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[ COLUMNAS HPLC ]
Continúa el legado
de las columnas HPLC
Columnas HPLC
Creación de una cromatografía excepcional
La reputación de Waters se basa en la cromatografía, pero nosotros no
creamos cromatografía: ese es su papel. El pensamiento innovador que
surge de su laboratorio crea los análisis y los métodos cromatográficos
que sustentan su negocio. Los parámetros de su éxito se controlan a
través de los métodos y los resultados que obtiene y la columna de
HPLC que seleccione hoy tiene que respaldar su éxito en el futuro.
Los científicos eligen la gama completa de modernas columnas HPLC
de fase reversa e HILIC que ofrece Waters porque entienden que el
rendimiento y la innovación están vinculados y que su éxito depende
de ellas.
2
CORTECS
XBridge
XSelect
Atlantis
SunFire
Symmetry
XTerra
Waters Spherisorb
Nova-Pak
Resolve
Delta-Pak
µBondaPak/BondaPak
µPorasil/Porasil
3
Reducción de la contrapresión
■■
Reducción de la contrapresión de trabajo: menor
contrapresión sin sacrificar la eficacia
■■
Aumento de la sensibilidad: mejora de la relación señal-ruido
para las aplicaciones LC-MS
■■
Simplificación de las transferencias de métodos:
compatibilidad con una amplia gama de sistemas
cromatográficos
Ventajas de las columnas CORTECS de 2,7 µm en cuanto a la eficacia
Mejor eficacia de su clase
Eficacia (USP)
Las columnas con partículas de núcleo sólido CORTECS® de 2,7 µm
maximizan la resolución y la capacidad de picos para todas las separaciones por LC y están optimizadas para incrementar el rendimiento
de los instrumentos HPLC. La innovadora tecnología de núcleo sólido
y la química enlazada que utilizan las columnas CORTECS le pueden
ayudar al proporcionar:
Las columnas CORTECS reducen la contrapresión de trabajo, lo que
le permite analizar métodos con instrumentos LC convencionales
sin comprometer la eficacia ni la resolución. Además, se pueden usar
columnas más largas para mejorar la resolución de los picos que
coeluyen en mezclas complejas de muestras.
CORTECS C18+, 2,7 μm
C18 totalmente poroso, 2,5 μm
Caudal
(mL/
min)
2,1 x 50 mm
0,17
0,35
0,52
0,69
3,0 x 50 mm
4,6 x 50 mm
0,35
0,83
0,71
1,66
1,06
2,49
1,41
3,32
0,87
1,04
4,15
4,99
C18 de1,77
núcleo sólido
2,12del competidor A, 2,6 μm
C18 de núcleo sólido del competidor B, 2,7 μm
Velocidad lineal (cm/min)
Caudal
(mL/min)
La selección de columnas CORTECS de 2,7 µm, tanto de fase reversa
como de fases HILIC, le aportan flexibilidad para separar rápidamente
una amplia gama de clases de compuestos. La mejora de la eficacia
de las columnas con núcleo sólido CORTECS de 2,7 µm produce picos
mejor definidos y estrechos si se comparan con los que generan las
columnas que utilizan substratos totalmente porosos; asimismo, le
permiten utilizar caudales más rápidos para poder incrementar la
velocidad de análisis de muestras.
2,1 x 50 mm
3,0 x 50 mm
4,6 x 50 mm
0,17
0,35
0,83
0,35
0,71
1,66
0,52
1,06
2,49
0,69
1,41
3,32
0,87
1,77
4,15
1,04
2,12
4,99
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
representativas de todas las aplicaciones.
Las columnas CORTECS de 2,7 µm muestran una eficacia excelente si se comparan con
las columnas con partículas de núcleo sólido y totalmente porosas de tamaño similar.
Condiciones experimentales: columnas: 2,1 x 50 mm; fase móvil: agua/acetonitrilo
(25/75, v/v); temperatura de la columna: 30 ˚C; detección: UV a 254 nm; volumen de
inyección: 0,5 µL; compuestos: acenafteno (200 µg/mL), octanofenona (100 µg/mL).
Ventajas de las columnas CORTECS de 2,7 µm en cuanto a la
contrapresión
CORTECS C18+, 2,7 μm
C18, totalmente poroso, 2,5 μm
O
O
Si
O
O
C18 de núcleo sólido del competidor A, 2,6 μm
Si
O
CORTECS
C18+
C18
HILIC
Tipo de ligando
C18 trifuncional
C18 trifuncional
Ninguno
2,4 µmol/m2
2,6 µmol/m2
N/A
5,7%
6,6%
No enlazada
Densidad del ligando
Carga de carbono
Tipo de recubrimiento
final
Patentado
Patentado
Ninguno
L1
L1
L3
Rango de pH
2–8
2–8
1–5
Límite de temp. a
pH bajo
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
Límite de temp. a
pH alto
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
Diámetro de poro
90 Å
90 Å
90 Å
Clasificación USP
4
C18 de núcleo sólido del competidor B, 2,7 μm
Presión de la columna (psi)
O
Un 25% menos contrapresión
que la columna de partículas
de núcleo sólido de 2,6 µm
de la competencia
Caudal
(mL/
min)
2,1 x 50 mm
0,17
0,35
0,52
0,69
0,87
1,04
3,0 x 50 mm
4,6 x 50 mm
0,35
0,83
0,71
1,66
1,06
2,49
1,41
3,32
1,77
4,15
2,12
4,99
Caudal
(mL/min)
2,1 x 50 mm
3,0 x 50 mm
4,6 x 50 mm
0,17
0,35
0,83
Velocidad lineal (cm/min)
0,35
0,71
1,66
0,52
1,06
2,49
0,69
1,41
3,32
0,87
1,77
4,15
1,04
2,12
4,99
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
representativas de todas las aplicaciones.
Las columnas CORTECS de 2,7 µm consiguen reducir la contrapresión de trabajo en un
25% sin sacrificar la eficacia. Condiciones experimentales: columnas: 2,1 x 50 mm;
fase móvil: agua/acetonitrilo (25/75, v/v); temperatura de la columna: 30 ˚C;
detección: UV a 254 nm; volumen de inyección: 0,5 µL; compuestos: acenafteno
(200 µg/mL), octanofenona (100 µg/mL).
Aumento de la sensibilidad
La tecnología de superficie cargada mejora la forma de los picos y la carga de compuestos al usar fases móviles con baja fuerza iónica, tales como
las preparadas con ácido fórmico. La carga superficial permanente de bajo nivel usada durante el proceso de enlace del C18+ mejora la relación señalruido al no tener que utilizar aditivos ni reactivos de par iónico que, de otro modo, afectarían negativamente a las aplicaciones LC-MS.
Forma de pico excelente para el análisis de impurezas a concentraciones bajas
C18 de núcleo sólido de la competencia, 2,6 μm
Presiónmáx: 3250 psi
1: SIR de 1 canal ES+
TIC (impureza adicionada al 0,1%)
1: SIR de 1 canal ES+
TIC (impureza adicionada al 0,1%)
CORTECS C18+, 2,7 μm
Presiónmáx: 2750 psi
3,68e7
3,68e7
100
Aumento del 60% en
la relación S/N
%
Relación S/N: 113
Relación S/N: 180
0
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6 min
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6 min
(1) PDA, canal 1, 254 nm a 4,8 nm
(1) PDA, canal 1, 254 nm a 4,8 nm
Rango: 8e-1
Rango: 1
4,0e-2
3,5e-2
3,0e-2
UA
Reducción del 35% en
la anchura del pico
Imipramina
2,5e-2
Imipramina
2,0e-2
Impureza adicionada al 0,1%
PW13,4%: 0,089 min
1,5e-2
Impureza adicionada al 0,1%
PW13,4%: 0,132 min
1,0e-2
5,0e-3
0,0
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6 min
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6 min
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las aplicaciones.
El análisis por HPLC-UV/MS de la imipramina, un antidepresivo básico de baja fuerza iónica, revela la presencia de una impureza de baja concentración. El uso de la columna
CORTECS C18+ de 2,7 µm, diseñada para utilizarse con fases móviles ácidas de baja fuerza iónica, da como resultado picos más estrechos y una mejor relación señal-ruido.
