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Instrucciones de uso
IVD Bacterial Test Standard
Estándar de calibración de masa que muestra un perfil de péptidos y proteínas
de Escherichia coli alfa DH5 y proteínas adicionales.
Para usar en espectrometría de masas de tiempo de vuelo de
desorción/ionización por laser asistida por matriz (MALDI-TOF-MS).
Los productos CARE están diseñados para asistir a nuestros clientes de
todo el mundo con consumibles, accesorios y kits exclusivos de alta
calidad.
La gama de productos CARE está optimizada y certificada
específicamente para su uso con todos los sistemas Bruker Daltonics.
Lengua: es
www.bruker.com/care
Revisión 4 (Enero de 2014)
Bruker
1 Uso previsto
2
2 Descripción del producto
2
3 Inspección, almacenamiento y estabilidad
3
3.1
Inspección en el momento de llegada
3
3.2
Almacenamiento en el momento de llegada
3
3.3
Almacenamiento después de crear alícuotas
3
4 Información de riesgo y seguridad
3
5 Requisitos de software
4
6 Procedimiento de preparación de muestras de IVD BTS
4
6.1
Solubilización y preparación de alícuotas de IVD BTS
5
6.2
Preparación de la muestra del IVD BTS en una placa MALDI
5
7 Calibración del espectrómetro de masas MALDI-TOF de Bruker utilizando el IVD BTS
6
7.1
Puntos de calibración utilizados
6
7.2
Procedimientos de calibración
6
7.2.1 Procedimiento de calibración manual
6
7.2.2 Procedimiento de calibración automático
9
8 Fabricante
1
12
Uso previsto
El IVD Bacterial Test Standard es un producto de diagnóstico in vitro para la calibración y optimización
de espectrómetros de masas Bruker MALDI-TOF, así como también para el control del rendimiento de
la identificación de microorganismos cultivados de muestras de seres humanos.
2
Descripción del producto
El IVD Bacterial Test Standard (denominado 'IVD BTS') contiene un extracto cuidadosamente
preparado de Escherichia coli DH5 alfa que muestra un perfil característico de péptidos y proteínas en
los espectros de masas de MALDI-TOF. El extracto se modificó con dos proteínas adicionales que
extienden el límite superior del rango de masa cubierto por IVD BTS. El rango general de masa
cubierto por IVD BTS es 3,6 a 17 kDa.
Cada tubo contiene suficiente material para la preparación de aproximadamente 40 puntos de
calibración en una placa MALDI.
Este kit es de uso para diagnóstico in-vitro.
Información para pedidos
Producto
Número de referencia
IVD Bacterial Test Standard, 5 tubos
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8290190 o 290190
IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
Revisión 4
Bruker
3
Inspección, almacenamiento y estabilidad
3.1
Inspección en el momento de llegada
Verifique el paquete del IVD BTS a su llegada. Si está dañado, verifique los tubos. Si los tubos están
dañados, no utilice el IVD BTS. Deseche el IVD BTS (tubos y paquete) siguiendo las directrices
descritas en la Hoja de datos de seguridad del material correspondiente al producto y póngase en
contacto
con
el
Departamento
de
servicios
de
Bruker
Daltonik
GmbH
([email protected]) para su reposición.
3.2
Almacenamiento en el momento de llegada
–18°C
3.3
El IVD BTS se envía a temperatura ambiente, pero debe almacenarse
inmediatamente a una temperatura máxima de –18°C al recibirlo. La fecha de
caducidad mencionada en el paquete es válida para el IVD BTS cerrado si se
almacena a una temperatura máxima de –18°C en el momento de su llegada.
Almacenamiento después de crear alícuotas
El IVD BTS debe solubilizarse antes de su utilización. Se recomienda especialmente que se creen
alícuotas del IVD BTS disuelto y se congelen utilizando microtubos de cierre de rosca de 0,5 mL y
tapones roscados.
–18°C
4
El IVD BTS disuelto puede almacenarse congelado hasta 5 meses a una
temperatura máxima de –18°C. Con el trascurso del tiempo, posiblemente se
detecten productos de oxidación. Estos productos de oxidación no influyen de
una manera importante en la calidad del espectro.
Información de riesgo y seguridad
Este producto no está clasificado de acuerdo con el Reglamento (CE) n.º 1272/2008 y, por lo tanto, no
está clasificado de acuerdo al Sistema Globalmente Armonizado de Clasificación y Etiquetado de
Productos Químicos (Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals, GHS).
De acuerdo con la experiencia del fabricante, el producto no produce efectos perjudiciales si se utiliza y
manipula conforme a las especificaciones. Sin embargo, todos los materiales pueden presentar
riesgos desconocidos y deben manipularse con precaución. Para más información, lea la Hoja de
Datos de Seguridad del Material que está disponible para descargar en www.bruker.com/msds.
