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[STOP]
Análisis ELISA para la determinación cuantitativa de progesterona en suero o plasma
humano
Presentación
55020
[REF]
96 determinaciones
Estuche completo
[IVD]
Uso previsto
La progesterona (Pregn-4-en-3, 20-dion) es una hormona esteroide C21
con un peso molecular de 314,5 Dalton. Es el gestágeno natural más
importante, producido por el cuerpo lúteo en mujeres no embarazadas y
por la placenta en embarazadas. En cantidades reducidas se encuentra en
los testes de hombres y en la corteza suprarrenal de hombres y mujeres.
La progesterona regula durante el ciclo de menstruación junto con los
estrógenos (especialmente el estradiol) órganos asociados. Una función
importante es la regulación de la transformación del endometrio al inicio
del embarazo así como el mantenimiento del endometrio.
La progesterona circulante en el sistema sanguíneo está ligado en un 9098% a proteínas portadoras (CBG, SHBG) y albúmina. La parte restante, la
progesterona libre, es la forma activa del esteroide.
Los valores de progesterona en la sangre varían fuertemente en
dependencia de las fases del ciclo de menstruación. Los valores reflejan
las actividades de los ovarios y del cuerpo lúteo de tal manera que la
relevancia de la determinación de progesterona puede verse en la
comprobación de la ovulación y en mujeres no embarazadas en el
dictámen de la función del cuerpo lúto1.
Puede comprobarse una secreción anormal de progesterona durante la
fase premenstrual, en insuficiencia luteal, dismenorrea y en el rechazo
retardado del endometrio2, 3, 4, 5.
Principio
- EIA Competitivo El análisis PROGESTERONE ELISA de HUMAN está destinado al uso
profesional. El ELISA se basa en la interacción competitiva de
progesterona de la muestra y un conjugado enzimático–hormonal por
una limitada cantidad de anticuerpos (conejo) anti-progesterona
inmovilizados. Por eso la cantidad de conjugado hormonal-enzimático
ligado es inversamente proporcional a la concentración de progesterona
en la muestra.
Después de la incubación de la muestra y del conjugado hormonalenzimático es eliminado por lavado el conjugado no ligado. Con la adición
de la solución sustrato (paso 2) se desarrolla un color azul, que se
transforma a amarillo después de parar la reacción. La intensidad del
color es inversamente proporcional a la concentración de progesterona en
la muestra.
La absorbancia de los calibradores y muestras se determina haciendo uso
de un lector de micropocillos ELISA o sistemas completamente
automatizadas (p.ej. instrumentos de las líneas HumaReader o ELISYS de
HUMAN). Los valores de concentración de muestras desconocidas se
determinan mediante una curva de calibración obtenida con ayuda de
calibradores de concentraciones conocidas de progesterona.
[CON]
[WS]
[SUB]
Solución de parada (tapa roja)
Acido sulfúrico
0.5 mol/l
Agentes preservantes: Concentración total < 0,6%
Notas de seguridad
No ingiera los reactivos. Evite el contacto con los ojos, piel y membranas
mucosas. Todas las muestras de pacientes y [CAL] deben ser manipulados
como posibles agentes potencialmente infecciosos. [CAL] han sido
encontrados negativos para HBsAg y anticuerpos contra VHC y VIH 1 + 2
en los donantes. Use ropa protectora y guantes desechables según las
buenas prácticas de laboratorio (GLP).
Todos los materiales contaminados con muestras o [CAL] deben inactivarse por métodos aprobados (autoclavado o tratamiento químico) según
las regulaciones aplicables.
[STOP] irrita los ojos, la piel y membranas mucosas. En caso de contacto,
lave intensamente con abundante agua y consultar un médico.
Estabilidad
Los reactivos son estables hasta las fechas de caducidad señaladas en las
etiquetas individuales cuando se almacenan a 2...8°C.
Después de abierto los reactivos deben almacenarse a 2...8°C y utilizarse
dentro de 60 días (ver también „Nota“).
[MIC]
- Están selladas en un envase de aluminio con un desecante.
- Antes de abrir, las tiras deben estar a temperatura ambiente.
- Las tiras no utilizadas deberán ser devueltas al envase con cierre y
almacenadas con el desecante. Las tiras almacenadas de esta manera a
2...8°C pueden ser usadas dentro de 60 días (ver “Nota”).
- No toque el bordo superior o el fondo de los micropocillos con los
dedos.
Preparación de reactivos
Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente (15...25°C) antes
del uso. Los reactivos que no están en uso deben almacenarse siempre a
2...8°C.
Solución de trabajo de lavado [WASH]
- Diluya [WS] a 1200 ml con agua fresca, desionisada en recipiente
apropiado. Enjuague el frasco varias veces.
- Estabilidad: Hasta 2 semanas a 15...25°C.
