación de los metales se realiza en una única muestra de lodo de la planta de tratamiento de
aguas residuales de Durazno utilizando diferentes metodologías analíticas: Na, Ca, Mg, K, Ni, Fe, Mn, Cu y
Zn por FAAS; As, Pb, Cr y Cd por GFAAS y Ni, Mn, Cu, Zn, Pb, Cr, Cd, Be, Al, Ti, Se y Ba por ICP-MS. Las
muestras analizadas blancos, lodos, lodos fortificados, controles y material de referencia certificado (MRC)
se digieren por duplicado utilizando la metodología de microondas (MW) según el método EPA 3051A [1].
En todas las muestras la pérdida de masa en el procedimiento de digestión por MW resulta ser <1%,
obteniéndose digestos límpidos, mostrando ser un método adecuado de digestión para la matriz ensayada.
La composición porcentual del Lodo estudiado se muestra en el Gráfico 1 siendo los metales mayoritarios
Ca > Al > Fe > K > Mg > Na > Mn > Zn. La muestra de Lodo es fortificada previo a su digestión con una
solución conteniendo As, Cd, Cr, Cu, Pb, Ni y Zn metales regulados según GESTA- Residuos [2]. En la
Tabla 1 se detalla el método seleccionado, la recuperación del fortificado y la recuperación obtenida con el
MRC.
Gráfico 1. Composición porcentual de los metales ensayados en el Lodo.
A partir de los resultados preliminares, se seleccionan las condiciones más adecuadas para la
determinación de metales pesados en muestras de Lodos, como ser las condiciones de digestión y la
elección del método analítico.
61
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Tabla 1. Recuperación de los metales pesados propuestos en Gesta- Residuos
Analito
Método
%
Recuperación
Lodo
%
Recuperación
MRC
Arsénico
GFAAS
96
101
Cadmio
ICP-MS
109
111
Cobre
FAAS
85
107
Cromo total
GFAAS
99
125
Níquel
ICP-MS
103
95
Plomo
GFAAS
96
98
Zinc
FAAS
98
104
REFERENCIAS
[1] U.S. EPA, 1998 rev 1. Method 3051a: Microwave assisted acid dissolution of sediments, sludges, soils,
and iols. U.S. Gov. Print. Office, Washington, DC.
[2] Grupo de estandarización ambiental de residuos (GESTA - Residuos). Propuesta técnica para la
reglamentación. Gestión integral de residuos sólidos industriales, agroindustriales y de servicios, versión
16/6/2003.
62
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 04
Propiedades fluorescentes de disruptores endócrinos derivados del fenol en
presencia de medios organizados y sus potenciales aplicaciones analíticas
Pellegrino, R. B.; Ibañez, G. A.; Escandar, G. M.
Departamento de Química Analítica, Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario e Instituto de
Química Rosario (IQUIR-CONICET), Suipacha 531, Rosario (S2002LRK), Argentina
[email protected]
Los contaminantes emergentes son sustancias que no integran naturalmente los ecosistemas, y que al
encontrarse biodisponibles pueden producir efectos adversos en los seres vivos. Se detectan con frecuencia
en aguas naturales y suelo y, si bien su presencia debe controlarse estrictamente, su regulación legal es
incompleta. Entre ellos se incluyen los disruptores endócrinos (DEs), moléculas de origen natural o artificial
con propiedades hormono-mimétricas, interfiriendo con la síntesis, almacenaje, transporte, y acción de
hormonas naturales [1]. En este trabajo se estudian disruptores derivados del fenol: bisfenol A (BPA), 4octilfenol (OF) y 4-nonilfenol (NF). El BPA se utiliza en la manufactura de polímeros policarbonatos y resinas
epoxy, mientras que OF y NF son precursores en la producción de surfactantes no iónicos, detergentes
hogareños y pesticidas. Para desarrollar estrategias de determinación de estos compuestos enmarcadas
bajo los principios de la Química Analítica Verde [2], se evalúan sus propiedades espectrofluorimétricas en
presencia de medios organizados, y la posibilidad que estas señales permitan desarrollar metodologías
analíticas amigables con el ambiente. Ensayos preliminares demostraron que las señales fluorescentes de
estos analitos en agua aumentan significativamente en presencia de ciclodextrinas (CD) nativas y
modificadas, y ciertos medios micelares. Se determinan las estequiometrías de los complejos formados, sus
constantes de equilibrio en medio acuoso y se proponen posibles estructuras de dichos complejos en base
a estudios de espectroscopia de H-RMN y cálculos semiempíricos. Se examinan diferentes variables
fisicoquímicas que influyen en la calidad de las señales luminiscentes medidas. En base a los resultados
obtenidos, se establece que el derivado metil-βCD produce el mayor incremento en las señales
fluorescentes de los analitos (aproximadamente 58 veces para BPA y 2,2 veces para OF y NF), sugiriendo
que este medio organizado sería el más adecuado para mejorar en forma significativa la sensibilidad del
método analítico. Actualmente, estamos llevando a cabo el estudio experimental de las curvas de
calibración y sus correspondientes cifras de mérito.
[1] RH McKee, JH Butala, RM David, G Gans, NTP center for the evaluation of risks to human reproduction
reports in phthalates: addressing the data gaps, Reprod Toxicol, 2004, 18:1-22
[2] A Galuszka, Z Migaszewski, J Namiésnik, The 12 principles of green analytical chemistry and the
SIGNIFICANCE mnemonic of green analytical practices, Trends in Anal Chem, 2013, 50:78-84
63
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 05
Um sistema de pré-concentração em linha para determinação de cádmio e cobalto
em águas naturais
Alves Barreto, Jeferson; de Jesus Ferreira, Vanessa; Alves Meira, Lucilia; Andrade Santos, Manuela; Silva
Assis Felix, Caio; Azevedo Lemos, Valfredo
1
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Laboratório de Química Analítica, Campus de Jequié, Bahia.
e-mail: [email protected]
Palavras chave: cádmio, cobalto, pré-concentração em linha, alimento, bebidas.
A dosagem de elementos em amostras de alimentos é um tópico bastante pertinente, devido à sua
importância toxicológica ou nutricional. Neste trabalho, é proposto um novo método de pré-concentração em
linha para a determinação de cádmio e cobalto em águas naturais por espectrometria de absorção atômica
com chama. O polímero poliestireno divinilbenzeno, disponível comercialmente como a série de resinas
Amberlite XAD-4, funcionalizado com o reagente quelante 2-(2’-benzotiazolilazo)p-cresol (BTAC) foi
utilizado como sorvente. O procedimento é baseado na retenção dos íons Cd(II) e Co(II) em uma minicoluna
recheada com o sorvente funcionalizado (1,2), com posterior dessorção com solução ácida e transporte até
o nebulizador de um espectrômetro de absorção atômica com chama. O sistema de pré-concentração em
linha é constituído de uma válvula manual de duas posições e seis portas, uma bomba peristáltica, uma
minicoluna (0,50 cm x 4,0 cm) com massa de 0,1g da resina e tubos de silicone e teflon. As vazões da
solução de metal e do eluente (ácido clorídrico a 0,1 mol L-1 para Cd e Co) foram 5,0 e 7,0 mL min-1,
respectivamente. O tempo de pré-concentração empregado foi 60 s. O volume da amostra foi de 100 mL
para ambos os metais e o pH foram de 7,5 e 8,0 para Cd e Co. O método apresentou limites de detecção de
0,7 (Cd) e 5,6 (Co) µg L-1 e fatores de enriquecimento de 11 (Cd) e 8 (Co). O método desenvolvido mostrouse simples, eficiente, robusto, com elevada frequência analítica, fácil de ser executado e automatizado, e foi
aplicado à determinação de cádmio e cobalto em amostras de águas naturais.
(1) CAMEL, V. Review: Solid phase extraction of trace elements. Spectrochimica Acta Part B, 2003 v. 58, p.
1177–1233.
(2) LEMOS, V. A.; SANTOS, J. S.; NUNES, L. S. Synthesis and application of a new functionalized resin in
on-line preconcentration of lead. Separation Science and Technology, New York, 2005 v. 40, p. 1401-1414.
64
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 06
Uso de digitalización de imagen para la determinación de arsénico usando kits
comerciales
Nuñez, Guillermo; Vispo, Enrique; Dol, Isabel; Pistón, Mariela
1
UdelaR – Facultad de Química – DEC – Química Analítica
El uso de kits comerciales para la determinación de algunos analitos, como es el caso del arsénico,
involucra una comparación de color que tiene que realizarse en forma visual y con una cartilla impresa en un
envase, donde se encuentran las tirillas en las que se realizan las reacciones de color.
Se considera que esta determinación es subjetiva, y no queda más registro que el indicado por el operador
en el momento de realizar la reacción, esto es más importante cuando se realizan dichas determinaciones
en campo, donde hay que atender varios aspectos además de la determinación analítica.
Objetivo: Evaluar el uso de un dispositivo digital para el análisis y registro de las reacciones químicas
mediante un kit para la determinación de arsénico en agua.
Se obtiene una foto digital de las tirillas que contiene un kit donde se desarrolla la reacción química para
determinación de arsénico en agua con desarrollo de color [1]. Esto posibilita realizar la comparación de los
valores de las señales digitalizadas.
Se estudia la correlación entre las respuestas obtenidas por señales digitales y la observación visual, así
como el límite de detección.
Se realiza un estudio de estabilidad del color mediante las señales digitales.
Metodología: Se emplea una tirilla para el desarrollo de la reacción química, una vez realizada esta
operación se fotografía, se obtiene un archivo el que se analiza y de los colores RGB, se toma el azul como
señal.
Se realiza un punto control y se determina la concentración de la muestra comparando con la señal del
blanco y del punto control.
En la validación se usaron curvas de calibración de arsénico a partir de una solución comercial certificada
-1
de 1000 mg L .
Se verificaron parámetros operativos tales como el lapso transcurrido entre la reacción y la fotografía,
diferentes formas de realización de la fotografía (ambiente exterior e interior), y digitalización mediante
-1
escáner. Los niveles de concentración investigados fueron de 0,001 a 0,100 mg L .
Con el fin de disminuir los efectos de exposición en diferentes condiciones ambientales se usa un papel de
color uniforme con la codificación RGB 255 255 215 (rojo verde azul)
Se compararon los resultados obtenidos visualmente por operadores y por fotografía encontrándose una
buena correlación (n=7 R=0,975, ordenada 0,007 y pendiente 0,92) y la comparación con valores obtenidos
mediante el método propuesto respecto a los valores reales de una curva de calibración arrojaron los
siguiente datos: pendiente de 0,9726 y ordenada 0,002, R² = 0,997 lo que se considera aceptable para el
fin.
Conclusiones: Esto permite tener un registro de las medidas realizadas en campo y analizarlas con
posterioridad para hacer nuevas evaluaciones.
Con la tecnología actual además es posible de esta manera transmitir las fotos digitales a un centro lejano y
realizar estudios a distancia.
Referencias:
[1] Soldat, D.J.; Barak, P.; Lepore, B.J. Microscale colorimetric analysis using a desktop scanner and
automated digital image analysis. J Chem Educ; 2009; 86; 617-620.
65
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 07
Investigação da concentração de elementos traço em carvões de usinas do Rio
Grande do Sul e Santa Catarina e avaliação do seu enriquecimento nas cinzas leves
e/ou pesadas
1
Maia, Sandra Maria1; Kalkreuth, Wolfgang2; Bitelo, Ana Paula1
Instituto de Química, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brasil
2
Instituto de Geociências, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brasil
Dentre os combustíveis fósseis, o carvão mineral é o mais abundante. Durante a sua queima são gerados
CO2, H2O, SOx, NOx, CO, S e grandes quantidades de partículas (cinzas volantes). As cinzas volantes são
partículas responsáveis pelos altos níveis de elementos traços em carvões próximos às usinas
termelétricas. Alguns destes elementos traços (As, Be, Cd, Hg, Mn, Ni, Pb, Se, F, V e U) possuem efeitos
tóxicos em organismos vivos e tendem a se concentrarem nas pequenas partículas das cinzas leves
durante o processo de condensação/volatilização. A volatilização seletiva resulta no seu enriquecimento,
enquanto outros decrescem. A concentração dos elementos traços nas amostras de carvão, para alguns
elementos é baixa. Assim, é necessário o uso de técnicas analíticas sensíveis. A espectrometria de massa
com fonte de plasma indutivamente acoplado (ICP-MS) é uma técnica multielementar que apresenta limite
de detecção baixo para a maioria dos elementos. Este trabalho teve como objetivo a determinação da
concentração de elementos como As, B, Be, Cd, Cr, Cu, Li, Mn, Mo, Ni, Pb, Sb, Se, Tl, U, V e Zn em
carvões e a avaliação do enriquecimento de elementos nas cinzas leves e/ou pesadas. As amostras de
carvão são provenientes de usinas termelétricas do Rio Grande do Sul e Santa Catarina, Brasil. As
amostras submetidas a uma queima prévia (cinzas), foram decompostas em bombas de PTFE com
aquecimento em bloco digestor (200°C, 6h) utilizando uma mistura de 7 mL de HNO3 bidestilado, 3 mL de
HF e 2 mL de H2O2. As amostras de carvão, sem queima prévia, foram colocadas no forno de microondas
(potência de 400 W, 12 min e, após, potência de 900 W, 20 min) e aquecidas a 240°C. Todas as
decomposições foram feitas em triplicata. As amostras foram diluídas para sua posterior análise no ICP-MS.
Os resultados das decomposições ácidas em forno de microondas e bloco digestor ficaram próximos, para a
maioria dos elementos, para todas as usinas, possibilitando a decomposição das amostras pelos dois
métodos. Os carvões da usina de Jorge Lacerda apresentaram as concentrações mais altas para As, Ni, V,
Cr, Co, Tl e Zn, enquanto nas usinas de Charqueadas e Candiota foram encontradas as maiores
concentrações para Li e Be e B e Mn, respectivamente. Os elementos que estão em mais alta concentração
nos carvões das 3 usinas são V, Cr, Mn e Zn. Na avaliação do enriquecimento dos elementos nas cinzas
leves e/ou pesadas foi observado que alguns elementos, como Cr, Mn, Ni e Zn, enriquecem nas cinzas
pesadas, enquanto outros como As, Cd, Tl e Mo, mais voláteis, enriquecem nas leves. Por outro lado, B,
Co, Be, V e U distribuem–se quase que igualmente nas duas. O decréscimo da concentração do As nas
cinzas pesadas ocorre, provavelmente, devido a sua volatilização e posterior condensação sobre a matriz
da cinza leve. A determinação das concentrações dos elementos traço é de grande importância, pois
permite a avaliação do enriquecimento dos elementos nas cinzas pesadas e leves que irá contribuir para a
contaminação ambiental.
66
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 08
Análisis de Metales en Material Particulado Total en el Aire de Montevideo
Edelsztejn, Flavia; Amaral, Gonzalo; Morales, Germán; Franco, Pablo; De Nigris, Andrea
Unidad Calidad Aire, Servicio de Evaluación de la Calidad y Control Ambiental, Intendencia de Montevideo
Objetivos: Determinar la composición relativa de algunos metales (Fe, Cu, Ti, Mn, Sn Ni y Cr) en Material
Particulado Total retenido en filtros de celulosa, obtenidos en una estación de monitoreo de Montevideo
durante los años 2011 y 2012.
Metodología: Se analizaron 53 filtros, 25 correspondientes al año 2011 y los restantes al año 2012. El
material particulado se retiene en un filtro obtenido mediante un equipo Hi Vol Staplex STX-PTS, cada uno
fue expuesto durante 24 horas, posteriormente analizados mediante espectrometría de fluorescencia por
rayos X (Shimadzu EDX-900HS).
Resultados: Se utilizó el método para caracterizar las concentración relativa de metales en el material
particulado. Se determinaron las siguientes cifras de mérito:
Precisión
(%)
Límite de detección
3
(µg/m )
Fe
14
0,07
Cu
5
0,06
Ti
1
0,04
Mn
1
0,05
Ni
0,4
0,05
Cr
0,3
0,2
Sn
1
0,3
En todos los filtros se encontró Fe, Cu Ti y Mn. El porcentaje de estos metales en la masa total del filtro
varia entre 0,44% y 9,5%. Los valores porcentuales promedio son Fe 1,54%; Cu 0,58%; Ti 0,07%; Mn
0,06%; Ni 0,02%; Cr 0,01%; Sn 0,12%. Estos porcentajes varían considerablemente entre diferentes filtros.
Tres componentes principales explican el 91% de la varianza total. Se agrupan Fe, Ti y Mn en uno de los
componentes, en otro Ni y Sn y en el tercero Cu.
La relación Fe/Cu permite caracterizar tres grupos de filtros, aquellos cuya relación es mayor de 20, los que
se encuentran entre 1 y 20 y aquellos en los cuales la concentración de Cu supera al Fe. Esta última
situación se dio en dos oportunidades en el año 2011 y en cinco en el año 2012. Los filtros del primer grupo
Fe/Cu > 20 se observaron en dos oportunidades en el año 2011 y en cinco filtros consecutivos desde
noviembre del 2012 hasta el final del período analizado.
67
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Relación porcentual de Metales en Filtros
12%
Cr
Sn
Cr
Ni
Mn
Ti
Cu
Fe
10%
8%
6%
4%
2%
14
58
14
65
14
70
14
76
14
89
14
95
15
01
15
11
15
26
15
35
15
38
15
42
15
49
15
53
15
56
15
59
15
65
15
68
0%
Nº Filtro
Conclusiones: La determinación de los metales presentes en los filtros de Material Particulado permite
obtener mayor información sobre las características del mismo. El método utilizando, es rápido, no requiere
preparación de la muestra, y no es destructivo. La variación de porcentaje y la cantidad relativa de los
diferentes metales observada en los filtros, se debe a diferentes fuentes de emisión, en las cercanías de la
estación.
Referencias
[1] Standard Operating Procedure for the determination of elemental concentrations in ambient air by
Energy-Dispersive X Rat Fluorescent (XRF) Spectroscopy. Northern Laboratory Branch Monitoring and
Laboratory Division. January 2006 California- Environmental Protection Agency Air Resourses Board.
[2] Ramis Ramos G, García Alvarez-Coque M.C.; Exploración de Datos en Quimiometría. 1AEd. Sintesis s.a
Madrid 2001
[3] Carreras A, Deluigi M T, Riveros J.A. Análisis De Aerosoles Atmosféricos De La Ciudad De San Luis
Mediante Xrf, Xrd Y Sem Anales del IX Seminario Latinoamericano de Análisis por Técnicas de Rayos X
(SARX 2004) Volumen XIII
68
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 09
Determinação de metais em amostras de lodo da estação de tratamento de água
(ETA) do município de Jequié-Bahia por ICP OES
Santos, Mirela de Jesus; Santos, Leandro Oliveira dos; Souza, Adelino Cariolano Santos de; Costa, Silvana
de Matos; Silva, Douglas Gonçalves da; Bezerra, Marcos de Almeida
1
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Laboratório de Química Analítica, Campus de Jequié-Ba
[email protected]
Palavras chave: Metais, Lodo de ETA, ICP OES.
A estação de tratamento de água (ETA) utiliza vários processos químicos e físicos para tornar a água
própria ao consumo humano. Diversos reagentes químicos são adicionados nesses processos conduzindo a
formação de resíduos que são removidos nos decantadores e nas águas de lavagem dos filtros. Esses
resíduos denominados lodos de ETA são considerados pela Associação Brasileira de Normas Técnicas
(ABNT) como resíduo sólido pertencente à classe I [1]. Dessa forma, oferece riscos potenciais ao meio
ambiente e à saúde pública e, por isso deve ser descartado adequadamente. No Brasil o Conselho Nacional
do Meio Ambiente (CONAMA) estabelece alguns parâmetros para o controle do lodo de ETA [2]. Assim,
neste trabalho, determinou-se Cu, Ni, Zn, Cr, Mn, Fe e Al em seis amostras de lodo gerado na ETA
Crisciúma localizada no município de Jequié-Ba. As amostras coletadas foram secas em uma estufa a 89°C
por 18 horas. Em seguida trituradas em grau e pistilo, peneiradas em malha de 60 micras e armazenadas
em frascos de polietileno. A digestão foi feita em tubos de vidro contendo 0,2000 g da amostra, 1,0 mL de
H2O2 30% (v/v) e 2,0 mL de HNO3 concentrado. Os tubos foram acoplados em um bloco digestor à
temperatura de 120 °C por 4 horas. O digerido foi filtrado e transferido para frascos volumétricos, os quais
tiveram o volume ajustado para 10 mL com água deionizada. As determinações foram feitas em triplicata em
um espectrômetro de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES) com visão axial
(Optima 7000 DV, Perkin Elmer, Norwalk, USA). As linhas de emissão selecionadas foram em nm: Al
396,153; Cr 267,716; Cu 213,598; Fe 238,204; Ni 216,555; Mn 257,210 e Zn 213,857. Os limites de
-1
detecção (LOD) em mg L , para os elementos Al, Cr, Cu, Fe, Ni, Mn e Zn foram: 0,62, 0,03, 0,08, 0,30,
0,01, 0,04, 0,06 respectivamente. Avaliou-se a precisão do método e testes de adição e recuperação foram
realizados. O procedimento validado foi aplicado nas amostras de lodo e os resultados obtidos (Tabela 1)
indicaram que as concentrações do Cu, Ni e Zn nas amostras analisadas estão dentro dos padrões
estabelecidos pelo CONAMA, já o Cr, Mn e Fe estão acima do limite permitido. A concentração do Al
também foi determinada. Os valores encontrados são comparáveis às concentrações reveladas em estudos
para diferentes ETAs operadas na Região Metropolitana de São Paulo, no Distrito Federal e em Manaus [3].
-1
Tabela 01. Concentrações dos metais presentes no lodo de ETA de Jequié-Ba (mg L ).
Amostra
Al
Cr
Cu
Fe
Ni
Mn
Zn
01
144,0 ± 0,6
1,60 ± 0,02
0,360 ± 0,01
58,19 ± 0,21
0,065 ± 0,0006
16,06 ± 0,057
2,38 ± 0,09
02
121,9 ± 0,3
1,57 ± 0,01
0,309 ± 0,002
53,74 ± 0,76
0,055 ± 0,002
15,61 ± 0,071
1,74 ± 0,041
03
120,8 ± 0,01
1,28 ± 0,10
0,284 ± 0,018
50,78 ± 0,56
0,047 ± 0,002
15,32 ± 0,15
1,01 ± 0,009
04
80,97 ± 0,67
1,61 ± 0,024
0,342 ± 0,023
48,14 ± 0,08
0,064 ± 0,002
16,46 ± 0,082
1,92 ± 0,07
05
97,97 ± 0,29
1,51 ± 0,016
0,305 ± 0,004
37,73 ± 0,35
0,052 ± 0,002
13,95 ± 0,052
1,68 ± 0,083
06
116,8 ± 0,87
1,25 ± 0,24
0,269 ± 0,024
39,36 ± 0,21
0,033 ± 0,005
10,37 ± 0,28
1,06 ± 0,047
CONAMA
--------
0,5
1,0
15,0
2,0
1,0
5,0
Referências
[1] ABNT - Associação Brasileira de Normas Técnicas: Resíduos Sólidos - NBR 10004. Rio de Janeiro,
2004. Disponível em www.abnt.org.br. Acesso em 22 de abril de 2014.
69
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
[2] CONAMA – Conselho Nacional do Meio Ambiente. Resolução N° 357. Disponível
http://www.cetesb.sp.gov.br/agua/praias/res_conama_357_05.pdf. Acesso em 06 de maio de 2014.
em
[3] Andreoli, C. V. Resíduos sólidos do saneamento: processamento, reciclagem e disposição final. Rio de
Janeiro: RiMa, ABES, 2001.
70
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 10
Empleo de un método analítico validado como herramienta para evaluar la
bioconversión de clorpirifós en un lecho biológico
1
2
3
3
4
Rivero, Anisleidy ; Niell, Silvina ; Gérez, Natalia ; Heinzen, Horacio ; Cerdeiras, María Pía ; Cesio, María
Verónica3
1
Laboratorio Tecnológico del Uruguay, Fray Bentos, Uruguay
Universidad de la República, Centro Universitario Paysandú, Polo Agroalimentario y Agroindustrial, Paysandú, Uruguay
3
Universidad de la República, Facultad de Química, Cátedra de Farmacognosia, 4 Cátedra de Microbiología, Montevideo, Uruguay
[email protected]
2
En nuestro país, el empleo de agroquímicos en la agricultura ha tenido un importante auge con el
incremento de los cultivos extensivos. El uso repetitivo y en grandes cantidades de pesticidas como el
clorpirifós constituye un problema ambiental debido a su toxicidad y su potencial de bio-acumulación,
produciendo impactos negativos en diversos ecosistemas. Los lechos biológicos o “Biobeds” resultan una
solución amigable con el medio ambiente para degradar el agroquímico acumulado ya sea por su uso, así
como por diferentes derrames del concentrado producidos durante la manipulación y aplicación [1]. Estas
camas biológicas se fabrican con productos de bajo costo como paja, turba y tierra siguiendo el diseño tipo
sueco. Para evaluar el funcionamiento del lecho biológico, es necesario conocer con precisión la disipación
del pesticida. Es por esto que se necesita de una técnica analítica que permita evaluar correctamente la
biotransformación de los compuestos de interés por el microorganismo. El empleo de una técnica analítica
validada según la DG-SANCO [2] con sus cifras de mérito determinadas, permitió determinar el porcentaje
de bioconversión en un experimento real a escala de laboratorio.Se desarrolló una metodología analítica
para la determinación de clorpirifós en la biomezcla compuesta por afrechillo, turba y tierra inoculado con el
basidiomicete bio-conversor. La extracción de los compuestos se realizó con acetato de etilo como solvente
de extracción asistida por 3 ciclos de ultrasonido utilizando Cromatografía Gaseosa con Detector de Captura
Electrónica para su determinación. Con este método se determinaron porcentajes de biotransformación para
el clorpirifós en condiciones no estériles y con la biomezcla esterilizada antes de su inoculación con el
hongo bioconversor. A los 13 días de transcurrido el experimento se determinó un 100% de
biotransformación para el agroquímico en estudio. En el experimento con la matriz estéril, empleando el
basidiomicete en estudio como único responsable de la biotransformación, se lograron valores de
aproximadamente el 70% de degradación para clorpirifós a los 56 días de ensayo. El uso de estos sistemas
baratos y amigables con el medio ambiente con un soporte analítico permite postular certeramente su
utilidad para disminuir el impacto ambiental del uso masivo de agroquímicos.
Bibliografía
[1] Castillo M.P,* Torstensson L, and Jonh Stenstrom Biobeds for Environmental Protection from Pesticide
Uses A Review.J. Agric. Food Chem. 2008, 56, 6206-6219.
[2] Directorate-General HCP (2011) Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide
Residues Analysis in Food and Feed. Document No. SANCO/12495/2011.
Agradecimientos:
ANII Fondo María Viñas PR-FMV-2009-1-2942-PEDECIBA.
71
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 11
Estudio del contenido de Cromo VI soluble en ladrillos de construcción
1
1
1
Odino, Ma. del Rosario ; Gabrielli, Adriana ; Piuma, Lourdes ; Geisenblosen, Ma.Cecilia
2
1
2
Dirección General de Secretaría, Ministerio de Industria, Energía y Minería
Dirección Nacional de Minería y Geología, Ministerio de Industria, Energía y Minería
En la fabricación de ladrillos, muchas veces se utilizan materias primas conteniendo compuestos de cromo,
por ejemplo residuos de provenientes de curtiembres, viruta de madera tratada, etc.
Adicionalmente, los procesos de calcinación involucrados en la fabricación de ladrillos de construcción
favorecen la oxidación del Cromo presente a Cromo VI. Este es un elemento tóxico que cuando se solubiliza
en agua puede penetrar la piel y reducirse a Cromo III, el cual se combina con proteínas epidérmicas
causando irritación. En algunos países desarrollados existe legislación vigente que regula la cantidad de
cromo VI presente en diferentes materiales de construcción. Por ejemplo, para la Unión Europea la Directiva
-1
2003/53/EC limita el contenido de Cromo VI soluble en agua a 2 mg kg en cemento [1].
Una de las dificultades que conlleva el análisis de Cromo VI soluble en muestras sólidas es la
reproducibilidad de la extracción. Si bien existen métodos para la determinación de Cromo VI en diferentes
matrices (alimentos, aguas, etc), no se han encontrado métodos estandarizados para la extracción de
Cromo VI en ladrillo.
