V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón CHEMICAL COMPOSITION OF STINGLESS BEES HONEY COLLECTED FROM VARIOUS PARTS OF KENYA Macharia J. K, Muli E. M, Raina S.K, Biesmeijer J.C, Gitonga L.N 50 VALORACIÓN DE MÉTODOS PALINOLÓGICOS COMO HERRAMIENTA DE CONTROL DE CALIDAD EN MIELES DE ABEJAS ANGELITAS (Trigona angustula) en COLOMBIA Montoya Pfeiffer Paula M, 51 EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LA MIEL DE Melipona beecheii y Scaptotrigona pectoralis DE YUCATAN, MEXICO. Catzin Ventura Gloria; Delgado America; Medina-Medina Luis. 55 DETERMINACIÓN DEL PODER ANTIBACTERIAL DE MIELES DE ABEJAS NATIVAS SIN AGUIJÓN, A PARTIR DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA Gamboa M. V, Figueroa J, Nates-Parra G, Cepeda M, Rosso J.M 63 RECURSOS FLORALES UTILIZADOS POR Melipona beecheii Bennet (APIDAE: MELIPONINAE) EN YUCATÁN, MEXICO. Alfaro-Bates, R., González-Acereto, J., Ortiz-Díaz, J.J. 67 Ponencia Magistral “ESTIMACIÓN DE LA DISTRIBUCIÓN DE LAS ESPECIES LOS MELIPONINI DE MÉXICO, ÁREAS DE ENDEMISMO Y PROBLEMÁTICA TAXONÓMICA” Ricardo Ayala Barajas 74 EL GÉNERO Melipona ILLIGER, 1806 (Hymenoptera , Apidae, Meliponini) EN MINAS GERAIS BRASIL – DISTRIBUCIÓN Y ESTADO ACTUAL DE CONSERVACIÓN Yurrita, Carmen L. & Silveira Fernando A. 76 COMPARATIVE PHYLOGEOGRAPHY OF THREE STINGLESS BEE SPECIES FROM BRAZIL Francisco, F.O.; Brito, R.M. & Arias, M.C 81 DIFFERENTIATION OF SPECIES OF THE GENUS Scaura BY GEOMETRIC MORPHOMETRICS OF THE WING Alayne Magalhães Trindade Domingues; Sidnei Mateus; Tiago Maurício Francoy; Maria Cristina Arias. 85 V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón 55 Evaluación de la actividad antibacteriana de la miel de Melipona beecheii y Scaptotrigona pectoralis (Apidae: Meliponini) en Yucatán, México. Catzín Ventura, Gloria A. 1, Delgado Herrera, Maria2, Medina Medina Luis A.1 1 Campus de Ciencias Biológicas y Agropecuarias (CCByA), Universidad Autónoma de Yucatán (UADY), [email protected]. 2 Departamento de Química Aplicada, Facultad de Química-UADY; [email protected]. Resumen. La actividad antimicrobiana es una de las propiedades biológicas que posee la miel de abejas, la cual ha sido evaluada principalmente en la miel de Apis mellifera. Sin embargo, existen mieles producidas por otras abejas; como las abejas sin aguijón, (Apidae: Meliponini), utilizadas en México desde tiempos precolombinos a las que también se les atribuyen dichas propiedades. No obstante, existe un poca información sobre sus propiedades antibacterianas; por lo que se evaluó esta actividad en la miel de Melipona beecheii y Scaptotrigona pectoralis. Se analizaron 10 muestras de miel por cada una de las especies, las cuales fueron colectadas en 7 localidades de Yucatán. Para evaluar la actividad antimicrobiana, se realizaron 5 diluciones de miel (5, 10, 15, 20, 50 y 100%) contra S. aureus, S. agalactiae, E. coli y P. aeruginosa. Los resultados demostraron que las mieles de M. beecheii y S. pectoralis inhiben el crecimiento de S. aureus aún a bajas concentraciones. S. agalactiae y P. aeruginosa fueron inhibidas por la miel de las dos especies de abejas al 50 y 100% y la miel de S. pectoralis inhibió el crecimiento de E. coli de manera más efectiva que M. beecheii. Palabras clave: M. beecheii; S. pectoralis; Actividad antibacteriana, Miel, Yucatán. Summary. Honey samples of the stingless bee species Melipona beecheii and Scaptotrigona pectoralis were evaluated for their antimicrobial activity at different dilutions (5, 10, 15, 20, 50 y 100%) against S. aureus, S. agalactiae, E. coli and P. aeruginosa. The results showed that the honey of both species, M. beecheii and S. pectoralis, inhibited the growth of S. aureus even at the lowest concentrations. S. agalactiae y P. aeruginosa were inhibithed only at dilutions of 50 y 100% and the honey of S. pectoralis inhibited the growth of E. coli more effectively than that of M. beecheii. V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón 56 Introducción. La determinación de la