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Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
AC
IÓ
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y
N
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
RM
ÁT
IC
A
Y
CO
M
UN
IC
PARASITOLOGÍA
IN
FO
Efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
“molle” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico
AS
DE
“in vitro”.
SI
ST
EM
TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO DE
BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO
Br. Nereyda Pamela Herrera Ascoy
RE
CC
IO
N
DE
AUTORA:
Dra. Icela Rodríguez Haro
CO ASESOR:
Dr. Marco Salazar Castillo
DI
ASESORA:
Trujillo – Perú
2013
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
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IC
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DEDICATORIA
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A Dios, por acompañarme en cada paso de mi vida, dándome salud y
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A
Y
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la fuerza para seguir adelante en los momentos más difíciles.
A mi madre, por ser el motivo que me impulsa a lograr mis objetivos, y
EM
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DE
IN
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porque con su amor y buenos ejemplos hizo de mí una persona de bien.
ST
A mi padre por su apoyo incondicional, por ser ejemplo de
DI
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DE
SI
perseverancia y por compartir los mejores momentos de mi vida.
ii
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RM
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A
Y
CO
siempre presentes, brindándome su apoyo y confianza.
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A mis hermanos; Herbert, Karen, Cynthia, Erick y Kiara por estar
IN
FO
A mi esposo por su paciencia y sus palabras de aliento a lo largo de mi
ST
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AS
DE
carrera, las cuales han motivado lograr este objetivo.
SI
A mis profesores por motivar la culminación de mis estudios
DI
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DE
profesionales.
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CO
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UN
IC
AC
IÓ
N
AGRADECIMIENTOS
A
Y
A la Dra. Icela Rodríguez Haro
Trujillo,
por
su
apoyo
RM
ÁT
de
IC
docente de la Universidad Nacional
y
esta
IN
FO
colaboración en la realización de
tesis,
por
la
confianza
DE
depositada, así como sus consejos
AS
que me permiten ser una mejor
DI
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DE
SI
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persona.
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desinteresado
en
M
UN
aporte
IC
Al Dr. Marco Salazar Castillo, por su
la
A mi amiga Melissa, con quien he
compartido logros y derrotas a lo
largo de nuestra carrera.
DI
RE
CC
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DE
SI
ST
EM
AS
DE
IN
FO
RM
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A
Y
CO
realización de esta tesis.
v
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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE
OTORGAN EL TITULO PROFESIONAL DE BIÓLGO – MICROBIÓLOGO
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N
Dr. Orlando Velásquez Benítez
M
UN
IC
RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
RM
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A
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VICERRECTORA ACADÉMICA
CO
Dra. Vilma Julia Méndez Gil
Dr. Pedro Lavalle Dios
DE
IN
FO
SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
EM
AS
Dr. Hermes Escalante Añorga
Dr. César Augusto Jara Campos
RE
CC
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N
DE
SI
ST
DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DI
SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas
DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
vi
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PRESENTACIÓN
N
Señores miembros del jurado:
AC
IÓ
En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento
la Universidad
M
UN
Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de
IC
de Grados y Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y
CO
Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio el presente
A
Y
trabajo de tesis titulado:
RM
ÁT
IC
“Efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
“molle” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”, con el
DE
IN
FO
cual pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo Microbiólogo.
AS
Esperando que los miembros del jurado se sirvan calificar este trabajo
SI
ST
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según su criterio establecido.
DI
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CC
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N
DE
Trujillo, Marzo del 2013
Br. Nereyda Pamela Herrera Ascoy
AUTOR
vii
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MIEMBROS DEL JURADO
Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha
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N
sido ejecutada en concordancia con las normas de la Escuela Académico
Profesional de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de
A
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CO
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Trujillo.
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IC
Dr. Marco Salazar Castillo
AS
DE
IN
FO
PRESIDENTE
SECRETARIA
DI
RE
CC
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N
DE
SI
ST
EM
Dra. Icela Rodríguez Haro
Ms.C. Anibal Quintana Díaz
VOCAL
viii
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APROBACIÓN
Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador,
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IÓ
N
declaran que el presente Informe de Tesis titulado: “Efecto del extracto
“molle” sobre la
hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
M
UN
IC
viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”, ha cumplido con
los requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO por
RM
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A
Y
CO
UNANIMIDAD.
IN
FO
Dr. Marco Salazar Castillo
Dra. Icela Rodríguez Haro
SECRETARIA
DI
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DE
SI
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AS
DE
PRESIDENTE
MS.C. Anibal Quintana Díaz
VOCAL
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DEL ASESOR
N
La que suscribe, profesora asesora de tesis titulada: “Efecto del
AC
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extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L. “molle” sobre la
M
UN
IC
viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”.
