Carrera de Técnicos Para Bioterio Asignaturas: Técnicas para Bioterio I V REPRODUCCIÓN EN ANIMALES DE LABORATORIO 1° parte: RATA - RATÓN Autores : Galassi Geréz, Paola F. Gullace , Federico A. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Reproducción en animales de laboratorio Consideraciones generales: RATA (rattus norvegicus) Clasificación reproductora: Hembra poliestrica continua Pubertad: Se encuentra altamente influido por factores externos. Algunos autores opinan que la apertura vaginal ocurre por término medio a los 72 días (34-109) y que los primeros ciclos fértiles aparecen a los 77 días, aunque no se las suele aparear hasta los 90 días de edad. Un de los signos de maduración sexual es la aparición de un patrón especifico de LH circulante, que se caracteriza por la repetición de picos agudos cada 30-60 minutos. Estos estimulan la secreción ovárica de 17-beta estradiol que hacia la tarde del día 26-30 (dependiendo de la cepa) provoca la secreción de Lh que estimula el desarrollo final del ovario. El día 30 se observa un aumento de la prolactina en plasma. Durante la pubertad esta hormona facilita el desarrollo y mantiene los receptores de LH en el ovario, necesario para la secreción normal de progesterona. Los cambios de humedad, intensidad lumínica o estrés a través de las glándulas pineal y adrenales pueden disociar la apertura vaginal, la 1° ovulación y el ciclo estral, fenómenos que se encuentran correlacionados habitualmente. Esto podría deberse a bajos niveles de estradiol insuficientes para estimular la LH y FSH suficientes para la ovulación. El apareamiento de hembras mal desarrolladas o muy jóvenes favorece la aparición de distocias, aumenta el intervalo entre camadas, disminuye él numero y el peso de las crías por parto. El crecimiento y la maduración corporal están relacionados con la somatotrofina, la misma tiene acción especifica sobre la actividad cíclica y la apertura vaginal. Él apareo de animales en forma tardía disminuye la capacidad reproductiva de los mismos. La mayor fertilidad se observa entre los 100 y los 300 días. El macho adquiere capacidad reproductiva entre los 50 y 60 días de edad. REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Los roedores de laboratorio pueden ser considerados animales en alta producción, según el sistema de apareo que se utilice. En producción intensiva es habitual que la hembra se encuentre amamantando y gestando al mismo tiempo por lo tanto en estas circunstancias las condiciones del medio ambiente, la dieta, las características genéticas y las condiciones sanitarias de estas especies determinan el comportamiento en la reproducción. La respuesta biológica esta absolutamente condicionada por el medio ambiente. Si este no es estable la respuesta tampoco lo será y habrá mayor margen de error en los experimentos y menor reproductividad. 2 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Ciclo estral El ciclo estral dura entre 4-5 días (siendo el de 4 días él mas frecuente). Los animales con ciclos de 5 días presentan mayor índice de pseudopreñez y de preñez posiblemente por tener mayor periodo de receptividad. El olor de la orina de los machos como de las hembras acorta el ciclo de 5 a 4 días en el 50 al 100 % de las hembras expuestas al mismo. ( la extirpación del bulbo olfatorio suprime este efecto) Características de las diferentes etapas: Proestro: Duración 12 hs. Vulva inflamada, vagina seca ph de 5,4. Células epiteliales nucleadas, leucocitos en fase temprana. Ovario con desarrollo folicular Útero distendido por que el aumento de flujo sanguíneo y acumulo de fluidos con una luz de 5mm. Metaestro I: duración aproximada 15 hs. Vulva inflamada. Vagina con cúmulos caseosos. Fluido vaginal caseoso y abundante con células pavimentosas. La ovulación múltiple y espontánea ocurre en esta fase temprana debido al aumento de LH. Es pico de LH determina el final de la liberación de estrógenos y el comienzo de secreción de progesterona que induce el comportamiento materno y la secreción uterina Metaestro II: Duración aproximada 6 hs. Vulva normal. Vagina con paredes húmedas. Frotis con células cornificadas y leucocitos. Los óvulos se hallan en el oviducto. Diestro: Duración aproximada 57 hs. Células epiteliales y leucocitos. El ph vaginal es de 6,1 y la luz uterina es de 2,5 mm. REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Estro: Duración aproximada 12 hs. Vulva inflamada. Vagina paredes de aspecto seco, blanquecino y lustroso ph 4,2 Células: 75% nucleadas y 25 % cornificadas. Al final del estro aparecen células planas nucleadas y el flujo se hace abundante y caseoso. Ovario con folículos grandes y óvulos casi maduros. En este periodo los estrógenos son los responsables del comportamiento de la hembra. La estimulación digital de la región pélvica produce una lordosis refleja (test de Blandau o de respuesta copulatoria). 