Condiciones de LC
Columnas: Fase móvil A: Fase móvil B: Gradiente:
Caudal: Temp. de la columna:
Detección: Volumen de inyección: 3,0 x 50 mm
ácido fórmico al 0,1% en agua
ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo
del 25 al 35% de B en 4,6 minutos
0,8 mL/min
30 SDgrC
UV a 254 nm y ESI+ MS
10 μL
Compuestos
Imipramina (0,5 mg/mL)
Impureza adicionada al 0,1% (0,5 μg/mL)
5
Transferencia de métodos sencilla
Se puede usar una selección específica de 3 fases para separar una amplia gama de clases
de compuestos. Las fases enlazadas de fase reversa CORTECS C18 y C18+ proporcionan a los
técnicos en cromatografía un perfil de retención equilibrado de ácidos, bases y compuestos
neutros, mientras que la fase CORTECS HILIC ortogonal no enlazada ofrece una retención
superior de analitos polares. Gracias a tamaños de partículas que son compatibles con las
plataformas HPLC, UPLC® y UHPLC, cualquier método desarrollado puede transferirse de
forma óptima y sencilla sin que surjan limitaciones por el tamaño de partícula, la configuración de la columna o el fabricante del instrumento.
Transferencia de métodos USP de abacavir en función del tiempo y del
consumo de eluyente
C18 totalmente poroso, 5 μm, 4,6 x 150 mm
Caudal: 1,00 mL/min
Volumen de inyección: 8 μL
Sistema: Alliance® HPLC
UA
0,02
Método original
2
1
0,01
3
4
5
0,00
12,0
16,0
18,0
20,0
22,0
24,0
CORTECS C18+, 2,7 μm, 4,6 x 75 mm
Caudal: 1,85 mL/min
Volumen de inyección: 4 μL
Sistema: Alliance® HPLC
0,02
UA
14,0
26,0
28,0
30,0 min
Transferencia a 2,7 µm
Método 4 veces más rápido
Dos veces menos eluyente
0,01
0,00
3,5
4,5
5,0
5,5
6,0
6,5
CORTECS C18+, 2,7 μm, 4,6 x 75 mm
Caudal: 1,85 mL/min
Volumen de inyección: 4 μL
Sistema: ACQUITY UPLC® H-Class
0,02
UA
4,0
7,0
7,5
8,0 min
Compatible con sistemas
Condiciones de LC
Fase móvil A: ácido trifluoroacético al 0,1% en agua
Fase móvil B: metanol al 85% en agua
Columna A: columna C18 totalmente porosa de 5 μm,
4,6 x 150 mm
Columna B: columna CORTECS C18 de 2,7 μm, 4,6 x 75 mm
Columna C: columna CORTECS C18 de 1 6 μm, 2,1 x 50 mm
Gradientes escalados geométricamente (es decir, los mismos volúmenes de
columna por paso de gradiente):
Columna A: del 5 al 30% de B en 23,6 minutos y
del 30 al 90% de B en 14,8 minutos
Columna B: del 5 al 30% de B en 6,4 minutos y
del 30 al 90% de B en 4,0 minutos
Columna C: del 5 al 30% de B en 2,5 minutos y
del 30 al 90% de B en 1,6 minutos
Fase móvil A: ácido trifluoroacético al 0,1% en agua
Fase móvil B: metanol al 85% en agua
Compuestos
1. Desciclopropilabacavir
2. Abacavir
3. 1R,4R trans-abacavir
4. o-(4-cloro-2,5-diaminopirimidina)-abacavir
5. o-t-butilo-abacavir
HPLC, UHPLC y UPLC
0,01
0,00
3,5
4,5
5,0
5,5
6,0
6,5
CORTECS UPLC C18, 1,6 μm, 2,1 x 50 mm
Caudal: 0,65 mL/min
Volumen de inyección: 0,6 μL
Sistema: ACQUITY UPLC H-Class
0,02
UA
4,0
7,0
7,5
8,0 min
Transferencia a 1,6 µm
Método 9 veces más rápido
12 veces menos eluyente
0,01
0,00
1,8
2,0
2,2
2,4
2,6
2,8
3,0
3,2
3,4
3,6 min
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las
aplicaciones.
Se pueden escalar y transferir métodos desarrollados con columnas totalmente porosas de 5 µm a columnas
más cortas de 2,7 µm. Para mejorar aún más la eficacia y la productividad, se pueden usar columnas UPLC con
tamaños de partícula inferiores a 2 µm, lo que permite una mayor flexibilidad y reproducibilidad de métodos al
realizar la transferencia entre laboratorios de una misma organización o a socios con vinculación contractual.
www.waters.com/cortecs
6
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]
7
Estabilidad frente al pH
Las columnas XBridge se han diseñado de manera específica para
contener las fases enlazadas cromatográficas más estables desde
el punto de vista químico que se encuentran disponibles, lo que le
permitirá explorar todas las ventajas que aporta el poder utilizar
fases móviles con un amplio rango de pH (1-12). La estabilidad
química, especialmente para los valores extremos de pH, se
incorpora a las partículas durante el proceso de síntesis y no se
puede reproducir mediante el proceso convencional de enlace a la
base de sílice. Ninguna otra columna puede igualar la estabilidad
química de una columna XBridge.
Las columnas para HPLC XBridge ® están concebidas para un
único propósito: maximizar la productividad. Tanto si su objetivo
es crear un método de control de calidad como desarrollar un
ensayo LC/MS de vanguardia, las columnas XBridge le pueden
ayudar al proporcionar:
■■
■■
Mejora de la estabilidad frente al pH: aumento de la vida
útil de la columna
Prueba acelerada de estabilidad a pH alto de las columnas de la
competencia
Mejora de la fiabilidad de la columna: análisis más
robustos
110
Maximización de la eficacia de las partículas: forma y
capacidad de picos inigualables
Con una selección de 10 fases enlazadas diferentes para
aplicaciones de uso general y específicas, que abarcan la
gama más amplia de tamaños de partículas que se encuentra
disponible, ninguna otra familia de columnas HPLC le
proporciona las herramientas necesarias para los retos
cromatográficos más exigentes. Tanto si se necesitan métodos
HPLC robustos, una transferencia óptima a UPLC® o un escalado
preparativo para el aislamiento de productos, se puede contar
con la versatilidad de una columna XBridge.
O
O
O
O
XBridge
Densidad del ligando*
Carga de carbono*
Tipo de recubrimiento final
Clasificación USP
C18 trifuncional
3,1 µmol/m2
18%
Patentado
Analito:
0
O
Si
CH
Acenafteno
50
100
150
200 horas
Horas con 50 mM de TEA, pH 10, 50 °C
O
O
Si
O
Los cromatogramas, obtenidos a intervalos regulares durante el estudio de vida útil
a pH alto,O demuestran que el 86% de la Oeficacia
original de las columnas XBridge
Si
Si
O
O
se mantiene
O de 10 y a una temperatura elevada, con
O después de 300 horas a un pH
pocos cambios en la forma de los picos o en el tiempo de retención.
O
CH
Si
O
Si
O
CH
Si
O
Si
O
C8
CH
Si
O
3
3
CH
CH
3
Shield RP18
O
O
3
O
3
up
Gro
lar
Po
up
Gro
lar
Po
up
Gro
lar
Po
CH
3
O
Si
Si
O
Fenilo
HILIC
Grupo polar integrado
monofuncional
Fenilo-hexilo
trifuncional
Partícula BEH
no enlazada
3,2 µmol/m2
3,3 µmol/m2
3,0 µmol/m2
N/A
13%
17%
15%
No enlazada
Patentado
TMS
Patentado
N/A
O
lar
Po
Zorbax® Extend C18
30
Si
3
CH
Tipo de ligando
YMC™ Pro C18
O
O
O
Luna® C18(2)
O
O
C18
Gemini™ C18
70
50
O
O
XTerra® MS C18
Si
Si
XBridge C18
90
% N5s inicial
■■
O
up
Gro
O
C8 trifuncional
3
O
O
Si
O
O
Si
O
L1
L7
L1
L11
L3
Rango de pH
1–12
1–12
2–11
1–12
1–9
Límite de temp. a pH bajo
80 °C
60 °C
50 °C
80 °C
45 °C
Límite de temp. a pH alto
60 °C
60 °C
45 °C
60 °C
45 °C
Diámetro de poro*
130 Å
130 Å
130 Å
130 Å
130 Å
Área superficial*
185 m2/g
185 m2/g
185 m2/g
185 m2/g
185 m2/g
2,5; 3,5; 5;
10 µm
2,5; 3,5; 5;
10 µm
2,5; 3,5; 5;
10 µm
2,5; 3,5; 5 µm
2,5; 3,5; 5 µm
Tamaño de partícula
* Valor esperado o aproximado.
