EJERCICIOS DE BIOLOGÍA CIENCIAS MEDIOAMBIENTALES 2006/2007 PRIMER CUATRIMESTRE Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 INTRODUCCIÓN La biología es una ciencia que busca comprender el ser vivo en su conjunto así como las interacciones que tiene con el medio y con otros organismos vivos que dan lugar a un ecosistema. Para ello, ha de emplear una gran diversidad de técnicas y métodos que le permitan analizar cómo es el ser vivo y cómo se producen los distintos procesos que permiten la vida tal y como hoy la conocemos. Como parte de este curso se han incluido créditos prácticos que se han dividido en prácticas de laboratorio y ejercicios. Mientras en las prácticas el alumno inicia el contacto con la realización del trabajo experimental, la obtención y el análisis de resultados, con estos ejercicios se pretende que el alumno comprenda y analice fenómenos largos en el tiempo que hacen imposible su realización en unas prácticas experimentales. Los ejercicios se han diseñado para complementar las prácticas experimentales y dar una perspectiva mas amplia de lo que es la biología y mostrar los problemas y las técnicas mas comunes de laboratorio que se encuentra un bió logo durante el desarrollo de una investigación. EJERCICIO 1 Obtención de una secuencia proteica a partir de una secuencia de DNA Los objetivos de este ejercicio son: familiarizarse con el uso del código genético para obtener la secuencia de una proteína a partir de un gen, analizar como una misma secuencia de DNA puede dar distintas proteínas según el marco de lectura que se emplee, y, finalmente, comprobar los efectos de los distintos tipos de mutaciones puntuales sobre una secuencia génica. 1.- En la primera parte, el alumno tiene que traducir los tres marcos posibles de lectura de la secuencia presentada (ORF open reading frames), según se considere el primer, segundo o tercer nucleótido de la secuencia como la base inicial del primer codón, por lo que podrían obtenerse teóricamente tres posibles péptidos. A continuación, buscar si existe un posible punto de inicio y realizar la traducción de la secuencia de DNA a partir del primer codón que se encuentre (esto es, desde el primer codón ATG que puede ser reconocido para iniciar la traducción). Es preciso hacer notar que la tabla del código genético que se proporciona es la que se emplea normalmente en los laboratorios, se indican los codones de DNA (que corresponden a la hebra complementaria a la que se transcribe) y que permiten trabajar directamente con las secuencias de DNA, ya que siempre se emplean 2 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 éstas para describir los genes en las publicaciones. Como puede comprobar es equivalente a la que se suele presentar en los libros de texto que corresponde a los codones del RNA. TABLA DEL CÓDIGO GENÉTICO SEGUNDA POSICIÓN DEL CODON T T C A G TTT Phe [F] TCT Ser [S] TAT Tyr [Y] TGT Cys [C] T TTC Phe [F] TCC Ser [S] TAC Tyr [Y] TGC Cys [C] C TTA Leu [L] TCA Ser [S] TAA Ter [end] TGA Ter [end] TCG Ser [S] TAG Ter [end] TGG Trp [W] P TTG Leu [L] R I CTT Leu [L] M CTC Leu [L] E R C CTA Leu [L] A CTG Leu [L] P ATT Ile [I] O ATC Ile [I] S I A ATA Ile [I] C ATG Met [M] I Ó GTT Val [V] N GTC Val [V] G GTA Val [V] GTG Val [V] GCT Ala [A] GAT Asp [D] GGT Gly [G] A T G E R T C E C R A A G P T O S C I A C G I Ó T N GCC Ala [A] GAC Asp [D] GGC Gly [G] C GCA Ala [A] GAA Glu [E] GGA Gly [G] A GCG Ala [A] GAG Glu [E] GGG Gly [G] G CCT Pro [P] CAT His [H] CGT Arg [R] CCC Pro [P] CAC His [H] CGC Arg [R] CCA Pro [P] CAA Gln [Q] CGA Arg [R] CCG Pro [P] CAG Gln [Q] CGG Arg [R] ACT Thr [T] AAT Asn [N] AGT Ser [S] ACC Thr [T] AAC Asn [N] AGC Ser [S] ACA Thr [T] AAA Lys [K] AGA Arg [R] ACG Thr [T] AAG Lys [K] AGG Arg [R] SECUENCIA DE DNA ...CCCGCCGCGCAGTCCGGGCCCGGCGCGATGGGGGCCGCCGC CGGCCGGAGCCCCCACCTGGGGCCCGCGC... TRES MARCOS DE LECTURA DE LA SECUENCIA DE DNA ORF 1 ORF 2 ORF 3 SECUENCIA PROTEICA DESDE EL PUNTO DE INICIACIÓN (ATG) 3 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 2.- ¿Existen diferencias entre los distintos péptidos obtenidos?. Si es así, explique a que se deben estas diferencias. 3.- Observando la tabla del código genético se puede ver que existen varios aminoácidos codificados por mas de un codón. ¿Qué ventajas ofrece esta redundancia?. 4.