3 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Cópula, transporte de esperma y fertilización El apareamiento se realiza en la etapa de celo y se ve influido por las feromonas del macho. Estas feromonas se hallan en la orina emitida por machos intactos. No así en la orina de machos prepúberes o castrados, o en la orina contenida en la vejiga urinaria, esto sugiere que estas feromonas se agregan a la orina en el momento de la micción y son producidas por glándulas andrógeno dependiente. Además de estimular el apareamiento producen el rechazo de otros machos. Durante la cópula el semen es depositado en la porción anterior de la vagina, cerca del cervix. El eyaculado contiene la secreción de las glándulas coagulantes que impide, al formar un tapón vaginal, la pérdida de semen por la vulva. Él estimulo de la cópula produce contracciones responsables de la progresión del semen hacia el útero y el oviducto, esta face de transporte produce una disrupción mecánica de los espermatozoides que hace que sean incapaces de fecundar. Contracciones posteriores durante el estro producen la progresión del esperma con capacidad fecundante hacia el oviducto. Al cuarto día de fecundación todos los blastocistos están ya en el útero. Estro vaginal persistente (E.V.P) El E.V.P. es un estado acíclico de las ratas adultas que marca el fin de la actividad ovárica cíclica. Se caracteriza por la presencia de ovarios de grandes folículos quísticos que no ovulan y, por lo tanto no experimentan luteinización. La citología vaginal es semejante a las de las ratas ovariectomizadas con tratamiento mantenido con estrógenos. La edad en que aparece varia según la cepa (entre los 5 y 12 meses de edad)y se ve influida por la cantidad de horas de luz a las que es sometido el animal y por factores sociales que actúan durante la vida adulta. Animales que al ser sometidos a mayor cantidad de horas luz desarrollaron EVP, retornan a la normalidad cuando la misma se reduce a 10 hs diarias. El EVP aparece antes cuando las hembras se encuentran aisladas. En este caso se puede prever por la aparición de ciclos irregulares y un exagerado reflejo de lordosis durante los mismos. En hembras que viven en comunidad el aumento de estrógenos en el frotis vaginal durante los ciclos irregulares es la única señal de la entrada en el EVP. REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Gestación La gestación dura 22-23 días. La placenta es discoidea y hemocorial. A partir del día 13 se observa el abultamiento del abdomen, dependiendo del numero de crías. Entre el día 2 y 16 de preñez es factible el hallazgo de glóbulos rojos en vagina. La duración del parto depende de la cantidad de crías, de la edad de la madre y de su condición física. 4 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Ratón (mus musculus) Clasificación reproductora: hembra poliéstrica continua. Pubertad: Aparece aproximadamente a las cuatro semanas de vida coincidiendo con la mayor secreción de gonadotrofinas. En hembras inmaduras que han tenido contacto con machos adultos o con la orina de éstos, se acelera el inicio de la pubertad, mientras que el contacto con hembras adultas o su orina retarda el ritmo de crecimiento, la apertura vaginal y la aparición del primer estro. Estos efectos se deben a la acción de la feromonas presentes en la orina de los machos y hembras. EFECTO BRUCE: Consiste en el bloqueo de la preñez si en la etapa previa a la implantación la hembra es expuesta a un macho extraño o a sus feromonas. Si la hembra es separada del macho con el que se apareo inmediatamente después de la cópula y luego de aproximadamente después de 6 horas retorna con el mismo macho, el bloqueo se produce como si se tratara de uno extraño. Esto implica que la hembra debe convivir con el macho 4-6 horas para que