Se pueden requerir otras sustancias químicas adicionales para los procesos descritos en estas
instrucciones de uso. Lea cuidadosamente la Hoja de Datos de Seguridad del Material proporcionada
por el proveedor y siga las regulaciones de seguridad cuando manipule sustancias químicas o material
que presente riesgo biológico.
Revisión 4
IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
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Bruker
5
Requisitos de software
Determinadas versiones/combinaciones de software requieren un parche de software gratuito para
admitir el IVD BTS (consulte la Tabla 1). Póngase en contacto con el Equipo de servicio de Bruker
Daltonics local para obtener ayuda con la instalación.
Tabla 1
Requisitos del parche de software
Versión de software
Versión Compass
1.4
1.3 1.2
1.1
1.0
Versión flexControl
3.4
3.3 3.0
2.4
2.2
2.0 1.2
1.1
No
No
Sí
Sí
Sí
Sí
¿Requiere parche de
software?
Sí
Sí
6
Procedimiento de preparación de muestras de IVD
BTS
Nota
El siguiente procedimiento no debe utilizarse si su flujo de trabajo incluye métodos prescritos
de preparación de IVD BTS (por ejemplo, procedimientos estandarizados de operación para
IVD MALDI Biotyper).
Comentarios preliminares
Una mala preparación de muestras disminuirá la sensibilidad y producirá una baja resolución y mala
reproducibilidad. La generación de iones mediante MALDI depende de la presencia de una proporción
óptima de sustancia matriz y analito. Para obtener mejores resultados, utilice soluciones preparadas
recientemente y sustancias químicas de la pureza más alta disponible (por ej., disolventes
CHROMASOLV LC-MS).
Sustancias químicas y materiales necesarios
l
l
l
l
IVD Matrix HCCA- portioned (números de referencia 8290200 o 290200) (denominado IVD
HCCA) o Matrix HCCA-portioned (números de referencia 8255344 o 255344) (denominado
HCCA; HCCA = ácido α-ciano- 4- hidroxicinámico), que debe ser preparado tal y como se
describe en las Instrucciones de uso de los mismos.
La disolución estándar (acetonitrilo 50%, agua 47,5% y ácido trifluoroacético 2,5%) de SigmaAldrich (número 19182) que ha sido testada por Bruker Daltonik GmbH y se recomienda su uso
para la solubilización del IVD BTS.
Microtubos de cierre de rosca (Sarstedt, número de referencia 72.730.003) y tapones roscados
(Sarstedt, número de referencia 65.716.002).
Placa de MALDI del tipo seleccionado para su flujo de trabajo.
Equipamiento y herramientas necesarios
Centrífuga, agitador tipo Vortex, pipetas, puntas de pipeta
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IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
Revisión 4
Bruker
6.1
Solubilización y preparación de alícuotas de IVD BTS
1. Agregue 50 µL de disolvente estándar al gránulo del IVD BTS y disuelva mediante pipeteado hacia
arriba y abajo al menos 20 veces a temperatura ambiente.
Evite la formación de espuma en la disolución.
2. Incube la disolución IVD BTS durante 5 minutos a temperatura ambiente y entonces mezcle
pipeteando arriba y abajo al menos 20 veces.
3. Centrifugue a 13.000 rpm durante 2 minutos a temperatura ambiente.
4. Pipetee alícuotas de 5 μL del sobrenadante en microtubos de cierre de rosca y cierre bien los
tubos.
5. Almacene las alícuotas a una temperatura máxima de –18°C.
6.2
Preparación de la muestra del IVD BTS en una placa
MALDI
Nota
Las alícuotas del IVD BTS deben descongelarse a temperatura ambiente y mezclarse
golpeando suavemente el microtubo de cierre de rosca con el dedo. Los microtubos de cierre
de rosca deben cerrarse y almacenarse a una temperatura máxima de ─18°C
inmediatamente después de la preparación de los puntos de muestra del IVD BTS. Cada
alícuota de 5 µL incluye suficiente material para al menos cuatro puntos de muestra.
1. Deposite 1 µL de la solución del IVD BTS en cualquier posición de la placa de MALDI.
2. Deje secar la muestra del IVD BTS a temperatura ambiente.
3. Recubra la muestra de IVD BTS con 1 µL de la solución IVD HCCA o HCCA inmediatamente
después del secado.
4. Deje secar la muestra a temperatura ambiente.
Se debe poder observar una preparación homogénea.