El presente trabajo tiene como objetivo optimizar un procedimiento de análisis para determinar Cromo VI
soluble en agua presente en ladrillos con la finalidad se realizar un estudio preliminar en ladrillos
provenientes de diferentes ladrilleras del país.
Para alcanzar el objetivo propuesto se seleccionó el método de referencia que establece la normativa
europea, EN-196-10, para determinación de Cromo VI en cemento, ya que éste también se emplea como
material de construcción [2].
El método de referencia consiste en: agitar la muestra molida en agua durante 15 minutos para lograr la
extracción del Cromo VI, filtrar y determinar el Cromo VI en el sobrenadante obtenido por colorimetría
utilizando difenilcarbazida [3]. Para el caso particular del ladrillo, se evaluaron y se establecieron algunas
variables que influyen en el proceso de extracción (toma de muestra, número de extracciones necesarias y
volumen de agua).
De los ladrillos seleccionados, fabricados artesanal e industrialmente, procedentes de diferentes zonas del
país, se identificaron algunas muestras producidas en forma artesanal con elevado contenido de Cromo VI
soluble en agua. En este caso los valores obtenidos se encontraron entre 300 y 3000 mg kg-1.
Se puede concluir que la metodología utilizada es adecuada para la determinación de Cromo VI soluble en
muestras de ladrillos. Sin embargo, para realizar una validación adecuada, es necesario utilizar un material
de referencia certificado de Cromo VI en una matriz similar. Por otro lado, se identificaron ladrillos
conteniendo altos niveles Cromo VI respecto a valores permitidos por normativas internacionales (2 mg kg-1)
en materiales de construcción. Sería importante profundizar el estudio para evaluar los niveles de Cromo VI
en ladrillos que se comercializan en el país, y así poder establecer una normativa nacional que regule los
niveles permitidos.
[1] Hills, L.; Johansen, V. Hexavalent Chromium in Cement Manufacturing: Literature Review. Serial No.
2983. Skokie, Illinois, USA, Portland Cement Association, 2007, 16 páginas.
[2] EN-196-10 Métodos de ensayo de cementos. Parte 10: Determinación del contenido de cromo (VI)
soluble en agua en cementos. AENOR. 2008.
[3] Eaton, A.; et al. 3500-Cr B Colorimetric Method. En: Standard Methods for the Examination of water and
wastewater. American Public Health Association. Ed. 21st. 2005.
72
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 12
Validação de Metodologia para a Determinação de Bisfenol-A em Percolado de
Aterro Sanitário Usando Microextração líquido-líquido assistida por vortex
1
1
2
2
Arsand, Daniel Ricardo ; Fehrenbach, Gustavo Walter ; Barboza, Sergiane Caldas ; Primel, Ednei Gilberto ;
Sanches Filho, Pedro José1
2
1
Instituto Federal Sul-rio-grandense - IFSul, Grupo de Pesquisa em Contaminantes Ambientais - GPCA, Pelotas, RS, Brasil 1
Universidade Federal do Rio Grande – FURG, Laboratório de Análises de Compostos Orgânicos e Matais - LACOM, Rio Grande, RS,
Brasil 2
Este trabalho teve como objetivo desenvolver metodologia para a determinação de Bisfenol-A (BFA) em
percolado de aterro sanitário. As determinação foram feitas por HPLC-DAD, usando microextração líquidlíquido assistida por vortex (VALLME) para extração, clean up e pré-concentração do analito em percolado
filtrado (0,45 µm) fortificado. As extrações foram feitas com 10 mL de amostra e 150 µL do solvente extrator
1-octanol em vortex, com separação da fase sobrenadante por centrifugação (2x). As determinações foram
feitas em 227,3 nm, usando fase móvel Acetonitrila:Água [40:60], coluna analítica Waters C18 5 µm ODS2
4,6x150 mm, vazão de 1 mL min-1, volume de injeção de 20 µL, 1500 psi, com tempo de retenção de 5,8-6,0
min. O coeficiente de correlação linear (r) obtido foi de 0,9985; recuperação entre 60 e 104%; e coeficiente
-1
de variação (CV) inferiores a 26%. O limite de quantificação (LQ) do método foi de 2,5 µg L e de detecção
-1
(LD) 0,83 µg L . A metodologia apresentou como pontos fortes o baixo consumo de solvente por extração
(150 µL); baixo custo; fácil e rápida determinação de Bisfenol-A em uma matriz de grande complexidade.
73
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 13
Desarrollo y validación de acuerdo a la Decisión 657/2002/CE de metabolitos de
PCBs en tejido graso animal por GC/MS
Schuller, Arlene; Salgueiro, Alicia; Abente, Lucia; Díaz Gill, Renate; Díaz Gill, Gustavo
1
División Econatura – Diaz Gill Medicina Laboratorial S.A., Asunción-Paraguay.
Los bifenilos policlorados (PCBs) son compuestos químicos aromáticos formados por cloro, carbono e
hidrógeno, de característica liposoluble, de gran estabilidad química, de resistencia extrema a la ruptura
química y biológica a través de procesos naturales.
Esta resistencia inusual, más su tendencia a permanecer y acumularse en organismos vivos, especialmente
en el tejido adiposo, genera la presencia de PCBs en el ambiente y una amplia dispersión con sus
consecuentes efectos.
La importancia de los análisis de laboratorio se ha vuelto esencial para garantizar la seguridad de los
alimentos y la calidad del producto en el mercado. Los procesos de validación permiten evaluar parámetros
de desempeño demostrando que el método analítico es adecuado al propósito y provee evidencia de
resultados confiables.
El presente trabajo tiene como objetivo el desarrollo y validación de una metodología de análisis de los
metabolitos de PCBs (PCB 28, PCB 52, PCB 101, PCB 118, PCB 138, PCB 153 Y PCB 180) en tejido graso
bovino por cromatografía de gases - espectrometría de masas (GC/MS).
El método de análisis desarrollado consistió en una limpieza con hexano, extracción líquido-líquido, seguida
de clean up dispersivo y análisis por GC/MS.
Para la extracción se utilizó acetonitrilo saturado en hexano y en la etapa de clean up dispersivo PSA, C18 y
MgSO4. Se empleó como estándar interno PCB 209.
El extracto se concentró hasta sequedad en baño seco a 50ºC con Nitrógeno leve y luego se reconstituyó
con Tertbutilmetiléter. La detección de los compuestos se realizó con un GC/MS 7890A-5975C Agilent,
modo SIM, con inyector automático.
2
Se realizó curva de calibración en matriz, siendo el coeficiente de determinación (R ) ≥ 0,975. Los límites de
cuantificación fueron inferiores a 0,01 ug/g para todos los PCBs en estudio. Estos límites son adecuados
para el monitoreo de estos compuestos en grasa bovina, donde el límite máximo permitido (LMR) es de 0,20
ug/g para cada uno de ellos. Se evaluó la veracidad del método con un material de referencia certificado
(MRC), que contenía PCB 138 y PCB 180 en grasa porcina, siendo el porcentaje de error inferior a 10%. La
repetibilidad y la reproducibilidad intralaboratorio del método se evaluaron a través del cálculo del % RSD,
siendo inferiores a 5% y 10% respectivamente. La incertidumbre expandida calculada al LMR fue inferior al
20%, para un nivel de confianza de 95% (K=2).
La técnica desarrollada y validada para la determinación de metabolitos de PCBs en grasa bovina por
GC/MS, cumple con los requisitos establecidos en la Decisión 657/2002/CE, y es apta para aplicarla al
monitoreo del control de contaminantes ambientales en alimentos. La validación y el control de calidad son
herramientas esenciales para asegurar la validez de los resultados.
74
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AMB 14
Determinación de residuos de pesticidas organofosforados para monitoreo en
tejido adiposo animal por GC/MS
Salgueiro, Alicia; Schuller, Arlene; Abente, Lucia; Díaz Gill, Renate; Díaz Gill, Gustavo
1
División Econatura – Diaz Gill Medicina Laboratorial S.A., Asunción-Paraguay.
En la actualidad, los pesticidas organofosforados constituyen uno de los grupos de plaguicidas más
ampliamente utilizados en la agricultura, en el hogar y en la práctica veterinaria. El uso continuado de estos
pesticidas en la agricultura incrementa la posibilidad de que los residuos de estos compuestos estén
presentes en los alimentos comprometiendo la seguridad alimentaria, por lo que las autoridades han dictado
una serie de normas legales que limitan o establecen condiciones al uso de los compuestos
organofosforados y fijan Límites Máximos de Residuos (LMRs) en los alimentos.
La mayoría de los pesticidas organofosforados comparten un mecanismo común de inhibición de la
colinesterasa y la exposición a los mismos podría conducir a una toxicidad aditiva seria.
El objetivo de este trabajo fue desarrollar una metodología de análisis para los pesticidas organofosforados
en tejido animal graso por cromatografía de gases con espectrometría de masas (GC/MS), y demostrar su
aptitud mediante el proceso de validación basado en protocolos internacionales, como la Decisión
657/2002/EC.
Los pesticidas organofosforados monitoreados y analizados fueron: Clorpirifos, Diazinon, Ethion, Metilparation y Etil-paration
El método desarrollado utilizó una limpieza de la matriz adiposa con hexano, seguido de una extracción
líquido-líquido con acetonitrilo saturado en hexano y posterior clean up dispersivo con PSA, C18 y MgSO4
marca Agilent. El extracto seco y reconstituido con Terbutilmetiléter se inyectó en un cromatógrafo de gases
con espectrómetro de masas, marca Agilent 7890A-5975C.
Durante el proceso de validación, las curvas de calibración en matriz fueron hechas en 5 niveles de
2
concentración y la linealidad del método se evaluó por el coeficiente de correlación (R ) siendo ≥ 0,980. El
método resultó ser selectivo y específico para los organofosforados mencionados. Los límites de
cuantificación (LOQ) fueron de 200 ng/g para Diazinon, 5 y 7 ng/g para E-parathion y M-parathion,
respectivamente, 30 ng/g para Clorpirifos y 500 ng/g para Ethion; los mismos fueron determinados teniendo
en cuenta los LMR a los que estos pesticidas son monitoreados. La precisión del método se evaluó
mediante la repetibilidad y reproducibilidad intralaboratorio, siendo respectivamente de 3% y 12% para
Diazinon, 11% y 18% para M-parathion, 4% y 17% para Clorpirifos, 7% y 21% para E-parathion, y
finalmente, 4% y 8% para Ethion. La exactitud del método se determinó calculando el porcentaje de error a
partir de un material de referencia certificado en grasa porcina de FAPAS T0587QC, siendo el mismo igual a
12%. Se calculó la incertidumbre expandida del método con un nivel de confianza de 95% (K=2), siendo los
resultados obtenidos satisfactorios, pese a la dificultad de la matriz estudiada.
El método para la determinación de pesticidas organofosforados en tejido adiposo animal por GC/MS fue
desarrollado y validado acorde a los parámetros requeridos por la Decisión 657/2002/CE, resultando una
adecuada precisión y veracidad para el análisis de estos pesticidas a niveles trazas en matrices complejas.
75
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P AUT 01
Desarrollo y optimización de un sistema automatizado controlado por hardware de
fuente abierta para determinación de fosfato en muestras de agua mediante análisis
en flujo por multibombeo (MPFS)
González, Pablo; Knochen, Moisés
Universidad de la República, Facultad de Química. DEC – Cátedra de Química Analítica.
Av. Gral. Flores 2124. 11800 Montevideo, Uruguay.
Se desarrolló y optimizó un sistema para la determinación de fosfato en aguas mediante MPFS. Estos
sistemas operan con bombas solenoide, las cuales impulsan líquidos en régimen de flujo pulsado; su
operación debe programarse mediante un ordenador utilizando una interface adecuada (hardware).
El sistema es controlado por una placa de microcontrolador de la plataforma de hardware libre Arduino
UNO, la que posee un entorno de programación sencillo y de fuente abierta. Esta se encarga de la
operación de 3 bombas solenoide para impulsar los fluidos (portador, reactivo y muestra); comanda el
sistema de detección fotométrico (LED, λ nominal 415 nm, fotodiodo como detector), digitaliza la señal
analógica adquirida, calcula las absorbancias y las envía al PC mediante comunicación serial empleando el
puerto USB.
Para el sistema se optimizaron los siguientes parámetros: cantidad de muestra inyectada y tiempo de
-1
-3
desarrollo del color. Se evaluaron las cifras de mérito del sistema optimizado: linealidad (0-10 mg L PO4 ),
veracidad (% recuperación 91-98% para 4 muestras comparando con el método de referencia [1]), precisión
(sr < 4% a 3 niveles de concentración), estabilidad del sistema y de la línea base, límites de detección y
-1
-3
-1
cuantificación (0,29 y 0,95 mg L PO4 respectivamente), frecuencia de muestreo (~ 36 h ).
La plataforma Arduino resulta sencilla de usar y versátil para el desarrollo y control de sistemas de análisis
en flujo. El sistema propuesto presenta estabilidad, linealidad, veracidad y precisión adecuadas, límites de
detección y cuantificación comparables con los del método de referencia [1], adecuada frecuencia de
muestreo, bajo consumo de reactivos, facilidad de programación y bajo costo por el uso de hardware libre.
[1] L. S. Clesceri, A. E. Greenberg, A. D. Eaton, “Standard Methods for the Examination of Water and
Wastewater.” 20th. edition. American Public Health Association (APHA), Washington DC, 1998, método
4500-P C.
76
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P BIO 01
Desarrollo de un método analítico para la detección y cuantificación de micotoxinas
de hongos del género Fusarium por HPLC y espectrometría de masa tándem
1
1
2
3
1
González, Rafael ; Menchaca, David ; Vero, Silvana ; Pereyra, Silvia ; Rodríguez-Haralambides, Alejandra
1
Instituto Polo Tecnológico de Pando, Facultad de Química
2
Cátedra de Microbiología, Depbio, Facultad de Química
3
Protección Vegetal, INIA La Estanzuela, Colonia
Las micotoxinas son sustancias químicas muy diversas, que presentan un riesgo importante para la salud
humana y animal. La fusariosis, enfermedad del trigo, cebada y otros granos, es causada por los hongos del
género Fusarium, que pueden producir micotoxinas con estructuras de tipo tricotecenos del grupo B. Los
tricotecenos son sesquiterpenos con esqueleto tetracíclico 12,13-epoxitricotec-9-eno.
Los hongos pertenecientes al complejo de especies Fusarium graminearum (principal agente causante de la
fusariosis) presentan tres quimiotipos diferentes, dependiendo de su potencial para producir micotoxinas:
nivalenol (NIV), deoxinivalenol (DON) y derivados acetilados (3ADON y 15 ADON) [1]. En general, sólo se
monitorea de forma rutinaria el deoxinivalenol (DON) en alimentos. Sin embargo, se ha detectado la
presencia del quimiotipo NIV en nuestro país [2]. Por otro lado, se considera cada vez mas importante la
detección de todas las posibles micotoxinas presentes en matrices alimentarias, incluyendo las micotoxinas
que pueden estar enmascaradas por conjugación con glucósidos, sulfatos y otras moléculas pequeñas.
En este trabajo nos proponemos desarrollar un método analítico que permita la rápida detección y
cuantificación de una amplia variedad de micotoxinas en muestras de cebada y trigo, incluyendo
micotoxinas enmascaradas.
Se optimizó la detección y análisis de estándares de micotoxinas (nivalenol, deoxinivalenol y zeralenona)
según los métodos desarrollados por Berthillier et al [3], con modificaciones. Se utilizó un equipo de HPLC
1200 Series, Agilent Technologies (Waldbronn, Alemania) con columna Luna C18 (100 X 3 mm, 3µm),
utilizando buffer acetato de amonio 5mM y acido acético/MeOH como fases móviles (en distinta proporción)
en modo gradiente. Como detector se utilizó un espectrómetro de masa de tipo trampa de iones, Esquire
6000, con ionización electrospray (Bruker Daltonik GmbH) o un equipo MicroQTof de alta resolución (Bruker
Daltonik GmbH).
La búsqueda de micotoxinas en muestras de cebada se realizó con un protocolo analítico abarcando un
amplio grupo de sustancias. Fue posible detectar los analitos NIV, DON, y ADON en muestras fortificadas
con los estandares analíticos, mientras que para detectar los metabolitos de las micotoxinas se requieren
muestras de campo contaminadas.
[1] Ward, T.J., Clear, R.M., Rooney, A.P., O’Donnell, K., Gaba, D., Patrick, S.; Starkey, D.E., Gilbert,J.,
Geiser, D.M., Nowicki, T.W. Fungal Genetics and Biology; 2008, 45(4):473-484.
[2] Umpiérrez-Failache, M., Garmendia, G., Pereyra, S., Rodríguez-Haralambides, A., Ward, T.J., Vero, S.
Regional differences in species composition and toxigenic potential among Fusarium head blight isolates
from Uruguay indicate a risk of nivalenol contamination in new wheat production areas, Intern. J. Food
Microbiol. 2013, 166 (1), 135-140
[3] Berthiller, F., Sulyok, M., Krska, R., Schuhmacher, R. Chromatographic methods for the simultaneous
determination of mycotoxins and their conjugates in cereals. Intern J Food Microbiology; 2007; 119:33-37.
77
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P BIO 02
Desarrollo de un Método de Screening de Drogas de uso en Equinos por
HPLC-MS/MS
Possi-Pezzali, Tania; Bado, Alejandra; Rodríguez-Haralambides, Alejandra
Instituto Polo Tecnológico de Pando, Facultad de Química, UdelaR
Los métodos de control de doping que actualmente se llevan a cabo en nuestro país para deportes equinos
implican una primera etapa de análisis realizada por métodos de screening inmunológicos, donde se busca
determinar la presencia o ausencia de diferentes drogas de manera rápida y a un bajo costo. Estos
ensayos, carecen de la suficiente especificidad para diferenciar sustancias similares entre sí. De manera
que aquellas muestras que resultan positivas con estos métodos deben ser sometidas a un segundo
análisis de tipo confirmatorio, donde se confirma inequívocamente la presencia de la droga. Estos análisis
se realizan con técnicas de cromatografía liquida o gaseosa acopladas a detección por espectrometría de
masa.
Un paso fundamental en los análisis confirmatorios es la preparación de muestra previa a la detección. El
auge de la química verde ha desarrollado un interés creciente en métodos de análisis que resulten menos
agresivos para el entorno utilizando muy pequeñas cantidades de muestra y de disolventes orgánicos o
incluso eliminando la utilización de estos últimos. La implementación de estos nuevos desarrollos en
laboratorios de análisis de rutina es un paso importante en la química analítica verde.
Utilizando estos lineamientos, el objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un método de screening para
20 drogas (Tabla 1) que son buscadas durante el control de doping en deportes equinos. Se llevó a cabo el
ajuste de las condiciones cromatográficas y se optimizó la detección para cada una de ellas. Para la etapa
de preparación de muestra, se trabajó con el método de referencia disponible en el laboratorio, en el cual se
utilizaba un total de 15 mL de dietiléter como solvente de extracción. El lineamiento de química verde
utilizado en la preparación de muestra consistió en la reducción de los volúmenes de muestra y de solvente
orgánico para la extracción líquido-líquido. El trabajo con volúmenes reducidos fue llevado a cabo con 1 mL
de muestra y un volumen de extracción total de 3 mL de éter etílico. Se suprimió el secado en atmósfera de
nitrógeno ya que el bajo punto de ebullición del disolvente, permite el secado casi completo por evaporación
a temperatura ambiente. La reconstitución se realizó utilizando 100 µL de fase móvil de corrida.
Paralelamente se trabajó en esta escala reducida pero con un solvente alternativo que es el 2metiltetrahidrofurano (2-MeTHF). Utilizando estas dos técnicas de extracción se prepararon fortificados con
las drogas de screening a 50 ng/mL y 25 ng/mL y muestras controles negativos. El método resultante es
capaz de detectar 20 drogas a ambas concentraciones ensayadas. Para verificación del método, se
participó de un interlaboratorio llevado a cabo por la AORC (Association of Official Racing Chemists).
78
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Tabla 1. Ejemplo de drogas detectadas y límite de concentraciones permitidas por AORC.
Nombre
Límite
AORC
(ng/mL)
SALBUTAMOL
5
Estructura
HO
H
H
N
CH3
HO
H3 C
CH3
HO
O
OH
CH3
FLUNIXINA
50
H
N
F 3C
N
OH
O
CH3
N
GLICOPIRROLATO
2
CLOROPROMAZINA
20
CH3
O
N
N
S
79
Cl
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 01
Aplicaciones tecnológicas do reactivo de Schiff para detección de metanol y
formaldehido
Martins, Guilherme B.C.; Suarez, Paulo A.Z.
LMC - IQ – UnB, Brasília – DF, Brasil.
Objetivos
El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso del reactivo de Schiff y desarrollar un kit para la detección de
metanol en combustibles líquidos y bebidas; y de formaldehido en productos comerciales. En ambos casos,
la forma de detección es colorimétrica, donde la presencia de formaldehido u metanol es indicada por
tonalidades de color purpura, y en la ausencia se observa el color rosado o incoloro, respectivamente.
Metodología
El reactivo de Schiff fue impregnado en papel filtro por sumersión y adsorción para ser usada como papel
indicador. Posteriormente, diversos productos comerciales y sus patrones contaminados con formaldehido
fueron ensayados goteando sobre el papel. Para detectar el metanol fue desarrollado un kit utilizando una
metodología que utiliza la oxidación selectiva de metanol a formaldehido usando permanganato de potasio,
seguida de la adición de ácido oxálico y posterior detección con el uso del reactivo de Schiff. El kit fue
validado en estaciones de servicio para análisis de combustibles.
Resultados
El papel indicador adsorbe y estabiliza el reactivo de Schiff, y cuando es almacenado a bajas temperaturas
permanece activo hasta por 4 meses. Fueron analizados diversos productos en los cuales, en Brasil, es
prohibido el uso de formaldehido como aditivo, tales como champú, suavizantes, detergente y leche. Estos
productos fueron analizados puros y contaminados, siendo posible verificar la contaminación con
formaldehido a partir del 0,1 %, sin que se observara interferencia de otros compuestos. En la Figura 1 se
puede observar el análisis de muestras de leche con diferentes niveles de contaminación.
El kit desarrollado para análisis de metanol fue usado para detección del mismo como contaminante en
nafta, que obligatoriamente en Brasil tiene un 25% de etanol y el uso de metanol como aditivo es prohibido;
así como también en etanol como combustible (forma hidratada al 96 %); y en diversas bebidas alcohólicas,
como cerveza y aguardiente. Los análisis fueron hechos con las muestras puras y con diversos niveles de
contaminación con metanol. En todos los casos la ausencia de metanol resulto en un líquido incoloro, así
como también en casos en los cuales algunas muestras, tales como la cerveza, no mostraban coloración
debida a su color intenso original. El resultado positivo para la presencia de metanol en las muestras era
indicado en un líquido con color purpura, siendo la intensidad del color proporcional al nivel de
contaminación. En la Figura 2 aparecen los resultados del análisis de muestras de cerveza con diferentes
niveles de contaminación. Es importante resaltar que el reactivo de Schiff detecta al grupo aldehído no
reaccionando exclusivamente como en el formaldehido. En la metodología propuesta la reacción de
oxidación del metanol es selectiva, de modo que el etanol no se oxida a acetaldehído, lo cual fue
comprobado mediante una serie de equilibrios químicos en medio ácido sobre la reacción entre el reactivo
de Schiff y el acetaldehído que resultaría de la oxidación del etanol, la cual no ocurrió.
Figura 1 – Análisis de muestras de leche con diferentes niveles de contaminación con formaldehido.
80
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Figura 2 – Análisis de muestras de cerveza con diferentes niveles de contaminación con metanol.
Conclusiones
El papel indicador de formaldehido y el kit de análisis de metanol demostraron ser robustos para la
detección de estos contaminantes en diferentes productos comerciales, en donde la presencia de estos
compuestos es prohibida por la legislación brasileña. El kit fue usado en análisis en establecimientos
comerciales, demostrando practicidad de uso en campo y robustez en los resultados.
81
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 02
Determinação de íons metálicos em água por espectroscopia de emissão óptica em
plasma induzido por laser (LIBS): uso de papel de filtro como suporte
Fontes, Laiane Moura; Raimundo Jr., Ivo M.
Universidade Estadual de Campinas
A espectroscopia de emissão óptica em plasma induzido por laser (LIBS) é uma técnica analítica para a
análise direta de amostras, pois não requer tratamento prévio, que é simples e rápido quando necessário.
No entanto, LIBS apresenta limitações na análise de amostras líquidas, as quais prejudicam a eficiência dos
processos de ablação e formação do plasma pelo laser [1]. A transferência do analito para um suporte
sólido é, portanto, desejável e o papel de filtro pode ser uma alternativa simples e altamente eficiente para
esse fim, possibilitando análise direta por LIBS, sem necessidade de adequações instrumentais. Neste
trabalho, papel de filtro Whatman 40 foi avaliado para a pré-concentração de cobre e chumbo em água. A
pré-concentração dos íons metálicos foi realizada pela imersão de um disco de papel de filtro (30 mm
-1
-1
diâmetro) em soluções de referência (0 – 1,0 mg L ), preparadas em tampão borato de sódio 0,02 mol L
pH 8,5. O disco foi removido da solução, seco em dessecador e analisado por LIBS, constituído por um
laser de Nd:YAG (1064 nm; pulso 5,2 ns; frequência 20 Hz; 100 mJ/pulso), policromador echelle e detector
ICCD. A aquisição dos espectros foi realizada integrando o sinal de 114 pulsos através de programação da
câmara ICCD. Os tempos de atraso e de integração foram de 1 µs. A intensidade do sinal foi monitorada
utilizando-se as linhas de emissão em 324,74 nm para cobre e 405,77 nm para chumbo, sendo estas raias
de emissão mais intensas e indicadas pela base de dados NIST [2]. O pH para pré-concentração foi
avaliado na faixa de 4,0 a 10,0, sendo que a máxima sensibilidade foi obtida em pH 8,5, indicando que a
pré-concentração está baseada em um mecanismo de troca iônica [3]. Nessas condições, o papel de filtro
não se mostrou saturado após imerso por 60 minutos em uma solução de Cu(II) 1,0 mg L-1. Pela imersão do
papel por um período de 30 minutos, foram obtidas respostas lineares para Cu(II) e Pb(II) nas faixas de 0,1
-1
-1
-1
a 0,5 mg L e 0,1 a 1,4 mg L e limites de detecção de 0,16 e 0,20 mg L , respectivamente. Estes valores
indicam a viabilidade de se utilizar papel de filtro como suporte para a pré-concentração de íons metálicos,
superando as desvantagens das medidas diretas em água e melhorando o limite de detecção da técnica.
(INCTAA – FAPESP 2008/57508-1 e CNPq 573894/2008-6; CNPq 149994/2010).
REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS
[1] Cortez, J.; Pasquini. C. Ring-Oven Based Preconcentration Technique for Microanalysis: Simultaneous
Determination of Na, Fe, and Cu in Fuel Ethanol by Laser Induced Breakdown Spectroscopy. Anal Chem;
2013; 85; 1547-1554.
[2] NIST Atomic Spectra Database. http://www.nist.gov/pml/data/asd.cfm
[3] Engin, M. S. et al. Effect of the adsorptive character of filter papers on the concentrations determined in
studies involving heavy metal ions. Adsorpt Sci Tecnol; 2010; 28; 837-846.
82
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 03
Microextração com gota orgânica flutuante solidificada para a determinação de
chumbo por GFAAS
*
Alves Meira, Lucilia ; de Jesus Ferreira, Vanessa; Alves Barreto, Jeferson; Azevedo Lemos, Valfredo
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Laboratório de Química Analítica, Campus de Jequié, 45206-190, Jequié, Bahia, Brasil.