Y
CO
CERTIFICA:
IC
A
Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido
RM
ÁT
por la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo,
estando en conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe
DE
IN
FO
ha sido redactado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.
EM
AS
Por lo tanto, autorizo a la Bachiller Nereyda Pamela Herrera Ascoy
ST
continuar con el trámite del reglamento correspondiente.
Dra. Icela Rodríguez Haro
DI
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DE
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Trujillo, Marzo del 2013
ASESORA
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CONTENIDO
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N
Pag.
IC
DEDICATORIA..............................................................................................ii
M
UN
AGRADECIMIENTOS ..................................................................................iv
CO
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ........ vvi
IC
A
Y
PRESENTACIÓN ........................................................................................ vii
RM
ÁT
MIEMBROS DEL JURADO ........................................................................ viii
IN
FO
APROBACIÓN .............................................................................................ix
DE
DEL ASESOR .............................................................................................. x
EM
AS
CONTENIDO................................................................................................xi
ST
RESUMEN ................................................................................................. xiii
DE
SI
INTRODUCCIÓN ......................................................................................... 1
RE
CC
IO
N
OBJETIVOS ................................................................................................. 8
MATERIAL Y MÉTODO ............................................................................... 9
DI
RESULTADOS ........................................................................................... 13
xi
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AC
IÓ
N
pag.
IC
DISCUSIÓN ............................................................................................... 16
M
UN
CONCLUSIONES ...................................................................................... 21
Y
CO
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................... 22
DI
RE
CC
IO
N
DE
SI
ST
EM
AS
DE
IN
FO
RM
ÁT
IC
A
ANEXOS .................................................................................................... 30
xii
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RESUMEN
Se determinó el efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de
AC
IÓ
N
Schinus molle L. “molle” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico
“in vitro”. Se utilizaron hojas de Schinus molle L. recolectado en el Centro
IC
Poblado Mayor de Buena Vista, distrito de Chao, Departamento de La
M
UN
Libertad y primocultivos de Streptococcus β-hemolítico.
CO
Se trabajó con cuatro concentraciones distintas (250, 500, 750 y 1000
A
Y
mg/mL) de extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L. y penicilina
microorganismo
se
utilizó
el
RM
ÁT
IC
como control de inhibición. Para evaluar el efecto del extracto sobre el
método
de
Kirby
Bauer
modificado,
IN
FO
sembrándose un inóculo estandarizado con el patrón de turbiedad de 0.5
del Nefelómetro de Mc Farland en placas con Agar Müeller Hinton por la
AS
DE
técnica de siembra en superficie.
EM
Los resultados fueron expresados en diámetro (mm) de los halos de
ST
inhibición del crecimiento de Streptococcus β-hemolítico, encontrándose que
DE
SI
las concentraciones empleadas afectan la viabilidad “in vitro” de este
Se
concluye
que
a
medida
que
aumentan
las
N
microorganismo.
RE
CC
IO
concentraciones de extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
“molle” en el rango de 250 a 1000 mg/mL aumenta el diámetro del halo de
DI
inhibición del crecimiento de Streptococcus β-hemolítico.
xiii
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I.
INTRODUCCIÓN
N
Las infecciones del tracto respiratorio constituyen un problema de
AC
IÓ
salud a escala mundial, sobre todo en los países en vías de desarrollo. La
IC
mayoría de estas infecciones pueden ser causadas por virus y no tener
M
UN
importancia significativa por ser benignas y autolimitadas; sin embargo las
CO
infecciones respiratorias bacterianas constituyen una importante causa de
A
Y
muerte cuando no se recibe el tratamiento oportuno 1.
RM
ÁT
IC
El agente etiológico más frecuente en infecciones respiratorias
bacterianas es streptococcus β hemolítico del grupo A (Streptococcus
IN
FO
pyogenes) causante de faringitis; una de las enfermedades más frecuentes
en niños, de quienes se aísla del 15 al 30% de los casos. En los adultos se
DE
aísla del 5-10% de los casos y es raro en los mayores de 50 años. Se
AS
presenta con mayor frecuencia en épocas de invierno y primavera;
SI
ST
en los centros 2,3.
EM
convirtiéndose en una de las causas más importantes de las visitas médicas
DE
La faringitis estreptocócica se transmite generalmente de persona a
RE
CC
IO
N
persona por gotitas de saliva emitidas al toser, estornudar o simplemente
hablar; el cuadro clínico incluye dolor de garganta con inflamación de la
DI
faringe y exudado blanquecino en las amígdalas, fiebre, escalofríos, cefalea
y malestar general; es una enfermedad leve pero que puede tener
complicaciones supurativas, no supurativas o mediadas por toxinas; dentro
de las más graves se reconocen las complicaciones no supurativas como
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fiebre reumática aguda, crónica y glomerulonefritis aguda; dentro de
las mediadas por toxinas desencadena síndrome de shock tóxico 3,4.