8
Fiabilidad de la columna
Factores de asimetría USP de la familia XBridge
La mayoría de los costes derivados del desarrollo de un método
cromatográfico están asociados con el riguroso proceso de
evaluación y validación del método final. Entendemos que
la revalidación del método no es una opción, de modo que
evaluamos meticulosamente cada lote de columnas y fases
enlazadas para garantizar las columnas más reproducibles que se
encuentran disponibles. Con una columna XBridge, puede estar
seguro de que el método que desarrolle hoy será reproducible
durante toda la vida útil del análisis.
pH 3
Factor de asimetría (Tf)
3
pH 7
Desipramina
Nortriptilina
Amitriptilina
Amitriptilina
2
1
Fenilo
C8
CH
Si
O
O
O
O
2
O
Si
O
O
O
Si
O
O
O
Amida
O
Amida
C18 trifuncional
7,5 µmol/m2
3,1 µmol/m2
18%
Ninguno
Patentado
O
O
CH
Si
O
3
up
Gro
lar
Po
CH
C18 trifuncional
3
O
O
3,1 µmol/m2
Si
O
12%
Patentado
CH
C4
H9
3
3
CH
C4
H9
O
O
3
Si
O
O
Si
Péptidos BEH C18, 300 Å
O
3
CH
Si
O
Si
O
Si
Péptidos BEH C18, 130 Å
12%
Zorbax®
SB-C18
La combinación de la excelente estabilidad tanto de los ligandos como de las
partículas, así como la elevada eficacia cromatográfica, convierte a las columnas
XBridge en la elección ideal para los métodos a pH bajos e intermedios.
Las partículas híbridas con puentes de etileno (BEH) ofrecen
muchas ventajas con respecto a las partículas basadas en sílice
convencionales, incluida la capacidad para controlar la actividad
silanólica con gran precisión. Al controlar la actividad silanólica,
se controlan y reducen las interacciones silanólicas no deseadas
que aumentan la asimetría de los picos.
NH
C18
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
representativas de todas las aplicaciones.
Eficacia de las partículas
ker
Lin
Shield RP18
Proteínas BEH C4, 300 Å
O
CH
Si
O
3
Oligo BEH C18
up
Gro
lar
Po
CH
3
O
O
Si
O
C4 monofuncional
C18 trifuncional
2,4 µmol/m2
3,1 µmol/m2
8%
18%
Ninguno
Patentado
-
L1
L1
L26
L1
2–1
1–12
1–12
1–10
1–12
90 °C
80 °C
80 °C
80 °C
80 °C
90 °C
60 °C
60 °C
50 °C
60 °C
130 Å
130 Å
300 Å
300 Å
130 Å
185 m2/g
185 m2/g
90 m2/g
90 m2/g
185 m2/g
2,5; 3,5 µm
3,5; 5; 10 µm
3,5; 5; 10 µm
3,5 µm
2,5 µm
O
Si
O
CH
Si
O
3
up
Gro
lar
Po
CH
3
O
O
9
Si
O
Transferencia de métodos con columnas
de 2,5 μm
Todas las columnas para HPLC XBridge y XSelect® (que se describen en la siguiente página)
se ofrecen con los formatos eXtended Performance [XP] de 2,5 µm a fin de ayudarle a
transferir los métodos de los instrumentos HPLC a los UPLC. Las columnas XP de 2,5 µm
mejoran el rendimiento de los instrumentos HPLC actuales y permiten conseguir una eficacia de separación máxima mediante la tecnología ACQUITY UPLC con tamaños de partícula
inferiores a 2 µm.
Separaciones escalables
0,0
0,0
0,0
2,0
0,5
0,2
4,0
1,0
0,4
1,5
0,6
0,8
6,0
2,0
1,0
8,0
2,5
1,2
3,0
1,4
10,0 min
3,5
1,6
1,8
4,0 min
2,0 min
5 µm – 150 mm
Inyección: 5,0 µL
Caudal: 0,2 mL/min
3,5 µm – 100 mm
Inyección: 3,3 µL
Caudal: 0,3 mL/min
2,5 µm – 75 mm
Inyección: 2,5 µL
Caudal: 0,5 mL/min
1,7 µm – 50 mm
Inyección: 1,7 µL
Caudal: 0,6 mL/min
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,1 min
Columnas de diferentes longitudes y tamaños de partículas se han utilizado para reducir satisfactoriamente los
tiempos de análisis y mantener la resolución.
Condiciones de LC
Sistema: Columnas: Fase móvil A: Fase móvil B: Caudal:
Volumen de inyección:
Isocrática: Diluyente de la muestra:
Conc. de la muestra: Temp. de la columna: Detección: Velocidad de adquisición: Constante de tiempo: ACQUITY UPLC con detector TUV
XBridge C18, 5 μm, 2,1 x 150 mm
XBridge C18, 3,5 μm, 2,1 x 100 mm
XBridge C18, 2,5 μm, 2,1 x 75 mm
ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 μm, 2,1 x 50 mm
ácido fórmico al 0,1% en agua
ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo
consultar el cromatograma anterior
consultar el cromatograma anterior
95% A:5% B
acetonitrilo al 3% en agua con ácido fórmico al 0,1%
25 μg/mL
38 °C
UV a 280 nm
40 pts/s
0,05
www.waters.com/xbridge
10
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]
11
Las columnas para HPLC XSelect están concebidas para los
científicos encargados de desarrollar métodos, que exigen la
selección más diversa de fases enlazadas para separar con
facilidad las coeluciones de analitos más dificultosas. Las
columnas XSelect son herramientas que están:
■■
Diseñadas para la selectividad: mejoran la capacidad para
separar picos que eluyen muy cerca
■■
Concebidas para el aislamiento y la purificación:
proporcionan la mayor capacidad de carga de analito que se
encuentra disponible
■■
Ideales para el rápido desarrollo métodos: reducen el
tiempo y los costes asociados al desarrollo de métodos
F
O
O
O
Si
O
O
O
Si
O
O
Si
Los substratos o partículas base influyen de manera
fundamental en la selectividad del analito; el ligando enlazado
ejerce una influencia secundaria. Cada uno de ellos, cuando
se usa por separado, no genera cambios de selectividad
notorios; sin embargo, juntos, el substrato y el ligando crean
las herramientas definitivas para mejorar la selectividad del
analito. Es por este motivo que la familia de columnas XSelect
contiene tanto la tecnología de partículas de sílice de alta
resistencia (HSS) como la de partículas híbridas de superficie
cargada (CSH™ ) con una optimización única de ligandos
enlazados. El resultado es una gran reproducibilidad y una alta
selectividad.
F
F
F
F
F
O
O
O
O
Si
O
O
O
Si
O
O
O
Si
O
O
Si
F
F
F
F
O
O
Si
CSH C18
CSH
fenilo-hexilo
CSH
fluorofenilo
HSS T3
HSS C18
HSS C18 SB
HSS PFP
HSS CN
C18 trifuncional
C6 fenilo trifuncional
Propilfluorofenilo
trifuncional
C18 trifuncional
C18 trifuncional
C18 trifuncional
Pentafluorofenilo
trifuncional
Cianopropilo
monofuncional
2,3 µmol/m2
2,3 µmol/m2
2,3 µmol/m2
1,6 µmol/m2
3,2 µmol/m2
1,6 µmol/m2
3,2 µmol/m2
2,0 µmol/m2
15%
14%
10%
11%
15%
8%
7%
5%
Patentado
Patentado
Ninguno
Patentado
Patentado
Ninguno
Ninguno
Ninguno
L1
L11
L43
L1
L1
L1
L43
L10
Rango de pH
1–11
1–11
1–8
2–8
1–8
2–8
2–8
2–8
Límite de temp. a
pH bajo
80 ˚C
80 ˚C
60 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
Límite de temp. a
pH alto
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
Diámetro de poro*
130 Å
130 Å
130 Å
100 Å
100 Å
100 Å
100 Å
100 Å
Área superficial*
185 m /g
185 m /g
185 m /g
230 m /g
230 m /g
230 m /g
230 m /g
230 m2/g
2,5; 3,5; 5;
10 µm
2,5; 3,5; 5 µm
2,5; 3,5; 5 µm
2,5; 3,5; 5 µm
2,5; 3,5; 5 µm
2,5; 3,5; 5 µm
2,5; 3,5; 5 µm
2,5; 3,5; 5 µm
XSelect
Tipo de ligando
Densidad del ligando*
Carga de carbono*
Tipo de recubrimiento
final
Clasificación USP
Tamaño de partícula
* Valor esperado o aproximado.
12
2
2
2
2
2
2
2
CN
Mejora de la selectividad
La selectividad y la capacidad de retención son las herramientas más poderosas que poseen
los desarrolladores de métodos para influir en el comportamiento cromatográfico. La
familia XSelect ofrece una variada gama de columnas C18 de fase reversa (por ejemplo, CSH
C18, HSS C18 y HSS C18 SB) para separaciones de fines generales, así como columnas que
proporcionan un incremento de la retención polar (T3) y mayores opciones de selectividad
(fenilo-hexilo, fluorofenilo y ciano) para el desarrollo de métodos.
