Colegio Santa Sabina 4to medio Dif. Depto. De Ciencias Prof. Paulette Rivera F. Transcripción en Eucariontes Aprendizaje esperado: Conocen que en procariontes, genes que codifican proteínas relacionadas funcionalmente se encuentran agrupados en regiones (operón) que se transcriben desde un sitio único generando un RNAm para varias proteínas. En eucariontes, cada gen se transcribe desde su propio sitio de inicio y origina un RNA que debe ser procesado antes de ser traducido en proteína, debido a que las regiones que codifican un gen eucarionte (exones) se encuentran físicamente separadas por regiones no codificantes (intrones). La transcripción es el proceso durante el cual la información genética contenida en el DNA es copiado a un RNA de una cadena única llamado RNA-mensajero. •La transcripción es catalizada por una enzima llamada RNApolimerasa. •El proceso se inicia separándose una porción de las cadenas de DNA: una de ellas, llamada hebra sentido (3´- 5´) es utilizada como molde por la RNA-polimerasa (5´-3´) para incorporar nucleótidos con bases complementarias dispuestas en la misma secuencia que en la hebra anti-sentido, complementaria de la hebra sentido inicial. La única diferencia consiste en que la timina del DNA inicial es sustituída por uracilo en el RNA mensajero. Así, por ejemplo, una secuencia ATGCAT de la hebra sentido del DNA inicial producirá una secuencia UACGUA. ¿Qué diferencias observas en estos dos tipos de transcripción? Compara la síntesis del triptófano en procariontes y eucariontes CARACTERÍSTICAS: •Los genes poseen un promotor donde se fija la ARN polimerasa. •Posee secuencias de consenso: TATAAT (caja Pribnow) y secuencia TTGACA. •Los genes que codifican para una misma vía metabólica se localizan en regiones contiguas del ADN. •Los genes se organizan en una unidad transcripcional: OPERON (organización regulada) •Cinco genes transcriben para 1 molécula de ARNm. •El ribosoma traduce el ARNm (ARN policistrónico) en una o varias proteínas. Bacteria Escherichia coli. Síntesis del triptófano. CARACTERISTICAS: 5 genes codifican la síntesis del trp. Los 5 genes se encuentran en 4 cromosomas diferentes. cada gen se transcribe desde su propio sitio de inicio. En la transcripción se origina un ARNm primario que debe ser procesado. Levadura: Saccharomyces cerevisiae. Síntesis del triptófano. El ARNm (ARN monocistrónico) listo se traduce en los ribosomas en1 sola proteína. En eucariontes: Cada gen tiene su propio promotor y señal de término de la transcripción. El ARN es cistrónico (una sola proteína). Algunos promotores poseen una secuencia de bases llamada Caja TATA. (25 a 30 pares de bases) Hay secuencias que regulan la transcripción del gen: secuencias de proteínas reguladoras o factores de transcripción.(que anteceden a la región codificadora de proteínas) Los genes eucariontes como el gen β- globina, contienen regiones reguladoras de la transcripción que anteceden a la región que codifica para proteínas. Confecciones una tabla comparativa que contemple los siguientes aspectos: N° de cromosomas. Ubicación de los genes en los cromosomas. N° de sitios de inicio de la transcripción. Organización de genes en Operón. Cantidad de ARNm formados. Procesamiento del ARNm (maduración). Tipo de ARN según números de proteínas a las que da origen. Participación de proteínas reguladoras o factores de transcripción. Cantidad de proteínas formadas. Cantidad de enzimas que participan en la vía metabólica de la formación del triptófano Comparación entre la transcripción en procariontes y eucariontes. Secuencia de nucleótidos RNA mensajero codifican copia del DNA inicial Por lo tanto, el RNA inicialmente transcrito Proteínas regiones que no codifican proteínas intrones. partes que codifican proteínas exones contiene tanto exones como intrones La transcripción en eucariontes Implica un procesamiento del ARNm sintetizado por la ARN polimerasa. 2 1 Estabilidad del mensaje genético y optimización de su traducción. 3, 4 El transcrito primario sufre varios procesamientos que incluyen: -1. La adición de un capuchón en el extremo 5´ (CAP 5´). -2. La adición de una cola de poliA en su extremo 3´.