*E-mail: [email protected]
O chumbo não apresenta nenhuma função fisiológica conhecida sobre o organismo de seres humanos e
animais. O monitoramento dos níveis deste elemento em diferentes matrizes, especialmente alimentos e
fluidos biológicos é muito importante. No entanto, os teores de chumbo em algumas amostras são muito
baixos, e sua determinação em diversas matrizes é, geralmente, precedida por uma etapa de préconcentração, devido à insuficiente sensibilidade ou seletividade de algumas técnicas detecção. A
microextração com gota orgânica flutuante solidificada tem sido bastante empregada para a préconcentração de elementos. Sua primeira aplicação foi na extração de hidrocarbonetos policíclicos
aromáticos (HPAs) e determinação por cromatografia gasosa com detector por ionização de chama (GCFID) [1]. Este trabalho tem como objetivo desenvolver um sistema simples e sensível utilizando a
microextração com gota orgânica flutuante solidificada (SFODME) para a pré-concentração e determinação
de chumbo por espectrometria de absorção atômica com forno de grafite (GFAAS). O procedimento baseiase na injeção do solvente 1-undecanol e do reagente quelante 1-(2-piridilazo)-2-naftol (PAN) em uma
solução aquosa contendo íons chumbo, com posterior extração do analito sob a forma de pequenas
gotículas do solvente. Após a extração, a mistura é centrifugada para acelerar a separação das fases [2]. O
sistema é, então, resfriado em banho de gelo por alguns minutos, para solidificação do solvente. A fase rica
solidificada é facilmente transportada para outro frasco, para a quantificação de chumbo por GFAAS. As
seguintes variáveis foram otimizadas: pH (9,0), solvente (1-undecanol), volume do solvente (50 µL),
concentração do reagente quelante (0,05% m/v) e tempo de centrifugação (3,0 minutos). Sob condições
-1
otimizadas, os limites de detecção e quantificação foram 0,2 e 0,7 µg L , respectivamente. O fator de
enriquecimento calculado foi de 14. O método proposto é simples, rápido, utiliza pequenos volumes de
solventes orgânicos e pode ser utilizado para a determinação de chumbo em diferentes matrizes.
Palavras-Chave: microextração com gota solidificada, chumbo, 1-(2-piridilazo)-2-naftol, GFAAS.
Referências Bibliográficas
[1] KHALILI ZANJANI, M. R; YAMINI, Y; SHARIATI, S; JONSSON, J. A. A new liquid-phase microextraction
method based on solidification of floating organic drop. Analytica Chimica Acta; 2007; v. 585; p.286-293.
[2] LEMOS, V. A; DOS SANTOS, L. O; SILVA, E. S,; VIEIRA, E. V. S. Spectrophotometric Determination of
Mercury in Water Samples After Preconcentration Using Dispersive Liquid Liquid Microextraction. Journal of
AOAC International; 2012; v. 95, p. 227-231.
83
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 04
Avaliação da utilização de Ni e Co como padrões internos para a determinação de
Cu em aguardente por FAAS usando a técnica de diluição em meio ácido
Gonçalves Machado, Geovane; Alves Barreto, Jeferson; de Jesus Santos, Mirela; de Jesus Ferreira,
Vanessa; Lacerda dos Anjos, Marcio; de Almeida Bezerra, Marcos
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Laboratório de Química Analítica, Campus de Jequié, Bahia.
e-mail: [email protected]
Palavras-chave: Cobre, padrões internos, aguardente, diluição em meio ácido.
A aguardente de cana é uma bebida típica brasileira e tem ganhado importância entre as importações de
bens manufaturados. Devido à complexidade da composição química dessa bebida, sua análise direta pode
ser difícil devido ao efeito de matriz causado por seu alto teor alcoólico. A digestão é um procedimento que
demanda muito tempo e apresenta um alto risco de contaminação (1,2). Este trabalho tem como objetivo
desenvolver um procedimento para a determinação de cobre em amostras de aguardente usando-se
diluição em meio ácido como uma técnica alternativa para o tratamento da amostra. Os elementos Ni e Co
foram avaliados como padrões internos para a correção do efeito de matriz causado pelo álcool. Os estudos
para o desenvolvimento do procedimento incluíram : avaliação do tipo de ácido (HCl ou HNO3) e sua
concentração, investigação das proporções entre volume da amostra e solução ácida usando-se um
planejamento experimental para otimização de misturas. Nas condições ótimas demanda-se que 8,0 mL da
amostra deve-se adicionar Co ou Ni como padrões internos para se ter uma concentração final de 0,8 e 1,0
-1
-1
mg L para Co e Ni e logo a amostra deve ser diluída a 10,0 mL com uma solução de HNO3 0,5 mol L .
Foram avaliadas curvas analíticas construídas pelos métodos: da padronização externa, da adição padrão e
do padrão interno para avaliação de seus coeficientes angulares e sua relação com o efeito de matriz. Os
resultados mostraram que Ni é um melhor padrão interno que Co. Os resultados da determinação de Cu em
amostras de aguardente utilizando-se o padrão interno concordaram com os resultados obtidos pelo método
-1
da adição padrão. Os teores de Cu encontrado em dez amostras variaram entre 0,18 a 3,4 mg L .
(1) BOGUSZ JUNIOR,S.; KETZER.D.C.M.; GUBERT,R.; ANDRATES,L.; GOBO,A.B. Composição química
da cachaça produzida na região Nordeste-Brasil. Ciência e Tecnologia de Alimentos. Campinas, 2006, v.26,
793-798.
(2) RECHE,R. V.; FRANCO, D. W. Distinção entre cachaças destiladas em alambiques e em colunas
usando quimiometria. Química Nova, 2009 v. 32, 332-336.
84
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 05
Nanotubos de carbono: un sustrato eficiente para la preconcentración de Hg(II)
utilizando un sistema en línea FI-CV-AAS
1,2
1
2,3
4
5
Parodi, Belén ; Londonio, Agustín ; Polla, Griselda ; Savio, Marianela ; Smichowski, Patricia
3,6
Instituto Nacional de Tecnología Industrial, Centro de Investigación y Desarrollo en Mecánica, Av. General Paz 5445- B1650KNA- San
Martín, Buenos Aires, Argentina.
2
Instituto de Investigación e Ingeniería Ambiental (3iA), Universidad de San Martín, Campus Miguelete, 25 de Mayo y Francia, San
Martín, Buenos Aires, Argentina.
3
Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia Química, Av. Gral Paz 1499, B1650KNA- San Martín, Buenos Aires, Argentina.
4
Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia Investigación y Aplicaciones, Av. Gral Paz 1499, B1650KNA- San Martín, Buenos
Aires, Argentina.
5
Instituto de Química de San Luis (UNSL-CONICET). Área de Química Analítica, Facultad de Química Bioquímica y Farmacia,
Universidad Nacional de San Luis. Chacabuco y Pedernera, D5700BWQ-San Luis, Argentina.
6
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas, Av. Rivadavia 1917, C1033AAJ-Buenos Aires, Argentina.
Se evaluó la potencialidad de los nanotubos de carbono de pared múltiple (MWCNTs) como posible sustrato
-1
para la preconcentración de Hg(II) en distintos tipos de aguas a niveles de ng L empleando un sistema en
línea de inyección en flujo-generación de vapor frío acoplado a espectroscopía de absorción atómica (FICV-AAS).
Las nanopartículas de carbono se caracterizan por una gran tendencia a la aglomeración, lo que afecta
negativamente la retención de Hg(II) en sistemas en flujo usando columnas compactas. Para evitar este
inconveniente, la preconcentración se llevó a cabo en una microcolumna rellena con una mezcla de
MWCNTs oxidados y un polímero de bajo peso molecular. Las características y preparación de la
microcolumna se discuten en detalle. La mejor performance se alcanzó con una microcolumna de 2,25 mm
(d.i.) x 20 mm de longitud. Se estudió en forma sistemática el efecto de variables físicas y químicas como:
pH, tipo y concentración del eluyente, caudales, etc. El Hg(II) fue retenido a pH 5,0 y se eluyó con HCl al
15%. Usando condiciones de trabajo optimizadas, la capacidad de adsorción del sustrato es de 3,2 mg g-1,
alcanzándose un alto factor de preconcentración de 150. La gran capacidad de retención del sustrato
-1
permitió obtener un límite de detección (3σ) de 1,9 ng L , utilizando una columna conteniendo sólo 1,0 mg
de MWCNTs. La precisión, expresada como desviación estándar relativa (RSD) es del 1,6% para una
concentración de 0,1 µg Hg L-1 (n=8). El sistema se utilizó para determinar Hg(II) en distintos tipos de agua
naturales colectadas en Argentina. Esta línea de investigación llevada a cabo en nuestro laboratorio
continúa y se está aplicando a la preconcentración de otros analitos. Además, se está estudiando el empleo
de otros nanomateriales (MWCNTs funcionarizados con aminoácidos), incluyendo análisis de la
especiación, para la determinación de contaminantes clave en matrices ambientales.
Agradecimientos
Los autores agradecen a Agustín Negri (Departamento de Física, CNEA) por proveer muestras de agua de
la Antártida. PS agradece a CONICET (Proyecto PIP 486) y a ANPCyT (Proyecto PICT 1195) por el
financiamiento. BP agradece a Gustavo Lafogiannis por su amable cooperación.
85
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 06
Desenvolvimento de um sensor colorimétrico não-enzimático para glicose
1
2
1
1
Vacaro, Bernardo B. ; Helfer, Gilson A. ; Ferrão, Marco F. ; Arguello, Jacqueline
1
2
Instituto de Química, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brasil
Mestrado em Sistemas e Processos Industriais, Universidade de Santa Cruz do Sul, Santa Cruz do Sul, RS, Brasil
Dispositivos analíticos em papel para diagnósticos rápidos por meio de reações colorimétricas representam
uma alternativa simples, portátil, barata e descartável. A capacidade de discriminar visualmente entre
diferentes concentrações do analito vem sendo explorada nas áreas clinicas há décadas [1]. No que diz
respeito aos sensores colorimétricos, o advento de novas e mais sofisticadas ferramentas de aquisição e
tratamento de imagens tem impulsionado enormemente o seu desenvolvimento e aplicação em diversas
áreas nos últimos tempos [2]. Atualmente, os medidores de glicose ilustram inovação e diversidade em
design, tecnologia, funções e desempenho para beneficiar pessoas com diabetes, em todo o mundo. Assim,
telefones com câmera ou scanners portáteis para a digitalização aliados a infraestrutura de comunicações
para a transferência de informação digital, oferecem novas perspectivas na obtenção e processamento dos
dados. Dentro dessa temática, neste trabalho esta sendo estudada a formação de nanopartículas de ouro
sobre papel para o desenvolvimento de um sensor colorimétrico para glicose. A redução química do ácido
cloroáurico gera uma mudança de cor de amarelo para rosa, cuja intensidade pode ser correlacionada com
a concentração da glicose. Papel de filtro quantitativo previamente funcionalizado com APTS foi utilizado
para imobilizar o complexo cloroáurico com o qual adquiriu uma coloração amarela. Os ensaios
colorimétricos foram realizados em meio alcalino a diferentes concentrações de glicose. As variáveis
experimentais tais como tempo e temperatura de reação foram otimizadas. Após a reação foi observada a
mudança de coloração de amarelo para rosa claro a vinho, dependendo da concentração de glicose. As
imagens escaneadas foram utilizadas para extrair as informações de intensidade de cor que se
correlacionam com a concentração de glicose. Os sistemas de cores CMYB (cyan-magenta-yellow-black) e
RGB (red-green-blue) foram modelados a fim de otimizar a correlação para a aplicação analítica. Os
resultados apresentaram potencialidade para a utilização das imagens digitalizadas para a determinação da
glicose, tornando esta metodologia promissora no desenvolvimento de sensores.
[1] S. F. Clarke.; J. R. Foster; A history of blood glucose meters and their role in self-monitoring of diabetes
mellitus; Br J Biomed Sci, 2012; 69 (2), 83-93.
[2] Andres W. Martinez, Scott T. Phillips, Emanuel Carrilho, Samuel W. Thomas III, Hayat Sindi e George M.
Whitesides, Simple Telemedicine for Developing Regions: Camera Phones and Paper-Based Microfluidic
Devices for Real-Time, Off-Site Diagnosis, Anal Chem, 2008; 80; 3699–3707, 2008.
86
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 07
Determinação de carbaril em plasma sanguíneo, de agricultores do perímetro
irrigado do baixo Jaguaribe-Ceará-Brasil, por microextração em fase sólida e
cromatografia gasosa (MEFS/CG)
Souza, F. Thiago Correia de; Vieira, Edivânia Castro; Becker, Helena; Longhinotti, Elisane
1
Departamento de Química Analítica e Físico-Química, Universidade Federal do Ceará.
A presença dos agrotóxicos é cada vez mais preocupante no Brasil visto que entre 2007 e 2012, o volume
de defensivos (considerando apenas o princípio ativo) aplicado nas lavouras cresceu 14%. O uso
descontrolado desses compostos tem oferecido riscos a trabalhadores e moradores das regiões do
agronegócio Uma pesquisa realizada por um grupo da Universidade Federal do Ceará, mostrou que em 23
amostras de água da região do perímetro irrigado do baixo Jaguaribe, coletadas em diferentes localidades e
analisadas por cromatografia líquida, todas apresentaram a presença de algum agrotóxico, destacando-se
que o carbaril foi detectado em todas as amostras. Nesse estudo, a constatação de anormalidades
cromossômicas em células da medula óssea de indivíduos expostos a pesticidas na região reforçam a
necessidade de desenvolvimento de métodos bioanalíticos capazes de detectar pesticidas em amostras
biológicas, para que essa exposição possa ser monitorada pelas autoridades competentes. Baseado nisso
um método foi desenvolvido para análise de carbaril usando um cromatógrafo a gás equipado com detector
de massas e de seu metabólito gerado (1-naftol), devido à degradação térmica no injetor do cromatógrafo.
Um estudo para determinação da melhor velocidade linear para o método foi realizado com a construção do
diagrama de Van Deemter, sendo a velocidade de 50,5cm.s-1 achada como ótima. O preparo da amostra foi
realizado com a precipitação das proteínas do plasma seguida de microextração em fase sólida no modo
2
headspace (MEFS-HS) do sobrenadante; para otimização da extração foi realizado planejamento fatorial 2
com
componente
central,
em
3
fibras
com
características
diferentes.
A
fibra
Polidimetilsiloxano/Divinilbenzeno (PDMS/DVB) de 65µm mostrou uma maior afinidade com os analitos,
sendo determinada como condições ótimas o tempo de 40 min de extração com NaCl 30% p/v de força
iônica e 110°C de temperatura; o pH 5,5, agitação de 1000 rpm e vial de 40 mL foram mantidos constantes.
O carbaril foi monitorado pelo sinal do seu metabólito 1-naftol, sendo validado um método para sua
determinação. A % de 1-naftol produzido pela degradação térmica do carbaril, nas condições de trabalho,
foi analisada por Ressonância Magnética Nuclear e o espectro, quando confrontado com padrões
individuais, mostrou que 8% do carbaril foi convertido em 1-naftol. A seletividade foi avaliada na matriz de
plasma sanguíneo para amostras normais, lipêmica e hemolisada, sendo o método bem seletivo. A faixa
linear de trabalho foi de 12 a 180 µg L-1; utilizando o método de superposição da matriz com a utilização do
pirimicarbe como padrão substituto, a linearidade da curva de calibração foi determinada pelo valor do
coeficiente de correlação (R = 0,999). Os valores do limite de detecção e quantificação foram de 3,0 e 12,0
-1
µg L , o que demonstra que pequenas concentrações podem ser analisadas pelo método; a precisão e
exatidão intra e inter corrida foram todos dentro do recomendado pela resolução da Agência Nacional de
Vigilância Sanitária Brasileira nº 27/2012, menores que 15% para concentrações médias e altas e, menores
que 20% para baixas concentrações. Amostras de 10 trabalhadores da região foram analisadas, porém não
foi detectada presença de carbaril no plasma desses indivíduos.
87
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 08
Validação de metodologia analítica para identificação e quantificação dos produtos
da reação de oxidação do glicerol por HPLC
Giertyas, Cristian J.; Silva, Camila L.F.; Araujo, Marlysson M.C.; Junges, Fábio V.; Almeida, Rusiene M.;
Bortoluzzi, Janaína H.
Instituto de Química e Biotecnologia- Universidade Federal de Alagoas.
A técnica de HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência) é uma técnica que pode ser utilizada na
determinação dos produtos da reação de oxidação do glicerol. Os produtos gerados nesta reação são de
interesse da indústria farmacêutica, petroquímica, química fina e produção de explosivos, como a
nitroglicerina e seus derivados [1]. O trabalho foi desenvolvido buscando a validação da metodologia
analítica segundo parâmetros como exatidão, precisão, linearidade, limite de detecção e quantificação [2].
O método cromatográfico foi desenvolvido utilizando os seguintes padrões analíticos: ácido oxálico, ácido
mesoxálico, ácido tartônico, gliceraldeído, ácido glicólico, ácido lático, glicerol, ácido fórmico, ácido acético e
dihidroxiacetona. O método foi baseado em cromatografia de troca iônica e utilizou-se ácido fosfórico diluído
como fase móvel.
O método proposto apresenta boa correlação linear entre as áreas obtidas e as concentrações, indicando
que os coeficientes de linearidade são adequados. O mesmo apresentou excelente sensibilidade com limite
de detecção e quantificação nas faixas de 2,7 – 51,7 ppt e 8,9 – 172,3 ppt, respectivamente. A repetividade
e a precisão apresentaram coeficientes de variação menores que 10% e 5%, respectivamente o que indica
que estes parâmetros avaliados apresentam um conjunto de dados homogêneos. A reprodutibilidade do
método foi avaliada através do desvio padrão da média de análises realizadas em diferentes dias e os
resultados alcançados mostraram que não ocorre variação na reprodutibilidade, uma vez que o desvio
padrão calculado foi ≤ 1,0%. Esta metodologia mostrou-se sensível e precisa para faixa de concentração
adotada de 30 a 3000 µg/mL.
A metodologia foi testada com uma amostra real na qual foi observada a presença de gliceraldeído, ácido
glicólico, ácido lático, glicerol, dihidroxiacetona + ácido fórmico. È importante destacar que a presença
destes produtos podem estar relacionada com as condições reacionais adotadas no processo de oxidação
do glicerol.
Baseado nos dados relatados anterioremente pode-se concluir que a metodologia analítica desenvolvida
empregando HPLC permite a detecção e quantificação dos possíveis produtos da reação de oxidação do
glicerol.
[1] CLAUDIO, J. A. M.; CAROLINA, X. A. S.; VALTER, L. C. G. Gliceroquímica: Novos Produtos e
Processos a partir da Glicerina de produção de Biodiesel; Quim Nova; 2009; 32, 639-648.
[2] MARCELO, R.; CARLA, B. G. B.; CAROL, H. C.; ISABEL, C. S. F. J.; LÚCIO, F. C. M. Validação em
métodos cromatográficos e eletroforéticos; Quim Nova; 2004; Vol. 27, 771-780.
88
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 09
Perfil N-glicoproteómico de una línea celular de cáncer de mama metastásico
(MCF-7)
1
1
2
2
1,3
Rivera, Bernardina ; Portela, Magdalena ; Charquero, Diego ; Ricciardi, Alejandro ; Durán, Rosario ;
Batthyány, Carlos1,4
2
1
Unidad de Bioquímica y Proteómica Analíticas; Institut Pasteur de Montevideo
Laboratorio de Biofármacos: Control de Calidad & Desarrollo; Institut Pasteur de Montevideo
3
Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente Estable, MEC
4
Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, UDELAR
Los glicanos (libres o unidos a otras biomoléculas) participan en casi todos los procesos celulares como el
tráfico de proteínas, la señalización y el reconocimiento celular, interacciones hospedero-patógenos y los
procesos de transformación maligna. Los glicanos asociados a proteínas se clasifican en dos grandes
familias (N- y O-glicosilación) que difieren en el residuo aminoacídico al que están unidos en la
glicoproteína. Las alteraciones de la N-glicosilación de células tumorales han sido asociadas a los procesos
de carcinogénesis, invasión, metástasis y resistencia a drogas [1].
En el presente trabajo realizamos la caracterización de la N-glicoproteómica en células de tumorales (MCF7) utilizando una aproximación por espectrometría de masa (EM) de tipo MALDI-TOF/TOF acoplada a la
deglicosilación enzimática, derivatización química específica de carbohidratos, separación por HPLC con
detección fluorescente y la electroforesis bidimensional. En particular, los N-glicanos liberados de manera
cuantitativa por digestión enzimática son derivatizados y analizados por HPLC en fase normal con detección
fluorescente y por EM. La asignación estructural de los glicanos se realiza en base a los RT y relación m/z
por comparación con datos depositados en la “Glycobase” (Dublin‐Oxford Glycobiology Laboratory) [2]. La
contraparte proteica de las N-glicoproteínas se analiza por electroforesis bidimensional e identificación por
EM.
Referencias:
[1] Dwek, R. A. Glycobiology: Toward Understanding the Function of Sugars. Chem Rev (1996)
96, 683‐720.
[2] Triguero A., Cabrera, G., Royle, L., Harvey, D.J., Rudd, P.M., Dwek, R.A., Bardor, M., Lerouge, P.
Cremata, J.A. Chemical and enzymatic N-glycan release comparison for N-glycan profiling of monoclonal
antibodies expressed in plants. Anal. Biochem. (2010) 400(2):173-83.
89
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 10
Combustão Iniciada por Micro-ondas Aplicada para a Volatilização de Cloro e Flúor
em Cimento
Mesko, M. F.; Pereira, R. M.; Novo, D. L. R.; Hartwig, C. A.; Costa, V. C.
Laboratório de Controle de Contaminantes em Biomateriais, Centro de Ciências Químicas, Farmacêuticas e de Alimentos,
Universidade Federal de Pelotas, Brasil.
[email protected]
O cimento é um material amplamente utilizado na construção civil e tem sido muito consumido nos últimos
anos. Todavia, elementos como o cloro e o flúor devem ser controlados neste material, pois, dependendo da
concentração, podem levar a formação de compostos indesejáveis no concreto [1, 2]. Todavia, os métodos
atualmente utilizados para quantificá-los apresentam desvantagens, como elevado número de etapas de
análise, gasto excessivo de reagentes e elevada geração de resíduos. Assim, neste trabalho propõe-se um
método para a determinação de Cl e F por cromatografia de íons (IC) em cimento Portland a partir da
volatilização desses analitos através da combustão iniciada por radiação micro-ondas (MIC). A MIC vem
sendo aplicada com sucesso para matrizes orgânicas ou com elevado teor de material inorgânico,
entretanto, ainda não foi aplicada para matrizes totalmente inorgânicas como o cimento [3]. Neste trabalho,
avaliaram-se o uso de auxiliares de volatilização, a forma de manipulação das amostras, a relação entre a
massa de amostra e o auxiliar de volatilização, a solução absorvedora e, ainda, a aplicação de uma etapa
de refluxo. Cloro também foi determinado pelo método C114-13 da American Society for Testing and
Materials (ASTM). Com a volatilização por MIC, utilizando 300 mg de celulose e 100 mg de cimento,
envoltas em filme de polietileno, 6 ml de água ultrapura como solução absorvedora e 5 min de refluxo,
obtiveram-se concordâncias para Cl acima de 90% com o método de referência e entre 98 e 103% com os
valores informados para Cl em materiais de referência certificados (CRMs) FLX-CRM 101 (Cement) e
PACS-2 (Sediment Marine). Para F, devido a ausência de CRM com matriz semelhante, foram realizados
ensaios de recuperação, misturando-se o CRM NIST 1566a (Oyster Tissue) ao cimento obtendo-se
recuperações em torno de 96%. Os limites de detecção para Cl e F com o método proposto foram de 99,1 e
17,7 mg kg-1, respectivamente. O desvio padrão relativo do método, para ambos os analitos, foi inferior a
7%. Assim, cimentos de lotes de diferentes fabricantes foram analisados e as concentrações de Cl variaram
-1
-1
de 174 a 339 mg kg , e as de F foram em torno de 270 mg kg . Desta forma, o método mostrou-se
adequado para a determinação de Cl e F em cimento, sendo possível observar que estas concentrações
estão dentro dos valores especificados na literatura. Ademais, o método está de acordo com o preconizado
pela química verde, como a mínima geração de resíduos e o menor consumo de reagentes.
[1] Apostolopoulos, C. A.; Demis, S.; Papadakis, V. G. Chloride-induced corrosion of steel reinforcement –
Mechanical performance and pit depth analysis. Constr Build Mater; 2013; 38; 139-146.
[2] Singh, D. D.; Ghosh, R.; Singh, B. K. Fluoride induced corrosion of steel rebars in contact with alkaline
solutions, cement slurry and concrete mortars. Corros Sci; 2002; 44; 1713-1735.
[3] Picoloto, R. S.; Wiltsche, H.; Knapp, G.; Barin, J. S.; Flores, E. M. M. Mercury determination in soil by
CVG-ICP-MS after volatilization using microwave-induced combustion. Anal Methods; 2012; 4; 630-636.
90
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 11
Estudo do uso de concha de mexilhão como suporte sólido para MSPD na extração
de compostos orgânicos de amostras de mexilhão dourado
1
1
1
1
2
Caldas, Sergiane ; Arias, Jean Lucas ; Rombaldi, Caroline ; Hertzog, Gabriel ; Vieira, João ; Martins,
Ayrton3; Primel, Ednei1
1
Universidade Federal do Rio Grande (FURG), Escola de Química e Alimentos (EQA), Laboratório de Análises de Compostos
Orgânicos e Metais (LACOM), Rio Grande, RS, Brasil
2
Universidade Federal do Rio Grande (FURG), Instituto de Oceonografia (IO),Rio Grande, RS, Brasil
3
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Departamento de Química, Santa Maria, RS, Brasil
A técnica de Dipersão da Matriz em Fase Sólida (MSPD) está baseada na homogeneização da amostra
com auxílio de um suporte sólido, que atua como abrasivo causando a ruptura da estrutura física da
amostra, a qual sofre uma dispersão na superfície do material suporte, formando uma nova fase que
proporciona o isolamento do analito na matriz [1]. A busca de novos materiais para emprego na MSPD tem
sido alvo de estudos, entre os quais podemos citar terra a diatomácea e areia. Visto que as conchas dos
mexilhões são compostas basicamente por 95% de carbonato de cálcio e 5% de matéria orgânica, elas
podem apresentar potencial para ser aplicado como um suporte sólido. Assim, este trabalho teve por
objetivo o preparo e a caracterização da concha de mexilhão dourado (Limnoperna fortunei) para ser usado
como suporte sólido na MSPD para extração de 19 contaminantes orgânicos em amostras de tecido de
mexilhão e determinação por Cromatografia Líquida acoplada a Expectrometria de Massas em série (LCMS/MS). O material obtido foi submetido à caracterização por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV),
Espectroscopia Dispersiva de Raios-X (EDS), Espectroscopia na Região do Infravermelho (IR) e BET. Após
caracterização, o material (concha) foi empregado durante a otimização da MSPD, demonstrando
resultados equivalentes ao C18, que é o suporte sólido mais empregado. A separação cromatográfica foi
realizada em um cromatógrafo líquido acoplado à um espectrometro de massas com analisador triplo
quadrupolo. A coluna utilizada foi a Kinetex C18 (2,6 µm; 50 × 3 mm d.i.) e fase móvel composta por água
ultrapura acidificada com 0,1% de ácido fórmico e metanol, em modo de eluição por gradiente. O método foi
-1
validado, e os limites de quantificação variaram entre 0,01 e 0,1 µg g , com recuperações entre 61-107% e
precisão entre 3-18% para todos os analitos. O efeito matriz avaliado foi inferior a 18% para todos os
analitos. Assim, o uso da concha de mexilhão mostrou ser uma alternativa eficiente e de menor custo para
extração de 19 contaminantes em amostras de tecido de mexilhão.
[1] Caldas, et al. Avanços recentes da MSPD para extração de resíduos de agrotóxicos, PPCPs, compostos
inorgânicos e organometálicos. Scientia Chromatographica, 2013, 5, 190-213.
Agradecimentos: CNPq, FAPERGs, FURG.
91
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 12
Desarrollo de una metodología para la determinación de residuos de plaguicidas en
productos farmacéuticos que contengan propóleos
1
1
1
1
1,2
Gérez, Natalia ; Pérez, Andrés ; Cesio, María Verónica ; Heinzen, Horacio
Grupo de Análisis de Compuestos Traza (GACT) – Cátedra de Farmacognosia y Productos Naturales, Facultad de Química - UdelaR
2
Polo Agroalimentario Agroindustrial Paysandú – Centro Universitario Paysandú – UdelaR
[email protected]
En las formulaciones farmacéuticas que contienen productos naturales, la determinación de residuos de
contaminantes representa garantía de calidad tanto para el consumidor como para el elaborador.
Pese a que los subproductos de la colmena son ampliamente utilizados en cremas, ungüentos y apósitos,
no se han reportado aún metodologías analíticas con el fin de la determinación de residuos de
contaminantes en productos elaborados, aunque sí en las materias primas como en tinturas de propóleos
[1].