Las columnas XSelect proporcionan diversas selectividades de analitos
5,6
2
3
1
CSH C18
Condiciones de LC
Sistema:
Columnas: Fase móvil A: Fase móvil B: Caudal:
Volumen de inyección:
Diluyente de la muestra: Temp. de la columna: 7
4
5,6
CSH fenilo-hexilo
6
2
CSH fluorofenilo
1
4
3
7
5
6
4
HSS CN
7
5
3
2
1
6
4
HSS PFP
2
1
3
HSS T3
5
7
5,6
4
7
3
Gradiente:
HSS C18
4
HSS C18 SB
0,0
0,5
1,0
1,5
3
2,0
2,5
3,0
3,5 min
Diferencias de selectividad observadas para una mezcla de analitos básicos. Compuestos: [1] aminopirazina,
[2] pindolol, [3] quinina, [4] labetalol, [5] verapamilo, [6] diltiazem, [7] amitriptilina.
Aislamiento y purificación
Las aplicaciones de alta capacidad de carga, como la purificación de compuestos, la
obtención de perfiles de impurezas y las pruebas de disolución, exigen que las columnas
tengan un excelente rendimiento. En el caso de estos tipos de aplicaciones, la carga de la
columna está limitada por su incapacidad para mantener una forma de picos simétrica. Esto
se pone de manifiesto por el excesivo ensanchamiento del pico del compuesto principal,
el cual, con frecuencia, oculta las impurezas traza que se tratan de eliminar durante la
purificación. Las columnas XSelect CSH proporcionan de forma sistemática picos estrechos
bajo condiciones de carga altas y otorgan al técnico en cromatografía la posibilidad de
separar productos de degradación o impurezas a nivel de trazas y, por tanto, permiten una
mayor capacidad de carga reduciendo el tiempo y el consumo de eluyente.
Mantenimiento de la forma de los picos con una alta capacidad de carga
UA
0,06
Concentraciones de imipramina
mantenidas constantes a 0,5 mg/mL
2,0%
ACQUITY UPLC CSH C18
Imipramina
0,08
0,04
0,02
1,0%
Amitriptilina
0,5%
0,1%
0,00
0,08
UA
0,06
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
0,04
0,02
2,0%
1,0%
0,5%
0,00
0,0
1,6
1,8
2,0 min
Kinetex® C18
Imipramina
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
Amitriptilina
0,1%
1,6
1,8
2,0 min
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean representativas de todas las aplicaciones.
La mejora de la capacidad de carga de las columnas XSelect permite la separación, identificación y cuantificación
de productos de degradación o impurezas que eluyen muy cerca.
Detección: Velocidad de adquisición: Respuesta del filtro:
Condiciones de LC
Sistema:
Columnas:
Fase móvil A:
Fase móvil B:
Fase móvil C:
Gradiente:
ACQUITY UPLC con
detector PDA
2,1 x 50 mm
10 mM de formiato de
de amonio, pH de 3,0
metanol
0,4 mL/min
1 μL
agua
30 °C
Tiempo
%A
(min)
0,00
70
3,00
15
3,50
15
3,51
70
4,50
70
UV a 260 nm
20 pts/s
normal
%B
30
85
85
30
30
ACQUITY UPLC H-Class con detector PDA para ACQUITY UPLC
2,1 x 50 mm
agua
acetonitrilo
ácido fórmico al 2% en agua
Tiempo Flujo
(min) (mL/min) %A %B %C Curva
inicial 0,6
70 25
5 inicial
2,0
0,6
60 35
5
6
3,0
0,6
0
95
5
6
3,1
0,6
70 25
5
6
5,0
0,6
70 25
5
6
Volumen de inyección: 5 μL
Diluyente de la muestra: agua
Conc. de la muestra: imipramina: 0.5 mg/mL; amitriptilina: como se indica (% de la imipramina)
Temp. de la columna: 40 °C
Detección: UV a 254 nm
Eluyente de lavado: acetonitrilo/agua 50/50
Eluyente de purga: acetonitrilo/agua 50/50
13
Desarrollo y transferencia de métodos
Al desarrollar métodos, los técnicos en cromatografía experimentados se dan cuenta
de que el desarrollo de cualquier método que utilice únicamente columnas selectivas
debe poder transferirse con facilidad entre un laboratorio y otro, independientemente
de la plataforma de LC usada. Las columnas XSelect se han diseñado para el
desarrollo de métodos y son completamente compatibles con todos los modos de
detección modernos.
Separaciones reproducibles y escalables
XSelect CSH fluorofenilo, 5 µm
8
2
1
4
3
5
6
7
Condiciones de LC
Sistema:
ACQUITY UPLC con detector PDA para ACQUITY UPLC
Columnas:
2,1 x 50 mm
Caudal:0,5 mL/min
Fase móvil A:
15,4 mM de formiato de amonio, pH de 3,0
Fase móvil B:
acetonitrilo
Gradiente:lineal del 5% al 90% de B en 5 minutos
Volumen de inyección: 5 μL
Diluyente de la muestra: agua
Temp. de la columna: 30 °C
Detección:
UV a 254 nm
Velocidad de adquisición: 20 pts/s
Respuesta del filtro:
normal
10
9
Compuestos
1. Tiourea
2. Resorcinol
3. Metoprolol
4. 3-nitrofenol
5. Ácido 2-clorobenzoico
6. Amitriptilina
7. Dietilftalato
8. Fenoprofeno
9. Dipropilftalato
10. Ácido pirenosulfónico
XSelect CSH fluorofenilo, 3,5 µm
ACQUITY UPLC CSH fluorofenilo, 1,7 µm
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0 min
Reproducibilidad y escalabilidad de separaciones por gradiente con columnas de 2,1 x 50 mm que
contienen nueve lotes diferentes de CSH fluorofenilo que representan tres tamaños de partículas (1,7, 3,5
y 5 µm).
www.waters.com/xselect
14
[ENC ABEZADO INTERIOR DEL FOLIO]
15
Larga vida útil de las columnas con
fases móviles de pH bajo
Las columnas para HPLC Atlantis ® no solo ofrecen un rendimiento,
una versatilidad y una retención excepcionales para los
compuestos polares, sino además una retención equilibrada para
las mezclas complejas de analitos.
Las columnas Atlantis resisten la hidrólisis del ligando cuando se usan
fases móviles muy ácidas, lo que mantiene la eficacia del método, la
retención del compuesto y la selectividad crítica del analito.
20 horas de exposición a TFA al 0,5% y a una temperatura de 60 °C
90
Compatibilidad con fases móviles
totalmente acuosas
80
Para maximizar la retención de los compuestos polares con
métodos de fase reversa, es posible utilizar las columnas
HPLC de fase reversa Atlantis con tampones y fases móviles
muy acuosas sin correr el riesgo de que se produzca la
deshumectación de los poros ni el colapso hidrofóbico de la fase
estacionaria.
50
40
30
20
10
N/A
14%
12%
N/A
Patentado
Patentado
N/A
Clasificación USP
L1
L1
L3
Rango de pH
2–8
3–7
1-5
Límite de temp. a
pH bajo
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
Límite de temp. a
pH alto
45 ˚C
45 ˚C
45 ˚C
Diámetro de poro*
100 Å
100 Å
100 Å
Área superficial*
330 m2/g
330 m2/g
330 m2/g
3; 5; 10 µm
3; 5; 10 µm
3; 5; 10 µm
Tamaño de partícula
* Valor esperado o aproximado.
16
nc
™
AQ
SP
18
S
D
k™
O
ac
ts
C
-P
er
In
es
H
C
G
L
Sc
ie
YM
YM
yd
en
ro
om
sp
en
he
il ®
O
re
D
™
S-
C
ua
18
Aq
ex
nt
tla
A
Ph
lip
ax
®
is
®
Pl
dC
us
P
r-R
se
la
Po
i™
rg
rb
ne
Zo
Ag
ile
nt
®
ex
en
om
en
Ec
P
Sy
C
do
ei
is
Sh
Ph
om
PA
ll
ce
ap
i™
rg
ne
Sy
1,6 µmol/g
en
HILIC Silica
1,6 µmol/g
Carga de carbono*
Tipo de recubrimiento final
dC18
en
ex
®
Densidad del
ligando*
T3
Ph
Atlantis
K®
AQ
18
-R
yd
H
Su
tla
A
ro
is
O
ire
T3
C
0
Si
nt
O
60
nF
O
% de pérdida de retención para el metilparabeno
70
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
representativas de todas las aplicaciones.