- Proponga mutaciones en la secuencia que den como resultado lo siguiente: mutación sin sentido inserción mutación con sentido mutación sinónima deleción Empleando el ORF 1, indique los péptidos resultantes en cada caso y compárelos con el obtenido previamente. 4 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 EJERCICIO 2 Digestión con enzimas de restricción de un DNA El empleo de las enzimas de restricción y los plásmidos es habitual en el laboratorio de Biología. Ambas herramientas son muy potentes y han permitido el desarrollo de la Biología Molecular, siendo hoy en día dos de las piezas claves en el desarrollo de cualquier estudio de esta rama de la Biología. El objetivo de este ejercicio es que el alumno conozca cómo se emplean y cuál es su utilidad básica a la hora de realizar el mapa de un fragmento de DNA a estudiar. Esto permite conocer la orientación del fragmento dentro un fragmento mayor y realizar posteriormente el clonaje del mismo en los plásmidos. Posteriormente estos plásmidos se emplean para secuenciar el DNA y realizar estudios funcionales de ese DNA y/o de la proteína que da lugar. 1.- Si estuviéramos trabajando con un DNA lineal como el que se muestra en la figura siguiente, ¿cuál es el tamaño en pares de bases (pb) de los fragmentos de DNA que se obtienen al realizar las digestiones con la enzima d, con la enzima e, con la enzima f y con las distintas combinaciones entre las mismas?. Los números corresponden al número de pares de bases del DNA (en total su tamaño es de 1500 pares de bases). e 0 f 500 d f 1000 d 1500 DIGESTIÓN d: DIGESTIÓN e: DIGESTIÓN f: DIGESTIÓN de: DIGESTIÓN df: DIGESTIÓN ef: 5 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 2.- En la figura se muestra un plásmido, un DNA circular de origen procariótico, con un tamaño de 4000 pares de bases. En el mismo hay cinco sitios de restricción, que corresponden a tres enzimas (a, b y c). La presencia de cinco sitios y solo tres enzimas indica que una o más de las enzimas pueden tener más de un sitio de corte. Al lado se muestra el resultado de una electroforesis en un gel de agarosa de los productos de las digestiones con las enzimas de restricción. En la electroforesis se separan los fragmentos de DNA generados, como consecuencia del corte con las enzimas, en función de su tamaño. El tamaño, como se ha comentado antes, se expresa en pares de base. El gel tiene siete carriles que corresponden a: M.- este carril corresponde al marcador, consiste en una serie de fragmentos de DNA con un tamaño conocido que se emplean como referencia para conocer el tamaño de los fragmentos obtenidos en la digestión con las enzimas de restricción. M a b c ab ac bc 0 500 3500 5000 pb 4000 pb 4500 pb 3000 pb 4000 pb 3000 2500 pb 1000 2000 pb 1500 pb 1000 pb 2500 1500 2000 800 pb 600 pb 400 pb 200 pb a.- este carril corresponde a los fragmentos de DNA obtenidos al digerir el plásmido con la enzima a. b.- este carril corresponde a los fragmentos de DNA obtenidos al digerir el plásmido con la enzima b. c.- este carril corresponde a los fragmentos de DNA obtenidos al digerir el plásmido con la enzima c. ab.- este carril corresponde a los fragmentos de DNA obtenidos al digerir el plásmido con las enzimas a y b al mismo tiempo. 6 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 ac.- este carril corresponde a los fragmentos de DNA obtenidos al digerir el plásmido con las enzimas a y c al mismo tiempo. bc.- este carril corresponde a los fragmentos de DNA obtenidos al digerir el plásmido con las enzimas b y c al mismo tiempo. En esta parte del ejercicio el alumno tiene que colocar en la figura del plásmido las enzimas de acuerdo con los resultados de las digestiones. Es importante recordar que las digestiones pueden dar como resultado fragmentos de diferente secuencia pero de igual tamaño, que en la electroforesis migrarán juntos aunque la banda resultante tendrá entonces mas intensidad. 3.- Las enzimas de restricción reconocen secuencias palindrómicas. Explique que son las secuencias palindrómicas y que ventajas ofrecen para este tipo de enzimas. 4.- Aunque las enzimas de restricción son empleadas en técnicas de Biología Molecular, tienen su origen en la célula procariotica. Explique cual es la función original de este tipo de enzimas en la célula procariotica. 