Este trabajo presenta el desarrollo de una metodología analítica para la determinación de residuos de
pesticidas en apósitos empapados con una emulsión de propóleos y excipientes, que contienen en su
formulación una mezcla de Polietilenglicoles y se emplean en el tratamiento de quemaduras tópicas.
Para el desarrollo de la misma se realizó un exhaustivo análisis de la matriz ya que los excipientes de la
forma farmacéutica se presentan en gran proporción con respecto al propóleo empleado (<1%). Los
componentes de la matriz se determinaron empleando técnicas de Cromatografía de Gel Permeación (GPC)
y Cromatografía gaseosa acoplada a espectrómetro de masas (GC-MS).
A su vez se evaluaron diferentes técnicas para la remoción de los excipientes como GPC y freeze-out,
donde se lograba remover selectivamente los polietilenglicoles de alto peso molecular, pero no los de bajo
ya que son similares a los de los analitos de interés.
Finalmente la técnica de preparación de muestra elegida fue la dispersión de matriz en fase sólida (MSPD)
realizada dispersando el extracto crudo en una mezcla 1:1 de sílica gel y alúmina neutra en mortero y
realizando una cromatografía en columna asociada a una co-columna con los mismos adsorbentes de la
dispersión. Se eluyó con una mezcla, previamente optimizada, de CH2Cl2/AcOEt (9:1), se concentró el
-1
extracto a presión reducida y se retomó en 500 µL de una solución de estándar interno (TPP a 0,50 mgL ).
Posteriormente se analizó mediante GC-MS, empleando modo de monitoreo selectivo de iones (SIM) para
21 pesticidas representativos.
Los 21 compuestos evaluados presentaron porcentajes de recuperación entre 65 y 120 % con desviaciones
estándares asociadas menores al 20 % (RSD’s), cumpliendo así con los requerimientos del Documento
SANCO de la Unión Europea [2]. A su vez se evaluó linealidad, precisión como repetitividad y
reproducibilidad, efecto matriz, límites de detección y cuantificación.
El método desarrollado resultó ser particularmente efectivo para los plaguicidas de mayor relevancia en
apicultura como coumafos, fluvalinato, fenvalerato así como para plaguicidas de relevancia ambiental como
clorpirifós y algunos piretroides, convirtiéndose en una herramienta útil para el control de calidad de éstas
formas farmacéuticas.
Referencias:
[1]- Pérez-Parada, A.; Colazzo, M.; Besil, N.; Geis-Asteggiante, L.; Rey, F.; Heinzen, H. J. Chromatogr. A
2011, 1218, 5852-5857.
[2]- Document N° SANCO/12571/2013.Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide
Residues Analysis in Food and Feed 2011.
Agradecimientos:
CSIC-PAIE, ANII-INI (Convocatoria 2012), PEDECIBA-QUÍMICA, GACT, UdelaR.
92
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 13
Comparación de distintos métodos de extracción y clean up para el análisis de
pesticidas y drogas veterinarias en hígado y músculo bovino
1
1
2
1,2
Souza, Rodrigo ; Cesio, María Verónica ; Heinzen, Horacio ; Pareja, Lucía
1*
Polo Agroalimentario y Agroindustrial de Paysandú, Centro Universitario de Paysandú, Universidad de la República, Paysandú,
Uruguay.
2
Cátedra de Farmacognosia y Productos Naturales, Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.
*[email protected]
Uruguay es uno de los principales productores cárnicos del mundo produciendo cerca de 55.0000 toneladas
de carne vacuna al año.
En los ultimos años se ha producido un cambio en el manejo del ganado con la introduccion de los feedlots,
en esta etapa previa a la faena, al animal se le alimenta con ración de origen vegetal a destajo junto con un
paquete de drogas veterinarias. Esto tiene como consecuencia un problema para la industria ganadera que
debe asegurar la calidad de sus productos, asociado a la presencia/ausencia de residuos de pesticidas y
drogas veterinarias.
En la actualidad se busca el desarrollo de metodologias económicas y ambientalmente amigables para el
análisis de residuos de contaminantes orgánicos, en particular pesticidas y drogas veterinarias, que
abarquen la mayor cantidad de compuestos.
En la literatura existen varias metodologias para el análisis de drogas veterinarias y pesticidas, pero son
escasos los reportes para la determinación simultánea de los mismos.
Un estudio sistemático y riguroso de la distribución de estos contaminantes en los distintos compartimientos
del ganado (hígado, músculo, grasa, entre otros) proporcionaría gran información para el correcto manejo
de fitosanitarios en la cadena agroalimentaria.
El objetivo del presente trabajo es la comparación de 4 métodos de extraccion y clean up, para la
determinación de 44 residuos de contaminantes (6 drogas veterinarias y 38 pesticidas) en hígado y
músculo, con el fin de obtener un método que permita el análisis de dichos compuestos en productos
cárnicos buscando asegurar la inocuidad alimentaria, tomando como criterio los requisitos establecidos en el
documento DG-SANCO [1].
Las metodologias desarrolladas consisten en extracciones con diferentes mezclas de solventes; AcOEt,
AcOEt/H2O (3:1), ambas variantes con buffer acetato; seguidas de una etapa de clean up dispersivo con
diferentes adsorbentes (MgSO4, CaCl2, PSA, C-18 y Al2O3) para posteriormente realizar un análisis
mediante HPLC-QqQ/MS.
En general los métodos evaluados presentaron resultados aceptables, no detectándose una diferencia
significativa entre éstos. Para hígado la extracción con AcOEt sin buffer y clean up con MgSO4, Al2O3 y C-18
es la que arrojó los mejores resultados (88% de los compuestos presentaron porcentajes de recuperación
entre 70-120 y una RSD <20%), mientras que para músculo la extracción con AcOEt/H2O y clean up con
MgSO4, Al2O3 y C-18 presentó el mejor desempeño, obteniendo buenas resultados para el 90% de los
compuestos).
Ninguno de los métodos mencionados fue capaz de recuperar pesticidas ácidos, esto se debe a que el pKa
de estos pesticidas se encuentra por debajo del pH del medio.
Las metodologías evaluadas, presentan una alternativa multi-residuo moderna y sencilla para el análisis
simultáneo de pesticidas y drogas veterinarias de rutina. El uso de AcOEt y Al2O3, en lugar de acetonitrilo y
PSA respectivamente representa una disminución en el costo del análisis. A su vez el análisis de varios
tipos de compuestos simultáneamente proporciona una disminución en el tiempo de análisis, resultando en
una metodología aplicable para el aseguramiento de la calidad de estos productos y aumentando así su
valor agregado.
REFERENCIAS
[1] European Commission DG-SANCO, Document No. N° SANCO/12751/2013.
93
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 14
Evaluación de diferentes estrategias de clean-up para el análisis de músculo de
pescado mediante el método de QuEChERS
1
1
1
1,2
1,2
Colazzo, Marcos ; Pareja, Lucía ; Fernández, Paula ; Cesio, María Verónica ; Heinzen, Horacio
1
Polo Agroalimentario y Agroindustrial, Centro Universitario de Paysandú, Universidad de la República, Paysandú, Uruguay.
2
Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.
[email protected]
La agricultura en el Uruguay ha crecido alrededor de un 50%, promoviendo un aumento del uso de altas
cargas de agroquímicos ya sean insecticidas, herbicidas o fungicidas. Estos compuestos ingresan al
medioambiente, particularmente a los cuerpos de agua superficial debido a procesos tales como deriva,
lixiviación y escorrentía o derrames accidentales durante su aplicación. Los agroquímicos presentes en el
agua, aún en muy bajas concentraciones, pueden bioacumularse en organismos acuáticos alcanzando
niveles de relevancia toxicológica. Por este motivo, resulta prioritario contar con estrategias que permitan su
análisis en los diferentes tipos de peces consumidos por la población, de forma de contribuir a la inocuidad
alimentaria.
El objetivo del presente trabajo involucra la optimización y validación de una metodología para el análisis de
60 residuos de pesticidas de diversas familias en tres especies de peces del Río Uruguay; Prochilodus
lineatus (sábalo), Leporinus obtusidens (boga) y Luciopimelodus pati (patí), con diferentes hábitos
alimenticios. Estas matrices son consideradas complejas, siendo el patí el que posee el mayor contenido de
lípidos (4-15%) de las tres especies. Por este motivo, se utilizó ésta matriz, con la finalidad de seleccionar el
mejor tratamiento de muestra y así validar para las tres matrices el método de análisis desarrollado.
Las estrategias evaluadas consistieron en variaciones en la etapa de clean up del método de QuEChERS,
basado en una extracción con ACN y salting out con NaCl y MgSO4, seguido de una purificación dispersiva
con: MgSO4, PSA (método A), MgSO4, PSA y C18 (Método B); MgSO4, PSA, C18 y freeze out (Método C);
MgSO4, PSA y freeze out (Método D). Este estudio se realizó a un nivel de 50 µg/kg con cinco réplicas
genuinas y análisis mediante LC-QqQ/MS y GC-ECD [1].
Según los criterios establecidos en el documento N° SANCO/12571/2013 [2] se observó que los porcentajes
de recuperación fueron no aceptables para 6 compuestos (método A), 11 compuestos (método B), 17
(método C) y 8 (método D). El método C, cuyo clean up es el más exhaustivo, presenta el mayor número de
compuestos (16) con menores porcentajes de recuperación, siendo éstos, principalmente organoclorados y
piretroides, no afectando a los compuestos más polares.
De acuerdo a los resultados obtenidos con el método C y D, el uso de C18 como adsorbente sería el
parámetro que más afecta en detrimento de la recuperación de los analitos.
El método A permitió determinar el mayor número de compuestos con recuperaciones entre 70 y 120% tal
como se estipula en el Documento SANCO, razón por la cual fue el seleccionado para la validación [3].
Los resultados obtenidos demuestran que no existe un método universal y que la elección de la metodología
a emplear varía según la combinación pesticidas/matriz y el grado de purificación deseado en el extracto
final según los requerimientos del equipamiento disponible.
Referencias
[1] http://quechers.cvua-stuttgart.de/.
[2] European Commission DG-SANCO, Document No. N° SANCO/12751/2013.
[3] Colazzo, M. Application of QuECHERS method for the determination of pesticide residues in fish fillet
th
using GC-ECD and HPLC-MS/MS. En: Libro de resúmenes. 10 EPRW, Dublín. 2014, 148.
94
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P DME 15
Método analítico para determinación de residuos de fipronil y fipronil sulfona en
tejidos de origen animal mediante GLC-ECD
Politi, P.; Rampoldi, O.
Laboratorio de Residuos Biológicos, Departamento de Protección de Alimentos, DI.LA.VE, Ministerio de Ganadería, Agricultura y Pesca
- URUGUAY
[email protected]
En el marco del Programa Nacional de Control de Residuos de medicamentos veterinarios y contaminantes
en alimentos de origen animal con la finalidad de garantizar la inocuidad de los mismos, fue necesario
desarrollar un método para determinación de fipronil. El fipronil y su metabolito pertenecen a la clase de
plaguicidas denominada fenil pirazoles. Su uso como insecticida y garrapaticida en ganado para consumo
humano está ampliamente extendido en Uruguay, por lo que es de gran importancia su monitoreo. Para ello
se desarrolló y validó un método de análisis para la determinación de residuos de fipronil y fipronil sulfona
en hígado (1), uno de los tejidos recomendados Internacionalmente para su evaluación.
La muestra pasa por un proceso de extracción con acetonitrilo que se separa por centrifugación y adiciona
agua para ser sembrados ambos en columnas SPE C18, se eluye con acetonitrilo, evapora y retoma con
acetona para su análisis por GC-ECD. El método fue validado de acuerdo a la normativa European
Commission Decision 2002/657/EC (2). El LMR del Codex Alimentarius para hígado es de 100 µg/kg, la
recuperacion obtenida entre 90 y 115 %, con una linealidad superior a 0,985 para el rango de trabajo de LC200 µg/kg. La precisión lograda entre 6 y 19 %, LD 5-10 ug/kg, LC 10-20 ug/kg, CCα de 107 ug/kg, CCβ 116
ug/kg y la incertidumbre de las medidas varia entre 6 y 8%. Se logro desarrollar una metodología
multirresiduo adecuada para la evaluación de posibles residuos de fipronil y fipronil sulfona en cumplimiento
con las exigencias Internacionales, el cual se encuentra operativo en la rutina de análisis del Programa
Oficial de monitoreo en Uruguay, habiendo sido muy útil para detectar muestras positivas y/o no conformes
para tomar las acciones correctivas correspondientes que aseguren el buen manejo de dicho medicamento.
[1] Analytical Chemistry Laboratory Guidebook Residues Chemistry – USDA - 1991
[2] Commission Decision 2002/657/EC, Off. J. Eur. Communities L221 (2002) 8.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P EDU 01
Innovaciones en el Laboratorio de Analisis Intrumental: Estudio de Grasas y Aceites
por Espectroscopía de Resonancia Magnética Nuclear
López, Andrés*; Pareja, Lucía; Moyna, Guillermo*
Departamento de Química del Litoral, CENUR Noroeste, Universidad de la República
*[email protected], [email protected]
Generalmente, la espectroscopìa de resonancia magnética nuclear (RMN) se presenta a estudiantes de
grado como una herramienta de elucidación estructural en cursos de química orgánica. Sin embargo,
existen numerosas aplicaciones de la técnica que raramente se discuten. Este trabajo describe una practica
de laboratorio adecuada para cursos de análisis instrumental en la cual se emplea RMN para estudiar el
grado de insaturación en distintos tipos de grasas y aceites. En ella se presenta un fundamento teórico
general, y se profundiza en la aplicación de la metodología al análisis de lípidos, incluyendo la
caracterización de señales propias de estos compuestos, y su uso en la estimación del porcentaje de ácidos
grasos saturados (SFA), monoinsaturados (MUFA), y poliinsaturados (PUFA). Por ejemplo, empleando
datos obtenidos por estudiantes para una muestra comercial de aceite de oliva se determinaron porcentajes
de PUFA y MUFA de 8,8 y 83,0%, respectivamente. Estos valores comparan favorablemente con los
declarados por el fabricante (9 y 77% para PUFA y MUFA, respectivamente). Se discute su posible uso
como sustituto de métodos químicos establecidos para la determinación de parámetros tradicionales, como
ser el índice de iodo [1-3]. De este modo se muestra al estudiante un método alternativo a los métodos
químicos aceptados.
1) Johnson, L. F.; Schoolery, J. N. Determination of Unsaturation and Average Molecular Weight of Natural
Fats by Nuclear Magnetic Resonance. Anal. Chem. 1962, 34, 1136-1139.
2) Miyake, Y.; Yokomizo, K.; Matsuzaki, N. Determination of Unsaturated Fatty Acid Composition by HighResolution Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy. J. Am. Oil Chem. Soc. 1998, 75, 1091-104.
1
3) Guillén, M. D.; Ruiz, A. High Resolution H Nuclear Magnetic Resonance in the Study of Edible Oils and
Fats. Trends Food Sci. Tech. 2001, 12, 328-338.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P EDU 02
Foros: herramientas virtuales de apoyo a la enseñanza de la Química Analítica
Bühl, Valery; Tissot, Florencia; Sanson, Pedro
Cátedra de Química Analítica. Facultad de Química. Universidad de la República. Montevideo, Uruguay
Introducción: Desde el año 2002 la Facultad de Química cuenta con su propio Entorno Virtual de
Aprendizaje (EVA) utilizando la plataforma Moodle, siendo una de las experiencias pioneras en la UdelaR
en el uso de Moodle para la enseñanza.
En el EVA se encuentran alojados más de 200 cursos, contando con más de 6000 usuarios registrados. Los
cursos de Química Analítica I, II y III cuentan con su espacio en la plataforma EVA.
Existen diferentes modalidades de uso del EVA en la enseñanza. En el caso de los cursos de Analítica, es
utilizado como complemento o recurso de apoyo a las clases presenciales. De esta forma se convierte en
una alternativa más que tiene el profesor a su alcance además de los recursos ya disponibles como por
ejemplo pizarrón o cañón proyector [1].
Los EVA combinan una gran variedad de herramientas: de comunicación síncrona y asíncrona, como chats,
foros de discusión, videoconferencias; para la gestión de los materiales; de gestión de los participantes,
incluidos sistemas de seguimiento y evaluación [2].
El objetivo del presente trabajo es conocer cuales son las herramientas del EVA más utilizadas y más
valoradas por docentes y estudiantes de Química Analítica.
Metodología: Se diseñó una encuesta y ésta fue propuesta a un grupo de docentes y estudiantes de los
cursos de Química Analítica. Se presentan algunas de las preguntas de dicha encuesta:
¿Para este curso cuáles recursos de la plataforma usas más?
¿Cuáles herramientas te parecen más útiles y cuales menos?
¿Para este curso, piensas que la plataforma facilita la comunicación?
Resultados: De las encuestas docentes surge que los foros son la principal vía de comunicación utilizada
por los estudiantes: “a veces están estudiando y se les están contestando dudas que envían desde la casa,
no tienen que venir a clase de consulta”.
Los estudiantes expresan que los foros de consulta son las herramientas más utilizadas: “La más útil, el foro
de consulta de teórico y práctico ya que podés descartarte dudas rápidamente”; “El foro te permite estar al
tanto del curso.”
Muchos estudiantes consideran que es más fácil comunicarse con los docentes por los foros, que en forma
presencial: “Podemos interactuar con ellos de esta forma. Facilita la comunicación”
Los foros de Novedades aparecen como una herramienta muy útil para que los estudiantes puedan estar al
tanto del curso. Un estudiante comenta: “se nos mantuvo actualizados con todo lo que se determinó en
cuanto a fechas, cambios de clases”.
Conclusiones: Desde la implementación del EVA, los foros han ido incorporándose paulatinamente a los
cursos de Analítica y al día de hoy se utilizan de forma habitual facilitando la comunicación entre docentes y
estudiantes y entre estudiantes.
Referencias:
[1] Area Moreira, M. Buenas prácticas de aulas virtuales en la docencia universitaria semipresencial. Teoría
de la educación: Educación y Cultura en la Sociedad de la Información, 2010, 11, 7-31.
[2] García Aretio, L. De la educación a distancia a la educación virtual. Barcelona: Ariel S. A., 2007.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P EDU 03
Una propuesta de mejora en la educación de la química analítica: la Unidad de
Cromatografía Experimental “Prof. Simón Dittrich”
1,2
1,3
1,3
1,4
1,3
Bardanca, María ; Valdomir, Guillermo ; Davyt, Danilo ; Knochen, Moisés ; Dellacassa, Eduardo ;
González, Gabriel1,5; Lorenzo, Daniel1,5
1
Unidad de Cromatografía Experimental
Departamento de Ciencias Farmacéuticas
3
Departamento de Química Orgánica
4
Departamento Estrella Campos
5
Departamento de Experimentación y Teoría de la Estructura de la Materia y sus Aplicaciones
Facultad de Química, Av. Gral. Flores 2124, CC 1157, Montevideo
2
Inaugurada en noviembre de 2013, la Unidad de Cromatografía Experimental “Prof. Simón Dittrich” de la
Facultad de Química (UCE, http://uce.fq.edu.uy) tiene como cometido la enseñanza práctica en
Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento (HPLC, High Pressure Liquid Chromatography).
La creación de la Unidad responde a la necesidad de actualización en tecnologías disponibles para los
estudiantes de grado y los egresados de Facultad de Química, fundamentalmente de equipos analíticos
como HPLC, uno de los más requeridos en la actividad profesional.
La Unidad hasta el momento ha brindado cursos de actualización para egresados a través del Programa de
Educación Permanente de Facultad de Química, estando en estudio la implementación de un curso de
grado para los estudiantes.
Se ha reciclado y acondicionado especialmente un laboratorio para desarrollar las clases, ubicado en el
edificio del Instituto de Química.Dicho laboratorio es patrimonio histórico de la institución, ya que allí fue
donde se realizaron las primeras experiencias de la técnica en el país.
Las actividades experimentales se realizan con 4 equipos HPLC de última generación y de reciente
adquisición (Agilent 1260), configurados con bomba cuaternaria, horno, detector de arreglo de diodos o
longitud de onda multivariable e inyector automático. Esta infraestructura permite trabajar hasta 16
estudiantes, realizando prácticas 4 personas por equipo.
El alcance de las capacitaciones que ofrece la UCE es ambicioso: desde los cursos básicos de HPLC que
se dictan actualmente (donde quien pocas veces ha usado un HPLC aprende a interactuar con el equipo,
realizar un análisis e imprimir un reporte), pasando por capacitaciones grupales a medida de los solicitantes
(empresas públicas o privadas), así como cursos avanzados de HPLC (aplicación intensiva del hardware y
software) a cargo de especialistas nacionales y/o extranjeros.
A la fecha se ha dictado el curso básico en dos oportunidades (noviembre de 2013 y julio de 2014),
habiéndose reportado un alto grado de satisfacción por parte de los asistentes tanto por la dinámica de
trabajo planteada como por la temática elegida y desarrollada en el curso. En varios casos se restaltó lo
innovadora que ha sido la propuesta así como la posibilidad de interactuar con los equipos en forma directa
y con un creciente grado de autonomía por parte del asistente al curso.
El curso básico hasta ahora dictado incluye una evaluación que consiste en la aplicación de todos los
contenidos desarrollados. Se plantea el desarrollo y optimización de un método cromatográfico para la
separación de tres analitos en una muestra de composición cualitativa conocida y la dosificación de uno de
ellos. Al finalizar se entrega un reporte analítico completo en donde se fundamenta la estrategia seguida
para la separación de los componentes en la muestra (si se emplea gradientes o se llevan a cabo corridas
cromatográficas isocráticas, volumen de inyección, composición de la fase móvil, temperatura del horno,
longitud de onda de detección), y se informan parámetros como resolución, número de platos teóricos,
factor de asimetría etc. Hasta el momentos los resultados fueron altamente satisfactorios habiendo
aprobado el 100% de los asistentes con buenca calificación.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P EDU 04
Estudio de casos: estrategia didáctica utilizada en el curso de Preparación de
Muestras para Análisis Químico
Bühl, Valery; Pistón, Mariela; Mollo, Alicia; Labandera, Fernando
Cátedra de Química Analítica. Facultad de Química. Universidad de la República. Montevideo, Uruguay.
El curso de Preparación de Muestras para Análisis Químico es un curso electivo para todas las carreras que
se brindan en la Facultad de Química de la Universidad de la República.
Los objetivos de este curso son complementar la formación en técnicas analíticas clásicas e instrumentales
modernas así como el tratamiento estadístico de datos adquiridos, con las herramientas necesarias para
preparar una muestra para su análisis. Este curso se impartió por primera vez en el año 2012.
La metodología de trabajo consiste en dos clases teóricas semanales de 1,5 hs. durante las primeras 10
semanas y 2 semanas de seminarios-taller.
Para los seminarios-taller, los docentes asignan a subgrupos de estudiantes diferentes situaciones, o
trabajos publicados en revistas científicas, que permitan la discusión crítica de los contenidos de los mismos
aplicando los conocimientos adquiridos.
En el acto educativo, según Elsa Gatti [1], hay tres procesos implícitos: enseñar (que privilegia el eje
docente-saber), aprender (que privilegia el eje estudiante-saber) y formar (que privilegia el eje docenteestudiante).
Existen algunos enfoques que intentan ver y pensar en la docencia desde la perspectiva del que aprende y
no del que enseña, privilegiando el eje “estudiante-conocimiento”, dándole más importancia a lo que se
aprende. El estudiante es el elemento activo y el docente sólo un facilitador. [1]
Dentro de las estrategias didácticas anteriormente mencionadas se encuentra el “estudio de casos” que
consiste en el planteo de situaciones problema reales a ser resueltas por los estudiantes. El “estudio de
casos” es siempre una oportunidad de aprendizaje significativo y trascendente en la medida en que quienes
participan en su análisis logran involucrarse y comprometerse tanto en la discusión del caso como en el
proceso grupal para su reflexión. [2]
En el curso de Preparación de Muestras se asignan los casos por sorteo. Los subgrupos son de tres o
cuatro estudiantes. Cada subgrupo cuenta con dos semanas para preparar su caso, pudiendo consultar
dudas a los docentes en forma presencial o mediante foros virtuales. Luego de esas dos semanas de
preparación, realizan una presentación del caso asignado al resto de los compañeros y a los docentes. En
general, los estudiantes apoyan su discurso mediante un programa de presentación visual. El tiempo
asignado para cada exposición es de 30 minutos. Todos los integrantes del equipo participan en la
exposición. Luego que los estudiantes presentan el caso, responden a las preguntas de los docentes. Éstas
están dirigidas a los integrantes del subgrupo. Los estudiantes responden y los docentes explican algunos
conceptos que pueden extraerse de ese caso también al resto de la clase.
Se evalúa la pertinencia de la resolución del caso, la claridad de la exposición y la resolución exitosa de las
preguntas realizadas.
Consideramos que el planteo de “estudios de caso” es muy enriquecedor, dado que el involucramiento e
interés de los estudiantes resultó excelente en la experiencia presentada, por lo que se continuará
empleando esta estrategia en las siguientes ediciones del curso.
[1] Gatti, E. Peré, N., Perera, H. Pedagogía Universitaria. Formación del docente universitario. Caracas:
UNESCO-IESALC. 2001.
[2] Niño Barajas E. Estudio de caso: una estrategia para la enseñanza de la educación ambiental. Praxis y
Saber.; 2012; 3; 53-78.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ELE 01
Desarrollo de una metodología electroanalítica para la detección de eugenol y
carvacrol en productos apícolas
Tonello, Natalia; Moressi, Marcela; D’Eramo, Fabiana; Marioli, Juan Miguel
Departamento de Química, Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas y Naturales, Universidad Nacional de Río Cuarto, ruta 36,
km 601, X5804BYA Río Cuarto, Argentina. [email protected]
Introducción
La varroasis es una afección de las abejas melíferas que causa pérdidas severas en la producción apícola.
El tratamiento se realiza mediante aplicación de acaricidas de síntesis: organofosforados, piretroides o
derivados de la formamidina. Sin embargo, su uso reiterado lleva a la acumulación de residuos y a la
aparición de resistencia del ácaro al medicamento empleado. Por lo tanto, se recomienda el uso de
acaricidas “suaves”, tales como ácidos orgánicos o aceites esenciales, cuyos residuos no ocasionarían
problemas a la salud humana, pero pueden producir cambios en las características organolépticas de la
miel. Por ejemplo, la presencia de algunos compuestos volátiles puede ser percibida por el ser humano
cuando su concentración supera los 1,6 mg/kg.
La determinación de estos compuestos alternativos tales como eugenol y carvacrol en estas matrices se
realiza generalmente por cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) con detección de fluorescencia o UVvisible con arreglo de diodos. Sin embargo, el empleo de técnicas electroquímicas es una alternativa
interesante debido a su alta sensibilidad y bajo coste dado que permite la determinación de residuos a nivel
de trazas.
En este trabajo se muestran los resultados preliminares de los estudios electroquímicos de carvacrol y
eugenol como componentes de aceites esenciales con el fin de desarrollar una metodología electroanalítica
para su determinación en matrices complejas como miel y cera.
Metodología
El estudio fue realizado aplicando técnicas voltamperométricas de barrido cíclico de potencial (VC) y de
onda cuadrada (VOC). El electrodo de trabajo fue de carbón vítreo y el de referencia de calomel saturado.
Se estudió el efecto de la concentración del analito, la velocidad de barrido de potencial (v) y del pH en las
respuestas electroquímicas. La v se varió entre 2x10-3 a 2,0 V s-1, la concentración de los analitos en el
-5
-5
intervalo de 1,0x10 M a 20x10 y el pH de 2 a 13. Los parámetros característicos de la VOC fueron:
amplitud de la onda cuadrada (∆Eoc) = 0,05 V, salto de escalera (∆Ee) = 0,01 V y la frecuencia (f) se varió
de 10 a 100 Hz.
Resultados y Discusión
Los estudios por VC muestran durante el barrido anódico un pico de oxidación a aproximadamente 0,30 V y
0,43 V para eugenol y carvacrol, respectivamente. No se observan, a todos los pHs estudiados, los
correspondientes picos complementarios cuando se invierte la dirección del barrido de potencial, al menos
en el rango de v estudiados, poniendo en evidencia un mecanismo de oxidación con reacciones químicas
acopladas a la transferencia de carga inicial. Dicho mecanismo fue corroborado mediante la aplicación de
1/2
diversos criterios de diagnóstico, tales como la variación de Ep vs. log(C*) y de la función corriente vs. v .