la hembra reconozca como familiares a las feromonas masculinas. La memoria olfativa dura 30 a 50 días, pasado ese tiempo el macho original no es reconocido. Cópula y fertilización: Normalmente el apareamiento se produce en el estro en el periodo de oscuridad cercano a la ovulación. La cópula se puede demostrar por la presencia en la vagina del llamado “tapón vaginal”, constituido por las secreciones de las glándulas accesorias del macho, principalmente las glándulas coagulantes. Este tapón distiende la vagina pudiéndose asomar por la vulva hasta 24 hs después de la copula. REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Ciclo estral: La duración del ciclo varia de 4 a 6 días en animales mantenidos con 14 hs luz/ 10 oscuridad (aunque según los autores también se puede ver influenciado por el medio ambiente a través del eje hipotálamo-hipófisis). El ciclo se divide en proestro, estro, metaestro y diestro. El celo dura aproximadamente 12 hs. El proestro y estro culminan en la ovulación y constituyen la face de liberación de estrogenos, mientras que el metaestro y el diestro (o pseudopreñez o preñez) conforman la face progestacional o luteal). (Ver Tabla 1) En las hembras mantenidas con Ciclos luminicos 14/10 el pico ovulatorio de LH se produce entre las 4 y las 5 de la tarde del día del proestro y la ovulación 12 horas después, entre la 1 y las 8 de la mañana del día del estro, con marcada tendencia a localizarse en la mitad del periodo de oscuridad. Los óvulos liberados en cada ciclo son transportados a la porción proximal o ampolla del oviducto donde tiene lugar la fecundación. Los mismos mantienen su fertilidad durante 10 a 15 hs 5 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Por lo general los espermatozoides se hallan esperando a los óvulos y son capaces de fecundar durante aproximadamente 6 hs, aunque mediante una motilidad remanente durante más de 14 horas. Y son eliminados por fagositosis leucocitaria 24 horas después de la cópula EFECTO LEE-BOOT: Las hembras aisladas presentan ciclos de 5 a 6 días de duración, a veces irregulares y con la aparición de pseudogestación espontáneas. Cuando se agrupan hembras sin la presencia de machos pueden presentar pseudopreñez, más frecuentemente si son grupos pequeños, o anestro si se agrupan en mayor número. En ambos casos hay una efectiva supresión del celo. Gestación La duración de la gestación es de 19 a 20 días según la cepa. La duración de la preñez esta muy relacionada con el tamaño de la masa fetal y no tanto con la cantidad de crías implantadas. La gestación es más corta cuando se trata de camada híbridas que cuando son cepas puras, lo que probablemente esta en relación con las diferencias antigénicas entre la madre y los fetos. En sistemas de apareamiento monogámico permanente, es habitual que se aproveche el celo posparto que aparece entre 16 y 24 horas después del mismo. La fertilidad es menor en este apareamiento que en otro correspondiente a un ciclo normal. La placenta es discoidea y hemocorial. Parto y Lactancia La mayoría de los nacimientos se producen en las horas de oscuridad según algunos autores, mientras que otros señalan que no hay relación entre el inicio del parto y el ciclo lumínico. El primer feto por lo general sale del cuerno derecho, y el resto es expulsado al azar. La lactación dura aproximadamente 21 días, pero puede prolongarse si se reemplaza la camada por otra de animales más jóvenes que produzcan mayor succión. Los máximos niveles de secreción láctea se producen a los 12 o 13 días pos parto. El reflejo de la expulsión de la leche, cuyo estimulo es la succión de los pezones por parte de las crías, es necesario no solo para la liberación de la oxitocina, sino también para la secreción de hormonas de la hipófisis anterior, responsables del mantenimiento de la secreción láctea. REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO EFECTO WHITTEN: Si las hembras aisladas ( que presentan anestro) son luego llevadas a la presencia de machos normales, comienzan a presentar ciclos con normalidad. Este efecto del macho sobre los ciclos es inducido por una feromona andrógeno-dependiente que se agrega a la orina dentro de la vejiga y también durante la salida al exterior, en este caso por la secreción de las glándulas prepuciales. 