XXXI REUNION ANUAL DELA SOCIEDAD DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR DE CHILE 23-26 de Septiembre de 2008 Termas de Chillan, Chile Directorio PRESIDENTE PRESIDENTE ANTERIOR VICE PRESIDENTE SECRETARIO TESORERA DIRECTORES Santiago Concepción Valdivia Talca Xavier Jordana Claudio Vásquez Juan Oíate Marcelo López-Lastra Ana Preller Pilar Carvallo Gino Corsini JGloria osé Martínez-Oyanedel León Simón Ruiz AUSPICIADORES INSTITUCIONES Fundación Chilena para Biología Celular Universidad de Talca Universidad Diego Portales Facultad de Ciencias Biológicas y Vicerrectoría Académica, Universidad de Concepción Facultad de Ciencias, Universidad de Chile Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile Universidad Nacional Andrés Bello, Vicerrectoría de Investigación y Postgrado SDT-USACH y Vicerrectoría de Investigación y Desarrollo, Universidad de Santiago de Chile Pan American Association for Biochemistry and Molecular Biology PABMB EMPRESAS FERMELO S.A. GENESYS BIOSCAN BIOS CHILE I.G.S.A. GENEXPRESS TCL XXXI Reunión Anual Programa Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular MARTES 23 DE SEPTIEMBRE 11:00-14:00 INSCRIPCIONES 13:00-14:30 ALMUERZO 15:00-17:00 COMUNICACIONES LIBRES I Sala A MICROBIOLOGÍA Y VIROLOGÍA Presidente: Claudio Vásquez Secretario: Nicolás Guiliani 15:00 CLONALIDAD DE CEPAS DE ACINETOBACTER BAUMANNII PRODUCTORAS DE CARBAPENEMASAS AISLADAS EN HOSPITALES CHILENOS (Clonality of carbapenemase-producer strains of Acinetobacter baumannii isolated from Chilean hospitals) Opazo, A. , Flores, M. , Bello, H. , Domínguez, M. , García, P. , San Martín, M. , Sakurada, A , González, G. . Depto Microbiología, Fac. Cs. Biológicas, Universidad de Concepción , Fac. Medicina, P. Universidad Católica de Chile , Lab. Centralizado, Hospital Barros Luco , Unid. Microbiología, Hosp. Clínico Universidad de Chile . Patrocinante: Martínez, J. 1 3 1 4 1 1 2 1 1 2 3 4 15:15 LOS COMPONENTES DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA DE Aeromonas caviae MEDIAN RESISTENCIA A TELURITO DE POTASIO EN Escherichia coli (The components of the pyruvate dehydrogenase complex of Aeromonas caviae medíate resistance to potassium tellurite in Escherichia coli.) Molina, R. , Castro, M. , Díaz, W. , Vásquez, C. . Laboratorio de Microbiología Molecular. Facultad de Química y Biología. USACH . 1 1 1 1 1 15:30 ESTUDIO DE TRANSPORTE IN VITRO EN PROTEOLIPOSOMAS DE LAS PORINAS OMPD, OMPW Y OMPL DE SALMONELLA ENTERICA SV. TYPHIMURIUM (In vitro transport studies using protegí i poso mes containing OmpD, OmpW or OmpL porins from Salmonella entérica sv Typhimurium) Gutiérrez, J.l. , Villarreal, J.M. , Collao, B. Parra, S. , Aspee, A. , Saavedra, C. . Laboratorio de Microbiología Molecular, Dpto Ciencias Biológicas, \ Universidad Andrés Bello , Laboratorio de cinética y fotoquímica molecular, Dpto. de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile , Laboratorio de Microbiología Molecular, Dpto. Ciencias Biológicas, Universidad Andrés Bello . 1,2 1,2 3 4 2 3 4 15:45 REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA GLUTAMIL-TRNA SINTETASA DE A. ferrooxidans POR EL ESTADO REDOX. (Regulation of GluRSI of A. ferrooxidans by the redox status) Katz, A. , Ibba, M. , Orellana, O. . Programa de Biología Celular y Molecular. ICBM. Facultad de Medicina, Universidad de Chile , Department of Microbiology, Ohio State University, USA. . 1 2 1 1 2 XXXI Reunión Anual 16:00 UTILIZACIÓN DE HERRAMIENTAS BIOINFORMÁTICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE FUNCIONES GÉNICAS QUE PODRÍAN SER REGULADAS POR EL SISTEMA QUORUM SENSING afel/afeR DE Acidithiobacillus ferrooxidans (Using bioinformatic tools to identify genes that might be regulated by the afel/afeR quorum sensing system from Acidithiobacillus ferrooxidans) Banderas, A. , Guiliani, N. . Lab. Microbiología Molecular y Biotecnología. Facultad de Ciencias. Universidad de Chile, Ins. Dinámica Celular y Biotecnología (ICDB) . Patrocinante: Preller, A.. 1 1 1 16:15 COMPRENDIENDO LA VIDA QUIMIOLITOAUTOTROFICA A PH 1 A TRAVES DE LA GENOMICA COMPARATIVA (Insights into chemolithoautotrophic life at pH 1 using comparative genomics) Quatrini, R. , Holmes, D. , Valdés, J.2. Centro de Bioinformática y Biología Genómica, Fundación Ciencia para la Vida. Programa de doctorado en Biotecnología, Universidad Andrés Bello. \ Centro de Bioinformática y Biología Genómica, Fundación Ciencia para la Vida. Programa de doctorado en Biotecnología, Universidad Andrés Bello. . Patrocinante: JedlickL E.. 1 1 2 16:30 LA PROTEINA HUR, ES UN MODULADOR DEL INICIO DE LA TRADUCCION MEDIADA POR IRES EN HIV-1 Y HCV (The Elav-like protein, HuR, is a modulator of HIV and HCV IRES-mediated translation initiation.) Rivas,. A. , Ramdohr, P. , Vallejos, M. , Dormoy-Raclet, V. , Rodríguez, F. , Valiente, F. , Huidobro-Toro, J.P. , .Gallouzi, I. , López-Lastra, M. . Laboratorio de Virología Molecular, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile , Department of Biochemistry, Faculty of Medicine, McGill University, Montreal, Quebec, Canadá. , Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile . 1 2 3 1 1 1 3 2 1 1 2 3 16:45 IDENTIFICACIÓN DE UN SITIO INTERNO DE ENTRADA DEL RIBOSOMA EN LA REGIÓN 5'UTR DEL mRNA COMPLETO DEL VIRUS DEL TUMOR MAMARIO MURINO (Identification of an IRES element in the mRNA of murine mammary tumor virus) Vallejos, M. , Ramdohr, P. , Tapia, K. , Valiente-Echeverría, F. , Lopéz-Lastra, M. . Laboratorio de Virología Molecular, Centro de Investigaciones Médicas, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile . 1 1 1 1 1 1 15:00-17:00 COMUNICACIONES LIBRES II Sala 1 SEÑALIZACIÓN CELULAR Y REGULACIÓN METABÓLICA Presidente: Sergio Lavandero Secretaria: María Victoria Hinrichs 15:00 CA2+ MEDIA LA INCORPORACIÓN DE GLUCOSA ESTIMULADA POR INSULINA EN CARDIOMIOCITOS Y L6GLUT4MYC (Ca2+ mediates insulin-stimulated glucose uptake in cardiac myocytes and L6GLUT4myc) Contreras-Ferrat, A. , Jaimovich, E. , Klip, A. , Lavandero, S. . FONDAP CEMC, Universidad de Chile , The Hospital for Sick Children, Toronto, ON, Canadá . 1 1 1 2 1 2 Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular 15:15 RIC-8B ES TRANSLOCADO DESDE EL CITOSOL A LA MEMBRANA PLASMATICA EN RESPUESTA A ISOPROTERENOL Y CARBACOL (RIC-8B is translocated from the cytosol to the plasma membrane in response to isoproterenol and carbachol) Pasten, P.\ Oíate, J. , Hinrichs, M.V. . Laboratorio de Genética Molecular. Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción. Anillo de Investigación de Estudios Avanzados en Señalización Celular y Regulación Génica. 1 1 1 15:30 NUEVAS ACCIONES DE ALDOSTERONA EN CÉLULAS MONONUCLEARES (New actions of aldosterone in mononuclear cells) Díaz-Elizondo, J.1, Olea-Azar, C. , Lavandero , S. , Michea, L. . Centro FONDAP CEMC. Facultades de Ciencias Químicas y Farmacéuticas y Medicina, Universidad de Chile , Facultades de Ciencias Químicas y Farmacéuticas , Universidad de Chile , Centro FONDAP CEMC. Facultades de , Medicina, Universidad de Chile . 2,3 1 4,5 1 2 3 4 5 15:45 PRIVACIÓN DE GLUCOSA ACTIVA DIVERSAS FORMAS DE AUTOFAGIA EN EL CARDIOMIOCITO (Different types of autophagy are activated in glucose-deprivated cardiomyocytes) Toro, B . \ Rodríguez, A. , Troncoso, R. , Cuervo, A.M. , Lavandero, S. . Centro FONDAP CEMC, Facultad Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile \ Albert Einstein College of Medicine, NY, USA . 1 1 2 1 2 16:00 NAD(P)H OXIDASA ESTA INVOLUCRADA EN EL AUMENTO DE LA EXPRESION Y ACTIVIDAD DE HCAT-1 POR D-GLUCOSA EN ENDOTELIO FETAL HUMANO (NAPH oxidase is involved in the increased expresión and activity of hCAT-1 by D-glucose in human fetal endotelium) González, M . \ Sobrevia, L. . Laboratorio de Fisiología Celular y Molecular (CMPL), Departamento de Obstetricia y Ginecología, Facultad de Medicina, Escuela de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile . Patrocinante: Lopez-Lastra, M. 1 1 16:15 REGULACIÓN DEL METABOLISMO ENERGÉTICO CARDIACO POR INSULINA Y SU RELACIÓN CON FUSIÓN Y FISIÓN MITOCONDRIAL (Regulation of cardiac energetic metabolism by insulin and its relationship with mitochodrial fussion and fisión) Parra, V. , Morales, C. , Eisner, V. , Zorzano, A. , Lavandero, S. . Centro FONDAP CEMC, Universidad de Chile, Chile. \ Instituto de Investigación Biomédica, Barcelona, España. 1 1 1 2 1 2 16:30 INHIBICIÓN DE LA A C T M D A D ENZIMÁTICA DE CK1<* POR AUTOFOSFORILACIÓN EN SU EXTREMO C-TERMINAL. (The Inhibition of Enzymatic Activity of CK1« by Cterminal Autophosphorylation) Budini, M . \ Jacob , G. , Jedlicki, A. , Allende, J.E. . ICBM, Programa de Biología Celular y Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. . Patrocinante: Jacob, G.. 1 1 1 1 16:45 DEGRADACIÓN DEL RECEPTOR DE RYANODINA TIPO 2 EN CULTIVOS DE CARDIOMIOCITOS (Degradation of RyR2 in cultured cardiomyocytes) Pedrozo, Z. , Sánchez, G. , Fernández, C. , Donoso, P . , Lavandero, S . Programa de Biología Celular y Molecular, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile , Centro FONDAP CEMC, Universidad de Chile , Programa de Fitopatología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile , Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile . 1,2 2,3 1 12 2A 1 2 3 4 XXXI Reunión 17:15 19:00 Anual SIMPOSIO I Sala A REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE RNAs EN EUCARIONTES Coordinador: Marcelo López-Lastra 17:15 MAMMALIAN SELENOPROTEIN SYNTHESIS: TRANSLATIONAL RECODING OF UGA AS SELENOCYSTEINE (Mammalian selenoprotein synthesis: translational recoding of UGA as selenocysteine) Chavatte, L. . Centre de Génétique Moléculaire (CGM-UPR2167) Gif sur Yvette-France. 1 1 17:50 HCV IRES RELIES ON PRIMARY SEQUENCE AND STRUCTURE FOR DRIVING TRANSLATION INITIATION. (HCV IRES relies on primary sequence a n o structure for driving translation initiation.) Barría, M.l. , González, A. , Vera-Otarola, J. , León, U. , Vollrath, V. , Marsac, D.\ Pérez-Arce, T. , Monasterio, O. , Soza, A. , López-Lastra, M. . Laboratorio de Virología Molecular, Centro de Investigaciones Médicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Centro de Bioinformática, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. , Departamento de Gastroenterología, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. . 1 1 2 2 3 1 4 1 1 1 2 3 4 18:25 MOLECULAR MECHANISM OF HIV-2 GENOMIC RNA TRANSLATION INITIATION (Molecular Mechanism of HIV-2 Genomic RNA Translation Initiation) Locker N, J.L. , Sargueil, B. . CNRS, UMR 8015, Faculté de pharmacie, 4 avenue de l'observatoire 75270 Paris cedex 06 . 1 1 1 19:00-19:30 CAFÉ 19:30-20:45 CONFERENCIA INAUGURAL Sala A RNA CHAPERONES, THE AIDS VIRUS AND THE PEOPLE (RNA chaperones, the AIDS virus and the people) Darlix , J.\ Gabus-Darlix, cA LaboRetro, Unité de Virologie Humaine INSERM, IFR 128, ENS LYON, 46 Allée d'ltalie, 69364 Lyon, France . 1 Presenta: Xavier Jordana 20:45 CÓCTEL DE BIENVENIDA 21:30 CENA Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular MIÉRCOLES 24 DE SEPTIEMBRE 9:00-11:00 COMUNICACIONES LIBRES III Sala A ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE PROTEÍNAS Presidente: Victoria Guixé Secretaria: Elena Uribe 09:00 EL SECRETOMA DE Penicillium purpurogenum: ANALISIS POR ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL ACOPLADO A ESPECTROMETRIA DE MASAS (The secretóme from Penicillium purpurogenum: analysis by two-dimensional electrophoresis coupled to mass spectrometry) Navarrete, M. , Callegari, E. , Zhang, M. , Black, G. , Eyzaguirre, J . Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad Andrés Bello, Santiago. , Universidad de Dakota del Sur, Vermillion, SD, U.S.A. , Universidad de Northumbria, Newcastle, Inglaterra. . 1 2 3 3 1 2 3 09:15 MAPEO COMPARATIVO DE GRUPOS FUNCIONALES EN PROTEÍNAS DE FUSIÓN VIRAL CLASE II (Comparative functional group mapping of Class II viral fusión proteins) Lagos, O F . , Huenchuñir, P. , López-Lastra, M. , Pérez-Acle, T . . Centro de Bioinformática, Facultad de Ciencias Biológicas, PUC , Laboratorio de Química Médica, Facultad de Química, PUC , Laboratorio de Virología Molecular, Facultad de Medicina, PUC , Fundación Ciencia para la Vida . 1 2 3 1,4 1 2 3 4 09:30 ROL DE RESIDUOS BASICOS EN EL SENSADO DE PH EN LOS CANALES TASK2 Y TASK3 (Role of basic residues in pH sensing of Task2 and Task3 channels) Sepulveda, F. , González-Nilo, F. , Navarro, C. , Chipot, C. , Niemeyer, M.l. . CECS, Valdivia \ CBSM, Universidad de Talca , CNRS/UHP, Francia , CECS, Valdivia . 1 2 2 3 2 4 3 4 09:45 DIFERENCIAS DE LA UNIDAD SENSORA DEL PH EXTRACELULAR ENTRE LOS CANALES DE ENTRADA DE POTASIO PRESENTES EN LOS ESTOMAS. (Differences in extracellular pH sensor units between the stomatal inward potassium channels) González, W. , Morales, S . \ Alzate, J . , González-Nilo, F.D. , Dreyer, I. . Centro de Bioinformática y Simulación Molecular, Universidad de Talca , Universitat Potsdam, Instituí fur Biochemie und Biologie, Heisenberg-Gruppe Biophysik und Molekulare Pflanzenbiologie, Germany. 1 1 1 2 1 2 10:00 ESTUDIOS in silico E in vitro DEL DESPLEGAMIENTO TÉRMICO DE LA FOSFOFRUCTOQUINASA-2 DE Escherichia coli: IMPORTANCIA DE LA INTERFAZ MONÓMERO-MONÓMERO. (in silico and in vitro studies of the thermal unfolding of phosphofructokinase-2 from Escherichia coli: importance of the monomer-monomer interface.) Merino, F. , Baez, M. , Babul, J . . Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile . 1 1 1 1 XXXI Reunión 10:15 UNIÓN DE ESTUDIOS from E. coli. Guixé, V. . Facultad de 1 Anual METALES DIVALENTES EN FOSFOFRUCTOQUINASA-2 DE E. coli CINÉTICOS Y DE EPR. (Binding of divalent metáis in phosphofructokinase-2 Kinetic and EPR studies) Rivas-Pardo, J.A. , Wilson, C.A.M. , Caniuguir, A. , Laboratorio de bioquímica y biología molecular, departamento de Biología, Ciencias, Universidad de Chile . 1 1 1 1 10:30 ANÁLISIS DE LA FUNCIÓN DEL ASA FLEXIBLE DE LA INTEGRASA DE M-MuLV POR MUTAGENESIS. (Analysis of the function of the flexible loop of M-MuLV integrase by mutagenesis.) Acevedo, M.L. , León, O. . Laboratorio de Retrovirus, Programa de Virología, Facultad de Medicina, Universidad de Chile . 1 1 1 10:45 EFECTO DEL PH EN EL ESTADO DE OLIGOMERIZACIÓN DE INSULINA. (pH effects in oligomerization state of Insulin) Cifuentes-Huerta, J.J. , Martinez-Oyanedel, J . . Universidad de Concepción . 1 1 1 9:00-11:00 COMUNICACIONES LIBRES IV Sala 1 EXPRESIÓN GÉNICA Presidente: Loreto Holuigue Secretario: José Leonardo Gutiérrez 09:00 ANALISIS GENOMICO DE LA FAMILIA SDG Y SU EXPRESION EN EL DESARROLLO DEL FRUTO EN Vitis vinifera (Genomic analysis of SDG family and its expression during grape development in Vitis vinifera) Aquea, F.\ Vega, A. , Arce-Johnson, P. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología. Pontificia Universidad Católica de Chile . 1 1 09:15 ANÁLISIS FUNCIONAL DEL PROMOTOR DEL GEN GRXC9 DE ARABIDOPSIS (Functional Promoter Analysis of GRXC9 Gene In Arabidopsis) Herrera, A. , Blanco, F. , Holuigue, L. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología. Facultad Ciencias Biológicas. Pontificia Universidad Católica de Chile. . 1 1 1 1 09:30 REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DE NURR1 POR SUMOILACIÓN Y LA PROTEÍNA DJ-1 (Regulation of the transcriptional activity of Nurrl by sumoylation and the protein DJ-1) Arredondo, C . \ Pereira, L. , Fuenzalida, N. , Andrés, M.E. . Departamento de Biología Celular y Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile . 1 1 1 1 09:45 REGULACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN DE GENES DE DIFERENCIACIÓN MIOBLÁSTICA Y OSTEOBLÁSTICA POR ACETILACIÓN DE HISTONAS ((Transcriptional regulation of myoblastic and osteoblastic differentiation genes by histone acetylation).) Cruzat, F.\ Henriquez, B. , Sepulveda, H. , Oíate, J . , Montecino, M. . Anillo de Investigación de Estudios Avanzados en Señalización Celular y Regulación Génica, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile. . 1 1 1 1 1 Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular 10:00 HIPERMETILACION DEL PROMOTOR DE BRCA1 SE CORRELACIONA CON LA AUSENCIA DE SU EXPRESIÓN EN TUMORES DE CANCER DE MAMA HEREDITARIO. (Promoter hypermethylation of BRCA1 correlates with absence of expression in hereditary breast cáncer tumors) Tapia, f . \ Smalley, S. , Kohen, P. , Muñoz, A. , Solis, L. , Corvalan, A. , Faundez, P. , Devoto, L. , Camus, M. , Alvarez, M. , Can/alio, P. . Departamento Biología Celular y Molecular, Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Instituto Investigaciones Materno Infantil, Universidad de Chile. , Facultad Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Centro de Cáncer, Pontificia Universidad Católica de Chile. . 2 3 3 1 2 1 2 4 4 1 1 2 3 4 10:15 EFECTO DEL HIERRO EN LA EXPRESION DE LAS FERROXIDASAS PERTENECIENTES A LA FAMILIA DE LAS OXIDASAS MULTICOBRE (MCO) DEL HONGO LIGNINOLITICO PHANEROCHAETE CHRYSOSPORIUM. (Effect of iron on the expression of ferroxidases belonging to multicopper oxidase family (MCO) from the ligninolytic fungus Phanerochaete chrysosporium) Canessa, P. , Larrondo, L. , Vicuña, R. . Depto Genética Molecular y Microbiología, Fac. Ciencias Biológicas, P. Univ. Católica de Chile. . 1 1 1 1 10:30 ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN GÉNICA EN EMBRIONES BOVINOS CLONADOS TRANSFERIDOS A RECEPTORAS TEMPORALES (Gene expression in cloned embryos transferred to temporary recipients) Bertin Benavides, A. , Rodríguez, L. , Navarrete, F. , Castro, F. . Universidad de Concepción . Patrocinante: PuchiThiele, M. 1 1 1 1 1 10:45 EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE GENES DEL HONGO Penicillium purpurogenum CRECIDO EN GLUCOSA Y UNA FUENTE DE CARBONO NATURAL, COSETA DE REMOLACHA (Differential expression of genes of the fungus Penicillium purpurogenum grown in glucose and a natural carbón source, sugar beet pulp) Klagges, C. , Eyzaguirre, J. . Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad Andrés Bello, Santiago. . 1 1 1 CAFE 11:00-11:30 11:30-12:45 CONFERENCIA SEVERO OCHOA Sala A BUSQUEDA DE CLAVES ESENCIALES PARA LA ASIMILACIÓN DE NITRATO EN PLANTAS CON UN ALGA VERDE (Searching for essential keys in nitrate assimilation of plants with a green alga) Fernández, E.\ Galván, A. , Llamas, A. , Tejada-Jiménez, M. , Higuera, J.J. , González-Ballester, D. , de Montaigu, A. , Sanz-Luque, E. . Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias, Universidad de Córdoba. Campus de Rabanales, Edif. Severo Ochoa, 14071-Córdoba, Spain . 1 1 1 1 1 Presenta: Juan Oíate 1 1 1 XXXI Reunión 13:00- 14:30 ALMUERZO 14:30-16:30 PANELES SESIÓN I 16:30-18:15 Anual SIMPOSIO II Sala A TRANSDUCCIÓN DE SEÑALES: ACCIONES NO GENÓMICAS DE ESTEROIDES Coordinador: Juan Oíate 16:30 COMO LOS RECEPTORES ACOPLADOS A PROTEÍNAS G Y RECEPTORES ESTEROIDALES REGULAN LA MEIOSIS (How G Protein-Cóupled and Steroid Receptors Regúlate Meiosis) Hammes, S. . Department of Infernal Medicine, División of Endocrinology and Metabolism, University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX, USA. . 1 1 % 17:05 EL RECEPTOR CLÁSICO DE PROGESTERONA XPR SE ASOCIA A LA MEMBRANA PLASMÁTICA A TRAVÉS DE SU DOMINIO DE UNIÓN A LIGANDO E INTERACCIONA CON G0y (The Classic Xenopus laevis Progesterone Receptor Associates to the Plasma Membrane through its Ligand Binding Domain and Interacts with G£y) Oíate, J . , Martínez, S. , Montecino, M. , Hinrichs, M.V. . Departmento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile. . 1 1 1 1 1 17:40 VÍAS DE SEÑALIZACIÓN INTRACELULARES PARA RECEPTORES DE ANDRÓGENO: UN MODELO INTEGRADO PARA LA HIPERTROFIA CARDÍACA (Androgens and androgen receptor intracellular signaling pathways: An integrated model for cardiac hypertrophy) Estrada, M. . ICBM, FONDAP, Programa de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Chile. . 1 1 18:15-18:45 18:45-20:30 CAFÉ SIMPOSIO III Sala A QUORUM SENSING Y BIOFILMS Coordinador: Nicolás Guiliani 18:45 BIOPELÍCULAS Y QUORUM SENSING EN MICROORGANISMOS BIOMINEROS: REALIDAD Y DESAFÍOS (Biofilms and Quorum Sensing in Biomining Microorganisms: Realities and Challenges) Guiliani, N. . Unidad de Comunicación Bacteriana, Laboratorio de Microbiología y Biotecnología Molecular, Departamento de Biología, Instituto de Dinámica Celular y Biotecnología, Universidad de Chile. . 1 1 Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular 19 20 CONTROL DE BIOPELÍCULAS MICROBIANAS POR METABOLITOS SECUNDARIOS DE LA FLORA NATIVA CHILENA (Control de biopelículas microbianas por metabolitos secundarios de la flora nativa chilena) Urrutia B, H. . Laboratorio e Biopelículas y Microbiología Ambiental, Departamento de Microbiología/Centro de Biotecnología, Universidad de Concepción, Casilla 160-c, fono: 041 2204249, email: [email protected] . 1 19:55 SOCIOMICROBIOLOGY: A NEW TWIST ON QUORUM SENSING SIGNALS THAT COORDINATE GENE EXPRESSION IN BACTERIAL POPULATIONS (Sociomicrobiology: A new twist on quorum sensing signáis that coordínate gene expression in bacterial populations) Greenberg, E.P. . Department of Microbiology, University of Washington, Seattle, USA . 1 1 21:00 CENA JUEVES 25 DE SEPTIEMBRE COMUNICACIONES LIBRES V Sala A 9:00-11:00 BIOMEDICINA Presidente: María Antonieta Valenzuela Secretaria: Leda Guzmán 09:00 EXPLORANDO UN MÉTODO ALTERNATIVO DE DIAGNOSTICO DE CÁNCER VESICAL BASADO EN LA DETECCIÓN DIFERENCIAL DE RNAS MITOCONDRIALES NO CODIFICANTES (Exploring an alternative method of bladder cáncer diagnosis based in the differential expression of non coding mitocondrial RNAs) Rivas, A. , Landerer, E. ' ' , López , O , Burzio , V. - - , Burzio, L . , Villegas, j . - - - . Fundación Ciencia Para la Vida , Instituto Milenio (MIFAB) , Universidad Andrés Bello , Grupo BIOS . 1 1 2 3 2 , 3 1 2 3 1 2 3 4 1 1 2 2 3 4 3 4 09:15 LA EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE UNA NOVEDOSA FAMILIA DE RNAs MITOCONDRIALES NO CODIFICANTES PARA EL DIAGNÓSTICO DE CÁNCER PROSTÁTICO (The differential expression of a novel family of non coding mitochondrial RNAs for the diagnosis of prostate cáncer) Landerer, E. , Rivas, A. , Burzio, V . , Burzio, L. ' ' , Villegas, J . . Fundación Ciencia para la Vida , Instituto Milenio MIFAB , Facultad de Ciencias de la Salud, UNAB , Grupo BIOS . 1,2,3 1 2 34 1 2 3 4 1 1 3 1 2 3 2 4 09:30 ANALISIS GENETICO Y GENOMICO EN TUMORES DESMOIDES DE PACIENTES CON POLIPOSIS ADENOMATOSA FAMILIAR: COMPARACION CON EL CANCER COLORRECTAL (Genetic and genomic analysis in desmoid tumors from patients with familial adenomatous polyposis: a comparison with colorectal cáncer) XXXI Reunión 1,2 1 Anual 2 1,2 12 3 Alvarez, K. , Orellana, P. - , De la Fuente, M. , Wielandt, A . M . , Oyarzo, M. , Church, J. , López-Kostner, F. , Carvallo, P. . Unidad de Coloproctología, Clínica Las Condes , Departamento de Biología Celular y Molecular, Pontificia Universidad Católica de Chile , Departamento Anatomía Patológica, Clínica Alemana , Cleveland Clinic Foundation, Cleveland-Ohio, USA. . 4 1 2 1 2 3 4 09:45 ALTERACIONES GENÓMICAS EN TUMORES DE CÁNCER DE MAMA: ANÁLISIS POR MICROARREGLOS DE DNA (Genomic profile of breast cáncer tumors: an array-CGH analysis) Hurtado, C . \ Alvarez, C. , Solis, L. , Henriquez, I. , Corvalán, A. , Alvarez, M. , Rozenblum, E , Munroe, D , Carvallo, P. . Depto. Biología Celular y Molecular, Fac. Cs. Biológicas, P. Universidad Católica de Chile , Facultad de Medicina, P. Universidad Católica de Chile , Centro de Cáncer, Fac. Medicina, P. Universidad Católica de Chile , Lab. Mol. Technology, SAIC-Frederick, NCI-Frederick, USA . 1 3 4 2 4 2 2 1 1 2 3 4 10:00 CONCERTACIÓN ENTRE MUERTE CELULAR TIPO I Y II EN CÉLULAS TUMORALES AL INTERFERIR CON EL RNA MITOCONDRIAL NO-CODIFICANTE ANTISENTIDO (RNAmtnc) (Cross-talk between cell death type I and II of tumor cells by interference of antisense non-coding mitochondrial RNA (ncmtRNA)) Vidaurre, S . \ Burzio, V. , Villegas, J. , Burzio, L. . Fundación Ciencia Para La Vida, MIFAB, GRUPOBIOS, UNAB . 1 1 1 1 10:15 DETECCION PRECOZ DEL CANCER DE CUELLO DE UTERO ASOCIADO A LA INFECCIÓN DE HPV (early detection of cervix cáncer associated to the HPV infection) Villota, C . \ Villa, I. , Boccardo, E. , Gaete, F. , Burzio, L. . Fundación Ciencia para la Vida , Ludwig Institute for Cáncer Research , Hospital Luis Tizne . 2 2 3 1 1 2 3 10:30 LINFOCITOS INFECTADOS CON VIRUS HTLV-1 PRODUCEN CAMBIOS EN EL CITO ESQUELETO NEURÍTICO DE CÉLULAS PC12 (HTLV-I infected lymphocytes produce changes in the neuritic cytoskeleton of PC12 cells) Pando , M.E. , Kettlun, A.M. , Maldonado, H. , Ramírez, E. , Cartier, L. , Alberti, C. , Escudero, C. , Collados, L. , Valenzuela, M.A. . Depto Bioquímica y Biología Molecular, Facultad Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Universidad de Chile. , Programa de Virología, Facultad Medicina, Universidad de Chile. ISP , Depto Ciencias Neurológcias, Facultad Medicina , Depto Fisiología, Fac Ciencias Biológicas, PUC . 1 2 3 1 1 1 4 1 1 1 2 3 4 10:45 EL VIRUS RESPIRATORIO SINCICIAL INHIBE LA ACTIVACION DE LINFOCITOS T MEDIANTE INTERFERENCIA DE LA SINAPSIS INMUNOLOGICA CON CELULAS DENDRITICAS (Respiratory Syncytial Virus Impairs T Cell Activation By Preventing Synapse Assembly With Dendritic Cells) González , P.A. , Prado, C E . , Leiva, E.D. , Carreño, L.J. , Bueno, S.M. , Riedel, C.A. , Kalergis, A . M . . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Departamento de Ciencias. Biológicas, Universidad Andrés Bello , Departamento de Reumatología, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile . 1 1 1 3 1 2 1 1 3 2 Sociedad 9:00-11:00 de Bioquímica y Biología Molecular - COMUNICACIONES LIBRES VI Sala 1 BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR DE PLANTAS Presidente: Patricio Arce Secretario: José Casaretto 09:00 ANÁLISIS ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE TRANSPORTADORES DE BORO EN FRUTALES (Structural and functional analysis of boron transporter in fruit crops) Cañón, P. , Aquea, F. , Rodríguez, A. , Bisquertt, A. , Arce-Johnson, P. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología. Pontificia Universidad Católica de Chile . 1 1 1 1 1 1 09.15 CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DEL GEN VvZIP INVOLUCRADO EN TRANSPORTE DE ZINC EN BAYAS DE Vitis vinifera CV. CARMENERE. (Structural and functional characterization of the gen VvZIP involved in zinc transport in grapes of Vitis vinifera cv. Carmenere) Gainza, F.l. , Pérez, R. , González, E. , Ruiz-Lara, S. . Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca . 1 1 1 1 1 09:30 UNA MUTANTE EN LA UGGT DE ARABIDOPSIS THALIANA, UNA ENZIMA CLAVE EN CONTROL DE CALIDAD EN RETÍCULO ENDOPLASMATICO, MUESTRA ALTERACIONES MORFOLÓGICAS. (An Arabidopsis thaliana mutant in the UGGT, a key enzyme in quality control at the endoplasmic reticulum, shows morphological alterations.) Tapia, R.\ Reyes, F. , Orellana, A. . Universidad Nacional Andrés Bello . 1 1 1 09:45 EFECTO DEL ETILENO EN LA FORMACIÓN DE AROMAS Y ALCOHOL ACIL TRANSFERASA EN PERAS PACKHAM^S TRIUMPH (Effect of ethylene on aroma formation and alcohol acyl transferase in Packham s Triumph pears) Fuentes, L. , Valdenegro, M. , Herrera, R. , Moya-León, M. . Laboratorio de Fisiología Vegetal, Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca. \ 1 1 1 1 10.00 DEFICIENCIA EN LA FUNCIÓN DEL COMPLEJO II MITOCONDRIAL PRODUCE UN AUMENTO DE LA ACTIVIDAD FOTOSINTETICA EN Arabidopsis thaliana (Impairment in mitochondrial complex II produces an increase of photosynthetic activity in Arabidopsis thaliana) Fuentes, D. , Nunes-Nesi, A. , Araujo, W. , Gómez, I. , Fernie, A. , Jordana, X. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile , Max Planck Instituí fur Molekulare Pflanzenphysiologie, Alemania . 1,2 2 2 1 2 1 1 2 10:15 EL GEN LOCHI CODIFICA PARA UNA ENDOQUITINASA DE CLASE III QUE ES EXPRESADO ESPECÍFICAMENTE EN RAÍCES Y NODULOS DE LOTUS SP. E INDUCIDO POR EFECTO DEL DÉFICIT HÍDRICO. (LoChi gen coding for Class III endochitinase that is speeifically expressed in roots and nodules of Lotus sp. and is induced by effect of water déficit.) Tapia, G . \ Acuña, H. . Instituto de Investigaciones Agropecuarias, INIA-Quilamapu . Patrocinante: Ruiz-Lara, S.. 1 1 1 XXXI Reunión Anual 10:30 ANALISIS FUNCIONAL DE UNA PROTEINA TIPO LECTINA (LLP) INDUCIDA POR ACIDO SALICILICO EN LA RESPUESTA DE DEFENSA A ESTRES EN ARABIDOPSIS (Functional analysis of a SA-inducible lectin like protein (LLP) in the stress defense response in Arabidopsis) Armijo, G. , Salinas, P. , Leiva, D. , Tapia, J. , León, L. , Holuigue, L. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile . 1 1 1 1 1 1 1 10:45 ANALISIS DE EXPRESIÓN GÉNICA GLOBAL EN RESPUESTA A LA INFECCIÓN VIRAL DURANTE EL PROCESO DE MADURACIÓN EN Vitis vinifera (Analysis of gene expression in response to viral infection through ripening in grape berries) Vega, A. , Medina, C. , Arce-Johnson, P. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología. Facultad de Ciencias Biológicas. Pontificia Universidad Católica de Chile. . 1 1 1 1 11:00-11:30 11:30-12:45 CAFÉ CONFERENCIA PABMB Sala A FORCE-CLAMP SPECTROSCOPY OF SINGLE PROTEINS (Force-clamp spectroscopy of single proteins) Fernández, J.M. . Columbia University, New York . 1 Presenta: José Martínez-Oyanedel 13:00- 14:30 ALMUERZO 14:30-16:30 PANELES SESIÓN II 16:30-18:15 SIMPOSIO IV Sala A INFERENCIA DE CONOCIMIENTO Y MINERÍA DE DATOS MEDIANTE BIOINFORMÁTICA: EJEMPLOS DE DESARROLLOS Y APLICACIONES Coordinador: Francisco Meló 16:30 POTENCIALES ESTADISTICOS: UNA PODEROSA HERRAMIENTA BIOINFORMATICA QUE PERMITE OBTENER BENEFICIOS DE LO ABUNDANTE, AL ELIMINAR LO REDUNDANTE Y EXTRAER LO RELEVANTE (Statistical Potentials: Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular A Powerful Bioinformatic Tool That Generates Useful Information From The Abundant, By Eliminating The Redundant And Extracting The Relevant) Meló, F. , Slater, A.W. , Norambuena, T. , Martínez, P. , Pérez, N. , Castellanos, J . , Panjkovich, A. , Ferrada, E. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. . 1 1 1 1 1 1 1 1 17:05 MARCOS DE LECTURA ABIERTOS ALTERNATIVOS: UNA PESADILLA BIOINFORMATICA PERO UNA POTENCIAL MINA DE ORO PARA LA EVOLUCION DE GENES (Altérnate Open Reading Frames: A Bioinformatics Nightmare But A Potential Goldmine For Gene Evolution) Holmes, D.S. , Rivera, G. , Ossandón, F. . Center for Bioinformatics and Genome Biology (CBGB), Fundación Ciencia para la Vida (www.cienciavida.cl) and Depto. de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Andrés Bello. . 1 1 1 1 17:40 IDENTIFICACION Y LOCALIZACION DE LOS COMPONENTES CLAVES DEL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS DE EUCARIOTAS EN BACTERIAS COMPARTIMENTALIZADAS (Identification And Localization Of Key Components Of The Eukaryotic Endomembrane System In Compartmentalized Bacteria) Devos, D.\ Franke, J. , Chait, B. , Sali, A. , Rout, M. . EMBL, Meyerhofstrasse 1, D-69117 Heidelberg, Germany. , Laboratory of Cellular and Structural Biology, The Rockefeller University, 1230 York Avenue, New York, NY 10021-6399, USA. , Departments of Biopharmaceutical Sciences and Pharmaceutical Chemistry, and California Institute for Quantitative Biomedical Research, UCSF, San Francisco, CA 94143-2552, USA. . 2 2 3 2 1 2 3 CAFE 18:15-18:45 18:45-20:00 CONFERENCIA OSVALDO CORI Sala A EL ACIDO SALICILICO EN LA RESPUESTA DE DEFENSA A ESTRES EN ARABIDOPSIS (Salicylic acid in the stress defense response in Arabidopsis) Blanco, F. , Laporte, D. , Armijo, G. , Herrera, A. , Merabachvili, G. , Holuigue, L. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile . 1 1 1 1 1 1 1 Presenta: Luz María Pérez XXXI Reunión 20:00-20:30 Anual CONFERENCIA CIENCIA DE FRONTERA (ACADEMIA DE CIENCIAS) Sala A MAS ALLÁ DEL PLANETA TIERRA Patricio Rojo, Universidad de Chile. Presenta: Danilo González-Nilo 21:30 CENA Y FIESTA VIERNES 26 DE SEPTIEMBRE 10:00-11:00 TRABAJOS DE INCORPORACIÓN Sala A Presidente: Jaime Eyzaguirre Secretario: Enrique González 10:00 ANÁLISIS GENÓMICO FUNCIONAL DEL DESARROLLO DEL POLEN EN Arabidopsis thaliana (Functional genomic analysis of pollen development in Arabidopsis thaliana) León, G. . Centro de Biotecnología Vegetal, Universidad Andrés Bello . Patrocinante: Jordana, X.. 1 1 10:30 IDENTIDAD DE ÓRGANOS FLORALES EN Vitis vinifera: CARACTERIZACIÓN DE UNA RED DE GENES INVOLUCRADOS (Floral organ identity in V. vinifera: Cha ráete rization of a network of genes involved) Poupin, M.J. , Leiva-Ampuero, A. , Timmermann, T. , Dauelsberg, P. , Matus, J.T. , Arce-Johnson, P. . Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Ciencias Biológicas. Depto. Genética Molecular y Microbiología. , Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Agronomía e Ingenería Forestal. Depto. Fruticultura y Enología. . Patrocinante: Arce-Johnson, P. 1 1 2 2 1 1 2 11:00-11:30 11:30-12:30 CAFÉ MEDALLA HERMANN NIEMEYER PREMIOS FERMELO-SBBM 1 Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular Conferencias XXXI Reunión CONFERENCIA SEVERO OCHOA CONFERENCIA INAUGURAL RNA CHAPERONES, Darilx THE AIDS 1 , J . L , Gabus-Dariix, VIRUS 1 C. . AND LaboRetro, THE Unité PEOPLE. de Virologie H u m a i n e I N S E R M , IFR 1 2 8 , E N S L Y O N , 4 6 a l l é e d l t a l i e , 6 9 3 6 4 L y o n , BÚSQUEDA D E C L A V E S E S E N C I A L E S PARA LA ASIMILACIÓN D E NITRATO EN essential PLANTAS keys in CON nitrate UN ALGA assimilation 1 of 1 VERDE plants (Searching with a green 1 for alga) 1 Fernández, E . , Galván, A. , Llamas, A. , Tejada-Jiménez, M. , Higuera, 1 France . Recent Anual intense biochemical and structural studies on the basic 1 J.J. , 1 González-Ballester, de 1 C i e n c i a s , U n i v e r s i d a d d e C ó r d o b a . C a m p u s d e R a b a n a l e s , Edif. S e v e r o Ochoa, 14071-Córdoba, Spain . acid N u m e r o s o s o r g a n i s m o s , e s p e c i a l m e n t e las plantas de c o s e c h a , a s i m i l a n crowding and chaperoning nitrato c a u s a t i v e a g e n t of A I D S , t h e role o f l U P ' s a n d R N A evolucionado utilizando como la will b e i l l u s t r a t e d . R e s u l t s will b e p r e s e n t e d t o ¡Ilústrate h o w e s s e n t i a l una viral factors s u c h a s t h e T a t t r a n s - a c t i v a t o r estructural m e n t e and the structural NC Facultad de 1 properties ( R N A - C H A P E R O N E S ) . B a s e d on investigations on HIV, the CHAPERONES Molecular, E. . i n t r i n s i c a l l y u n s t r u c t u r e d ( I U P ) a n d s e c o n d l y t h a t a c l a s s of n u c l e i c potent Biología Sanz-Luque, c o n c e p t s in b i o l o g y , f i r s t l y t h e f a c t t h a t a l a r g e n u m b e r of p r o t e i n s a r e have y A. , Departamento proteins Bioquímica 1 Montaigu, m e c h a n i s m s of life h a v e l e d t o t h e e m e r g e n c e of t w o e n t i r e l y n o v e l binding de D. , asimilación forma nitrogenada preferente. Así éstos una dosis específica de genes que eficiente. sencilla. La ruta El de interés asimilación de la de han aseguran nitrato investigación es en los p r o t e i n s , t h a t a r e b o t h I U P ? s a n d R N A C H A P E R O N E S , f u n c t i o n in m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s d e e s t e p r o c e s o h a c a m b i a d o d e s d e los p a s o s vitro and control virus de r e d u c c i ó n , de nitrato a a m o n i o y hasta su incorporación a e s q u e l e t o s replication from entry to particle production, dissemination and variability. T h u s targeting Tat and N C by specific c a r b o n a d o s , a los d e t r a n s p o r t e . molecules p a s a d o a los m e c a n i s m o s r e g u l a d o r e s d e la r u t a , p o s i t i v o p o r n i t r a t o y should ensure a sustained high level inhibition of Más recientemente este interés ha H l V r e p l i c a t i ó n in i n f e c t e d p e r s o n s . T w o s u c h r n o l e c u l e s h a v e r e c e n t l y negativo p o r a m o n i o y sus derivados. Al ser b e e n d i s c o v e r e d that t a r g e t N C in i n f e c t e d cells in a highly specific unicelular, m a n n e r w i t h a n I C 5 0 of 0 . 2 n M . B a s e d o n t h e s e r e s u l t s , w e s h o u l d secuenciado, y filogenéticamente emparentado con plantas, estas tareas consider developing similar molecules targeting d e i d e n t i f i c a c i ó n d e e l e m e n t o s e s e n c i a l e s p a r a la a s i m i l a c i ó n d e n i t r a t o RNA-CHAPERONES haploide, de genética C h l a m y d o m o n a s u n alga relativamente fácil y genomio essential for t h e replication of h u m a n p a t h o g e n i c v i r u s e s a n d a g e n t s , se v e n f a c i l i t a d a s . D e e s t a f o r m a , n u e s t r o g r u p o ha p o d i d o i d e n t i f i c a r l o s s u c h as H C V , H B V , W N V a n d the P r i o n . W o r k s u p p o r t e d by I N S E R M , transportadores Europe, A N R S and Sidact.ion p l a s m á t i c a c o m o s i s t e m a s d e u n o y d o s c o m p o n e n t e s , el t r a n s p o r t a d o r de n i t r a t o y nitrito de alta afinidad d e la membrana d e n i t r i t o al c l o r o p l a s t o , y r e c i e n t e m e n t e u n t r a n s p o r t a d o r d e m o l i b d a t o , micronutriente esencial de e s t a ruta. A s i m i s m o c o n objeto de d e t e r m i n a r los factores transcripcionales reguladores, hemos generado una c o l e c c i ó n d e 2 2 0 0 0 m u t a n t e s i n s e r c i o n a l e s q u e c u b r e n la m a y o r p a r t e del genoma y que están afectados en la s e ñ a l i z a c i ó n por nitrato amonio. Así h e m o s identificado a NIT2 c o m o factor transenpcional media la s e ñ a l d e n i t r a t o y d i v e r s o s negativa compleja. Financiado elementos MEC para una (BFU2005-07521) y o que regulación Junta de Andalucía (CVI-1609). CONFERENCIA OSVALDO CORI CONFERENCIA PABMB FORCE-CLAMP SPECTROSCOPY OF SINGLE 1 PROTEINS. EL ACIDO SALIClLICO EN LA R E S P U E S T A DE D E F E N S A A ESTRÉS EN ARABIDOPSIS 1 F e r n a n d e z , J . M . . Columbia University, N e w York . Arabidopsis) forces affect the dynamics and chemistry of , 1 F. , acid in t h e s t r e s s d e f e n s e r e s p o n s e 1 Laporte, 1 D. , Armijo, G.\ Herrera, in 1 A. , 1 how Merabachvili, G . , H o l u i g u e , L . . D e p a r t a m e n t o de Genética Molecular y proteins. M i c r o b i o l o g í a , F a c u l t a d d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a W e have developed single m o l e c u l e A F M t e c h n i q u e s to study mechanical (Salicylic Blanco Using molecular biological techniques, w e engineer tándem modular 1 de Chile . p r o t e i n s t h a t a r e m a d e o f i d e n t i c a l r e p e a t s o f a p r o t e i n of i n t e r e s t . El á c i d o These genes de respuesta a estrés biótico (patógenos) y abiótico en plantas. polyproteins act as handles for a t o m i c forcé microscopes, without the n e e d for linkers o r special a t t a c h m e n t c h e m i s t r y . When En salicílico ( S A ) es nuestro grupo una hormona hemos identificado c l a v e p a r a la a c t i v a c i ó n un grupo de 217 de genes de el a n á l i s i s d e l t r a n s c r i p t o m a de s u c h polyproteins are e x t e n d e d by a n A F M , t h e i r forcé properties are respuesta temprana unique mechanical fingerphnts that u n a m b i g u o u s l y distinguish them Arabidopsis from single c o a c t i v a d o r m a e s t r o d e la v í a d e l S A ( N P R 1 ) , n o s p e r m i t i ó i d e n t i f i c a r d o s the more frequent non-specific events that plague en a SA, respuesta mediante a SA. El uso de una mutante en un molecule studies. W e combine polyprotein engineering together with vías de activación t e m p r a n a de g e n e s p o r SA, una dependiente y otra a c t i v e f o r c e c l a m p A F M t e c h n i q u e s . W t h t h i s a p p r o a c h , t h e l e n g t h of independiente de N P R 1 . Estos dos grupos de genes se diferencian en a n e x t e n d i n g p o l y p r o t e i n is m e a s u r e d w h i l e t h e p u l l i n g f o r c é is a c t i v e l y s u s c a t e g o r í a s f u n c i o n a l e s , e n la c i n é t i c a d e a c t i v a c i ó n p o r S A y e n la kept presencia constant technique poweríul by combined approach force-dependeney reactions. negative to of From the transition state mechanisms. with feedback polyprotein study proteins. protein folding, data will help The engineering We have unfolding force-dependence, of t h e s e r e a c t i o n s Our control. we force-clamp has become investigated and extract of the the chemical fe a t u r e s that reveal underlying guide a of the molecular development of new de promotores. evaluando defensa a elementos Mediante regulatorios análisis de sobrerepresentados genómica funcional en sus estamos la f u n c i ó n d e u n p a r d e e s t o s g e n e s e n la r e s p u e s t a estrés. Para esto se obtuvieron y caracterizaron de líneas m u t a n t e s y s o b r e - e x p r e s o r a s d e l o s g e n e s s e l e c c i o n a d o s y s e e v a l ú a el fenotipo d e resistencia o tolerancia a estrés en estas líneas. En paralelo e s t u d i a m o s el m e c a n i s m o d e a c t i v a c i ó n t r a n s c r i p c i o n a l d e e s t o s g e n e s theories on á r e a s s u c h as t h e statistical d y n a m i c s of a folding p o l y m e r por and transgénicas de A r a b i d o p s i s . E s t a s estrategias nos permitirán identificar ab-initio studies stretching forcé. of a c h e m i c a l References: 1- reaction while Fernandez, J.M. placed and under a Li, H. B. SA, mediante análisis funcionales de sus promotores e n líneas g e n e s c l a v e s p a r a la p r o t e c c i ó n al e s t r é s c e l u l a r , a s í c o m o d e t e r m i n a r el F o r c e - c l a m p s p e c t r o s c o p y m o n i t o r s t h e f o l d i n g t r a j e c t o r y of a s i n g l e mecanismo protein (2004), S c i e n c e , 3 0 3 : 1 6 7 4 - 1 6 7 8 2 - W i i t a et al, (2007) Probing F O N D E C Y T - C O N I C Y T (1060494) y Núcleo Milenio Genómica Funcional t h e c h e m i s t r y of t h i o r e d o x i n c a t a l y s i s w i t h f o r c é . N a t u r e , 4 5 0 : 1 2 4 - 7 . de Plantas ( P 0 6 - 0 0 9 - F ) . de su activación por SA. Financiado por Sociedad de Bioquímica y Biología CONFERENCIA CIENCIA DE FRONTERA (ACADEMIA DE CIENCIAS) M A S A L L Á D E L P L A N E T A T I E R R A (Mas Alia del Planeta Tierra) Rojo, P. 1 1 U n i v e r s i d a d de C h i l e . N u e s t r o p l a n e t a T i e r r a es el ú n i c o c u e r p o a s t r o n ó m i c o e n el q u e e s t a m o s s e g u r o s q u e la v i d a s e d e s a r r o l l a y p r o s p e r a en a b u n d a n c i a . L a m a y o r í a de los otros c u e r p o s del S i s t e m a S o l a r p r e s e n t a n , en forma evidente, su inhabilidad de m a n t e n e r o desarrollar vida. Sin e m b a r g o , nuevos descubrimientos sugieren que en ciertos lugares de estos mundos, aparentemente i n h ó s p i t o s , s e p o d r í a n t e n e r las c o n d i c i o n e s b á s i c a s en las q u e algunos organismos podrían prosperar. A d e m á s d e r e s u m i r los d e s c u b r i m i e n t o s m á s r e l e v a n t e s e n el S i s t e m a S o l a r , e n e s t a c h a r l a t a m b i é n h a b l a r é de los d e s c u b r i m i e n t o s m á s i m p o r t a n t e s en el á r e a d e planetas extrasolares. E s t a á r e a se e s t a b l e c i ó t a n solo a m e d i a d o s d e los n o v e n t a , c o n el d e s c u b r i m i e n t o d e l p r i m e r planeta e n t o m o a una estrella m a d u r a . D e s d e e n t o n c e s , esta área h a tenido u n c r e c i m i e n t o explosivo y m u c h o s de sus i n e s p e r a d o s descubrimientos lograron d e r r u m b a r viejas teorías e hicieron surgir n u e v a s ideas. Pero quizá m á s importante, nos ha permitido tener, h o y en día, u n a mejor idea de qué esperar de otros m u n d o s . Molecular XXXI Reunión Anual Simposios Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular SIMPOSIO I: REGULACION DE LA EXPRESION DE RNAs EN EUCARIONTES MAMMALIAN SELENOPROTEIN SYNTHESIS: T R A N S LATI O NAL R E C O D I N G O F U G A A S S E L E N O C Y S T E I N E ( M a m m a l i a n s e l e n o p r o t e i n s y n t h e s i s : t r a n s l a t i o n a l r e c o d i n g of U G A a s selenocysteine) C h a v a t t e , L . . Centre de G é n é t i q u e Moléculaire ( C G M - U P R 2 1 6 7 ) Gif s u r Y v e t t e - F r a n c e . . 1 1 S e l e n i u m is a n e s s e n t i a l t r a c e e l e m e n t , w h i c h is c o - t r a n s l a t i o n a l l y incorporated into t w e n t y five sel eno p r o t e i n s in human as selenocysteine (Sec), the 21st amino acid. Selenoproteins synthesis follows a remarkable mechanism which involves t r a n s l a t i o n a l r e c o d i n g of a U G A c o d o n , n o r m a l l y u s e d a s a s t o p s i g n a l , i n t o a s e l e n o c y s t e i n e i n s e r t i o n s i g n a l . In e u k a r y o t e s , a s p e c i f i c s e c o n d a r y s t r u c t u r e in t h e 3 ' U T R o f t h e s e l e n o p r o t e i n m R N A ( n a m e d S E C I S ) is r e q u i r e d t o d i r e c t f a i t h f u l r e c o d i n g . Several c o m p o n e n t s of the eukaryotic S e c insertion machineny h a v e b e e n c h a r a c t e n z e d s o far: a S e c - t R N A S e c , a n e l o n g a t i o n factor EF-Sec, and two S E C I S binding proteins ( S B P 2 and r i b o s o m a l p r o t e i n L 3 0 ) . In o u r m o d e l , S B P 2 a n d L 3 0 p e r f o r m d i f f e r e n t t u n c t i o n s in t h e U G A r e c o d i n g m e c h a n i s m , w i t h t h e S E C I S acting as a molecular switch c h a r a c t e n z e d by a conformational t r a n s i t i o n u p o n p r o t e i n b i n d i n g . O u r d a t a i n d í c a t e t h a t t h e n a t u r e of t h e S E C I S acts at the translational level to m o d u l a t e s e l e n o p r o t e i n e x p r e s s i o n , w h i c h is h i g h l y t u n e d in m a m m a l i a n c e l l s . T o d e f i n e t h e p r e c i s e d e t e r m i n a n t s of t h e S E C I S e l e m e n t on U G A ' S e c r e c o d i n g a c t i v i t y , w e h a v e u s e d a l u c i f e r a s e - b a s e d r e p ó r t e r g e n e s y s t e m in t r a n s f e c t e d c e l l s a n d in i n v i t r o t r a n s l a t i o n . U s i n g t h i s s y s t e m , w e h a v e s h o w e d that h u m a n S E C I S can be classified into w e a k , m o d é r a t e a n d s t r o n g e l e m e n t s for S e c i n s e r t i o n efficiency. W i t h i n the SECIS, w e have identified the structural determinants r e s p o n s i b l e for positive a n d n e g a t i v e r e g u l a t i o n of U G A r e c o d i n g e f f i c i e n c y i n c e l l s a n d in v i t r o . F u n c t i o n a l i m p l i c a t i o n s of t h e s e s t r u c t u r a l d e t e r m i n a n t s will b e a n a l y s e d a n d d i s c u s s . e d . MOLECULAR MECHANISM OF HIV^2 GENOMIC RNA T R A N S L A T I O N INITIATION (Molecular M e c h a n i s m of HIV-2 G e n o m i c R N A Translation Initiation) L o c k e r N, J.L. , S a r g u e i l , B . . CNRS, UMR 8015, Faculté de pharmacie, 4 avenue de l'observatoire 75270 Paris cedex 0 6 . 1 1 1 T r a n s l a t i o n o f t h e H I V - 2 g e n o m i c R N A r e s u l t s i n t h e s y n t h e s i s of a l a r g e p o l y p r o t e i n t h a t is c l e a v e d t o y i e l d s t r u c t u r a l p r o t e i n s ( G a g ) a n d e n z y m e s ( P o l ) . A n a l y s i s of H I V - 2 i m m a t u r e v i n o n p a r t i ó l e s g e n e r a t e d in p r o t e a s e inhibitors t r e a t e d cells r e v e a l e d t h e p r e s e n c e of three isoforms of the G a g polyprotein: the e x p e c t e d G a g p57 and t w o s h o r t e r i s o f o r m s of 5 0 a n d 4 4 k D a a p p a r e n t m o l e c u l a r w e i g h t . W e h a v e p r e v i o u s l y s h o w n that t h e s e t h r e e G a g i s o f o r m s are p r o d u c e d by an internal nbosomal e n t r y site (IRES)-driven m e c h a n i s m . T h e H I V - 2 I R E S e l e m e n t is l o c a t e d w i t h i n t h e G a g c o d i n g r e g i ó n a n d d o w n s t r e a m t h e first A U G . M o r e o v e r , it d i r e c t s t h e t r a n s l a t i o n of t h e t h r e e G a g i s o f o r m s w i t h no n e e d for u p s t r e a m 5' untranslated R N A s e q u e n c e a n d this I R E S e l e m e n t c a n recruit three independent initiation c o m p l e x e s onto the gag mRNA. T h e molecular mechanism by which such a peculiar initiation process occurs remains elusive. D u r i n g internal ribosome e n t r y , i n t e r a c t i o n b e t w e e n t h e I R E S a n d t h e r i b o s o m e is m e d i a t e d b y eukaryotic initiation factors ( e l F ) that c a n be assisted b y I R E S transacting factors. To try and understand the molecular m e c h a n i s m s i n v o l v e d in i n t e r n a l e n t r y o f t h e r i b o s o m e o n t o G a g g e n o m i c R N A w e m o d e l l e d t h e s e c o n d a r y s t r u c t u r e of t h e c o d i n g r e g i ó n . T o d e f i n e t h e r o l e of i n d i v i d u a l s e c o n d a r y structure elements, we introduced mutations disrupting the structure of the o p e n reading frame. The mechanistic and physiological significance o f t h o s e r e s u l t s will b e d i s c u s . s e d H C V I R E S R E L I E S ON P R I M A R Y S E Q U E N C E AND S T R U C T U R E F O R D R I V I N G T R A N S L A T I O N INITIATION. ( H C V I R E S relies on p r i m a r y s e q u e n c e a n d structure for driving translation initiation.) Barría, M I . , González, A . , V e r a - O t a r o l a , J . , L e ó n , U. , Vollrath, V. , Marsac, D . \ Pérez-Arce, T. , Monasteno, O. , Soza, A. , L ó p e z - L a s t r a , M. . L a b o r a t o r i o d e V i r o l o g í a M o l e c u l a r , C e n t r o d e Investigaciones M é d i c a s , Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de Chile. , Centro de Bioinformática, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. , Departamento de Gastroenterología, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. . 1 2 1 1 2 1 3 4 1 1 2 3 4 T h e H C V i n t e r n a l r i b o s o m e e n t r y s i t e ( I R E S ) s p a n s a r e g i ó n of a p p r o x i m a t e l y 3 4 0 n t t h a t e n c o m p a s s e s m o s t of t h e 5 ? u n t r a n s l a t e d r e g i ó n ( U T R ) of t h e v i r a l m R N A a n d t h e first 2 4 - 4 0 nt of t h e c o d i n g r e g i ó n . T o i n v e s t í g a t e t h e e f f e c t s of a l t e r a t i o n s t o t h e p r i m a r y sequence of the 5 7 U T R on IRES activity naturally occurring m u t a t i o n s w e r e identified a n d their effect on translation initiation w a s e v a l ú a t e in t h e c o n t é x t of R L u c / F L u c b i c i s t r o n i c R N A s . R e s u l t s s h o w that d e p e n d i n g on their location within the R N A structure, m u t a t i o n s c a u s e a r a n g e of e f f e c t s o n I R E S a c t i v i t y . H o w e v e r , mutations within the IRES llld s u b d o m a i n totally abolish H C V IRES a c t i v i t y . In a n a t t e m p t t o e x p l a i n t h e s e o b s e r v a t i o n s t h e d y n a m i c b e h a v i o r of I R E S l l l d s u b d o m a i n w a s a n a l y z e d b y m e a n s o f a 6 - n s m o l e c u l a r d y n a m i c s i m u l a t i o n ( M D S ) . S t r i k i n g l y , a n d d e s p i t e of t h e l o s s of f u n c t i o n M D S a n a l y s i s p r e d i c t e d t h a t t h e G 2 6 6 A / G 2 6 8 U m u t a n t e x h i b i t s s t r u c t u r a l c o n s e r v a t i o n w i t h r e s p e c t to t h e w t - I R E S . V a l i d a t i o n of t h i s p r e d i c t i o n w a s obtained by analyzing the secondary structure of the isolated H C V llld R N A s b y circular d i c h r o i s m ( C D ) s p e c t r o s c o p y i n p r e s e n c e o r a b s e n c e of M g 2 + i o n s . R e s u l t s s u g g e s t that t h e p r i m a r y s e q u e n c e of s u b d o m a i n llld plays a r o l e , a n d is r e q u i r e d , f o r I R E S - m e d i a t e d t r a n s l a t i o n i n i t i a t i o n . T o g e t h e r results confirm the stringent structure/function relationship exhibited by the H C V IRES, but also suggest that the primary s e q u e n c e o f s u b d o m a i n l l l d p l a y s a r o l e , a n d ¡s r e q u i r e d , for I R E S - m e d i a t e d translation initiation. XXXI Reunión Anual SIMPOSIO II: TRANSDUCCIÓN DE SEÑALES: ACCIONES NO GENÓMICAS DE ESTEROIDES COMO L O S R E C E P T O R E S A C O P L A D O S A PROTEÍNAS G Y R E C E P T O R E S E S T E R O I D A L E S R E G U L A N L A M E I O S I S (How G Protein-Coupled and Steroid Receptors Regúlate Meiosis) Hammes, S. Department of I n t e r n a l M e d i c i n e , D i v i s i ó n of E n d o c r i n o l o g y a n d M e t a b o l i s m , U n i v e r s i t y of T e x a s S o u t h w e s t e r n Medical Center, Dallas, TX. U S A . . 1 1 Classical steroid receptors medíate m a n y transcription-independent ( n o n g e n o m i c ) s t e r o i d r e s p o n s e s in v i t r o . A m a j o r p r o b l e m in t h i s f i e l d h a s b e e n t o j u s t i f y t h e b i o l o g i c a l s i g n i f i c a n c e of t h e s e n o n g e n o m i c p r o c e s s e s , s i n c e d i s s e c t i n g t h e r e l a t i v e i m p o r t a n c e of g e n o m i c v e r s u s n o n g e n o m i c s t e r o i d r e c e p t o r - m e d i a t e d s i g n a l i n g is difficult. T o c i r c u m v e n t t h e s e c o n c e r n s , our laboratory studies the biologically important and accepted transcription-independent p r o c e s s of s t e r o i d - i n d u c e d m a t u r a t i o n , o r m e i o t i c resumption. U s i n g X e n o p u s l a e v i s o o c y t e s , w e h a v e s h o w n t h a t : 1) X e n o p u s o o c y t e s a r e h e l d in m e i o t i c a r r e s t b y c o n s t i t u t i v e G « s a n d G0y s i g n a l i n g t h a t r a i s e s i n t r a c e l l u l a r c A M P l e v é i s , 2) t h i s c o n s t i t u t i v e G p r o t e i n s i g n a l i n g is r e g u l a t e d in p a i t by t h e G p r o t e i n - c o u p l e d r e c e p t o r , G P R 3 , 3) a n d r o g e n s a r e c r i t i c a l i n - v i v o r e g u l a t o r s of oocyte maturation, signaling via classical a n d r o g e n receptors; 4) androgens and progestins rapidly suppress the constitutive i n h i b i t o r y G p r o t e i n s i g n a l i n g in a R e l é a s e o f I n h i b i t i o n f a s h i o n to p r o m o t e m e i o t i c p r o g r e s s i o n ; a n d 5) t h e s c a f f o l d m o l e c u l e t e r m e d M N A R ( M o d u l a t o r of N o n g e n o m i c A c t i o n s of s t e r o i d R e c e p t o r s ) regulates the cross-talk between classical steroid receptors and G p r o t e i n s . F i n a l l y , w e h a v e d e m o n s t r a t e d t h a t s t e r o i d s can s i m i l a r l y p r o m o t e m o u s e o o c y t e m a t u r a t i o n i n d e p e n d e n t of t r a n s c r i p t i o n , s u g g e s t m g t h a t t h e p r o c e s s of n o n g e n o m i c steroid-triggered m a t u r a t i o n is c o n s e r v e d f r o m l o w e r t o h i g h e r v e r t e b r a t e s . VIAS DE SEÑALIZACION INTRACEL ULARES PARA R E C E P T O R E S D E A N D R Ó G E N O : UN M O D E L O INTEGRADO P A R A L A H I P E R T R O F I A CARDÍACA (Androgens and androgen receptor intracellular s i g n a l i n g p a t h w a y s : An i n t e g r a t e d m o d e l for c a r d i a c h y p e r t r o p h y ) E s t r a d a , M. . I C B M , F O N D A P , P r o g r a m a d e Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Chile. . 1 1 D e s p i t e a d v a n c e s in t r e a t m e n t , c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e still is t h e n u m b e r o n e c a u s e of m o r t a l i t y a n d m o r b i d i t y w o r l d w i d e . C a r d i a c c e l l s , not o n l y must maintain an adequate balance under n e u r o - h u m o r a l s t i m u l a t i o n , but this m u s t t h e n b e m o d i f i e d a n d c o n d i t i o n e d f u r t h e r by t h e c a r d i o m y o c y t e s t o m a i n t a i n n o r m a l h o m e o s t a s i s . C a r d i a c h y p e r t r o p h y is p r o d u c e d in r e s p o n s e to s e v e r a l p h y s i o - p h a t o l o g i c a l c o n d i t i o n s a n d is c h a r a c t e r i z e d by i n c r e a s e s in c a r d i o m y o c y t e s i z e a n d p r o t e i n s y n t h e s i s , w h i c h is a c c o m p a n i e d by a s w i t c h in t h e m e t a b o l i c s u b s t r a t e u t i l i z e d b y t h e heart. Although initially adaptive, neuro-hormonal activation t o g e t h e r w i t h m e t a b o l i c d i s t u r b s h a v e d e l e t e r i o u s e f f e c t s on c a r d i o v a s c u l a r s y s t e m . A b n o r m a l c a r d i o m y o c y t e s f u n c t i o n s r e s u l t in cardiac hypertrophy, which is a cardinal manifestation of c a r d i o v a s c u l a r f a i l u r e H e a r t is a t a r g e t t i s s u e f o r a n a b o l i c s t e r o i d s . Testosterone elicits significant cardiovascular effects, and a b n o r m a l i t i e s of p l a s m a c o n c e n t r a t i o n s c a n c a u s e c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e . H o w e v e r , m o s t e v i d e n c e of t h e l i n k b e t w e e n t e s t o s t e r o n e and metabolic a c t i o n s is o b s e r v a t i o n a l . S t u d i e s t a r g e t e d at e s t a b l i s h i n g s u c h e f f e c t s at c e l l u l a r l e v e l a n d t h e i r c o r r e l a t i o n s w i t h in v i v o m o d e l s , will b r o a d e n o u r u n d e r s t a n d i n g of t h e r o l e s p l a y e d b y t h e s e m a l e s t e r o i d h o r m o n e s on t h e c a r d i o v a s c u l a r s y s t e m . I n t h i s t a l k , e v i d e n c e f o r d i f f e r e n t s i g n a l i n g p a t h w a y s a c t i v a t e d by t e s t o s t e r o n e d u r i n g t h e s h i f t f r o m n o r m a l to h y p e r t r o p h y p h e n o t y p e in c a r d i o m y o c y t e s w i l l b e d i s c u s s e d . W e p r o p o s e a b a s i c m o d e l t h e h o m e o s t a t i c a n d h y p e r t r o p h y m e c h a n i s m s of s t e r o i d s a c t i o n in cardiac cells. Understanding hypertrophy mechanisms are p a r t i c u l a r l y i m p o r t a n t a s t h e y r e l a t e t o a v a r i e t y of p r o c e s s e s r a n g i n g f r o m c e l l p h y s i o l o g y to h u m a n c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e . EL RECEPTOR CLASICO DE PROGESTERONA XPR SE ASOCIA A L A MEMBRANA PLASMÁTICA A TRAVÉS DE S U D O M I N I O D E U N I Ó N A L I G A N D O E I N T E R A C C I O N A C O N Gpy (The Classic X e n o p u s laevis Progesterone Receptor Associates to t h e P l a s m a M e r n b r a n e t h r o u g h its L i g a n d B i n d i n g D o m a i n a n d I n t e r a c t s w i t h GPy) Oíate, J . , Martínez, S. , Montecino, M. , Hinrichs, M V . . Departrnento de Bioquímica y Biología Molecular, F a c u l t a d d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n , Concepción, Chile. . 1 1 1 1 1 D u r i n g t h e last d e c a d e , c o n s i d e r a b l y e x p e r i m e n t a l e v i d e n c e h a s a c c u m u l a t e d that supports the view that classical steroid receptors a r e m e d i a t i n g e x t r a - n u c l e a r a c t i o n s in d i f f e r e n t s y s t e m s and o r g a n i s m s . O n e of t h e b e s t c h a r a c t e r i z e d e x a m p l e s is p r o g e s t e r o n e induced Xenopus laevis o o c y t e m a t u r a t i o n . In t h i s system, o v e r e x p r e s s i o n a n d d e p l e t i o n of c j a s s i c p r o g e s t e r o n e r e c e p t o r (xPR) have been shown to accelerate and to block p r o g e s t e r o n e - m d u c e d o o c y t e m a t u r a t i o n r e s p e c t i v e l y . In a d d i t i o n , r a p i d p r o g e s t e r o n e i n h i b i t i o n of a d e n y l y l c y c l a s e ( A C ) a c t i v i t y in i so late d p l a s m a m e r n b r a n e p r e p a r a t i o n s s u p p o r t s t h e i d e a t h a t x P R a n d s i g n a l G ^ s - A C c o m p o n e n t s s h o u l d b e l o c a l i z e d at t h e o o c y t e p l a s m a m e r n b r a n e . T o test this hypothesis, we have cloned the o o c y t e A C w h i c h is a c t i v a t e d by G a s a n d GPy a n d s t u d i e d its p a r t i c i p a r o n in t h e m a t u r a t i o n p r o c e s s . In a d d i t i o n , w e h a v e transiently t r a n s f e c t e d t h e x P R c D N A into C o s - 7 cells a n d a n a l y s e d its subcellular distribution. Through western blot and i m m u n o f l u o r e s c e n s e confocal m i c r o s c o p y analysis, w e w e r e able to d e t e c t x P R a s s o c i a t e d t o t h e p l a s m a m e r n b r a n e of t r a n s f e c t e d Cos-7 cells. W e also e x p r e s s e d t h e N-terminal a n d ligand b i n d i n g d o m a i n ( L B D ) of t h e r e c e p t o r a n d f o u n d t h a t o n l y t h e L B D d i s p l a y e d mernbrane association, although the N-terminal domain was e x p r e s s e d in e q u a l a m o u n t s . P r o g e s t e r o n e - B S A - F I T C binding s t u d i e s s h o w n s p e c i f i c s t e r o i d b i n d i n g at t h e p l a s m a m e r n b r a n e , s u g g e s t i n g t h a t x P R - L B D is e x p o s e d o n t h e o u t s i d e of t h e c e l l . Finally, w e u s e d the T á n d e m Affinity Purification m e t h o d ( T A P - t a g ) a n d f o u n d GPy a s s o c i a t e d to x P R , w h i c h w a s c o r r o b o r a t e d in t h e X e n o p u s l a e v i s o o c y t e by c o - i m m u n o p r e c i p i t a t i o n a n a l y s i s . Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular SIMPOSIO III: QUORUM SENSING Y BIOFILMS BIOPELÍCULAS Y MICROORGANISMOS (Biofilms and QUORUM SENSING BIOMINEROS: REALIDAD Y Quorum Sensing in Biomining R e a l i t i e s a n d C h a l l e n g e s ) G u i l i a n i , N. 1 EN DESAFÍOS Microorganisms: U n i d a d de Comunicación CONTROL DE BIOPELÍCULAS METABOLITOS CHILENA SECUNDARIOS (Control de MICROBIANAS DE biopelículas LA FLORA microbianas por POR NATIVA metabolitos 1 s e c u n d a r i o s d e la flora n a t i v a c h i l e n a ) U r r u t i a B , H . . L a b o r a t o r i o e B a c t e r i a n a , L a b o r a t o n o de Microbiología y B i o t e c n o l o g í a Molecular, Biopelículas Departamento M i c r o b i o l o g í a / C e n t r o d e B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n . de Biología, Instituto de Dinámica Celular y y Microbiología Ambiental, Departamento 1 Biotecnología, Universidad de Chile. . Casilla 160-c, fono: 0 4 1 2 2 0 4 2 4 9 , email: h u r r u t i a @ u d e c . c l . L a f o r m a h a b i t u a l d e c r e c i m i e n t o d e l a s b a c t e r i a s e n la n a t u r a l e z a Una e s b a j o el e s t a d o d e b i o p e l í c u l a s o b i o f i l m s . E s t a s s e d e f i n e n c o m o microorganismos que viven adheridos a c o m u n i d a d e s de m i c r o o r g a n i s m o s q u e c r e c e n e m b e b i d o s en una desarrollando su actividad i n m e r s o s en u n a matriz matriz de exopolisacáridos y a d h e r i d o s a u n a superficie inerte o un ellos y expresando tejido vivo. Las biopelículas han adquirido relevancia en diversos habitat 1 biopelícula mismos c a m p o s d e i n v e s t i g a c i ó n s e a p o r s u p a p e l b e n e f i c i o s o o s e a , al importancia humanas las biopelículas conformadas por comunidades de procahontes tienen alto valor a g r e g a d o producción oro, uranio, cobalto) desde mineral m e d i a n t e el p r o c e s o d e b i o l i x i v i a c i ó n . N o o b s t a n t e e s t a s mismas biopelículas son también responsables de las contaminaciones una para en medicina, bacterianas, un particular agrupación un diversos viven impacto agro forestal. Su conglomerado propio. ámbitos generada por Constituyen el de industria sobre ecológico formación, económico caracterizar Como poder mecanismos fomentar moleculares en el p r o c e s o involucrados microorganismos de biolixiviación en biomineros o aminorar el la producto del trabajo para p l a n t a - m i c r o o r g a n i s m o , e n el daño Ambiental, (Centro de área de interacción Biotecnología Universidad algunos metabolitos s e c ú n d a n o s extraíbles, desde plantas ( e c o s i s t e m a de Gram-negativas. estrategias Por e s o . y c o n el d e s a f í o biológicas que biopelúclas en bacterias e s t a vía biopelículas está presente permitan de regular en bacterias generar la nuevas formación de b i o m i n e r a s , n o s p r o p u s i m o s i n d a g a r si en Acidithiobacillus ferrooxidans y otras caracterizado P s e u d o m o n a s syringae D C 3 0 0 y P s e u d o m o n a s syringae C C 9 4 . En extractos que mecanismos han. sido de a c c i ó n , activos se explorando ha comenzado interferencia c i r c u i t o Q S m e d i a n t e ( m e d i a n t e el u s o d e b i o s e n s o r e s ) . THAT BACTERIAL COORDINATE POPULATIONS GENE Greenberg, SENSING EXPRESSION E.P. 1 IN Department of 1 Microbiology, University of W a s h i n g t o n . Seattle, U S A . Acyl-homoserine lactone (acyl-HSL) q u o r u m - s e n s i n g systems have b e e n found in over 6 0 bacterial s p e c i e s w h e r e t h e y function regulators of a range of phenotypes. The signáis are as fatty a c y l - H S L s a n d t h e f a t t y a c y l g r o u p d e t e r m i n e s s p e c i f i c i t y . P a i r s of l i n k e d g e n e s e n c o d e t h e signalincj s y s t e m s ; a n R r e c e p t o r and an I signal synthase gene. signal-dependent transcription factors biosynthesis intermediates substrates. W e utilizes an and The acid from the function gene as T h e s y n t h a s e s u s e fatty acid S-adenosylmethionine have recently discovered organic receptors a signal synthase environment. the as that aromatic c o u m a r i c a c i d as a s u b s t r a t e for t h e s y n t h e s i s of c o u m a r y l - H S L . Coumaryl-HSL is d e t e c t e d b y t h e c o g n a t e controls gene expression. W e species with coumaryl-HSL receptor protein have discovered synthases. This several represents and bacterial a new b r e a d t h i n t h e d i v e r s i t y o f a c y l - H S L s i g n á i s . T h i s d i s c o v e r y wiíl b e d i s c u s s e d within the context of bacterial s o c i a l b e h a v i o r . el e f e c t o d e a l g u n o s e x t r a c t o s s o b r e la f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s d e b1-04-321, SIGNALS nativas d e la C o s t a V I I y V I I I r e g i o n e s ) . M e d i a n t e e n s a y o s q u e i n v e s t i g a n la c a p a c i d a d d e f o r m a r B i o p e l í c u l a s ( c o l o n y investigar SOCIOMICROBIOLOGY: A N E W T W I S T ON QUORUM de químicamente b l o t t i n g ) y la v i a b i l i d a d f i s i o l ó g i c a ( y o d u r o p r o p i d i o ) s e e s t u d i a aquellos bacterias biomineras. cordillera y la regulación de aislado de q u o r u m s e n s i n g ( Q S ) e s u n a d e l a s p r i n c i p a l e s v í a s m o l e c u l a r e s de formación han el L A B de Biopelículas y Microbiología Concepción) la se en amigables fitopatógenos. a m b i e n t a l de las A M D s . L a c o m u n i c a c i ó n b a c t e r i a n a célula-célula o de la el m á s de d o s mil tipos de i n f e c c i o n e s y e n f e r m e d a d e s de plantas p a r a c o n t r o l a r la a d h e r e n c i a d e b a c t e r i a s y h o n g o s biopelículas en para i n i c i o d e t o d o p r o c e s o f i t o p a t o g é n i c o y a u n q u e s o n , los c a u s a n t e s de e n sitios m i n e r o s d e s a f e c t a d o s o n o . A p a r e c e r e l e v a n t e , e n t o n c e s , los. Las terrestres, fundamental a ú n no e x i s t e n , e n el m e r c a d o , b i o c i d a s a m b i e n t a l m e n t e de tienen actividades vegetales y es las y y agricultura. ambientales [ A g u a acidas de drenaje de m i n a s , ( A M D ) ] generadas formación de superficies inertes o vivas, microorganismos, ambiente, que o fenotipo muchos económica como e x t r e m o f i l a s p e r m i t e a la i n d u s t r i a ( b i o ) m i n e r a r e c u p e r a r m e t a l e s d e (cobre, es primario contrario, p o r su papel perjudicial. Las actividades m e t a b ó l i c a s de biopelículas de DIUC 208.142.026-1.0. a con INNOVA XXXI Reunión Anual SIMPOSIO IV: INFERENCIA DE CONOCIMIENTO Y MINERÍA DE DATOS MEDIANTE BIOINFORMÁTICA: EJEMPLOS DE DESARROLLOS Y APLICACIONES P O T E N C I A L E S ESTADISTICOS: UNA P O D E R O S A HERRAMIENTA BIOINFORMATICA Q U E PERMITE O B T E N E R BENEFICIOS DE LO ABUNDANTE, AL ELIMINAR LO REDUNDANTE Y E X T R A E R LO R E L E V A N T E (Statistical Potentials: A Powerful Bioinformatic Tool That Generates Useful Information From The Abundant, By Eliminating The Redundant And Extracting The Relevant) Meló, F . , Slater, A . W . , N o r a m b u e n a , T . , M a r t í n e z , P. , P é r e z , N. , C a s t e l l a n o s , J. , Panjkovich, A. , Ferrada, E. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. . 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Los potenciales estadísticos constituyen una poderosa herramienta q u e p e r m i t e la e x t r a c c i ó n d e i n f o r m a c i ó n útil a c e r c a d e u n s i s t e m a c o m p l e j o q u e s e a e s t r u c t u r a d o y f u n c i o n a l . E l l o s r e l a c i o n a n la probabilidad de o c u r r e n c i a de un e s t a d o discreto con una energía a t r a v é s d e la a p l i c a c i ó n d e la ley i n v e r s a d e B o l t z m a n n . E s t a ú l t i m a , s e e n c u e n t r a a su v e z e s t r e c h a m e n t e r e l a c i o n a d a c o n c o n c e p t o s d e información y entropía propuestos por Shannon. Probabilidad, energía, información y entropía son conceptos altamente relacionados e n t r e s í , los c u a l e s en ú l t i m o g r a d o c o n f i e r e n p o d e r p r e d i c t i v o a c e r c a d e la c o n d i c i ó n e s t á t i c a o e v o l u c i ó n d i n á m i c a d e un s i s t e m a . E n e s t a c h a r l a p u n t u a l del s i m p o s i o , s e d e s c r i b i r á d e m a n e r a m u y s i m p l e en q u é consisten y c ó m o se o b t i e n e n los p o t e n c i a l e s estadísticos. La utilidad de los p o t e n c i a l e s e s t a d í s t i c o s s e r á e j e m p l i f i c a d a a t r a v é s de la p r e s e n t a c i ó n d e t r e s a p l i c a c i o n e s d i f e r e n t e s d e é s t o s q u e s e h a n e s t a d o d e s a r r o l l a n d o en l o s ú l t i m o s a ñ o s e n n u e s t r o l a b o r a t o r i o . L o s e j e m p l o s i n c l u y e n : 1) p r e d i c c i ó n d e e s t r u c t u r a y f u n c i ó n d e p r o t e í n a s , 2 ) p r e d i c c i ó n d e g e n e s y 3) p r e d i c c i ó n d e a u t o r í a d e t e x t o s en disputa.Financiamiento: Proyecto F O N D E C Y T 1080158. IDENTIFICACION Y LOCALIZACION DE L O S C O M P O N E N T E S CLAVES D E L SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS DE EUCARIOTAS E N B A C T E R I A S C O M P A RTIM E N T A L I Z A D A S (Identification And Localization Of K e y C o m p o n e n t s Of T h e E u k a r y o t i c E n d o m e m b r a n e S y s t e m In C o m p a r t m e n t a l i z e d B a c t e r i a ) D e v o s , D . , F r a n k e , J . , Chait, B. , Sali, A , Rout, M. . E M B L , Meyerhofstrasse 1, D-69117 H e i d e l b e r g , G e r m a n y . , L a b o r a t o r y of C e l l u l a r a n d S t r u c t u r a l B i o l o g y , The Rockefeller University, 1230 York Avenue, New York, N Y 1 0 0 2 1 - 6 3 9 9 , U S A . , D e p a r t m e n t s of B i o p h a r m a c e u t i c a l S c i e n c e s a n d P h a r m a c e u t i c a l C h e m i s t r y , and California Institute for Quantitative Biomedical Research, U C S F , San Francisco, CA 94143-2552, U S A . . P a t r o c i n a n t e : M e l ó , F.. 1 2 3 2 2 1 2 3 A m a j o r s t e p in e u k a r y o t i c e v o l u t i o n w a s t h e d e v e l o p m e n t of compartmentalization. S e q u e n c e b a s e d searches are uninformative a b o u t t h e origin of t h e e u k a r y o t i c e n d o m e m b r a n e s y s t e m . B e c a u s e s t r u c t u r e is m o r e c o n s e r v e d t h a n s e q u e n c e in e v o l u t i o n , w e u s e d structure b a s e d searches to identify prokaryotic contributions to the eukaryotic compartmentalization system. W e have discovered a c o m b i n a t i o n of f o l d t y p e s t h a t is a s i g n a t u r e of t h e e u k a r y o t i c e n d o m e m b r a n e s y s t e m in t w o c o m p a r t m e n t a l i z e d b a c t e r i a f r o m t h e Planctomycetes phylum, Rhodopirellula báltica and Gemmata o b s c u r i g l o b u s . Our analysis provides a m o l e c u l a r link b e t w e e n the eukaryotic and prokaryotic compartmentalization s y s t e m s , supporting a n a u t o g e n o u s m o d e l of e u k a r y o t i c e v o l u t i o n . MARCOS DE LECTURA ABIERTOS ALTERNATIVOS: UNA P E S A D I L L A B I O I N F O R M A T I C A P E R O UN P O T E N C I A L MINA D E O R O P A R A L A E V O L U C I O N D E G E N E S (Altérnate O p e n R e a d i n g F r a m e s : A Bioinformatics N i g h t m a r e But A Potential G o l d m i n e For G e n e Evolution) H o l m e s , D . S . , R i v e r a , G . , O s s a n d ó n , F. . C e n t e r f o r Bioinformatics and G e n o m e Biology (CBGB), Fundación Ciencia para la V i d a ( w w w . c i e n c i a v i d a . c l ) a n d D e p t o . d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , F a c u l t a d d e C i e n c i a s d e la S a l u d , U n i v e r s i d a d d e A n d r é s B e l l o . . P a t r o c i n a n t e : M e l ó , F.. Altérnate open reading f r a m e s ( O R F s ) that genérate overlapping g e n e s h a v e b e e n w e l l d o c u m e n t e d in v i r a l g e n o m e s . H o w e v e r , f e w e x a m p l e s h a v e b e e n d e s c r i b e d in o t h e r o r g a n i s m s , p r o m p t i n g u s to c a r r y o u t a l a r g e s c a l e , m u l t i - g e n o m e s u r v e y of B a c t e r i a a n d A r c h a e a in a s e a r c h f o r a l t é r n a t e O R F s t h a t m i g h t b e f u n c t i o n a l g e n e s . A n a l y s i s of o v e r 7 0 0 g e n o m e s ( > 2 m i l l i o n g e n e s ) r e v e á i s t h a t s u b s t a n t i a l a l t é r n a t e O R F s (>-300 n u c l e o t i d e s w i t h o u t a s t o p c o d o n ) a r e s u r p r i s i n g l y c o m m o n , e s p e c i a l l y in G + C rich g e n o m e s . T h i s t a l k will o u t l i n e t h e d i s c o v e r y a n d i n t e r p r e t a t i o n of a l t é r n a t e O R F s a n d will describe a publicly available, searchable datábase (AlterORF, w w w . A l t e r O R F . c l ) of a l t é r n a t e O R F s . M a n y altérnate O R F s do n o t e n c o d e p r o t e i n s a n d can be m i s a n n o t a t e d as hypothetical g e n e s exacerbating the so-called "orphan g e n e " problem and confounding t h e i n t e r p r e t a t i o n o f g e n o m e s . A l t e r O R F is h e l p i n g t o d e p ú r a t e t h e s e incorrect gene identifications. H o w e v e r , altérnate O R F s also represent a rich s o u r c e of p o t e n t i a l c o d i n g i n f o r m a t i o n t h a t c a n g i v e r i s e t o n o v e l proteins w h e n c o u p l e d to appropriate regulatory s e q u e n c e s a n d , as such, may represent an important contributor to gene evolution. E x a m p l e s w i l l b e d e s c r i b e d of n e w g e n e s t h a t a r e h y p o t h e s i z e d t o have arisen from altérnate O R F s . F u n d i n g : F O N D E C Y T 1050063, D I - U N A B 3406-R, DI-02-08/I and a Microsoft Sponsored Research Award. 1 1 1 1 Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular Trabajos de Incorporación XXXI Reunión IDENTIDAD DE ORGANOS FLORALES EN Vitis vinifera: CARACTERIZACIÓN D E UNA R E D D E G E N E S I N V O L U C R A D O S ( F l o r a l o r g a n i d e n t i t y in V. v i n i f e r a : C h a r a c t e r i z a t i o n of a n e t w o r k of g e n e s involved) P o u p i n , M.J. , L e i v a - A m p u e r o , A. , T i m m e r m a n n , T. . Dauelsberg, P. , Matus. J.T. , Arce-Johnson, P. . Pontificia Universidad Católica de Chile F a c u l t a d de C i e n c i a s Biológicas. Depto. Genética Molecular y Microbiología. , Pontificia Universidad C a t ó l i c a de Chile. F a c u l t a d de A g r o n o m í a e Ingenería F o r e s t a l . D e p t o . F r u t i c u l t u r a y E n o l o g í a . . P a t r o c i n a n t e : A r c e - J o h n s o n . P. L a i d e n t i d a d de ó r g a n o s f l o r a l e s es c o n t r o l a d a por distintos g e n e s , d o n d e factores tipo M A D S - b o x son p r o t a g o n i c e s É s t o s se clasifican e n l o s s u b g r u p o s A, B y C , a p a r t i r d e l o s - c u a l e s f u e d e r i v a d o el m o d e l o actual de floración. A u n q u e este p r o c e s o es c o n s e r v a d o , e x i s t e n d i f e r e n c i a s en e l n ú m e r o d e g e n e s i n v o l u c r a d o s , s u s r e g u l a c i o n e s y f u n c i o n e s en las distintas e s p e c i e s . E s t e estudio p r e s e n t a la c a r a c t e r i z a c i ó n d e la c l a s e B d e g e n e s M A D S - b o x e n Vitis vinifera, c l a s e r e s p o n s a b l e d e la f o r m a c i ó n d e p é t a l o s y e s t a m b r e s . I d e n t i f i c a m o s los g e n e s VvPiSTiLLATA, Vv TM6 y VvAPETALAS. El a n á l i s i s d e l g e n o m a d e la v i d r e v e l a q u e s ó l o e x i s t i r í a n e s t o s g e n e s en la c l a s e y q u e s e e n c o n t r a r í a n en c o p i a ú n i c a . S e c o r r e l a c i o n a n s u s p a t r o n e s d e e x p r e s i ó n c o n l o s e v e n t o s m i c r o s c ó p i c o s o b s e r v a d o s en e l d e s a r r o l l o d e p é t a l o s y e s t a m b r e s . A n a l i z a m o s la r e g u l a c i ó n d e e s t o s g e n e s p o r p o l i n i z a c i ó n . A d e m á s , i d e n t i f i c a m o s la e x p r e s i ó n d e VvTM6 en f r u t o y s e m i l l a , s i e n d o é s t a la p r i m e r a e v i d e n c i a d e q u e un g e n d e c l a s e B, s e e x p r e s e t a m b i é n d u r a n t e el d e s a r r o l l o y la m a d u r a c i ó n del fruto. Adicionalmente, identificamos distintos genes i n v o l u c r a d o s en f l o r a c i ó n y d e s c r i b i m o s s u s p a t r o n e s d e e x p r e s i ó n , e n c o n t r a n d o g e n e s q u e s e e n c o n t r a r í a n t a n t o río a r r i b a c o m o a b a j o d e la c l a s e B . 0 7 G E N O M A 0 1 , C o n s o r c i o T e c n o l ó g i c o d e la F r u t a , Conicyt. 1 1 2 2 1 1 2 1 Anual ANALISIS GENOMICO FUNCIONAL DEL DESARROLLO DEL P O L E N E N Arabidopsis thaiiana ( F u n c t i o n a l g e n o m i c a n a l y s i s of p o l l e n d e v e l o p m e n t in Arabidopsis thaiiana) L e ó n , G . . Centro de Biotecnología Vegetal, Universidad Andrés Bello . Patrocinante: J o r d a n a . X.. 1 1 El desarrollo del gametofito masculino de las plantas, o m i c r o e s p o r o g é n e s i s , e s un p r o c e s o c o m p l e j o q u e f i n a l i z a c o n la p r o d u c c i ó n d e l o s g r a n o s d e p o l e n . A p e s a r d e la i m p o r t a n c i a b i o l ó g i c a y a g r o n ó m i c a del p o l e n , n u e s t r o c o n o c i m i e n t o d e l o s aspectos moleculares q u e gobiernan su desarrollo es escaso. La principal razón para e s t o es q u e se h a n identificado p o c o s g e n e s e s e n c i a l e s p a r a e s t e p r o c e s o , la m a y o r í a a t r a v é s d e l a n á l i s i s d e m i l e s d e p l a n t a s m u t a n t e s a Ja v e z , u n a e s t r a t e g i a l e n t a y p o c o e f i c i e n t e . P o r o t r a p a r t e , el a n á l i s i s f u n c i o n a l d e f a m i l i a s g é n i c a s a p e r m i t i d o i d e n t i f i c a r o t r o s g e n e s c u y a f u n c i ó n e s e s e n c i a l p a r a la m i c r o g a m e t o g é n e s i s ; sin e m b a r g o , en e s t e c a s o el f o c o d e la i n v e s t i g a c i ó n n o e s el d e s a r r o l l o d e l p o l e n y el f e n o t i p o e s d e t e c t a d o f o r t u i t a m e n t e . P a r a e n t e n d e r m e j o r la b i o g é n e s i s d e l p o l e n , h e m o s d e s a r r o l l a d o u n a e s t r a t e g i a d i r i g i d a al d e s c u b r i m i e n t o d e g e n e s e s e n c i a l e s p a r a su d e s a r r o l l o , b a s a d a e n el a n á l i s i s d e p e r f i l e s d e acumulación de tmRNAs en diferentes etapas de este p r o c e s o seguido d e un s e n c i l l o a n á l i s i s f e n o t í p i c o d e p l a n t a s m u t a n t e s e n g e n e s candidatos. Usando esta estrategia h e m o s descubierto nuevos genes e s e n c i a l e s p a r a el d e s a r r o l l o d e l p o l e n , l o s q u e h e m o s l l a m a d o DPD (DEFECTIVE ÍN POLLEN DEVELOPMENT). Actualmente nos e n c o n t r a m o s c a r a c t e r i z a n d o f u n c i o n a l m e n t e a l o s g e n e s DPD y e s p e r a m o s contribuir d e m a n e r a significativa a e n t e n d e r mejor los a s p e c t o s m o l e c u l a r e s la m i c r o g a m e t o g é n e s i s . Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular Comunicaciones Ubres Orales XXXI Reunión Anual MICROBIOLOGIA Y VIROLOGIA CLONALIDAD DE CEPAS DE ACINETOBACTER BAUMANNII PRODUCTORAS DE CARBAPE NEMAS AS AISLADAS EN H O S P I T A L E S C H I L E N O S ( C l o n a l i t y of carbapenemase-producer strains of Acinetobacter baurnannii isolated from Chilean hospitals) O p a z o , A . , Flores, M . . Bello. H . , D o m í n g u e z , M . , G a r c í a . P. . S a n Martín, M. . Sakurada, A . González, G. . Depto Microbiología, Fac. C s . B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d ' d e . C o n c e p c i ó n . F a c . M e d i c i n a . P. U n i v e r s i d a d Católica de Chile . L a b . C e n t r a l i z a d o , Hospital Barros L u c o , U n i d . M i c r o b i o l o g í a , H o s p . Clínico U n i v e r s i d a d de C h i l e . Patrocinante: Martínez. J.. 1 1 3 1 1 4 2 1 1 2 3 4 A c i n e t o b a c t e r b a u r n a n n i i , c o c o b a c i l o Grarn n e g a t i v o no t e r m e n t a d o r , es c o n s i d e r a d o un p a t ó g e n o o p o r t u n i s t a y se ha involucrado frecuentemente en brotes epidémicos en unidades de cuidados intensivos. Es agente etiológico de septicemia, neumonía e infecciones del tracto urinario en p a c i e n t e s hospitalizados. Se c a r a c t e r i z a p o r s e r m u l t i r e s i s t e n t e a l o s a n t i b i ó t i c o s , p o r lo q u e los c a r b a p e n é m i c o s s o n i m p o r t a n t e s e n el t r a t a m i e n t o d e l a s i n f e c c i o n e s que causan. Estos betalactámicos corresponden a potentes c o m p u e s t o s p o r lo q u e h a n s i d o r e s e r v a d o s p a r a el t r a t a m i e n t o d e pacientes hospitalizados con infecciones graves. Sin embargo, d u r a n t e la ú l t i m a d é c a d a h a i n c r e m e n t a d o c o n s i d e r a b l e m e n t e el n ú m e r o d e c e p a s m u l t i r e s i s t e n t e s , c u y o principal m e c a n i s m o de r e s i s t e n c i a es la p r o d u c c i ó n d e c a r b a p e n e m a s a s , e n t r e e l l a s las s e r i n - c a r b a p e n e m a s a s y m e t a l o - b e t a l a c t a m a s a s . E n este t r a b a j o se investigó la clonalidad de 37 cepas de A. baurnannii por macrorestricción y electroforesis en c a m p o pulsado, en cepas m u l t i r e s i s t e n t e s a i s l a d a s e n t r e s h o s p i t a l e s d e la R e g i ó n M e t r o p o l i t a n a y se relacionó los clones con la producción de distintas c a r b a p e n e m a s a s . La detección de c a r b a p e n e m a s a s se realizó m e d i a n t e la p r u e b a d e H o d g e y la d e m e t a l o - b e t a l a c t a m a s a s p o r s i n e r g i a entre i m i p e n e m y E D T A . T o d a s las c e p a s a n a l i z a d a s f u e r o n productoras de carbapenemasas, principalmente s e r i n - c a r b a p e n e m a s a s . El p r i m e r h o s p i t a l a n a l i z a d o p r e s e n t ó m a y o r p o l i c l o n a l i d a d (> 7 c l o n e s ) , i n d i c a n d o u n m e j o r m a n e j o d e l a s i n f e c c i o n e s i n t r a h o s p i t a l a r i a s y q u e la r e s i s t e n c i a s e d i s e m i n a r í a p o r t r a n s f e r e n c i a h o r i z o n t a l d e g e n e s m á s q u e p o r la d i s e m i n a c i ó n d e c l o n e s r e s i s t e n t e s . E n los otros c e n t r o s h o s p i t a l a r i o s s ó l o se e n c o n t r ó de 3 a 4 clones. E S T U D I O D E T R A N S P O R T E IN V I T R O E N P R O T E O L I P O S O M A S DE L A S PORINAS OMPD, O M P W Y O M P L D E S A L M O N E L L A E N T E R I C A SV. TYPHIMURIUM (In vitro transport studies using p r o t e o l i p o s o m e s containing O m p D , O m p W or O m p L porins from Salmonella entérica sv T y p h i m u r i u m ) Gutiérrez, J . l . . Villarreal, J . M . , C o l l a o , B. , P a r r a , S . \ A s p e e , A . , S a a v e d r a , C V Laboratorio de Microbiología Molecular, Dpto. Ciencias Biológicas, Universidad A n d r é s Bello , Laboratorio de cinética y f o t o q u í m i c a molecular, Dpto. de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile . Las bacterias G r a m negativo, están cubiertas por dos m e m b r a n a s , u n a i n t e r n a q u e s e p a r a el a m b i e n t e r e d u c t o r del c i t o p l a s m a d e l a m b i e n t e o x i d a n t e p e r i p l a s m á t i c o . S e p a r a d a d e la m e m b r a n a i n t e r n a p o r el p e r i p l a s r n a , s e e n c u e n t r a la m e m b r a n a e x t e r n a e n c u y o c o n t e n i d o proteico e s t á n las p o r i n a s . E s t a s c o r r e s p o n d e n a c a n a l e s a c u o s o s q u e p e r m i t e n la d i f u s i ó n p a s i v a d e s o l u t o s a t r a v é s d e l o s q u e s o n i m p o r t a d o s a z ú c a r e s y n u t r i e n t e s e s e n c i a l e s p a r a la b a c t e r i a a s í c o m o t a m b i é n p e r m i t e n la e n t r a d a d e a l g u n o s t ó x i c o s y antibióticos.Evidencia genética obtenida en nuestro laboratorio, indica q u e los g e n e s q u e c o d i f i c a n p a r a las p o r i n a s O m p D , O m p L y O m p W d e S a l m o n e l l a T y p h i m u r i u m , p a r t i c i p a n e n la r e s i s t e n c i a a m e t i l v i o l ó g e n o ( M V ) lo q u e s u g i e r e u n rol d u a l d e e s t a s p r o t e í n a s , p e r m i t i e n d o la s a l i d a d e M V al e s p a c i o e x t r a c e l u l a r . P o r o t r o l a d o , c u a n d o S a l m o n e l l a se e n c u e n t r a c o l o n i z a n d o s u h o s p e d e r o dentro del m a c r ó f a g o , c o m o p r i m e r a b a r r e r a d e f e n s i v a el g l u t a t i ó n r e d u c i d o q u e e s t á e n el c i t o p l a s m a p u e d e s e r e x p o r t a d o al e s p a c i o e x t r a c e l u l a r , p o r m e c a n i s m o ( s ) a ú n n o c a r a c t e r i z a d o ( s ) . E n e s t e t r a b a j o s e d e m o s t r ó in v i t r o q u e O m p D y O m p W p e r m i t e n la d i f u s i ó n d e M V desde p r o t e o l i p o s o m a s reconstituidos. A diferencia de O m p L que no fue c a p a z d e p e r m i t i r la s a l i d a d e e s t e t ó x i c o . A l u t i l i z a r g l u t a t i ó n c o m o s u s t r a t o e n v e z d e M V , e l c a n a l O m p D p e r m i t e la s a l i d a d e e s t a m o l é c u l a . L o que sugiere q u e esta proteína d e m e m b r a n a podría ser responsable in vivo de la exportación de glutatión al extracelular.Financiamiento F O N D E C Y T 1085131; DI-UNAB 39-06/R, 08-14/1. 1 1 1 2 1 2 LOS COMPONENTES DESHIDROGENASA DE RESISTENCIA A TELURITO DEL COMPLEJO PIRUVATO Aeromonas caviae MEDIAN D E P O T A S I O E N Escherichia coii (The components of t h e p y r u v a t e dehydrogenase complex of Aeromonas caviae m e d í a t e r e s i s t a n c e t o p o t a s s i u m t e l l u r i t e in Escherichia coii.) M o l i n a , R . , C a s t r o , M . , D í a z , W . , V á s q u e z . C . . L a b o r a t o n o de M i c r o b i o l o g í a M o l e c u l a r . F a c u l t a d de Q u í m i c a y Biología. U S A C H . El t e l u r i t o d e p o t a s i o ( K T e 0 ) e s t ó x i c o p a r a la m a y o r í a d e l o s o r g a n i s m o s . A la f e c h a s e d e s c o n o c e el m e c a n i s m o p o r el c u a l e j e r c e s u t o x i c i d a d y s e s u g i e r e q u e p a r t e d e ella e s t a r í a d a d a p o r g e n e r a c i ó n de e s t r é s o x i d a t i v o . U n a v í a de d e s i n t o x i c a c i ó n de K T e 0 es la r e d u c c i ó n d e t e l u r i t o a t e l u r o e l e m e n t a l ( T e ) , d e b a j a o n u l a toxicidad. E n nuestro laboratorio aislamos una cepa de Aeromonas caviae r e s i s t e n t e a K T e 0 q u e r e d u c e e n z i m á t i c a m e n t e t e l u r i t o a T e . L a p u r i f i c a c i ó n d e e s t a a c t i v i d a d i d e n t i f i c ó el c o m p l e j o d e la p i r u v a t o d e s h i d r o g e n a s a ( P D H ) c o m o r e s p o n s a b l e d e la r e d u c c i ó n d e t e l u r i t o . S e d e t e r m i n ó q u e la e x p r e s i ó n d e l o s g e n e s q u e e s p e c i f i c a n l o s c o m p o n e n t e s E 1 , E 2 y E 3 del c o m p l e j o P D H d e A. caviae {aceE, aceFy IpdA r e s p e c t i v a m e n t e ) c o n f i e r e r e s i s t e n c i a a K T e 0 e n E. coii. E s t o e s t á d e a c u e r d o c o n la o b s e r v a c i ó n q u e c é l u l a s d e E. coii deficientes e n cada uno de estos g e n e s exhiben u n a gran sensibilidad al t ó x i c o , la q u e e s r e v e r t i d a p o r c o m p l e m e n t a c i ó n c o n l o s r e s p e c t i v o s g e n e s . U t i l i z a n d o c é l u l a s r e p o r t e r a s d e m o s t r a m o s q u e la e x p r e s i ó n d e los g e n e s d e A. caviae d i s m i n u y e n los niveles de e s p e c i e s reactivas de oxígeno en E. coii. Financiado por Fondecyt 1060022, Dicyt-USACH. 1 1 1 1 1 2 3 2 3 0 0 2 3 2 REGULACIÓN SINTETASA DE DE LA A. (Regulation of G l u R S I 1 A. , 2 Ibba, M. , Molecular ACTIVIDAD ferrooxidans of A LA EL GLUTAMIL-tRNA ESTADO REDOX. ferrooxidans b y the redox status) Katz, 1 Orellana, ICBM. DE POR 3 O. . Programa de de Medicina, Universidad Facultad Biología Celular y 1 de Chile , 2 Department of Microbiology, Ohio State University, USA. . El h e m o cumple un papel importante en las células d e b i d o a que participa en diversos p r o c e s o s m e t a b ó l i c o s . Sin e m b a r g o , t a m b i é n es capaz de generar especies reactivas de o x í g e n o , p o r lo q u e sus n i v e l e s s e m o d u l a n f i n a m e n t e . El h e m o s e p r o d u c e a p a r t i r del á c i d o óaminolevulínico Acidithiobaciiius y tRNA en ( A L A ) . E n la m a y o r í a d e las b a c t e r i a s , ferrooxidans, una vía incluyendo el A L A s e s i n t e t i z a a p a r t i r d e g l u t a m a t o catalizada por tres enzimas: Glutamil-tRNA sintetasa (GluRS), Glutamil-tRNA reductasa y Glutamatosemialdehido a m i n o t r a n s f e r a s a . E s t u d i o s p r e v i o s i n d i c a n q u e e n A. ferrooxidans la s í n t e s i s d e h e m o s e r e g u l a e n p a r t e m e d i a n t e la m o d u l a c i ó n d e la a c t i v i d a d d e la G l u R S I , u n a d e l a s d o s G l u R S p r e s e n t e s e n microorganismo, resultados sin afectar i n d i c a n q u e in vitro su concentración celular. este Nuestros la h e m i n a , u n a n á l o g o d e hemo, p u e d e i n h i b i r a c o n c e n t r a c i o n e s r e l a t i v a m e n t e a l t a s a la G l u R S I embargo, el peróxido de hidrógeno provoca un efecto Sin inhibidor s i n é r g i c o c o n la h e m i n a . E s t e e f e c t o s e r e v i e r t e p o r la a c c i ó n d e D T T . Estudios d e m o d i f i c a c i ó n c o n D T N B m u e s t r a n que sólo tres de las cuatro cisteínas d e la G l u R S son accesibles y una sola de estas c i s t e í n a s s e o x i d a p o r la m e z c l a d e h e m i n a y H 0 . A c t u a l m e n t e 2 2 se r e a l i z a n e x p e r i m e n t o s p a r a i d e n t i f i c a r la c i s t e í n a o x i d a d a y el e s t a d o r e d o x in vivo A.K. Financiado por Fondecyt 1070437 y becas Conicyt a Sociedad . de Bioquímica y Biología Molecular UTILIZACIÓN D E H E R R A M I E N T A S BIOINFORMATICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN D E F U N C I O N E S GÉNICAS Q U E PODRÍAN S E R R E G U L A D A S P O R E L S I S T E M A Q U O R U M S E N S I N G afel/afeR DE Acidithiobaciiius ferrooxidans ( U s i n g bioinformatic tools to identify g e n e s t h a t m i g h t b e r e g u l a t e d b y t h e a fel/a fe R q u o r u m s e n s i n g s y s t e m f r o m Acidithiobacillus ferrooxidans) B a n d e r a s , A . , G u i l i a n i , Ñ.V L a b Microbiología Molecular y Biotecnología. F a c u l t a d de Ciencias. U n i v e r s i d a d d e Chile, Ins. D i n á m i c a Celular y B i o t e c n o l o g í a ( I C D B ) . P a t r o c i n a n t e : P r e l l e r . A.. C O M P R E N D I E N D O L A VIDA Q U I M I O L I T O A U T O T R O F I C A A pH 1 A T R A V E S D E L A G E N O M I C A C O M P A R A T I V A (Insights into c h e m o l i t h o a u t o t r o p h i c life at p H 1 u s i n g c o m p a r a t i v e g e n o m i c s ) Q u a t r i n i , R. , H o l m e s , D . , V a l d é s , J . . C e n t r o d e B i o i n f o r m á t i c a y B i o l o g í a G e n ó m i c a , F u n d a c i ó n C i e n c i a p a r a la V i d a . P r o g r a m a d e d o c t o r a d o en B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d A n d r é s B e l l o . \ C e n t r o d e B i o i n f o r m á t i c a y B i o l o g í a G e n ó m i c a , F u n d a c i ó n C i e n c i a p a r a la V i d a . P r o g r a m a d e d o c t o r a d o en B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d A n d r é s B e l l o . . P a t r o c i n a n t e : J e d l i c k i . E.. L a s f u n c i o n e s fisiológicas r e g u l a d a s por el s i s t e m a q u o r u m s e n s i n g (QS) mediado por el par génico afel/afeR en la bacteria quimiolitoautótrofa Acidithiobaciiius ferrooxidans son aún desconocidas. Como se ha descrito en otras bacterias G r a m - n e g a t i v a s . e s p o s i b l e q u e e n e s t e m i c r o o r g a n i s m o el Q S r e g u l e la p r o d u c c i ó n d e e x o p o l i s a c á r i d o s y la f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s , a m b o s f e n o t i p o s r e l a c i o n a d o s c o n el p r o c e s o d e b i o l i x i v i a c i ó n N o s p r o p u s i m o s r e a l i z a r un a n á l i s i s b i o i n f o r m á t i c o d e la secuencia n u c l e o t í d i c a d e l g e n o m a d e A. ferrooxidans A T C C 2 3 2 7 0 con el o b j e t i v o d e i d e n t i f i c a r s i t i o s d e u n i ó n p u t a t i v o s p a r a el r e g u l a d o r transcripcional de Q S AfeR. Para esto, c o n s t r u i m o s un conjunto de Modelos Ocultos de Markov (HMM) b a s a d o s en la secuencia o p e r a d o r a del g e n afei. L o s s i t i o s d e u n i ó n p u t a t i v o s i d e n t i f i c a d o s en la b ú s q u e d a fueron agrupados de acuerdo a diferentes parámetros, i n c l u y e n d o su p o s i c i ó n r e l a t i v a al c o d ó n d e i n i c i o m á s c e r c a n o y s u v e c i n d a d con p r o m o t o r e s s i g m a 70. Se identificaron 7 6 g e n e s q u e r e p r e s e n t a n 2 . 4 % d e los O R F s t o t a l e s d e A. ferrooxidans. Éstos codifican para proteínas que pertenecen a diferentes categorías f u n c i o n a l e s . I n t e r e s a n t e m e n t e , y en d i r e c t a r e l a c i ó n c o n nuestra h i p ó t e s i s d e t r a b a j o , se i d e n t i f i c a r o n t r e s g e n e s c o d i f i c a n t e s p a r a p r o t e í n a s q u e p a r t i c i p a n en el m e t a b o l i s m o d e p o l i s a c á r i d o s . A d e m á s , s e e n c o n t r a r o n 5 r e g u l a d o r e s t r a n s c r i p c i o n a l e s p e r t e n e c i e n t e s a la familia LysR y dependientes de sigma 54. Estos resultados abren n u e v a s p e r s p e c t i v a s r e s p e c t o del rol q u e p o d r í a t e n e r el s i s t e m a Q S afel/afeR de A. ferrooxidans. Sin embargo, estos resultados bioinformáticos deberán ser c o n f i r m a d o s con e x p e r i m e n t o s biológicos. L a s m i c r o o r g a n i s m o s p a r t i c i p a n t e s en p r o c e s o s biogeoquímicos a s o c i a d o s a la b i o m i n e r í a s e c a r a c t e r i z a n por p r o l i f e r a r en a m b i e n t e s ácidos y por obtener energía d e s d e fuentes inorgánicas de hierro y a z u f r e . El e s t u d i o d e e s t o s m i c r o o r g a n i s m o s y d e los p r o c e s o s m o l e c u l a r e s r e s p o n s a b l e s d e la b i o l i x i v i a c i ó n h a n s i d o i m p e d i d o s p o r la f a l t a d e u n s i s t e m a d e m a n i p u l a c i ó n g e n é t i c a . Sin e m b a r g o , la s e c u e n c i a c i ó n d e los g e n o m a s d e a l g u n o s m i e m b r o s d e e s t e consorcio de microorganismos ha permitido descifrar parte i m p o r t a n t e d e los p r o c e s o s m e t a b ó l i c o s r e l e v a n t e s p a r a el p r o c e s o d e b i o l i x i v i a c i ó n . C o n e l fin d e o b t e n e r u n a v i s i ó n m a s a m p l i a y c o m p l e t a de las p o t e n c i a l e s a c t i v i d a d e s biológicas y su i m p a c t o en los p r o c e s o s b i o g e o q u í m i c o s p r e s e n t e s en el n i c h o d e b i o l i x i v i a c i ó n h e m o s s e c u e n c i a d o y analizado a través de diversas herramientas b i o i n f o r m á t i c a s l o s g e n o m a s d e A. c a l d u s y A . t h i o o x i d a n s . L a i n f o r m a c i ó n g e n e r a d a s e a n a l i z ó en c o n j u n t o c o n la i n f o r m a c i ó n d i s p o n i b l e p a r a el g e n o m a d e A . f e r r o o x i d a n s m e d i a n t e h e r r a m i e n t a s d e g e n ó m i c a c o m p a r a t i v a . L o s r e s u l t a d o s o b t e n i d o s m u e s t r a n la p r e s e n c i a d e d i s t i n t o s m e c a n i s m o s p a r a la o b t e n c i ó n d e e n e r g í a a partir de s u s t r a t o s m i n e r a l e s , a s i m i l a c i ó n de n u t r i e n t e s , m o t i l i d a d y quimiotaxis. El análisis de los tres genomas del genero A c i d i t h i o b a c i l l u s p e r m i t i ó e s t a b l e c e r y a n a l i z a r el ? p a n g e n o m a ? ( g e n o m a comunitario) d e este g e n e r o . Esta información nos permitió identificar funciones conservadas en estas bacterias y la e s t r u c t u r a c i ó n d e r e d e s d e r e g u l a c i ó n t r a n s c r i p c i o n a l y m e t a b ó l i c a , lo q u e en s u c o n j u n t o n o s e n t r e g a n l a s b a s e s f u n d a m e n t a l e s p a r a descifrar el potencial impacto ecofisiológico de estos microorganismos. LA PROTEINA H U R , E S U N M O D U L A D O R D E L INICIO D E L A T R A D U C C I O N M E D I A D A P O R I R E S E N HIV-1 Y H C V ( T h e E l a v - l i k e p r o t e i n , H u R , is a m o d u l a t o r of H I V a n d H C V IRES-mediated translation initiation.) R i v a s , A . , R a m d o h r , P.\ Vallejos, M. , D o r m o y - R a c l e t , V , R o d r í g u e z , F. , V a l i e n t e , F. , Huidobro-Toro, J . P . , Gallouzi, I. , L ó p e z - L a s t r a , M . . L a b o r a t o r i o de Virología M o l e c u l a r , F a c u l t a d de M e d i c i n a , Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de C h i l e , D e p a r t m e n t of B i o c h e m i s t r y , F a c u l t y of M e d i c i n e , McGill University, Montreal, Q u e b e c , C a n a d á , D e p a r t a m e n t o de Fisiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile . IDENTIFICACIÓN D E UN SITIO I N T E R N O D E E N T R A D A D E L RIBOSOMA EN LA REGIÓN 5'UTR DEL mRNA COMPLETO DEL V I R U S D E L T U M O R M A M A R I O M U R I N O ( I d e n t i f i c a t i o n of an I R E S e l e m e n t in t h e m R N A of m u r i n e m a m m a r y t u m o r v i r u s ) V a l l e j o s , M. , R a m d o h r , P. , T a p i a , K. , V a l i e n t e - E c h e v e r r í a , F. , L o p é z - L a s t r a , M . . Laboratorio de Virología Molecular, C e n t r o de Investigaciones M é d i c a s , F a c u l t a d de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile . 1 1 1 2 3 1 3 1 2 1 1 2 3 T h e h u m a n embryonic lethal abnormal visión (ELAV)-like protein, H u R , is k n o w n t o e n h a n c e m R N A s t a b i l i t y t h r o u g h b i n d i n g to c o n s e n s u s A U - r i c h e l e m e n t s in 3 - U T R s e q u e n c e s . M o s t r e c e n t l y H u R h a s a l s o b e e n f o u n d t o p a r t i c í p a t e in t r a n s l a t i o n a l c o n t r o l of s p e c i f i c m R N A s . In t h i s s t u d y w e s h o w t h a t H u R p a r t i c i p a t e s in t h e t r a n s l a t i o n a l c o n t r o l of t h e H I V - 1 a n d H C V I R E S e l e m e n t s . H u R f u n c t i o n s a s a r e p r e s s o r o f H I V - 1 I R E S a c t i v i t y , h o w e v e r it a c t s a s an a c t i v a t o r of H C V I R E S . T h e e f f e c t of H u R o n H I V - 1 a n d H C V IRES-driven translation was evaluated in three independent experimental m o d e l s y s t e m s , rabbit reticulocyte lysate. H e L a cells, and Xenopus leavis oocytes. using both overexpression and k n o c k d o w n a p p r o a c h e s . F u r t h e r m o r e , r e s u l t s o b t a i n e d in X e n o p u s l a e v i s o o c y t e s s u g g e s t t h a t H u R m e d i a t e d r e g u l a t i o n of b o t h H I V - 1 a n d H C V I R E S e s d o e s n o t r e q u i r e t h e n u c l e a r t r a n s l o c a t i o n of t h e I R E S - c o n t a i n i n g R N A s . T o g e t h e r our o b s e r v a t i o n s identify H u R as a m o l e c u l a r m o d u l a t o r of b o t h H I V - 1 a n d H C V I R E S e l e m e n t s a n d y i e l d novel insights into the role of t h i s cellular protein in the p o s t - t r a n s c r i p t i o n a l r e g u l a t i o n of v i r a l g e n e e x p r e s s i o n . S u p p o r t e d by F O N D E C Y T - 1 0 6 0 6 5 5 , J E A I - I R D . J P H - T is a m e m b e r of M I F A B ; M L L is m e m b e r of t h e I n s t i t u t o M i l e n i o d e I n m u n o l o g í a e I n m u n o t e r f : la 1 1 2 2 1 1 1 1 1 1 El v i r u s d e l t u m o r m a m a r i o m u r i n o ( M M T V ) m i e m b r o d e la f a m i l i a R e t r o v i r i d a e , es r e s p o n s a b l e del c á n c e r m a m a r i o de r a t ó n . E n este e s t u d i o e v a l u a m o s si la r e g i ó n 5' n o t r a d u c i d a ( 5 ' U T R ) d e l m R N A d e M M T V p o s e e un sitio i n t e r n o d e e n t r a d a de r i b o s o m a s ( I R E S ) . N u e s t r a h i p ó t e s i s s e s u s t e n t a e n la p r e s e n c i a d e e l e m e n t o s I R E S en o t r o s m R N A r e t r o v i r a l e s y r e p o r t e s q u e d e s c r i b e n q u e d u r a n t e la i n f e c c i ó n v i r a l la p r o t e a s a d e M M T V e s c a p a z d e p r o c e s a r e l f a c t o r d e i n i c i a c i ó n e l F 4 G i n h i b i e n d o a s í la t r a d u c c i ó n c a p - d e p e n d i e n t e , sin a f e c t a r la t r a d u c c i ó n IRES d e p e n d i e n t e . U t i l i z a n d o un mRNA b i c i s t r ó n i c o q u e p o s e e e n su r e g i ó n i n t e r c i s t r ó n i c a e l s e g m e n t o 5 ' U T R del m R N A de M M T V y lisado de reticulocitos d e conejo (RRL) c o m o s i s t e m a d e t r a d u c c i ó n in v i t r o , d e m o s t r a m o s q u e la r e g i ó n 5 ' U T R d e M M T V e s c a p a z d e i n i c i a r la s í n t e s i s d e p r o t e í n a s b a j o c o n d i c i o n e s e x p e r i m e n t a l e s en las q u e la t r a d u c c i ó n c a p - d e p e n d i e n t e esta i n h i b i d a , c o m o s o n la p r e s e n c i a d e la p r o t e a s a L del v i r u s d e la f i e b r e a f t o s a J F M D V ) y e n la p r e s e n c i a d e a n á l o g o d e c a p . L o s r e s u l t a d o s d e l o s e n s a y o s in v i t r o s e r a t i f i c a r o n en u n c o n t e x t o c e l u l a r m e d i a n t e e n s a y o s de t r a n s f e c c i ó n en c é l u l a s N M u M G y C o s - 7 . En r e s u m e n e s t e e s t u d i o h a p e r m i t i d o i d e n t i f i c a r un n u e v o I R E S r e t r o v i r a l p r e s e n t e en la r e g i ó n 5 ' U T R del m R N A d e l M M T V . P r o y e c t o F O N D E C Y T 1060655. M V y FV son becarios C O N I C Y T . PR e s becario U N A B . XXXI Reunión Anual SEÑALIZACION CELULAR Y REGULACIÓN METABÓLICA CA2+ MEDIA LA INCORPORACIÓN POR INSULINA EN DE GLUCOSA CARDIOMIOCITOS Y ESTIMULADA L6GLUT4MYC (Ca2+ m e d i a t e s i n s u l i n - s t i m u l a t e d g l u c o s e u p t a k e in c a r d i a c m y o c y t e s L6GLUT4myc) Contreras-Ferrat, A.\ 1 Jaimovich, E. , 1 and 2 Klip, A. , 1 L a v a n d e r o , S . . F O N D A P C E M C , U n i v e r s i d a d de C h i l e , T h e Hospital for Sick C h i l d r e n , T o r o n t o , O N , C a n a d á 2 RIC-8B ES TRANSLOCADO 1 Oíate, J. , por de Ca2+ se MV. . Laboratorio de Investigación de E s t u d i o s A v a n z a d o s Ric-8 del este trabajo 1 Hinrichs, celular. En A LA ISOPROTERENOL m e r n b r a n e in r e s p o n s e t o i s o p r o t e r e n o l a n d c a r b a c h o l ) P a s t e n , Regulación Génica. . participación CITOSOL Y C A R B A C O L ( R I C - 8 B is t r a n s l o c a t e d f r o m t h e c y t o s o l t o t h e p l a s m a m o v i l i z a c i ó n d e los t r a n s p o r t a d o r e s d e g l u c o s a G L U T 4 a la s u p e r f i c i e La EL Genética P.\ Molecular. F a c u l t a d de C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n . Anillo I n s u l i n a e s t i m u l a la c a p t a c i ó n d e g l u c o s a e n c é l u l a s m u s c u l a r e s investigada. DESDE MEMBRANA PLASMATICA EN RESPUESTA A en este evaluó el proceso papel no del ha Ca2+ sido en la i n c o r p o r a c i ó n de glucosa inducida p o r insulina, u s a n d o F L U 0 3 - A M y en Señalización Celular y 1 es una C elegans, canónica familia que de proteínas cumplen mediada por un rol descubiertas importante proteínas G. Al en inicialmente en la s e ñ a l i z a c i ó n no realizar la caracterización c a p t a c i ó n de glucosa ( 3 H - 2 D G ) e n c a r d i o m i o c i t o s y cuantificación del f u n c i o n a l d e la i s o f o m n a R i c 8 B h u m a n a , c l o n a d a r e c i e n t e m e n t e G L U T 4 m y c en superficie de células L 6 G L U T 4 m y c . Insulina indujo un n u e s t r o laboratorio, se e n c o n t r ó q u e ésta no fue c a p a z de i n c r e m e n t a r aumento p o r sí s o l a l o s n i v e l e s d e c A M P al s e r e x p r e s a d a e n c é l u l a s H E K , p e r o bifásico del calcio m á x i m o e n la i n t e n s i d a d d e intracelular ([Ca2+]i), fluorescencia alcanzando un relativa de 2 2 4 ± 2 3 y 219 ± 38 ( [ A F / F ] x 1 0 0 ) en m e d i o c o n y s í n - C a 2 + , r e s p e c t i v a m e n t e , s i e n d o inhibido por genisteina en cardiomiocitos. activada por el complejo Gas, Isoproterenol-receptor la (3-adrenérgico. D a d o que R I C - 8 es u n a proteína cítosólica y q u e tiene la c a p a c i d a d d e i n t e r a c c i o n a r c o n d i f e r e n t e s t i p o s d e s u b u n i d a d e s G a . sin-Ca2+ nosotros efecto estimuló previamente c a p t a c i ó n d e 3 H - 2 D G e n 3,2 ± 0,2 y 3,5 ± 0 , 3 v e c e s e n m e d i o c o n y en c a r d i o m i o c i t o s - E s t e Insulina s í d e p o t e n c i a r a t r a v é s d e s u a c t i v i d a d G E F a la s u b u n i d a d en fue inhibido por Indinavir, citocalasina, B A P T A - A M , A k t i l / 2 , Adpark-ct, LY-294002, U-73122 y quisimos comparar la localización subcelular de esta proteína en condiciones no e s t i m u l a d a s y tratadas con agonistas para 2 - A P B . E n c é l u l a s L 6 G L U T 4 m y c , i n s u l i n a a u m e n t ó el t r a n s p o r t a d o r distintos e n superficie cuales fueron incubadas con y sin Isoproterenol y Carbacol, ligandos 2,1 ± 0,2 y 2 , 0 ± 0,2 v e c e s e n m e d i o c o n y s i n - C a 2 + , G P C R s . Para ello se t r a n s f e c t a r o n c é l u l a s H E K 2 9 3 T , las r e s p e c t i v a m e n t e . B A P T A - A M , A k t i 1/2. L Y 2 9 4 0 0 2 y 2 - A P B i n h i b i e r o n que este efecto parcialmente. r e s p e c t i v a m e n t e . Los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s indican q u e R I C - 8 B no se Estos resultados s u g i e r e n q u e el Ca2+ se unen l i b e r a d o d e s d e c o m p a r t i m i e n t o s i n t r a c e l u l a r e s r e g u l a el t r a n s p o r t e d e encuentra glucosa estimuladas inducido por insulina 1080436, Gradúate Student's FONDAP 1501006, FONDECYT Exchange Program, Canadá. ACF es becano doctorado-CONI.CYT asociado diferentes con a receptores que activan a la m e m b r a n a y que transloca a la a las proteínas plasmática membrana Gs interaccionar publicados, que con las DE GLUCOSA indican subunidades Ga Gq en condiciones no al s e r a c t i v a d a s las proteínas G p o r s u s respectivos G P C R s . Ello resultados y que concuerda Ric8 sólo moQoméhcas y no puede con el hete rotrím ero. NUEVAS ACCIONES MONONUCLEARES DE (New ALDOSTERONA actions of 1 cells) Díaz-Elizondo, J . , Olea-Azar, C. L 4 , 5 Centro FONDAP Farmacéuticas y CEMC. Medicina, 2 , 3 Universidad 2 in CÉLULAS mononuclear 1 , Lavandero , S. , Michea, Facultades Ciencias Químicas y Farmacéuticas EN aldosterone de Ciencias de 1 Chile , Químicas Facultades y de 3 , U n i v e r s i d a d de Chile , Centro 4 5 F O N D A P C E M C . Facultades d e , Medicina, U n i v e r s i d a d de Chile . PRIVACIÓN are activated FONDAP clásicamente por un cardiomyocytes) Toro, 2 Facultad Ciencias Químicas y autofagia 2 mediada con una por chaperonas secuencia reconocimiento al (AMC) aminoacídica receptor lisosomal degrada proteínas consenso especifica, Lamp-2A. Tanto n i v e l e s d e la c h a p e r o n a H s c 7 0 c o m o l o s d e L A M P - 2 A s e de directamente acción sobre células sus células monucleares gradiente de del efectos Ficoll sistema sobre las inmune, células en este trabajo mononucleares.Las de s a n g r e p e r i f é r i c a de rata s e s e p a r a r o n y se trataron con aldosterona. Se por evaluó la 1 B. , Farmacéuticas, g e n ó m i c o . D a d o que se c o n o c e p o c o d e s u s a c c i o n e s y m e c a n i s m o s investigamos DE 1 1 La mecanismo glucose-deprivated 1 CEMC, citosólicas y vascular, FORMAS U n i v e r s i d a d d e C h i l e , A l b e r t E i n s t e i n C o l l e g e of M e d i c i n e , N Y , U S A . previo renal in 1 sodio nivel DIVERSAS Rodríguez, A . , T r o n c o s o , R. , C u e r v o , A . M , Lavandero, S. . Centro A l d o s t e r o n a e s u n a h o r m o n a q u e r e g u l a la h o m e o s t a s i s d e l a g u a y a ACTIVA A U T O F A G I A E N E L C A R D I O M I O C I T O ( D i f f e r e n t t y p e s of a u t o p h a g y a cambios los asocian e n la v e l o c i d a d d e a c t i v a c i ó n d e la A M C , e s p e c i a l m e n t e b a j o c o n d i c i o n e s d e e s t r é s . D a d o q u e el m e t a b o l i s m o glicolítico e s c l a v e e n el c a r d i o m i o c i t o n e o n a t o , e n e s t e t r a b a j o estudiaron los efectos de la compensan el carencia de glucosa sobre se procesos g e n e r a c i ó n d e e s p e c i e s r e a c t i v a s del o x í g e n o ( R O S ) p o r c i t o m e t r í a d e celulares f l u j o y / o f l u o r i m e t r í a u s a n d o D C F - D A c o m o s e n s o r . A d e m á s las R O S balance s e c a r a c t e r i z a r o n p o r r e s o n a n c i a d e s p i n e l e c t r ó n i c o ( E S R ) u s a n d o el r e a c t i v a s d e o x í g e n o , la c a r b o n i l a c i ó n a t r a p a d o r D M P O . L a a c t i v a c i ó n d e la v í a E R K 1 / 2 s e e v a l u ó a t r a v é s agregados d e su fosforilación m e d i a n t e W e s t e r n b l o t . A L D O p r i v a c i ó n , l o s n i v e l e s d e A T P d i s m i n u y e r o n m i e n t r a s q u e los d e L a m p una rápida generación de ROS desde los 5 (100 nM) hasta los estimuló 15 min, que redox intracelular proteicos estrés. dado La que falta d e glucosa alteró aumentaron el las especies de proteínas y se generaron poliubiquitinados. Después de 18 h 2 A y H s c 70 a u m e n t a r o n a s í c o m o la m a s a total mitocondrial. de Los p r i n c i p a l m e n t e e n los m o n o c i t o s , e f e c t o q u e f u e p r e v e n i d o t a n t o p o r el niveles antagonista espironolactona m o d i f i c a r o n . A u n q u e N a c e t i l c i s t e i n a p r e v i n o la g e n e r a c i ó n d e R O S , ( 5 Á u M ) c o m o p o r N - a c e t i l c i s t e i n a . P o r E S R s e d e t e c t ó la g e n e r a c i ó n h u b o u n a u m e n t o e n la m u e r t e c e l u l a r e i n h i b i c i ó n d e la d e g r a d a c i ó n d e la e s p e c i e r a d i c a l a r i a h i d r o x i l o . T a m b i é n a l d o s t e r o n a e s t i m u l ó u n d e la p r o t e í n a a u t o f á g i c a G F P - L C 3 . S e c o n c l u y e q u e la p r i v a c i ó n d e aumento de del receptor de la f o s f o r i l a c i ó n de mineralocorticoide ERK1/2 a los 5 m i n . E s t o s datos s u g i e r e n un posible efecto no g e n ó m i c o d e a l d o s t e r o n a a través de su receptor Conicyt. clásico en las células mononucleares.JDE es becaria glucosa de CHOP activa retículo. BT 1501006 y 24071082. y y BIP, la A M C RT beca son marcadores y la autofagia becarios CONICYT de estrés no pero no genera estrés doctorado apoyo reticular, tesis 'CONICYT. doctoral se de FONDAP 24080060 y Sociedad de Bioquímica y Biología NAD(P)H OXIDASA E S T A I N V O L U C R A D A E N E L A U M E N T O D E L A E X P R E S I O N Y ACTIVIDAD D E HCAT-1 P O R D-GLUCOSA EN E N D O T E L I O F E T A L H U M A N O ( N A P H o x i d a s e is i n v o l v e d i n t h e i n c r e a s e d e x p r e s i ó n a n d activity of h C A T - 1 b y D - g l u c o s e in h u m a n fetal e n d o t e l i u m ) G o n z á l e z , M. , S o b r e v i a , L. . Laboratorio de Fisiología Celular y Molecular (CMPL), Departamento d e Obstetricia y Ginecología, Facultad de Medicina, Escuela d e Medicina. Pontificia Universidad Católica de C h i l e . Patrocinante: Marcelo L o p e z - L a s t r a . A l t a D - g l u c o s a a l t e r a la e x p r e s i ó n d e d i v e r s a s p r o t e í n a s , e n t r e é s t a s y + / h C A T - 1 , i n v o l u c r a d a e n el t r a n s p o r t e d e L - a r g i n i n a , y N A D ( P ) H o x i d a s a , i n v o l u c r a d a e n la s í n t e s i s d e e s p e c i e s r e a c t i v a s d e r i v a d a s d e l oxígeno ( R O S ) en endotelio de vena umbilical humana ( H U V E C ) . E s t u d i a m o s c a m b i o s en el p r o t e o m a (electroforesis b i d i m e n s i o n a l ) p o r D-glucosa (25 m M , 24 horas) e insulina (1 n M , 8 horas) y los efectos de e s t a s m o l é c u l a s e n la s í n t e s i s d e R O S , m R N A d e h C A T - 1 y t r a n s p o r t e d e L-arginina e n H U V E C , en ausencia y e n presencia d e apocinina (10 Á u M , inhibidor d e N A D ( P ) H o x i d a s a ) . A l t a D - g l u c o s a a u m e n t ó la síntesis d e R O S , e l n i v e l d e h C A T - 1 m R N A y el t r a n s p o r t e d e L - a r g i n i n a . E s t e efecto de D-glucosa fue bloqueado por apocinina e insulina. La síntesis d e R O S fue disminuida p o r insulina, un efecto q u e no fue bloqueado p o r a p o c i n i n a . T a n t o alta D - g l u c o s a c o m o i n s u l i n a m o d i f i c a n l a e x p r e s i ó n d e diferentes p r o t e í n a s e n H U V E C . El a u m e n t o d e la e x p r e s i ó n y a c t i v i d a d de hCAT-1 podría ser mediado por R O S derivado de N A D ( P ) H oxidasa. L a inhibición de los efectos de D-glucosa p o r insulina podrían deberse a una inhibición de la actividad de NAD(P)H oxidasa en HUVEC.FONDECYT 1070865, 1080534, 7080139, 7070249. Beca CONICYT 23070213. 1 1 1 INHIBICIÓN DE L A ACTIVIDAD AUTOFOSFORILACIÓN Inhibition of EN SU Enzymatic Activity 1 of 1 Autophosphorylation) Budini, JE. . ENZIMÁTICA EXTREMO CK1a CK1a by es una serina/treonina subfamilia integrada 1 , G . , Jedlicki, A . , Allende, Celular y Molecular, Facultad de proteína por 6 isoformas quinasa por genes 1 1 2 1 2 cultured cardiomyocytes) P e d r o z o , Z . una distintos 1 , 2 C . \ Donoso, P. Molecular, Centro que conforma codificadas 1 P O R DEGRADACIÓN D E L R E C E P T O R D E RYANODINA TIPO 2 E N CULTIVOS D E C A R D I O M I O C I T O S ( D e g r a d a t i o n of R y R 2 in Medicina, Universidad d e Chile. V Patrocinante: Jacob. G.. CK1 REGULACIÓN D E L METABOLISMO ENERGÉTICO CARDIACO P O R INSULINA Y S U RELACIÓN C O N FUSIÓN Y FISIÓN M I T O C O N D R I A L ( R e g u l a t i o n of c a r d i a c energetic m e t a b o l i s m b y i n s u l i n a n d its r e l a t i o n s h i p w i t h m i t o c h o d r i a l f u s s i o n a n d f i s i ó n ) Parra, V . , Morales, C. , Eisner, V. , Zorzano, A . , Lavandero, S. . Centro F O N D A P C E M C , U n i v e r s i d a d d e Chile, Chile. \ Instituto d e Investigación Biomédica, Barcelona, España. . El n ú m e r o , e s t r u c t u r a y f u n c i ó n d e l a s m i t o c o n d r i a s d e p e n d e n d e eventos d i n á m i c o s y b a l a n c e a d o s de fusión y fisión. Evidencias r e c i e n t e s m u e s t r a n q u e la m a q u i n a r i a d e l a f u s i ó n m i t o c o n d r i a l t a m b i é n regula su m e t a b o l i s m o ; sin e m b a r g o , a ú n n o existe u n a relación directa entre a m b o s p r o c e s o s . D a d o que insulina regula e n z i m a s c l a v e s d e l m e t a b o l i s m o i n t e r m e d i a r i o del c a r d i o m i o c i t o , e s p o s i b l e p r o p o n e r q u e e s t a h o r m o n a t a m b i é n c o n t r o l e la m o r f o l o g í a m i t o c o ridrial. E n este trabajo se investigaron parámetros metabólicos y morfológicos d e mitocondrias de cardiomiocitos d e r a t a e x p u e s t o s a i n s u l i n a 1-10 n M p o r 0 - 2 4 h. A l u t i l i z a r la s o n d a m i t o t r a c k e r g r e e n - A M , m i c r o s c o p í a c o n focal y r e c o n s t r u c c i ó n 3 D , s e o b s e n / ó q u e i n s u l i n a p r o m o v i ó l a f u s i ó n m i t o c o n d r i a l , lo q u e s e tradujo e n u n a u m e n t o significativo del v o l u m e n p r o m e d i o del o r g a n e l o a las 3 h d e t r a t a m i e n t o . El p o t e n c i a l de m e m b r a n a m i t o c o n d r i a l y el c o n t e n i d o i n t r a c e l u l a r d e A T P s e u t i l i z a r o n p a r a d e t e r m i n a r el m e t a b o l i s m o m i t o c o n d r i a l , o b s e r v á n d o s e q u e e s t o s p a r á m e t r o s a u m e n t a r o n d u r a n t e el m i s m o p e r í o d o d e t i e m p o . S e e s t a b l e c e a s í , p o r p r i m e r a v e z , u n a r e l a c i ó n d i r e c t a e n t r e la m o r f o l o g í a y la f u n c i ó n m i t o c o n d r i a l , s i e n d o a m b o s procesos regulados por insulina. Parra V. es becada C O N I C Y T . F O N D A P 1501006, FONDECYT 1080436, Proyecto Colaboración Internacional P C I 2 0 0 7 A 7 0 5 1 5 , Ministerio de Educación y Ciencia, España. (The C-terminal 1 M. , Jacob ICBM, P r o g r a m a de Biología DE C-TERMINAL. Molecular , Lavandero, S . ICBM, Facultad FONDAP 2 , 4 1 , 2 , Sánchez, G de Medicina, CEMC, 2 , 3 , Fernández, P r o g r a m a de Biología Celular y 1 Universidad 2 Universidad de Chile , de Chile , Programa de 3 Fisiopatología, I C B M , Facultad de Medicina, Universidad de Chile , Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de 4 ( C K 1 a , y 1 , y 2 , y 3 5 y s). C K 1 a p u e d e procesamiento alternativo de generar cuatro variantes p o r su m R N A (CK1a. CK1aL, CK1aS y Chile . Los canales de calcio/receptores de ryanodina ( R y R 2 ) del retículo C K I a L S ) . E l e s t u d i o d e la r e g u l a c i ó n d e la a c t i v i d a d e n z i m á t i c a d e C K 1 sarcoplasmático se excitación-contracción ha centrado en su autofosforilación. Está demostrado q u e la a u t o f o s f o r i l a c i ó n d e l e x t r e m o c a r b o x i l o t e r m i n a l de C K 1 5 y C K 1 s causa u n a i n h i b i c i ó n d e s u a c t i v i d a d c a t a l í t i c a . P o r e s p e c t r o m e t r í a d e m a s a se identificaron sitios d e a u t o f o s f o r i l a c i ó n e n e l e x t r e m o carboxilo terminal d e C K 1 a y s u s variantes. M e d i a n t e la c r e a c i ó n d e m u t a n t e s puntuales y de deleción de CK1a10-325, CK1a (CK1 1-325(S311A,S312A,T321A,T323A), a CK1a10-325(S311A.S312A.T321A.T323A)), se confirmó q u e estos s o n los principales sitios de autofosforilación y q u e son los responsables pierden de inhibir estos sitios la a c t i v i d a d enzimática. (CK1a10-325(S311A,S312A,T321A,T323A) CK1a1-325(S311A,S312A,T321A,T323A)) presentan el doble Las mutantes de actividad no se q u e la enzima autofosfonlan nativa que y y (CK1a1-325), r e s u l t a d o q u e s e r í a e x p l i c a d o p o r el a u m e n t o e n c o n t r a d o e n la e f i c i e n c i a catalítica (k c a t /K ). m Este es el primer reporte de inhibición por a u t o f o s f o r i l a c i ó n d e la a c t i v i d a d d e C K 1 a , s u g i r i e n d o q u e este podría s e r un mecanismo estudiadas N° 1060107. de hasta regulación ahora. común para Patrocinado las por isoformas Proyecto de C K 1 Fondecyt son protagonistas del claves e n el cardiomiocito. acoplamiento Durante la isquemia/re perfusión (l/R) ocurre una rápida disminución del RyR2, s i n e m b a r g o l a s v í a s d e d e g r a d a c i ó n i m p l i c a d a s se d e s c o n o c e n . E n estados fisiológicos degradación lisosoma y patológicos, de proteínas (autofagia). En las intracelulares este principales vías s o n el p r o t e o s o m a trabajo estudiamos de y el las vías de d e g r a d a c i ó n d e l R y R 2 e n el c a r d i o m i o c i t o b a j o c o n d i c i o n e s b á s a l e s y de l/R. Se utilizaron cardiomiocitos D M E / M 1 9 9 bajo 9 5 % aire y 5 % C 0 2 cultivados en medio (condición basal) o expuestos a l/R s i m u l a d a p o r 8 y 1 6 h , r e s p e c t i v a m e n t e . L a v i d a m e d i a d e l RyR2 3 5 se determinó S-metionina por como ensayos trazador. de Para pulso y determinar caza las usando vías de d e g r a d a c i ó n i m p l i c a d a s s e utilizaron inhibidores del p r o t e o s o m a y la autofagia. Los niveles proteicos del R y R 2 se determinaron por W e s t e r n Blot. L a v i d a m e d i a d e l R y R 2 cardiaco fue de 3 0 Á ± 1 2 h, siendo a u m e n t a d a significativamente p o r inhibidores d e calpaínas p e r o n o p o r i n h i b i d o r e s d e l p r o t e o s o m a o la a u t o f a g i a . S i n e m b a r g o , durante la previnieron condiciones mediante l/R simulada, la degradación básales, proteasas el tipo sólo del RyR2 los inhibidores .del RyR2. se calpaína, Se degradaría en proteosoma concluye cambio que bajo principalmente durante la l/R simulada, este canal de calcio/receptor tendría c o m o principal vía de degradación al proteosoma.FONDECYT 1080481, FONDAP 1501006, B e c a A T C O N I C Y T 2 4 0 8 0 0 4 4 . Z P e s becaria C O N I C Y T . XXXI Reunión Anual - ESTRUCTURA Y FUNCION DE PROTEINAS E L S E C R E T O M A D E Peniciüium ELECTROFORESIS purpurogenum: ANALISIS BIDIMENSIONAL ESPECTROMETRIA DE MASAS (The secretóme from coupled : mass spectrometry) 3 Black, G. , 1 Navarrete, 2 M. , 3 Callegari, E. , Z h a n g , 1 Eyzaguirre, A Penicillium p u r p u r o g e n u m : analysis by t w o d i m e n s i o n a l electrophoresis to POR ACOPLADO J. . Departamento de Ciencias U S A 2 , Universidad de Northumbna, Newcastle, 3 Es FUNCIONALES group mapping of 2 Huenchuñir, P. , Class II viral fusión 3 López-Lastra, M. , proteins) 1 Lagos, 1 Pérez-Acle, EN functional 4 T. - . C.F. , Centro de Q u í m i c a M é d i c a , F a c u l t a d de Q u í m i c a , P U C , Laboratorio de Virología 1 2 3 Molecular, Facultad de M e d i c i n a , P U C , F u n d a c i ó n Ciencia para la 4 Vida . E n v e l o p e d v i r u s e s infect cells via f u s i ó n of t h e virus m e r n b r a n e w i t h a - " ¡ c i l l i u m p u r p u r o g e n u m e s u n h o n g o a i s l a d o d e s u e l o s del s u r d e Chile. GRUPOS Bioinformática, Facultad de Ciencias Biológicas, P U C , Laboratorio de Inglaterra. . 1 DE M. , 1 SD, COMPARATIVO P R O T E Í N A S D E F U S I Ó N V I R A L C L A S E II ( C o m p a r a t i v e Biológicas, Universidad A n d r é s Bello, S a n t i a g o . , U n i v e r s i d a d de Dakota del Sur, Vermillion, MAPEO un activo secretor de enzimas que permiten al hongo h o s t cell m e r n b r a n e t h r o u g h v i r a l f u s i ó n p r o t e i n s . U p o n appropriate tnggering, the fusión protein interacts with the target mernbrane and d e g r a d a r s u s t r a t o s d e d i s t i n t a c o m p l e j i d a d c o n el o b j e t i v o d e o b t e n e r undergoes a conformational c h a n g e that drives the mernbrane fusión los nutrientes r e a c t i o n . T h e s t r u c t u r e s o f t h e e c t o d o m a i n s of f u s i ó n p r o t e i n s necesarios para su m e t a b o l i s m o . Los sustratos que : r'ntienen h e m i c e l u l o s a s i n d u c e n u n a activa s e c r e c i ó n de e n z i m a s por flaviviruses :arte amino del hongo. Uno de los componentes importantes de las revealed acid " - • n i c e l u l o s a s e s el x i l a n o , el c u a l r e q u i e r e p a r a s u d e g r a d a c i ó n d e la structures participación construction "asas: de distintas endo xilanasas, oil e s t e r a s a s utilizada enzimas, y acetil en el cultivo degradación lo que denominadas beta-xilosidasas, xilano induce influye arabinofuranosidasas, esterasas. las en La enzimas la genéricamente fuente de carbono requeridas composición del para that sequence although these conservation, are remarkably of consensus similar. proteins their In functionality lack secondary this work maps and we for from detectable tertiary report functional the group b i n d i n g in c l a s s II f u s i ó n p r o t e i n s . T h e c a l c u l a t i o n s w e r e d o n e f o r t h r e e flavivirus class II envelope glycoproteins: Dengue virus (DENV), su Tick-Borne Encephalitis Virus ( T B E V ) a n d W e s t Nile Virus ( W N V ) . The secretoma. results g a v e c o n s e n s u s m a p s that i n d í c a t e functional g r o u p s that are Utilizando electroforesis b i d i m e n s i o n a l se ha c o m p a r a d o el s e c r e t o m a insensitive to the specific protein conformation a n d the existence d e l h o n g o al c r e c e r l o e n d i s t i n t a s f u e n t e s d e c a r b o n o . D e e s t a f o r m a alternative b i n d i n g sites that c o u l d be t a r g e t e d in t h e rational d e s i g n of se aprecia la sobre-expresión o inhibición de la expresión de broad-spectrum inhibitors.Acknowledgments: d i f e r e n t e s p r o t e í n a s r e p r e s e n t a d a s p o r m a n c h a s al t e ñ i r l o s g e l e s c o n W81XWH-08-1-0285 S y p r o R u b y . M e d i a n t e el u s o d e u n a t i n c i ó n e s p e c í f i c a t a m b i é n C i e n c i a p a r a la V i d a ( P F B - 1 6 ) . sido posible detectar manchas el g r a d o d e g l i c o s i l a c i ó n ha del s e c r e t o m a . USAMRMC. Funding from C F L is a f e l l o w of t h e of grant Fundación Las son cortadas p a r a p r o c e s a r l a s c o n tripsina y s o m e t e r los péptidos a análisis identificación. identificar por Utilizando algunas diferencialmente espectrometría la b a s e da xilanasas, expresadas cultivo.Financiamiento: las en FONDECYT de datos masas Mascot, cuales para hemos se distintas su podido encuentran condiciones 1040201 y 1070368, Proyectos Internos 03-05R y 07-06/I y Vicerrectoría de UNAB de Investigación y Postgrado U N A B R O L D E R E S I D U O S B A S I C O S E N E L S E N S A D O D E pH E N L O S DIFERENCIAS C A N A L E S T A S K 2 Y T A S K 3 ( R o l e of b a s i c r e s i d u e s i n p H s e n s i n g of EXTRACELULAR Task2 and Task3 channels) 2 1 Sepulveda, 3 Navarro, C. , Chipot, C. , Niemeyer, M I 4 F. , 2 González-Nilo, . C E C S , Valdivia \ F. , CBSM, POTASIO DE LA UNIDAD ENTRE LOS PRESENTES EN SENSORA CANALES LOS DE DEL pH ENTRADA ESTOMAS. DE (Differences in extracellular pH sensor units between the stomatal inward potassium F . D . , D r e y e r , I. . C e n t r o de B i o i n f o r m á t i c a y S i m u l a c i ó n estado U n i v e r s i d a d de T a l c a , U n i v e r s i t a t P o t s d a m , Instituí f u r B i o c h e m i e u n d de 3 protonación de 4 aminoácidos básicos explicaría el 1 W. , Morales, Nuestro Biologie, estados Pflanzenbiologie, G e r m a n y . barreras P a r a que se a b r a n los e s t o m a s y neutro de la energéticas importantes Arg224 cuando de TASK2, pasa de estado genera activado (aprox 6 González-Nilo, Molecular, 1 estudio demuestra cargado Alzate, J. , 2 m e c a n i s m o de a c t i v a c i ó n de los c a n a l e s T A S K 2 y T A S K 3 . q u e el p e r f i l d e e n e r g í a l i b r e e n t r e los S.\ 1 channels) L a a c t i v a c i ó n d e los c a n a l e s d e K s e n s a d o s p o r p H p o r c a m b i o s d e 2 González, 1 Universidad de T a l c a , C N R S / U H P , F r a n c i a , C E C S , Valdivia . Heisenberg-Gruppe Biophysik und Molekulare 2 acidificación del a p o p l a s m a , e n las p l a n t a s , es prerrequisito lo c u a l garantiza que los canales la de K c a l / m o l ) a estado inactivado (sobre 2 0 Kcal/mol). Estos perfiles de entrada d e potasio d e p e n d i e n t e s de voltaje (canales K ) perciban esta energía libre d e m u e s t r a n que existe una p e r t u r b a c i ó n electrostática y acidificación y se a b r a n c o n u n m e n o r g a s t o de energía. Las u n i d a d e s i n e s t r u c t u r a l i m p o r t a n t e e n el filtro d e s e l e c t i v i d a d d u r a n t e el p r o c e s o d e s e n s o r a s del p H extracelular en los c a n a l e s K c a m b i o d e e s t a d o d e p r o t o n a c i ó n d e la A r g , q u e e x p l i c a la i n a c t i v a c i ó n h i s t i d i n a s e x p u e s t a s al a p o p l a s m a . S i n e m b a r g o , e n el c a n a l K A T 1 d e tipo-C observada Arabidosis experimental mente. De esta misma forma hemos r e a l i z a d o u n e s t u d i o s i s t e m á t i c o de D i n á m i c a M o l e c u l a r del canal de K TASK3. sensor Nuestros resultados durante el conformacionales inaccesible proceso importantes, demuestran de pasando al s o l v e n t e a u n e s t a d o q u e el r e s i d u o d e protonación, de un sufre electrostático que importantes no cambios e n el p o r o d e l c a n a l K A T 1 , f o r m a n d o p a r t e d e la s e c u e n c i a c o n s e n s o neutro solvente; demuestra la a c t i v a c i ó n d e l c a n a l . N u e s t r o e s t u d i o c o n c l u y e q u e la a c t i v a c i ó n de esta electrostáticos gobernada conformacionales del filtro fundamentalmente de selectividad y no por por cambios el potencial electrostático producido durante el p r o c e s o d e c a m b i o d e e s t a d o de protonación de la Científico A C T / 4 6 . His sensorAgradecimientos: la m u t a c i ó n d e la ú n i c a h i s t i d i n a ( H 2 6 7 ) e x p u e s t a al m e d i o e x t r a c e l u l a r n o a f e c t a la d e p e n d e n c i a d e p H . L a H 2 6 7 e s t á T V G Y G D X H . E n la p o s i c i ó n X d e e s t a s e c u e n c i a K A T 1 p r e s e n t a u n a durante TASK3 existen son His, e s t e c a m b i o c o n f o r m a c i o n a l g e n e r a u n a r e o r g a n i z a c i ó n d e la r e d d e e n l a c e s d e H . L a e v a l u a c i ó n del p o t e n c i a l d e los e s t o m a s cambios estado c a r g a d o a c c e s i b l e al thaliana i n Proyecto Anillo fenilalanina, mientras que el r e s t o d e l o s canales K posee j n l e u c i n a e n X. U n m o d e l o p o r h o m o l o g í a d e K A T 1 p e r m i t i ó una distinguir q u e las c a d e n a s l a t e r a l e s d e la F 2 6 6 y la H 2 6 7 d i s t a n m e n o s d e 5 A . . . . S e p l a n t e ó la h i p ó t e s i s q u e la H 2 6 7 d e K A T 1 n o p o d í a s e n s a r el p H porque la F 2 6 6 hipótesis se desplaza corroboró su pK a a valores mediante no mutagénesis detectables. sitio Está dirigida y experimentos de voltaje-clamp con dos electrodos. Mediante cálculos de Mecánica establecer sensora que puede Cuántica-Mecánica si en la posición protonarse y Molecular X hay (QM/MM), una deprotonarse, leucina, mientras se la que pudo histidina si está p r e s e n t e u n a f e n i l a l a n i n a , e s t o s e v e n t o s n o s e p r o d u c e n p o r q u e la fenilalanina H267. estaría formando una i n t e r a c c i ó n tipo catión-pi c o n la Sociedad de Bioquímica y Biología E S T U D I O S in sitico E in vitro D E L D E S P L E G A M I E N T O T É R M I C O DE LA FOSFOFRUCTOQUINASA-2 DE Escherichia coii: IMPORTANCIA D E LA INTERFAZ MONÓMERO-MONÓMERO. {in silico a n d in vitro studies of t h e t h e r m a l unfolding of p h o s p h o f r u c t o k i n a s e - 2 f r o m Escherichia coii i m p o r t a n c e of t h e m o n o m e r - m o n o m e r interface.) Merino, F . . Baez. M . , Babul, J . \ Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad d e Ciencias, Universidad de Chile . 