7 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 EJERCICIO 3 El gen: su estructura básica en los eucariotas El gen es la unidad de transcripción básica. Consta de varios elementos que a lo largo del tiempo se han ido identificando e incorporando a la definición del mismo. A pesar de que en un principio se asoció la presencia de un gen a la de un producto proteico, hoy en día se admite que siempre hay un RNA aunque este no siempre es traducido para dar un producto proteico . En este ejercicio nos centraremos en el gen tipo que codifica para una proteína pero el alumno ha de tener presente que existen muchas variaciones sobre este esquema básico y que además de productos proteicos los genes también codifican para RNAs con diversas funciones celulares. 1.- En la figura se muestra el esquema general de un gen transcrito por RNA polimerasa II. Se representan varios elementos estructurales e implicados en la transcripción. Situar cada uno de los elementos en la figura y explicar brevemente que es cada uno de ellos. 1 2 3 4 Exón Intrón Secuencia TATA 5 Punto de inicio de la transcripción 6 Punto de fin de la transcripción 7 ARN polimerasa Secuencias reguladoras 8 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 2.- Además del mRNA existen otros tipos de RNAs, ¿cuáles son?. Explicar su función en la célula. 3.- La expresión de una proteína puede ser regulada en distintos niveles, uno de ellos es la transcripción. En esta regulación participan las secuencias reguladoras, que pueden ser de diversos tipos y responden a diversos estímulos. Comentar dos situaciones por las que se puede modificar la expresión de proteínas en una célula explicando porqué se produce ese cambio y como afecta a la célula. 9 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 4.- El RNA mensajero resultante de la transcripción sufre una serie de modificaciones para poder ser traducido que incluye en algunos casos un proceso de maduración. Comentar es t asmodi fi caci onesyexpl i carbr ev ement equeesel“ s pl i ci ng” . 10 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 EJERCICIO 4 Biología celular: división y diferenciación La célula es una entidad dinámica que puede ser por si misma un organismo completo, ser unicelular, o formar parte de un ser multicelular. Los seres unicelulares precisan reproducirse teniendo diversas opciones para ello. En el caso de los seres multicelulares precisan primero formar su organismo a partir de una única célula, para lo cual es necesario que se divida para dar lugar a los distintos órganos y sistemas que conforman el ser completo. Durante este proceso, además las células resultantes se diferencian para dar los distintos tipos celulares que conforman los tejidos y los órganos del organismo complejo. El objetivo de este ejercicio es resaltar que la célula puede encontrarse en varias situaciones que están relacionadas entre ellas y que tienen un papel en la formación del organismo así como en situaciones patológicas. 1.- En la figura se presenta un esquema básico con 9 posibles situaciones en las que podemos encontrar una célula. Cada uno de los términos que hay corresponde a una de esas situaciones representadas por un número en el dibujo, el alumno ha de asociarlos así como cada una de las breves descripciones que se dan. 11 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 9 1 5 2 8 4 3 6 Transformación Diferenciación Fase G2 Senescencia Fase S Apoptosis Necrosis Fase G1 Mitosis 7 La célula se especializa y cesa su división Arresto irreversible del crecimiento celular Muerte celular La célula se desdiferencia dividiendose descontroladamente La célula se prepara para la división La célula replica su DNA Muerte celular programada División celular La célula crece 12 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 2.- La formación de un tumor es producto de la transformación celular. Esta transformación provoca una desregulación de la célula difernciada reiniciando su ciclo división. De las 9 situaciones expuestas en la figura, ¿cuáles piensa que pueden ser mecanismos celulares para impedir que la célula transformada progrese?. Razone la respuesta. 3.- La apoptosis y la necrosis son dos tipos de muerte celular. Explicar brevemente las diferencias entre cada una de ellas y la utilidad de la apoptosis en un organismo multicelular durante su desarrollo. 