También se observó un marcado efecto del pH del medio de reacción sobre el Ep de las moléculas
estudiadas, obteniéndose relaciones lineales. La VOC se empleó para construir las curvas de calibración
correspondientes previa optimización de parámetros tales como amplitud y frecuencia, las cuales fueron
lineales en el rango de concentraciones estudiadas con buenos coeficientes de correlación.
100
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ELE 02
Generación Electroquímica de Especie Volátil de Arsénico Utilizando como Cátodo
Amalgama de Au/Hg
1
1
1
1
2
2,*
Caiminagua, Andrea ; Romero, Hugo ; Lapo, Byron ; Alvarado, José ; Fernández, Lenys
Universidad Técnica de Machala, Facultad de Ciencias Químicas y de la Salud, Apartado 070151, Machala, Ecuador
2
Departamento de Química, Universidad Simón Bolívar, Apartado 89000, Caracas 1080-A, Venezuela
En la generación electroquímica de especies volátiles como técnica de introducción de muestra para
Espectroscopia de Absorción Atómica, las interferencias de iones metálicos son un grave problema. Aunque
estas interferencias pueden ser eliminadas mediante previos métodos de separación, utilizando materiales
electródicos con bajo sobrepotencial de hidrógeno y electrolitos alcalinos para precipitar las sales de
interferentes; estos procesos aumenta el tiempo de análisis y el costo, reducen la eficiencia de la generación
del hidruros (1) y conllevan a la dispersión de precipitados en la interfase catódica. De aquí la importancia
de plantearse nuevos materiales catódicos para este tipo de estudio, no solo para que los mismos permitan
mayor tolerancia a las interferencias sino también aporten una mayor estabilidad mecánica; otros de los
inconvenientes que se ha presentado al momento de la aplicación de esta técnica. En el presente estudio se
reporta la generación electroquímica de la especie volátil de arsénico (Arsina), sobre un cátodo de
amalgama de Au/Hg en una solución de H2SO4 0,5 M. Los resultados obtenidos se compararon con otros
cátodos comúnmente utilizados en la generación electroquímica de vapor. Se estudiaron los efectos de las
condiciones de la electrólisis y los posibles iones de interferentes. Se obtuvo que el cátodo de Au/Hg tiene
una mayor tolerancia a las interferencias y la repetitividad de las mediciones sobre el mismo, es mejor al
comparase con el uso de cátodos de Au, Pt, Pb o de carbón vítreo reticulado. Bajo las condiciones optimas,
-1
el límite de detección (3 σ) para el As en soluciones acuosas fue 0,027 g L ; con desviación estándar
-1
relativa de 2,4% para 0,1 mg L de As. La exactitud del método fue verificada mediante la determinación de
As en un material de referencia certificado de sedimento marino. El método propuesto se aplicó en la
determinación del contenido de As en muestras de agua potable. Teniendo en cuenta la erosión de otros
cátodos en medio ácido (2,3), el cátodo de Au/Hg es una buena opción para la generación electroquímica
de As. La tolerancia a la interferencia del cátodo de Au se mejoró notablemente, proporcionando un bajo
límite de detección comparable con otros materiales. Sin embargo, no se recomienda para la especiación de
As.
Referencias
1 Wang-bing Zhang, Wu-er Gan, Xiang-qin Lin. Development of a new electrochemical hydride generator
with tungsten wire cathode for the determination of As and Sb atomic fluorescence spectrometry. Talanta;
2006; 68; 1316-1321.
2 María Saénz, Lenys Fernández, José Domínguez, José Alvarado. Electrochemical Generation of Lead
Volatile Species as a Method of Sample Introduction for Lead Determination by Atomic Absorption
Spectrometry. Electroanalysis; 2010; 22; 2842–2847.
3 María Saénz, Lenys Fernández, José Domínguez, José Alvarado. Electrochemical generation of volatile
lead species using a cadmium cathode.Comparison with graphite, glassy carbon and platinum cathodes.
Spectrochimica Acta Part B; 2012, 71-72; 107–111.
101
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ELE 03
Generación Electroquímica de Especie Volátil de Antimonio y su Determinación por
Espectroscopia Atómica
1
1
1
1
2
Ordóñez, Jessenia ; Romero, Hugo ; Lapo, Byron ; Alvarado, José ; Fernández, Lenys
2
Universidad Técnica de Machala, Facultad de Ciencias Químicas y de la Salud, Apartado 070151, Machala, Ecuador
2
Departamento de Química, Universidad Simón Bolívar, Apartado 89000, Caracas 1080-A, Venezuela
Los métodos de análisis que utilizan generación electroquímica de hidruros son ampliamente utilizados para
la determinación de As, Sb, Se, Sn y Bi a nivel de trazas. La principal ventaja de esta técnica es la preconcentración y separación del analito a partir de la matriz de la muestra, lo cual se traduce en mayor
sensibilidad y capacidad de detección, así como la supresión de interferencias durante la atomización.
Desafortunadamente, es un conceso en la literatura que los cátodos utilizados presenten deficiencias en la
estabilidad mecánica, poca tolerancia a las interferencias, y deben ser reemplazados periódicamente (1); de
allí la importancia en búsqueda materiales catódico convenientes. En el presente trabajo se evalúa el
comportamiento de la generación electroquímica de estibina (SbH3) sobre cátodos de oro, plata, oro
amalgamado y plata amalgamada, con la finalidad de optimizar un material electródico con características
útiles en la generación de esta especie volátil del Sb. Los mejores resultados se lograron con plata
amalgamada, en la cual la eficiencia de generación mayor que 70%. En general, los límites de detección se
-1
encontraron entre 0,041 y 0,07 g L , con una precisión superior a 4%. El análisis de un material de
referencia de sedimento marino mostró buena concordancia con los valores certificados para Sb. La celda
donde se llevó a cabo la reacción presenta un arreglo de electrodos que consta de un alambre metálico
como electrodo de trabajo, un alambre de platino en forma de espiral como ánodo y un electrodo de
referencia de Ag/AgCl, la cual puede ser fácilmente acoplada al espectrofotómetro de absorción atómica vía
un separador gas- liquido (2,3).
Referencias
1. E. Denkhaus, F. Beck, P. Bueschler,R.Gerhard, A. Golloch, Electrolytic hydride generation atomic
absorption spectrometry for the determination of antimony, arsenic, selenium, and tin – mechanistic aspects
and figures of merit, Fresenius J Anal. Chem 370 (2001) 735-743.
2. María Saénz, Lenys Fernández, José Domínguez, José Alvarado. Electrochemical Generation of Lead
Volatile Species as a Method of Sample Introduction for Lead Determination by Atomic Absorption
Spectrometry. Electroanalysis; 2010; 22; 2842–2847.
3. María Saénz, Lenys Fernández, José Domínguez, José Alvarado. Electrochemical generation of volatile
lead species using a cadmium cathode.Comparison with graphite, glassy carbon and platinum cathodes.
Spectrochimica Acta Part B; 2012, 71-72; 107–111.
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P ELE 04
Eletrodos nanoestruturados do tipo Nb¤ Nb2O5 como sensores de pH em soluções
etanólicas.
Silva, Elvandi; Bulhões, Luis Otavio S.
Centro Universitário Franciscano - Santa Maria - RS – Brazil
Medidas de pH são importantes para o controle de processo e tem amplas aplicações na indústria de
alimentos, na medicina e na área ambiental. Na produção de vinho a determinação do pH é uma ferramenta
de controle de qualidade para determinar as propriedades físico - químicas, características biológicas e
sensoriais dos vinhos [1]. A acidez influencia na qualidade e estabilidade do vinho [2]. O ácido tartárico é o
mais forte entre os ácidos orgânicos presentes no vinho e, portanto, tem uma influência determinante sobre
o pH e nas características sensoriais. Os eletrodos de vidro são utilizados para medir pH em soluções
aquosas, devido à alta sensibilidade, estabilidade e seletividade. No entanto, as desvantagens deste são a
fragilidade mecânica da membrana de vidro, a instabilidade em meio alcalino, dificuldade de miniaturização
e desidratação da membrana quando em contacto com o etanol. Eletrodos do tipo metal/óxido é uma
alternativa, pois são robustos e podem ser miniaturizados. Para esses sistemas um parâmetro importante é
a seleção de metal e a estabilidade do óxido em meios ácido e alcalino. Nb2O5 tem alta estabilidade química
+
em meios ácidos e alcalinos e possui elevada seletividade, com resposta rápida à presença de H em
solução. O eletrodo para medida de pH foi preparado por anodização de uma folha de Nb (99,8%, a Alfa
Caesar) de 0,127 milímetros de espessura e 1,5 cm2. Antes de anodização a folha de nióbio foi polida,
lavada com acetona e água deionizada. A anodização foi executada em 50 mL de solução 1:1 água e
-3
etilenoglicol, contendo 4% em volume de H3PO4 a 1 mol dm e 0,30 g de NaF. A anodização foi executada
utilizando um sistema de dois eléctrodos consistindo de um ânodo (Nb) e de cátodo (Pt), onde foi aplicada
uma corrente de 0,1 mA a 50 ° C, durante 1 h. Após a anodização, as amostras foram lavadas com água
deionizada e secas ao ar. Em seguida, as amostras foram tratadas termicamente a 400 ° C durante 30 min.
A morfologia do eletrodo Nb/Nb2O5 analisada por microscopia eletrônica de varredura mostra uma estrutura
duplex com a interface metal / óxido compacta (100 nm), e uma segunda estrutura formada por nanotubos
com cerca de 700 nm. As medidas de pH foram realizadas com uma solução tampão de MacIlvaine aquosa
e em soluções tampão hidroalcoolica (14 vol% de etanol) a 22 ° C. A diferença de potencial de cada solução
foi medida com o eletrodo de Nb/Nb2O5 e o eletrodo de referência Ag / AgCl, KCl 1M. Os potenciais medidos
em todas as soluções foram estáveis a ± 0,8 mV e uma dependência linear entre o potencial e pH foram
observadas no intervalo de pH 2 a pH 10. Uma inclinação de 28 mV / pH foi obtida a qual está de acordo
com aquela esperada para o sistema. O sistema Nb/Nb2O5 nanoestruturado é estável e pode ser usado
como um sensor de pH em soluções hidro-alcoólicas, sendo viável a sua utilização para determinar o pH de
vinhos e durante seu processo de fermentação.
1. CHAUREL, J. Effect of Potassium fertilization on soil, grapevine and wine in granitic soil. Progress
Agricole et Viticole, Montpellier, 2006, 123, 23,455-462.
2. ZOECKLEIN, B; FUGELSANG, K; GUMP, B; NURY, F. Análisis y Producción de Vino. Zaragoza,
Espanha: Acribia, 2001.
103
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P FAR 01
Digestão de fármacos assistida por radiação micro-ondas
1,2
1
Garcia, Mariana Ortega ; Nóbrega, Joaquim Araujo
1
GAIA, Departamento de Química, UFSCar
2
Nova Analítica LTDA
Introdução: Com objetivo de regulamentar a produção farmacêutica e firmar padrões de qualidade dos
produtos finais, organizações como a USP e EMEA estabeleceram normas que regulamentam os limites
máximos de exposição aos elementos alvo. Em dezembro de 2015 serão implementados os novos capítulos
da USP 232 e 233, que estabelecem limites e procedimentos para análise de impurezas metálicas. O
capítulo 233 estabelece os procedimentos para conduzir a análise elementar, do preparo da amostra à
determinação elementar, via ICP OES ou ICP-MS. Caso a amostra seja solúvel em água ou solvente
orgânico a preparação ocorre através de dissolução, caso contrário é necessário utilização da digestão do
material em frasco fechado (1).
Objetivo: Este trabalho tem como objetivo estabelecer procedimentos de digestão de fármacos assistida
por radiação micro-ondas seguida por determinação usando ICP OES ou ICP-MS.
Materiais e Metodologia: Para o desenvolvimento deste trabalho foram escolhidos, na lista de
medicamentos mais vendidos no Brasil, três fármacos com diferentes tipos de excipientes, visando testar a
aplicabilidade de uma única rampa de temperatura que seja capaz de digerir amostras de diferentes
composições. Para isso foi utilizado o sistema de digestão de amostras assistida por radiação micro-ondas
SpeedWave4, da Berghof. Esse sistema possui sensores que possibilitam a medida de temperatura e
pressão independente em cada um dos frascos, o que viabiliza que se faça a digestão de amostras de
diferentes composições em um mesmo ciclo de digestão. A duração do programa de aquecimento foi de 41
min e a temperatura máxima foi 210 oC.
Amostras de 100 mg ± 10% de Dorflex (comprimido), Salompas (emplastro) e Hipoglós (pomada) foram
submetidas à digestão utilizando diferentes misturas ácidas (mostradas na tabela). As amostras foram
sonicadas e, posteriormente, o teor de carbono dissolvido foi determinado por ICP OES.
Resultados: O teor de carbono dissolvido foi determinado operando o ICP OES em condições
convencionais e usando a linha de emissão atômica de 247,856 nm. Digeridos com menores teores de
carbono dissolvido refletem melhores condições de digestão, uma vez que houve maior conversão de
compostos orgânicos em CO2. Os teores (%) de carbono dissolvidos determinados estão apresentados na
tabela abaixo.
HNO3 conc HNO3 dil 75% HNO3 dil 50% 1HNO3:3HCl3HNO3:1HCl3HNO3:1H2SO4 3HNO3:1H2O2
Dorflex
0,08
0,07
0,14
0,10
0,05
0,07
0,11
Salompas
0,13
0,09
x
x
0,05
0,06
0,12
Hipoglós
0,15
0,09
x
x
0,07
0,06
0,14
Tanto HNO3 50% como água régia não foram capazes de diluir Salompas e Hipoglós. Este último
apresentou digestão completa apenas com o uso de HF. Já Dorflex e Salompas foram melhor digeridos pela
mistura 3HNO3:1HCl.
Conclusão: Conclui-se que sistemas assistidos por radiação micro-ondas são efetivos na digestão de
amostras de fármacos. O modelo SpeedWave4 de micro-ondas foi capaz de digerir diferentes amostras
usando uma única rampa de aquecimento.
Referências Bibliográficas
(1) The United States Pharmacopeia Convention, The United States Pharmacopeia, Chapter 233: Elemental
Impurities—Procedures, Revision Bulletin, Official February 1, 2013.
104
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P FAR 02
Análise total e de especiação de Hg em solução de lente de contato por ICP-MS
1
2
2
M. Siqueira, Bruno ; Kutscher, Daniel ; Wills, Julian ; Rottman, Lothar
2
1
2
Nova Analítica Imp. Exp., São Paulo, Brasil
Thermo Fischer Scientific, Bremem, Alemanha
Introdução
Embora haja consciência da exposição a fontes de mercúrio (Hg) em geral, e MeHg+ em particular, devido à
sua presença em amostras de alimentos, como peixe, menos importância é dada às espécies de
+
etilmercúrio (EtHg ou EtHgX). Uma das principais razões para isto é a degradação mais rápida e, por
conseguinte, a excreção de EtHg+ no corpo humano, que resulta em toxicidade crónica consideravelmente
inferior. Resta, no entanto fontes potenciais onde ingestão aguda de EtHg+ pode ocorrer, por exemplo, como
consequência da exposição ao tiomersal. Tiomersal são utilizados como um bactericida em multi-dose
(concentração típica 0,001 a 0,01%), e em outros produtos relacionados com a saúde, tais como gotas para
os olhos ou as soluções para lentes de contacto. O composto se hidrolisa em solução aquosa para formar
EtHg + e tiosalicilato que é um bactericida eficaz.
Objetivo
Desenvolver um método quantitativo para a determinação de Hg total e espécie de Hg em soluções para
lentes de contato.
Método
O espectrômetro de massa iCAP Qc, Thermo Fiscer Scientific foi utilizado para aquisição de dados. O iCAP
Q foi operado no modo single KED para todas a medidas. O cromatográfo iônico ICS-5000 foi acoplado ao
iCAP Q para análise de especiação. Os parâmetros operacionais estão nas duas tabelas a seguir:
Parâmetros Operacionais do iCAP Q
Potência de RF: 1550W
Gás de Nebulização: 1,05 L/min
injetor: 2mm I.D.
Interface: cone de amostragem de Ni
Dwell Time: 10ms, 100 ms para análise de
especiação
Modo de Análise: modo padrão (sem célula de gás)
Parâmetros Operacionais do Cromatógrafo
Eluição: Isocrático
Fase Móvel: 10mmol/L NaClO4; 10mmol/L de ácido acético; 10 mmol/L de cistina
Fluxo: 0,5 mL/min
Volume de Injeção: 20 µL
Duração: 5 min
105
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Resultados
+
Foi feito uma separação cromatográfica do EtHg proveniente da hidrólise do thimerosal. Também foi
analisada a recuperação de thimerosal adicionado.
Figura 1: Separação cromatográfica do EtHg+ derivado da hidrólise do thimerosal.
Amostra
Spike (mg/kg)
Recuperação (mg/kg)
% de recuperação
1
10,2
10,9 ± 0,04
108
2
18,1
18,8 ± 0,07
104
Conclusão
O iCAP Qc ICP-MS é capaz de analisar tanto o total quanto as espécies de Hg em solução de lente de
contato. O acoplamento com o cromatógrafo iônico foi operado utilizando o software Qtegra que controla os
dois equipamentos.
Referência
[1] Thimerosal in Vaccines Questions and Answers, US Food and Drug Administration;
http://www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/Vaccines/QuestionsaboutVaccines/UCM070430;
[2]
Statement
on
thiomersal,
World
Health
http://www.who.int/vaccine_safety/topics/thiomersal/statement_jul2006/en/index.html;
106
Organisation;
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P MET 01
Implementación de un proceso de calibración de balanzas en Facultad de Química
Barneche, Stephanie; Vignoli, Fernando; Lorenzo, Daniel
Taller de Instrumentos, DETEMA, Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay
Desde el tercer trimestre de 2012, el Taller de Instrumentos de la Facultad de Química ofrece el servicio de
calibración de balanzas a los distintos docentes e investigadores de la Institución. Para ello, se cuenta con
un juego de pesas E2 (según Recomendación OIML 111-1), marca Troemner de 200 g a 1 mg, con su
correspondiente certificado de trazabilidad al SI (Cert. Nº 1354292 con fecha 10/9/2013) y termohigrómetro
Radiance (calibrado Cert. Nº S13/32192 con fecha 11/10/2013, S13/32191 con fecha 15/10/2013).
Este proceso es novedoso dentro del ámbito universitario y permite a los distintos laboratorios contar con un
servicio dentro de la propia institución que les garantice la calidad de las medidas de masa, tanto en el
ámbito de investigación como para servicios a terceros.
El Taller ha capacitado a su personal entrenándolo para calibración de balanzas analíticas. Los
procedimientos correspondientes han sido documentados siguiendo los lineamientos de la “Guía para la
calibración de los instrumentos para pesar de funcionamiento no automático” SIM MWG7/cg-01/v.00 del
Sistema Interamericano de Metrología y la Recomendación OIML R 76-1 de la Organización Internacional
de Metrología Legal. A su vez, el Taller de Instrumentos es miembro de la Red de Laboratorios Secundarios
de Calibración (RLSC, http://www.redcalibracion.com.uy).
Como integrante de la RLSC, el Taller tiene como objetivo trabajar cumpliendo los requisitos de la Norma
ISO 17025, proponiéndose como meta la acreditación. La parte más visible de este camino está dada por
los certificados de calibración, emitidos también de acuerdo a la Norma en todos sus aspectos.
Durante más de un año el Taller ha calibrado varias balanzas utilizadas para diversos fines,
fundamentalmente clase I y II, en rangos de 0 a 500 g.
Se presentan los resultados de la metodología de trabajo implementada en la Facultad de Química
abordando principalmente dos enfoques: el técnico y el humano, entendiendo este último como la
importancia que los investigadores y docentes le asignan a las balanzas.
En base a estos resultados se ha encontrado algunas balanzas con determinada problemática, y en base a
ese diagnóstico se ha establecido una comunicación con los docentes e investigadores a los efectos de
tomar decisiones en relación a este instrumento. Se ha encontrado que muchas veces hay desconocimiento
del uso apropiado, fundamentalmente en lo vinculado a la pesada mínima.
La implementación de este tipo de procesos dentro del ámbito universitario es importante para garantizar la
calidad de los resultados que se generan en el mismo y además este servicio contribuye a la formación
docente y profesional de los integrantes de la institución.
107
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P MET 02
Determinação de chumbo em tubos de raios catódicos por diferentes técnicas
espectrométricas
1
1
1
2
1,3
Malmonge, Luiz F. ; Lima, Luiz R. M. ; Santana, Ariane M. ; Cadore, Solange ; Santos, M. C.
1
Departamento de Física e Química, Univ Estadual Paulista - Unesp, Ilha Solteira-SP
Grupo de Espectrometria Atômica, Instituto de Química, Universidade Estadual de Campinas - Unicamp, Campinas-SP
3
Grupo de Espectroanálise e Automação, Instituto de Química, Univ Estadual Paulista - Unesp, Araraquara-SP
2
No presente trabalho foram desenvolvidos métodos para a determinação de Pb em vidros provenientes de
tubos de raios catódicos (CRT). Para as análises foram utilizadas pequenas partes dos componentes do
CRT (televisão e computador) provenientes de diferentes fabricantes. Após a moagem, as amostras vítreas
foram analisadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV), espectroscopia por dispersão de energia
(EDS) e Difratometria por raios –X (DRX) para determinar o tamanho de partículas e a composição
elementar do material investigado. Para este estudo foi utilizada uma mistura de proporção de 1:1:1:4 em
peso (canhão de elétrons, pescoço, funil e tela). O tamanho das partículas foram 1,15-35,67 µm e o teor de
Pb no CRT proveniente do televisor e computador foram 21% e 20%, respectivamente. Para as análises por
espectrometria de absorção atômica em forno de grafite (GFAAS) as amostras foram digeridas em meio
ácido (2,4 mL de HCl, 1,2 mL HNO3, 2,4 mL de HF e 2,0 mL de H2O), onde cerca 125mg da amostra vítrea
foram adicionados em frasco de PTFE juntamente com a mistura ácida. A mistura resultante foi submetida
ao seguinte programa de aquecimento: Etapa 1: 7 min/ 500 W e Etapa 2: 7 min/ 550 W, Etapa 3: 5 min/
600W, Etapa 4: 5 min/ 630W e Etapa 5: 5 min/ 0W. Ao final da digestão os digeridos foram diluídos com
água deionizada até 50 mL. A concentração total de chumbo nos CRTs foi determinada por GFAAS e os
valores encontrados para duas misturas provenientes de diferentes amostras foram 735,52 ± 6,12 mg kg-1
(televisor) e 886,61 ± 5,49 mg kg-1 (computador). O limite de quantificação foi 2,40 mg L-1.
A toxicidade da amostra foi avaliada utilizando a norma ABNT NBR 10004:2004 para resíduos sólidos. A
mistura sólida foi submetida a ensaios de lixiviação e o extrato lixiviado foi analisado por espectrometria de
absorção atômica em chama (FAAS) e espectrometria de emissão atômica com plasma acoplado
indutivamente (ICP OES). A solução extratora foi preparada utilizando 5,7 mL de ácido acético glacial e 64,3
-1
mL de NaOH 1,0 mol L e volume ajustado para 1L. O pH desta solução foi 4,93. Um grama da amostra foi
tratado com 19,3 mL da solução extratora e posteriormente, foi colocada em banho Dubnoff sob agitação
por 18h à 25oC. A mistura resultante foi filtrada e líquido foi analisado por FAAS e ICP OES. As
concentrações de Pb obtidas nos extratos lixiviados foram 638,00 ± 14,00 mg kg-1 (televisor) e 668,72 ±
-1
-1
-1
54,78 mg kg (computador) por FAAS e 650,83 ± 8,67 mg kg (televisor) e 621,02 ± 11,90 mg kg
-1
(computador) por ICP OES. Os limites de quantificação foram 6,50 e 5,32 mg L para FAAS e ICP OES,
respectivamente.
Os resultados obtidos foram concordantes com 95% de confiança quando foi aplicado o teste t Student.e
indicaram que cerca de 85% do Pb presente no resíduo foi lixiviado. As duas técnicas foram adequadas
para a determinação de Pb em tubos de CRT, entretanto a ICP OES apresentou melhor precisão e
sensibilidade. Os testes lixiviação realizados para os resíduos de CRTs atingiram os valores de Classe I resíduo perigoso de acordo com a norma NBR 10004:2004, devido à alta concentração de chumbo presente
em sua composição.
108
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P MET 03
Avaliação da toxicidade de resíduos de pilhas e baterias empregando técnicas
espectrométricas
1,2
2
2
3
Santos, M. C. ; Santana, Ariane M. ; Lima, Luiz R. M. ; Cadore, Solange ; Malmonge, Luiz F.
2
1
Grupo de Espectrometria Atômica, Instituto de Química, Universidade Estadual de Campinas - Unicamp, Campinas-SP
2
Departamento de Física e Química, Univ Estadual Paulista - Unesp, Ilha Solteira-SP
3
Grupo de Espectroanálise e Automação, Instituto de Química, Univ Estadual Paulista - Unesp, Araraquara-SP
Neste trabalho foram desenvolvidos métodos de análise aplicados a baterias e pilhas. As amostras de pilhas
e baterias foram desmontadas e o material ativo (catodo, anodo e eletrólito) sofram separados e moídos
para análise. Com a Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Espectroscopia de Dispersão de Energia
(EDS) foi possível calcular o tamanho médio das partículas (8,08 a 22,96 µm) e determinar a presença dos
metais tóxicos. Foi identificado Cd apenas nas baterias de Níquel-Cádmio (NiCd), os demais elementos
potencialmente tóxicos (Cd, Cr e Pb) não foram detectados por esta técnica. Ainda para a caracterização do
material ativo das amostras e com auxílio da Difratometria de Raios-X (DRX) foi possível identificar a
presença dos compostos químicos no material ativo das amostras.
Para a determinação da concentração total de Cr, Cd, Ni e Pb, o material ativo das amostras foram
digeridos em meio ácido. Cerca 50 mg da amostra vítrea foram adicionados em frasco de PTFE juntamente
com 8,0 mL de água-régia. Depois de um repouso de 18 h, a mistura resultante foi submetida ao seguinte
programa de aquecimento: Etapa 1: 5 min/ 130oC, Etapa 2: 2 min/ 130oC, Etapa 3: 2 min/ 170oC, Etapa 4: 2
o
o
o
min/ 170 C, Etapa 5: 3 min/ 200 C e Etapa 6: 15 min/ 200 C. Ao final da digestão os digeridos foram
diluídos com água deionizada até 50 mL e a concentração dos analitos foram determinadas por
Espectrometria de Emissão Óptica com Plasma Acoplado Indutivamente (ICP OES). As concentrações
obtidas nos diferentes tipos de pilhas e baterias variaram de 0,90 – 2,73 mg kg-1 para Cr, 8,04 – 4561,58 mg
-1
-1
-1
kg para Cd, 2,29 – 1250,69 mg kg para Ni e 1,05 – 4,79 mg kg para Pb. Os desvios padrão relativos
-1
foram inferiores a 5%. Os limites de quantificação variaram de 0,03 à 0,50 mg L .
A toxicidade das amostras foi avaliada utilizando a norma ABNT NBR 10004:2004. A mistura sólida foi
submetida a ensaios de lixiviação e o extrato lixiviado foi analisado por Espectrometria de Absorção Atômica
em Chama (FAAS) e ICP OES. A solução extratora foi preparada utilizando 5,7 mL de ácido acético glacial
-1
e 64,3 mL de NaOH 1,0 mol L e volume ajustado para 1L. Um grama da amostra foi tratado com 19,3 mL
da solução extratora e posteriormente, foi colocada em banho Dubnoff sob agitação por 18h à 25oC. A
mistura resultante foi filtrada e líquido foi analisado por FAAS e ICP OES. Os resultados obtidos através das
duas técnicas utilizadas foram concordantes entre si, com a aplicação do Test t de Student com 95% de
confiança. As concentrações obtidas nos diferentes tipos de pilhas e baterias investigados variaram de 0,80
– 2,46 mg kg-1 para Cr, 6,67 – 4059,76 mg kg-1 para Cd, 2,00 – 1013,03 mg kg-1 para Ni e 1,00 – 4,47 mg
kg-1 para Pb. Os desvios padrão relativos foram inferiores a 5%. Os limites de quantificação variaram de
-1
0,03 à 0,96 mg L . Estes resultados indicaram que 85-95% dos analitos foram lixiviados e as amostras
analisadas são consideradas resíduos tóxicos.