AC
IÓ
N
Los miembros del genero Streptococcus son cocos esféricos, Gram
positivos, no esporulados, homofermentativos, anaerobios facultativos,
M
UN
IC
oxidasa negativos, que por lo general se disponen en cadenas largas
cuando crecen en medio de cultivo; tienen un crecimiento óptimo en medios
CO
enriquecidos como agar sangre, sus colonias son pequeñas, grisáceas de 1
A
Y
a 2 mm con zonas grandes de β- hemólisis (hemólisis total de los glóbulos
RM
ÁT
IC
rojos) 3. Se aísla frecuentemente de personas adultas sanas. Se estima que
entre 5-15% de los individuos sanos albergan la bacteria, generalmente en el
IN
FO
tracto respiratorio, sin signos de enfermedad. Como parte de la flora normal,
Streptococcus puede producir enfermedad cuando las defensas están en
DE
peligro o cuando los organismos son capaces de penetrar las defensas
ST
EM
AS
constitutivas del individuo 5.
el cultivo de secreción faríngea con la ayuda de una torunda
DE
mediante
SI
El diagnóstico microbiológico de faringitis streptocócica se realiza
RE
CC
IO
N
estéril, en agar sangre de oveja y medio tioglicolato, realizado en forma
correcta tiene una sensibilidad de 90 – 95%. La muestra se obtiene
rotándolo en ambas amígdalas. El cultivo se incuba a 35 – 37 ºC por 18 – 24
DI
horas 6.
2
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Cuando una muestra resulta positiva el tratamiento de elección es con
Penicilina V oral durante 10 días, en los pacientes con antecedentes de
AC
IÓ
N
alergia a la penicilina, se puede usar eritromicina o una cefalosporina oral 7.
Streptococcus β hemolítico del grupo A no ha desarrollado resistencia a
M
UN
IC
las penicilinas y/o cefalosporinas o mostrado un aumento en la
concentración inhibitoria mínima (CIM) a pesar de su amplio uso por más de
CO
50 años. La estabilidad en la susceptibilidad a la penicilina se observa en un
A
Y
estudio realizado con cepas recogidas de todo el mundo durante 80 años, en
RM
ÁT
IC
el cual se evidencia que no se ha presentado ningún cambio en la
susceptibilidad a penicilina en streptococcus siendo la CIM de 0,031 μg/mL
IN
FO
para todos ellos 8. Sin embrago en los últimos años en muchos países se ha
aumentado el uso de eritromicina
generando resistencia a estos
DE
macrólidos; describiéndose en diversos países cifras de resistencia a
ST
EM
AS
eritromicina que van desde el 0,5% hasta el 60% 9, 10,11.
SI
La resistencia bacteriana es una consecuencia del uso excesivo e
DE
inadecuado de los antimicrobianos, lo cual crea condiciones favorables a la
RE
CC
IO
N
aparición y propagación de microorganismos resistentes. Esto ocurre cuando
los pacientes no toman el tratamiento completo con el antimicrobiano
recetado o cuando los utilizan para tratar infecciones contra las cuales no
DI
están indicados, a dosis inadecuadas y durante un período de tiempo
incorrecto. Esta situación ha provocado que las tasas de mortalidad por
cepas multirresistentes sean elevadas12.
3
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El aumento constante de la resistencia bacteriana, así como sus
efectos indeseables, ha llevado a los científicos a investigar nuevas
sustancias antimicrobianas a partir de plantas consideradas popularmente
AC
IÓ
N
medicinales. La Organización Mundial de la Salud estima que casi el 80% de
todos los habitantes de la tierra, confían en medicinas tradicionales para
13, 14
IC
. Es así que muchos
M
UN
resolver sus principales necesidades de salud
investigadores han realizado diversos estudios utilizando los principios
CO
activos obtenidos a partir de extractos de hojas, raíces, bulbos y frutos con el
A
Y
fin de comprobar su efectividad como sustancias antimicrobianas y así
RM
ÁT
IC
puedan ser utilizadas como tratamiento alterno a las infecciones bacterianas,
15, 16
.