6 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace EFECTO VANDENBERGH: Las hembras presentan un inicio precoz de la pubertad inducido por la presencia del olor de un macho adulto. A este fenómeno se lo conoce como efecto Vandenberg que es TABLA 1 Proestro Estro Metaestro Diestro Color rojo –rosáceo, Orificio húmedo y dilatado, hendidura longitudinal desarrollada. Edema y hendidura longitudinal prominente, orificio dilatado, mayor coloración que en proestro. Pequeño edema, seco, palidez, pueden observarse restos de células blancas. Orificio contraído, color pálido y húmedo. Frotis vaginal Células epiteliales nucleadas, leucocitos ocasionales, células epiteliales cornificadas. Abundantes células cornificadas, escasas células epiteliales nucleadas. Células cornificadas, numerosos leucocitos, escasas células epiteliales nucleadas. Moco, menos células que en otros estadios, predominantemente leucocitos con células epiteliales nucleadas ocasionales. REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Orificio Vaginal 7 Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace SISTEMAS DE APAREO Son independientes de los sistemas de cría El criterio para elegir los mismos va a depender del comportamiento de los animales y de la capacidad reproductiva de la especie. Los sistemas de Apareo se clasifican de dos maneras diferentes: A) Según el numero de animales utilizados (Son Monogámicos o Poligámicos ) B) Según el tiempo de permanencia (Son Permanente o Temporales ) APAREO MONOGÁMICO Es cuando mantenemos un macho apareado con una hembra en forma permanente. Este tipo de apareo tiene la ventaja de aprovechar el celo posparto de las hembras, se llevan registros detallados y precisos en forma sencilla. Posee la desventaja de ser mas caros, por la cantidad de materiales que se utilizan (Jaulas, mamaderas, etc.) y más trabajosos. Producen a su vez un mayor desgaste de las hembras (las mismas se retiran de producción luego 7 partos consecutivos) REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV 8 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace APAREO POLIGÁMICO Es cuando apareamos un macho con dos o más hembras. A su vez estos grupos de apareo pueden mantenerse fijos durante toda la vida reproductiva o pueden deshacerse y rearmarse. Desventajas: Si son fijos no puede individualizarse las crías de cada hembra y se dificultan los registros y no son detallados. Si no son fijos (o sea que se retiran los machos o las hembras) son costosos y requieren mucho trabajo y dedicación del personal. Ventajas: Si son fijos se ahorra mucho en materiales y si no son fijos hay un gran aprovechamiento de los machos y altas producción de animales. APAREO PERMANENTE Es el sistema de apareo en el cual los animales permanecen juntos durante toda su vida reproductiva REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO APAREO MANUAL O TEMPORARIO Es cuando los animales son separados después de la copula y según las especies puede ser después de detectada la preñez. Tiene por ventaja el mejor aprovechamiento de los machos y de las hembras reproductoras. Y el registro de las fechas exactas de los servicios, pero tiende a ser caro y poco factible de utilizar en las especies más comunes de laboratorio (rata - ratón). Tipos de apareo según la especie: Rata, Ratón y Cobayo: En General aceptan Ap. Monogámico, Poligámico, temporales y/o Permanentes dependiendo de la conducta de los animales) Hámster y Conejo: Aceptan apareo Monogámico o Poligamico ( Solo Manual ) Gato y Perro: Aceptan Monogámico, Poligamico y a su vez Permanente o Transitorio. 9 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace SELECCIÓN DE REPRODUCTORES La selección de reproductores debe basarse en el estudio de las características reproductivas y productivas de animales cuya producción ya se encuentra establecida. 