actividad antibacteriana puede ser usada como un valor adicional sobre la calidad de la miel de abejas. Esta actividad, permite conocer su acción contra algunas bacterias patógenas, para el uso de este producto en el tratamiento de ciertas enfermedades infecciosas (Enríquez y Aguilera, 2008). Posiblemente, el gran interés en el uso de la miel como terapia alternativa, es la presencia de bacterias resistentes a los antibióticos. Algunos investigadores reportan que la actividad antibacteriana de la miel es debido a su efecto osmótico por su alto contenido de azúcares. Sin embargo, diversos estudios microbiológicos indican que la miel tiene otros componentes antibacterianos mas efectivos (Molan, 2001). Se sugiere que la miel de abeja es efectiva porque: a) previenen infecciones por sus propiedades antibacterianas, b) proporciona una barrera viscosa para la pérdida de fluidos y la invasión bacterias en las de heridas, por lo tanto previene la infección, c) contiene enzimas las cuales ayudan a curar y promover la formación de células, d) absorbe el pus, limpiando las heridas y e) reduce el dolor e irritación al igual que elimina los olores desagradables (Jones, 2001). Las culturas establecidas en las regiones tropicales de América, emplearon la miel de las abejas nativas sin aguijón (meliponinos) para el tratamiento de algunas enfermedades, y en la civilización Maya la miel no solo fue utilizada con fines edulcorantes si no también terapéuticos, para el tratamiento de problemas oculares, óticos, de las vías respiratorias, intestinales y de la piel. Debido a estos antecedentes, el objetivo de este trabajo fue evaluar la propiedad antibacteriana en la miel perteneciente a dos especies de abejas nativas de Yucatan siendo Melipona beecheii y Scaptotrigona pectoralis, utilizando bacterias del grupo Gram-positivas y Gram-negativas. V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón 57 Materiales y métodos. Localización del área de estudio. La colecta de miel producida por las abejas nativas, fue realizada durante el periodo comprendido de Noviembre de 2007 a Marzo del 2008, siendo 10 muestras por cada una de las especies a evaluar. Las muestras de miel de Melipona beecheii fueron colectadas en los municipios de Hunucmá, Tetiz, Maní, Baca, Tepakán y Sacalum y el resto de las muestras (n=4) al igual que todas las muestras para la especie de Scaptotrigona pectoralis fueron colectadas en el meliponario perteneciente al Departamento de Apicultura del Campus de Ciencias Biológicas y Agropecuarias (CCByA) de la Universidad Autónoma de Yucatán (UADY). Los análisis de la actividad antimicrobiana fueron realizados en el Laboratorio de Farmacología perteneciente a la Facultad de Química de la UADY. Obtención de las mieles. Las mieles de las abejas sin aguijón (M. beecheii y S. pectoralis) fueron extraídas directamente de los potes de miel operculados, de los cuales fue removido la parte superior del cerumen en un ambiente estéril. La miel fue extraída con ayuda de pipetas o jeringas y depositadas en frascos previamente esterilizados. Dichos frascos fueron etiquetados y posteriormente fueron llevados al laboratorio de la Facultad de Química (UADY), almacenándolos a una de temperatura de 5.4° C (DeHemera et al., 2004). Para cada especie de abejas, se obtuvo un volumen aproximado de 100 mL de miel. Microorganismos. Para evaluar la actividad antimicrobiana se seleccionaron 4 bacterias todas ellas fueron cepas de referencia de la ATCC (American Type Culture Collection). Gram positivas: Staphylococcus aureus (ATTC 6338) y Streptococcus agalactiae (ATCC 260). Gram negativas: Escherichia coli (ATCC 10231) y Pseudomona aeruginosa (ATCC 10536). V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón 58 Evaluación de la actividad antibacteriana. Se realizaron diluciones a la miel en agua estéril para obtener concentraciones finales de 5, 10, 15, 20, 50 y 100% V/V. Para evaluar la actividad antimicrobiana, se utilizó el método de difusión en agar llamado pozo-placa de KIRBY-BAUER (Figura 1; Koneman, et al., 1985). Figura 1.