IN
FO
sin que esto implique un daño para el paciente
Se ha demostrado la actividad antibacteriana de los extractos acuoso y
DE
crudo de las hojas de Piper angustifolium L. “matico” contra Staphylococcus
17
. Psidium guajava L. “guayaba” tiene actividad antibacteriana
ST
aeruginosa
EM
AS
aureus, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae y Pseudomonas
SI
contra las bacterias Gram positivas Staphylococcus aureus y Bacillus
DE
subtilis, contra las Gram negativas Escherichia coli y Pseudomonas
RE
CC
IO
N
aeruginosa; y contra la levadura Candida albicans
. El extracto acuoso de
18
Uncaria tormentosa “uña de gato” tiene efecto antibacteriano in vitro
19
. Así
como el extracto hidroalcohólico de Caesalpinia spinosa (Molina) Kunteze
DI
“taya” tiene efecto sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico y
Corynebacterium diphtheriae
20,21
.
4
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Los extractos orgánicos y acuosos de Plantago major “llantén”,
Clinopodium bolivia “Khoa”, Calendula officinalis “caléndula” y Piper
angustifolium “matico” tienen actividad antimicrobiana contra Helicobacter
22
N
. Así también, se ha demostrado que los extractos de hojas de seis
AC
IÓ
pylori
especies del género Piper tienen actividad contra microorganismos
M
UN
IC
patógenos de interés clínico como Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella tiphy y Klebsiella
A
Y
CO
pneumoniae 23.
RM
ÁT
IC
Además, se ha demostrado la actividad bactericida del extracto
etanólico y del aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis L. sobre
bacterias
de
interés
alimentario
IN
FO
algunas
como
Escherichia
coli,
Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Listeria
DE
monocytogenes, Pseudomonas eruginosa, Bacillus cereus y Lactobacillus
24
AS
. Así como, el efecto del extracto etanólico de hojas de
EM
plantarum
ST
Passiflora foetida “Granadilla de culebra” sobre el crecimiento in vitro de
SI
Staphylococcus aureus, Salmonella tiphy y Pseudomonas aeruginosa
DE
Además, se ha
25
.
comprobado que Plantago major “llantén”, Erythroxylum
RE
CC
IO
N
novogranatense var. Truxillense “coca trujillo” y Camelia sinensis “té verde”
tienen actividad antimicrobiana sobre el crecimiento de Streptococcus
mutans,
Lactobacillus
acidophilus,
Actinomyces
DI
melaninogenica y Fusobacterium nucleatum
viscosus,
Prevotella
26
.
5
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Como podemos ver, se han venido estudiando plantas que el hombre
ha utilizado a lo largo de la historia como fuente para las preparaciones
tradicionales, con la finalidad de controlar la prevalencia de ciertas
AC
IÓ
N
enfermedades infecciosas, vencer los problemas de resistencia de los
microorganismos y los efectos colaterales que estos provocan; esto nos
M
UN
IC
motiva a estudiar e investigar un sin número de especies nativas presentes
27
.
CO
en nuestro país, las cuales forman parte de una gran biodiversidad
A
Y
Una de las especies de plantas reconocidas en nuestro país por sus
RM
ÁT
IC
propiedades curativas es Schinus molle L. perteneciente a la familia
Anacardiácea, conocida popularmente como molle, árbol del Perú, pirul o
IN
FO
falsa pimienta. Es oriundo de los valles interandinos del centro del Perú,
especialmente en las regiones áridas y semiáridas de la serranía. Crece
DE
también en zonas secas de la Costa y parte de la Amazonía, desde el nivel
EM
AS
del mar hasta los 3500 msnm. Puede medir entre 10 y 12 metros de alto,
ST
tiene un diámetro de 1.5 metros en la base y es muy ramificado en la parte
SI
superior. Su follaje es perenne, denso y tiene ramas colgantes, las hojas son
DE
muy aromáticas y miden de 1.5 a 4 cm de largo, sus flores son pequeñas,
RE
CC
IO
N
hermafroditas o unisexuales; los frutos tienen un color rojizo muy llamativo y
DI
están agrupados en racimos 28.
6
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Schinus molle L. es usado en medicina tradicional como antirreumático,
laxante, cefalálgico, cicatrizante, depurativo de la sangre y antiespasmódico.
También es usado para combatir malestares de riñón, vejiga e hígado, así
AC
IÓ
N
como dolores corporales y algunas afecciones respiratorias 29.
conocidas en nuestro país, por
M
UN
IC
Las propiedades antimicrobianas de Schinus molle L. son aún poco
lo cual la presente investigación
está
CO
orientada a determinar el efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de
A
Y
Schinus molle L. “molle” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico.
contribuir como posible
RM
ÁT
IC
Los resultados del presente trabajo podrían
alternativa de tratamiento natural para las infecciones respiratorias que son
DI
RE
CC
IO
N
DE
SI
ST
EM
AS
DE
IN
FO
causadas por bacterias.
7
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II.
OBJETIVOS
AC
IÓ
N
 Determinar el efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus
molle L. “molle” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in
M
UN
IC
vitro”.