Revisión 4
IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
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Bruker
7
Calibración del espectrómetro de masas MALDITOF de Bruker utilizando el IVD BTS
7.1
Puntos de calibración utilizados
Tabla 2
Puntos de calibración con un límite de tolerancia de masa de ±300 ppm
Proteína
Masa de referencia (masa media)
Rango de ± 300 ppm
RL29 [M+2H]2+
3637,8 Da
3636,7 Da – 3638,8 Da
RS32 [M+H]+
5096,8 Da
5095,3 Da – 5098,3 Da
RS34 [M+H]+
5381,4 Da
5379,8 Da – 5383,0 Da
RS33meth [M+H]+
6255,4 Da
6253,5 Da – 6257,3 Da
RL29 [M+H]+
7274,5 Da
7272,3 Da – 7276,7 Da
RS19 [M+H]+
10.300,1 Da
10.297,0 Da – 10.303,2 Da
RNAse A [M+H]+
13.683,2 Da
13.679,1 Da – 13.687,3 Da
Mioglobina [M+H]+
16.952,3 Da
16.947,2 Da – 16.957,4 Da
7.2
Procedimientos de calibración
Dispone de procedimientos de calibración manuales y automáticos. El procedimiento manual puede
utilizarse con todas las versiones de flexControl, mientras que se requiere flexControl 3.3 o posterior
para el procedimiento automático.
7.2.1
Procedimiento de calibración manual
1. Inserte la placa MALDI preparada con la muestra del IVD BTS en el espectrómetro de masas
MALDI-TOF.
2. Asegúrese de que se esté ejecutando flexControl.
3. Utilice el método de flexControl estándar MBT_FC.par (modo Lineal y Positivo) para la medición
y calibración.
4. Mida manualmente un espectro de suma; para hacerlo, sume 6 x 40 disparos de láser de diferentes
posiciones en el pocillo de la muestra preparada del IVD BTS. Haga clic en el botón Start
y, a continuación, en el botón Add
para cada posición del pocillo
que desee para registrar un total de 240 disparos de láser, tal como se muestra en
debe optimizar el nivel de energía del láser.
Optional:
Alternativamente se puede medir automáticamente un espectro suma en:
l
hacer clic en la pestaña AutoXecute;
seleccionar el método autoX MBT_ AutoX en la lista desplegable Method
(Figura 1);
l
hacer clic en el botón Run method on current spot
l
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. Se
IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
.
Revisión 4
Bruker
Figura 1
Ficha AutoXecute con selección del método MBT_AutoX para la
medición automática del espectro de suma
Esto mide automáticamente un espectro de suma.
5. Haga clic en el botón de la barra de herramientas Single Buffer
para ocultar el único espectro
actualmente mostrado. Esto habilita el botón de la barra de herramientas Sum Buffer
muestra el espectro de suma medido.
6. Haga clic en el botón de la barra de herramientas Smooth Spectrum
espectro de suma (Figura 2).
Figura 2
y
para suavizar el
Espectro de suma suavizado del IVD BTS
7. Haga clic en la pestaña Calibration y seleccione el archivo de calibración MBT_Standard en la
lista desplegable Mass Control List (Figura 3).
Figura 3
Pestaña Calibration que muestra la Mass Control List
8. Haga clic en el botón Automatic Assign
calibración correctos.
Revisión 4
escoger automáticamente los picos de
IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
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Bruker
9. Compruebe si la asignación automática de los picos de calibración funcionó correctamente. La lista
de picos de calibración debe mostrar que todos los picos están asignados y que la desviación
máxima Err/ppm no es superior a ±300 ppm para cualquiera de los picos (Figura 4).
Figura 4
Resultado de la asignación automática de los picos de calibración en la que todos
los picos están asignados y la desviación máxima Err/ppm es inferior a ±300 ppm
para todos los picos
Según el resultado, continúe de la siguiente manera:
l
l
l
l
l
Si todos los picos están asignados y la desviación máxima Err/ppm es inferior a ±300 ppm
para todos los picos, la asignación automática de los picos de calibración es correcta.
Continúe con el paso (12).
Si todos los picos están asignados, pero la desviación máxima Err/ppm es mayor a ±300
ppm para cualquiera de los picos, repita los pasos (4) a (9).
Si algunos pocos picos están asignados y la desviación máxima Err/ppm es menor a ±300
ppm para todos los picos, continúe con el paso (10).
Si algunos pocos picos están asignados, pero la desviación máxima Err/ppm es mayor a
±300 ppm para cualquiera de los picos, repita los pasos (4) a (9).
Si ninguno de los picos está asignado, continúe con el paso (11).
10. Haga clic en el botón Apply
en el botón Automatic Assign
y repita la asignación automática de picos haciendo clic
.