109
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P OTR 01
Evolução da Viscosidade e Massa Específica em Amostras de Biodiesel Etílico de
Soja, em Função da Composição do Meio
De Freitas, José Anderson Silva; de Melo, Lucas Natã; Salgueiro, Bruno; Meneghetti, Mario Roberto;
Bortoluzzi, Janaína Heberle; Meneghetti, Simoni Margareti Plentz
Grupo de Catálise e Reatividade Química, Instituto de Química e Biotecnologia, Universidade Federal de Alagoas, Av. Lourival de Melo
Mota, Cidade Universitária, Maceió - AL, Brasil
Amostras de biodiesel etílico de soja foram obtidas por transesterificação, na presença de NaOH, variandose as condições reacionais, com o intuito de obter-se entre 0 e < 98 % de conversão em ésteres etílicos.
Praticamente não houve separação de fases e, portanto a maior parte das caracterizações foi realizada na
mistura reacional. Segundo a literatura, a dificuldade de separação de fases é observada com frequência na
etanólise e butanólise (1).
Inicialmente a composição do meio, em termos de B100, TAG, DAG e MAG foi determinada por HPLC e CG
e avaliada para as amostras em que não ocorreu separação de fases (Figura 1). Conforme esperado,
verifica-se que à medida que os monoésteres etílicos são formados, diminui-se proporcionalmente a
quantidade de TAG na reação (2). Em relação ao teor de MAG e DAG, os mesmos se formam e são
consumidos e os teores tendem a diminuir ao longo do processo (2).
Figura 1. Composição do meio ao longo da transesterificação de óleo de soja com etanol.
MAG=monoacilglicerídeos; DAG=diacilglicerídeos e TAG=triacilglicerídeos.
Com a finalidade de compreender como tais parâmetros físico-químicos estão relacionados com a
composição do meio, as correlações entre o rendimento em monoésteres etílicos, a viscosidade cinemática
e a massa específica estão apresentadas na Figura 2. A evolução dessas propriedades foi inversamente
proporcional ao teor de monoésteres etílicos, ou seja, quanto maior a conversão menor a viscosidade
cinemática ou a massa específica da fase biodiesel bruto. Tal comportamento está relacionado às
interações intermoleculares presentes no óleo de soja e no biodiesel, o que tem influência significativa sobre
os valores de viscosidade e massa específica (3).
110
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Figura 2. Relação obtida entre a viscosidade cinemática e a massa específica da mistura reacional e o
rendimento de conversão da reação de transesterificação de soja com etanol.
Não foi possível estabelecer correlações ou tendências entre os teores de DAG e MAG e as propriedades
avaliadas e esse comportamento pode estar relacionado à complexidade do meio.
Através deste estudo foi possível comprovar correlações entre os parâmetros físico-químicos massa
específica e viscosidade cinemática com a composição do meio durante a reação de transesterificação de
óleo de soja com etanol, no que diz respeito ao teor de monoésteres e TAG presentes. Pelo conjunto de
resultados analisados, é possível afirmar que a composição do meio em termos de resíduos de
catalisadores, teor de álcool e água, entre outros, não apresenta influência significativa nas propriedades
físico-químicas estudadas. Essas são principalmente influenciadas pela composição do meio em termos de
B100 e TAG, mesmo que impurezas e contaminantes estejam presentes.
(1) ZHOU, W.; KONAR, S.K.; BOOCOCK, D.G.B. Ethyl Esters from the Single-Phase Base-Catalyzed
Ethanolysis of Vegetable Oils, JAOCS, 2003, 80, 367-371.
(2) SUAREZ, P. A. Z.; MENEGHETTI, S. M. P.; MENEGHETTI, M. R.; WOLF, C. R. Transformação de
Triglicerídeos em Combustíveis, Materiais Poliméricos e Insumos Químicos: Algumas Aplicações da
Catálise na Oleoquímica. Quim. Nova. 2007, 30, 667-676.
(3) KNOTHE, G. Dependence of Biodiesel Fuel Properties on the Structure of Fatty Acid Alkyl Esters. Fuel
Process. Technol. 2005, 86, 1059-1070.
111
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P OTR 02
Síntese de um novo sorvente com íons impressos para aplicação em sistema de
pré-concentração de chumbo
1
1
1
Silva Assis Felix, Caio ; Novaes, Cleber Galvão ; Alves Barreto, Jeferson ; da Silva, Erik Galvao P.
2
1
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia - UESB, Departamento de Química e Exatas, Av. José Moreira Sobrinho s/n,
Jequiezinho, CEP: 45206-190, Jequié-Bahia-Brasil.
Universidade Estadual de Santa Cruz – UESC, Departamento de Química e Exatas, Campus Soane Nazaré de Andrade (Salobrinho),
Km 16 - BR-415, BA, 45662-900
*[email protected]
2
A longa exposição ao chumbo pode causar danos à saúde. Quando em contato com os seres humanos
provoca vários problemas de saúde, tais como, danos ao rim, fígado, sistema nervoso, etc. A busca por
-1
métodos analíticos com capacidade de determinar íons metálicos em baixas concentrações (≤ µg L ), tem
crescido de forma exponencial nos últimos anos [1]. Neste trabalho, é proposta a síntese de IIP para a préconcentração e determinação de chumbo. O IIP foi preparado convencionalmente pelo método conhecido
por polimerização em “bulk” ou polimerização em massa, onde a reação é realizada em sistema
homogêneo, são reações moderadamente exotérmicas e o aumento da viscosidade no meio é relativamente
rápida [2]. A síntese do polímero se processa em duas etapas. Na primeira, ocorre a formação do complexo
com os reagentes 2-2 tiazolilazo - p - cresol juntamente com o nitrato de chumbo, já na segunda etapa
ocorre a polimerização do complexo com os monômeros etilenoglicol dimetacrilato (EGDMA) e ácido
metacrílico juntamente com o iniciador radicalar 2-2 – Azobisisobutironitrila (AIBN). A resina sintetizada foi
empacotada em uma minicoluna (0,8 cm x 5,0 cm) com uma massa de 300 mg, e aplicada em um sistema
em fluxo acoplado a um espectrômetro de absorção atômica com chama na determinação de chumbo.
-1
Alguns parâmetros analíticos foram obtidos como: pH 8,0; vazão da amostra 5,0 mL min , concentração do
-1
eluente de 0,1 mol L (HNO3) e tempo de pré-concentração de 60 segundos.
[1] ÁVILA, T. C. et al. Emprego de sílica gel organicamente modificada e impressa ionicamente para préconcentração seletiva on line de íons cobre. Quim. Nova, Química Nova, 2010, 33, 301-308.
[2] MANO, E.B.; MENDES, L.C.; Introdução a polímeros, 2º Edição. Rio de Janeiro: Editora EDGAR
BLUCHER, 1999.
112
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P PRO 01
Efecto de PknG de Mycobacterium tuberculosis sobre el proteoma de fagosomas
murinos
1
1
1,2
3
1,3
Lima, Analía ; Gil, Magdalena ; Portela, María Magdalena ; Álvarez, María Noel ; Batthyány, Carlos ;
Durán, Rosario1
1
Unidad de Bioquímica y Proteómica Analíticas, Institut Pasteur de Montevideo e IIBCE
2
Facultad de Ciencias (UdelaR)
3
Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina (UdelaR)
Mycobacterium tuberculosis es capaz de sobrevivir en macrófagos del hospedero mediante la inhibición del
proceso de maduración de fagosomas. Se ha postulado que la Ser/Thr-quinasa PknG de M. tuberculosis
cumple un papel importante en este proceso ya que micobacterias deficientes en PknG muestran un
fenotipo atenuado y son rápidamente degradadas en fagosomas maduros [1]. Más aún, nuestros propios
resultados previos muestran que en un modelo de fagocitosis utilizando macrófagos tratados con partículas
de látex cargadas con la quinasa activa, inactivada o proteínas control, PknG aislada tiene un efecto
inhibitorio en el proceso de maduración fagosomal [2]. Sin embargo, aún no se conoce el mecanismo
mediante el cual PknG ejercería este efecto. Con el objetivo de elucidar las vías moleculares involucradas
en este proceso, en este trabajo nos planteamos estudiar el efecto de PknG aislada sobre el proteoma de
fagosomas murinos. Con este fin, llevamos a cabo un estudio proteómico diferencial de fagosomas tratados
con PknG y con PknG inactivada. Se realizaron ensayos de fagocitosis de partículas de látex con estas
proteínas unidas a su superficie. Los fagosomas fueron aislados por ultracentrifugación en gradiente de
sacarosa, las proteínas fagosomales se separaron por electroforesis bidimensional y las proteínas
diferenciales fueron identificadas por espectrometría de masa usando un equipo de tipo MALDI TOF/TOF. A
través de esta estrategia logramos identificar varias proteínas diferenciales, específicamente detectadas en
fagosomas tratados con PknG, que cumplen roles importantes en distintas funciones fagosomales.
Actualmente, con el fin de profundizar estos análisis, estamos implementado una estrategia de proteómica
diferencial cuantitativa basada en electroforesis de fluoresencia diferencial (DIGE).
[1] Walburger, A. et al. Protein Kinase G from Pathogenic Mycobacteria promotes Survival Within
Macrophages. Science. 2004. 18; 304:1800-1804
[2] Lima, A. et al. Caracterización del efecto de PknG de Mycobacterium tuberculosis sobre la maduración
de fagosomas. 8vas Jornadas de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular. 2013.
http://www.iibce.edu.uy/SBBM/Docs/jornadas/jornadas2013/2013_PROGRAMA%20SBBM.pdf
113
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P PRO 02
Análisis proteómico comparativo de dos cepas de Pseudomonas aeruginosa con
diferente capacidad de adhesión a superficies celulares mediante 2D DIGE/MALDI
TOF TOF
Rossello, Jessica1; Lima, Analía1; Kierbel, Arlinet2; Durán, Rosario1,3
1
Unidad de Bioquímica y Proteómica Analíticas, Institut Pasteur de Montevideo
²Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Rodolfo Ugalde", Buenos Aires
³Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente Estable, MEC
Introducción: Pseudomonas aeruginosa (PA) es un patógeno oportunista capaz de causar la muerte a
er
individuos inmunocomprometidos. Representa un problema importante a nivel de la salud, ya que es el 3 o
to
4 aislamiento hospitalario más común [1]. Constituye la principal causa de muerte en individuos con
Fibrosis Quística, siendo la formación de biofilms un factor clave en la resistencia a antibióticos y la
cronicidad de la infección [2]. La transición desde una forma de vida planctónica a una asociada a
superficie, es un paso temprano crucial en la formación de biofilms y el establecimiento del proceso
infectivo. En este sentido, nuestro grupo de trabajo ha demostrado que una cepa de PA que sobre-expresa
una fosfodiesterasa específica que degrada al segundo mensajero c-di-GMP, es incapaz de adherirse a la
superficie celular. A partir de estos resultados nos propusimos estudiar las bases moleculares de la
adhesión de PA sobre la superficie celular.
Objetivo: Determinar diferencias a nivel de proteínas secretadas y de membrana entre dos cepas de PA
con distinta capacidad de adhesión a superficies celulares.
Metodología: Para llevar a cabo el objetivo se utilizó la técnica de proteómica cuantitativa 2D DIGE (two
dimensional difference gel electrophoresis). Esta tecnología permite comparar distintas condiciones
biológicas en forma cuantitativa a partir de un análisis proteómico, utilizando la espectrometría de masa
como herramienta de identificación. Brevemente, se marcaron las proteínas de ambas cepas de PA con dos
fluoróforos distintos(Cy3 & Cy5) se mezclaron y separaron en un mismo gel 2D junto a un estándar
consistente en una mezcla equimolar de ambas muestras marcada con un tercer fluoróforo (Cy2). Los geles
fueron analizados con un sistema de adquisición de imágenes/software (Typhoon FLA-9500/ DeCyder 2D,
GE) que detecta diferencias en la abundancia relativa de proteínas en forma precisa. La identidad de las
proteínas diferencialmente expresadas se determinó mediante espectrometría de masas de tipo MALDI
TOF-TOF.
La tecnología de 2D-DIGE minimiza el problema de variabilidad entre los geles, disminuye el tiempo de
análisis y permite una cuantificación y comparación más precisa y sensible de los perfiles de expresión
proteica.
Resultados y conclusiones: Como resultado de la aplicación de la tecnología de 2D DIGE / MALDI TOFTOF a nuestro problema planteado se generó una lista de candidatos implicados en la adhesión de PA a la
superficie celular. Recientemente, algunos de estos candidatos proteicos han sido biológicamente validados
por nuestro grupo de trabajo.
Algunas de éstas proteínas podrían representar buenos candidatos como blancos para la intervención
terapéutica. La búsqueda de estrategias alternativas, que apunten no sólo a eliminar a la bacteria
planctónica, sino a evitar la formación de biofilms son hoy en día de gran interés, debido a la barrera que
éstos imponen frente al tratamiento con antibióticos
Referencias:
[1] K. Todard, Todard’s online textbook of bacteriology (2008). Disponible en www.textbookofbacteriology.net
[2] Mandell GL, Bennett JE & Dolin R. Principles and Practice of Infectious Diseases. New York, Churchill
Livingstone Inc. (2000) 4320p.
114
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 01
Estrategias de selección aplicadas a cuantificación y clasificación mediante
cuadrados mínimos parciales (PLS)
1
1
1
1,
Allegrini, Franco ; Pisano, Pablo L. ; Olivieri, Alejandro C. *
Departamento de Química Analítica, Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario, Instituto
de Química Rosario (IQUIR-CONICET), Suipacha 531, Rosario, S2002LRK, Argentina
*E-mail: [email protected] (A.C. Olivieri)
Actualmente, PLS (Partial Least-Squares) [1] es considerado como un método de referencia en la mayoría
de las aplicaciones en calibración multivariada de primer orden, y existen numerosos libros y artículos
referidos a este modelo. Cuando se utiliza con fines cuantitativos, se ha demostrado que la selección de
variables, métodos de preprocesamiento matemático y muestras representativas, constituyen una
herramienta potente de optimización. Si bien existen algoritmos específicos para efectuar cada una de estas
tareas de manera separada, hasta el momento se realizaron muy pocos intentos para tratar de integrar las
tres actividades en una única estrategia de optimización combinada [2]. Con este objetivo, en este trabajo
se presenta el algoritmo ACOGASS, que utiliza de manera conjunta e integrada la Optimización por
Colonias de Hormigas (ACO, Ant Colony Optimization) para seleccionar variables, un Algoritmo Genético
(GA, Genetic Algorithm) para elegir combinaciones óptimas de métodos de preprocesamiento matemático y
distintas metodologías de selección de muestras (SS, Sample Selection) basadas en distancias. El análisis
de las cifras de mérito y otros indicadores muestra una mejora significativa en la calidad predictiva de PLS
cuando es optimizado por medio de la estrategia propuesta y aplicado a NIRS (Near Infrared Spectroscopy).
Otra técnica de selección de variables existente para PLS es el cálculo de la importancia de la variable en la
proyección o VIP (Variable Importance in the Projection) [3]. Los datos instrumentales obtenidos en un
estudio de vinos tintos mediante LC-MS fueron procesados mediante dos modelos de UPLS-DA (Unfolded
PLS - Discriminant Analysis) diseñados para discriminar las muestras. Dichos modelos lograron una
clasificación de los varietales Malbec, Merlot y Cabernet Sauvignon del resto de las muestras, mientras que
respecto al origen geográfico, las regiones este, sur y norte de la provincia de Mendoza (Argentina) se
discriminaron del resto. En este caso, el análisis de los VIPs se realizó para identificar los compuestos clave
que ayudaron a discriminar las muestras, y permitió, por comparación con los datos existentes en la
literatura, la identificación tentativa de antocianinas derivadas de malvidina como los compuestos
responsables de ambos tipos de discriminación.
1. Sjöström, M.; Wold, S.; Lindberg, W.; Persson, J.-Å.; Martens, H., A multivariate calibration problem in
analytical chemistry solved by partial least-squares models in latent variables. Analytica Chimica Acta 1983,
150 (0), 61-70.
2. Devos, O.; Duponchel, L., Parallel genetic algorithm co-optimization of spectral pre-processing and
wavelength selection for PLS regression. Chemometrics and Intelligent Laboratory Systems 2011, 107 (1),
50-58.
3. Mehmood, T.; Liland, K. H.; Snipen, L.; Sæbø, S., A review of variable selection methods in Partial Least
Squares Regression. Chemometrics and Intelligent Laboratory Systems 2012, 118, 62-69.
115
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 02
Desarrollo de un método analítico para la cuantificación de residuos de agrotóxicos
en manzanas empleando espectroscopia de fluorescencia y calibración
multivariada
1
Montemurro, Milagros1; Culzoni, María Julia1; Goicoechea, Héctor1; Véras, Germano2; Ugulino de Araújo,
Mário Cesar3
Laboratorio de Desarrollo Analítico y Quimiometría (LADAQ), Cátedra de Química Analítica I, Universidad Nacional del Litoral, Santa
Fe, Argentina
2
Departamento de Química, Universidad Estatal da Paraíba, Campina Grande, Paraíba, Brasil
3
Departamento de Química, Universidad Federal da Paraíba, João Pessoa, Paraíba, Brasil
El aumento del consumo de manzanas y otras frutas que contienen residuos de agrotóxicos, sumado al
desconocimiento de su toxicidad crónica en humanos, puede causar serios daños a la salud pública. La
utilización masiva de agroquímicos y el consiguiente avance de la legislación regulatoria en este campo dan
origen a una continua demanda de métodos para la determinación de residuos de estas sustancias en
alimentos, a los fines de garantizar la seguridad alimentaria de la población.
En este trabajo se desarrolló un método para la determinación de agrotóxicos en manzanas por
espectroscopia de fluorescencia y calibración multivariada de segundo orden. Los compuestos estudiados
fueron: clorpirifos (CPF), pirimifos-metil (PMF), azinfos-metil (AZF), diclorvos (DCV) y dicofol (DCV).
En primer lugar, se evaluó el efecto de diferentes medios organizados en la inducción o exaltación de la
señal fluorescente de los analitos de interés. Estos macrocompuestos pueden acomodar el solvente en
regiones con propiedades particulares y secuestrar solutos en ambientes distintos respecto al cuerpo de la
solución, mejorando la detección y/o cuantificación de analitos a través de cambios inducidos por la
asociación analito-medio organizado. Se estudiaron tres ciclodextrinas: α, β y γ- ciclodextrina, y siete
surfactantes: lauril sulfato de sodio (SDS), bromuro de dodeciltrimetilaminio (DTAB), bromuro de
hexadeciltrimetilamonio (CTAB), cloruro de hexadeciltrimetilamonio (HTAC), 4-(1,1,3,3-tetrametilbutil) fenilpolietilen glicol (Triton x-100), polioxietilen dodecil eter (Brij 35), polisorbato 20 (Tween 20). Para cada uno
de los analitos en cuestión se evaluó el aumento de la intensidad de fluorescencia en función de la
concentración de ciclodextrina o surfactante agregado. A partir de estos ensayos se evidenció que los
reactivos que producen el mayor aumento en la intensidad de fluorescencia son SDS, HTAC, Brij 35 y γciclodextrina, y, por lo tanto, se seleccionaron para continuar con el desarrollo del método. Con el objetivo
de hallar las condiciones óptimas que permitieran maximizar la señal de fluorescencia de todos o la mayoría
de los pesticidas en estudio de manera simultánea, y además aumentar la selectividad mediante la
generación de cambios en los espectros de fluorescencia, se aplicaron herramientas de diseño
experimental, a través de las que se establecieron los valores de variables tales como naturaleza y
concentración de medio organizado, pH, temperatura, etc.
Una vez optimizado el sistema, se prepararon estándares de calibración y un juego de validación, y se
generaron matrices de excitación-emisión de fluorescencia para cada muestra. Los datos obtenidos se
analizaron mediante algoritmos de calibración multivariada de segundo orden (MCR-ALS, PARAFAC, UPLS/RBL). Los límites de cuantificación alcanzados fueron del orden de los 0,05 mg L-1, lo que permite
detectar los niveles máximos de residuos establecidos por el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad
Agroalimentaria (SENASA). El método se empleó para cuantificar de manera satisfactoria residuos de
agroquímicos en muestras de manzanas sin pasos previos de pretratamiento y en presencia de
interferencias no modeladas.
116
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 03
Modelado de datos de segundo orden generados a partir de cromatografía líquida
de alta resolución con detección de fluorescencia de barrido rápido para la
determinación de 7 fluoroquinolonas en agua residual. Exaltación de fluorescencia
por agregado de Ytrio
1
Alcaráz, Mirta R.1; Montemurro, Milagros1; Culzoni, M. Julia1; Goicoechea, Héctor C.1
Laboratorio de Desarrollo Analítico y Quimiometría (LADAQ), Cátedra de Química Analítica I, Facultad de Bioquímica y Ciencias
Biológicas, Universidad Nacional del Litoral, S3000ZAA Santa Fe, Argentina.
En este trabajo se presenta el desarrollo de un método por cromatografía liquida de alta resolución con
detección de fluorescencia de barrido rápido combinado con resolución multivariada de curvas extendida
mediante cuadrados mínimos alternantes (MCR-ALS extendido) para la cuantificación de 7 fluoroquinolonas
en muestras de agua residual en presencia de itrio (Y+3).
El Y+3 en solución no presenta características fluorescentes, pero se ha demostrado que aumenta
significativamente la fluorescencia nativa de ciertas fluoroquinolonas mediante la formación de complejos de
coordinación [1]. Las fluoroquinolonas utilizadas en este trabajo fueron ciprofloxacina (CPF), enrofloxacina
(ENF), norfloxacina (NRF), ofloxacina (OFL), enoxacina (ENO), flumequina (FLU), sarafloxacina (SRF),
danofloxacina (DNF) y difloxacina (DIF); todas ellas presentan fluorescencia. La utilización de Y+3
incrementa la fluorescencia de estos analitos, disminuyendo así los límites de detección y cuantificación,
llegando a límites comparables con métodos de mayor complejidad.
En primer lugar, se evaluó espectrofluorimétricamente el efecto del Y+3 en la exaltación de la señal
fluorescente de las fluoroquinolonas de interés 3, en un rango de pH de 4 a 9, así como también posibles
corrimientos de los máximos de emisión y excitación de fluorescencia. La condición óptima fue aquella que
generó tanto la máxima intensidad de fluorescencia para todos los analitos, como un corrimiento espectral
que permita diferenciar aquellas fluoroquinolonas que presentaron el mismo espectro (NRF, CPF y ENF por
un lado, y SRF y DIF, por el otro). A continuación, se procedió a optimizar el sistema cromatográfico de
manera tal de obtener la máxima resolución cromatográfica entre los analitos que presentan espectros de
emisión iguales.
El método cromatográfico se desarrolló en modo isocrático, utilizando una fase móvil de buffer Tris (20
mmol/L, pH=4, adicionado con Y+3 en una concentración de 1x10–4 mol L–1) /acetonitrilo/metanol. Se trabajó
–1
con un flujo de 2,20 mL min y a una temperatura de horno de columna de 40ºC. Se utilizó una columna
Zorbax Eclipse C18 4,6 × 75 mm y 3,5 µm de tamaño de poro. A cada tiempo cromatográfico se registró el
espectro de emisión en el rango entre 340 nm y 510 nm a una longitud de onda de excitación de 280 nm.
Para la calibración, se prepararon estándares de cada una de las fluoroquinolonas en 5 niveles de
concentración entre 0 y 90 ppb por triplicado, y para la validación, 12 mezclas de estándares de las 7
fluoroquinolonas en agua MilliQ por duplicado. Todas la muestras se prepararon transfiriendo cantidades
adecuadas de cada analito a matraces de 5 mL, agregando 5 µL de Y+3 0,1 mol L–1 y llevando a volumen
con agua MilliQ. Para cada muestra, se registraron matrices de tiempo-emisión de fluorescencia, generando
datos de segundo orden que luego se analizaron mediante MCR-ALS extendido.
El método desarrollado permitió cuantificar los analitos de interés en muestras de agua residual, en
presencia de interferencias no modeladas, obteniendo límites de detección y cuantificación en el orden de
ppt, sin necesidad de preconcentración.
Referencias
1) Tong, C.; Zhuo, X.; Guo, Y.; Fang, Y.. The fluorescence characteristic of the yttrium–norfloxacin system
and its analytical application. J Lumin; 2010; 130; 2100-2105.
117
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 04
Aplicación de la espectroscopía NIR para evaluar parámetros de calidad nutricional
del jugo de naranja de la variedad Valencia
1
2
3
Miró, Esteban; Pistón, Mariela ; Dellacassa, Eduardo ; Boido, Eduardo
1
2
Química Analítica, Departamento Estrella Campos
Farmacognosia y Productos Naturales, Departamento de Química Orgánica
3
Sección Enología, Departamento de Ciencia y Tecnología de Alimentos
Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay
[email protected]/[email protected]
La determinación rápida de parámetros que permiten decidir sobre la calidad de las materias primas y
productos terminados es un objetivo fundamental para dentro de la industria alimentaria. Estas
metodologías deben ser, además, de bajo costo y confiables para obtener resultados comparables con los
que se obtienen mediante las metodologías indicadas por los métodos estándar. En este sentido, la
industria ha incorporado la técnica de espectroscopia en el infrarrojo cercano (NIR) como una opción viable
y eficiente.
Para los cítricos, se han reportado trabajos donde se correlacionan diferentes factores vinculados con la
calidad de la naranja y medidas en el NIR. En este trabajo, se estudió la posibilidad de correlacionar el
contenido de sodio, potasio, calcio, hierro, magnesio, ácido ascórbico, acidez y sólidos totales en el jugo de
naranja (Citrus sinensis) de la variedad Valencia, con los espectros obtenidos mediante espectroscopía NIR
del jugo.
Las muestras de naranjas se recogieron semanalmente (setiembre-noviembre) de distintos cuadros de las
plantaciones comerciales de Azucitrus S.A. (Paysandú). Las determinaciones de sodio y potasio se
realizaron mediante espectrometría de emisión atómica de llama y las de calcio, hierro y magnesio mediante
espectrometría de absorción atómica de llama. La acidez se midió por titulación ácido base y el contenido
sólidos totales por refractometría. El contenido de ácido ascórbico se determinó mediante HPLC.
La obtención de los espectros NIR (1000-2500 nm) se realizó utilizando un equipo PerkinElmer Spectrum en
la modalidad de refractancia. El software “The Unscambler” (Versión 7.5, CAMO, Noruega) se utilizó para el
análisis quimiométrico. La calibración se realizó por regresión de mínimos cuadrados parciales (PLS) con
validación cruzada completa. Las calibraciones obtenidas se evaluaron mediante la pendiente de la gráfica
de los valores medidos y predichos por el modelo para el set de validación, la correlación, el error estándar
de predicción (SEP), y la desviación predictiva residual (RPD) calculada como el cociente entre la
desviación estándar de la población de datos y el error estándar de predicción (SD/SEP).
Los resultados obtenidos mostraron que los metales livianos, que presentan enlaces con moléculas
orgánicas, como el calcio, pueden presentar buenas correlaciones cuando su contenido es determinado por
NIR y por métodos químicos.
Para los elementos más pesados (como el hierro), disminuyó la correlación. Para metales muy solvatados
(sodio y potasio) no se obtuvieron correlaciones aceptables. La buena correlación encontrada entre la
determinación de parámetros en jugo de naranja y el contenido de calcio, señala que la espectroscopía NIR
representa un buen indicador de predicción. En el caso de los demás parámetros estudiados los resultados
no fueron concluyentes. La importancia del calcio para un desarrollo saludable, y los productos lácteos
como su fuente natural más importante, determinan la importancia de su consumo desde fuentes
alternativas como jugos, y la necesidad de metodologías analíticas rápidas como la descripta.
En resumen, en este trabajo se demostró la capacidad de la espectroscopía NIR, y el papel de la
quimiometría, en el desarrollo de metodologías rápidas y eficientes para la predicción de la calidad
nutricional del jugo de naranja Valencia.