13 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 4.- En el ciclo celular se representa la división de la célula por medio de mitosis. Además de la mitosis, en los organismos pluricelulares existe otro tipo de división celular que permite la formación de los gametos denominada meiosis. Hacer un esquema comparativo de la mitosis y la meiosis en el que se expongan las diferencias y las semejanzas entre ambos tipos de división. 14 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 EJERCICIO 5 Análisis de la herencia de enfermedades genéticas El objetivo de esta ejercicio es familiarizarse con la herencia mendeliana de caracteres monogénicos, deducir datos genéticos a partir de genealogias, y calcular probabilidades de herencia de caracteres tanto a nivel de genotipo como de fenotipo. Como ejemplo se va a realizar el estudio de la enfermedad conocida como fibrosis quística en una familia. La fibrosis quística es una enfermedad de origen genético, de carácter monogénico, determinada por un alelo recesivo autosómico. Hoy día se ha avanzado mucho en su estudio, y se disponen de numerosos datos acerca de la base genética y molecular de esta enfermedad. El gen normal se encuentra localizado en el cromosoma 7 humano, y codifica una proteína de transporte que se localiza en la membrana de las células e interviene en el transporte de iones cloruro. Existe un alelo recesivo que produce una proteína no funcional. Cuando una persona es homocigota para este alelo manifiesta la enfermedad, caracterizada por secreciones mucosas anormalmente densas en las células que tapizan los pulmones, los órganos digestivos y reproductores, provocando graves trastornos de salud. Su frecuencia es alta en la raza blanca, siendo de aproximadamente uno en 2500 frente a uno de cada 17000 niños negros nacidos con esta enfermedad. Es una enfermedad grave, aunque la severidad de los síntomas varían de paciente en paciente. Puede llegar a producir graves trastornos respiratorios, con degeneración pulmonar que provoca la muerte. No obstante, existe tratamiento paliativo, que requiere medicación diaria para aliviar los síntomas. Actualmente se investiga en nuevos fármacos y se están realizando ensayos de terapia génica. Una pareja formada por un hombre y una mujer, ambos con antecedentes familiares de la enfermedad, están considerando tener hijos y deciden someterse a un estudio para analizar previamente las posibilidades de transmitir esta enfermedad, aunque ninguno de ellos presenta síntomas de la misma. Para lo cual le piden consejo. 15 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 ●Enpr i merl ugar ,anal i cel osant ecedent esfami l i ar esdeambos . En la figura se representa el árbol genealógico de la mujer (8) y del hombre (9). afectado afectada gemelas 1 † fallecido 2 3 4 † 5 6 7 8 9 10 11 12 ? Como puede observar, el padre de la mujer así como dos hermanas gemelas del hombre padecen la enfermedad. 1. Con estos datos ¿es posible deducir los genotipos de todos los representados en el esquema? ¿Cuáles serán los posibles genotipos de 8 y 9? 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 16 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 ● Pos t er i or ment e,s e deci de r eal i zarun anál i s i sgenét i coani v elmol ecul ardando como resultado que ambos, 8 y 9, son portadores del alelo (q) de la fibrosis quística. Con estos datos responda a las cuestiones que le plantea la pareja, considerando únicamente este gen (cromosoma 7, alelos Q y q) y los cromosomas sexuales. 2. ¿Cuántos tipos de óvulos diferentes puede producir la mujer? 3. ¿Cuántos tipos de espermatozoides diferentes puede producir el hombre? 4. ¿Cuál es la probabilidad de tener un hijo varón sano y no portador? 5. ¿Cuál es la probabilidad de tener un descendiente (varón o hembra) sano? 6. ¿Cuál es la probabilidad de tener una hija portadora de la enfermedad? 17 Ejercicios de Biología-Ciencias Medioambientales 2004/2005 7. Les gustaría tener una pareja (niño y niña) ambos sanos y no portadores ¿cuál es la probabilidad de que se cumplan sus deseos? 8. Poniéndose en el supuesto de que su primer hijo hubiera nacido ya con la enfermedad ¿cuál sería la probabilidad de que su segundo hijo naciera con la enfermedad también?. 18
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