Durante esta prueba acelerada, las columnas se expusieron a unas condiciones de pH
bajo y alta temperatura para determinar la influencia de la pérdida del ligando a causa
de la hidrólisis. El enlace de la columna Atlantis T3 resiste la hidrólisis del ligando y
mantiene la retención del analito bajo condiciones extremadamente adversas de la
fase móvil.
Retención de compuestos polares
sin reactivos de par iónico
La eliminación de los reactivos de par iónico mejora los límites de
detección, así como la robustez y la reproducibilidad del método;
al mismo tiempo, reduce las labores de mantenimiento del
instrumento debidas a las condiciones adversas de la fase móvil.
Retención de compuestos polares
1
2
4
3
5
Atlantis T3
4
1
3,5
2
Agilent Zorbax® SB-AQ
4
1
2
5
3
Thermo Hypersil Gold AQ™
3,4
1
2
1
5
2
Phenomenex® Synergi™ Hydro-RP
5
3
4
Shiseido Capcell PAK® C18 AQ
0
1
2
3
4
5
6
7
8 min
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
representativas de todas las aplicaciones.
Separación de analitos muy polares con la columna Atlantis T3 y con columnas de la
competencia. Los científicos confían en la forma de picos y en la retención inigualables
que solo pueden ofrecer las columnas Atlantis.
Condiciones de LC
Columna: 4,6 x 150 mm
Fase móvil: 10 mM de formiato de amonio, pH de 3,0
Caudal: 1,3 mL/min para 3 µm
Volumen de inyección: 2,0 µL
Temp. de la columna: 30 °C
Detección: 254 nm
Velocidad de adquisición: 10 pts/s
Sistema: Alliance 2695 con detector de absorbancia
de doble longitud de onda 2487
Compuestos
1. Tiourea
2. 5-fluorocistina
3. Adenina
4. Guanosina-5'-monofosfato
5. Timina
www.waters.com/atlantis
17
Excelente estabilidad a pH bajos
Con fases móviles de pH bajo, las columnas SunFire tienen una
vida útil que supera a la de muchas marcas de columnas para
HPLC basadas en sílice.
Las columnas SunFire™ se han convertido en el estándar de
referencia de las columnas para HPLC de sílice enlazada a C18
y C 8 más modernas. Gracias a varios años de investigación y
desarrollo de productos, las columnas SunFire son el resultado
de lo mejor de los conocimientos técnicos en cuanto a
partículas y enlaces; asimismo, ofrecen un nivel de rendimiento
cromatográfico líder en el sector.
Alta eficacia
Se precisa una combinación sinérgica de síntesis de partículas,
tecnología de relleno e ingeniería de hardware para lograr
una eficacia alta. Las columnas SunFire Intelligent Speed™
(IS™ ) y Optimum Bed Density (OBD™ ) se han desarrollado
específicamente a partir de estos conocimientos.
Formas de picos excelentes
O
O
SunFire
O
Si
O
CH 3
Durante años, las columnas SunFire han proporcionado picos
simétricos para mejorar la resolución de los compuestos ácidos,
neutros y básicos a rangos de pH bajos y moderados (2–8).
Si
CH 3
C8
C18
Sílice
3,5 µmol/g
3,5 µmol/g
N/A
12%
16%
N/A
Patentado
Patentado
N/A
L7
L1
L3
Rango de pH
2–8
2–8
2–8
Límite de temp. a
pH bajo
40 ˚C
50 ˚C
55 ˚C
Límite de temp. a
pH alto
40 ˚C
40 ˚C
45 ˚C
Diámetro de poro*
100 Å
100 Å
100 Å
Área superficial*
340 m /g
340 m /g
340 m2/g
2,5; 3,5; 5;
10 µm
2,5; 3,5; 10 µm
2,5; 3,5; 10 µm
Densidad del
ligando*
Carga de carbono*
Tipo de recubrimiento final
2
* Valor esperado o aproximado.
18
1
2
3
4
Clasificación USP
Tamaño de partícula
Comparación entre las formas de picos de las columnas SunFire
2
SunFire C18
4,6 x 150 mm, 5 µm
T USP – 1,26
5
6
Phenomenex® Luna® C18 (2)
4,6 x 150 mm, 5 µm
T USP – 1,35
T USP – 1,79
0
5
10
15
20
25
ACT® Ace® C18
4,6 x 150 mm, 5 µm
30
35
40 min
Es posible que las separaciones mostradas en las comparativas no sean
representativas de todas las aplicaciones.
Separación isocrática
Fase móvil A: 20 mM de fosfato de dipotasio al 35%/
20 mM de fosfato monopotásico con un pH de 7,0
Fase móvil B: metanol al 65%
Longitud de onda: 254 nm
Caudal:1,0 mL/min
Vol. de inyección: 14 µL
Temp. de la columna:23 ˚C
Sistema:
Alliance 2695 con detector de absorbancia
de doble longitud de onda 2487
Compuestos
1. Uracilo
2. Propranolol
3. Butilparabeno
4. Naftaleno
Reproducibilidad entre lotes
Waters se compromete con el mantenimiento de las
especificaciones más estrictas en el sector de la HPLC. Los
procesos de fabricación y los procedimientos de empaquetado
de columnas controlados le aseguran que recibirá la mejor y
más reproducible columna HPLC que se encuentra disponible.
Reproducibilidad entre lotes de las columnas SunFire
Lote 112 (2005)
Lote 118 (2007)
Lote 130 (2007)
Lote 134 (2008)
0
5
10
15
20
25
30
35
40 min
Esta excelente reproducibilidad es consecuencia de nuestro compromiso de mantener
las especificaciones más estrictas en el sector de las columnas HPLC. Las columnas
SunFire parten de materias primas de alta pureza y se producen mediante procesos de
fabricación y procedimientos de empaquetado de columnas controlados que ofrecen
a los científicos actuales las mejores y más reproducibles columnas para HPLC que se
encuentran disponibles.
www.waters.com/sunfire
19
Las columnas Symmetry® se fabrican con
sílice de alta pureza y mediante procesos de
fabricación controlados de forma estricta
para garantizar que recibirá una columna
que supere los estándares establecidos
para el rendimiento de las columnas HPLC.
Ninguna otra marca de columnas para LC
basadas en sílice puede igualar la reproducibilidad entre columnas y entre lotes de la
familia Symmetry. Las columnas Symmetry
están disponibles en formatos de columna,
de cartucho y de precolumna:
■■
Columnas Symmetry C18 y C 8:
ofrecen la máxima reproducibilidad
■■
Columnas SymmetryShield™ RP18 y RP8:
ofrecen una forma de picos excelente
■■
Columnas Symmetry300™ C18 y C4: ofrecen recuperaciones
elevadas de péptidos y proteínas
CH 3
O
CH 3
Si
O
CH 3
CH
Si
Si
CH
O
3
3
up
Gro
lar
Po
CH
Si
O
3
CH
3
up
Gro
lar
Po
CH 3
O
3
CH
CH 3
Si
O
CH 3
Si
CH 3
Symmetry
Symmetry
C18
Symmetry
C8
SymmetryShield
SymmetryShield
RP18
RP18
Symmetry300
C18
Symmetry300
C4
Tamaño de partícula
3,5; 5µm
3,5; 5 µm
3,5 µm
5 µm
3,5 µm
5 µm
Forma de las partículas
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Tamaño de poro
100 Å
100 Å
100 Å
100 Å
300 Å
300 Å
12%
12%
15%
17%
8,5%
2,8%
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Carga de carbono
Recubrimiento final
Columnas Symmetry para la máxima
reproducibilidad
Reproducibilidad entre lotes de las columnas Symmetry
1
2
3
4
Puede confiar en las columnas para HPLC Symmetry si desea que
el rendimiento sea robusto y reproducible. Los estrictos intervalos
de las especificaciones de las columnas minimizan la variación
y le ofrecen la seguridad de que, el día de mañana, podrá seguir
utilizando los métodos que usa hoy en día.
Lote 136 (1998)
Lote 142 (1998)
Lote 149 (1999)
Lote 151 (2000)
Lote 156 (2001)
0,0
1,50
3,0
4,5
6,00
7,5
9,0
10,5
12,0
13,5
15,0
min
Reproducibilidad sin igual un año tras otro.