(100 a 250 Ribonucleótidos de adenina)(La Endonuleasa que corta el ARNm para la adición de la cola por la PoliA polimerasa) -3. Remoción de los intrones y empalme de exones (splicing). -4. Generación de ARN maduro listo para salir al citoplasma para su traducción. . Sin embargo, antes de que abandone el núcleo para dirigirse al citoplasma donde se encuentran los ribosomas, este RNA es procesado mediante operaciones de "corte y empalme", eliminándose los intrones y uniéndose entre sí los exones. La eliminación unión posterior de los exones sucesivos intrones mecanismo de corte eliminar los intrones regiones de paso de exón a intrón y de intrón a exón mecanismo de corte y unión "splicing" unión de dos exones consecutivos dos reacciones transesterificación intercambio de un enlace fosfidiéster por otro Luego, las secuencias de intrones son reconocidas y removidas por moléculas de ARN nucleares pequeñas (ARNnp) que interaccionan con proteínas formando partículas ribonucleoproteicas pequeñas que constituyen lo que se ha denominado el "espliceosoma". La β-galactosidasa es una enzima de gran importancia en la industria porque se usa para fermentar los azúcares de la lactosa. La producción de yogur y queso, por ejemplo, necesita bacterias que expresen esta enzima. Además, es usada para adicionarla a los productos lácteos con el fin de eliminar los residuos de lactosa y hacer productos deslactosados. Otra función crucial consta de identificar si las bacterias presentes en el agua potable son coliformes. La presencia de estas bacterias se puede identificar porque la galactosidasa está presente en bacteria como Escherichia coli, común en la materia fecal. Para comenzar, leamos: MODELO OPERÓN Jacob, Monod y colaboradores analizaron el sistema de la lactosa en E. coli, de manera que los resultados de sus estudios permitieron establecer el modelo genético del Operón que permite comprender como tiene lugar la regulación de la expresión génica en bacterias. Jacob y Monod recibieron en 1965 el Premio Nobel pos estas investigaciones Francois Jacob Jacques Monod Son pequeños fragmentos circulares de ADN, además de su cromosoma principal, contienen de 2 a 30 genes. Algunos tienen la capacidad para incorporarse o salir del cromosoma bacteriano Se denomina episoma a un plásmido incorporado al cromosoma bacteriano. Los plásmidos se replican en manera similar al cromosoma bacteriano. El ADN procariota se organiza en paquetes coherentes denominados OPERONES, en los cuales se encuentran los genes para funciones interrelacionadas. Codifica para proteína represora Reconocido por la ARN polimerasa Reconocido por la proteína represora Codifican para las proteínas necesarias ¿Cómo está formado un operón? Los principales elementos que constituyen un operón son los siguientes: Los genes estructurales: llevan información para polipéptidos. Se trata de los genes cuya expresión está regulada. Los operones bacterianos suelen contener varios genes estructurales, son poligénicos o policistrónicos. Hay algunos operones bacterianos que tienen un solo gene estructural. El promotor (P): se trata de un elemento de control que es una región del ADN con una secuencia que es reconocida por la ARN polimerasa para comenzar la transcripción. Se encuentra inmediatamente antes de los genes estructurales. Abreviadamente se le designa por la letra P. El operador (O): se trata de otro elemento de control que es una región del ADN con una secuencia que es reconocida por la proteína reguladora o represora. El operador se sitúa entre la región promotora y los genes estructurales. Abreviadamente se le designa por la letra O. El gen regulador (i): secuencia de ADN que codifica para la proteína reguladora o represora que reconoce la secuencia de la región del operador. El gen regulador está cerca de los genes estructurales del operón pero no está inmediatamente al lado. Abreviadamente se le denomina gen i. Proteína reguladora o represora: proteína codificada por el gen regulador. Está proteína se une a la región del operador para bloquearlo. ¿Cómo está formado un operón? E. Coli puede utilizar glucosa u otros azúcares, como el disacárido lactosaRequiere de 2 enzimas Lactosa permeasa