CO
 Determinar si el crecimiento de Streptococcus β-hemolítico es
A
Y
dependiente de la concentraciones de 250, 500, 750 y 1000 mg/mL
DI
RE
CC
IO
N
DE
SI
ST
EM
AS
DE
IN
FO
RM
ÁT
IC
de extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L. “molle”.
8
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III.
MATERIAL DE ESTUDIO
procedentes del Centro
“molle”
IC
Hojas de Schinus molle L.
AC
IÓ
N
3.1
MATERIAL Y MÉTODO
M
UN
Poblado Mayor de Buena Vista, distrito de Chao, Departamento
CO
de La Libertad- Perú en Octubre del 2012 (Anexo 1). La
Y
identificación se realizó en el Herbarium Truxillense de la
RM
ÁT
IC
A
Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo- Perú (Anexo 2).
DE
MÉTODOS
AS
3.2
IN
FO
Diez primocultivos de Streptococcus β-hemolítico. (Anexo 3).
EM
3.2.1 Preparación de la muestra ensayo
ST
3.2.1.1 Tratamiento y obtención del extracto
SI
Las hojas seleccionadas fueron lavadas con agua
DI
RE
CC
IO
N
DE
destilada y secadas bajo sombra durante 2 días. Se continuó
con el secado en estufa a 40ºC por 24 horas y luego fueron
pulverizadas en un molino de cuchillas hasta obtener un polvo
fino por tamizaje. Posteriormente se hizo la obtención del
extracto alcohólico al 100% por el método de maceración
30
.
9
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A 30 g de polvo fino se maceró en 300 mL de alcohol al
100 % durante una semana, luego se reflujó por 2 horas;
posteriormente, se filtró y se concentró por pervaporación
AC
IÓ
N
obteniéndose el extracto hidroalcohólico de “molle” al 100% a
partir del cual se obtuvieron las concentraciones estudiadas
CO
M
UN
IC
(Anexo 4).
Y
3.2.1.2 Preparación de las diluciones para la realización del
A
Método de Difusión en Agar.
RM
ÁT
IC
A partir de extracto seco, se realizó diluciones en agua
destilada hasta obtener concentraciones de 250, 500, 750 y
IN
FO
1000 mg/mL, luego se taparon herméticamente y se
conservaron en refrigeración (4-7ºC) hasta realizar las
EM
AS
DE
pruebas.
Ensayo microbiológico
3.2.2.1
Aislamiento del cultivo de Streptococcus β-hemolítico.
SI
ST
3.2.2
DI
RE
CC
IO
N
DE
Se obtuvieron muestras mediante hisopado faríngeo, las
cuales fueron sembradas en Agar Sangre al 5% y medio
tioglicolato31, se incubó a 37ºC por 24 horas. Luego se
identificaron las colonias por la β-hemólisis en Agar Sangre
31
, por su morfología macroscópica (colonias pequeñas,
circulares, brillantes) y por la formación de grumos en el
medio tioglicolato (Anexo 5); así como por su morfología
10
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microscópica
(cocos
esféricos,
Gram
positivos,
no
esporulados). Se evaluó la pureza de los cultivos mediante
coloración Gram (Anexo 6), posteriormente se sembró en
AC
IÓ
N
tubos de ensayo conteniendo Caldo Infusión Cerebro -
3.2.2.2
Preparación
y
CO
M
UN
IC
Corazón (BHI) 32 y se incubó a 37ºC por 24 horas.
estandarización
inóculo
de
A
Y
Streptococcus β-hemolítico.
del
RM
ÁT
IC
Streptococcus β-hemolítico se cultivó en Agar Sangre y
con las colonias se prepararon suspensiones en 10 mL de
IN
FO
Solución Salina Fisiológica Estéril hasta alcanzar la densidad
similar a la turbidéz del tubo Nº 0,5 del Nefelómetro de Mac
SI
Sensibilidad antibiótica de Streptococcus β-hemolítico.
La prueba de sensibilidad antibiótica se determinó a los
10 cultivos de Streptococcus β-hemolítico utilizando como
control positivo de inhibición: Penicilina de 10 U (Anexo 7).
DI
RE
CC
IO
N
DE
3.2.2.3
ST
EM
AS
DE
Farland (1,5 x 108 cel/mL) 33.
11
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La evaluación se realizó mediante el método de difusión
de Kirby-Bauer modificado
33
. Se sembró el inóculo de
Streptococcus β-hemolítico en placas con Agar Müeller
por la técnica de siembra en superficie, se secaron
N
33
AC
IÓ
Hinton
las placas a estufa por 10 minutos aproximadamente.