118
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 05
Aplicação de cartas de controle multivariadas e MIR para o controle de qualidade de
misturas de biodiesel/diesel de algodão (B7)
1
1
1
2
Guimarães, Eloiza ; Mitsutake, Hery ; Gontijo, Lucas Caixeta ; Santos, Douglas Queiroz ; Borges Neto,
Waldomiro1
1
Instituto de Química, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
Escola Técnica de Saúde, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
2
No Brasil, a medida provisória no647 estabelece a adição de 7% (v/v) de biodiesel no diesel (B7) a partir de
Novembro de 2014. O algodão apresenta destaque na cadeia produtiva de biodiesel, por se tratar de
subproduto e ter custo inferior aos demais óleos vegetais [1]. A principal forma de adulteração desta mistura
é pela adição de óleos mais baratos, podendo esse tipo de prática danificar os motores. Neste contexto, o
trabalho desenvolveu uma metodologia utilizando cartas de controle multivariadas e espectroscopia no
infravermelho médio para o controle de qualidade de misturas biodiesel/diesel de algodão no que se refere
a adulterações com óleos (soja, milho e residual) na faixa de concentração de 5 a 30% (v/v).
Foram preparados os seguintes grupos de amostras: I- diesel puro (10 amostras), II- amostras dentro do
controle para a calibração (20), III- amostras dentro do controle para a validação (10), IV a VI- amostras
adulteradas (20 amostras por grupo).Os espectros foram obtidos em quintuplicata, na região entre 4000 e
-1
600 cm utilizando um espectrômetro SpectrumTwo (PerkinElmer) e HATR de cristal ZnSe. A correção foi
feita por baseline e Savistky-Golay e o programa utilizado foi o Matlab 6.1 (Mathworks).
Construiu-se as três cartas de controle com limites estatísticos de 95% de confiança a partir dos grupos I e
II: a carta NAS, correspondente ao analito de interesse (biodiesel), a carta interferente que monitora outras
contribuições (diesel) e a carta de resíduo referente a variações não-sistemáticas. Desta maneira foi
possível identificar amostras que estavam fora das especificações relativas ao biodiesel contaminado com
óleo.
A Figura 1 mostra as cartas desenvolvidas com os valores das amostras dos conjuntos, em que de 120
amostras, apenas uma do conjunto III foi classificada erroneamente como fora de controle, pois estava
acima do limite superior na carta NAS. Todas as amostras adulteradas foram corretamente classificadas,
uma vez que saíram dos limites estabelecidos em pelo menos uma das cartas [2].
Figura 1. Cartas para as amostras: calibração (●), validação dentro de controle (*), validação fora de
controle por adulteração: (★) óleo de soja, (◊) óleo de milho e (▼) óleo residual.
Com a utilização de espectroscopia no infravermelho médio aliada a cartas de controle multivariadas foi
possível construir uma metodologia rápida e eficiente capaz de detectar adulterações por óleos em B7 de
algodão uma vez que, as amostras fora das especificações foram identificadas. Desta maneira, trata-se de
uma metodologia viável para o monitoramento e controle de qualidade de biocombustíveis.
119
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
[1] Beltrão, N. E. de M.; Vale, L. S. do; Brito Neto, J. F. de; Xavier, J. de F. Industrialização do caroço de
algodão. En: Algodão no cerrado do Brasil. Freire, E. C. (Ed.), Aparecida de Goiânia, Mundial Gráfica, 2011,
p. 1011-1033.
[2] Rocha, W. F. de C.; Poppi, R. J. Multivariate control charts based on net analyte signal (NAS) for
characterization of the polymorphic composition of Piroxicam using near infrared spectroscopy. Microchem J;
2010. 96; 21-26.
Agradecimento: FAPEMIG e CAPES
120
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 06
Desenvolvimento e validação de metodologia para a quantificação de óleo
adulterante em misturas de biodiesel/diesel (B5) empregando PLS e MIR
1
1
1
2
Guimarães, Eloiza ; Souza, Letícia Maria ; Mitsutake, Hery ; Santos, Douglas Queiroz ; Borges Neto,
Waldomiro1
1
Instituto de Química, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
Escola Técnica de Saúde, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
2
O biodiesel surge como fonte promissora de energia renovável. É produzido a partir de diversas
oleaginosas, sendo a soja a mais utilizada. Devido a semelhança das propriedades físico-químicas do
biodiesel e da alta miscibilidade com os óleos, este biocombustível é passível de adulterações. Além disso,
os óleos possuem menor custo que o biodiesel, dando lucros aos comerciantes infratores. Assim, o
presente trabalho visa quantificar óleos adulterantes em misturas de biodiesel/diesel B5 (5% de biodiesel e
95% de diesel, em v/v) etílico e metílico de soja na faixa de concentração de 1,00 a 30,00% (v/v) usando
MIR e PLS e validar estas metodologias através de recomendações da IUPAC e da ASTM E-1655.
Os espectros foram obtidos em triplicata no espectrômetro Spectrum Two (PerkinElmer) com ATR de cristal
de ZnSe, resolução de 4cm-1 e 16 varreduras. Os dados foram centrados na média e corrigidos por
baseline. Foram construídos dois modelos: I- Biodiesel Etílico de soja (BES) e II- Biodiesel Metílico de soja
(BMS), adulterados com óleo de soja.
Ambos os modelos foram construídos com 4 VLs. A linearidade pode ser observada através dos gráficos
dos valores reais vs. previstos mostrados na Figura 1, em que as curvas estão bem ajustadas com
distribuição linear e uniforme.
Figura 1. Ajuste para as amostras de B5 adulteradas com óleo: (a) BES (b) BMS
A Tabela 1 apresenta os resultados obtidos para a validação dos modelos PLS. Os métodos mostraram-se
-1
lineares, com baixos valores de erros (boa exatidão) e baixos LD e LQ. A γ indica que a quantidade
mínima que os métodos são capazes de diferenciar é de 0,08 e 0,02% (m/m) para o BES e BMS,
respectivamente [1].
121
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Tabela 1. Resultados para a validação dos modelos PLS.
Parâmetro
BES
BMS
0,9998
0,0066
0,9996
0,9997
0,0100
0,9994
RMSEC
0,18
0,21
RMSEP
0,22
0,26
N de amostras calibração
39
47
o
N de amostras de validação
25
31
Erro médio (%)
1,12
1,42
Sensibilidade
0,08
0,05
Sensibilidade analítica (γ)
12,60
48,42
γ (v/v)
0,08
0,02
Seletividade
0,23
0,15
tbias
1,95
0,90
tcrítico
2,06
2,04
LD
0,26
0,07
LQ
0,79
0,21
Inclinação
Linearidade
Intercepto
Coef.
correlação
o
-1
A ausência de erros sistemáticos foi avaliada pelo teste t conforme a ASTM E1655-05 e pela elipse de
confiança (EJCR) mostrada na Figura 2.
Figura 2. EJCR para o intercepto e inclinação das regressões dos valores reais vs valores previstos pelo
PLS para óleo em (a) BES e (b) BMS.
Portanto, as metodologias desenvolvidas usando MIR e PLS mostraram-se eficientes na quantificação de
óleos adulterantes em misturas de biodiesel/diesel etílico e metílico de soja nas concentrações de 1,00 a
30,00% (v/v). Assim sendo, pode ser utilizada nas análises de rotina para controle de qualidade destes
produtos.
[1] VALDERRAMA,P.; BRAGA, J. W. B.; POPPI, R. J. Estado da arte de figuras de mérito em calibração
multivariada, Química Nova. v.32, p.1278-1287, 2009.
Agradecimento: FAPEMIG e CAPES
122
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 07
Uso de cartas de controle multivariadas baseadas no NAS para monitoramento de
qualidade de blendas diesel/biodiesel metílico residual
1
1
1
2
Mitsutake, Hery ; Souza, Letícia Maria ; Guimarães, Eloiza ; Santos, Douglas Queiroz ; Borges Neto,
Waldomiro1
1
Instituto de Química, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
Escola Técnica de Saúde, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
2
O uso de óleo de fritura usado tem se destacado na produção de biodiesel por motivos ambientais e custo;
geralmente, é usado em misturas com o diesel, através de mandatórios que determinam as porcentagens
nas misturas. A sua adulteração muda suas propriedades físico-químicas, o que pode causar danos aos
motores. As cartas de controle multivariadas baseadas no sinal analítico líquido (NAS) é um método
qualitativo, que demandam menores quantidades de dados em relação aos métodos quantitativos, além de
utilizar apenas amostras dentro das especificações de qualidade para a construção dos modelos [1]. Assim,
o objetivo deste trabalho é monitorar qualidade de blendas biodiesel metílico residual/diesel B5 com
espectroscopia MIR e cartas de controle multivariadas em relação a adulterações por óleo lubrificante
usado, querosene e gasolina, na faixa de 5-30%.
Metodologia
Foram preparados 6 grupos de amostras: A, dieseis puros (10 amostras); B, amostras dentro de controle
para calibração (22); C, amostras dentro de controle para validação (8); e D a F, amostras adulteradas (20
amostras cada grupo). Os espectros foram obtidos com espectrômetro SpectrumTwo (PerkinElmer), HATR
-1
de cristal ZnSe, na faixa de 4000-600 cm em quintuplicata e foram corrigidos por baseline e SavistkyGolay. O programa Matlab 6.1 (Mathworks) foi usado na construção das cartas.
Resultados
Construiu-se o espaço interferente usando PCA (2 PC’s). Os espectros de B foram decompostos nos
vetores NAS, interferente e residual, a partir dos quais determinou-se limites com 95% de confiança (Tabela
1).
Tabela 1. Valores dos limites das cartas de controle.
NAS Superior
0,0024
NAS Inferior
0,0019
Interferente (D)
7,3960
Residual (Q)
7,3222 x 10
-6
A Figura 1 mostra as cartas construídas com todos os grupos; uma amostra é classificada como fora das
especificações se sair dos limites em pelo menos uma das cartas de controle; assim, obteve-se uma
classificação 100% correta, pois as amostras fora de controle saíram dos limites em pelo menos uma das
cartas, e todas dentro de controle estavam dentro de todos os limites estabelecidos.
123
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Figura 1. Cartas para as amostras: calibração (●), validação dentro de controle (*), validação fora de
controle por adulteração: (◊) lubrificante usado, (▼) querosene e (★) gasolina.
Conclusões
A metodologia desenvolvida usando cartas de controle multivariadas baseadas no NAS aliadas a
espectroscopia MIR para o monitomento de qualidade de biodiesel metílico de fritura residual em relação a
adulterações por óleo lubrificante usado, querosene e gasolina mostrou-se um método rápido e simples,
desde que todas as amostras fora das especificações foram detectadas. Assim, trata-se de uma alternativa
viável ao controle de qualidade desse combustível.
Referência
[1] Oliveira, I. K.; Rocha, W. F.; Poppi, R. J. Application of near infrared spectroscopy and multivariate
control charts for monitoring biodiesel blends. Anal Chim Acta; 2009; 642; 217-221.
Agradecimentos: FAPEMIG e CAPES
124
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 08
Detecção de adulteração de óleo de oliva extra virgem usando ESI-MS, algoritmos
SIMCA e KNN
Mitsutake, Hery; Santana, Felipe Bachion; Guimarães, Eloiza; Souza, Letícia Maria; Borges Neto,
Waldomiro
Instituto de Química, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
O óleo de oliva extra virgem (EVOO) representa cerca de 10% da produção mundial de óleo de oliva; está
entre os óleos mais caros, e é adulterado principalmente com óleos mais baratos [1], prática que traz
prejuízos financeiros e a saúde. Nesse contexto, este trabalho teve por objetivo detectar e identificar a
adulteração do EVOO com óleos de soja, milho, girassol e canola na faixa de 1.0 a 20.0% (m/m) utilizando
dados ESI(+)-MS e os algoritmos SIMCA e KNN.
Metodologia
Foram preparadas 5 classes de amostras, conforme indicado na Tabela 1; realizou-se uma extração usando
solução água/metanol (1:1) com ácido fórmico (1%), e a fase aquosa-metanólica foi injetada diretamente no
ESI-MS (LCQFleet). As m/z abaixo de 5% foram descartadas.
Os algoritmos foram aplicados usando os programas Matlab 7.5 e PLS_Toolbox 7.5.
Tabela 1. Classes das amostras utilizadas nos modelos.
Classe
Óleo Adulterante
No. Amostras
Calibração
No. Amostras
Validação
1
Nenhum
20
10
2
Soja
20
10
3
Canola
20
10
4
Milho
20
10
5
Girassol
19
10
Resultados
Os resultados do SIMCA são mostrados na Tabela 2; as amostras não classificadas corretamente não
foram classificadas em nenhuma classe; assim, obteve uma classificação de 100.00% e 78.00% para a
calibração e a validação, respectivamente.
Tabela 2. Resultados do SIMCA.
Classe Real
Calibração
Validação
Classe
Prevista
No.
PCs
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
5
20
0
0
0
0
7
0
0
0
0
2
6
0
20
0
0
0
0
6
0
0
0
3
5
0
0
20
0
0
0
0
10
0
0
4
6
0
0
0
20
0
0
0
0
8
0
5
5
0
0
0
0
19
0
0
0
0
8
125
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
A Tabela 3 mostra os resultados do modelo KNN; apenas algumas amostras da classe 5 foram classificadas
erradas, tanto na calibração quanto na validação, mas obteve-se uma classificação 97.98% e 98.00%
correta para a calibração e a validação, respectivamente.
Tabela. Resultados do KNN.
Classe Real
Calibração
Validação
Classe
Prevista
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
20
0
0
0
1
10
0
0
0
0
2
0
20
0
0
1
0
10
0
0
1
3
0
0
20
0
0
0
0
10
0
0
4
0
0
0
20
0
0
0
0
10
0
5
0
0
0
0
17
0
0
0
0
9
Conclusões
As metodologias desenvolvidas neste trabalho, usando os métodos SIMCA e KNN aliados a ESI (+)-MS
foram bem-sucedidas na detecção das adulterações de EVOO com óleos vegetais, com uma boa
porcentagem de classificação correta. Assim, os resultados obtidos indicaram que as metodologias
desenvolvidas nesse trabalho são alternativas viáveis ao controle de qualidade de óleo de oliva extra
virgem.
Referência
[1] Alves, J. O.; Botelho, B. G.; Sena, M. M.; Augusti, R. Electrospray ionization mass spectrometry and
partial least squares discriminant analysis applied to the quality control of olive oil. J. Mass Spectrom.; 2013;
48; 1109-1115.
Agradecimentos: FAPEMIG e CAPES
126
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 09
Discriminação de biodiesel adulterado em blendas biodiesel metílico de soja/diesel
usando espectroscopia no infravermelho médio e SVM-DA
1
2
2
2
Santos, Douglas Queiroz ; Mitsutake, Hery ; Guimarães, Eloiza ; Santana, Felipe Bachion ; Souza, Letícia
Maria2; Borges Neto, Waldomiro2
1
Escola Técnica de Saúde, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
2
Instituto de Química, Universidade Federal de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil
O biodiesel é um combustível usado principalmente em misturas com diesel, sendo que o mais utilizado é o
sintetizado do óleo de soja com metanol. A presença de óleo no biodiesel pode vir tanto da adulteração com
óleos mais baratos, quanto por uma purificação ruim. Isso prejudica os consumidores, e pode danificar os
motores. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar adulterações com óleos de soja e fritura residual no
biodiesel metílico de soja quando misturado com diesel na porcentagem de 5% v/v (B5) usando a
espectroscopia no infravermelho médio (MIR) e análise discriminante por máquina de vetores de suporte
(SVM-DA).
Metodologia
Foram preparados 2 grupos de amostras, conforme indicado na Tabela 1. Os espectros foram obtidos em
quintuplicata, usando espectrômetro FTIR com HATR de ZnSe (Spectrum Two, Perkin Elmer), na faixa de
4000-600 cm-1. Os espectros foram pré-tratados usando baseline, SNV e centrados na média. O algoritmo
SVM-DA foi aplicado com kernel linear, utilizando os programas Matlab 7.5 e PLS_Toolbox 7.5.
Tabela 1. Classes das amostras utilizadas no modelo.
Grupo
1
2
Óleo adulterante
Nenhum
Soja e Fritura
Residual
Biodiesel(%)
4,5-5,5
3,8-4,8
Adulterante(%)
0,0
0,2-1,2
Diesel(%)
94,5-96,5
95,0-95,4
No. Amostras
Calibração
16
40
No. Amostras
Validação
7
20
Resultados
A Tabela 2 mostra os resultados do modelo SVM-DA considerando a classe 1 as misturas B5 autênticas, e
a classe 2 as adulteradas. O modelo foi obtido com 10 vetores de suporte, e o parâmetro de custo foi 10. A
partir destes valores, pode-se dizer que as margens dos hiperplanos são suaves, isto é, mais fáceis de
serem entendidas.
A Figura 1 mostra o gráfico de probabilidade da classe 1 para cada uma das amostras nos conjuntos, com
um limite threshold de 0,5. É importante ressaltar que, embora os níveis de adulterações nas misturas sejam
baixos nas misturas, representam 4,0-24,0% de adulteração na quantidade total de biodiesel.
127
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Tabela 2. Resultados do modelo SVM-DA.
Calibração
Conjunto
1
2
1
2
1
16
0
7
0
2
0
40
0
20
Classe Real
Classe Prevista
Validação
1
0.9
Probabilidade da Classe 1
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Amostras
Figura 1. Gráfico de probabilidade das amostras para a classe 1 (♦) B5 autêntico, (★) B5 adulterado com
óleo de soja, (▲) B5 adulterado com óleo residual.
Todas as amostras foram classificadas corretamente em seus grupos, obtendo-se excelentes valores de
sensibilidade e especificidade (1,00). As adulterações por meio dos óleos residuais e de soja foram
consideradas como um único grupo, pois o primeiro trata-se do segundo degradado; assim, suas
propriedades físico-químicas são semelhantes [1].
.
Conclusão
O uso do MIR, aliado a SVM-DA, mostrou-se uma metodologia eficiente na detecção de adulteração do
biodiesel metílico de soja usado em misturas B5, com excelentes taxas de classificação correta. Assim, a
metodologia desenvolvida neste trabalho é uma alternativa para o monitoramento de qualidade deste
combustível para este tipo de adulteração.
Referências
[1] Brandão, L. F.; Braga, J. W.; Suares, P. A. Determination of vegetable oils and fats adulterants in diesel
oil by high performance liquid chromatography and multivariate methods. J Chromatogr A; 2012; 1225; 150157.
Agradecimentos: FAPEMIG e CAPES
128
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 10
Aplicação de cartas de controle multivariadas no controle e garantia da qualidade
do biodiesel (B100)
Correa, Camila; Vacaro, Bernardo B.; Ruschel, Carla F. C.; Ferrão, Marco F.
Departamento de Química Inorgânica, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Brasil;
O biodiesel é um promissor substituinte do diesel proveniente do petróleo. Suas principais fontes no Brasil
são óleo de soja e sebo bovino. Atualmente são adicionados 6% de biodiesel ao diesel comercializado no
território brasileiro, mistura conhecida como B6. O sucesso na comercialização do biodiesel depende de
uma série de parâmetros de qualidade, dentre esses a conversão completa dos triglicerídeos em ésteres
metílicos na reação de transesterificação é um fator importante na garantia da qualidade do biocombustível,
segundo a legislação o teor de éster deve ser de ≥96,5% (Resolução ANP N°14/2012). Neste contexto o
presente trabalho aborda o uso de cartas de controle multivariadas (Skibsted et al.) associadas à
espectroscopia no infravermelho médio para o controle e garantia da qualidade do biodiesel de sebo e soja.
Foram preparados 2 conjuntos de amostras, um composto por onze amostras com blendas de biodiesel de
sebo (20±1%) e soja com rendimento ≥96,5%, consideradas dentro do controle. E outro composto por nove
amostras (conjunto teste), utilizando biodiesel de soja com rendimento de 88,0-91,7% (consideradas fora de
controle) e duas com rendimento ≥96,5%. Os espectros foram adquiridos por HATR/FT-IR, em duplicata, na
-1
faixa de 4000 a 700 cm . Os dados foram normalizados e corrigidos com a primeira derivada (algoritmo
Savistky-Golay, 15 pontos, polinômio de segunda ordem). O software utilizado foi o Matlab 7.11 (MathWorks
Inc., Natick, MA), rotinas do PLS_Toolbox 6.2.1 (Eigenvector Research Inc.). Com a utilização das cartas de
controle, construiu-se um método multivariado para o controle de qualidade do combustível, onde o sinal do
espectro das amostras é divido em três contribuições independentes: NAS (biodiesel de sebo), interferente
(biodiesel de soja) e resíduo. Assim, foram desenvolvidas três cartas de controle e calculados os limites de
controle para cada carta. A carta NAS possibilita identificar a(s) amostra(s) que está (ão) com biodiesel de
sebo abaixo ou acima dos 20±1% na blenda, neste caso todas as amostras do conjunto teste se
mantiveram dentro dos limites na carta, pois não foi variada a proporção de biodiesel de sebo. A carta do
interferente mostra toda a variação que ocorre com o biodiesel de soja, neste caso a carta não mostrou
nenhuma informação acerca das amostras em que o biodiesel de soja utilizado na blenda tinha baixo
rendimento, as amostras ficaram dentro do limite da carta. Porém, na carta do resíduo as amostras com
rendimento de 88,0-91,7% ficaram fora, devido a possível presença de impurezas oriundas do processo de
produção do biodiesel, ficando evidenciado o baixo rendimento do biodiesel de soja utilizado na blenda. Já
as amostras com rendimento ≥96,5% não apresentaram desvio. Com base nos resultados alcançados esta
metodologia analítica é promissora para o controle e garantia da qualidade do biodiesel obtido com
diferentes matérias-primas.
Referências
Resolução ANP n° 14, de 11/05/12, ANP - Agência Nacional Do Petróleo, Gás Natural E Biocombustíveis,
publicada no Diário Oficial em 18 de Maio de 2012, Brasil.
Skibsted, E. T. S.; Boelens, H. F. M.; Westerhuis, J. A.; Smilde, A. K.; Broad, N. W.; Rees, D. R.; Witte, D. T.
Net Analyte Signal Based Statistical Quality. Control Analytical Chemistry 2005, 77, 7103-7114.
129
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 11
iPLS aplicado ao controle de qualidade de óleo de linhaça
Souza, Letícia M.*; Santana, Felipe B.; Mazivila, Sarmento J.; Guimarães, Eloiza; Borges Neto, Waldomiro
Universidade Federal de Uberlândia, Instituto de Química, Laboratório de Quimiometria do Triângulo, Brasil
[email protected]
O Óleo Extravirgem de Linhaça é um alimento de grande valor nutracêutico, rico em Tocoferol e outros
antioxidantes. Atualmente, diversos trabalhos científicos tem apontado para os benefícios da inserção do
óleo extravirgem de Linhaça na dieta humana, como recurso terapêutico na prevenção e tratamento de
pacientes quimioterápicos [1].
O óleo extravirgem de linhaça pode ser alvo de adulterações por adição de outros óleos de menor valor
agregado. A espectroscopia de infravermelho médio (MIR) aliada ao modelo de Calibração Multivariada de
Regressão por Mínimos Quadrados Parciais (PLS) tem sido utilizada como um método analítico, que
fornece resultados de quantificação satisfatórios, aplicados no controle de qualidade de alimentos [2]. No
presente trabalho, aplicou-se a espectrometria de infravermelho médio (MIR) e calibração multivariada –
intervalo parciais de mínimos quadrados (iPLS), com a finalidade de quantificar de forma melhorada
adulterações de óleo de linhaça extravirgem por óleo de soja refinado, a partir de espectros MIR, conforme
as recomendações presentes na norma ASTM E1655-05.
Preparou-se as amostras utilizando óleo de linhaça extravirgem e óleo de soja refinado. Foram preparadas
77 amostras de óleo de linhaça, adulteradas com proporções conhecidas de óleo de soja refinado, partindo
de uma proporção de 5,0%(m/m) de adulterante até uma proporção final de adulteração de 30,0%(m/m).
Para escolha da região de trabalho,os espectros foram divididos em regiões equidistantes e,
posteriormente, construídos modelos PLS locais para cada um dos intervalos, usando o mesmo número de
variáveis latentes. Assim, uma media de erro é calculado para cada intervalo do espectro. A região com o
menor erro é escolhida [3]. Os espectros FT-MIR foram obtidos em equipamento Perkin Elmer (Espectrum
-1
Two), 16 varreduras, resolução de 4 cm e acessório de reflectância total atenuada de seleneto de zinco
(Zn-Se). O modelo iPLS foi construído em ambiente Matlab 6.0 e PLS_Toolbox 6.5. Os espectros foram
corrigidos por baseline e os dados foram centrados na média, o número de variáveis latentes foi escolhido
de acordo com o menor valor de RMSECV. Para este modelo, obteve-se valores de erro conforme Tabela 1.
-1
A faixas escolhida para construção do modelo iPLS foi 682-733 cm para amostras de óleo extravirgem de
linhaça adulterados por óleo de soja refinado.
Tabela1: Valores comparativos de erros para PLS e iPLS, amostras de Óleo de Linhaça adulterados por
óleo de soja refinado.
Modelo
Variáveis
Latentes
RMSECV
RMSEC
RMSEP
Erro (%)
PLS Linhaça + Soja
6
0.6954
0.2610
0.4478
2.90
iPLS Linhaça + Soja
3
0.3124
0.2523
0.3127
1.83
O modelo iPLS por seleção de faixas é vantajoso, quando comparado ao modelo global para quantificação
de óleo de soja refinado em óleo extravirgem de linhaça, pois apresenta diminuição considerável nos
valores de Erro e no número de Variáveis Latentes.
[1] Hoz L., et al.,. Effect of dietary linseed oil and a-tocopherol on pork tenderloin (Psoas major) muscle,
Meat Science 65, 1039–1044, 2003
[2] Kartheek, M., Smith, et al., Determination of adulterants in food: A review. Journal of Chemical and
Pharmaceutical Research, 3, 629–636. 2011
[3] A. Borin, R.J. Poppi, Vibrational Spectroscopy, 37, 27, 2005
Agradecimentos: CNPq CAPES e FAPEMIG.
130
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 12
Validação de modelo de quantificação de adulteração de óleo extravirgem de
linhaça por óleo de girassol
Souza, Letícia M.*; Gontijo, Lucas C.; Santana, Felipe B.; Mitsutake, Hery; Borges Neto, Waldomiro
Universidade Federal de Uberlândia, Instituto de Química, Laboratório de Quimiometria do Triângulo, Brasil
[email protected]
A Semente de Linhaça é uma oleaginosa rica em ácido α-Linolênico (Ômega 3), ácido Oleico (Ômega 6) e
α-Tocoferol. O consumo do óleo extravirgem de Linhaça trás benefícios a saúde humana, uma vez que
apresenta características antioxidantes e anticarcinogênicas [1]. Devido ao seu valor nutracêutico e
econômico, o óleo extravirgem de linhaça pode, por vezes, ser alvo de adulterações por adição de outros
óleos de menor valor agregado, como óleo de girassol refinado.
No presente trabalho, foi construído um modelo PLS, com a finalidade de quantificar adulterações de óleo
de linhaça extravirgem por óleo de girassol, a partir de espectros MIR, conforme as recomendações
presentes em “American Society for Testing and Materials (ASTM)”, norma E1655-05. O modelo obtido foi
analiticamente validado através do calculo das Figuras de Mérito [2]. Foram preparadas 63 amostras,
utilizando óleo de linhaça extravirgem e óleo de girassol refinado, adulteradas com proporções conhecidas
de óleo de girassol refinado, em proporção de 5,0%(m/m) a 30,0%(m/m). Obteve-se espectros de MIR em
-1
espectrômetro FT-IR SpectrumTwo (Perkin Elmer) utilizando HATR-ZnSe de 4000 a 600 cm , resolução 4
-1
cm e 16 varreduras por espectro. Foram obtidos espectros de MIR em triplicata para cada amostra,
obtendo um total de 189 espectros. Os espectros obtidos tiveram suas linhas de base corrigidas utilizando
Baseline e foram analisados com PLS toolbox 3.5 (Eigenvector Research) em ambiente MATLAB 6.1
(MathWorks Inc.). O conjunto de dados foi centrado na média e dividido, de forma que 49 amostras para o
conjunto de calibração e 18 para o conjunto de previsão.
A eficiência de previsão do modelo, construído com 5 variáveis latentes foi analisada avaliando os valores
de RMSEC, RMSECV, RMSEP e através da determinação dos coeficientes de validação cruzada (R²cal) e
de validação (R²val). Os valores de Q residual e leverage foram utilizados para a determinação de outliers,
aplicando um limite de confiança de 95%.