1 1 1 L a f o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 d e Escherichia coli e s u n h o m o d í m e r o , c u y o m o n ó m e r o e s t á c o m p u e s t o p o r u n d o m i n i o g r a n d e y u n o p e q u e ñ o . El sitio activo s e e n c u e n t r a en un s u r c o entre e s t o s d o m i n i o s . La mterfaz entre los m o n ó m e r o s c o m p r o m e t e a a m b o s d o m i n i o s m e n o r e s en u n a i n t e r a c c i ó n p r i n c i p a l m e n t e a p o l a r . P a r a e s t u d i a r la i m p o r t a n c i a d e e s t a i n t e r f a z e n la e s t a b i l i d a d d e f o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 s e d i s e ñ ó l a m u t a n t e L 9 3 A q u e i n t r o d u c e u n a c a v i d a d h i d r o f ó b i c a en la interfaz. Esta mutante e s m o n o m é r i c a y posee u n a cantidad menor de estructura s e c u n d a r i a q u e el d í m e r o . E x p e r i m e n t o s d e d e s p l e g a m i e n t o p o r t e m p e r a t u r a d e la m u t a n t e m u e s t r a n q u e , a d i f e r e n c i a d e la e n z i m a s i l v e s t r e , el p r o c e s o o c u r r e m e d i a n t e u n a t r a n s i c i ó n n o c o o p e r a t i v a . El d e s p l e g a m i e n t o d e la f o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 i n d u c i d o p o r t e m p e r a t u r a fue s i m u l a d o m e d i a n t e d i n á m i c a m o l e c u l a r utilizando la función de energía efectiva E E F 1 i m p l e m e n t a d a en C H A R M M . Simulaciones del m o n ó m e r o a 3 0 0 K muestran un reordenamiento del dominio menor a u n q u e n o c a p t u r a n la p é r d i d a d e e s t r u c t u r a s e c u n d a r i a o b s e r v a d a e n la m u t a n t e L 9 3 A . E x p e r i m e n t o s d e d e s p l e g a m i e n t o a p a r t i r d e l d í m e r o m u e s t r a n q u e la disociación d e los m o n ó m e r o s ocurre l u e g o de u n a g r a n p é r d i d a d e e s t r u c t u r a s e c u n d a r i a , s u g i r i e n d o q u e el p a s o limitante del d e s p l e g a m i e n t o es la ruptura d e la interfaz. E x p e r i m e n t o s d e d e s p l e g a m i e n t o a partir d e l m o n ó m e r o m u e s t r a n q u e é s t e sigue un c a m i n o d i s t i n t o al d e l d í m e r o . l o q u e s u g i e r e q u e l a i n t e r f a z e n t r e m o n ó m e r o s e s i m p o r t a n t e t a n t o para la ruta d e d e s p l e g a m i e n t o c o m o p a r a la estabilidad de la e n z i m a . F o n d e c y t 1 0 5 0 8 1 8 ANÁLISIS D E L A FUNCIÓN D E L ASA FLEXIBLE DE LA I N T E G R A S A D E M - M u L V P O R M U T A G E N E S I S . ( A n a l y s i s of t h e f u n c t i o n o f t h e f l e x i b l e l o o p of M - M u L V i n t e g r a s e b y m u t a g e n e s i s . ) A c e v e d o , M.L. , León, O. . Laboratorio de Retrovirus, Programa de Virología, Facultad de Medicina, Universidad de Chile . L a integrasa (IN) del virus de l e u c e m i a m u r i n a de M o l o n e y ( M - M u L V ) e s e s e n c i a l p a r a el c i c l o r e p l i c a t i v o d e l v i r u s . P o s e e t r e s d o m i n i o s , el N - t e r m i n a l , C - t e r m i n a l y el d o m i n i o c e n t r a l q u e p r e s e n t a l a a c t i v i d a d c a t a l í t i c a d e l a e n z i m a . D e n t r o d e s u e s t r u c t u r a e n l a I N d e H I V - 1 , el dominio catalítico presenta un a s a flexible q u e podría estar involucrada en la unión del e x t r e m o del L T R . P o r h o m o l o g í a de s e c u e n c i a s e n t r e l a s I N s s e e s t a b l e c i ó q u e el a s a d e la IN de M-MuLV corresponde a los aminoácidos 2 0 8 a 218. S e seleccionaron los residuos T y r 2 1 1 , A r g 2 1 2 , G l n 2 1 4 , S e r 2 1 5 , S e r 2 1 6 y G l n 2 1 8 d e l a s a d e la IN d e M - M u L V p a r a h a c e r m u t a g e n e s i s sitio dirigida y s e a n a l i z ó la actividad e n z i m á t i c a d e c a d a m u t a n t e . S e o b s e r v ó q u e las e n z i m a s c o n las m u t a c i o n e s Y 2 1 1 A, R 2 1 2 A , R 2 1 2 Q y Q 2 1 4 A poseen m e n o s de un 2 0 % de actividad de integración concertada y t r a n s f e r e n c i a d e h e b r a . N i n g u n a m u t a n t e a f e c t ó s i g n i f i c a t i v a m e n t e la a c t i v i d a d d e p r o c e s a m i e n t o 3 ' A l a n a l i z a r el e f e c t o d e l a s m u t a c i o n e s en la desintegración, las mutantes Y 2 1 1 A , Q 2 1 4 A y Q 2 1 4 N fueron inactivas c u a n d o se utilizó un sustrato d u m b b e l l sin la cola 5'. A d e m á s la mutante Q214A presentó una disminución en el f o t o - e n t r e c r u z a m i e n t o c o n u n s u s t r a t o c o n y o d o - u r i d i n a e n el e x t r e m o 5' p r o c e s a d o . Nuestros r e s u l t a d o s d e m u e s t r a n q u e el a s a flexible de la I N d e M - M u L V e s t á e n c o n t a c t o c o n e l e x t r e m o 5 ' p r o c e s a d o d e l L T R . P r o b a b l e m e n t e T y r 2 1 1 , A r g 2 1 2 y G l n 2 1 4 e s t a b i l i z a r í a n el D N A p r o c e s a d o p a r a q u e o c u r r a la i n t e g r a c i ó n . F o n d . e c y t 1 0 4 0 4 0 9 1 1 1 1»! Molecular UNIÓN DE METALES DIVALENTES EN F O S F O F R U C T O Q U I N A S A - 2 D E E. coii. E S T U D I O S C I N É T I C O S Y D E E P R . ( B i n d i n g of di v a l en t m e t a l s in p h o s p h o f r u c t o k i n a s e - 2 f r o r n E. coii. K i n e t i c a n d E P R s t u d i e s ) R i v a s - P a r d o , J . A . . W i l s o n , C . A . M . , Caniuguir, A . , Guixé, V . Laboratorio de bioquímica y biología molecular, departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile . 1 1 1 1 1 La f o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 de E coii p e r t e n e c e a la s u p e r f a m i l i a riboquinasa e n la q u e el m o t i v o c o n s e r v a d o N X X E h a s i d o a s o c i a d o a la u n i ó n d e M g al sitio activo D a t o s c i n é t i c o s s u g i e r e n el r e q u e r i m i e n t o de u n ion M g d i s t i n t o d e l i o n p r e s e n t e e n el c o m p l e j o m e t a l - n u c l e ó t i d o p a r a la catálisis. E n este t r a b a j o e s t u d i a m o s la unión d e m e t a l e s d i v a l e n t e s a P f k - 2 y a la m u í a n t e E 1 9 0 Q d e l m o t i v o conservado. Sólo Mg * y M n s o n catalíticamente activos con p a r á m e t r o s c i n é t i c o s e s e n c i a l m e n t e i g u a l e s en la e n z i m a s i l v e s t r e , e n t a n t o q u e e n l a m u t a n t e h a y a l t e r a c i o n e s en la K para a m b o s s u s t r a t o s ( A T P y f r u c t o s a - 6 - P ) y u n a d i s m i n u c i ó n en k . A t r a v é s d e e s t u d i o s c i n é t i c o s y d e s u s t i t u c i ó n d e m e t a l e s d e m o s t r a m o s la e x i s t e n c i a d e u n s e g u n d o s i t i o p a r a c a t i o n e s d i v a l e n t e s e n P f k - 2 al que M n se u n e c o n m a y o r afinidad q u e M g . E n condiciones de s a t u r a c i ó n c o n los s u s t r a t o s la unión d e l m e t a l libre a e s t e s e g u n d o sitio es n e c e s a r i a p a r a o b t e n e r la k m á x i m a . La mutación E 1 9 0 Q a f e c t a la c o n s t a n t e de a c t i v a c i ó n d e M n y M g . Experimentos de E P R m u e s t r a n q u e tanto Pfk-2 c o m o la m u t a n t e E 1 9 0 Q unen M n en a u s e n c i a d e l nucleótido. A m b a s e n z i m a s presentan u n a K de ~ 170 y u n a estequiometría d e unión de ~1 mol/mol. Los resultados d e m u e s t r a n la e x i s t e n c i a d e u n s i t i o d e a l t a a f i n i d a d p o r M n en Pfk-2 y e s t a b l e c e n la p a r t i c i p a c i ó n d e l r e s i d u o E 1 9 0 e n e s t a interacción (Financiamiento Fondecyt 1070111). 2 + 2 + 2 2 + M cat 2 + 2 + c a t 2 + 2 + 2 + d 2 + E F E C T O D E L pH E N E L E S T A D O D E OLIGOMERIZACIÓN D E INSULINA. (pH effects in oligomerization state of Insulin) Cifuentes-Huerta, J . j . . Martinez-Oyanedel, J . . Universidad de Concepción . 1 1 1 El m a y o r p r o b l e m a q u e e n f r e n t a l a c o m e r c i a l i z a c i ó n d e i n s u l i n a r e c o m b i n a n t e e s la f o r m a c i ó n d e f i b r a s d e i n s u l i n a . E s t e p r o b l e m a actualmente tiene un altísimo costo para las empresas b i o t e c n o l ó g i c a s q u e la f a b r i c a n , y a q u e e n su p r o d u c c i ó n , t a n t o c o m o en su a l m a c e n a m i e n t o y distribución se p r o d u c e n c o n d i c i o n e s q u e d e s e s t a b i l i z a n a la insulina y p r o m u e v e n la f o r m a c i ó n de a g r e g a d o s fibrilares E n su e s t a d o n a t i v o a c t i v o , la i n s u l i n a se e n c u e n t r a e n f o r m a de h e x á m e r o asociado a 2 á t o m o s de Zn+2.. Se ha d e m o s t r a d o que e s n e c e s a r i o d e s o l i g o m e r i z a r el h e x á m e r o d e i n s u l i n a a m o n ó m e r o s p a r a q u e el p r o c e s o f i b r i l a c i ó n o c u r r a . E x i s t e n v a r i a s c o n d i c i o n e s q u e son capaces de inducir el proceso d e desoligomerización, entre estas encontramos el p H y l a t e m p e r a t u r a . M e d i a n t e c r o m a t o g r a f í a d e filtración molecular hemos seguido la desoligomerización del h e x á m e r o d e la insulina c o m e r c i a l c o m o c o n s e c u e n c i a d e u n a disminución en el p H , e n c o n t r á n d o s e u n a transición total a m o n ó m e r o s bajo p H 4 . 0 . P a r a l e l a m e n t e se h a n calculado los p K a s de l o s a m i n o á c i d o s p r o t o n a b l e s m e d i a n t e v a r i o s m é t o d o s in s i l i c o , u t i l i z a n d o l a e s t r u c t u r a h e x á m e r i c a 1 m s o r e s u e l t a a 1.0 A m s t r o n g , c o n el o b j e t o d e r e a l i z a r e s t u d i o s d e D i n á m i c a s M o l e c u l a r e s a d i s t i n t o s pHs y estudios de potencial electrostático q u e entreguen información a nivel a t ó m i c o a c e r c a de los s u c e s o s relevantes e n el proceso de d e s o l i g o m e r i z a c i ó n i n d u c i d o p o r el p H . XXXI Reunión Anual EXPRESION GENICA ANALISIS G E N O M I C O D E LA FAMILIA S D G Y S U E X P R E S I O N E N ANALISIS E L D E S A R R O L L O D E L F R U T O E N Vitis A R A B I D O P S I S (FUNCTIONAL P R O M O T E R A N A L Y S I S OF vinifera (Genomic analysis j f S D G f a m i l y a n d its e x p r e s s i o n d u r i n g g r a p e d e v e l o p m e n t in 1 vinifera) 1 A q u e a , F . , V e g a , A . , A r c e - J o h n s o n , P.V Vitis Departamento de G e n é t i c a M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a . P o n t i f i c i a U n i v e r s i d a d Católica de 1 Chile . GENE FUNCIONAL D E L P R O M O T O R D E L G E N GRXC9 1 IN A R A B I D O P S I S ) Departamento de Herrera, A. , Blanco, F . \ Genética Molecular y DE GRXC9 1 Holuigue, Microbiología. L. . Facultad 1 Ciencias Biológicas. Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de Chile. . L a s g l u t a r e d o x i n a s s o n u n a f a m i l i a d e o x i d o r e d u c t a s a s q u e u s a n el L a r e g u l a c i ó n e p i g é n e t i c a es r e c o n o c i d a c o m o u n m e c a n i s m o n o r m a l glutatión y esencial glutationiladas p a r a el c o n t r o l de la e x p r e s i ó n g é n i c a en eucanontes, (GSH) reducir proteínas, disulfuro del GRXs por á c i d o salicílico ( S A ) , una hormona flores, a s o c i a d a a la r e s p u e s t a d e d e f e n s a a e s t r é s . A n á l i s i s d e expresión frutos. Marcas epigenéticas, tales como la n i v e l d e la o r g a n i z a c i ó n d e la c r o m a t i n a . L a m a y o r í a d e la m e t i l a c i ó n t r a n s c r i p c i ó n b Z I P ( T G A 2 / 5 / 6 ) y es i n d e p e n d i e n t e t a n t o de de p r o t e i c a de novo es realizada SDG metiltransferasa Arabidopsis, con o una dominio levaduras activadores por (SET-domain y familia SET han humanos. represores de group). metiltransferasas A la sido Éstas fecha, varias caracterizadas se transcripcionales. clasifican En como este i d e n t i f i c a m o s y c a r a c t e r i z a m o s la f a m i l i a S D G e n Vitis en trabajo, vinifera. Esta utilizando proteínas de SDG1232. plantas, Análisis levaduras y filogenéticos animales generan g r u p o s , los q u e r e f l e j a n a p a r e n t e m e n t e la e s p e c i f i c i d a d d e 9 sustrato y en forma NPR1-independiente. sobrerepresentada región proximal mediante la con y H3K27, versiones truncas algunos genes asociados transcripcional como :ndatos y represores. pertenecientes a los grupos H3K9 Seleccionamos los distintos grupos funcionales y como por elementos un de la la v e r s i ó n expresión y versiones tipo as-1. agrotransformación todo estable transcripcional REGULACIÓN D E LA ACTIVIDAD T R A N S C R I P C I O N A L D E NURR1 REGULACIÓN POR DIFERENCIACIÓN DJ-1 (Regulation of the transcriptional activity of N u r t i b y s u m o y l a t i o n and the protein DJ-1) 1 Arredondo, C. , 1 Pereira, L. , Fuenzalida, 1 N. , identificar de respuesta de del estos gen elementos reportero promotor 1 Andrés, ME. . D e p a r t a m e n t o de Biología Celular y M o l e c u l a r , F a c u l t a d de C i e n c i a s 1 Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile . usando Arabidopsis. el distal es u n i m p o r t a n t e motivo para en respuesta a y Milenio (1060494) Núcleo SA.Financiado de por Genómica DE ACETILACIÓN myoblastic LA DE and TRANSCRIPCIÓN MIOBLÁSTICA HISTONAS osteoblastic Y acetylation). Cruzat, F . , Henriquez, B . \ 1 M. . Anillo de GENES (Transcriptional differentiation 1 Montecino, DE OSTEOBLÁSTICA Investigación mesencefálicas, que Celular y Regulación DE POR regulation genes by of histone 1 1 Sepulveda, H. , Oíate, J . , de Estudios A v a n z a d o s Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile. . dopaminérgicas de resultados Señalización neuronas en los sistema Nuestros sobrevida las +26), sitio-dirigidas N u r r l e s u n r e c e p t o r n u c l e a r h u é r f a n o e s e n c i a l p a r a el d e s a r r o l l o y de GUS, (-1860 a funcional de Plantas ( P 0 6 - 0 0 9 - F ) . Núcleo Milenio G e n ó m i c a Funcional de Plantas ( P 0 6 - 0 0 9 - F ) . PROTEÍNA del esto en FONDECYT-CONICYT LA permitió con mutaciones histonas metiltransferasas activación nos funcionalidad completa la Y del e n la i n d i c a n q u e e l e l e m e n t o t i p o as-1 SUMOILACIÓN NPR1-independiente. (TGACGTCAnnnnTGACGTCA), elemento la a n a l i z a m o s s u p a t r ó n d e e x p r e s i ó n d u r a n t e el d e s a r r o l l o del f r u t o d e fruto.Financiamiento: de síntesis SA.EI v i d . E s t e t r a b a j o s u g i e r e p o r p r i m e r a v e z la p o s i b l e p a r t i c i p a c i ó n d e e n el d e s a r r o l l o del factores a evaluación controlados activación de c o n t i e n e 2 p u t a t i v o s e l e m e n t o s t i p o as-1 Analizamos asociados Esto la c a j a t i p o as-1 previamente d e s ú s miembros. Identificamos los'grupos H3K4 y H3K36 la II p r o m o t o r del c o n j u n t o de g e n e s q u e r e s p o n d e n t e m p r a n a m e n t e a S A p r o m o t o r d e GRXC9 a subclase las U t i l i z a n d o e l s o f t w a r e M o t i f s a m p l e r , r e a l i z a m o s u n a n á l i s i s in siiico descrita SDG1200 la de c o m o del coactivador N P R 1 , clasificándose c o m o un les como de gen inducido tempranamente por S A de forma f a m i l i a t i e n e 3 2 m i e m b r o s y s e g ú n la h o m o l o g í a c o n o t r a s e s p e c i e s s e nombró requiere una indican histonas GRXC9 como m o d i f i c a c i ó n d e h i s t o n a s , a f e c t a n el c o n t r o l d e la e x p r e s i ó n g é n i c a a denominadas que inducidas laboratorio cisteínas oxidativo. GRXC9 altamente por nuestro y daño : : " t r o t a n d o el d e s a r r o l l o y la r e s p u e s t a a e s t í m u l o s a m b i e n t a l e s . E n y identificada enlaces protegiéndolas c i a n t a s , este m e c a n i s m o es i m p o r t a n t e p a r a el d e s a r r o l l o n o r m a l de semillas fue para de Génica, Facultad de en Ciencias 1 r e g u l a n f u n c i o n e s f i s i o l ó g i c a s f u n d a m e n t a l e s c o m o el c o n t r o l d e l o s El p r o c e s o d e d i f e r e n c i a c i ó n c e l u l a r i n v o l u c r a la e x p r e s i ó n d e g e n e s movimientos Nurrl tejido específicos cuyas regiones p r o m o t o r a s requieren de procesos neurotransmisión d e re m o d e l a c i ó n d e s u e s t r u c t u r a c r o m a t í n i c a . E n c é l u l a s e u c a r i o n t e s regula la voluntarios, expresión de emociones genes y procesos involucrados en cognitivos. d o p a m i n é r g i c a , t a l e s c o m o , t i r o s i n a h i d r o x i l a s a y el t r a n s p o r t a d o r d e p l u n p o t e n c i a l e s los e v e n t o s de r e m o d e l a c i ó n c r o m a t í n i c a p u e d e n s e r d o p a m i n a . S i n e m b a r g o , los m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s que controlan regulados por complejos con actividades de acetiltransferasa (HAT) o la actividad transcripcional d e N u r r l s o n p r á c t i c a m e n t e d e s c o n o c i d o s . deacetilasa ( H D A C ) de h i s t o n a s . N u e s t r o laboratorio está interesado Nuestro grupo de trabajo determinó que P I A S y , una proteína en SUMO E 3 ligasa, interactúa c o n N u r r l y reprime su actividad transcripcional. Nosotros regulada proponemos por q u e la a c t i v i d a d t r a n s c r i p c i o n a l sumoilación, una modificación de N u r r l es post-traduccional definir la contribución compromiso fenotipos de células osteoblástico inmunoprecipitación de este tipo precursoras y muscular. de c r o m a t i n a de complejos durante mesenquimáticas el con los Mediante ensayos de (ChIP), RT-PCR, y Western Blot c o v a l e n t e y r e v e r s i b l e , q u e r e g u l a la a c t i v i d a d d e u n a s e r i e d e f a c t o r e s d e m o s t r a m o s q u e el t r a t a m i e n t o d e c é l u l a s p l u r i p o t e n c i a l e s de c o n el i n h i b i d o r g e n e r a l d e d e a c e t i l a s a s T r i c o s t a t i n a A ( T S A ) , p r o d u c e transcripción. efectivamente Nuestros sumoilado. resultados muestran A d i c i ó n al m e n t e que planteamos Nurrl que es DJ-1 un estado de hiperacetilación global de histonas, que resulta en una r e g u l a la a c t i v i d a d t r a n s c r i p c i o n a l d e N u r r l a t r a v é s d e r e g u l a c i ó n d e disminución en la su sumoilación. DJ-1 es una proteína multifuncional q u e muscular un aumento interactúa C2C12 y expresión en de marcadores la expresión de de diferenciación marcadores de c o n m i e m b r o s d e la f a m i l i a P I A S , r e g u l a la s u m o i l a c i ó n d e a l g u n o s diferenciación f a c t o r e s d e t r a n s c r i p c i ó n y e s t á i n v o l u c r a d a e n c a s o s f a m i l i a r e s d e la u n i ó n d e h i s t o n a s a c e t i l a d a s e n el p r o m o t o r d e l f a c t o r d e t r a n s c r i p c i ó n e n f e r m e d a d d e P a r k i n s o n . M e d i a n t e e n s a y o s de g e n e s reporteros en R u n x 2 lo q u e células P C 1 2 y H E K 2 9 3 d e m o s t r a m o s q u e la s o b r e e x p r e s i ó n de D J - 1 i n d u c i e n d o c o n e l l o e l c o m p r o m i s o c o n el l i n e a j e ó s e o . E n c o n j u n t o , d i s m i n u y e la a c t i v i d a d t r a n s c r i p c i o n a l d e N u r r l . P o r lo t a n t o , n u e s t r o s nuestros resultados pluripotenciales sugieren que la actividad transcripcional de Nurrl r e g u l a d a p o r s u m o i l a c i ó n y p o r la p r e s e n c i a d e la p r o t e í n a D J - 1 . es puede osteoblástica. A d e m á s , promueve resultados indican expresión que mesenquimáticas ser favorecida hiperacetilación su que este tratamiento aumenta la hacia y la de s u s diferenciación el p o r s o b r e la m u s c u l a r , involucran c r o m a t i n a del tipo H A T s y H D A C s . genes complejos fenotipo de la blanco, células osteoblástico mediante eventos de remodeladores de Sociedad de Bioquímica y Biología HIPERMETILACIÓN DEL PROMOTOR DE BRCA1 SE CORRELACIONA CON LA AUSENCIA DE SU EXPRESIÓN EN T U M O R E S D E C A N C E R D E MAMA HEREDITARIO. (Promoter h y p e r m e t h y l a t i o n of B R C A 1 c o r r e l a t e s w i t h a b s e n c e of e x p r e s s i o n in hereditary breast cáncer tumors) T a p i a , T. , Smalley, S. , Kohen, P , M u ñ o z , A . , Solis, L , C o r v a l a n , A . , F a u n d e z , P. , D e v o t o , L. , C a m u s , M , Alvarez, M , Carvallo, P. . Departamento Biología Celular y Molecular, Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Instituto Investigaciones Materno Infantil, Universidad de Chile. , F a c u l t a d M e d i c i n a , Pontificia Universidad Católica de Chile. , Centro de Cáncer, Pontificia Universidad Católica de Chile. . 1 2 3 3 4 4 1 1 2 2 1 1 2 3 4 L a p a r t i c i p a c i ó n de B R C A 1 en el c á n c e r de m a m a ha sido a m p l i a m e n t e d e s c r i t a e n a q u e l l o s t u m o r e s q u e p r e s e n t a n m u t a c i ó n en e s t e g e n e n la l í n e a g e r m i n a l . A d e m á s B R C A 1 h a s i d o i m p l i c a d o en el desarrollo de tumores de mama esporádicos, debido a la h i p e r m e t i l a c i ó n d e la r e g i ó n p r o m o t o r a d e e s t e g e n j u n t o con la a u s e n c i a de su expresión en e s t o s t u m o r e s . La participación de B R C A 1 en el d e s a r r o l l o d e t u m o r e s h e r e d i t a r i o s sin m u t a c i ó n en la línea g e r m i n a l , n o ha s i d o a ú n d e m o s t r a d o , e x i s t i e n d o sólo un estudio e n el c u a l s e h a d e t e r m i n a d o la h i p e r m e t i l a c i ó n del p r o m o t o r d e B R C A 1 e n el 4 2 % d e e s t o s t u m o r e s . N o s o t r o s e s t u d i a m o s la h i p e r m e t i l a c i ó n d e la r e g i ó n p r o m o t o r a d e B R C A 1 en 4 7 t u m o r e s d e m a m a h e r e d i t a r i o s y su c o r r e l a c i ó n c o n la e x p r e s i ó n d e la p r o t e í n a . El p r o m o t o r del gen B R C A 1 s e amplificó m e d i a n t e P C R , a partir de D N A tumoral modificado con bisulfito de sodio, utilizando partidores e s p e c í f i c o s p a r a la c o n d i c i ó n m e t i l a d a y la n o m e t i l a d a . A d e m á s , s e analizó la expresión de la proteína BRCA1 mediante i n m u n o h i s t o q u í m i c a . U n 5 1 % (24/47) d e los t u m o r e s presenta h i p e r m e t i l a c i ó n del p r o m o t o r d e B R C A 1 , d e l o s c u a l e s , un 6 7 % ( 1 6 / 2 4 ) n o e x p r e s a la p r o t e í n a ( p = 0 . 0 1 9 9 ) . E s t o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n q u e la h i p e r m e t i l a c i ó n del p r o m o t o r d e B R C A 1 e s un evento i m p o r t a n t e en el s i l e n c i a m i e n t o d e e s t e g e n e n t u m o r e s h e r e d i t a r i o s , s u g i r i e n d o su p a r t i c i p a c i ó n n o s ó l o e n el i n i c i o d e l p r o c e s o t u m o r a l , s i n o t a m b i é n d u r a n t e el d e s a r r o l l o é s t e . F O N D E C Y T 1 0 8 0 5 9 5 , B e c a doctorado CONICYT. ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN GÉNICA EN E M B R I O N E S BOVINOS CLONADOS TRANSFERIDOS A RECEPTORAS TEMPORALES ( G e n e e x p r e s s i o n in c l o n e d e m b r y o s t r a n s f e r r e d t o temporary recipients) Bertin B e n a v i d e s , A. , Rodríguez. L . \ Navarrete, F. , Castro, F. . Universidad de Concepción . 1 1 1 1 Patrocinante: P u c h i Thiele. M.. Los embriones elongados son fuente de información de la proliferación trofoblástica, diferenciación, expresión génica y de interacciones embrión-maternales. Dado que la clonación y m a n t e n i m i e n t o de e m b r i o n e s bovinos son c o s t o s o s , u n a alternativa es u t i l i z a r r e c e p t o r a s t e m p o r a l e s h e t e r ó l o g a s . C o n e l f i n d e d e t e r m i n a r el e f e c t o d e l a m b i e n t e u t e r i n o h e t e r ó l o g o e n el e m b r i ó n c l o n a d o y v i c e v e r s a , s e e s t u d i ó la e x p r e s i ó n d e m a r c a d o r e s e m b r i o n a r i o s . Examinamos marcadores moleculares, mediante RT-PCR, en e m b r i o n e s bovinos c l o n a d o s . E s t o s f u e r o n o b t e n i d o s por transferencia n u c l e a r s o m á t i c a sin m i c r o m a n i p u l a d o r e s . L o s e m b r i o n e s f u e r o n transferidos a receptoras intermediarias y posteriormente recuperados e n estadio d e e l o n g a c i ó n . S e logró la e l o n g a c i ó n de e m b r i o n e s c l o n a d o s , t a n t o en a m b i e n t e h e t e r ó l o g o c o m o h o m ó l o g o . S e e n c o n t r ó e x p r e s i ó n diferencial de m a r c a d o r e s e m b r i o n a r i o s e n t r e los e m b r i o n e s recuperados de úteros bovinos y ovinos. Se d e m o s t r ó gran diferencia e n la e x p r e s i ó n d e e s t o s m a r c a d o r e s e n los ú t e r o s d e a m b a s especies, d e t e c t a n d o la p r e s e n c i a d e la m a y o r í a d e g e n e s e m b r i o n a r i o s s ó l o en ú t e r o s o v i n o s . N u e s t r o s d a t o s c o n f i r m a n q u e l o s o v i n o s p u e d e n ser u t i l i z a d o s c o m o r e c e p t o r e s t e m p o r a l e s . S i n e m b a r g o el a m b i e n t e h e t e r ó l o g o p u e d e a f e c t a r l o s p a t r o n e s d e expresión de los e m b r i o n e s c l o n a d o s . Un hito i m p o r t a n t e en esta i n v e s t i g a c i ó n e s la d e t e c c i ó n d e m a r c a d o r e s e m b r i o n a r i o s en l o s ú t e r o s r e c e p t o r e s , lo q u e i n d i c a u n a e s t r e c h a i n t e r a c c i ó n m o l e c u l a r e n t r e el ú t e r o y el e m b r i ó n . Molecular EFECTO DEL HIERRO EN LA EXPRESION DE LAS FERROXIDASAS P E R T E N E C I E N T E S A LA FAMILIA D E L A S O X I D A S A S M U L T I C O B R E (MCO) D E L H O N G O LIGNINOLITICO PHA ÑERO CHA EJE CHRYSOSPORIUM. ( E f f e c t of iron on t h e e x p r e s s i o n of f e r r o x i d a s e s b e l o n g i n g t o m u l t i c o p p e r o x i d a s e f a m i l y ( M C O ) f r o m t h e l i g n i n o l y t i c f u n g u s Phanerochaete chrysosporium) C a n e s s a , P . , L a r r o n d o , L. , V i c u ñ a , R. . D e p t o G e n é t i c a M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a , F a c . C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v . C a t ó l i c a d e C h i l e . . E n el g e n o m a d e P chrysosporium h e m o s identificado 4 genes transcnpcionalmente activos que codifican para oxidasas multicobre ( M C O ) . M e d i a n t e q R T - P C R , a n a l i z a m o s el e f e c t o del h i e r r o en l o s n i v e l e s d e t r a n s c r i t o d e l o s g e n e s rncol, mco2, mco4 y fet3. El m e t a l indujo u n a i m p o r t a n t e d i s m i n u c i ó n en los niveles de transcrito de los c u a t r o g e n e s m e n c i o n a d o s , s i e n d o mco4 y feí3 los g e n e s c u y o s m R N A s s e v i e r o n m a y o r m e n t e a f e c t a d o s . E n e l c a s o d e é s t o s , el análisis de sus respectivos p r o m o t o r e s permitió identificar e l e m e n t o s regulatorios en cis idénticos al r e c o n o c i d o p o r el f a c t o r de t r a n s c r i p c i ó n U R B S 1 d e Ustilago maydis, el q u e h a s i d o i n v o l u c r a d o en la r e p r e s i ó n t r a n s c r i p c i o n a l d e s u s g e n e s b l a n c o m e d i a d a p o r h i e r r o E s t u d i o s a n i v e l d e la e s t r u c t u r a p r i m a r i a d e M C 0 1 , F E T 3 y M C 0 4 permiten sugerir que ésta última enzima no poseería actividad ferroxidasa c o m o h e m o s demostrado previamente para M C 0 1 . Estas o b s e r v a c i o n e s s e b a s a n a d e m á s en e s t u d i o s b i o q u í m i c o s d e u n a v e r s i ó n m u t a n t e d e M C 0 1 , d e n o m i n a d a M C 0 1 E 2 1 4 A , la q u e al i g u a l q u e M C 0 4 , n o p o s e e un a m i n o á c i d o c l a v e i n v o l u c r a d o en la a c t i v i d a d f e r r o x i d a s a . A c t u a l m e n t e n o s e n c o n t r a m o s e s t u d i a n d o la l o c a l i z a c i ó n subcelular de MC04, así como su actividad enzimática.FINANCIAMIENTO: Fondecyt 1070588 y MIFAB. 1 1 1 1 EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE G E N E S D E L HONGO Penicillium purpurogenum C R E C I D O E N G L U C O S A Y UNA F U E N T E D E CARBONO NATURAL, C O S E T A DE REMOLACHA (Differential e x p r e s s i o n of g e n e s of t h e f u n g u s P e n i c i l l i u m p u r p u r o g e n u m g r o w n in glucose a n d a natural carbón source, sugar beet pulp) K l a g g e s , C . , Eyzaguirre, J . . D e p a r t a m e n t o de Ciencias Biológicas, Universidad Andrés Bello, Santiago. . 1 1 1 El h o n g o d e p u d r i c i ó n b l a n d a P e n i c i l l i u m p u r p u r o g e n u m c r e c e e n diversos sustratos naturales, entre ellos coseta de r e m o l a c h a , y produce una gran variedad de e n z i m a s hemicelulolíticas, que son r e p r i m i d a s por g l u c o s a . E s t e trabajo p l a n t e a el estudio, a nivel transcripcional, de las e n z i m a s q u e s o n producidas s e l e c t i v a m e n t e p o r el h o n g o c u a n d o e s c r e c i d o e n c o s e t a . S e c o n s t r u y ó u n a g e n o t e c a s u s t r a c t i v a d e c D N A m e d i a n t e la t é c n i c a d e s u p r e s i ó n p o r sustracción de secuencias mediante hibridación (PCR-SSH), e l i m i n á n d o s e los g e n e s c o n s t i t u t i v o s q u e se e x p r e s a n con g l u c o s a . S e s e l e c c i o n ó 1 0 1 c l o n e s p o r P C R y s e d e t e r m i n ó por d o t b l o t q u e 8 0 c l o n e s t e n í a n s e c u e n c i a s e x p r e s a d a s d i f e r e n c i a l m e n t e en c o s e t a . Estos clones fueron s e c u e n c i a d o s , o b t e n i é n d o s e 62 s e c u e n c i a s de i n t e r é s . E n t r e e l l a s : s e c u e n c i a s r e l a c i o n a d a s c o n la d e g r a d a c i ó n d e lignocelulosa ( 2 7 , 4 % ) (arabinofuranosidasa, endoxilanasa, glicosil transferasa, beta- galactosidasa, celobiohidrolasa, fructoquinasa, pectina acetil esterasa y p r o t e a s a s ) , secuencias h o m o l o g a s a proteínas hipotéticas (35,5%) y proteínas reguladoras (6,5%), y otras q u e n o p r e s e n t a n s i m i l i t u d c o n p r o t e í n a s d e las b a s e s d e d a t o s (14,5%). Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1070368 y UNAB 02-08/R. XXXI Reunión E X P L O R A N D O UN M É T O D O ALTERNATIVO DE DIAGNOSTICO DE CÁNCER VESICAL BASADO EN LA DETECCIÓN D I F E R E N C I A L D E R N A s M I T O C O N D R I A L E S NO C O D I F I C A N T E S ( E x p l o r i n g a n a l t e r n a t i v e m e t h o d of b l a d d e r c á n c e r d i a g n o s i s b a s e d in the differential expression of n o n coding mitocondrial RNAs) R i v a s , A . , L a n d e r e r , E. - - , L ó p e z , C - , B u r z i o , V . ' , B u r z i o , L 1.2.3.4 V i l l e g a s , J . F u n d a c i ó n C i e n c i a P a r a la V i d a , I n s t i t u t o Milenio (MIFAB) , Universidad Andrés Bello , Grupo B I O S Nuestro laboratorio ha descrito una n u e v a familia de RNAs m i t o c o n d r i a l e s no codificantes ( R N A m t n c ) , constituido por dos grupos: el p r i m e r o d e n o m i n a d o R N A m t n c s e n t i d o c o r r e s p o n d i e n t e al r R N A 16S que tiene covalentemente u n i d o un f r a g m e n t o p r o v e n i e n t e d e l t r a n s c r i t o d e la h e b r a n o c o d i f i c a n t e d e l m i s m o g e n . P o r o t r o l a d o s e i d e n t i f i c ó un s e g u n d o g r u p o d e n o m i n a d o R N A m t n c antisentido, c o r r e s p o n d i e n t e al t r a n s c r i t o d e la h e b r a n o c o d i f i c a n t e del g e n r R N A 1 6 S q u e t i e n e u n i d o un f r a g m e n t o p r o v e n i e n t e d e l t r a n s c r i t o d e l g e n r R N A 1 6 S . H e m o s d e t e r m i n a d o q u e el p a t r ó n d e e x p r e s i ó n d e a m b a s f a m i l i a s d e t r a n s c r i t o s e s d i f e r e n c i a d a d e p e n d i e n d o del t i p o c e l u l a r : los R N A m t n c s e n t i d o s e e x p r e s a n e n c é l u l a s e n p r o l i f e r a c i ó n , t a n t o n o r m a l e s c o m o t u m o r a l e s , s i n e m b a r g o n o s e e x p r e s a n en c é l u l a s q u i e s c e n t e s . L o s R N A m t n c a n t i s e n t i d o s e e x p r e s a n s ó l o en c é l u l a s q u e p r o l i f e r a n d e m a n e r a n o r m a l , y n o e n c é l u l a s t u m o r a l e s o en r e p o s o . En c o n s e c u e n c i a , esto p u e d e constituir una poderosa h e r r a m i e n t a d e d i a g n o s t i c o . S i e n d o el c á n c e r v e s i c a l u n o d e l o s t i p o s d e cáncer m a s f r e c u e n t e s y su d e t e c c i ó n b a s a d a principalmente m e d i a n t e m e t o d o l o g í a s i n v a s i v a s , c o m o c i s t o s c o p i a o b i o p s i a s , el p r e s e n t e t r a b a j o m u e s t r a l o s a v a n c e s r e a l i z a d o s en la r e c u p e r a c i ó n d e c é l u l a s t u m o r a l e s y en la d e t e c c i ó n n o i n v a s i v a d e e s t e t i p o d e células p r e s e n t e s en m u e s t r a s d e o r i n a m e d i a n t e la t é c n i c a d e h i b r i d a c i ó n in situ ( H I S ) e h i b r i d a c i ó n in situ f l u o r e s c e n t e ( F I S H ) y su ::rrelación con el diagnóstico del paciente. (PFB-16, MIFAB P-04-071-F. FONDECYT 1085210, UNAB DI 30-06/R, FONDEF D04I1338). 