1. CARACTERISTICAS REPRODUCTIVAS: ( los valores son generales y varia en función de la cepa , colonia y/o características del ambiente en el que se encuentran los animales en estudio) A) Índice de primera cría: Indica la edad que la hembra es apta para él apareo. Ratón: 50 a 60 días de edad Rata: 50 a 60 días de edad Hámster: 50 a 70 días de edad (Syrian, Chinese y Djungarian) Cobaya: 90 a 100 días de edad Conejo: 150 a 180 días de edad B) Tamaño de la camada al nacimiento: Se refiere a la cantidad promedio de crías nacidas por parto por hembra. Ratón: cepas 3 – 4 crías / colonias 10 – 12 crías Rata: 10-12 (los extremos van de 3 a 18 crías ) Hámster: 5 – 7 crías (Syrian, Chinese y Djungarian) Cobaya: 5 a 7 crías Conejo: 6 – 8 crías D) Tasa de mortalidad al nacimiento y al destete: Porcentaje de animales muertos respecto de los nacidos. E) Intervalo entre partos: Es el tiempo que media entre un parto y el siguiente. Ratón - Rata: Ciclo estral + gestación y/o destete = 4 + 21 = 25 días Hámster: C. estral + gestación + destete + gestación = 4 + 16/21 + 21 + 16 = 57-62 días Cobaya: Ciclo estral + gestación y destete= 16/19 + 68 (58-75) = 74 / 94 días Conejo: Gestación + destete + descanso + gestación = 28/33 + 30/45 + 0/10 + 28/33 = 86/121 días F) Índice de ultima cría: Indica la edad de la hembra que comienza a presentar baja capacidad reproductiva. Ratón: 7 partos o 240 días de edad Rata: 8 partos o 300 días de edad Hámster: 5 partos o 1 año de edad Cobaya: 8 partos o 2 años de edad Conejo: 8 partos o 3 años de edad REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO C) Tamaño de la camada al destete: Se refiere a la cantidad promedio de crías destetadas por hembra. 1 0 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace 2. CARACTERISTICAS PRODUCTIVAS: A) Peso medio de la camada al nacimiento (media de la camada) Ratón:1 – 1.5 grs Rata: 4 – 6 grs Hamster: 1.5 a 2.5 grs Cobayo: 50 a 80 grs Conejo:50 a 100 grs B) Peso medio de la camada al destete Ratón: 8 a 12 grs Rata: 30 a 55 grs Hamster: 35 a 60 grs Cobayo: 100 a 130 grs Conejo: 600 a 1500 grs C) Curva de peso (peso expresado en gramos en función de la edad expresada en días) D) Peso “ y“ antes del destete. Donde “ y ” es igual al pico de producción de leche. En hembras de ratón es a los 11 a 13 días e indica la habilidad materna y debe ser evaluado en el día 12 posterior al nacimiento. Todos estos datos sirven para seleccionar los reproductores donde las madres que no respondan a la media de la colonia serán descartadas, este descarte no debe ser realizado antes de la tercera camada ,que es donde se puede en forma certera evaluar la capacidad reproductiva de las hembras. Las mismas deben ser comparadas con la cepa patrón. La metodología de descarte de reproductores debe ser realizada en el siguiente orden: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Tamaño de la camada Mortalidad de los lactantes Intervalo entre partos Edad de los reproductores Peso medio de la camada Productividad Estado de Salud Fertilidad REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO E) Productividad: Es la relación entre él numero de animales destetados en un periodo determinado de tiempo (por semana o mes) y el numero de hembras que se encuentran en producción durante el mismo periodo. 11 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace MANTENIMIENTO DE LINEAS ISOGENICAS Una cepa es endocriada cuando se aparearon animales mas emparentados que la media de la población a la que pertenecen (padre x hijo - hermano x hermana) por mas de 21 generaciones consecutivas y que a su vez dichos antecesores puedan ser rastreados hasta un apareo ancestral único. A partir de la generación 21 se considera un grado de consanguinidad del 98,6% CARACTERISTICAS Sistema Lineal Simple (SLS): Sirve para mantener núcleos isogénicos. Se parte de una pareja de hermanos y se aparean hermano x hermano en las siguientes generaciones (siempre utilizando selección de reproductores y comparando con la misma cepa patrón). G1 Pareja elegida G2 G3 G4 G = Generación REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO G0 1 2 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Sistema de Líneas Paralelas (SLP) Tiene la misma utilidad que el SLS. Pero se diferencia de este porque no puede hacerse por mas de cinco generaciones consecutivas ya que aumenta la probabilidad de que aparezcan sublineas. G0 G1 Trafic Light System (TLS) O Sistema de luz de transito. Es el único sistema utilizado en producción. Se parte de un SLS donde un grupo de animales sigue en el sistema y el otro pasa a formar el TLS G2 G3 Núcleo Verde del TLS REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO G2 1 3 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Los animales del núcleo verde se aparean independientemente del grado de parentesco que los una. Los hijos de estos apareos formaran el nuevo núcleo del sistema (amarillo o de expansión) y puede ser utilizado para venta y para formar el núcleo de stock o núcleo rojo cuyos animales solo pueden ser utilizados para venta y no pueden ser apareados ya que sino perderían el 98,6% de consanguinidad. N. Isogenico Núcleo Expansión CARACTERISTICAS ANIMALES ENDOCRIADOS / Inbred Strain • • • • • Población cerrada genéticamente uniforme. Cruzamiento continuo entre hermanos por mas de 20 generaciones consecutivas. 