Condiciones de LC
Columna:
Symmetry C18, 5 µm,
4,6 x 150 mm
agua
Fase móvil A: Fase móvil B:
acetonitrilo
Fase móvil C: pH de 3,75; 100 mM de
formiato de amonio en agua
1,4 mL/min
Caudal: Isocrática: 30% A; 60% B; 10% C
20
Volumen de inyección: Temperatura: Detección:
5,0 µL
30 °C
UV a 233 nm
RSD para tiempos de retención
1. Terbinafina HCI
0,7%
0,8%
2. Ibuprofeno
0,6%
3. Lovastatina
4. Simvastatina
0,7%
Columnas Symmetry para formas de
picos excelentes
Las columnas SymmetryShield incorporan la tecnología de grupos
polares integrados patentada por Waters; dicha tecnología protege los
silanoles residuales de la sílice de los analitos muy básicos y mejora la
forma general de los picos. Además, al colocar el grupo polar integrado
cerca de la superficie de sílice, la actividad de los silanoles superficiales
se reduce aún más. De este modo, se confiere una selectividad y una
retención diferentes de las del ligando Symmetry C18.
Las columnas SymmetryShield ofrecen una selectividad única
1
2
4
SymmetryShield RP18
Factor de asimetría USP = 1,2
UA
3
5
6
7
0
5
1
10
15
20
30 min
25
2
3
Symmetry C18
Factor de asimetría USP = 1,9
UA
4
5
7
0
5
10
15
20
6
25
30 min
La tecnología de grupos polares integrados mejora la selectividad y las formas
de los picos cromatográficos.
Condiciones de LC
Columna:
SymmetryShield RP18, 5 µm, 3,9 x 150 mm
Symmetry C18, 5 µm, 3,9 x 150 mm
Fase móvil:
metanol al 65%; 20 mM de fosfato monopotásico al 35%/
fosfato de dipotasio con un pH de 7
Caudal:1,0 mL/min
Detección:
UV a 254 nm
Temp. de la columna:
23 °C
Compuestos
1. Uracilo
2. Propranolol
3. Butilparabeno
4. Dipropilftalato
5. Naftaleno
6. Amitriptilina
7. Acenafteno
www.waters.com/symmetry
21
Las columnas XTerra® MS, Shield RP y Phenyl combinan las mejores propiedades de la sílice y de las fases enlazadas poliméricas con la tecnología
patentada de partículas híbridas, que reemplaza uno de cada tres silanoles
por un grupo metilo durante la síntesis de partículas. Solo se puede conseguir dicho reemplazo durante la síntesis de partículas inicial; asimismo,
la inclusión de este grupo metilo es una parte integral de la estructura de
las partículas base. El resultado es un partícula mecánicamente fuerte que
puede usarse para separaciones a pH altos; como consecuencia, se mejora
la carga y las formas de picos de los compuestos básicos.
La eficacia de la sílice con la estabilidad de
los polímeros
La gran mayoría de las separaciones HPLC de fase reversa tienen lugar
en fases estacionarias basadas en sílice. A la sílice se le ha atribuido
durante mucho tiempo una eficacia elevada y una gran resistencia
mecánica. Sin embargo, la sílice tiene como inconvenientes la obten-
ción de formas de picos deficientes para las bases y un rango de pH
limitado. Una de las formas con la que los técnicos en cromatografía
han tratado de superar estas limitaciones ha sido la utilización de fases
estacionarias basadas en polímeros. Los polímeros, no obstante, no
han gozado de la aceptación de la sílice debido a su poca eficacia, a su
baja resistencia mecánica y a un orden de elución de picos impredecible
cuando se transfieren métodos de columnas poliméricas a columnas
basadas en sílice.
La tecnología de partículas híbridas supera estas limitaciones; no solo
combina los mejores atributos de ambos materiales, sino que subsana
las debilidades de cada material. El resultado es un material robusto
con una resistencia mecánica elevada, una eficacia alta, una forma de
picos excelente para las bases y un escalado sencillo de la cromatografía analítica a la preparativa.
Comparación entre el proceso de fabricación del relleno híbrido de
primera generación (XTerra) y el de la sílice
Proceso de fabricación tradicional de la sílice
Partículas de sílice enlazadas y con recubrimiento final
Si
O
Si
O
O
OH
HO
Si
O
O
Si
Si
CH 3
O
XTerra
Tamaño de partícula
Forma de las
partículas
rG
p
rou
la
Po
Si
CH 3
CH 3
O
r
ola
P
Si
CH 3
G
p
rou
O
O
Si
2
CH
CH
CH
RP8
2,5; 3,5; 5;
10 µm
3,5; 5;
10 µm
3,5; 5;
10 µm
3,5; 5 µm
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Tamaño de poro
125 Å
125 Å
125 Å
125 Å
15,5%
15,0%
13,5%
12,0%
Sí
OH
Si
O
O
Si
O
Si
Si
O
O
Si
O
Si O
Si
O
Si
O
Si
O
O
Si
Si
Si
O
O
O
Si
La cobertura superficial
n
Si
más baja
Si
Si
3
CH
O
OH
Si
O
n
Forma de picos
n
Rango de pH entre 2 y 8
Fenilo
Carga de carbono
Sí
OH
Si
Si
O
deficiente
RP18
Sí
O
O
HO
OH
O
O
Si
3
MS C18
Recubrimiento final
Si
OH
Si
Si
O
Si O
O
O
O
OH
HO
Si
Si
O
O
HO
O
Si
Si
OH
Si
Si O
Si
HO
OH
O
O
Si
O
HO
Si
O
Si
O
O
O
Si
O
Si
Si
OH
O
Si OH
Si
Si
Partícula de sílice
no enlazada
Politoxisilano
(PEOS)
Tetraetoxisilano
(TEOS)
Proceso de fabricación del relleno híbrido de primera
generación (XTerra)
Mucho más que una modificación de la superficie
Partículas XTerra enlazadas y con recubrimiento final
Si
H 3C
O
Si
Sí
Si
O
Si
H 3C
O
Si
O
Si
* Valor esperado o aproximado.
Si
Si
OH
H 3C
O
OH
HO
CH3
Si
Si
O
O
Si
OH
HO
Si
O
Si
O
O
OH
O
Si
O
Si
H 3C
O
CH3
O
Si
Si
H 3C
Si
H 3C
O
HO
O OH
Si
O
O
H3C
Si
O
O
Si
Si
OH
O
Si
O
CH3
Si
O
O
Si
O
Si
O
Si
OH
Si
O
O
Si
Si
O
O
Si
O
Si
CH3
Si
O
CH3
Si
O
Si
Si
O
Si
O
CH3
n La cobertura homogénea
más alta
n
1/3 menos de silanoles
n
Excelente forma de picos
n
Rango de pH entre 1 y 12
Si
HO
O
Si O
CH3
O
O
O
Si
O
O
Si
O
Si
Si
O
Si
CH3
Si
H 3C
Partícula
XTerra
no enlazada
22
Metilpolietoxisilano
(MPEOS)
Tetraetoxisilano
(TEOS)
Metiltrietoxisilano
(MTEOS)
Separaciones con la eficacia típica de la sílice trabajando a pH
típicos de rellenos poliméricos
XTerra RP18: 4,6 x 150 mm
pH 10,7
3
1
0,2
6
2
0,4
1
0,3
UA
UA
0,4
0,8
3
0,5
1,2
0,1
5
4
6
2
4
5
0
0
10
min
20
10
20
min
Columna polimérica: 4,1 x 150 mm
pH 10,7
3
0,5
0,4
1
UA
0,3
0,2
6
2
0,1
4
5
0
20
min
10
20
min
Condiciones de LC
Fase móvil A: 20 mM de NH4OH, pH de 10,7
Fase móvil B: acetonitrilo
Caudal: 3 mL/min
Gradiente: Tiempo Perfil
(min) %A%B
0,00 70 30
25,00 4060
28,00 4060
Volumen de inyección: 5 µL
Temperatura: ambiente
Detección: UV a 220 nm
Instrumento: detector de matriz de fotodiodos
2690 y 996 de Waters
Compuestos 1. Codeína
2. Yohimbina
3. Tebaína
4. Cocaína
5. Reserpina
6. Metadona
www.waters.com/xterra
23
COLUMNAS WATERS SPHERISORB
Las columnas Waters Spherisorb ® son una de las columnas HPLC más citadas en la literatura científica. Existen más de
2000 resúmenes analíticos publicados que mencionan las columnas Waters Spherisorb, lo que brinda un intervalo extraordinario de
aplicaciones y métodos validados que le pueden servir de ayuda durante el proceso de desarrollo de métodos.
Las columnas Waters Spherisorb se fabrican en un rango amplio de tamaños de partícula (3, 5 y 10 µm) y de fases enlazadas para satisfacer
cualquier necesidad cromatográfica. Además, las fases enlazadas de calidad superior de las columnas Waters Spherisorb ofrecen muchas
selectividades de separación diferentes y únicas. Las columnas analíticas Waters Spherisorb se suministran con conectores de columna de
estilo Parker, que constituyen el estándar del sector. Los cartuchos de columna Waters Spherisorb precisan conectores de cartucho de estilo
Parker reutilizables.