1 1 2 3 2 3 1 2 1 , 2 , 3 , 4 1 2 i 3 3 4 ANALISIS GENETICO Y GENOMICO EN T U M O R E S DESMOIDES DE P A C I E N T E S C O N P O L I P O S I S A D E N O M A T O S A FAMILIAR: C O M P A R A C I O N C O N E L C A N C E R C O L O R R E C T A L (Genetic and g e n o m i c a n a l y s i s in d e s m o i d t u m o r s f r o m p a t i e n t s w i t h f a m i l i a l adenomatous polyposis: a comparison with colorectal cáncer) A l v a r e z , K . , O r e l l a n a , P . - , D e la F u e n t e , M . , W i e l a n d t , A . M . * , O y a r z o , M . , C h u r c h , J , L ó p e z - K o s t n e r , F. , C a r v a l l o , P. . U n i d a d de Coloproctología, Clínica Las C o n d e s , D e p a r t a m e n t o de Biología Celular y Molecular, Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de C h i l e , Departamento Anatomía Patológica, Clínica A l e m a n a , Cleveland Clinic F o u n d a t i o n , C l e v e l a n d - O h i o , U S A 1 2 3 1 2 1 , 2 4 1 1 2 2 1 2 3 4 U n a v a r i a n t e h e r e d i t a r i a d e l c á n c e r c o l o r r e c t a l e s la p o l i p o s i s a d e n o m a t o s a familiar q u e se origina d e b i d o a m u t a c i o n e s en el gen A P C , y cuyos pacientes pueden además desarrollar tumores d e s m o i d e s . H a s t a a h o r a s e s a b e q u e e n el d e s a r r o l l o d e l c á n c e r colorrectal ocurren a l t e r a c i o n e s en g e n e s e s p e c í f i c o s tales c o m o A P C , K R A S , D C C y P 5 3 , sin e m b a r g o e l c o n o c i m i e n t o g e n é t i c o m o l e c u l a r es e s c a s o p a r a los t u m o r e s d e s m o i d e s . C o n s i d e r a n d o q u e a m b o s t u m o r e s c o m p a r t e n la m i s m a m u t a c i ó n e n el g e n A P C , n o s p r o p u s i m o s estudiar las a l t e r a c i o n e s g e n é t i c a s que ocurren en los t u m o r e s d e s m o i d e s e n c o m p a r a c i ó n c o n la i n f o r m a c i ó n p u b l i c a d a p a r a el c á n c e r c o l o r r e c t a l . P a r a e s t o s e e s t u d i a r o n 6 b i o p s i a s d e t u m o r e s d e s m o i d e s , en l a s c u a l e s s e e v a l ú o la p r e s e n c i a d e m u t a c i o n e s s o m á t i c a s y / o d e l e c i o n e s e n el g e n A P C , a d e m á s d e d e l e c i o n e s d e l o s loci p a r a D C C y P 5 3 , y m u t a c i o n e s s o m á t i c a s p a r a el protón c o g e n K R A S . P a r a esto se r e a l i z a r o n las t é c n i c a s S S C P y secuenciación de D N A , y detección m a r c a d o r e s S T R . A d e m á s se d e t e r m i n a r o n las a l t e r a c i o n e s g e n ó m i c a s en el D N A d e los t u m o r e s m e d i a n t e a r r a y - C G H . I d e n t i f i c a m o s 4 t u m o r e s c o n a l t e r a c i o n e s en el g e n A P C , u n a m u t a c i ó n s o m á t i c a y 3 c a s o s c o n d e l e c i ó n , lo c u a l s u g i e r e la p a r t i c i p a c i ó n d e e s t e s u p r e s o r d e t u m o r e s en e l d e s a r r o t l o d e l t u m o r d e s m o i d e . N o d e t e c t a m o s m u t a c i o n e s en K R A S , ni d e l e c i o n e s de los g e n e s D C C y P 5 3 . A d e m á s , i d e n t i f i c a m o s , d e l e c i o n e s y g a n a n c i a s g e n ó m i c a s , s i e n d o l a s m á s r e c u r r e n t e s la d e l e c i ó n 2 q 2 1 - 3 2 y la g a n a n c i a 1 1 q 1 2 - 1 3 . F O N D E C Y T 1 0 4 0 8 2 7 , T h e C l e v e l a n d Clinic F o u n d a t i o n . Anual LA EXPRESIÓN D I F E R E N C I A L D E UNA N O V E D O S A FAMILIA D E RNAs MITOCONDRIALES NO CODIFICANTES PARA EL DIAGNÓSTICO DE CÁNCER PROSTÁTICO (The differential e x p r e s s i o n of a n o v e l f a m i l y of n o n c o d i n g m i t o c h o n d r i a l R N A s f o r t h e d i a g n o s i s of p r o s t a t e c á n c e r ) L a n d e r e r , E . , Rivas, A. , Burzio, V. , Burzio, L. , Villegas, J . F u n d a c i ó n c i e n c i a p a r a la V i d a , I n s t i t u t o M i l e n i o M I F A B , F a c u l t a d d e C i e n c i a s d e la S a l u d , U N A B , G r u p o B I O S . Patrocinante: J a i m e . V.. 1 , 2 , 3 1 , 2 , 3 1 , 2 , 3 , 4 1 1 , 2 , 3 , 4 1 2 3 4 N u e s t r o l a b o r a t o r i o h a d e m o s t r a d o la e x i s t e n c i a d e u n a n u e v a f a m i l i a de R N A s no c o d i f i c a n t e s m i t o c o n d r i a l e s ( R N A n c m t ) , c o n s t i t u i d o s por el R N A r i b o s o m a l 1 6 S m i t o c o n d r i a l , y a s e a en o r i e n t a c i ó n s e n t i d o ( R N A n c m t S) o a n t i s e n t i d o ( R N A n c m t A S ) , c o v a l e n t e m e n t e unido a un r e p e t i d o i n v e r t i d o t r a n s c r i t o a p a r t i r d e la c a d e n a c o m p l e m e n t a r i a d e l m i s m o g e n . E s t u d i o s b a s a d o s e n h i b r i d a c i ó n in situ ( H i S ) h a n d e m o s t r a d o q u e la e x p r e s i ó n d e e s t a s m o l é c u l a s en c é l u l a s h u m a n a s se e n c u e n t r a r e l a c i o n a d a c o n el e s t a d o proliferativo d e las m i s m a s ; d e tal f o r m a , l a s c é l u l a s n o r m a l e s p r o l i f e r a t i v a s e x p r e s a n en f o r m a equivalente los R N A n c m t S y A S y las células n o r m a l e s q u i e s c e n t e s no e x p r e s a n n i n g u n o . Sin e m b a r g o , las células t u m o r a l e s reprimen s e l e c t i v a m e n t e la e x p r e s i ó n del R N A n c m t A S , a b r i e n d o la p u e r t a al desarrollo de m é t o d o s diagnósticos selectivos basados en la v i s u a l i z a c i ó n d e la e x p r e s i ó n d i f e r e n c i a l d e a m b a s moléculas. C o n s i d e r a n d o q u e el c á n c e r d e p r ó s t a t a e s la s e g u n d a c a u s a d e m u e r t e p o r c á n c e r en C h i l e ; q u e la p r o y e c c i ó n p a r a los p r ó x i m o s 10 a ñ o s m u e s t r a un i n c r e m e n t o en la m o r t a l i d a d e s p e c í f i c a p o r la p a t o l o g í a , y q u e la d i s c o r d a n c i a e n t r e el a n á l i s i s del e s t a d i a j e c l í n i c o b a s a d o en la b i o p s i a p o r p u n c i ó n v e r s u s el e s t a d i a j e p a t o l ó g i c o l l e g a al 4 0 % , n u e s t r o l a b o r a t o r i o c o m e n z ó a desarrollar una nueva a p r o x i m a c i ó n d i a g n ó s t i c a b a s a d a e n la e v a l u a c i ó n d e la e x p r e s i ó n d e los n c m t R N A S y A S , m e d i a n t e H i S e n b i o p s i a s p r o s t é t i c a s en a r a s d e m e j o r a r el d i a g n o s t i c o . P B F - 1 6 , M I F A B P - 0 4 - 0 7 1 - F ; FONDECYT 1 0 8 5 2 1 0 . F O N D E F D 0 4 I 1 3 3 8 , U N A B D I 3 2 - 0 6 / R , Clínica Las C o n d e s . ALTERACIONES GENÓMICAS EN TUMORES DE CÁNCER DE MAMA: ANÁLISIS P O R M I C R O A R R E G L O S D E DNA (Genomic p r o f i l e of b r e a s t c á n c e r t u m o r s : a n a r r a y - C G H a n a l y s i s ) H u r t a d o , C . , Alvarez, C . \ Solis, L. , H e n r i q u e z , I. , C o r v a l á n , A . , Alvarez, M , R o z e n b l u m , E , M u n r o e , D. , Carvallo, P. . Depto. Biología Celular y Molecular, Fac. C s . Biológicas, P. Universidad Católica de Chile , F a c u l t a d d e M e d i c i n a , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e , C e n t r o d e C á n c e r , F a c . M e d i c i n a , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e , L a b . M o l . Technology, SAIC-Frederick, NCI-Frederick, USA . U n a d e l a s e s t r a t e g i a s m á s u s a d a s e n la i d e n t i f i c a c i ó n d e g e n e s s u p r e s o r e s d e t u m o r y p r o t o n c o g e n e s q u e p a r t i c i p a n e n el d e s a r r o l l o d e l c á n c e r d e m a m a e s la b ú s q u e d a d e a l t e r a c i o n e s g e n ó m i c a s , t a l e s c o m o d e l e c i o n e s y a m p l i f i c a c i o n e s g é n i c a s . N o s o t r o s a n a l i z a m o s el D N A g e n ó m i c o d e 7 7 b i o p s i a s t u m o r a l e s d e 5 2 p a c i e n t e s con c á n c e r de m a m a hereditario (45 B R C A X , 3 B R C A 1 , 4 B R C A 2 ) y de 25 esporádicos mediante la técnica de Hibridación Genómica C o m p a r a t i v a en m i c r o a r r e g l o s d e D N A ( a r r a y - C G H ) p a r a i d e n t i f i c a r deleciones y amplificaciones g e n ó m i c a s . Nuestro análisis reveló que l a s b i o p s i a s d e c á n c e r h e r e d i t a r i o p r e s e n t a n un perfil d e d e l e c i o n e s y g a n a n c i a s diferente a las de t u m o r e s e s p o r á d i c o s . E s t a s diferencias incluyen deleciones en: 8p23, 11p15-p14, 12p13, 16p13 y 17p12, (BRCAX); 2q22, 3 p 2 1 , 10q21, 12q13 y 17q21 (BRCA1); 1q32-q41, 2q34-q35, 3p12, 4q28, 13q12-q13 (BRCA2); 1p36-p33, 1q24-q25, 3p14, 7q11-q21, 11p15, 11q22-q24, 17p13 (esporádicos). Adicionalmente, observamos distintas ganancias genómicas, i n c l u y e n d o las regiones: 1q, 3 q 2 5 , 1 6 p t e r - p 1 3 , 1 7 q 1 2 - q 2 1 , 1 7 q 2 4 , 19p13-ter y 20q11 ( B R C A X ) ; 3q25, 6q22, 11q12 y 22q12 (BRCA1); 1q32, 2q24, 6p21 y 9p21 ( B R C A 2 ) ; 1 p 2 1 , 7 q 3 1 , 17q21 y 19p13 (esporádicos). Identificamos algunos g e n e s supresores de t u m o r de c o n o c i d a p a r t i c i p a c i ó n en cáncer; M L H 1 , A T M y R A S S F 1 ; así c o m o protoncogenes; W N T 2 , V A V 1 , C C N L 1 y SRC. Las diferencias g e n ó m i c a s e n c o n t r a d a s e n t r e a m b o s g r u p o s d e t u m o r e s s u g i e r e la p a r t i c i p a c i ó n d e m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s d i f e r e n t e s en el d e s a r r o l l o de tumores esporádicos y hereditarios, probablemente influenciado p o r la p r e s e n c i a d e m u t a c i o n e s e n la l í n e a g e r m i n a l e n l o s t u m o r e s hereditarios. F O N D E C Y T 1080595 y 3 0 7 0 0 2 1 . 1 2 4 2 4 2 3 1 1 2 3 4 Sociedad CONCERTACIÓN CÉLULAS ENTRE MUERTE TUMORALES MITOCONDRIAL (Cross-talk AL CELULAR INTERFERIR NO-CODIFICANTE between cell death type I and II of a n t i s e n s e n o n - c o d i n g m i t o c h o n d r i a l S. - , Burzio, V , 1 CIENCIA PARA FUNDACIÓN LA EL tumor RNA 3 LA 3 by (ncmtRNA) FUNDACIÓN 2 GRUPOBIOS, , VIDA, EN RNA cells 1 MIFAB, PARA II (RNAmtnc) V i l l e g a s , J . , B u r z i o , L. . VIDA, CIENCIA I Y of interference 3 TIPO CON ANTI SENTI D O Vidaurre, 2 de Bioquímica y Biología MIFAB, UNAB , GRUPOBIOS, Molecular DETECCION PRECOZ ASOCIADO cáncer A associated Hemos descrito no-codificante y de caracterizado origen una nueva mitocondrial, los familia cuales de RNAs presentan un r e p e t i d o i n v e r t i d o ( R l ) , d e l o n g i t u d v a r i a b l e , c o v a l e n t e m e n t e u n i d o al e x t r e m o s 5? del r R N A 1 6 S m i t o c o n d r i a l . E s t u d i o s d e h i b r i d a c i ó n in to 2 CANCER the DE DE HPV HPV CUELLO infection) 3 DE UTERO (eariy detection of cervix 1 Villota, 2 C . , villa, I. , 4 1 b o c e a r d o , e . , g a e t e , f. , b u r z i o . L . . f u n d a c i ó n c i e n c i a p a r a la V i d a , 2 ludwig institute 3 for c á n c e r r e s e a r c h , hospital luis t i z n e , fundación 4 c i e n c i a p a r a la v i d a . hemos identificado y caracterizado una nueva familia de R N A s no codificantes d e origen m i t o c o n d r i a l ( R N A m t n c , de R N A mitocondria no codificante), 3 UNAB . DEL LA INFECCIÓN formada por transcritos sentido y antisentidos. Al c o m p a r a r la e x p r e s i ó n d e e s t o s R N A s e n c é l u l a s t e j i d o s n o r m a l e s y en t u m o r e s (biopsias) h e m o s d e m o s t r a d o q u e existe una expresión diferencial de estos transcritos. L a s células presentes en tejido normal expresan niveles muy semejantes de los RNAmtnc Sentido y situ r e v e l a n u n p a t r ó n de e x p r e s i ó n d i f e r e n c i a l e n t r e c é l u l a s n o r m a l e s A n t i s e n t i d o . S i n e m b a r g o , la c o n t r a p a r t e t u m o r a l , e x p r e s a el R N A m t n c e n proliferación y células tumorales. Células normales e n proliferación sentido pero repnme expresan u n transcrito sentido y dos tipos de transcritos sido encontrado en u n a gran cantidad de tipos tumorales analizados, antisentido, los R N A m t n c Antisentido. Este fenómeno ha e n c a m b i o , e n c é l u l a s t u m o r a l e s s ó l o s e e x p r e s a n el t r a n s c r i t o s e n t i d o tanto en h u m a n o c o m o en m o d e l o murino. r e p r i m i e n d o los t r a n s c r i t o s a n t i s e n t i d o . E l t r a t a m i e n t o in v i t r o e n l í n e a s r e s u l t a d o s , h e m o s d e t e r m i n a d o q u e u n n u e v o R N A m t n c , el c u a l n o s e Conjuntamente con estos celulares tumorales con oligonucleótidos induce una masiva muerte e x p r e s a e n c é l u l a s t u m o r a l e s ni e n c é l u l a s n o r m a l e s , e s e x p r e s a d o e n c e l u l a r , m i e n t r a s q u e c é l u l a s n o r m a l e s n o s o n a f e c t a d a s p o r el m i s m o c é l u l a s i n m o r t a l i z a d a s c o n el Virus, d e l P a p i l o m a H u m a n o ( H P V ) . L a t r a t a m i e n t o . L a m u e r t e c e l u l a r i n d u c i d a p o r el t r a t a m i e n t o p r e s e n t a los expresión típicos c a m b i o s m o r f o l ó g i c o s y m o l e c u l a r e s de una m u e r t e c e l u l a r tipo i n m o r t a l i z a d a s o p r e t u m o r a l e s t a n t o e n in vitro. c o m o en biopsias de I cuello (translocación condensación hemos de observado asociados a fosfatidilsenna, nuclear y que esta autofagia, observación de activación fragmentación muerte tal como, estructuras del está de DNA). precedida vacuolización multilamelares, caspasas, Adicional mente por eventos (Neoplasia establecer De esta ha manera en Biopsias grado relación 1 permitido hemos de e n el d e s a r r o l l o intraepitelial una RNA y identificar podido pacientes células identificar estas correspondientes del c á n c e r d e c u e l l o d e 2) y esto e n t r e la e x p r e s i ó n nos ha a útero permitido d e los R N A m t n c y los e s t a d i o s d e d e s a m o l l o d e l c á n c e r u t e r i n o , lo q u e e n c o n j u n t o c o n l o s -análisis a s o c i a d o s a la m u e r t e c e l u l a r t i p o I y II. útero. nuevo estadios tempranos y N u e s t r o s resultados indican q u e habría una c o n c e r t a c i ó n de eventos este células pretumorales mitocondria. citoplasmática y colapso de de anatomopatológicos realizados en la actualidad, podrían m e j o r a r e n o r m e m e n t e la d e t e c c i ó n d e l e s i o n e s p r e c u r s o r a s del c á n c e r de cuello de útero. LINFOCITOS CAMBIOS INFECTADOS EN CON VIRUS EL CITOESQUELETO HTLV-1 PRODUCEN NEURÍTICO DE CÉLULAS P C 1 2 ( H T L V - I i n f e c t e d l y m p h o c y t e s p r o d u c e c h a n g e s in t h e neuritic 1 1 cytoskeleton of P C 1 2 cells) P a n d o , M . E . , K e t t l u n , A . M . , M a l d o n a d o , 2 3 4 H . \ Ramírez, E. , Cartier, L. , Alberti, C . \ E s c u d e r o , C . , C o l l a d o s , L . \ 1 Valenzuela, M.A. . Depto Bioquímica y Biología Molecular, Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Universidad Facultad de 3 paraparesia espástica Syncytial Virus CON Impairs INTERFERENCIA CELULAS T Cell DE LA DENDRITICAS Activation By SINAPSIS (Respiratory Preventing Synapse 1 1 E.D. , 1 1 Carreño, L.J. , Bueno, Universidad Fac Ciencias Biológicas, P U C . MEDIANTE 1 A s s e m b l y W i t h Dendritic Cells) G o n z á l e z , P.A. , Prado, C E . , Leiva, 2 Fisiología, T INMUNOLOGICA Departamento 4 La LINFOCITOS 1 Chile. , P r o g r a m a d e Virología, F a c u l t a d M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de Chile. I S P . Depto Ciencias Neurológcias, Facultad Medicina , Depto E L V I R U S R E S P I R A T O R I O SINCICIAL INHIBE L A ACTIVACION D E de Genética Católica Universidad Andrés 2 S.M. , Riedel, C A , Molecular de Chile. \ y Microbiología, Departamento 2 Bello , Departamento de C s . de Genética Biológicas, Molecular asociada a al retrovirus HTLV-1 se 3 Biológicas y M e d i c i n a , Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de C h i l e . se propone m u n d i a l e s de h o s p i t a l i z a c i ó n infantil y constituye un serio d e b i d o a la a c c i ó n d e la p r o t e í n a viral T a x infectados. Alteraciones en la secretada dinámica de los vitro degeneración células T. P o r otro l a d o , las c é l u l a s diferenciadas con células utilizó como modelo células y cocultivadas a través de m e m b r a n a linfocitarias control K-562. Mediante diferentes Se formas MT2 que contienen PC12 semipermeable el p r o v i r u s , o c o n su " w e s t e m blot" de P C 1 2 usadas se determinó modificadas de tubulina relacionadas con la causas problema e c o n ó m i c o p a r a l o s s i s t e m a s d e s a l u d p ú b l i c a . E s t u d i o s r e c i e n t e s in microtúbulos y m a n t e n c i ó n del citoesqueleto de actina p u e d e n c a u s a r neurítica. y Microbiología y D e p a r t a m e n t o de R e u m a t o l o g í a , Facultad de Ciencias El V i r u s R e s p i r a t o r i o S i n c i c i a l ( V R S ) e s u n a d e las p r i m e r a s linfocitos A.M. . Pontificia c a r a c t e r i z a p o r la d e g e n e r a c i ó n a x o n a l e n e l h a z c ó r t i c o - e s p i n a l , q u e desde 3 Kalergis, e in v i v o sugieren que VRS puede p r e v e n i r la a c t i v a c i ó n dendríticas (DCs) son de células p r e s e n t a d o r a s d e a n t í g e n o p r o f e s i o n a l e s q u e p o s e e n la c a p a c i d a d d e m o d u l a r y activar linfocitos T helper (Th) antígeno-específicos. Por e s t e m o t i v o , s e r í a p r o v e c h o s o p a r a V R S i n t e r f e r i r c o n la f u n c i ó n d e DCs e i m p e d i r la i n d u c c i ó n d e u n a respuesta immune T. En este e s t a b i l i d a d d e m i c r o t ú b u l o s , y d e la f o r m a a c t i v a d e G S K - 3 p q u e j u n t o e s t u d i o c a r a c t e r i z a m o s el e f e c t o d e V R S s o b r e D C s y s u c a p a c i d a d c o n C D K 5 f o s f o r i l a a M A P 1 B , a s o c i a d a c o n la e s t a b i l i d a d del c o n o d e de crecimiento por O b s e r v a m o s que D C s i n f e c t a d a s c o n V R S s o n i n c a p a c e s de activar Se encontró u n a u m e n t o de tubulina tirosinada linfocitos T antígeno-especificos y c o m o resultado de esta interacción, ( m a y o r inestabilidad) en P C 1 2 e x p u e s t a s a M T 2 y u n a disminución de l o s l i n f o c i t o s T a d q u i r i e r o n u n f e n o t i p o a n é r g i c o . M á s a u n , la a c c i ó n d e axonal. inmunofluorescencia. La detectó Tax en los cultivos de MT2 activar a linfocitos T naÁ~ve mediante ensayos de co-cultivo. la f o r m a a c t i v a d e la G S K - 3 p s e ñ a l a n d o q u e p o d r í a e s t a r a f e c t a d a la V R S i n v o l u c r ó la i n h i b i c i ó n d e la f o r m a c i ó n d e s i n a p s i s n o r m a l f u n c i ó n d e la M A B 1 B , p r o t e í n a q u e a s o c i a l o s c i t o e s q u e l e t o s e n t r e D C s y l i n f o c i t o s T . N u e s t r o s d a t o s s u g i e r e n q u e la i n t e r f e r e n c i a de microtúbulos-actina. La presencia de productos secretables inmunológica de c o n la f o r m a c i ó n d e s i n a p s i s i n m u n o l ó g i c a e n t r e e s t a s c é l u l a s p o d r í a M T 2 t a m b i é n r e t a r d a r o n el i n i c i o d e la d i f e r e n c i a c i ó n . T o d o e s t o h a c e c o n t r i b u i r a la p a t o g é n e s i s d e V R S e v a d i e n d o la r e s p u e s t a i n m u n e y p e n s a r q u e T a x p u e d e c a u s a r c a m b i o s e n el c o n o r e d u c i e n d o la e l i m i n a c i ó n d e v i r u s m e d i a d a p o r l i n f o c i t o s T . de crecimiento a x o n a l , c a u s a n d o r e t r o t r a c c i ó n e n las n e u r i t a s . A c t u a l m e n t e s e esta trabajando e n la s í n t e s i s de Tax recombinante a partir del RNAm o b t e n i d o d e M T 2 p a r a v e r el e f e c t o d i r e c t o d e T a x s o b r e los c u l t i v o s d e P C 1 2 . F i n a n c i a m i e n t o F o n d e c y t 108 0 3 9 6 . XXXI Reunión Anual BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR DE PLANTAS ANÁLISIS ESTRUCTURAL TRANSPORTADORES functional A quea, analysis 1 F . FUNCIONAL EN FRUTALES of b o r o n t r a n s p o r t e r 1 Rodríguez, Departamento Y DE BORO de A. , Genética DE (Structural a n d 1 Molecular A. , y Arce-Johnson, Microbiología. ESTRUCTURAL Vitis Pontificia vinifera CV. CARMENERE. Universidad de Talca . p o r lo q u e e s u n and functional 1 of V i t i s v i n i f e r a c v . C a r m e n e r e ) G a i n z a , F . l . , P é r e z , R . , G o n z á l e z , E.\ polínico, (Structural 1 El b o r o e s t á i n v o l u c r a d o p r i n c i p a l m e n t e e n la f o r m a c i ó n de la p a r e d del tubo DELGEN c h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e g e n V v Z I P i n v o l v e d in z i n c t r a n s p o r t i n g r a p e s 1 y e n la e l o n g a c i ó n FUNCIONAL 1 P. . Universidad Católica d e Chile . íelular Y 1 i n fruit c r o p s ) C a ñ ó n , P . , Bisquertt. CARACTERIZACIÓN VvZIP I N V O L U C R A D O E N T R A N S P O R T E D E ZINC E N B A Y A S D E 1 Ruiz-Lara, S . . Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, 1 E n Vitis vinifera, la d e f i c i e n c i a e n z i n c , m i c r o n u t r i e n t e e s e n c i a l , se m i c r o nutrí e n t e f u n d a m e n t a l p a r a e l d e s a r r o l l o n o r m a l d e l a s p l a n t a s . manifiesta S e cree q u e es a b s o r b i d o c o m o ácido bórico p o r las raíces e n forma d e s a r r o l l o d e l a s b a y a s . E l l o o t o r g a e s p e c i a l r e l e v a n c i a a la a b s o r c i ó n pasiva, aunque evidencias y t r a n s p o r t e d e z i n c t a n t o e n el p r o c e s o d e c u a j a d e f r u t o s c o m o e n el sustentan la p r e s e n c i a d e u n t r a n s p o r t e fundamental mente, afectando la fructificación y el a c t i v o . E l r a n g o e n t r e d é f i c i t y t o x i c i d a d al b o r o e s m u y e s t r e c h o , p o r desarrollo d e bayas partenocárpicas lo q u e la r e g u l a c i ó n e n t r e la a b s o r c i ó n y e x c l u s i ó n e n la c é l u l a s o n mecanismos \jndamentales Se ha descrito que participación de una variedad ^ e n t e al d é f i c t d e b o r o e n el m e d i o , e x i s t e u n t r a n s p o r t a d o r d e b o r o homeostasis de Z n . . 3 0 R 1 ) r e s p o n s a b l e de m o v i l i z a r el boro d e s d e las raíces hacia los relacionados c o n la c a p t a c i ó n d e este m e t a l : r o t e s , p e r m i t i e n d o el c r e c i m i e n t o n o r m a l d e la p l a n t a . Si b i e n e s t e V v Z I P que codifica para u n a proteína similar a transportadores Z I P ha proceso para mantener su homeostasis. se ha de sentó monocotiledóneas, Homólogos a BOR1. identificado y en en frutales Utilizando clonado nacrophyfla y Vitis bases genes vinifera. Arabidopsis thaliana no s e h a n identificado de datos homólogos a y en aún genes de ESTs BOR1 hemos en Citrus Estos genes p o s e e n u n O R F de 2145pb 2148pb respectivamente. A m b o s codifican para una posible proteína sido de captación identificado levaduras corresponde no semilladas. E n plantas, los distribución de zinc de transportadores involucran la que controlan la U n grupo de ellos, denominados en indican y vides. que Estudios a nivel radicular. El g e n de funcionalmente ZIP, están complementación la proteína en codificada a u n t r a n s p o r t a d o r d e e n t r a d a d e z i n c . A l a n a l i z a r la expresión de este g e n s e estableció s u expresión e n diferentes tejidos de Vitis vinifera determinándose cv que C a r m é n Á re su actividad incluyendo flores transcripcional se y frutos encuentra d e 10 d o m i n i o s t r a n s m e m b r a n a y m e d i a n t e f u s i ó n a G F P , p r e s e n t a n r e p r i m i d a e n b a y a s n o s e m i l l a d a s , lo q u e sugiere u n a a s o c i a c i ó n d e l localización e n m e m b r a n a plasmática. E n s a y o s funcionales, utilizando evento complementación homeostasis d e zinc. jenes en levaduras codifican para Agradecimientos: mutantes, transportadores Conicyt, Proyecto demuestran de boro INNOVA que ambos en CHILE parten oca rpico con alteraciones en el transporte y DE AROMAS Y plantas. 204-4037, :!eo M i l e n o en G e n ó m i c a F u n c i o n a l d e P l a n t a s . UNA M U T A N T E E N L A U G G T D E A R A B I D O P S I S THALIANA, U N A EFECTO ENZIMA ALCOHOL CLAVE EN CONTROL ENDOPLASMATICO, DE CALIDAD EN MUESTRA RETÍCULO ALTERACIONES D E L ETILENO TRIUMPH ACIL EN LA FORMACIÓN TRANSFERASA EN PERAS PACKHAM S (Effect of ethylene o n a r o m a formation a n d alcohol acyl M O R F O L Ó G I C A S . ( A n A r a b i d o p s i s thaliana mutant in t h e U G G T , a transferase in P a c k h a m s T n u m p h pears) F u e n t e s , L . , Valdenegro, k e y e n z y m e i n q u a l i t y c o n t r o l at t h e e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m , M. , Herrera, R. , M o y a - L e ó n , M . . Laboratorio d e Fisiología Vegetal,. morphological alterations.) 1 Tapia, R. , Reyes, shows 1 F.\ Orellana. A . . 1 Universidad Nacional Andrés Bello . 1 1 1 1 1 Instituto d e Biología V e g e t a l y B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d d e T a l c a . . La pera es u n fruto climatérico cuya m a d u r a c i ó n es regulado p o r La presencia de un residuo terminal de glucosa en N-oligosacáridos e t i l e n o . D u r a n t e é s t a s e p r o d u c e u n a l z a e n la p r o d u c c i ó n d e e t i l e n o lo de polipéptidos recientemente sintetizados, constituye u n a señal para q u e v a a c o m p a ñ a d o d e l d e s a r r o l l o d e a r o m a s . E n p e r a s el a r o m a e s la a s i s t e n c i a d e c h a p e r o n a s d u r a n t e el p r o c e s o d e p l e g a m i e n t o e n el p r o p o r c i o n a d o p r i n c i p a l m e n t e p o r e s t e r e s , s i n t e t i z a d o s p o r la e n z i m a l u m e n del retículo e n d o p l a s m á r t i c o ( E R ) . L a e n z i m a r e s p o n s a b l e d e l a l c o h o l - a c i l - t r a n s f e r a s a ( A A T ) . P a r a d i l u c i d a r el r o l d e e t i l e n o s o b r e la r e c o n o c i m i e n t o de p r o t e í n a s m a l p l e g a d a s y d e la a d i c i ó n del r e s i d u o p r o d u c c i ó n d e v o l á t i l e s y a c t i v i d a d d e A A T , s e e v a l u ó el e f e c t o d e de glucosa es la UDP-glucosa glicoproteína: glucosiltransferasa 1-MCP (bloqueador del receptor de etileno). Para esto, peras ( U G G T ) . E s t a e n z i m a e s u n a p i e z a c l a v e e n el p r o c e s o d e c o n t r o l d e Packharn s Triumph :¿!idad q u e ocurre al interior del E R y s u función h a sido estudiada E t h r e l ( 2 0 0 0 p p m ) . L u e g o d e e l l o la f r u t a f u e m a n t e n i d a 1 3 d í a s a principalmente en eucanontes unicelulares y no en individuos fueron tratadas c o n 1-MCP (200 p p b ) o con 20°C, evaluando periódicamente la producción de etileno, c o m p u e s t o s m u l t i c e l u l a r e s . P o r e s t o , d e c i d i m o s a n a l i z a r e l r o l d e e s t a e n z i m a e n la volátiles y Dlanta m e n o r tasa d e producción d e etileno y de compuestos volátiles q u e modelo Arabidopsis thaliana. b i o q u í m i c a m e n t e la a c t i v i d a d U G G T Primero, detectamos actividad A A T . Fruta tratada con 1-MCP presentó una en fracciones enriquecidas de fruta t r a t a d a c o n E t h r e l . L o a n t e r i o r c o i n c i d i ó c o n u n a m e n o r a c t i v i d a d E R d e A r a b i d o p s i s . El a n á l i s i s de N - o l i g o s a c á r i d o s p r o d u c i d o s e n este d e A A T e n f r u t o s t r a t a d o s c o n 1 - M C P . A d e m á s la a c t i v i d a d A A T d e ensayo, confirmó ^-abidopsis Líneas posee la e s p e c i f i c i d a d u n único homocigotas d e la e n z i m a . gen q u e codifica mutantes fueron aisladas El g e n o m a para y esta de pulpa supera a la d e piel. E s t o s r e s u l t a d o s indican q u e etileno tiene enzima. un rol i m p o r t a n t e s o b r e la a c t i v i d a d d e A A T y e n la g e n e r a c i ó n d e posteriormente caracterizadas. L a s plantas m u t a n t e s p o s e e n raíces m á s cortas que las plantas silvestres y a d e m á s s o n p l a n t a s de m e n o r t a m a ñ o , esto s u g i e r e u n r o l i m p o r t a n t e p a r a la U G G T e n l a e l o n g a c i ó n c e l u l a r y la secresión de proteínas en Arabidopsis thaliana Fondecyt PCB-MN ICM P06-065-F, PFB-16. 1070379, esteres en pera. Agradecimientos (PSD-61) y a Claudia Moggia. a Proyecto PBCT-Postdoctorado Sociedad de Bioquímica y Biología DEFICIENCIA EN LA FUNCIÓN DEL COMPLEJO II MITOCONDRIAL P R O D U C E UN A U M E N T O D E L A ACTIVIDAD FOTO SINTETICA EN Arabidopsis thaliana (Impairment in m i t o c h o n c i r i a l c o m p l e x II p r o d u c e s a n i n c r e a s e of photosynthetic a c t i v i t y in Arabidopsis thaiiana) F u e n t e s , D. , Nunes-Nesi, A. , A r a u j o , W . , G ó m e z , I. , Fernie, A. , J o r d a n a , X . . D e p a r t a m e n t o de G e n é t i c a Molecular y Microbiología, F a c u l t a d de Ciencias Biológicas. Pontificia U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a de C h i l e . M a x P l a n c k Instituí fur Molekulare Pflanzenphysiologie. Alemania . 1 2 2 1 2 2 1 1 2 SDH1-1 e s u n g e n q u e c o d i f i c a p a r a la f l a v o p r o t e í n a . u n a d e las subunidades de la succinato deshidrogenasa o complejo II mitocondrial. En n u e s t r o g r u p o h e m o s c a r a c t e r i z a d o u n a línea h e t e r o c i g o t a m u t a n t e S D H 1 - 1 / s d h 1 - 1 y d o s l í n e a s s i l e n c i a d a s en el g e n SDH1-1, y l a s u t i l i z a m o s a h o r a p a r a e s t u d i a r el rol d e l c o m p l e j o II e n t e j i d o f o t o s i n t é t i c o . O b s e r v a m o s q u e l a s p l a n t a s d e la l í n e a m u t a n t e y de las s i l e n c i a d a s s o n d e m a y o r t a m a ñ o q u e las plantas silvestres. Cuando analizamos distintos parámetros fisiológicos e n c o n t r a m o s q u e la a s i m i l a c i ó n d e C 0 y la c o n d u c t a n c i a e s t o m á t i c a e s t á n a u m e n t a d a s t a n t o e n l a s p l a n t a s m u t a n t e s c o m o en l a s silenciadas, y esto se correlaciona con una mayor apertura e s t o m á t i c a . F i n a l m e n t e , c u a n d o f u s i o n a m o s el p r o m o t o r del g e n SDH1-1 al g e n reportero G U S o b s e r v a m o s u n a e x p r e s i ó n e l e v a d a d e l g e n SDH1-1 en los e s t o m a s . L o s r e s u l t a d o s de e s t e trabajo m u e s t r a n q u e u n a a l t e r a c i ó n e n la f u n c i ó n d e c o m p l e j o II m i t o c o n d r i a l p r o d u c e u n a u m e n t o e n la f o t o s í n t e s i s , p r o b a b l e m e n t e m e d i a d o p o r u n c a m b i o e n la f u n c i ó n e s t o m á t i c a . F o n d e c y t 1 0 6 0 4 8 5 , B e c a d e p a s a n t í a al e x t r a n j e r o C O N I C Y T y V R A I D , B e c a A T 2 4 0 8 0 1 0 0 . Núcleo Milenio P06-009-F. 2 ANALISIS FUNCIONAL D E UNA P R O T E I N A TIPO L E C T I N A (LLP) INDUCIDA P O R ACIDO SALICILICO E N L A R E S P U E S T A D E D E F E N S A A E S T R E S E N A R A B I D O P S I S ( F u n c t i o n a l a n a l y s i s of a S A - i n d u c i b l e l e c t i n like p r o t e i n ( L L P ) in t h e s t r e s s d e f e n s e r e s p o n s e in A r a b i d o p s i s ) A r m i j o , G . , S a l i n a s , P. , L e i v a , D. , T a p i a , J . , L e ó n , L. , Loreto, H. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, F a c u l t a d d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e . E l á c i d o salicílico ( S A ) e s u n a h o r m o n a crucial p a r a el e s t a b l e c i m i e n t o d e la r e s p u e s t a d e d e f e n s a a e s t r é s , y a q u e p o s e e la c a p a c i d a d d e i n d u c i r la e x p r e s i ó n d e g e n e s c l a v e s e n e s t e p r o c e s o . E n e s t u d i o s a n t e r i o r e s , m e d i a n t e un análisis del t r a n s c r i p t o m a de A r a b i d o p s i s , n u e s t r o laboratorio identificó un g r u p o d e g e n e s t e m p r a n a m e n t e i n d u c i d o s p o r S A . D e n t r o d e e l l o s , el g e n L L P p o s e e el m a y o r n i v e l d e a c t i v a c i ó n y es t r a n s c r i p c i o n a l m e n t e i n d u c i d o p o r S A y por inoculación c o n Pseudomonas syringae p v t o m a t o ( A v r R p m 1 ) . El p r o d u c t o d e L L P n o h a s i d o a s o c i a d o a u n a f u n c i ó n b i o l ó g i c a . P a r a e v a l u a r la f u n c i ó n d e L L P e n la r e s p u e s t a d e d e f e n s a a p a t ó g e n o s , h e m o s desarrollado líneas transgénicas sobreexpresoras, fusionadas al e p í t o p e c - M y c o a la p r o t e í n a G F P . E n p a r a l e l o , h e m o s a i s l a d o y c a r a c t e r i z a d o u n a l í n e a h o m o c i g o t a , m u t a n t e i n s e r s i o n a l p a r a el g e n . A c t u a l m e n t e e v a l u a m o s la r e s p u e s t a d e e s t a s l í n e a s a la i n o c u l a c i ó n c o n la b a c t e r i a Pseudomonas syringae pv t o m a t o ( A v r R p m l ) . Los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s i n d i c a n q u e L L P e s t a r í a i n v o l u c r a d a en la respuesta de defensa contra esta bacteria. Financiado por FONDECYT-CONICYT (1060494) y Núcleo Milenio Genómica Funcional Plantas (P06-009-F). 1 1 1 1 1 1 1 Molecular E L G E N LOCHI C O D I F I C A P A R A UNA ENDOQUITINASA D E C L A S E III Q U E E S E X P R E S A D O E S P E C Í F I C A M E N T E E N R A Í C E S Y N O D U L O S D E L O T U S S P . E INDUCIDO P O R E F E C T O D E L D É F I C I T H Í D R I C O . ( L o C h i g e n c o d i n g f o r C l a s s III e n d o c h i t i n a s e t h a t is s p e c i f i c a l l y e x p r e s s e d in r o o t s a n d n o d u l e s of L o t u s s p . a n d is i n d u c e d b y e f f e c t of w a t e r d é f i c i t . ) T a p i a , G . , A c u ñ a , H . . I n s t i t u t o d e Investigaciones Agropecuarias, INIA-Quilamapu . 