M
UN
IC
Posteriormente se hizo un pocillo de 6 mm de diámetro en
cada placa, y se agregaron 0.2 mL de las concentraciones
CO
indicadas (250, 500, 750 y 1000 mg/mL) del extracto
A
Y
hidroalcohólico previamente preparado además del control,
RM
ÁT
IC
luego las placas se incubaron a 37ºC por 24 horas y se
procedió luego a dar lectura. El ensayo se realizó
por
3.2.2.4
DE
IN
FO
triplicado para cada cultivo (Anexo 7).
Medición de los halos de inhibición
EM
AS
Se realizó la medición del diámetro de los halos de
SI
ST
inhibición del crecimiento bacteriano en milímetros (mm).
Análisis estadístico
DI
RE
CC
IO
N
DE
3.2.3
Los resultados obtenidos se analizaron mediante el
programa SPSS 14 donde las pruebas estadísticas usadas
fueron el Análisis de Varianza unidireccional (ANOVA) para
observar las diferencias significativas entre las diferentes
concentraciones (Anexo 8).
12
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IV.
RESULTADOS
El promedio de los diámetros de los halos de inhibición de diez
de extracto hidroalcohólico de hojas de
Schinus molle L.
AC
IÓ
N
cultivos de Streptococcus β-hemolítico enfrentados a las concentraciones
“molle”
M
UN
IC
empleadas, varía de 10.73 hasta 22.57 milímetros (mm), tal como se
CO
muestra en la tabla 1.
A
Y
En la figura 1 se observa que el extracto hidroalcohólico de hojas de
RM
ÁT
IC
Schinus molle L. “molle” a las concentraciones empleadas (250, 500, 750,
1000 mg/mL) tiene efecto sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico,
IN
FO
y que el promedio de diámetros de los halos de inhibición de crecimiento lo
cual es expresado en milímetros (mm) va en aumento conforme aumentan
250, 500, 750 y 1000 mg/mL del extracto
DE
las concentraciones de
DI
RE
CC
IO
N
DE
SI
ST
EM
AS
hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L. “molle”.
13
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Tabla 1: Promedio de halos de inhibición (mm) de 10 cultivos de
Streptococcus β-hemolítico frente a cuatro concentraciones de
extracto hidroalcohólico de Schinus molle L. “molle” y un grupo
IC
AC
IÓ
N
control positivo
M
UN
N°
Concentraciones de "molle" (mg/mL)
500
750
1000
Y
Penicilina 250
CO
Cultivos
9.33
2
28
10.67
3
27
11.00
4
29
5
30
6
28
7
27
18.67
22.67
18.67
23.67
16.33
19.67
24.00
12.67
11.33
19.67
20.67
10.33
14.33
17.33
22.67
13.33
16.33
18.67
23.00
9.33
13.33
17.00
23.67
10.00
15.33
17.33
21.00
26
11.00
14.00
21.00
23.67
10
27
9.67
15.33
19.33
20.67
X
27.8
10.73
14.47
18.73
22.57
DE
AS
EM
ST
SI
29
DE
8
14.67
DI
RE
CC
IO
N
9
13.67
RM
ÁT
27
IN
FO
1
IC
A
Promedio de halos de inhibición (mm)
14
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ST
EM
AS
DE
IN
FO
RM
ÁT
IC
A
Y
CO
M
UN
IC
AC
IÓ
N
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Diámetros promedios de halos de inhibición de crecimiento de
N
1.
RE
CC
IO
Fig.
DE
SI
a: p < 0.05
Streptococcus
β-hemolítico a diferentes concentraciones de
DI
extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L. “molle”.
15
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DISCUSIÓN
A la especie vegetal Schinus molle L.
curativas
tales
como:
se le asignan
antirreumáticas,
cicatrizantes,
AC
IÓ
propiedades
“molle”
N
V.
desinflamante, repelente, diurético, expectorante, antiparasitario, antifúngico
M
UN
IC
y antibacteriano; por lo cual su uso en medicina tradicional es muy frecuente.
Esto se debe a la presencia de taninos, compuestos fenólicos, alcaloides,
CO
flavonoides, saponinas, esteroles, terpenos y aceite esencial; localizado en
A
Y
la corteza y hojas de la planta; los cuales pueden explicar su actividad
RM
ÁT
IC
biológica 29.
IN
FO
En el presente trabajo se determinó el efecto de la concentración del
extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
“molle” sobre la
DE
viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”. Observándose que las
EM
AS
concentraciones de extracto empleadas (250, 500, 750 y 1000 mg/ mL)
ST
tienen efecto sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico, tal como se
SI
observan en la tabla y en la figura 1. Esto podría compararse con el trabajo
DE
realizado por Cruz y col, quienes trabajando con extracto hidroalcohólico de
RE
CC
IO
N
Schinus molle L. “molle” encontraron que, tiene efecto antimicrobiano contra
DI
Staphylococcus aureus 34.