Spherisorb
www.waters.com/spherisorb
Tipo de ligando
ODS2 (C18)
ODS1 (C18)
ODSB (C18)
C8
C6
C1
Tamaño de partícula
3; 5; 10 µm
3; 5; 10 µm
5 μm
3; 5; 10 µm
3; 5; 10 µm
3; 5; 10 µm
3; 5; 10 µm
220 m /g
220 m /g
220 m /g
220 m /g
220 m /g
220 m /g
220 m2 /g
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Área superficial
Forma de las partículas
Tamaño de poro
2
2
2
2
2
NH2 (amino)
2
80 Å
80 Å
80 Å
80 Å
80 Å
80 Å
80 Å
11,5%
6,2%
11,5%
7,75%
4,7%
2,15%
1,9%
2,98 µmol/m2
1,49 µmol/m2
2,98 µmol/m2
3,12 µmol/m2
3,36 µmol/m2
2,97 µmol/m2
2,64 µmol/m2
Sí
No
Sí
Sí
Sí
No
No
Fenilo
CN (nitrilo)
OD/CN
W (sílice)
SCX
SAX
3; 5; 10 µm
3; 5; 10 µm
5 μm
3; 5; 10 µm
5; 10 µm
5; 10 µm
220 m /g
220 m /g
220 m /g
220 m /g
220 m /g
220 m2/g
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Tamaño de poro
80 Å
80 Å
80 Å
80 Å
80 Å
80 Å
Carga de carbono
2,5%
3,1%
5%
N/A
4%
4%
2,72 µmol/m2
3,29 µmol/m2
1,15 µmol/m2
N/A
–
–
No
No
Sí
N/A
No
No
Carga de carbono
Cobertura del
ligando
Recubrimiento final
Tipo de ligando
Tamaño de partícula
Área superficial
Forma de las
partículas
Cobertura del
ligando
Recubrimiento final
24
2
2
2
2
2
COLUMNAS NOVA-PAK
Las fases enlazadas de las columnas Nova-Pak® cuentan con tamaños de partículas de 4 y 6 µm que ofrecen una resolución elevada, así como una
cromatografía más rápida y eficaz. El tamaño de partícula más pequeño, en combinación con unas longitudes más cortas de columnas, se puede
usar para reducir el consumo de eluyente, así como para mantener la resolución en el caso de las mezclas complejas. Las columnas analíticas que
tienen un relleno con un tamaño de partícula de 4 µm se encuentran disponibles como columnas de acero con longitudes de 75, 150 y 300 mm.
Las columnas de cartucho de acero con conectores reutilizables se encuentran disponibles en longitudes de 50, 100, 150 y 250 mm. Las columnas
semipreparativas Prep Nova-Pak HR se empaquetan con rellenos que tienen un tamaño de partícula de 6 µm y proporcionan un intervalo inigualable
de posibilidades de separación. El relleno de alta eficacia de las columnas Prep Nova-Pak HR ofrece separaciones más rápidas utilizando menos
eluyente, así como la ventaja adicional que aportan unas fracciones más concentradas; por tanto, reduce el coste de la cromatografía preparativa.
Todas las columnas Nova-Pak se empaquetan utilizando rigurosos procedimientos de control de calidad que se llevan a cabo en nuestras fábricas de
acuerdo con las buenas prácticas de fabricación actuales (cGMP); de esta forma, se garantiza la reproducibilidad entre lotes.
www.waters.com/nova-pak
Nova-Pak
Química
C18
C8
Fenilo
CN
Sílice
Prep HR C18
Prep HR Sílice
Tamaño de partícula
4 µm
4 µm
4 µm
4 µm
4 µm
6 µm
6 µm
Forma de las partículas
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Tamaño de poro
60 Å
60 Å
60 Å
60 Å
60 Å
60 Å
60 Å
Carga de carbono
7%
4%
5%
2%
N/A
7%
N/A
Recubrimiento final
Sí
Sí
Sí
Sí
N/A
Sí
N/A
25
COLUMNAS RESOLVE
El relleno Resolve™ sin recubrimiento final es considerablemente diferente de otros materiales de relleno de Waters. El cambio en el
comportamiento cromatográfico se detecta, por lo general, en compuestos polares que normalmente se retienen más. Se pueden obtener
cromatogramas de compuestos básicos mediante modificadores de fase móvil, como es el caso de reactivos de par iónico que reducen la
asimetría excesiva de picos. Las columnas Resolve C18 y de sílice están disponibles para aplicaciones que precisan una resolución elevada.
Resolve
Tipo de ligando
www.waters.com/resolve
Sílice
C18
C8
CN
Tamaño de partícula
5; 10 µm
5; 10 µm
10 µm
10 µm
Forma de las partículas
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Tamaño de poro
90 Å
90 Å
90 Å
90 Å
Carga de carbono
10%
10%
5%
3%
Recubrimiento final
N/A
No
No
No
COLUMNAS DELTA-PAK
Las columnas Delta-Pak™ son ideales para la separación y el aislamiento de péptidos, proteínas y productos naturales; cuentan con dos
tamaños de poro diferentes que están optimizados para las separaciones de moléculas grandes. Las columnas Delta-Pak son conocidas por el
escalado sistemático y predecible entre formatos de columna, lo que ofrece a los científicos encargados de la purificación la posibilidad de
aislar los compuestos diana con cantidades que van desde varios miligramos a varios gramos. La sílice enlazada de las columnas Delta-Pak,
que es muy estable, dispone de tamaños de partícula muy eficaces de 5 y 15 μm.
Delta-Pak
Tipo de ligando
www.waters.com/delta-pak
C18
C18
C4
C4
Tamaño de partícula
5; 15 µm
5; 15 µm
5; 15 µm
5; 15 µm
Forma de las partículas
Esférica
Esférica
Esférica
Esférica
Tamaño de poro
100 Å
300 Å
100 Å
300 Å
17%
7%
7%
3%
Sí
Sí
Sí
Sí
Carga de carbono
Recubrimiento final
26
Tecnología de partículas irregulares
Los primeros materiales de relleno de HPLC constaban de partículas con formas irregulares y no esféricas. Por lo general, estas columnas
reducen la estabilidad mecánica y hacen que disminuya la eficacia en comparación con las columnas empaquetadas con partículas esféricas.
Sin embargo, incluso con estas limitaciones, existen muchos métodos que precisan el uso de dichas fases enlazadas. Como principal fabricante de sorbentes y fases enlazadas, Waters ha mostrado durante más de 40 años que sus columnas ofrecen un rendimiento sistemático y
fiable; por este motivo, continuará respaldando a estas marcas en el futuro.
Columnas µBONDAPAK/BONDAPAK
Si su método es adecuado para una columna μBondapak®, solo existe una columna que contenga el material de relleno μBondapak C18. Muchas
empresas afirman contar con una selectividad "similar a μBondapak", pero ninguna ha superado las rigurosas pruebas de control de calidad a las que
se ven sometidos los lotes de Waters. Los materiales de relleno μBondapak o BondaPak ® han demostrado su reproducibilidad un año tras otro desde
1973, lo que ha favorecido que las columnas μBondapak sean la marca de columnas HPLC que con más frecuencia se
ha citado.
µBondapak/
Bondapak
Tipo de ligando
Tamaño de partícula
Forma de las partículas
Tamaño de poro
Carga de carbono
Recubrimiento final
www.waters.com/bondapak
C18
Fenilo
CN
NH2
10 μm
10 μm
10 μm
10 μm
Irregular
Irregular
Irregular
Irregular
125 Å
125 Å
125 Å
125 Å
10%
8%
6%
3,5%
Sí
Sí
Sí
No
Columnas µPORASIL/PORASIL
Las partículas μPorasil™ y Porasil™ fueron de los primeros materiales de relleno totalmente porosos que se pusieron a la venta para las
separaciones por LC. Por contraste con la capacidad de separación de fase reversa de μBondapak C18, el material no enlazado basado en sílice
de las columnas μPorasil se creó para proporcionar separaciones de fase normal para una amplia gama de tipos de muestras.
µPorasil/Porasil
Tipo de ligando
Tamaño de partícula
Forma de las partículas
Tamaño de poro
www.waters.com/porasil
Sílice
10, 15-20 μm
Irregular
125 Å
Carga de carbono
N/A
Recubrimiento final
N/A
27
¿Cómo puede saber que su sistema cromatográfico funciona de forma adecuada?