1 1 1 Patrocinante: R u i z - L a r a . S.. L a s q u i t m a s a s s o n e n z i m a s q u e c a t a l i z a n la h i d r ó l i s i s d e e n l a c e s B-1,4-glicósidos, presentes en biopolímeros de N-acetil-Dg l u c o s a m i n a ( Q u i t i n a ) . L a s q u i t i n a s a s p u e d e n s e r c l a s i f i c a d a s en d o s c a t e g o r í a s : E x o q u i t i n a s a s y E n d o q u i t i n a s a s s e g ú n su c a p a c i d a d d e atacar e n l a c e s entre m o n ó m e r o s de los e x t r e m o s o internos. En p l a n t a s , e s t a s e n z i m a s c u m p l e n u n a f u n c i ó n i m p o r t a n t e en la d e f e n s a c o n t r a e l a t a q u e por p a t ó g e n o s , a u n q u e t a m b i é n s e h a d e s c r i t o su i n d u c c i ó n frente a d a ñ o m e c á n i c o , o z o n o , metales p e s a d o , frío y s a l i n i d a d . A s í m i s m o , s e h a d e s c r i t o su rol e n la r e g u l a c i ó n d e la c o n c e n t r a c i ó n d e f a c t o r e s d e n o d u l a c i ó n ( N o d ) en a l g u n a s e s p e c i e s l e g u m i n o s a s . U t i l i z a n d o u n a m e t o d o l o g í a b a s a d a en a n n e a l i n g c o n t r o l p r i m e r , s e a i s l ó un f r a g m e n t o g é n i c o c u y a s e c u e n c i a t r a d u c i d a p o s e e u n a a l t a h o m o l o g í a c o n la s u p e r f a m i l i a 1 8 d e las g l i c o s i l h i d r o l a s a s . Mas específicamente, la secuencia aislada posee una alta conservación en residuos aminoacídicos con la familia de e n d o q u i t i n a s a s d e c l a s e III e n d i v e r s a s e s p e c i e s l e g u m i n o s a s , t a l e s c o m o Sesbania rostrata, M e d i c a g o sativa, Glycine max y Vigna unguiculata. L o s análisis de expresión g é n i c a muestran q u e este gen es s o b r e e x p r e s a d o d u r a n t e estrés h í d n c o en n o d u l o s de Lotus sp. Así m i s m o , su e x p r e s i ó n es a c o t a d a a raíces y n o d u l o s . Los análisis b i o i n f o r m á t i c a s h a n p r e d i c h o c o n u n a a l t a c o n f i a b i l i d a d la p r e s e n c i a d e un p é p t i d o s e ñ a l d e l o c a l i z a c i ó n e x t r a c e l u l a r . L o s r e s u l t a d o s sugieren que esta endoquitinasa actuaría c o m o una nodulina de e x p r e s i ó n t a r d í a , d e f o r m a s i m i l a r a S r c h i 1 3 d e S. r o s t r a t a l i m i t a n d o la acción de factores Nod Agradecimientos:Proyecto L O T A S S A . ANALISIS D E EXPRESIÓN GÉNICA G L O B A L E N R E S P U E S T A A LA INFECCIÓN VIRAL DURANTE EL PROCESO DE M A D U R A C I Ó N E N Vitis vinifera ( A n a l y s i s of g e n e e x p r e s s i o n in r e s p o n s e to v i r a l i n f e c t i o n t h r o u g h r i p e n i n g in g r a p e b e r r i e s ) V e g a , A . , Medina, C. , A r c e - J o h n s o n , P. . D e p a r t a m e n t o de Genética Molecular y Microbiología. Facultad de Ciencias Biológicas. Pontificia Universidad Católica de C h i l e . . 1 1 1 1 L o s v i r u s c a u s a n e n f e r m e d a d e s c r ó n i c a s en v i d e s , sin q u e s e h a y a n descrito reacciones de resistencia. Estas infecciones generan c a m b i o s e n la p l a n t a , q u e s e t r a d u c e n e n u n a d i s m i n u c i ó n en el c r e c i m i e n t o , d e f o r m a c i ó n d e h o j a s y a l t e r a c i o n e s e n la c a l i d a d d e l o s frutos, entre o t r o s . Los s í n t o m a s q u e c a u s a n los virus han sido p r e v i a m e n t e descritos p e r o se d e s c o n o c e n los p r o c e s o s fisiológicos i n v o l u c r a d o s , e s p e c i a l m e n t e su e f e c t o en el d e s a r r o l l o y m a d u r a c i ó n d e l f r u t o . El o b j e t i v o d e e s t e t r a b a j o e s e s t u d i a r c a m b i o s m o l e c u l a r e s q u e o c u r r e n e n l o s f r u t o s d e Vitis vinifera cv. C a b e r n e t S a u v i g n o n d u r a n t e la i n f e c c i ó n p o r el v i r u s G L R a V 3 . S e r e a l i z ó un a n á l i s i s d e la e x p r e s i ó n g é n i c a g l o b a l en f r u t o s p r o v e n i e n t e s de p l a n t a s s a n a s e i n f e c t a d a s m e d i a n t e el m i c r o a r r e g l o G e n e C h i p d e A f f y m e t r i x en d o s e s t a d o s d e m a d u r a c i ó n . S e i d e n t i f i c a r o n u n t o t a l d e 1 1 6 g e n e s e n el e s t a d o d e p i n t a ( i n i c i o d e m a d u r a c i ó n ) y 9 0 6 g e n e s en b a y a m a d u r a con e x p r e s i ó n diferencial entre los frutos d e plantas i n f e c t a d a s y p l a n t a s s a n a s . El a n á l i s i s f u n c i o n a l d e e s t o s g e n e s i n d i c a q u e la respuesta de d e f e n s a , estrés y s e n e s c e n c i a , c o m o t a m b i é n , la biosíntesis de metabolitos primarios y secundarios, se encuentran a f e c t a d o s . E s t a e x p r e s i ó n d i f e r e n c i a l p o d r í a e x p l i c a r los c a m b i o s fisiológicos observados en frutos de plantas infectadas. A g r a d e c i m i e n t o s : C O N I C Y T , 0 7 G E N O M A 0 1 , C o n s o r c i o del V i n o INNOVA 05CTE01-03, VINNOVA. XXXI Reunión Anual Paneles Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE PROTEÍNAS; ENZIMOLOGÍA 1. E N Z I M A B I F U N C I O N A L D E L A F A M I L I A 43 D E L A S G L I C O S I L HIDROLASAS DE PeniciUium BETA-D-XILOSIDASA PURIFICACIÓN, ( B i f u n c t i o n al purpurogenum Y 43 purpurogenum ACTIVIDAD ALFA-L-ARABINOFURANOSIDASA: PROPIEDADES family CON Y SECUENCIA glycoside AMINOACIDICA hydrolase with from Penicillium beta-D-xylosidase alpha-L-arabinofuranosidase activities: Purification, properties 1 2. IDENTIFICACIÓN Y MULTIENZIMÁTICOS purpurogenum secreted 1 M. , ANÁLISIS DE SECRETADOS COMPLEJOS POR Penicilliurr ( I d e n t i f i c a t i o n a n d a n a l y s i s of m u l t i e n z y r n e c o m p l e x e s 1 by Penicillium 2 p u r p u r o g e n u m ) González, Á. ' , 1 Eyzaguirre. J. . Departamento de Navarrete Ciencias Biológicas 1 and U n i v e r s i d a d A n d r é s Bello, S a n t i a g o . , Pontificia Universidad Católica and de Valparaíso. . 1 a m i n o acid sequence) R a v a n a l , M.C. , Eyzaguirre, J . . Departamento 2 El h o n g o P e n i c i l l i u m p u r p u r o g e n u m e s u n a c t i v o s e c r e t o r d e e n z i m a s de Ciencias Biológicas, Universidad A n d r é s Bello, Santiago. . h e m i c e l u l o l í t i c a s q u e s o n p r o d u c i d a s al c u l t i v a r l o e n d i v e r s a s fuentes E l h o n g o P e n i c i l l i u m p u r p u r o g e n u m s e c r e t a al m e d i o d e c u l t i v o u n a de en gran enzimas 1 variedad de enzimas xilanolíticas, entre ellas tres carbono. Nuestro grupo hemicelulosas). a cooperación de múltiples 3 (ABF3). Esta enzima fue purificada a orientado su investigación las c a p a c e s d e d e g r a d a r el x i l a n o ( m a y o r c o m p o n e n t e d e las a r a b i n o f u r a n o s i d a s a s ( A B F 1, 2 y 3). E n e s t e trabajo n o s r e f e r i r e m o s la a r a b i n o f u r a n o s i d a s a ha La degradación completa enzimas del xilano requiere que actúan sinérgicamente \e pare h o m o g e n e i d a d y c a r a c t e r i z a d a , es un m o n ó m e r o glicosilado c o n un m e j o r a r la h i d r ó l i s i s d e e s t a s c o m p l e j a s e s t r u c t u r a s . N u e s t r o e s t u d i e peso i n d i c a q u e e s t a s e n z i m a s p u e d e n f o r m a r p a r t e de c o m p l e j o s proteicos molecular (medido por de 47.500 (determinado isoelectroenfoque) de por SDS-PAGE), 5.8. La A B F 3 es y un una enzima b i f u n c i o n a l q u e a c t ú a s o b r e los s u s t r a t o s artificiales p-nitrofenil arabinofuranósido (pNPAra) (Km: 0.65+-0.075 mM) y pl alfa-L p-nitrofenil beta-D xilopiranósido (pNPXyl) (Km de 12.03+-2.68 mM). En ambos casos El la e n z i m a sigue una cinética tipo Michaelis-Menten. pH (xilanosomas) esterasas, que contienen xilanasas, acetil xilano beta-xilosidasas, esterasas, feruloi arabinofuranosidasas ), c e l u l a s a s . E s t e t i p o d e o r g a n i z a c i ó n m i n i m i z a la p e r d i d a p o r d i f u s i ó r d e los p r o d u c t o s y f a c i l i t a el s i n e r g i s m o y la e s t a b i l i d a d . P o c o s e s a b e s o b r e los x i l a n o s o m a s y las i n t e r a c c i o n e s e n z i m a - e n z i m a presentes ó p t i m o e s 5 , 0 y la t e m p e r a t u r a ó p t i m a d e 5 0 ° C . S e e v a l u ó la a c c i ó n en este tipo de c o m p l e j o s . S e aislaron 2 x i l a n o s o m a s provenientes d e sobre cultivo e n c o s e t a de r e m o l a c h a , 2 de c o r o n t a de m a í z y 3 d e xilanc sustratos desrramificado hidroliza naturales de tales remolacha preferentemente unida a otra arabinosa, como arabinano y arabinoxilano arabinosa lo q u e unida y arabinano de trigo. L a a xilosa se d e t e r m i n ó que enzima arabinosa enzimáticamente. Se acetilado determinando electroforesis Blue cromatográficos. su peso molecular (400-750 kDa) Native acoplada Los ensayos a zimogramas enzimáticos mediante y análisis y d o t b l o t s m u e s t r a n \e s e c u e n c i ó el g e n d e la a b f ó y s u c D N A . N o s e o b s e r v a r o n i n t r o n e s y p r e s e n c i a d e m ú l t i p l e s e n z i m a s y la c o - i n m u n o p r e c i p i t a c i ó n c o r r o b o r a la p r o t e í n a m a d u r a c o n s t a d e 3 8 8 a m i n o á c i d o s c o n u n p e s o m o l e c u l a r s u existencia. Diferencias en actividades enzimáticas y composiciones calculado proteicas de 42.226. Se han encontrado 5 posibles sitios de N de acuerdo al s u s t r a t o u t i l i z a d o p a r a c u l t i v a r el h o n g o e g l i c o s i l a c i o n e s y el a l i n e a m i e n t o d e la s e c u e n c i a d e A B F 3 c o n o t r a s i n t e r a c c i o n e s pro t e í n a - p r o t e í n a reflejan u n a sofisticada p r o t e í n a s h o m o l o g a s m u e s t r a q u e la e n z i m a p e r t e n e c e a la f a m i l i a 4 3 U n a m a y o r c o m p r e n s i ó n de este tipo de interacciones podría llevar e de primera u n a m e j o r a e n la f o r m u l a c i ó n d e m e z c l a s e n z i m á t i c a s c o n p r o p ó s i t o s familia. biotecnológicos, tales c o m o las glicosil enzima hidrolasas. bifuncional Financiamiento: de Este trabajo eucariontes FONDECYT informa sobre descrita (1040201 y en la esta 1070368) la s a c a r i f i c a c i ó n d e la l i g n o c e l u l o s a Universidad otros. Financiamiento: Proyecto F O N D E C Y T ESTERASA 4. y organización \ 1070368. A n d r é s Bello (01-05/1). 3. PURIFICACIÓN Y P R O P I E D A D E S D E L A F E R U L O I L 4 DE PeniciUium purpurogenum Penicillium purpurogenum A. 1 , 2 , 1 Eyzaguirre, J. . (Purification and feruloyl esterase 4 ) R o s a , Departamento de properties L.\ González, Ciencias Biológicas, 1 Universidad A n d r é s Bello, S a n t i a g o , Pontificia Universidad Católica 2 de Valparaíso FUNCION DE TIROSINA207 FOSFOENOLPIRUVICA 5. cerevisiae Cardemil, DE phosphoenolpyruvate 1 E. . Jabalquinto, EN LA CARBOXIQUINASA S . C E R E V I S I A E ( R o l e of t y r o s i n e 2 0 7 in 1 A. . carboxykinase) Facultad de Andrade, Química y 1 C. , Biología, 1 U n i v e r s i d a d de S a n t i a g o de C h i l e . L a c a r b o x i q u i n a s a f o s f o e n o l p i r ú v i c a ( P E P C K ) c a t a l i z a la r e a c c i ó n d e La degradación permite of de utilizar la l i g n o c e l u l o s a estas (biocombustibles) residuos generar Mn2+ para dar fosfoenolpiruvato (PEP), ADP/GDP y C0 . 2 El sitio c o n s e r v a d o , p a r a el c u á l s e h a n s u g e r i d o d i s t i n t a s f u n c i o n e s . A s í , a partir d e las estructuras cristalinas de e s t a s e n z i m a s en c o m p l e j o con y pectinas). L a hidrólisis c o m p l e t a d i s t i n t o s s u s t r a t o s , s e h a p r o p u e s t o q u e el e x t r e m o e l e c t r o p o s i t i v o d e l hemicelulosas y su pectinas, de estos cadena sus polisacáridos principal y, en ramificaciones desrramificantes incluyen glicanasas y esterasas e s t á n las Los d e s c a r b o x i l a c i ó n d e o x a l o a c e t a t o ( O A A ) en p r e s e n c i a de A T P / G T P y l o s p o l i s a c á r i d o s d e la p a r e d c e l u l a r v e g e t a l ( c e l u l o s a , h e m i c e l u l o s a s sobre químicos. renovable p o s e e n un gran potencial para producir e n z i m a s c a p a c e s de d e g r a d a r actúen compuestos agroindustriales energía activo de estas e n z i m a s p r e s e n t a un residuo d e tirosina estrictamente que obtener y de para hongos enzimas y fuentes requiere el c a s o Las enzimas a n i l l o a r o m á t i c o d e la t i r o s i n a i n t e r a c t ú a c o n e l g r u p o c a r b o x i l a t o d e l P E P , por otra parte se ha propuesto que el g r u p o h i d r o x i l o d e la Entre estas últimas t i r o s i n a e s t a b l e c e u n e n l a c e d e h i d r ó g e n o c o n el C 0 . E n e s t e t r a b a j o feruloil e s t e r a s a s ( F A E s , E C 3 . 1 . 1 . 7 3 ) q u e l i b e r a n á c i d o s s e e v a l ú a el rol d e T i r 2 0 7 , e l i m i n a n d o el a n i l l o a r o m á t i c o y e l g r u p o h i d r o x i c i n á m i c o s , e n p a r t i c u l a r el á c i d o f e r ú l i c o y d i f e r u l a t o s . ácidos de son de sobrenadantes Penicillium interés de por cultivo sus en purpurogenum propiedades coseta se ha de hidroxilo, al En dirección de hongo presenta una antioxidantes. remolacha descrito Estos la del 2 presencia de aumento de reemplazarlo formación de disminución 9 por leucina. OAA de el M n c o n r e s p e c t o a la e n z i m a d e d e s e c h o d e la i n d u s t r i a a z u c a r e r a q u e c o n t i e n e u n 1 % d e para bicarbonato 25 veces estudios que cinéticos la m u t a n t e e n la V m a x en Y207L y con un v e c e s e n la c o n s t a n t e d e a f i n i d a d d e la e n z i m a p o r a p r o x i m a d a m e n t e 5 isoenzimas de F A E s . La coseta es un producto ácido Los muestran aumentó silvestre, respectivamente. La significativamente. Se concluye Km que f e r ú l i c o . N u e s t r o g r u p o e s t á a b o c a d o al e s t u d i o d e l a s p r o p i e d a d e s d e t i r o s i n a 2 0 7 e s r e l e v a n t e p a r a la a f i n i d a d d e la e n z i m a p o r el m e t a l y e s t a s e n z i m a s . E n este trabajo s e i n f o r m a n los resultados obtenidos e s t á i m p l i c a d a e n la i n t e r a c c i ó n c o n C 0 2 . F i n a n c i a d o p o r F O N D E C Y T con enzima 1070202 y DICYT-USACH 02-0741JL. una de ellas, denominada FAE 4. Se purificó la a h o m o g e n e i d a d . E s t a t i e n e u n a m a s a m o l e c u l a r de 5 0 k D a , u n pl de 5,9, un p H ó p t i m o de 8,0, T° ó p t i m a de 30°C y un m ó d u l o de unión a celulosa. Es dihidroferulato activa (dMUF) frente a y metil umbeliferil los sustratos acetato metil r a z ó n de actividad d M U F / M U A d e 0,07. F i n a n c i a m i e n t o : Proyectos 1040201 y 1070368 y Proyecto. umbeliferil (MUA), con una FONDECYT XXXI Reunión 5. P R O P I E D A D E S D E U N A I N U S U A L A G M A T I N A S A ( P r o p e r t i e s 1 1 of 2 :•- u n u s u a l a g m a t i n a s e ) M e l l a , C . , C a s t r o , V . , M a r t í n e z , F . , G a r c í a , 2 M.d.lA , 3 Bustos, P. , 4 Carvajal, N. , Cifuentes, M. 5 6 Uribe, E . 1 D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i c a y Biología M o l e c u l a r . , D e p a r t a m e n t o de 2 3¡ología Celular. , Departamento de Bioquímica 4 D e p a r t a m e n t o de Bioquímica y Biología Molecular. je 3 , Clínica , Departamento 5 Biología Celular, G e n é t i c a y Fisiología, U n i v e r s i d a d de M a l a g a . , Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Universidad de 6 Concepción . La a g m a t i n a asocia a una serie la d e s c a r b o x i l a c i ó n de acciones d e la a r g i n i n a biológicas, incluso a y se nivel : : Jría r e g u l a r s u s n i v e l e s e n el c e r e b r o . no tiene relación de Aunque presenta secuencia con las LIM que une Zn2+. Sin a n t i c u e r p o a n t i - a g m a t i n a s a de embargo, E. c o l i . es que actividad agmatinasas : - ¡ a d a s h a s t a a h o r a y, a d i f e r e n c i a d e e s t a s , p r e s e n t a u n tipo le de neurotransmisión. Recientemente, h e m o s clonado una proteína - PARTICIPACIÓN DEL ASP^204 EN LAS INTERACCIONES I N T E R M O N O M E R I C A S D E L A A R G I N A S A T I P O I: DE LA MUTANTE intermonomeric D204A. interactions (Participation of 1 type PROPIEDADES Asp dominio reconocida por un P o r su parte, un anticuerpo c o n t r a n u e s t r a p r o t e í n a r e c o n o c e a la a g m a t í n a s a b a c t e r i a n a , p e r o n o a a r g i n a s a , q u e p e r t e n e c e a la m i s m a f a m i l i a d e p r o t e í n a s . A m b o s 204 in I: P r o p e r t i e s 1 D 2 0 4 A m u t a n t . ) L o b o s , M. , 1 arginase of the of the 1 1 U r i b e , E. , G a r c í a , D. , Orellana, M . S . , 1 F u e n t e a l b a , P. , Carvajal, N. . D e p a r t a m e n t o de Bioquímica y Biología 1 Molecular. Universidad de C o n c e p c i ó n . . La a r g i n a s a tipo I es t r i m é r i c a y en la interfaz subunidad-subunidad presenta u n motivo C-terminal e n f o r m a de S. E n resulta de agnatinasa, 6. Anual él s e d e s t a c a la A r g - 3 0 8 , q u e f o r m a u n e n l a c e s a l i n o i n t e r m o n ó m e r o c o n el A s p - 2 0 4 de la s u b u n i d a d adyacente, y cuyo reemplazo por alanina genera m o n ó m e r o s . E n este t r a b a j o , d e s c r i b i m o s los e f e c t o s e s t r u c t u r a l e s y c i n é t i c o s del r e e m p l a z o d e A s p - 2 0 4 p o r a l a n i n a . L a m u t a n t e D204A r e s u l t ó a c t i v a y, p r á c t i c a m e n t e , e q u i v a l e n t e a la e n z i m a s i l v e s t r e e n cuanto a valores de K m , guandina (análogo tnptófanos. resultó Sin ser activador kcat, afinidad por omitina y clorhidrato de de la embargo, rnonomérica. (Kd un orden urea) y emisión a diferencia con de una de menor magnitud de fluorescencia la s i l v e s t r e , afinidad mayor). A la por de mutante el metal diferencia de la anticuerpos r e c o n o c e n a u n a proteína en cortes d e cerebro de rata. mutante P o r o t r o l a d o , la d e p e n d e n c i a proteína h i p e r b ó l i c a a ú n e n p r e s e n c i a de b a j a s c o n c e n t r a c i o n e s de g u a n i d i n a . - c o m b i n a n t e de c e r e b r o no e s t á r e l a c i o n a d a c o n el d o m i n i o tipo L I M . L o s r e s u l t a d o s a p o y a n u n rol c l a v e d e l A s p - 2 0 4 e n la e s t a b i l i z a c i ó n de Mn2+ que presenta E n e f e c t o , u n a p r o t e í n a t r u n c a d a , q u e n o lo c o n t i e n e , la es inactivada R308A, la cinética de la especie D204A a al g r u p o g u a n i d i n o d e la A r g 3 0 8 e n la m u t a n t e R 3 0 8 A . Concluímos 1070467. oroteína y la agmatinasa bacteriana - o m o l o g í a s estructurales F O N D E C Y T 7. PREFERENCIA POR en secuencia, comparten coii 2 1 R. , C a b r e r a , R. . FONDECYT importantes EN GLUCOSA-6-P ( P r e f e r e n c e for c o f a c t o r s i n g l u c o s e - 6 - P d e h y d r o g e n a s e f r o m Escherichia Muñoz, fue 11070069. COFACTORES D E S H I D R O G E N A S A D E Escherichia nuestra 7,5 del t r í m e r o d e a r g i n a s a , y c o r r o b o r a n la a c c i ó n de g u a n i d i n a i m i t a n d o p o r d i á l i s i s c o n t r a u n q u e l a n t e , s i e n d o r e a c t i v a d a p o r el i o n m e t á l i c o . que, a p e s a r de las d i f e r e n c i a s pH Departamento 1 coli) O l a v a m a , K. , de Biología, Facultad 1 de 2 C i e n c i a s , U n i v e r s i d a d de C h i l e , U n i v e r s i d a d A n d r é s B e l l o . 8. A N Á L I S I S T E R M O D I N Á M I C O DEL DESPLEGAMIENTO DE LA FOSFOFRUCTOQUINASA-2 A TEMPERATURAS BAJAS Y ALTAS. (Thermodynamic analysis phosphofructokinase-2 1 Wilson, C.A. , at low of the and high thermal 1 Babul, unfolding temperatures.) J. . Departamento de of 1 Baez, M. , Biología, Facultad de L a g l u c o s a - 6 - P d e s h i d r o g e n a s a ( G 6 P D H ) d e la v í a d e l a s p e n t o s a s - P Ciencias, Universidad de Chile, S a n t i a g o , Chile . s e c o n s i d e r a una d e las p r i n c i p a l e s f u e n t e s de N A D P H . F o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 ( P f k - 2 ) d e E. coli es u n h o m o d í m e r o e s t a b i l i z a d o Homólogos + : e esta e n z i m a en distintos o r g a n i s m o s p u e d e n u s a r N A D P sustrato, aunque en vanos pueden usar N A D P enzima de + y NAD Escherichia coli casos + se han reportado como enzimas que ( d u a l e s ) . A u n q u e s e c o n s i d e r a q u e la es específica + para NADP , no 1 por un dominio grande y uno pequeño que provee los contactos interfaciales entre las s u b u n i d a d e s . La estabilidad de a m b o s d o m i n i o s parece depender de la formación de la interfaz a juzgar por la se ha disociación y d e s p l e g a m i e n t o c o n c e r t a d o o b s e r v a d o en presencia de : - * ' i n i d o la p r e f e r e n c i a e n t é r m i n o s d e k c a t / K m . E n e s t e t r a b a j o se c l o r u r o d e g u a n i d i n i o ( G d n H C I ) . N o o b s t a n t e , s e h a p r o p u e s t o q u e el o b s e r v ó la d i s t r i b u c i ó n f i l o g e n é t i c a d e la e s p e c i f i c i d a d p o r c o f a c t o r e s desplegamiento en la familia caracterizó G6PDH de G6PDHs, cinéticamente de E. coli. Se así como también la p r e f e r e n c i a recopilaron se por N A D P purificó + o NAD bibliográficamente los : " é t i c o s p a r a 17 o r g a n i s m o s . E n g e n e r a l , l a s K m p a r a N A D P o r d e n m i c r o m o l a r , e n tanto que las d e N A D + + + y se temperatura en la Mediciones datos s o n del presentan una variación de ocurre de proteínas inducido a de través dicroísmo un circular por la disminución mecanismo muestran no que el de la cooperativo. contenido de estructura s e c u n d a r i a d e la P f k - 2 d i s m i n u y e p o r d e b a j o de 15 y por sobre de 37 gradC llegando a valores similares a 3 y 53 gradC. A m b a s t r a n s i c i o n e s f u e r o n s i g m o i d e a s y s e n s i b l e s a la c o n c e n t r a c i ó n m a y o r . S e o b s e r v a e n u n d e n d r o g r a m a f i l o g e n é t i c o ( r e a l i z a d o p o r el d e p r o t e í n a , s u g i r i e n d o la f o r m a c i ó n c o o p e r a t i v a d e m o n ó m e r o s método s i m i l a r c o n f o r m a c i ó n a t e m p e r a t u r a s b a j a s y e l e v a d a s . El a j u s t e d e de neighbor joining) para secuencias bacterianas y e u c a r i o n t e s a l i n e a d a s c o n C l u s t a l W , q u e las e n z i m a s c o n d u a l i d a d no + ambas transiciones a un modelo concertado de de disociación y se distribuyen en u n ciado s e g r e g a d o de las N A D P - e s p e c í f i c a s . La d e s p l e g a m i e n t o p r o d u c e u n d e l t a C p d e 7,8 k c a l / m o l / K y u n d e l t a H d e G6PDH 620 de E. coli fue expresada punficada e n tres etapas desde el v e c t o r p S U 1 8 , de s e p a r a c i ó n c r o m a t o g r á f i c a . e n y fue DEAE, kcal/mol, indicando que el dímero está estabilizado n i d r o x i l a p a t i t a y s e p h a c r y l - 2 0 0 . L a e n z i m a p u r a (> 9 5 % d e p u r e z a ) f u e que caracterizada h i d r a t a d o , lo q u e e s c o h e r e n t e c o n e l v o l u m e n c a l c u l a d o p a r a usando N A D P cinéticamente + o NAD + en condiciones de velocidad inicial c o m o sustrato, resultando en una preferencia d e alrededor de 5500 v e c e s por N A D P 2 06/02-2 Universidad de Chile. + sobre + N A D . Proyecto DI por 10,5 k c a l / m o l a 2 0 g r a d C . P o r o t r a p a r t e , el v a l o r d e d e l t a C p p r e d i c e el especie monómero en obtenido presencia de a bajas GdnHCI a temperaturas 20 gradC. está Estos altamente esta resultados i n d i c a n q u e la d i s o c i a c i ó n d e la P f k - 2 i n d u c i d a p o r frío p r o c e d e s i n intermediarios adicionales respecto calory GdnHCI. Fondecyt 1050818. al d e s p l e g a m i e n t o inducido por Sociedad 9.ANÁLISIS UNIÓN DEL FUNCIONAL Y ESTRUCTURAL de Bioquímica y Biología D E L O S SITIOS DE LIGANDOS EN QUINASAS DEPENDIENTES DOMINIO ARQUAEA (Structural and l i g a n d b i n d i n g s i t e s in A D P - d e p e n d e n t 1 2 domain) Oíate, F . , Guixé, V. . 1 Universidad Andrés Bello , functional glucokinases Facultad Facultad analysis of t h e de Ciencias de Ciencias, DE DE ADP 10. Molecular FOSFORILACION DE LA SUBUNIDAD CK2p POR LA P R O T E I N A Q U I N A S A C K 1 a (Phosphorylation of the C K 2 p subunlt by of protein kinase C K 1 a ) Pérez, C . , Jedlicki, A. , Budini, M. , Allende, archaea J E . . P r o g r a m a de Biología Celular y Molecular, ICBM, Facultad de d e la S a l u d , Universidad de 1 1 1 1 1 M e d i c i n a , U. de C h i l e . Las caseína quinasas CK1 y CK2 son serina/treonina quinasas 2 Chile . c o n s e r v a d a s e n la e v o l u c i ó n y u n i v e r s a l m e n t e e x p r e s a d a s e n c é l u l a s L a s a r q u a e a s Thermococcus una vía de litoraíis y Pyrococcus Embden-Meyerhoff furiosus modificada, presentan donde la actividad eucariontes. mientras Con que respecto CK2 es a estructura, un CK1 heterotetrámero es un monómero, compuesto por dos g l u c o q u i n a s a utiliza A D P . e n v e z de A T P , c o m o d a d o r de fosforilo. E n s u b u n i d a d e s catalítcas ( a , a ' ) y dos s u b u n i d a d e s r e g u l a d o r a s (P). E n e s t e trabajo las e n z i m a s de a m b o s m i c r o o r g a n i s m o s s e purificaron a la p r o t e í n a q u i n a s a C K 2 , la s u b u n i d a d (3 t i e n e p o r f u n c i ó n i n c r e m e n t a r homogeneidad la e s t a b i l i d a d t é r m i c a y m o d u l a r la a c t i v i d a d c a t a l í t i c a d e la s u b u n i d a d y se caracterizaron e n z i m a d e T. iitorafis cinética y estructuraImente La es u n m o n ó m e r o c o n u n a m a s a m o l e c u l a r de 5 2 k D a , m i e n t r a s q u e la e n z i m a d e P. furiosus es un h o m o dímero de a p r o x i m a d a m e n t e 93 k D a , c u y o e s t a d o d e a g r e g a c i ó n no c a m b i a en presencia de glucosa, A D P ó DTT. A m b a s enzimas utilizan ADP, C D P , glucosa y maltosa en forma significativa, en tanto que ninguna d e e l l a s r e c o n o c e al A T P c o m o s u s t r a t o . L a e f i c i e n c i a c a t a l í t i c a p a r a A D P , C D P y g l u c o s a e s 2, 1,7 y 3 v e c e s m a y o r p a r a la e n z i m a d e P furiosus.La unión de los ligan dos se determinó por equilibrio de diálisis ya que a u n q u e a m b a s e n z i m a s p o s e e n 4 triptofanos, éstos no s o n s e n s i b l e s a la u n i ó n d e A D P o g l u c o s a . L a u n i ó n d e g l u c o s a s ó l o p u d o d e t e r m i n a r s e e n p r e s e n c i a d e A M P , c o n K d d e 1,2 y 0,9 mM para Los la e n z i m a s resultados como de sugieren pirimidinas y T. iitorafis y P. que ambas que la furiosus enzimas estructura respectivamente. reconocen de los tanto grupos punnas fosfatos es f u n d a m e n t a l e n el r e c o n o c i m i e n t o d e e s t e l i g a n d o . A d e m á s , d e los experimentos de unión se predice un mecanismo de unión de a. No obstante, t a m b i é n se ha observado que tanto C K 2 a c o m o C K 2 p tienen funciones independientes d e la h o l o e n z i m a . E n c u a n t o a la r e g u l a c i ó n d e C K 2 , s e h a s u g e r i d o q u e e s t a s e e f e c t u a r í a m e d i a n t e la interacción de sus s u b u n i d a d e s con otras proteínas. Esta hipótesis no ha sido comprobada. mostraron que espectrometría fosforilación: estructura Estudios CK1a de fosforila masas S205 y iniciales a fue T213. en CK2p, y posible identificar Considerando hete rotetram erica nuestro laboratorio mediante dos estos determinada análisis resultados por de sitios de y la cristalografía, p o s t u l a m o s un posible m e c a n i s m o de r e g u l a c i ó n de C K 2 mediante fosforilación de C K 2 p e n u n a s e c u e n c i a necesaria para unir C K 2 a . Experimentos preliminares de coinmunoprecipitación con CK2a i n d i c a n q u e la f o s f o r i l a c i ó n d e C K 2 p p o r C K 1 a d i s m i n u y e la a f i n i d a d entre las s u b u n i d a d e s d e C K 2 . T r a b a j o s e n m a r c h a se encuentran e n f o c a d o s a la r e a l i z a c i ó n d e m u t a c i o n e s d e los s i t i o s d e f o s f o r i l a c i ó n a á c i d o g l u t á m i c o , y a a n a l i z a r si C K 2 p es c a p a z de s e r fosforila d a p o r s u s t r a t o s d e tipo o r d e n a d o . P r o y e c t o F o n d e c y t 1 0 7 0 1 1 1 . C K 1 a f o r m a n d o p a r t e d e la h o l o e n z i . m a . 11. ESTUDIOS ESTRUCTURALES DE FICOBILISOMA DE G R A C I L A R I A C H I L E N S I S ( S t r u c t u r a l s t u d i e s o f p h y c o bilis o r n e s f r o m 1 1 1 Gracilaria chilensis) M e z a , C . , Martinez-Oyanedel, J . , Bunster, Laboratorio de Biofísica Molecular, Departamento cantidad de mediante y algas rojas h a n debido luz presente complejos en su habitat multiproteicos de Bioquímica y 1 Biología Molecular, Universidad de C o n c e p c i ó n Cianobacterias M. . a la c a l i d a d optimizando su y captación ficobilisomas q u e p r e s e n t a n a l t a e f i c i e n c i a ( > 9 5 % ) e n la c o n d u c c i ó n d e (PBS), energía DE PARAMETROS R - F I C O E R I T R I NA DE ESPECTROSCOPICOS GRACILARIA CHILENSIS (DETERMINARON OF THE ESPECTROSCOPIO PARAMETERS OF R-PHYCOERYTHRIN OF 1 S e p u l v e d a-Ug arte, adaptarse llamados 12. D E T E R M I N A C I Ó N DE J. , Laboratorio d e Biofísica GRACILARIA Martinez-Oyanedel, Molecular, CHILENSIS) J.\ Departamento 1 Bunster, M. . de B i o q u í m i c a y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de 1 Concepción . L o s F i c o b i l i s o m a s s o n c o m p l e j o s p r o t e i c o s a c c e s o r i o s de captación h a c i a los c e n t r o s f o t o s i n t é t i c o s . L o s P B S de Gracilaria chilensis e s t á n d e luz p r e s e n t e s e n a l g a s r o j a s y c i a n o b a c t e r i a s . compuestos r e c o l e c t a n y t r a n s f i e r e n luz h a c i a l o s s i s t e m a s f o t o s i n t é t i c o s d e e s t o s por 3 ficobiliproteínas organizadas en un centro de Estos complejos Aloficocianina, del cual irradian varillas c o m p u e s t a s por Ficocianina y o r g a n i s m o s , c o n u n a e f i c i e n c i a > 9 5 % . E s t a a l t a e f i c i e n c i a s e d e b e a la F i c o e r i t r i n a . A d e m á s p r e s e n t a n p r o t e í n a s l i n k e r q u e d e t e r m i n a r í a n la presencia de c r o m ó f o r o s , tetrapirroles lineales unidos a residuos de e s t r u c t u r a d e l P B S . S e h a v i s t o u n a r e l a c i ó n e n t r e la p r e s e n c i a cisteina. ciertas proteínas l i n k e r y el t i p o de organización centro del P B S . Estudios previos realizados han permitido determinar core-membrana (L C M la presencia que presenta en nuestro de una avale estudios esto. Es por esto estructurales utilizando estas esta hipótesis gradiente laboratorio proteína del PBS que y es importante linker plantear un experimental realizar modelo nuevos estructural nuevas evidencias experimentales. Para confirmar se e s t a n d a r i z ó u n a t é c n i c a de u l t r a c e n t r i f u g a c i ó n discontinuo enriquecidas de el ) d e 110 k D a , q u e s e g ú n bibliografía corresponde c o n un centro pentacilíndrico, pero a ú n falta evidencia que de de s a c a r o s a ficobilisomas donde se obtuvieron completos, los en fracciones cuales fueron caracterizados mediante técnicas e s p e c t r o s c ó p i c a s de fluorescencia y a b s o r c i ó n y estudios de electroforesis g r a d i e n t e ( 6 - 1 5 % ) . D e las completos, se seleccionan fracciones algunas en geles de poliacrilamida en enriquecidas en para ser ficobilisomas analizadas por m i c r o s c o p í a e l e c t r ó n i c a d e t r a n s m i s i ó n , d o n d e se b u s c a n las m e j o r e s c o n d i c i o n e s p a r a o b t e n e r u n a f o t o g r a f í a q u e n o s m u e s t r e la e s t r u c t u r a del P B S . Financiamiento: F O N D E C Y T 108.0267. R-Ficoeritrina, ficobilisoma, subunidad presenta a y en uno como la de los componentes cromóforos subunidad Ficourobilina. La conducción p proteicos dos Ficoeritrobilinas dos Ficoeritrobilinas d e luz e n el f i c o b i l i s o m a se m e d i a n t e el m e c a n i s m o d e n o m i n a d o F R E T ( f l u o r e s c e n c e energy transfer), el cual considera parámetros del en y la una describe resonance estructurales y e s p e c t r o s c ó p i c o s de los c r o m ó f o r o s . S e d e s c o n o c e n los p a r á m e t r o s e s p e c t r o s copíeos d e los c r o m ó f o r o s cálculos de las vías de d e F i c o e r i t r i n a , p o r lo q u e transferencia aproximados. Para obtener estos de luz son parámetros debemos los bastante contar con c a d a c r o m o f o r o a i s l a d o y e n u n a m b i e n t e s e m e j a n t e al d e la p r o t e í n a . E n el p r e s e n t e t r a b a j o s e p u r i f i c ó F i c o e r i t r i n a d e Graciíaria chilensis. A d e m á s s e aislaron sus s u b u n i d a d e s y se obtuvieron c r o m o p e p t i d o s , los cuales fueron Finalmente, cromopeptidos aislados R-Ficoeritrina fueron mediante nativa, HPLC sus caracterizados en fase subunidades reversa. y los espectroscopicamente, d e t e r m i n a d o s e los e s p e c t r o s d e a b s o r c i ó n , espectros d e e m i s i ó n de fluorescencia, T i e m p o de vida media de fluorescencia, cuántico e integral de s o l a p a m i e n t o e n cada caso. Estos rendimiento parámetros nos permiten d e s c r i b i r l o s cromóforos presentes en Ficoeritrina, y a su vez las vias preferenciales de Transferencia Ficobilisoma.Financiamiento: Fondecyt 108.0267. de Luz en el XXXI Reunión Anual BIOINFORMATICA-ESTRUCTURA DE PROTEINAS 13.MODELAMIENTO VASCONCELLEA MECANISMO MOLECULAR PUBESCENS: CATALITICO DE LA PREDICCIÓN (Molecular VPAAT1 D E UN modelling of DE POSIBLE VpAAT1 from . a s c o n c e l l e a p u b e s c e n s : p r e d i c t i o n of a p o s s i b l e c a t a l i t i c m e c h a n i s m ) Morales-Quintana, 1 Moya-León, M. . L.