16
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El efecto de las concentraciones de extracto hidroalcohólico de hojas
de Schinus molle L.
“molle” sobre la viabilidad de Streptococcus β-
AC
IÓ
flavonoides, saponinas esferoidales, terpenos y aceites esenciales 35.
N
hemolítico podría atribuirse a que sus hojas contienen taninos, alcaloides,
M
UN
IC
Los taninos son compuestos fenólicos cuya acción antimicrobiana se
debe a su capacidad para desnaturalizar proteínas, inactivar adhesinas
A
Y
CO
microbianas, enzimas, y formar complejos con la pared celular 36.
RM
ÁT
IC
Los alcaloides, constituyen un grupo heterogéneo de bases
nitrogenadas, la mayoría contiene un anillo aromático
y su efecto
IN
FO
antimicrobiano puede estar relacionado con la capacidad que presentan para
DE
inhibir la biosíntesis de ácidos nucleicos 36.
EM
AS
Los Flavonoides, son pigmentos vegetales que poseen un esqueleto
ST
carbonado, tiene actividad antimicrobiana debida probablemente a su
SI
habilidad para formar complejos con las proteínas solubles y extracelulares y
RE
CC
IO
N
DE
el complejo con la pared bacteriana 36.
Las saponinas poseen una importante actividad antibacteriana, debido
a que reducen la tensión superficial y actúan sobre los lípidos de la
DI
membrana provocando alteraciones de las mismas, lo que conlleva a la
muerte celular; para ello se sugiere la formación de complejos con el
colesterol presente en la membrana 37.
17
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Los posibles mecanismos de acción de los terpenos contenidos en los
aceites esenciales puede deberse a su volatilidad y bajo peso molecular, de
esta forma pueden atravesar estructuras de resistencia de la especie
AC
IÓ
N
bacteriana fácilmente. Así, el daño a la membrana citoplasmática, promueve
la formación de poros por los cuales difunden moléculas e iones
M
UN
IC
(fundamentalmente K+ y H+), lo que finalmente compromete la viabilidad de
CO
la membrana 37.
A
Y
Los aceites esenciales de Schinus molle son una mezcla de
aldehído
cinámico,
RM
ÁT
IC
compuestos químicos que se encuentran en un 2% en las hojas y contienen:
mirceno,
geraniol,
borneno,
cardineno,
cadinol,
IN
FO
calacoreno, calamenediol, calamaneno, canfeno, carvacrol, ácido gálico,
butirato de geraniol, limoneno, ácido linoleico, ácido palmítico, α y β pineno,
38, 39
.
EM
AS
DE
p-cimeno, α-felandreno, δ-cadineno y principalmente sabineno
ST
Considerando la gran variedad de compuestos químicos presentes en
SI
los aceites esenciales de Schinus molle es muy probable que su actividad
DE
antimicrobiana no sea atribuible a un mecanismo específico, sino a la acción
RE
CC
IO
N
combinada de varios de ellos sobre distintas localizaciones de la célula.
Algunos estudios demuestran que los componentes de menor proporción
tienen un papel crítico en la actividad antimicrobiana, posiblemente debido a
DI
un efecto sinérgico entre ellos 39.
18
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En el caso de las bacterias Gram positivas como Streptococcus βhemolítico, los aceites esenciales de Schinus molle se introducen a través de
los lípidos de la membrana celular y mitocondrial, alterando su estructura y
AC
IÓ
N
haciéndola más permeable. Como consecuencia tiene lugar una fuga de
iones y de otros contenidos celulares, de forma más o menos intensa, que
demuestra en un
CO
La acción antimicrobiana de Schinus molle se
M
UN
IC
llevan a la muerte celular 40.
A
Y
estudio realizado por Gundidza donde demuestra que el aceite esencial de
siguientes
especies
bacterianas:
RM
ÁT
IC
las hojas frescas de Schinus molle tienen actividad significativa contra las
Klebsiella
pneumoniae,
Alcaligenes
Proteus
vulgaris,
Clostridium
sporogenes,
Calcoacetica
DE
aerogenes,
IN
FO
faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Leuconostoc cremoris, Enterobacter
acinetobacter, Escherichia coli, Natriegens beneckea, Citrobacter freundii,
ST
EM
AS
Serratia marcescens, Bacillus subtilis y Thermosphacata brochothrix 41.
SI
Flores y col determinaron que el aceite esencial de Schinus molle
DE
tiene efecto antimicrobiano contra Shigella flexneri, luego de evaluar el
RE
CC
IO
N
efecto de diferentes aceites esenciales extraídos de hojas de plantas de
origen medicinal
42
. Así como, Pauli evaluó las propiedades de los aceites
esenciales, llegando a la conclusión que éstos tienen acción inhibitoria frente
DI
a bacterias, hongos y levaduras 43.