Os valores das figuras de mérito, calculadas de acordo com a literatura e normas vigentes, são
apresentadas na Tabela 1.
Tabela 1: Valores de Figuras de Mérito calculadas para modelo PLS de quantificação de Óleo de Girassol
Refinado em amostras de òleo Extravirgem de Linhaça.
Figuras de mérito
Ajuste
Parâmetros
Valores
PLS Linhaça + Óleo de Girassol
RMSEC (% w/w)
RMSECV (% w/w)
RMSEP (% w/w)
0.32
0.45
0.44
Bias
Standard deviation
Degree of freedom
tcalc
tcrit
0.07
0.27
0.06
0.09
366.24
0,0027
0.31
0.40
18
0.28
2.09
Limite de Detecção(% w/w)
Limite de Quantificação(% w/w)
Seletividade (%)
Sensibilidade
Sensibilidade Analítica
Inverso da Sensibilidade Analítica
Erro Sistemático
131
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
[1] Hoz L., et al.,. Effect of dietary linseed oil and a-tocopherol on pork tenderloin (Psoas major) muscle,
Meat Science 65, 1039–1044, 2003
[2] Poppi, R.J., Braga, J.W., Valderrama, P., Estado da arte de figuras de mérito em calibração multivariada.
Quim. Nova, Vol. 32(No. 5): p. 1278-1287, 2009
Agradecimentos: CNPq CAPES e FAPEMIG
132
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P QYC 13
Detecção de adulterantes na mistura de biodiesel/diesel através da Espectroscopia
no Infravermelho Médio e PLS-DA
1
1
1
1
Mazivila, Sarmento Júnior ; Souza, Letícia Maria ; Guimarães, Eloiza ; Gontijo, Lucas Caixeta ; Santos,
Douglas Queiroz2; Borges Neto, Waldomiro1
2
1
Instituto de Química da Universidade Federal de Uberlândia, Brasil
Escola Técnica de Saúde da Universidade Federal de Uberlândia, Brasil
Objetivo
O biodiesel se destaca como fonte de energia renovável. A mistura de biodiesel/diesel é objeto de
adulteração por óleo lubrificante automotivo residual (OLAR). Esta prática irregular visa à obtenção de
lucros, uma vez que OLAR é mais barrato [1]. A mistura também pode sofrer contaminação por adição de
gasolina durante o transporte usando gasodutos assim como por outros derivados do petróleo, durante a
fase de distribuição [2]. Assim, o trabalho objetiva desenvolver modelos para detectar OLAR e gasolina em
misturas de biodiesel/diesel através da Espectroscopia no Infravermelho Médio (MIR) aliada a Análise
Discriminante por Quadrados Mínimos Parciais (PLS-DA).
Metodologia
Foram desenvolvidos dois modelos PLS-DA, para classificar amostras não adulteradas da mistura de
biodiesel/diesel de BMS (Biodiesel Metílico de Soja) de amostras adulteradas com OLAR e gasolina. Para
amostras não adulteradas, foram usadas 22 amostras de lotes diferentes (15 amostras para conjunto de
treinamento do modelo e 7 amostras para conjunto de teste). Em relação às amostras adulteradas na faixa
de concentração 1-20% (m/m) foram usadas 15 amostras (10 para o conjunto de treinamento e 5 para o
conjunto de teste).
Os modelos PLS-DA desenvolvidos foram baseados em algoritmos PLS, onde a matriz X (espectros) foi
correlacionada com as classes contidas no vetor y. No entanto, o vetor y é formado por valores inteiros 1 e
0, onde 1 é usado para as classes de interesse e 0 para a classe que não sejam de interesse.
Resultados
Dada a semelhança entre os espectros é impossível distinguir os constituintes através da visão humana o
que torna necessário o uso de PLS-DA. A Tabela 1 mostra os resultados obtidos pelos modelos PLS-DA,
com valores concordantes do erro médio quadrático de calibração (RMSEC), validação (RMSECV) e de
previsão (RMSEP).
Tabela 1: Resultados obtidos pelos modelos PLS-DA
Parâmetros/
Variáveis
Adulteração
Latentes
OLAR
Gasolina
RMSEC
RMSEV
RMSEP
Sensibilidade
Especificidade
3
0.0881
0.1253
0.1341
1.00
1.00
4
0.0664
0.0944
0.1391
1.00
1.00
De acordo com a Figura 1, observamos que todas as amostras dos conjuntos testes foram classificadas
corretamente.
133
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Figura 1: Estimativa da classe para conjuntos de treinamento (símbolos cheios) e conjuntos de teste
(símbolos vazios) para classificação entre amostras não adulteradas e adulteradas. Onde: (■) Amostras não
adulteradas, (▼) Amostras adulteradas por OLAR, (▲) Amostras adulteradas por gasolina (- - -) Valor limite.
Conclusão
Os resultados apresentados com 100% de classificação correta mostram que as metodologias baseadas na
Espectroscopia MIR e PLS-DA são viáveis para serem usadas na detecção de adulterantes durante o
controle de qualidade da mistura de biodiesel/diesel pelos órgãos de fiscalização.
Referência
[1] Souza, Leticia Maria; Mitsutake, Hery; Gontijo, Lucas Caixeta; Borges Neto, Waldomiro. Quantification of
residual automotive lubricant oil as an adulterant in Brazilian S-10 diesel using MIR spectroscopy and PLS.
Fuel; 2014; 130; 257–262.
[2] Alves, Julio Cesar L.; Henriques, Claudete B.; Poppi, Ronei J. Classification of diesel pool refinery
streams through near infrared spectroscopy and support vector machines using C-SVC and ⱱ-SVC.
Spectrochim Acta A; 2014; 117; 389–396.
Agradecimentos: CNPq/MCT-MZ e FAPEMIG
134
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P TOX 01
Desarrollo de una metodología analítica para la determinación de o-cresol en orina
por HPLC con detector UV, como indicador biológico de exposición a tolueno
Torres, Angela; Martínez, Gabriela; Gastellú, Andrés; Rampoldi, Osvaldo; Cousillas, Adriana
Cátedra de Toxicología e Higiene Ambiental
Facultad de Química
Montevideo, Uruguay
[email protected]
El objetivo del presente trabajo es el desarrollo de una metodología analítica por HPLC - UV, para la
determinación de o-cresol en orina, como indicador biológico de exposición a tolueno [1]. La metodología
analítica consiste en una hidrólisis ácida en baño de arena a 100 ºC durante 1 hora, para liberar el o-cresol
que se presenta como sulfato o glucurónido conjugado en la orina. Luego se realiza una extracción líquidolíquido para separar el analito de la matriz; y finalmente en se inyecta el extracto obtenido en un equipo de
Cromatografía Líquida de Alta Presión con Detector UV, para su identificación y cuantificación.
Los resultados obtenidos de la validación de dicha metodología analítica en orina, son los siguientes:
Linealidad
r2 = 0,998
Exactitud
Recuperación = 99,4 %
Precisión (n = 10)
RSD = 11,9 %
L.D. (n = 12) (3σ)
0,04 mg/L
L.C. (n = 12)
0,13 mg/L
La exposición a tolueno causa tanto cambios reversibles como irreversibles en el sistema nervioso central,
por lo que el Ministerio de Salud Pública establece en la Ordenanza 145/2009 el o-cresol en orina como
Indicador Biológico de Exposición (BEI). Valores por encima de 0,5 mg/L determinan niveles de acción, y los
trabajadores deben ser evaluados por médicos especialistas en salud ocupacional.
De los resultados obtenidos, se puede concluir que la metodología analítica desarrollada es adecuada para
el control de la exposición de estos trabajadores, ya que permite detectar y cuantificar valores por debajo de
lo establecido en dicha ordenanza.
Referencias:
[1]. Masahiro Yoshikawa, M.Y; Yasuko Taguchi, Y.T; Keiichi Arashidani, K.A, Yasushi Kodama, Y.K.
Determination of cresols in urine by- high performance liquid chromatography. Journal of Chromatography;
1986; 362; 425 - 429.
135
er
3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P TOX 02
Control de la exposición a tolueno en ambientes laborales a través de metabolitos
biológicos
Torres, Angela; Martínez, Gabriela; Rampoldi, Osvaldo; Cousillas, Adriana
Cátedra de Toxicología e Higiene Ambiental
Facultad de Química
Montevideo, Uruguay
El tolueno es un líquido claro y volátil, con olor aromático dulzón, poco soluble en agua y muy liposoluble. Es
uno de los solventes de abuso más utilizados (via nasal). Se usa en la manufactura del benceno y productos
tales como detergentes, adhesivos, explosivos, pegamentos, colas, lacas, etc.
La exposición aguda o crónica de los trabajadores a disolventes orgánicos en el ámbito laboral está dada
por sus múltiples aplicaciones. Se ha convertido en un grave problema de salud pública, puesto que es una
de las causas de enfermedades profesionales que afecta a diversos órganos y sistemas del cuerpo
humano, como la piel, hígado, sistema nervioso central y pulmones. Provoca dermatitis, síndrome orgánico
cerebral, leucemia, cáncer, y en casos extremos la muerte [1,2].
El MSP reglamentó en 2004 una parte del Decreto del Poder Ejecutivo Nº 406/988 del 3 de junio de 1988, y
establece un esquema básico referente a los diversos factores de riesgo químicos y físicos, los respectivos
controles y análisis médicos, así como la determinación de los períodos específicos para cada caso, a los
que deben ser sometidos todos los trabajadores. Esa Ordenanza del 2004 se ha actualizado en 2009
(Ordenanza 145/ 2009) [3].
Los metabolitos ácido hipúrico y o-cresol son indicadores de exposición a tolueno. La variación individual de
ambos metabolitos es alta, y cuando sean implementados como indicadores de exposición biológica, deben
ser considerados el sexo, el peso, la edad y el consumo de alcohol y tabaco [4].
EL objetivo de este trabajo es demostrar que los metabolitos son sólo indicadores de exposición, y que se
deben tener varios factores en cuenta para su interpretación al realizar la evaluación de los trabajadores.
Se realizó un estudio de 29 trabajadores expuestos a tolueno y se analizó en la orina de cada uno, el Acido
Hipúrico y Orto-Cresol, además de la Creatinina.
En este trabajo se demuestra la variabilidad de los resultados para los metabolitos sugeridos, así como las
diferencias observadas según la forma de expresar los mismos (g/g de creatinina, mg/L, mg/g de creatinina),
considerando la recomendación del MSP (2009) y de la ACGIH (2013) [3,5].
Metabolito en orina
2004
2009
2013
Acido hipúrico
1,5 g / g creat.
1,5 g / g creat.
1,5 g / g creat.
o-cresol
--
0,5 mg/L (MSP)
0,3 mg/g de creat. (ACGIH)
El 48% de los trabajadores tiene valores de acido hipúrico sobre lo aceptado. Por otra parte, hay un 52%
que están con valores por encima en o-cresol expresado en mg/g de creatinina, pero solamente hay 17%
expresado como establece la ordenanza del MSP. Internacionalmente, se acepta que el o-cresol es el
metabolito más especifico de la exposición a tolueno, ya que el acido hipúrico se ve influenciado por
determinados alimentos o medicamentos. Por lo tanto, debería profundizarse el tema, y evaluarse si la
ordenanza debe ser actualizada.
Referencias:
[1] Muñoz R. y Alborez A. (2011), Hidrocarburos, En: Rojas M., Toxicología Ambiental y Ocupacional,
Valencia pag. 349-353, cap. 14. Ed. Universidad de Carabobo
136
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
[2] Casarett y Doll (2005), Fundamentos de Toxicologia, España: Ed. McGraw Hill- Interamericana.
[3] Ordenanza 154/2009, La vigilancia sanitaria de los trabajadores expuestos a los diferentes factores de
riesgo laborales. Recuperado [2014, 30 de julio ]: http://www.msp.gub.uy/marco-normativo/vigilanciasanitaria-de-trabajadores-expuestos-factores-de-riesgo-laborales
[4] WHO (1996), World Health Organization, Biologivcal Monitoring of Chemical Exposure in Workplace,
Guidelines vol1, Geneva
[5] American Conference of Govermmental Industrial Hygienists, ACGIH 2013- TLV and BEIs, Based on the
Documentaation of the Threshold Limit Values for Chemical Substances and Physical Agents & Biological
Exposure Indices http://www.acgih.org/TLV/.
137
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
P TOX 03
Determinación de mercurio en orina: Validación de una metodología de rutina
Pizzorno, Paulina; Alvarez, Cristina; Mañay, Nelly
Cátedra de Toxicología, Facultad de Química, Universidad de la República (UdelaR), Montevideo, Uruguay
[email protected]
La exposición a niveles altos de mercurio puede perjudicar el sistema nervioso, los riñones, los pulmones, el
sistema inmunológico de personas de todas las edades, y puede también perjudicar seriamente al feto en
desarrollo [1].
A los efectos de la evaluación y control de la exposición a mercurio en la población afectada se debe
realizar la determinación de los niveles mercurio en fluidos biológicos. Dado que el mercurio metálico que se
absorbe en el cuerpo se excreta casi exclusivamente en la orina, las muestras de orina proporcionan el
mejor indicador de exposición a esta forma de mercurio [2].
La Ordenanza 145/2009 del Ministerio de Salud Pública, establece el control obligatorio de los trabajadores
expuestos a riesgos químicos en su lugar de trabajo, incluyendo al mercurio. A pesar de esto, los riesgos
asociados a la exposición al mercurio en ambientes laborales o en el ambiente general aún no han sido
evaluados en forma sistemática en el país.
Los niveles de mercurio en orina resultan de fundamental importancia para el diagnóstico, el control y
seguimiento de trabajadores expuestos y para población general presuntamente expuesta por
contaminación ambiental como apoyo a la prevención de los riesgos a la salud.
Por lo tanto, se necesitan protocolos estandarizados, validados y fiables para el biomonitoreo de este metal
en la población presuntamente afectada.
El objetivo de este trabajo es plantear el desarrollo de una metodología analítica para la determinación de
Hg en orina, aplicable en rutinas de laboratorio.
El método se basa en la digestión de una muestra de orina con una solución de ácido nítrico y sulfúrico. Las
determinaciones se realizan mediante Espectrometría de Absorción Atómica con Vapor Frío. Para el
desarrollo se utilizó orina de adultos voluntarios no expuestos ocupacionalmente.
Los parámetros de desempeño obtenidos fueron: límite de detección: 1 µgL-1 (3s), límite de cuantificación 2
-1
µgL (10s), precisión: RSD<5% (n=10), recuperación: entre (80-110)% (muestras adicionadas, n=10).
Los parámetros de desempeño son adecuados, y la metodología propuesta puede ser implementada para
un análisis de rutina de mercurio en orina en estudios epidemiológicos, controles ocupacionales, casos
médico - legales, etc.
Referencias
1.- US. EPA (2006) “Mercurio” US
http://www.epa.gov/mercury/espanol.htm
Environment
2.ATSDR
(2012)
“Mercurio
(azogue)
http://www.atsdr.cdc.gov/es/toxfaqs/es_mercmetal5.html
Protection
metálico
Agency.Information
(Metallic
Agradecimientos: Agencia Nacional de Investigación e Innovación, Beca INI_X_2012_1_4409
138
Sources.
Mercury)“
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Índice de autores
139
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Abente, Lucia................................................74, 75
Bojorge, Alejandra ....................................... 49, 50
Alcaráz, Mirta R. ...............................................117
Bonari, Gianella ................................................. 61
Allegrini, Franco................................................115
Borges Neto, Waldomiro119, 121, 123, 125, 127,
130, 131, 133, 134
Almeida, Rusiene M............................................88
Bortoluzzi, Janaína H......................................... 88
Alonso, Beatriz....................................................50
Bortoluzzi, Janaína Heberle............................. 110
Alvarado, José ..........................................101, 102
Brasca, Romina ................................................. 31
Alvarez, Cristina..........................................38, 138
Bühl, Valery............................................ 38, 97, 99
Álvarez, María Noel ..........................................113
Bulhões, Luis Otavio S..................................... 103
Alves Barreto, Jeferson ........... 28, 64, 83, 84, 112
Burgueño, Anna ................................................. 50
Alves Meira, Lucilia...........................28, 46, 64, 83
Cadore, Solange ...................................... 108, 109
Alves Meira, Lucília.......................................28, 64
Caggiani, Andrés ............................................... 61
Alzari, Pedro .......................................................36
Cagiao, Alejandro .............................................. 61
Amaral, Gonzalo .................................................67
Caiminagua, Andrea ........................................ 101
Andrade Santos, Manuela ..................................64
Caldas, Sergiane ......................................... 30, 91
Araujo, Marlysson M.C. ......................................88
Carballal, Martín................................................. 45
Arguello, Jacqueline ...........................................86
Cardoso, Josefina .............................................. 26
Arias, Jean Lucas ...................................24, 30, 91
Caristo, Rita ....................................................... 61
Arruda, M.A.Z. ....................................................26
Carrau, Francisco .............................................. 37
Arsand, Daniel Ricardo.......................................73
Cerdeiras, María Pía.................................... 25, 71
Azevedo Lemos, Valfredo.......................28, 64, 83
Cerqueira, Maristela........................................... 24
Baccino, M. .........................................................29
Cesio, María Verónica20, 23, 25, 49, 50, 71, 92,
93, 94
Bado, Alejandra ..................................................78
Barboza, Sergiane Caldas..................................73
Charquero, Diego............................................... 89
Bardanca, María .................................................98
Colazzo, Marcos .......................................... 50, 94
Barin, J. S. ..............................................22, 34, 90
Coniberti, Andrés ............................................... 37
Barneche, Stephanie ........................................107
Correa, Camila................................................. 129
Batista Peixoto, Leandro.....................................46
Costa, Silvana de Matos .............................. 51, 69
Batthyány, Carlos .................................36, 89, 113
Costa, V. C......................................................... 90
Bazzurro, Paula ..................................................50
Cousillas, Adriana .................................... 135, 136
Bechlin, Marcos André........................................33
Culzoni, M. Julia......................................... 31, 117
Becker, Helena ...................................................87
Culzoni, María Julia ......................................... 116
Befani, Romina ...................................................48
D. Wills, Julian ................................................... 52
Belluzzi, Marcelo.................................................45
Da Silva S., Daiane............................................ 59
Besil, Natalia .......................................................50
da Silva, Erik Galvao P. ................................... 112
Bezerra, Marcos de Almeida ..............................69
Davyt, Danilo...................................................... 98
Bitelo, Ana Paula ................................................66
de Almeida Bezerra, Marcos ............................. 84
Bizzi, C. A. ..........................................................22
De Freitas, José Anderson Silva ..................... 110
Boido, Eduardo ...........................................37, 118
140
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
de Jesus Ferreira, Vanessa..............28, 64, 83, 84
Goicoechea, Héctor C...................................... 117
de Jesus Santos, Mirela .....................................84
Gomes Neto, José Anchieta .............................. 33
de Melo, Lucas Natã.........................................110
Gonçalves Machado, Geovane ......................... 84
De Nigris, Andrea ...............................................67
Gontijo, Lucas C. ............................................. 131
Dellacassa, Eduardo.............................37, 98, 118
Gontijo, Lucas Caixeta..................... 119, 133, 134
Denicola, Ana .....................................................36
González, Gabriel .............................................. 98
Diana, Laura .......................................................50
González, Pablo........................................... 35, 76
Diana, María Laura .............................................25
González, Rafael ............................................... 77
Díaz Gill, Gustavo.........................................74, 75
Grille, Lucia ........................................................ 41
Díaz Gill, Renate...........................................74, 75
Guimarães, Eloiza119, 121, 123, 125, 127, 130,
133
Díaz, Eduardo.....................................................48
Hartwig, C. A...................................................... 90
Disegna, Edgardo ...............................................37
Heinzen, Horacio 20, 23, 25, 49, 50, 71, 92, 93, 94
Dol, Isabel .........................................27, 44, 45, 65
Helfer, Gilson A.................................................. 86
Duarte, F. A. .......................................................56
Hertzog, Gabriel................................................. 91
Durán, Rosario..............................36, 89, 113, 114
Honorato Santos Neto, João ............................. 46
Edelsztejn, Flavia................................................67
Ibañez, G. A. ...................................................... 63
Escandar, G. M...................................................63
Iop, Gabrielle D. ................................................. 34
Farías, Silvia Sara ..............................................48
Irigoyen, Juan Octavio ....................................... 26
Fariña, Laura ......................................................37
Jesús, Florencia................................................. 23
Fehrenbach, Gustavo Walter..............................73
Junges, Fábio V. ................................................ 88
Fernández, Lenys .....................................101, 102
Kalkreuth, Wolfgang........................................... 66
Fernández, Paula .........................................41, 94
Kierbel, Arlinet.................................................. 114
Ferrão, Marco F. .........................................86, 129
Knochen, Moisés ........... 32, 35, 42, 44, 55, 76, 98
Ferreira, Edilene Cristina ....................................33
Krzyzaniak, S. R. ............................................... 56
Flores, E. M. M. ................................22, 34, 56, 90
Kutscher, Daniel............................................... 105
Fontes, Laiane Moura.........................................82
Labandera, Fernando ........................................ 99
Fotunato, Felipe Manfroi.....................................33
Lacerda dos Anjos, Marcio ................................ 84
Franco, Pablo .....................................................67
Lapo, Byron.............................................. 101, 102
Gabrielli, Adriana ................................................72
Larrea, Nadia ..................................................... 55
Gadzhieva, Anastasia.........................................54
Larroque, Gabriela ............................................. 41
Galvão Novaes, Cleber.......................................46
Lavanca, Rosario ............................................... 61
Garcia, Mariana Ortega ..............................54, 104
Lima, Analía ....................................... 36, 113, 114
Gastellú, Andrés ...............................................135
Lima, Luiz R. M. ....................................... 108, 109
Geisenblosen, Ma.Cecilia ...................................72
Londonio, Agustín ........................................ 48, 85
Gérez, Natalia............................ 25, 49, 50, 71, 92
Longhinotti, Elisane............................................ 87
Gerpe, Alejandra.................................................61
López, Andrés.............................................. 41, 96
Giertyas, Cristian J. ............................................88
Lorenzo, Daniel.......................................... 98, 107
Gil, Magdalena............................................36, 113
M. Siqueira, Bruno ..................................... 52, 105
Goicoechea, Héctor ....................................31, 116
141
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Machado, Ignacio ...................... 20, 26, 42, 43, 44
Odino, Ma. del Rosario ...................................... 72
Maia, Sandra Maria ............................................66
Oliveira da Silva, Valéria Maria.......................... 46
Malmonge, Luiz F. ....................................108, 109
Oliveira, J. S. S. ................................................. 22
Mañay, Nelly ...............................................38, 138
Olivieri, Alejandro C. ........................................ 115
Marioli, Juan Miguel..........................................100
Onaindia, M. Celeste ......................................... 31
Martínez, Gabriela ....................................135, 136
Ordóñez, Jessenia ........................................... 102
Martínez, María Cristal .......................................27
Pardinho, R. B.................................................... 56
Martins F., Ayrton ...............................................59
Pareja, Lucía.................................... 50, 93, 94, 96
Martins, Ayrton..................................24, 30, 57, 91
Parodi, Belén ..................................................... 85
Martins, Ayrton Figueiredo..................................57
Pastorino, Natalia............................................... 43
Martins, Guilherme B.C. .....................................80
Paulista, Marcos ................................................ 24
Marube, Liziane ..................................................30
Pedroso, Giovanni Bressiani ............................. 57
Mazivila, Sarmento J. .......................................130
Pellegrino, R. B. ................................................. 63
Mazivila, Sarmento Júnior ................................133
Pereira, Juliana S. F. ......................................... 34
McSheehy, Ducos...............................................52
Pereira, Letícia S. F. .......................................... 34
Mello, P. A. .............................................22, 34, 56
Pereira, R. M...................................................... 90
Menchaca, David ................................................77
Pereyra, Silvia.................................................... 77
Meneghetti, Mario Roberto ...............................110
Pérez, Andrés ........................................ 49, 50, 92
Meneghetti, Simoni Margareti Plentz................110
Pérez, Cecilia..................................................... 23
Mesko, M. F. .................................................34, 90
Picoloto, R. S. .............................................. 22, 90
Mesko, Márcia F. ................................................34
Piedrabuena, Laura ........................................... 41
Miró, Esteban....................................................118
Pinto Alves Guarino, Maria Elizabeth ................ 46
Mitsutake, Hery 119, 121, 123, 125, 127, 131, 134
Pisano, Pablo L................................................ 115
Mollo, Alicia................................ 32, 42, 44, 55, 99
Pistón, Mariela20, 26, 27, 38, 42, 43, 45, 65, 99,
118
Mondutey, Sebastián ..........................................43
Piuma, Lourdes.................................................. 72
Montemurro, Milagros...............................116, 117
Pizzorno, Paulina ............................................. 138
Morales, Germán ................................................67
Politi, P. .............................................................. 95
Moressi, Marcela ..............................................100
Polla, Griselda.................................................... 85
Moyna, Guillermo..........................................41, 96
Portela, Magdalena............................................ 89
Muller, E. I...........................................................56
Portela, María Magdalena ............................... 113
Muñoz de la Peña, Arsenio ................................31
Possi-Pezzali, Tania .......................................... 78
Muslera, Alejandro..............................................61
Primel, Ednei.................................... 24, 30, 73, 91
Nascimento, Mariele S........................................34
Primel, Ednei Gilberto ........................................ 73
Niell, Silvina ............................................23, 50, 71
Quintero, César.................................................. 48
Nóbrega, Joaquim Araujo .................................104
Raimundo Jr., Ivo M........................................... 82
Novaes, Cleber Galvão.....................................112
Rampoldi, O. ................................................ 29, 95
Novo, D. L. R. .....................................................90
Rampoldi, Osvaldo................................... 135, 136
Nunes, Leane Santos .........................................51
Ricciardi, Alejandro ............................................ 89
Nuñez, Guillermo ................................................65
142
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3 Congreso Uruguayo de Química Analítica
Rivera, Bernardina..............................................89
Silva, Elvandi ................................................... 103
Rivero, Anisleidy ...........................................25, 71
Silva, Ricardo Moutinho ..................................... 33
Rodríguez, Agustina ...........................................50
Sixto, Alexandra................................................. 44
Rodríguez, Cintia ................................................50
Smichowski, Patricia ................................ 8, 48, 85
Rodríguez-Haralambides, Alejandra ............77, 78
Souza, Adelino Cariolano Santos de ................. 69
Rombaldi, Caroline .................................24, 30, 91
Souza, F. Thiago Correia de.............................. 87
Romero, Hugo ..........................................101, 102
Souza, Letícia M. ..................................... 130, 131
Rossello, Jessica ..............................................114
Souza, Letícia Maria ........ 121, 123, 125, 127, 133
Rottman, Lothar ..........................................52, 105
Souza, Rodrigo ............................................ 50, 93
Ruschel, Carla F. C. .........................................129
Suarez, Paulo A.Z.............................................. 80
Salgueiro, Alicia ............................................74, 75
Tissot, Florencia........................................... 44, 97
Salgueiro, Bruno ...............................................110
Tonello, Natalia ................................................ 100
Sanches Filho, Pedro José.................................73
Torre, María H.................................................... 26
Sanson, Pedro ....................................................97
Torres, Angela ......................................... 135, 136
Santana, Ariane M. ...................................108, 109
Ugulino de Araújo, Mário Cesar....................... 116
Santana, Felipe B. ....................................130, 131
Vacaro, Bernardo B. .................................. 86, 129
Santana, Felipe Bachion...........................125, 127
Valdomir, Guillermo ........................................... 98
Santos, Douglas Queiroz. 119, 121, 123, 127, 133
Véras, Germano............................................... 116
Santos, Leandro Oliveira dos .............................69
Vero, Silvana...................................................... 77
Santos, M. C. ............................................108, 109
Vieira, Edivânia Castro ...................................... 87
Santos, Mirela de Jesus ...............................51, 69
Vieira, João ........................................................ 91
Savio, Marianela .................................................85
Viera, Inés .......................................................... 26
Schuller, Arlene ............................................74, 75
Vignoli, Fernando............................................. 107
Silva Assis Felix, Caio ................................64, 112
Vispo, Enrique.................................................... 65
Silva, Camila L.F.................................................88
Wills, Julian ................................................ 52, 105
Silva, Douglas Gonçalves da........................51, 69
143