Se ubica en la membrana plasmática Permite el transporte de la lactosa al interior de la célula. Βgalactosidasa Cataliza la ruptura de la lactosa para generar los monosacáridos galactosa y glucosa. Β- galactósido transacetilasa *Participa en el metabolismo de los Bgalactósidos, diferentes a la lactosa. *También llamada tiogalactósido transferasa, que cataliza la transferencia del grupo acetil del acetil Coenzima A al 6-OH de un aceptor tiogalactósido. Este gen no está relacionado con el metabolismo de la lactosa. Medio de cultivo bacteriano Ausencia de lactosa Las enzimas lactosa permeasa y Bgalactosidasa no son necesarias Presencia de lactosa Las enzimas lactosa permeasa y Bgalactosidasa son necesarias su expresión es reprimida. Se induce la expresión Disminuyen sus niveles en el citoplasma Aumentan sus niveles en el citoplasma Operon Lac Genes estructurales Genes reguladores Codifican proteínas enzimáticas que metabolizan la lactosa Codifican para las proteínas que regulan la actividad de los genes estructurales. 3 genes Gen Z Codifica para la enzima Bgalactosidasa. Gen Y Codifica para la enzima lactosa permeasa Gen A Codifica para la enzima Bgalactósido transacetilasa Son contiguos y se transcriben en 1 solo ARN policistrónico. Junto al Gen z (estructural) Se transcriben 2 secuencias específicas Operador (O) Promotor (P) Para Junto a él se encuentran Impedir Gen regulador I Que la ARN polimerasa Se une al Que codifica para una Proteína Transcriba el Operón Llamada Represor En ausencia de lactosa La unión Operadorrepresor Reprime la sistema No se sintetizan Proteínas necesarias Metabolizar Lactosa En presencia de lactosa Entonces… El represor Libera al La lactosa operador Se une al Represor Y la ARN polimerasa Produciendo un Cambio conformacional que disminuye La afinidad Por el Se puede unir al Promotor Para Transcribir Los Operador Genes estructurales 1. Represor se une al operador e impide que la ARN polimerasa transcriba los genes estructurale s Z, Y , A 1 2 2. En presencia de lactosa, ésta se une al represor y éste libera al operados, entonces la ARN polimerasa puede transcribir. ¿Cuáles son los genes de control en el modelo del operón Lac y cuáles son sus funciones? 2. ¿Cuáles son los genes estructurales del modelo y cuál es la función de cada uno? 3. ¿Qué ocurre con los genes del operón en ausencia y en presencia de lactosa? 4. ¿Cómo se regula la transcripción en procariontes? 1. Responder: Regulación de la transcripción en eucariontes. En organismos eucariontes multicelulares el Control de la expresión génica Se relaciona con cambios que ocurre en la Diferenciación de los tejidos y Etapa embrionaria Depende de las Variaciones hormonales En el Medio interno Regulación de la transcripción en Eucariotes: Para que se inicie la transcripción se necesita de factores de transcripción para que la ARN polimerasa actué. 1. Un primer factor de transcripción reconoce la caja TATA. 2. Un segundo factor asegura el ingreso de la ARN polimerasa al sitio de inicio. 3. Unión de la ARN polimerasa II. 4. Factores adicionales ayudan a formar el complejo de iniciación en la zona del promotor. 5. Inicio de la transcripción. El complejo de iniciación puede ser acelerado o retardado por factores de transcripción específicos: proteínas activadoras o proteínas represoras. Proteínas activadoras: Se unen a una secuencia de nucleótidos llamadas secuencia amplificadora. Estimulan la formación del complejo de iniciación acelerando la transcripción. Proteínas represoras: Se unen a la secuencia silenciadora. Retardan el inicio de la transcripción. Diferencia en la trascripción: Eucariontes Se requiere la participación de factores de transcripción para que se forme el complejo de iniciación para que pueda transcribirse. Procariontes En ausencia de represores la ARN polimerasa se une al promotor y transcribe. Control hormonal de la transcripción: Hormonas Hidrosolules Características: 1.Se unen a receptores de superficie celular (no pueden atravesar la membrana). 2.Pueden ser aminas: adrenalina y hormonas peptídicas: insulina y glucagón. 