19
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En la figura 1 se observa que a medida que aumentan las
concentraciones de extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
“molle” en el rango de 250 a 1000 mg/mL, aumenta el diámetro del halo de
AC
IÓ
N
inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico; lo cual avalado por
el análisis estadístico realizado indica que hay diferencia significativa entre
M
UN
IC
las concentraciones de extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
“molle” y el halo de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico
Lo que demuestra que el crecimiento de Streptococcus
CO
(Anexo 8).
β-
A
Y
hemolítico es dependiente de la concentración de extracto hidroalcohólico de
RM
ÁT
IC
hojas de Schinus molle L. “molle”.
IN
FO
La figura 1 muestra que estadísticamente, cada tratamiento es
distinto; lo cual implica que a estas concentraciones el extracto
DE
hidroalcohólico de hojas Schinus molle L. podría utilizarse como alternativa
EM
AS
en el tratamiento de faringitis estreptocócica. Sin embargo es necesario
ST
tener en cuenta que la composición de los extractos vegetales puede variar
SI
incluso dentro de una misma especie debido a la localización geográfica,
RE
CC
IO
N
DE
estado de crecimiento de la planta y condiciones de siembra.
Los resultados aquí presentados destacan y justifican el uso de
DI
Schinus molle L. en el tratamiento de faringitis estreptocócica.
20
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VI.
CONCLUSIONES
 El extracto hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L.
AC
IÓ
N
“molle”
medida
que
aumentan
las
concentraciones
CO
 A
M
UN
IC
afecta la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”.
de
extracto
A
Y
hidroalcohólico de hojas de Schinus molle L. “molle” en el rango de
RM
ÁT
IC
250 a 1000 mg/mL aumenta el diámetro del halo de inhibición del
DI
RE
CC
IO
N
DE
SI
ST
EM
AS
DE
IN
FO
crecimiento de Streptococcus β-hemolítico.
21
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ANEXOS
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Anexo 1. Schinus molle L. “molle”
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ANEXO 2. Constancia de Identificación de Schinus molle L. “molle”
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Anexo 3. Cultivo de Streptococcus β-hemolítico
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2
4. Proceso de obtención del extracto hidroalcohólico de hojas
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Anexo
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1
ST
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de Schinus molle L. “molle”
DE
SI
1) Polvo seco de hojas de Schinus molle L. macerado en alcohol
RE
CC
IO
N
2) Reflujo del polvo seco de hojas de Schinus molle L. macerado en
alcohol
DI
3) Concentración por pervaporación
4) Extracto hidroalcohólico Schinus molle L.
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Anexo 5. Crecimiento de Streptococcus β-hemolítico en agar sangre y
DE
en medio tioglicolato
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a) Colonias de Streptococcus β-hemolítico en agar sangre
DI
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CC
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N
DE
SI
ST
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b) Streptococcus β-hemolítico en medio tioglicolato
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DE
Anexo 6. Coloración Gram de Streptococcus β-hemolítico
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A
C
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EM
AS
DE
IN
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B
E
SI
D
hemolítico por control positivo de inhibición (A)
β-
y por
diferentes concentraciones de extracto hidroalcohólico de
hojas de Schinus molle L. “molle” (B, C, D, E)
DI
RE
CC
IO
N
DE
Anexo 7. Halos de inhibición de crecimiento de Streptococcus
B: 250 mg/mL
C: 500 mg/mL
D: 750 mg/mL
E: 1000 mg/mL
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Anexo 8. Análisis de varianza y prueba Tukey del efecto del extracto
hidroalcohólico de Schinus molle L. “molle” sobre el crecimiento
N
de Streptococcus β-hemolítico
AC
IÓ
ANOVA de un factor
Media
4
447,651
Intra-grupos 80,256
45
1,783
Total
49
N
EM
AS
TRATAMIENTO
10
ST
250,00
DE
1000,00
RE
CC
IO
Tukeya
de 750,00
N
HSD
SI
500,00
10,00
Sig.
IC
Subconjunto para alfa = 0.05
DE
CRECIMIENTO
,000
(0.05)
IN
FO
1870,859
251,002
Sig.
A
Inter-grupos 1790,603
CO
cuadrática
RM
ÁT
cuadrados
F
M
UN
de gl
Y
Suma
IC
PROMEDIOS
1
2
3
4
5
10,7330
10
14,4650
10
18,7340
10
22,5690
10
27,8000
1,000
1,000
1,000
1,000
1,000
DI
Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 10,000.
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