- Método pozo-placa en agar de KIRBY-BAUER. Se realizaron inóculos de las bacterias ya mencionadas con 18 hrs de incubación; transcurrido este tiempo los inóculos fueron ajustados al 0.5 de la escala de McFarland para posteriormente ser depositados con ayuda de un hisopo estéril, distribuyéndolo uniformemente en las superficie de las placas de agar Muller Hinton de 4 a 5 mm de grosor. Estas cajas contenían 6 pozos los cuales fueron realizados con 24 hrs de anterioridad; en 4 de los pozos se depositaron las concentraciones de miel a evaluar, y el control positivo (antibiótico) y el control negativo (agua estéril) se depositaron en los 2 pozos sobrantes. Las muestras de miel que presentaron inhibición contra alguna bacteria, se les midió el halo de inhibición con ayuda de un vernier, tomándose como casos positivos las que presentaron halos 10 mm de diámetro. V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón 59 Resultados y discusión. Staphylococcus aureus: En la figura 3, se puede observar que la miel tanto de M. beecheii como de S. pectoralis fueron capaces de inhibir el crecimiento de S. aureus. En la evaluación realizada por Enríquez y Dardón (2007), sobre la actividad antibacteriana en la miel de 9 especies de abejas nativas de Guatemala, demostraron que S. aureus fue inhibido por la miel de M. beecheii a una concentración de 5% y la miel de S. pectoralis fue efectiva a una concentración del 10%; y en este estudio resultó que las diluciones para inhibir a S. aureus fueron contrarias, en un rango de 10 hasta 100% y 5 a 100% para la miel de M. beecheii y de S. pectoralis, respectivamente. También se pudo observar que el aumento de la concentración es directamente proporcional a su diámetro de inhibición en los dos tipos de miel; siendo que para S. pectoralis las concentraciones del 50 y 100% fueron las que mostraron halos de inhibición muy similares al control (antibiótico). Streptococcus agalactiae: Este microorganismo solamente fue inhibido a la concentración del 100% por la miel de M. beecheii con un diámetro inferior al de su control. Con respecto a la miel de S. pectoralis; esta presentó inhibición en concentraciones de 50 y 100% y los halos de inhibición fueron menores al control. V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón 60 S. aureus 35 21.78 21.1 Zona de inhibición (mm) 30 21 21.69 21.33 20.25 25 22.15 16.46 20 21.16 18.6 20.5 20.05 16.64 15.58 14.11 13.75 12.5 20.82 19.95 20.82 13.5 12.9 15 10 5 0 10% 15% 20% 50% 100% 5% 10% 20% 25% 50% 100% Concentración de miel (%) E .c o li 25 .83 18.0 4 30. 33 1 5.6 100% 50% 18 . 06 100% Concentración de miel (%) M. beecheii 40 P .areu gin o s a 24 35 30 22 25 20 8.42 11 15 10 5 0 100% 100% Concentración de miel (%) S pectoralis Zona de inhibición (mm) 29 .6 Zona de inhibición (mm) Zona de inhibición (mm) S .agalactiae 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 45 28.43 26.33 40 35 27.09 30 25 20 14 13.83 15.27 15 10 5 0 100% 50% 100% Concentración de miel (%) Control Figura 3.- Diámetros de las zonas de inhibición (Media r D.E.) para Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli y Pseudomona aeruginosa, en las diluciones con efecto antimicrobiano, de las mieles analizadas para cada especie de abeja. Escherichia coli: Para este microorganismo, únicamente se obtuvo inhibición a una concentración del 100% en las mieles de ambas especies de abejas y se puede observar que el valor para M. beecheii es menor a 10mm. Para S. pectoralis se obtuvo un halo de 11mm pero también fue menor a su control (antibiótico), por lo que podemos considerar que esta bacteria fue resistente a la miel de ambas abejas, y este efecto se puede comparar con el estudio realizado por Enríquez y Dardón en 2007, ya que estos autores reportan dicha actividad a una concentración de 5% para ambas mieles, valor inferior al obtenido en este estudio. V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón 61 Pseudomona aeruginosa: La miel de