98,6 % de homocigosis Pierden el vigor híbrido y disminuye la expectativa de vida. Pone en descubierto anormalidades genéticas que están encubiertas en colonias REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Núcleo Stock o consumo 1 4 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace MANTENIMIENTO DE COLONIAS EXOCRIADAS Exocría: Se produce cuando los individuos apareados están menos emparentados que la media de la población. Lo que se busca es producir animales heterocigotas. Por lo cual la población tiene una homocigosis menor al 1%. Para mantener estas colonias con sus características estables por muchas generaciones. Para elegir el sistema de cruzamiento a utilizar en una colonia se tiene en cuenta el numero de machos reproductores que la colonia utiliza históricamente. N° de ♂ reproductores Sistema Utilizado El Sistema para evitar al maximo el indice de consangüinidad es utilizado en pequeñas colonias donde se debe mantener el indice por debajo del 1% . El sistema es efectivo si los apareos se realizan todos en un periodo de tiempo corto y no se superponen generaciones. El sistema se basa en el principio a partir del cual de cada macho reproductor se obtenga un macho para la siguiente generacion reproductora y de cada hembra una hembra. En este metodo para evitar cruzamientos cercanos se aplica el siguiente esquema de cruzamiento. Ej: Para una colonia que cuenta con 8 jaulas de cria ♀Go 1 3 5 7 2 4 6 8 Nueva Jaula Reproductora 1 2 3 4 5 6 7 8 ♂Go 2 4 6 8 1 3 5 7 REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO 1 - 25 ♂ --------------------------------------- Sistema para evitar el apareo consanguineo 26 - 100 ♂ ---------------------------------------- Sistemas Rotacionales (Poiley – Falconer) más de 100 ♂ ------------------------------------------------------ Sistema de apareo al Azar 1 5 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Este sistema tan estricto solo se utiliza en ratas y ratones y no es aconsejado para colonias con menos de 10 ♂ y 20 ♀ ( siempre teniendo en cuenta la posible aparicion de casos de muerte y/o infertilidad) Los Sistemas Rotacionales (Poiley – Falconer) tienen como principal objetivo el de evitar el apareamiento de animales emparentados. Para ello Samuel M. Poiley (1960) describió un sistema donde las poblaciones cerradas son sistemáticamente controladas de forma tal que todos los animales contribuyan igualmente al mantenimiento del pool genético a lo largo del tiempo. Para seguir con el sistema se debe dividir a los animales en grupos uniformes y seguir con el esquema descrito. En este método se describieron esquemas para colonias divididas en 3 (tres) y hasta 12 (doce) grupos. Cuanto mayor sea el número de machos que forman la colonia menor será el número de grupos a formar. Los grupos están formados por un número determinado de jaulas (Ej.: Grupo 1 formado por jaulas que van de la 1 a la 333, grupo 2 va de la jaula 334 a la 666 y el grupo 3 va de la jaula 667 a la jaula 1000). N ° de grupo de procedencia de Los machos 1 2 3 2 3 N ° de grupo de procedencia de las hembras 3 1 1 2 Nuevo grupo a formar Esquema de 4 grupos N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 3 4 Nuevo grupo a formar 3 4 1 2 N ° de grupo de procedencia de las hembras 2 3 4 1 REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Esquema de 3 grupos 1 6 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Esquema de 5 grupos N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 3 4 5 2 3 4 5 N ° de grupo de procedencia de las hembras 5 1 2 3 1 4 Nuevo grupo a formar N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 3 4 4 5 1 6 N ° de grupo de procedencia de las hembras 3 4 6 5 5 3 2 6 2 1 Nuevo grupo a formar Esquema de 7 grupos N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 7 1 N ° de grupo de procedencia de las hembras 5 6 3 2 7 4 5 3 5 6 4 6 7 