Los estándares de referencia QCRM contienen mezclas de patrones seleccionadas de forma específica para ofrecer una
manera sencilla y fiable de controlar el rendimiento de cualquier sistema cromatográfico. El uso de los QCRM le puede
servir para asegurarse de que la columna y el sistema estén preparados para analizar las muestras. El uso regular de
QCRM también proporciona una oportunidad para optimizar los sistemas cromatográficos
y consultar la evolución del rendimiento de dichos sistemas a lo largo del tiempo, lo que facilita la
identificación de problemas de forma proactiva y la posibilidad de resolverlos con mayor rapidez.
Dado que los análisis cromatográficos son complejos y dependen de muchas variables diferentes, como
la composición de la fase móvil, el tipo de columna y el método de detección, Waters ha formulado
mezclas de QCRM específicas diseñadas para evaluar los sistemas teniendo en cuenta estas diferencias.
Para obtener más información acerca de los estándares específicos para la calibración, la cualificación y el ajuste de instrumentos y
detectores, así como una lista más completa de los estándares y reactivos que se encuentran disponibles, visite asr.waters.com.
Nombre del
producto
Uso previsto
QCRM de
compuestos
neutros
Proporciona información del
rendimiento cromatográfico
independientemente del pH de
fase móvil usando 3 compuestos
neutros.
QCRM de fase
reversa
Proporciona información del
rendimiento cromatográfico,
incluido el pH de fase móvil,
usando 1 marcador de volumen
muerto, 3 compuestos neutros,
1 compuesto ácido y 2
compuestos básicos.
HILIC QCRM
Proporciona información del
rendimiento cromatográfico del
modo HILIC, incluido el pH de
fase móvil, usando 1 marcador
de volumen muerto, 1 compuesto
neutro polar y 2 compuestos
básicos polares.
QDa QCRM
Quad LCMS QCRM
LCMS QCRM
28
Proporciona información
cromatográfica y de espectrometría
de masas de cuadrupolo usando una
mezcla de 8 componentes para cubrir
un amplio rango de m/z de ESI (+-) a
una concentración optimizada. Esta
solución contiene 1 par crítico para
medir el rendimiento cromatográfico.
Proporciona información
cromatográfica y de espectrometría
de masas de alto rendimiento usando
una mezcla de 9 componentes a
una concentración optimizada.
Esta solución contiene 2 pares
críticos para medir el rendimiento
cromatográfico.
Proporciona información
cromatográfica y de espectrometría
de masas de alto rendimiento usando
una mezcla de 9 componentes a
una concentración optimizada.
Esta solución contiene 2 pares
críticos para medir el rendimiento
cromatográfico.
Modo
cromatográfico
Sistemas
Fase reversa
Todos los sistemas de
UPLC/HPLC
con detector UV
Fase reversa
HILIC
Fase reversa
Todos los sistemas de
UPLC/HPLC
con detector UV
Todos los sistemas de
UPLC/HPLC
con detector UV
Todos los sistemas de UPLC/HPLC
con el detector ACQUITY® QDa®
Contenido
Mezcla de 3 componentes que incluye:
10 μL/mL de acetona, 0,25 mg/mL de naftaleno y
0,4 mg/mL de acenafteno
En una solución de 2 mL de 50/50 acetonitrilo/agua.
Almacenar a temperatura ambiente.
Mezcla de 7 componentes que incluye:
0,016 mg/mL de uracilo, 0,02 mg/mL de butilparabeno, 0,06 de mg/mL naftaleno,
0,4 mg/mL de propranolol, 0,34 mg/mL de dipropilftalato,
0,2 mg/mL de acenafteno y 0,1 mg/mL de amitriptilina
En una solución de 2 mL de 65/35 metanol/20 mM de tampón de K2HPO4 a un
pH de 7.
Almacenar a temperatura ambiente.
Mezcla de 4 componentes que incluye:
0,0190 mg/mL de acenafteno, 0,0037 mg/mL de timina
0,0037 mg/mL de adenina y 0,0077 mg/mL de citosina
En una solución de 1 mL de 20/80 acetonitrilo/agua.
Almacenar a una temperatura refrigerada de 2–5 °C tras su recepción.
Mezcla de 9 componentes que incluye:
100,0 μg/mL de paracetamol, 45,0 μg/mL de cafeína,
50,0 μg/mL de sulfaguanidina, 10,0 μg/mL de sulfadimetoxina,
25,0 μg/mL de val-tyr-val, 6,0 μg/mL de verapamilo, 6,0 μg/mL de terfenadina,
25,0 μg/mL de leucina-encefalina y 19,0 μg/mL de reserpina
En una solución de 1 mL con 23,5% de acetonitrilo de calidad LC-MS,
76,5% de agua de calidad LC-MS y 0,007% de ácido fórmico.
Almacenar a una temperatura refrigerada de 2–5 °C.
Fase reversa
Todos los sistemas de UPLC/HPLC
con espectrómetro de masas de
cuadrupolo
Mezcla de 8 componentes que incluye:
100 µg/mL de paracetamol, 50 µg/mL de sulfaguanidina,
10 µg/mL de sulfadimetoxina, 25 µg/mL de val-tyr-val,
6 µg/mL de verapamilo, 6 µg/mL de terfenadina,
25 μg/mL de leucina-encefalina y 8 μg/mL de reserpina
19/81 acetonitrilo/agua, 0,008% de ácido fórmico.
Almacenar a una temperatura refrigerada de 2–5 °C tras su recepción.
Fase reversa
Todos los sistemas de UPLC/HPLC
con espectrómetro de masas de
alto rendimiento
Mezcla de 9 componentes que incluye:
10,0 µg/mL de paracetamol, 1,5 µg/mL de cafeína,
5,0 μg/mL de sulfaguanidina, 1,0 μg/mL de sulfadimetoxina,
2,5 µg/mL de val-tyr-val, 0,2 µg/mL de verapamilo,
0,2 µg/mL de terfenadina, 2,5 µg/mL de leucina-encefalina y
0,6 μg/mL de reserpina
En una solución de 500 μL de 5,7% de acetonitrilo y 94,3% de agua.
Almacenar a una temperatura refrigerada de 2–5 °C tras su recepción.
Recursos adicionales
DescripciónReferencia
Documentación técnica sobre patrones de referencia QCRM y la optimización del rendimiento del instrumento
720004535EN
Nota de aplicación sobre la resolución de problemas habituales del sistema con los patrones de referencia QCRM de compuestos neutros720004635EN
Guía de selección de reactivos, patrones analíticos y columnas de Waters
720002241EN
Para obtener una lista con los números de referencia de todas las columnas mencionadas en este folleto, visite
waters.com/findmycolumn.
Herramientas on-line
Waters Reversed-P hase Column Selectivity C hart (Gráfico de
selectividad de las columnas de fase reversa de Waters)
Waters Column Advisor
(Asesor de columnas de Waters)
www.waters.com/selectivitychart
www.waters.com/columnadvisor
Waters Part Selector and Selectivity C hart for iPad ®
(Selector de piezas y gráfico de selectividad de Waters para iPad)
www.waters.com/apps
29
OFICINAS DE VENTAS:
Austria 43 1 877 18 07
Australia 61 2 9933 1777
Bélgica y Luxemburgo 32 2 726 1000
Brasil 55 11 4134 3788
Canadá 1 800 252 4752
China 86 21 6156 2666
República Checa 420 2 617 11384
Dinamarca 45 46 59 8080
Finlandia 358 9 5659 6288
Francia 33 1 30 48 72 00
Alemania 49 6196 400 600
Hong Kong 852 2964 1800
Hungría 36 1 350 5086
India 91 080 49292200 03
Irlanda 353 1 448 1500
Israel 9723 3731391
Italia 39 02 265 0983
Japón 81 3 3471 7191
Corea 82 2 6300 9200
México 52 55 52 00 1860
Países Bajos 31 76 508 7200
Noruega 47 6 384 6050
Polonia 48 22.101 5900
Portugal 351 21 893 61 77
Puerto Rico 1 787 747 8445
Rusia/CEI 7 495 727 4490 / 336 7000
Singapur 65 6593 7100
España 34 93 600 9300
www.waters.com/hplccolumns
Suecia 46 8 555 115 00
Suiza 41 56 676 7000
Taiwán 886 2 2508 5500
Reino Unido 44 208 238 6100
Estados Unidos 1 800 252 4752
Waters Corporation
34 Maple Street
Milford, MA 01757 EE. UU.
T EL 508 478 2000
Fax: 508 872 1990
www.waters.com
Waters, T he Science of W hat’s Possible, CORTECS, UPLC, Alliance, ACQUITY UPLC, XBridge, XSelect, Atlantis,
Symmetry, XTerra, Waters Spherisorb, Nova-Pak, BondaPak, µBondaPak, QDa y ACQUITY son marcas comerciales
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