Muestra
Suero o Plasma EDTA
No use muestras hiperlipémicas o hemolíticas así como muestras que
contienen azida de sodio.
Las muestras pueden almacenarse 3 días a 2...8°C o hasta 30 días a -20°C.
Congele y descongele solamente una vez. Las muestras descongeladas
deben ser homogeneizadas. Elimine el material particulado por
centrifugación o filtración.
Procedimiento
Siga el procedimiento exactamente como se describe.
Notas de uso
U1: No mezcle o use componentes de diferentes números de lote. No
mezcle tapas de envases (riesgo de contaminación). No use reactivos
despúes de sus fechas de expiración.
Reactivos y contenidos
[MIC]
12
Tiras de Micropocillos (en portatiras)
Tiras (divisibles) de 8 pocillos
con anticuerpos (conejo) anti-progesterona
[CAL]
14 ml
A - G Calibradores (tapa blanca)
7x1.0mllistos para usar, en suero humano
Concentración de progesterona: 0 (A), 0,3 (B), 1,25 (C),
2,5 (D), 5,0 (E), 15,0 (F) y 40,0 (G) ng/ml
U2: No use reactivos que pueden ser contaminados o que tienen aspecto
diferente o olen diferentemente que normal.
25 ml
U4: [MIC] – saque el número requerido y colóquelos firmemente en el
portatiras.
Conjugado enzimático-antígeno (tapa blanca)
listo para usar, coloreado rojo
Conjugado Progesterona – HRP
pH 6,9  0,2
BSA
0,5 %
TRIS/MOPS buffer
0,05 mol/l
NaCl
0,1 mol/l
30 ml
Solución de lavado (tapa negra)
Concentrado para aprox. 1200 ml
TWEEN 20
TRIS-NaCl-buffer
25 ml
Solución sustrato (tapa amarilla)
listo para usar
3,3', 5,5'- Tetrametilbenzidina (TMB)
Peróxido de hidrógeno
Buffer acetato de sodio
DMSO
pH 7.3  0.1
0.2 %
3.0 mmol/l
pH 3.5 – 4.0
0.26 g/l
0.015 %
0.05 mol/l
<5%
U3: Note el reparto [CAL], las muestras y los controles cuidadosamente
en la hoja provista en el estuche.
U5: Analice cada [CAL], control o muestra por duplicado. Pipetéelos en el
fondo de los micropocillos.
U6: Siempre deben agregarse los reactivos en el mismo orden y tiempo
para minimizar diferencias en los tiempos de reacción entre los
micropocillos. Es importante para obtener resultados reproducibles.
El pipeteo de las muestras no debe exceder de 10 minutos. De lo
contrario pipetee la curva [CAL] en las posiciones indicadas en la
mitad del intervalo de la serie. Si se emplea más de una placa, repetir
la curva de calibración para cada placa.
U7: Evite/remueva burbujas de aire antes de las incubaciones y lecturas
de absorbancia.
U8: [SUB] inicia y [STOP] termina una reacción cinética. Evite la luz
intensa durante el desarrollo del color.
U9: [MIC] -Después de cada pipeteo agite suavemente durante 20-30 sec.
sin verter las soluciones para asegurar una buena mezcla. Si está
disponible, mezcle en un mezclador de pocillos (p.ej. HumaReader).
Procedimiento de lavado
El procedimiento de lavado es crítico. Un lavado insuficiente producirá
una mala precisión o absorbancias falsamente elevadas.
L1: Aspire el contenido, agregue [WASH], aspire después de aproximadamente 30 sec. de enjuague y repita el lavado.
L2: En el caso de lavadores automáticos, se deben llenar y enjuagar con
[WASH] y después lavar los pocillos 3 veces. Asegúrese que el lavador
llene los pocillos completamente y los espire eficientemente después
de 30 sec. (líquido remanente: < 15 µl).
L3: Después del lavado, remueva el líquido remanente invirtiendo los
micropocillos sobre papel absorbante.
Esquema de pipeteo
Los reactivos y las muestras deben estar a temperatura ambiente antes
del uso.
Paso 1
Pocillo [µl]
A1...F2
G2...
[CAL] A-G; en duplicado
25
--
Muestras, controles; en duplicado
--
25
200
200
400
400
200
200
100
100
[CON]
Mezcle
Incube por 60 min. a 20...25°C
Paso 2
[SUB]
Incube por 15 min. a 20...25°C (ver U8)
[STOP]
Valores normales
Valores de progesterona
Mujeres normales
Fase folicular
Fase luteal
Menopausia
0,2 – 1,4 ng/ml
4 – 25 ng/ml
0,1 – 1 ng/ml
Hombres normales
0,1 – 1 ng/ml
Factor de cálculo: 1 ng/ml = 3,18 nmol/l
Cada laboratorio debe determinar sus propios rangos de referencia
utilizando los instrumentos/equipos, métodos de colección de sangre y
técnicas de análisis usuales empleados normalmente en dicho
laboratorio.