3 4 1 2 Nuevo grupo a formar REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Esquema de 6 grupos 1 7 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Esquema de 8 grupos N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 2 5 N ° de grupo de procedencia de las hembras 8 3 3 6 4 4 7 5 5 8 6 6 7 1 3 7 1 8 4 2 Nuevo grupo a formar N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 2 5 N ° de grupo de procedencia de las hembras 9 3 3 6 4 4 7 5 5 8 6 6 7 9 1 7 8 8 3 1 9 4 2 Nuevo grupo a formar REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Esquema de 9 grupos 1 8 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Esquema de 10 grupos N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 2 5 N ° de grupo de procedencia de las hembras 10 3 3 6 4 4 7 5 5 8 6 6 7 9 10 7 8 8 1 9 9 3 1 10 4 2 Nuevo grupo a formar N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 2 5 N ° de grupo de procedencia de las hembras 11 3 3 6 4 4 7 5 5 8 6 6 7 9 10 7 8 8 11 9 9 1 10 10 3 1 11 4 2 Nuevo grupo a formar REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Esquema de 11 grupos 1 9 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Nº de grupo de procedencia de los machos 1 2 4 5 Nº de grupo de procedencia de las hembras 3 4 3 6 5 4 7 6 5 8 7 6 7 9 10 8 9 8 11 10 9 12 11 10 1 12 11 2 1 12 3 2 Nuevo grupo a formar Siguiendo los lineamientos generales del sistema Poiley posteriormente (1967) se describió el Sistema Falconer. Bajo este sistema las colonias son divididas en grupos que son cruzados usando el siguiente cuadro: N ° de grupo de procedencia de los machos 1 2 1 2 N ° de grupo de procedencia de las hembras 2 3 3 3 4 4 4 5 5 5 6 6 7 6 7 7 8 8 8 1 Nuevo grupo a formar REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Esquema de 12 grupos 2 0 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace Como se puede extraer del cuadro anterior solo se rotan las hembras para la formación de los nuevos grupos Hay que tener en cuenta que a medida que se rotan las hembras generación tras generación, se llegará a un punto donde la h del grupo 1 deberá ser apareada con el macho del grupo 1 (cosa que seria imposible ya que pertenecen al mismo grupo) entonces este esquema se saltea y se pasa al esquema siguiente; de esta forma se consigue mantener uniforme el índice de consanguinidad existente en la colonia a lo largo del tiempo. En ambos sistemas es recomendado rotar en los esquemas la columna de machos por la de hembra en cada ciclo de rotación y cruzamiento. Cruzamiento al azar: el núcleo de reproductores para la próxima generación se elige al azar de la colonia total , la cual debe poseer mas de 100 machos reproductores. Generalmente se usa para ampliar la colonia de produccion la cual se mantiene con sistemas más efectivos y controlados como ser los sistemas Poiley y/o Falconer • • • • Alto vigor híbrido Consanguinidad menor al 1 % Alta productividad Se debe mantener la colonia con amplia dispersión genética a lo largo de las generaciones. REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO CARACTERISTICAS ANIMALES EXOCRIADOS / Outbred Stock 2 1 CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO TÉCNICAS PARA BIOTERIO IV Paola F. Galassi Geréz Federico A. Gullace BIBLIOGRAFIA F. J. Benavides; J.L. Guénet MANUAL DE GENÉTICA DE ROEDORES DE LABORATORIO Universidad de Alcalá , SECAL, Laboratory Animals Ltd. 2003 J. ZUÑIGA, J. TUR MARI, S. MILOCCO, R. PiÑEIRO CIENCIA Y TECNOLOGÍA EN PROTECCIÓN Y EXPERIMENTACIÓN ANIMAL. Ed. Mc Graw - Interamericana. 1º ed. 2001 Jesus ZUÑIGA PRINCIPIOS DE LA CIENCIA DE ANIMALES DE LABORATORIO Ed. L.F.M. VAN ZUTPHEN, V. BAUMANS, A.C.BAYNEN – 1° Ed. 1999 (ELSEVIER) Institute of Laboratory Animal Resources, National Research Council GUIDE FOR THE CARE AND USE OF LABORATORY ANIMALS National Academy Press, Washington, 1996. Poole T.B. (Ed.) THE UFAW HANDBOOK ON THE CARE AND MANAGEMENT OF LABORATORY ANIMALS, 6th Ed. Longman Scientific and Technical, London, 1989. GUIDE TO THE CARE AND USE OF EXPERIMENTAL ANIMALS, VOL I y II CCAC, Otawa, Vol I, 2nd Ed., 1993; Vol II, 1984. REPRODUCCION EN ANIMALES DE LABORATORIO Castillo Menendez R. ANIMALES DE LABORATORIO EN LAS INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS Editorial Ciencias Médicas, La Habana, 1985. 2 2
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