Compruebe si todos los picos están asignados y si la desviación máxima Err/ppm es menor a ±300
ppm para todos los picos.
l
l
Si todos los picos están asignados y la desviación máxima Err/ppm es inferior a ±300 ppm
para todos los picos, la asignación automática de los picos de calibración es correcta.
Continúe con el paso (12).
Si no todos los picos están asignados o si la desviación máxima Err/ppm es mayor a ±300
ppm para cualquiera de los picos, repita los pasos (4) a (9).
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IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
Revisión 4
Bruker
11. Seleccione manualmente el pico a m/z 6255,4 Da haciendo clic en el lado izquierdo del pico en el
espectro. La línea vertical junto al pico debe cambiar de color rojo a verde en el caso de una
correcta asignación de picos (los datos correspondientes se incorporan en la lista de picos de
calibración). Haga clic en el botón Apply
haciendo clic en el botón Automatic Assign
y repita la asignación automática de picos
.
Compruebe si todos los picos están asignados y si la desviación máxima Err/ppm es menor a ±300
ppm para todos los picos.
l
l
Si todos los picos están asignados y la desviación máxima Err/ppm es inferior a ±300 ppm
para todos los picos, la asignación automática de los picos de calibración es correcta.
Continúe con el paso (12).
Si no todos los picos están asignados o si la desviación máxima Err/ppm es mayor a ±300
ppm para cualquiera de los picos, repita los pasos (4) a (9).
12. Después de haber asignado automáticamente todos los picos con una desviación máxima
Err/ppm de menos de ±300 ppm para todos los picos, haga clic en el botón Apply
.
13. Guarde los nuevos valores de calibración en el método de flexControl (MBT_FC.par). Al hacer
clic en el botón de la barra de herramientas Save method as
se abre el cuadro de diálogo
Save flexControl Method As. Haga clic en el botón Save. Confirme el reemplazo del archivo
(MBT_FC.par) haciendo clic en el botón Yes en el cuadro de diálogo de confirmación (Figura 5).
Figura 5
Cuadro de diálogo de confirmación sobre el reemplazo del archivo del método
especificado
7.2.2
Procedimiento de calibración automático
Nota
Se requiere flexControl 3.3 o posterior para el procedimiento de calibración automático.
1. Inserte la placa MALDI preparada con la muestra del IVD BTS en el espectrómetro de masas
MALDI-TOF.
2. Asegúrese de que se esté ejecutando flexControl.
3. Utilice el método de flexControl estándar MBT_FC.par (modo Lineal y Positivo) para la medición
y calibración.
4. Seleccione Tools > Method Calibration Parameters (Figura 6 ) para definir o comprobar la
configuración de calibración del método de flexControl.
Nota
Revisión 4
Solo debe configurar los parámetros de calibración para la primera calibración (inicial).
Para las posteriores calibraciones, solo se debe comprobar la selección del método de
autoX correcto (MBT_AutoX) .
IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
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Bruker
Figura 6
Comando Method Calibration Parameters del menú Tools
5. Introduzca o compruebe la configuración de los parámetros de autocalibración mostrados en la
Figura 7. A continuación, haga clic en el botón OK.
Figura 7
Cuadro de diálogo Edit Auto Calibration Parameters
6. En la pestaña Calibration (Figura 3), compruebe que el parámetro Peak Assignment Tolerance
está definido al valor máximo de 1000 ppm (Figura 8).
Figura 8
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Parámetro Peak Assignment Tolerance
IVD Bacterial Test Standard – Instrucciones de uso
Revisión 4
Bruker
7. Para iniciar el procedimiento de calibración, haga clic en el botón Calibrate
.
Se adquirirá automáticamente un espectro de suma; para ello, se sumarán 6 x 40 disparos de láser
de diferentes posiciones en el pocillo del IVD BTS y se completará automáticamente la calibración.
Después de una correcta calibración se abre un cuadro de diálogo (Figura 9). Haga clic en el botón
OK para completar la calibración.
Figura 9
Cuadro de diálogo de información de calibración
8. Si se producen errores durante la calibración, repita el procedimiento de calibración automático,
pasos (4) a (7), o siga el procedimiento de calibración manual descrito en la sección 7.2.1.
Revisión 4
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Bruker
8
Fabricante
Bruker Daltonik GmbH
Fahrenheitstraße 4
28359 Bremen
Alemania
Soporte
E-mail: [email protected]
Teléfono: +49 (421) 2205-1401
Fax:
+49 (421) 2205-106
Información sobre ventas
E-mail:
[email protected]
Teléfono: +49 (421) 2205-0
Web:
www.bruker.com/care
# 8290190 o 290190
Las direcciones y especificaciones sustituyen toda información anterior y están sujetas a cambios sin previo aviso.
© Copyright 2014 Bruker Daltonik GmbH
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Revisión 4