S. pectoralis fue capaz de inhibir el crecimiento de P. aeruginosa a concentraciones de 50 y 100%, presentando halos de inhibición similares a estas dos concentraciones (14 y 15.7 mm). La miel de M. beecheii solo inhibió a una concentración de 100% con un halo promedio de 13.83 mm, y estos resultados fueron diferentes a los obtenidos por Enríquez y Dardón (2007), que reportaron valores de 5% para M. beecheii y 2.5% para S. pectoralis contra este microorganismo. Aún cuando las propiedades antimicrobianas de la miel se han relacionado con su alta osmolaridad y acidez, esto es correcto cuando la miel no ha sido diluida (Gheldof y Engeseth, 2002; Gonçalves, 2005) y por esta razón, probablemente se observó la inhibición del crecimiento de las bacterias utilizadas en este estudio para los dos tipos de miel a una concentración del 50 y 100% v/v. Sin embargo, cuando la miel es diluida, ni la osmolaridad ni el pH son suficientes como agentes antimicrobianos, no obstante, también se ha observado inhibición contra ciertos microorganismos en dichas mieles, debido posiblemente al peróxido de hidrógeno (H202) y a otros componentes fitoquímicos que estuvieran contenidos en las fuentes florales; como los flavonoides presentes en la miel como metabolitos secundarios de las plantas. (Bogdanov, 1997; Vit y Jacob, 2008) En el presente estudio, el efecto inhibitorio de la miel de ambas especies de abejas sobre Staphylococcus aureus, aún en bajas concentraciones, evidencian la presencia de otros factores responsables de sus propiedades antimicrobianas, además de su alto contenido de azúcares, pH ácido y osmolaridad, incluyendo también el origen botánico del néctar colectado para su conversión en miel. La miel de ambas especies de abejas indujeron actividad inhibitoria contra todas las bacterias analizadas; sin embargo, el microorganismo mas resistente fue E. coli. El presente estudio permite concluir que las mieles de abejas nativas de Yucatán, poseen actividad antimicrobiana variable y respecto a su grado de V Congreso Mesoamericano sobre abejas sin aguijón 62 dilución y origen botánico implicando múltiples beneficios, entre ellos una fuente natural y alternativa potencial para el tratamiento infecciones. Referencias. Bogdanov, S. (1997) Nature and origin of the antibacterial substances in honey. Lebensm.Wiss. U. Technol. Pp 748-753. Dardón, M.J.; Enríquez, E. (2006). Folleto “Miel de abejas nativas sin aguijón de Guatemala”. LENAP, Esc. Biología, Fac. Farmacia, USAC. Dirección general de investigación. Edit Fénix. Guatemala. Pp 12. En: “Miel de abejas nativas en Guatemala” por Enríquez E. y Aguilera C.M. USAC de Guatemala, 2008. pp 17-18. DeMera, J.H.; Angert, E.R. (2004). Comparison of the antimicrobial activity of honey produced by Tetragonisca angustula (Meliponinae) and Apis mellifera from different phytogeographic regions of Costa Rica. Apidologie 35: 411-417. Gheldof, N.; Engeseth, N. (2002). Antioxidant capacity of honey from various floral sources based on the determination of oxygen radical absorbance capacity and inhibition of in vitro lipoprotein oxidation in human serum samples. J. Agric. Food Chem. 50: 3050-3055. Gonçalves, A.L.; Filho, A. A.; Menezes, H. (2005). Atividade antimicrobiana do mel da abelha nativa sem ferrão Nannotrigona testaceicornis (hymenoptera: apidae, meliponini). Arq. Inst. Biol. São Paulo, 72 (4): pp 455- 459. Jones, R. (2001). Honey and healing through the ages: Honey and healing, (edit.) Pamela Munn & Richards Jones, IBRA; pp 1-4. Koneman, E.; Allen, S.; Dowell, V.R. (1985) Diagnóstico microbiológico. Ed. Médica Panamericana. 4ta. edición. pp. 382-397. Molan, P. (2001). Why honey is effective as a medicine. I. Its use in modern medicine: Honey and healing, (edit.) Pamela Munn & Richards Jones, IBRA; pp 1-11. Vit, P.; Jacob, J.T. (2008) Putative anticataract properties of honey studied by the action of flavonoids on a lens culture model. Journal of Health Science 54 (2): 196-202.
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