Características de la ejecución
La sensibilidad analítica de la prueba PROGESTERONE ELISA es de 0,03 0,07 ng/ml de material de muestra.
Muestras con una concentración de progesterona mayor a 40 ng/ml
deben diluirse con [CAL] A (0 ng/ml) 1+9 y debe multiplicarse el resultado
por 10.
Las características de ejecución de la prueba pueden consultarse en el
informe de verificación, accesible vía
www.human.de/data/gb/vr/el-prog.pdf o
Lave 3 veces, como descrito (ver L1/L2 + L3)
[WASH]
La determinación de progesterona por sí sola no es suficiente para un
diagnóstico. La anamnesis así como exámenes clínicos adicionales,
especialmente parámetros diagnósticos (hormonales), deberían tenerse
en cuenta.
Mezcle cuidadosamente
Mida la absorbancia a 450 nm lo más pronto posible o dentro de
30 min. después de terminar la reacción usando una longitud de onda
de referencia de 620 - 690 nm (si está disponible).
Validación del análisis
Los resultados son válidos si se cumplen los siguientes criterios:
La absorbancia media (DO) de [CAL] A ≥ 1,0.
La diferencia entre los duplicados de [CAL] A no excede de un 10%.
Cálculo
Grafique las absorbancias mesuradas contra las concentraciones de [CAL]
en papel milimetrado lineal. La interpolación apropriada de los puntos
mesurados graficados da lugar a una curva de calibración desde la cual
puede determinarse la concentración del analito en la muestra.
Para calcular las concentraciones del analito, seleccionar una opción apropriada y validada para el cálculo de la curva (recomendación: punto a
punto).
Control de calidad
Según las buenas prácticas de laboratorio (GLP) deben analizarse
controles con cada curva de calibración. Para asegurar el funcionamiento
adecuado de la prueba, debe efectuarse un número estadísticamente
significativo de controles para establecer los valores medios y rangos
aceptables. Las muestras de control de calidad deben analizarse según las
regulaciones locales. Los resultados deben estar dentro de los rangos
establecidos.
www.human-de.com/data/gb/vr/el-prog.pdf
Si no puede acceder a las características de la ejecución vía internet,
póngase en contacto con su distribuidor local quien se las proporcionará
sin costo alguno.
Nota
Los componentes del estuche son estables hasta la la fecha de caducidad
aún después de abiertos. Sin embargo, la posibilidad de una
contaminación está directamente relacionada con el número de tomas
del reactivo. Por lo tanto, el límite de 60 días en frascos abiertos se fijó por
razones de seguridad.
La manipulación debe siempre estar de acuerdo con las buenas prácticas
de laboratorio (GLP*). ¡Los criterios de validación del análisis deben
cumplirse siempre!
(*Esto incluye: Coloque la tapa debida en el vial y ciérrelo firmemente / Saque de los viales
de stock solamente los reactivos necesarios para la corrida si entraran en contacto con otras
soluciones contaminantes como lo son las muestras, etc. / Las soluciones de stock siempre
deben regresarse a 2...8°C si no se usan.)
Literatura
1. Israel R. et al., Am. J.- Obstet. Gynecol. 112, 1043 (1971)
2. Soules M.R. et al., Fertil. Steril. 36, 31 (1981)
3. Maganliello P.D. et al., Fertil. Steril. 36, 55 (1981)
4. Hahlin M. et al., Hum. Reprod. 5, 622-626 (1990)
5. Buck R.H. et al., Fertil. Steril. 50, 752-755 (1988)
EL-PROG
INF 5502001 E
11-2013-23M
|
Interpretación de resultados
La concentración de progesterona en un paciente no solo puede variar de
día en día, sino también de hora en hora. Por lo tanto solamente
determinaciones de progesterona en serie pueden garantizar
interpretaciones más correctas de los valores determinados en
enfermedades ginecológicas o embarazos anormales.
Progesterona ocasiona, debido a un efecto termogenético, un aumento
de la temperatura basal. La valoración de los valores de progesterona se
facilita, si se realiza en relación con una curva de temperatura basal.
Los rangos de los valores de progesterona fluctúan desde por debajo de
1 ng/ml en la fase folicular hasta aprox.10-20 ng/ml en la fase luteal (vea
tabla de valores normales). Valores máximos son alcanzados 6-8 días
después de la ovulación y se mantienen por 4-6 días. 1-2 días antes del
sangrado de la menstruación los valores de progesterona vuelven a caer a
los valores bajos iniciales.
Durante el embarazo sube la concentración de la progesterona
placentaria en forma contínua a 200 ng/ml.
Human Gesellschaft für Biochemica und Diagnostica mbH
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