3.Provocan en el receptor un cambio conformacional y una transducción de señales (segundos mensajeros). Ejemplo: activan al factor de transcripción NF- KB que ingresa al núcleo inducen la expresión de genes que participan en la respuesta inmune en células de mamíferos. Control hormonal de la transcripción: Hormonas Liposolubles Características: 1.Se unen a receptores intracelulares.(atraviesan la membrana). 2.Incluye las hormonas esteroidales, como las hormonas sexuales, los esteroides cortisol y la aldosterona, las hormonas tiroideas y los retinoides (derivados de la vitamina A). 3.Interactúan con regiones reguladoras en el ADN llamados “elementos de respuesta de la hormona” Estas hormonas producen un cambio conformacional mediante una proteína que se libera “Hsp90”, la que ayuda a la formación del complejo de iniciación y comience la transcripción. Hormonas Liposolubles Escriba lo que debe ocurrir previamente para que se realice el proceso de transcripción en eucariontes. 2. ¿Para qué sirven las proteínas activadoras y las proteínas represoras? 3. Escriba un ejemplo de lo que ocurre en la transcripción de señales al llegar una hormona hidrosoluble y una liposoluble a la célula. 1. Responder: Responder: 1. Indique la afirmación falsa y justifíquela: a) Una parte importante del DNA de cada célula no tiene función y se estima que sólo alrededor del 10% del DNA eucarionte codifica proteínas. b) Los genes en el DNA procariontes se organizan en grupos que funcionan como unidades transcripcionales (operones). c) La organización del DNA en exones e intrones puede determinar una mayor variación en las proteínas. d) Los promotores son regiones reguladoras de la expresión génica a los cuales se unen factores de transcripción. e) Las bacterias no tienen la capacidad para regular la expresión génica en respuesta a los cambios ambientales. 2. Los intrones se transcriben junto con los exones en el RNA mensajero, sin embargo no participan en la síntesis de la proteína. ¿Qué aseveración considera correcta? justifique las falsas. a) Los intrones se remueven del RNA mensajero y este proceso puede generar distintas proteínas a partir de un mismo gen. b) El aparato de síntesis de proteínas distingue entre intrones y exones y sólo traduce éstos últimos. c) Los exones tienen una composición de nucleótidos distinta de los intrones. d) En eucariontes cada gen se transcribe desde su propio sitio de inicio en cambio en procariontes varios genes comparten un sitio de inicio de la transcripción. e) Todo gen se expresa en una célula mientras no sea reprimido por un mecanismo regulador. Caracterice la transcripción en general. ¿Qué sentido tiene la hebra que transcribe la ARN polimerasa? ¿Cómo reconocería en un dibujo simple la transcripción en procariontes? ¿Y en eucariotes? ¿Cuál es la función del ARN de transferencia? ¿Qué es la caja TATA. ¿Qué es la cola de poli A y donde se ubica? ¿Cuál es la función de la endonucleasa? ¿Qué es el espliciosoma? ¿En qué sentido trabaja la ARN polimerasa? ¿Cuál es la función del ARN ribosomal? ¿Qué es la caja de Pribnow? ¿Qué son las secuencias de consenso? ¿Qué es el capuchón 5´ y donde se ubica? ¿Cuál es la función de la poli A polimerasa. ¿Qué es el ARNnp y para qué sirve? ¿Qué es un cistrón? ¿y un policistrón? ¿Qué es un exón? ¿ y un intrón? Compare el proceso de transcripción y traducción de la vía metabólica de producción de enzimas que participan en la síntesis de triptófano en eucariontes y procariotes, según: ejemplo de organismo que la realiza (específico), presencia de operón, tipo de ARN (cistrónico o policistrónico), números de sitios de unión para la síntesis de proteína, presencia de ARN primario, número de cromosomas y genes, Número de sitios de inicio para la síntesis del ARN. Dibuje el proceso formación de enzimas de síntesis de triptófano en levadura y en escherichia coli, Colocando los cromosomas, operón (en la que corresponda), indicando dónde ocurre la transcripción, la traducción, dónde está el ARNm (cistrónico o policistrónico) que se forma y dónde está la proteína o las proteínas formadas. Compare la regulación hormonal de la transcripción según la acción de las hormonas liposolubles y las hidrosolubles.
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