\ Instituto u n i v e r s i d a d de T a l c a . El aroma otiles es de coducido Gaete-Eastman, de Vegetal y peso complejo, molecular. por Transferasa determinado En por Vasconcellea esteres, compuestos pubescens ESTRUCTURA DE DE WNT3A UTILIZANDO MODELAMIENTO (Structure p r e d i c t i o n of W n t 3 a u s i n g c o m b i n a t o r y m e t h o d s o f p r o t e i n m o d e l l i n g ) 1 Burgos Arias, F . \ Cárdenas 2 Inostroza, P. , Martínez-Oyanedel, J . , 1 D e Ferrari V a l e n t i n i , G . . L a b o r a t o r i o de G e n é t i c a y T r a n s d u c c i ó n de Señales, Universidad 1 de Concepción , Laboratorio de Biofísica mediante reacciones (VpAAT). la e n z i m a , la cual fue validada uso de herramientas de modelamiento molecular de d e s e ñ a l i z a c i ó n W n t . D a d a la a u s e n c i a d e e s t r u c t u r a s r e l a c i o n a d a s s e enzima comparativo de conocer el c o m b i n a d a s s e h a g e n e r a d o u n m o d e l o d e W n t 3 a , l i g a n d o d e la v í a m o l e c u l a r de a c c i ó n de V p A A T , se utilizó m o d e l a m i e n t o la e s t r u c t u r a Para Mediante es mecanismo construir DE COMBINADOS 2 el : ara PREDICCION MÉTODOS Molecular. Universidad de C o n c e p c i ó n . principalmente Acil R. , Biotecnología, e s t e r i f i c a c i ó n e n t r e a l c o h o l e s y a c i l C o A s c a t a l i z a d a s p o r la -Icohol 1 Herrera, 1 un carácter bajo Biología C.\ 14. y hace necesario realizar un enfoque múltiple utilizando información obtenida de predicciones de estructura secundaria ( J U F O , J P R e d 3 , PSIPred) y Modeller y P h y r e ) . E n p r i m e r a i n s t a n c i a se g e n e r ó un p r i m e r set de programas de modelamiento molecular (l-TASSER, mostró 5 estructuras u s a n d o l - T A S S E R , d e los c u a l e s 3 m o d e l o s se u s a r o n q u e la p r o t e í n a e s t á f o r m a d a p o r 15 h o j a s ? y 14 ? h é l i c e s , el sitio en las s i g u i e n t e s e t a p a s y c u y a e l e c c i ó n se realizó b a s a d a en cálculos refinada m e d i a n t e d i n á m i c a molecular. El m o d e l o resultante a c t i v o d e la p r o t e í n a e s e l s e g m e n t o H T M S D y s e e n c u e n t r a e n u n :op entre la h o j a 7 y la h é l i c e 5, además H166 se encontraría e x p u e s t a e n u n c a n a l d e s o l v e n t e p r e s e n t e e n la e n z i m a , p e r m i t i e n d o energéticos y estructurales obtenidos por Anolea, Prosa y Procheck. Adicionalmente obtenida en se c o m p a r ó los modelos la e s t r u c t u r a secundaria predicha observándose correlación entre y la ambos a i n t e r a c c i ó n c o n el s u s t r a t o . P o r D o c k i n g m o l e c u l a r s e e x p l o r a r o n las p a r á m e t r o s , p r i n c i p a l m e n t e e n la r e g i ó n N - t e r m i n a l d o n d e s e l o c a l i z a n c o n f o r m a c i o n e s d e i n t e r a c c i ó n e n t r e la p r o t e í n a y s u s l i g a n d o s . P a r a h é l i c e s q u e p o d r í a n e s t a r a s o c i a d a s a s u f u n c i ó n . A c o n t i n u a c i ó n , los a interacción con alcoholes y acil CoAs, se sugiere que la c o n f o r m a c i ó n m á s estable del complejo se produciría uniendo primero Acil CoA a la p r o t e í n a , a cuyo complejo, debido a los cambios modelos seleccionados paso refinamiento de fueron con utilizados Modeller como templados donde se generó para un un segundo g r u p o d e e s t r u c t u r a s y s e c o m p l e m e n t ó el m o d e l a m i e n t o del e x t r e m o z o n f o r m a c i o n a l e s p r o d u c i d o s p o r e s t e l i g a n d o , i n g r e s a r í a el a l c o h o l . C-terminal - nanciado por Proyecto Anillo ACT^I-1. Posteriormente, con la predicción las de cadenas estructura laterales se dada por adicionaron Phyre. utilizando S C W R L 3 . 0 . F i n a l m e n t e , se realizó un p r o c e s o de minimización energía usando trabaja GROMACS, con el c a m p o de fuerza O P L S de y se e n la p a r a m e t r i z a c i ó n d e l g r u p o p r o s t é t i c o p a l m i t o i l q u e es a g r e g a d o p o s t r a d u c c i o n a l m e n t e al e s q u e l e t o p r o t e i c o . E s t a e s t r u c t u r a permitirá estudiar posibles sitios de i n t e r a c c i ó n c o n otros m i e m b r o s de la v í a y d e t e r m i n a r r e g i o n e s i m p l i c a d a s en su función. Financiado: Anillo A C T - 0 4 . 1 5 . E S T U D I O S IN S I L I C O D E R E S I D U O S I N V O L U C R A D O S E N L A 16. UNIÓN CANALES DE SUSTRATOS HIDROXIMETILPIRIMIDINA ^volved in PARA PIRIDOXAL E Q U I N A S A S . (In silico s t u d i e s of r e s i d u e s binding of substrate for pyridoxal 1 and 1 "ydroxymethylpyhmidine kinases.) Ramírez, C . , Guixé, V. , Cabrera, 1 R. . Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de 1 I encias. Universidad de Chile. . lentro de la superfamilia ESTUDIO ARABIDOPSIS se agrupan enzimas cuya LA 1 S. , THALIANA 1 González, Bioinformática DINAMICA POTASIO voltage-gated potassium Universitat riboquinasa DE DE W , y (Study of POR DE VOLTAJE conformational EN dynamics of channels in A r a b i d o p s i s thaliana) M o r a l e s , 2 Dreyer, Simulación Potsdam, Heisenberg-Gruppe CONFORMACIONAL ACTIVADOS I. , Institut fur Biophysik und 1 González, Molecular. F. . Centro Universidad Biochemie Molekulare de 1 de Talca. , und Biologie, Pflanzenbiologie, 2 e s t r u c t u r a t e r c i a r i a e s a l t a m e n t e c o n s e r v a d a , l a s c u a l e s c a t a l i z a n la Germany ransferencia El p o t a s i o ( K + ) e s c r u c i a l e n m u c h o s p r o c e s o s m e t a b ó l i c o s e n l a s de u n grupo fosforilo h a c i a un sustrato determinado. Estas enzimas pueden ser distinguidas de acuerdo a su especificidad células : e s u s t r a t o , la a d i c i ó n d e e l e m e n t o s s e c u n d a r i a y la m a y o r í a d e l a s c o m i e n t e s d e K + e n la m e m b r a n a p l a s m á t i c a d e e s t o s ^ e s e n c i a de un d o m i n i o de m e n o r t a m a ñ o . Se ha s u g e r i d o que los organismos, siendo activados por voltaje y con topología consistente de estructura m e m b r o s m á s p e q u e ñ o s d e esta s u p e r f a m i l i a s o n r e p r e s e n t a t i v o s de a topología ancestral. 1 En este trabajo, se estudiaron in silico las vegetales. Los en cuatro s u b u n i d a d e s cada una, siendo S4 canales de la familia Shaker, median de seis s e g m e n t o s t r a n s m e m b r a n a el sensor de voltaje, y S5-S6, la (S1-S6) el poro de - j i n a s a s d e p i r i d o x a l e h i d r o x i m e t i l p i r i m i d i n a , m e d i a n t e la u t i l i z a c i ó n c o n d u c c i ó n d e l o s i o n e s q u e a l b e r g a el m o t i v o G Y G D q u e le c o n f i e r e : e un alfabeto estructural unidimensional ( P B E ; d e Brevern y cois), en la s e l e c t i v i d a d :orrelato c o n u n alineamiento derivado de las estructuras rectificadores presentes a K + . La familia S h a k e r en plantas, incluye de entrada (Kin), activados a voltajes canales negativos, y e n l a b a s e d e d a t o s . L o s m o t i v o s N X X E y G X G D , c o m u n e s p a r a la canales rectificadores de salida ( K o u t ) , activados a voltajes positivos. = j p e r f a m i l i a , s e e n c u e n t r a n d e f i n i d o s p o r el m i s m o p a t r ó n e s t r u c t u r a l Kin similitud estructural, en d i f i e r e n e n la s e n s i b i l i d a d a l v o l t a j e y a l a c o n c e n t r a c i ó n extracelular todos los miembros sin ~etodología, se determinó : ¡ n d o x a l {d/d/f/f/M/h) es posible código de zd/d/d/c/l/h), ~~nte a zaron este 2I5B) que la p i r i d o x a l un es coherente grupo de enzimas de verificar unión la de con su (Rice y de de Además, Baciiius de subtiiis Kout, aunque presentan una estrecha de K + p a r a su a p e r t u r a , lo q u e a u m e n t a las i n t e r r o g a n t e s s o b r e las razones moleculares que involucran contexto, KAT1 (Kin) y S K O R estas diferencias. En este ( K o u t ) , s o n s i s t e m a s m o d e l o p a r a el análisis e s t r u c t u r a - f u n c i ó n . El p r o c e s o de activación de los canales de K+ puede ocurrir f r e c u e n t e m e n t e a escala d e t i e m p o fisiológico, pero in de unión y de semejanza sustratos esta hidroximetilpirimidina cois). importancia de p a r a la u n i ó n estructural al de través {c/d/d/d/c/f/h). quinas a motivo semejanza lo c u a l para A un motivo estructural presenta mayor experimentos ^-UTODOCK menor. e hidroximetilpirimidina distinguir PDB sndoxal dominio estructural Finalmente, silico los son menos frecuentes a escala de tiempo de dinámica molecular se ( D M ) . U n a h e r r a m i e n t a de D M q u e intenta s u p e r a r e s t e p r o b l e m a , es mediante T a r g e t e d Molecular D y n a m i c s ( T M D ) , que permite guiar una proteína residuos hacia u n a c o n f o r m a c i ó n de interés. D e e s t a m a n e r a , T M D fue u s a d o : erres p o n di e n t e s a c a d a m o t i v o e s t r u c t u r a l , t r a b a j a n d o s o b r e d i v e r s o s p a r a a c e l e r a r la t r a n s i c i ó n c o n f o r m a c i o n a l ~odelos de cerrado de K A T 1 y S K O R , p e r m i t i é n d o n o s a n a l i z a r a nivel molecular, r 1070111. ondecyt mutantes generados por métodos bioinformáticos. sus diferencias funcionales. e n t r e el e s t a d o abierto y Sociedad 17.DETERMINACIÓN DE LA ENERGÍA LIBRE de Bioquímica y Biología DE UNIÓN DE Molecular 18.ESTUDIO DE LA DESCARBOXILACIÓN (HLOX) A TRAVÉS DE MÉTODOS P E R T U R B A C I O N D E ENERGÍA PROTEÍNA L I B R E ( F E P ) . (free e n e r g y d e t e r m i n a t i o n of ( D e s c a r b o x i l a t i o n s t u d y of o x a l o a c e t a t e a n d M n + + human 12 and 15 lipoxigenase selective inhibitor unión (hLOX) through 1 m o l e c u l a r d y n a m i c s (FEP)) P o b l e t e , H. , N u ñ e z , G . 2 F. , 1 Mascayano, C. . Universidad de Santiago 1 , 2 methods (LOX) son una familia CATALIZADOR FOSFOENOLPIRUVATO EN LA CARBOXIQUINASA a s c a t a l i z a t o r in , González-Nilo, E. , G o n z á l e z , D. . U n i v e r s i d a d de T a l c a , T a l c a , Instituto de Q u í m i c a , 1 de de COMO fosfoenolpiruvate carboxykinase) López, X. , Henriquez, J. , Cardemil, Chile , CBSM 2 Lipoxigenasas MN++ of U n i v e r s i d a d d e T a l c a . P a t r o c i n a n t e : G o n z a l e z - N i l o . F.. Las DE OXALOACETATO EN of PRESENCIA DE I N H I B I D O R E S S E L E C T I V O S D E 1 2 Y 15 L I P O X I G E N A S A H U M A N A dioxigenasas c o n t i e n e n hierro no h é m i c o Fe(III) en su sitio activo y que c a t a l i z a n la 1 3 2 4 1 2 Universidad de Talca, Universidad de Santiago, Talca , Facultad 3 Santiago. , de Química Centro de y Biología, Bioinformática y 4 S i m u l a c i ó n Molecular, U n i v e r s i d a d de T a l c a , T a l c a . . Este trabajo evalúa la influencia del catión Mn++ en la i n s e r c i ó n e s t é r e o e s p e c i f i c a de o x i g e n o s o b r e el s u s t r a t o natural ácido descarboxilación araquidónico. Las Lipoxigenasas h u m a n a s ( h L O X ) están relacionadas r e d u c i d o es u n a p r i m e r a a d i f e r e n t e s e n f e r m e d a d e s s e g ú n la p o s i c i ó n e n q u e e s t a d i o x i g e n a d o p r o t e í n a f o s f o e n o l p i r u v a t o c a r b o x i q u i n a s a ( P E P C K ) , la c u a l p a r t i c i p a el acido en araquidónico, asma; 15-hLOX d e tórax y por ejemplo: 5-hLOX a cáncer prostético y c á n c e r rectal y arteriosclorsis, y 1 2 - h L O X a c á n c e r soriasis. Las estructuras de hidrofóbica d o n d e el á c i d o a r a q u i d ó n i c o coordinado de forma octaédrica. Los LOX muestran interacciona flavonoides poseer variadas aplicaciones terapéuticas, han debido una zona c o n el hierro demostrado principalmente a la v í a de de la la descarboxilación/carboxilación con los aminoácidos utiliza introducción favorece de la grupos electroatractores selectividad frente en a12-hLOX. de revelaron que dichas Mediante del para la oxaloacetato esenciales s o n p o t e n t e s y s e l e c t i v o s i n h i b i d o r e s d e 12 y 1 5 - h L O X . M e d i d a s isoflavonoides, esencial sistema formación gracias p r o t e í n a , el c a t i ó n M n + + , e l q u e c o m p l e t a u n a g e o m e t r í a modelo por homología e Este de a una c o o r d i n a c i ó n d e l c o m p u e s t o o r g á n i c o c o n p a r t e del sitio a c t i v o d e la pesados. Estudios biológicos han demostrado que dichos compuestos flavonoides oxaloacetato. a p r o x i m a c i ó n a l p r o c e s o r e a l i z a d o p o r la gluconeogénesis, estudiado c o n distintos de g l u c o s a a p a r t i r d e p r e c u r s o r e s n o g l u c o c í d i c o s . L a P E P C K c a t a l i z a la s u poder antioxidante y su c a p a c i d a d para coordinarse c o n metales IC50 molécula de esta proteína. octaédrica El sistema e s u n a r e d u c c i ó n d e l s i t i o a c t i v o , el c u a l p r o v i e n e d e como hecho estructura de para la P E P C K referencia los de S.cerevisiae, datos un que cristalográfica de la P E P C K de E.coli [Matte et al. J. Mol. Biol 2 5 6 , 126-143, 1996]. E n una moléculas p r i m e r a a p r o x i m a c i ó n a la c o o r d i n a c i ó n del c o m p u e s t o o r g á n i c o , l o s técnicas de aminoácidos circundantes al centro metálico de interés han sido s i m u l a c i ó n d e a c o p l a m i e n t o pro teína-I i g a n d o " d o c k i n g " se analizaron r e e m p l a z a d o s p o r m o l é c u l a s de a g u a . U n a etapa m á s a v a n z a d a se las h a r e a l i z a d o i n c l u y e n d o l o s a m i n o á c i d o s q u e s e c o o r d i n a n al M n + + interacciones Posteriormente, generadas se realizó método de perturbación energía libre grupos electroatractores claramente de de unión más entre un los estudio energía obtenidos en favorables la flavonoides más libre (FEP) muestran, posición y la detallado, los que 4? energéticamente la del enzima. usando indican de q u e la c o o r d i n a c i ó n d e la m o l é c u l a presencia de m e d i o de dos á t o m o s de oxígeno c a r g a d o s negativamente. D e esta B fueron compuestos c a r e c í a n de dicha s u s t i t u c i ó n . A g r a d e c i m i e n t o s : P r o y e c t o que Fondecyt 11075047. misma forma se observa de oxaloacetato se realiza u n a f u e r t e i n f l u e n c i a d e los por aminoácidos c o o r d i n a d o s e n las p r o p i e d a d e s e l e c t r ó n i c a s del M n + + , lo c u a l i n f l u y e en la reacción de descarboxilación. Agradecimientos: Proyecto F O N D E C Y T N° 1070202, Proyecto AnilloACT/24. 19.ESTUDIO HUMANA DE LA INHIBICION (HLOX) MOLECULAR MEDIANTE DIRIGIDA (SMD) DE 12 Y 15 DOCKING (study of LIPOXIGENASA Y SIMULACION imbition of 12 h u m a n lipoxigenase (hLOX) through Docking and Steered 1 2 and 15 Molecular 2 Dynamics) Nuñez, G . , Poblete, H. , Mascayano, C. , González-Nilo, 1 1 D. . U N I V E R S I D A D DE T A L C A , U N I V E R S I D A D D E S A N T I A G O CHILE (K213, K256, H233, D264). Los resultados de este sistema resultados anillo que el DE 2 20. E S T U D I O D E P E R F I L DE ENERGÍA LIBRE DE IONES DE K+ E N E L C A N A L D E P O T A S I O T A S K - 2 . ( F r e e e n e r g y profile of a K+ ion in T A S K - 2 potassium channel.) 3 1 Navarro, 2 C . , Sepúlveda, 1 F. , 1 Chipot, C , González-Nilo, D. . U N I V E R S I D A D D E T A L C A , C E N T R O DE ESTUDIOS 2 CIENTÍFICOS, VALDIVIA , UMR CNRS/UHP, 3 FRANCIA . T A S K - 2 e s u n c a n a l d e p o t a s i o p e r t e n e c i e n t e a la f a m i l i a K C N K , la L a s lipoxigenasas ( h L O X ) s o n d i o x i g e n a s a s q u e c o n t i e n e n hierro no que h é m i c o e n s u s i t i o a c t i v o , c a t a l i z a n la i n s e r c i ó n e s t é r e o - e s p e c i f i c a d e l cuatro oxigeno TASK-2 m o l e c u l a r al a c i d o a r a q u i d ó n i c o . En mamíferos las hLOX se caracteriza por formar dímeros. segmentos transmembranales pertenece a la e s t á n c l a s i f i c a d a s d e a c u e r d o a la p o s i c i ó n d e d i o x i g e n a c i ó n e n el alcalino-activados.Experimentalmente se de han (P). Canales propuesto varios Estas sensores e n f e r m e d a d e s , tales como n e u t r a l i z a c i ó n d e u n a a r g i n i n a ( A R G 2 2 4 ) c e r c a n a a l p o r o , e s el s e n s o r c á n c e r prostético, a s m a , c á n c e r de tórax, soriasis, c á n c e r colorectal y d e p H d e T A S K - 2 . E s t u d i a n d o la c o n d u c t a n c i a d e l o s i o n e s d e p o t a s i o están involucradas arterosclerosis. La en 8-LOX, contiene de poro 12-LOX y 15-LOX. hLOX 5-LOX, subunidad subfamilia acido araquidónico como Cada y dos dominios diferentes dioxigenación del acido araquidónico de pH para TASK-2. Nuestro grupo demostró que la es e n T A S K - 2 , s e p u e d e d e d u c i r q u e el p o t e n c i a l e l e c t r o e s t á t i c o y l a s c o n s e c u e n c i a d e u n a s e r i e d e r e a c c i o n e s e n d o n d e el h i e r r o c u m p l e p e r t u r b a c i o n e s g e n e r a d a s p o r el c a m b i o del e s t a d o de p r o t o n a c i ó n de u n rol f u n d a m e n t a l . E n la l i t e r a t u r a e x i s t e n i n h i b i d o r e s para 5-hLOX inhibidores y de aplicaciones 15-hLOX, gran no importancia medicas anticancerigenos, pero son los por 12hLOX. su amplia flavonoides antioxidantes, específicos Un grupo variedad Se estabilidad conformacional de g e n e r a r la i n a c t i v a c i ó n t i p o C d e l c a n a l . P a r a e s t e e s t u d i o s e a p l i c ó el (antimicrobianos, etc). l o s r e s i d u o s s e n s o r e s r e g u l a n e l n i v e l d e o c u p a n c i a y/o de del filtro de selectividad, lo que además podría método A B F (Adaptive Biasing Forcé) implementado en N A M D . En realizaron l o s c á l c u l o s d e A B F r e a l i z a d o s p a r a o b t e n e r el perfil d e e n e r g í a l i b r e , e n s a y o s de IC50 con a l r e d e d o r 4 0 c o m p u e s t o s frente a 1 2 - h L O X y s e i m p l e m e n t o u n a seria de r e s t r i c c i o n e s s o b r e los i o n e s de potasio 1 5 - h L O X , r e v e l a n d o u n a i n t e r e s a n t e s e l e c t i v i d a d . D e b i d o a lo a n t e r i o r , a l t e r n a d o s c o n a g u a , e s t o s f u e r o n u b i c a d o s e n s i t i o s e s p e c í f i c o s e n el se antivirales, para e s c o g i e r o n los i s o f l a v o n o i d e s q u e e x h i b i e r o n d i c h a s e l e c t i v i d a d y filtro d e s e l e c t i v i d a d . S e r e a l i z a r o n s i m u l a c i o n e s para los s e o b s e r v ó q u e la p r e s e n c i a d e u n g r u p o e l e c t r o a t r a c t o r e n la p o s i c i ó n estados 4 del a n i l l o B d e la c r o m o n a f a v o r e c e la s e l e c t i v i d a d h a c i a 12-hLOX. s u g i e r e n q u e t r a s l a d a r el i o n d e s d e el s i t i o SO c o n a m b a s Para mediante neutras validar estos datos experimentales, se trabajó "docking" y simulación molecular dirigida (Steered) a partir de los m o d e l o s de 1 2 - h L O X y 15-hLOX. Análisis c o m p a r a t i v o s entre energías de "docking" y fuerzas forma de entrada estructurales de de dichos importancia IC50, ( " S t e e r e d " ) , n o s p e r m i t i e r o n d e f i n i r la inhibidores para y cuáles generar la son las selectividad h L O X A g r a d e c i m i e n t o s Proyecto F O N D E C Y T N° 11075047. claves en las de protonación presenta ARG224 cargadas, experimentales nivel una atómico de menor lo que observados. los la A R G 2 2 4 . L o s eventos barrera sé energética correlaciona Estos resultados que TASK-2.Agradecimientos: FONDECYT resultados gobiernan que con los permiten la N/1070722. distintos obtenidos ARG224 con ambas resultados analizar activación a de X X X / Reunión 21.ROL DE RESIDUOS HIDRÓFOBOS EN LA CONDUCTANCIA D E L C A N A L D E P O T A S I O H S L O (Role of h y d r o p h o b i c r e s i d u e s conductance 1 W. , of h S l o p o t a s s i u m 2 Latorre, R. , 1 channel) Márquez, 1 Gonzalez-Nilo, F. . V. , UNIVERSIDAD in González, 1 DE TALCA , 2 Anual 22. P R O P I E D A D E S ESTRUCTURALES Y ELECTROSTATICAS LA VÍA D E C O N D U C C I Ó N IÓNICA D E L C A N A L D E P O T A S I O SHAKER Y EL MUTANTE P475D. (Structural and Electrostatic p r o p e r t i e s in t h e p e r m e a t i o n p a t h w a y of S h a k e r p o t a s s i u m UNIVERSIDAD DE VALPARAISO . and L o s c a n a l e s d e K + d e p e n d i e n t e s d e v o l t a j e y d e c a l c i o i n t r a c e l u l a r se González-Nilo, D. . the mutant P475D) 1 1 Vergara^Jaque, A. , EN (K+) channel 2 Naranjo, D. , 1 UNIVERSIDAD DE TALCA , UNIVERSIDAD DE 2 c a r a c t e r i z a n p o r p r e s e n t a r u n a a l t a c o n d u c t a n c i a , q u e e n el c a s o d e l VALPARAÍSO . c a n a l d e p o t a s i o h u m a n o h S l o a l c a n z a los 2 5 0 p S . T o d o s l o s c a n a l e s L o s C a n a l e s p o t a s i o d e p e n d i e n t e s d e v o l t a j e a b r e n y c i e r r a n el p o r o d e p o t a s i o p r e s e n t a n r e s i d u o s c o n s e r v a d o s e n el filtro d e s e l e c t i v i d a d , e n r e s p u e s t a a c a m b i o s e n e l v o l t a j e d e la m e m b r a n a , p e r m i t i e n d o a s í indispensables la en el reconocimiento del ion K+. Estudios conducción e x p e r i m e n t a l e s e n el c a n a l d e p o t a s i o h S l o q u e el r e s i d u o F 3 8 0 p o s e e selectividad u n rol c r í t i c o e n la c i n é t i c a d e a c t i v a c i ó n d e l c a n a l . M u t a c i o n e s de sobre iones. Estos el potasio, ion canales presentan determinada una por la elevada secuencia sitio aminoacídica T V G Y G altamente conservada entre dichos canales. De dirigidas de este residuo han revelado u n a disminución significativa en a c u e r d o a e s t o la c o n d u c t a n c i a u n i t a r i a e n t r e e l l o s d e b e r í a s e r s i m i l a r , la sin e m b a r g o varía c o n s i d e r a b l e m e n t e conductancia intracelular. Nuestro estudio se enfoca en la entre u n canal y otro. E n el c a r a c t e r i z a c i ó n d e la f u n c i ó n d e l r e s i d u o F 3 8 0 e n la c o n d u c t a n c i a a canal t r a v é s del c a n a l d e p o t a s i o h S l o s i l v e s t r e y la m u t a n t e F 3 8 0 A . P a r a t a l compuerta e f e c t o , se realizaron s i m u l a c i o n e s m e m b r a n a , n o o b s t a n t e la m u t a c i ó n d e la s e g u n d a p r o l i n a p o r a c i d o de D i n á m i c a Molecular Dirigida, Shaker la de secuencia entrada que PVP se del cierra segmento ante un S6, forma una negativo voltaje de t é c n i c a q u e aplica fuerzas e x t e r n a s a s i s t e m a s , e n u n c o n t e x t o d e no aspártico, r : u i l i b r i o , o b t e n i é n d o s e a s í u n perfil d e e n e r g í a l i b r e a lo l a r g o d e u n a ~ 1 0 v e c e s m a y o r a la d e l c a n a l s i l v e s t r e . El o b j e t i v o d e e s t e t r a b a j o e s coordenada de determinar Jarzynski. Resultados reacción, utilizando la identidad preeliminares han determinada concluido por que la bajo estas las condiciones, propiedades muestra estructurales una y conductancia electrostáticas g o b i e r n a n las v a r i a c i o n e s e n la c o n d u c t a n c i a e n t r e el c a n a l que Shaker c o n d u c t a n c i a e n el t i p o s i l v e s t r e e s t á m á s f a v o r e c i d a e n e r g é t i c a m e n t e silvestre y el m u t a n t e P 4 7 5 D . P a r a r e a l i z a r este e s t u d i o s e utilizaron q u e e n la m u t a n t e . P a r a c a r a c t e n z a r la i n t e r a c c i ó n c a t i o n - p i e n t r e el técnicas - : i d u o F 3 8 0 y el c a t i ó n K + , y d e e s t a f o r m a , o b t e n e r u n a relación entre importancia sus propiedades aromáticas p a r a la c o n d u c t a n c i a químico-cuánticos de e energías de interacción. simulación molecular, acompañadas de cálculos de p o t e n c i a l e l e c t r o e s t á t i c o e n la v í a d e c o n d u c c i ó n i ó n i c a . El a n á l i s i s d e en su l a s p r o p i e d a d e s e s t r u c t u r a l e s y e l e c t r o s t á t i c a s c o r r e l a c i o n a d a s c o n la estudios c o n d u c t a n c i a d e l c a n a l , m u e s t r a q u e el i n c r e m e n t o d e é s t a s e d e b e al hidrófobas del c a n a l , s e a p l i c a r o n de posible Agradecimientos: P r o y e c t o F O N D E C Y T N° 1070049, Proyecto Anillo Científico A C T / 2 4 . anillo de cargas n e g a t i v a s f o r m a d o p o r r e s i d u o s a s p a r t a t o , los c u a l e s a u m e n t a n el p o t e n c i a l e l e c t r o s t á t i c o e n la c a v i d a d i n t e r n a del p o r o , g e n e r a n d o c o m o c o n s e c u e n c i a u n a u m e n t o e n la c o n c e n t r a c i ó n l o c a l d e i o n e s K + y, p o r lo t a n t o , u n a m a y o r p r o b a b i l i d a d d e e s t e c a t i ó n e n e s t a r e g i ó n del c a n a l . A g r a d e c í m i e n t o s A C T / 4 6. MICROBIOLOGIA 23.ESTUDIO EXTERNA BIOFISICO OMPW TYPHIMURIUM DE DE LA PROTEÍNA SALMONELLA DE MEMBRANA ENTERICA SEROVAR INCORPORADA EN BICAPAS PLANAS LIPÍDICAS 24. L A C A R E N C I A DE POLIFOSFATOS LA RESISTENCIA A sp. B4 (Lack of METALES inorganic INORGÁNICOS PESADOS polyphosphates metal 1 outer mernbrane OmpW Viologen toxic) Delgado, M.G. 1 Saavedra, C. . Laboratorio 1 , 2 from Salmonella entérica 1 serovar 1 2 , P a c h e c o . N . , Gil. F. , Vergara, C , de M i c r o b i o l o g í a Molecular, Universidad 1 A n d r é s B e l l o , Laboratorio de Fisiología Celular, U n i v e r s i d a d de Chile caracterización de porinas de bacterias Gram negativo ha C . \ Chávez, F.P. , 1 1 D e p t o . Biología. F a c u l t a d de C i e n c i a s e I C D B , Universidad de Chile. . Todos los seres vivos biopolímeros lineales enlaces poseen polifosfatos (poliP), que son f o r m a d o s p o r r e s i d u o s de orto fosfato u n i d o s por fosfoanhídrido bacteria La Mauriaca, heavy Jerez, C.A. . Laboratorio de Microbiología Molecular y Biotecnología, protein B4) affeets resistance i n c o r p o r a t e d o n p l a n a r lipidie b i l a y e r s a f e c t e d b y M e t i l sp. AFECTA Pseudomonas F R E N T E A L T O X I C O M E T I L V I O L O G E N O ( B i o p h i s i c a l S t u d y of t h e Typhimurium i n Pseudomonas EN La degradadora bacteria de Pseudomonas los sp. contaminantes B4 es una ambientales policlorobifenilos ( P C B s ) , y es c a p a z de a c u m u l a r una gran cantidad c o n t r i b u i d o a la c o m p r e n s i ó n d e la f i s i o l o g í a b a c t e r i a n a . S o n c a n a l e s de acuosos c o m p a r a t i v a m e n t e el e f e c t o q u e t i e n e la c a r e n c i a d e p o l i P e n c é l u l a s que permiten la difusión pasiva de solutos hidrofílicos, poliP en diferentes p a t o g e n i c i d a d e n el h o s p e d e r o . S e de N u e s t r o s r e s u l t a d o s i n d i c a n q u e la p r e s e n c i a d e l p o l i P e n la c é l u l a e s metil i m p o r t a n t e p a r a la r e s i s t e n c i a a a l g u n o s m e t a l e s p e s a d o s c o m o el C u , d e m o s t r ó q u e el g e n o m p W compuesto gatillador viológeno (MV), expresión se transporte in expulsado d e la c é l u l a y c e p a s induce vivo en con presencia [14C]-MV para la r e s i s t e n c i a de de estrés este demostraron mutantes en a oxidativo y tóxico.Estudios que el tóxico el g e n o m p W Fe y Cd. La presencia de C u d e s d e de fenómeno es latencia, que ven Además, adaptación, generó fue m a y o r para cuando cultivos un la c e p a crecidos cepa control y otra niveles deficientes en los poliP. su de una estudiar r e c o m b i n a n t e de esta bacteria, c o n requerido utilizado Para enfrentadas es hemos cultivo. a m b i e n t e s d i v e r s o s , la r e s i s t e n c i a a d r o g a s y a l g u n o s a s p e c t o s d e s u Typhimurium metales, de n u t r i e n t e s o t ó x i c o s . S u n a t u r a l e z a e x p l i c a el d e s a m o l l o b a c t e r i a n o e n Salmonella a condiciones sin el c o m i e n z o alargamiento con niveles Cu se del crecimiento, d e la f a s e nulos de enfrentaron de poliP. a dicho d i s m i n u i d a s u s a l i d a . E n e s t e t r a b a j o , m e d i a n t e la r e c o n s t i t u c i ó n d e la metal, ocurrió una baja considerable del n ú m e r o de células viables en proteína O m p W purificada en bicapas lipídicas planas y condiciones el c u l t i v o , de d e p e n d e r í a d e l o s n i v e l e s d e l o s p o l i P e n la c é l u l a p r e v i o al e s t r é s voltaje electro controlado, fisiológicas conductancia se establecieron las características d e é s t a , la c u a l p r e s e n t a al m e n o s d o s n i v e l e s d e (130 y 40 pS en 100 mM KCI). Se analizó c o m p o r t a m i e n t o de O m p W frente a M V . E n presencia del tóxico inducido lo q u e por el de fue seguido metal. los poliP de Los como una recuperación, cuya resultados una obtenidos molécula rapidez apoyan protectora frente la el participación a d i v e r s o s t i p o s d e e s t r é s , y e n p a r t i c u l a r e n la f u n c i ó n r e g u l a t o r i a d e la a c o n c e n t r a c i o n e s e n el r a n g o d e 6 0 a 1 0 0 m M , e l c a n a l c a m b i a su resistencia frente a los m e t a l e s p e s a d o s . F i n a n c i a d o p o r p r o y e c t o s c i n é t i c a , p e r m a n e c i e n d o u n m a y o r t i e m p o e n el e s t a d o abierto. El F O N D E C Y T 1070986, 11070180 nrvel mayor de conductancia de Potasio disminuye en un 50%. - - . a l m e n t e , d a t o s p r e l i m i n a r e s i n d i c a n q u e el t ó x i c o e s c o n d u c i d o a t r a v é s d e la p r o t e í n a e n u n s o l o s e n t i d o . y proyecto ICM P05-001-F. Sociedad 25. PURIFICACIÓN PEPTIDOS Y de Bioquímica y Biología CARACTERIZACIÓN ANTIMICROBIANOS DE NUEVOS PRODUCIDOS POR Molecular 2 6 . E L G E N yggE EL D E Escherichia ESTRÉS OXIDATIVO coli: ( T h e yggE UNA D E F E N S A CONTRA g e n e f r o m Escherichia 1 coii : a 2 1 P S E U D O M O N A S A E R U G I N O S A ( P u r i f i c a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n of d e f e n s e a g a i n s t o x i d a t i v e s t r e s s . ) A c u ñ a , L . , C a l d e r ó n , I. , E l i a s , A . , novel antimicrobial peptides secreted by P s e u d o m o n a s Sandoval, 1 1 1 Ferrer, A. , Navarro, M. . Saavedra, J.M. , Tello, M. Laboratorio Salud, de Bacteriología Molecular. Universidad 1 , Corsiru, G . . F a c u l t a d d e C i e n c i a s d e la 1 Diego 1 , 2 aeruginosa) Portales. , Departamento de Biología, 2 Facultad de Ciencias, U n i v e r s i d a d de C h i l e . . Pseudomonas aeruginosa es una p e r t e n e c i e n t e a la r a m a g a m m a laboratorio nos ha interesado 1 Castro, M. , 1 Vásquez, C. . Laboratorio de Microbiología Molecular, F a c u l t a d de Q u í m i c a y Biología, Universidad 1 d e S a n t i a g o d e C h i l e , F a c u l t a d d e C i e n c i a s d e la S a l u d , U n i v e r s i d a d 2 Andrés Bello, Santiago, Chile . El t e l u r i t o d e p o t a s i o ( K T e 0 ) e s t ó x i c o p a r a m u c h o s o r g a n i s m o s y a 2 bactena Gram negativa de las p r o t e o b a c t e r i a s . E n analizar 1 M. , aislados nuestro clínicos de esta la fecha no se 3 conocen mecanismos específicos de resistencia bacteriana a K T e 0 . N o o b s t a n t e , se h a postulado que su toxicidad 2 se debería 3 en parte a la generación de superóxido que ocurre bacteria c o m o m o d e l o para e s t u d i a r un n u e v o tipo de bacteriocinas, concomitantemente producidas por G r a m negativas pero que tiene su efecto sólo sobre elemental la p o t e n c i a l función b a c t e r i a s G r a m positivas. A n a l i z a n d o u n a c o l e c c i ó n de 120 aislados anti o x i d a n t e d e la p r o t e í n a p en p l a s m á t i c a Y g g E d e Escherthia coli c l í n i c o s d e P. frente a los g e n e r a d o r e s d e a n i ó n s u p e r ó x i d o telurito d e p o t a s i o encontrado aeruginosa 35 termoestables mediante aislados que producen de naturaleza denominado gicinas, ensayos sobre césped sustancias hemos anti b a c t e r i a ñas proteica. Estas proteínas, que poseen actividad antimicrobiana hemos sólo sobre bacterias G r a m positivas. E m p l e a n d o c o l u m n a s hidrofóbicas hemos c o n la r e d u c c i ó n i n t r a c e l u l a r d e t e l u r i t o a t e l u r o (TeK°). En este trabajo, función es desconocida. Mutantes normales por complementación s o b r e e x p r e s a n yggE pyogenes, de además y L monocytogenes. Mediante poseen una masa molecular gicina B tiene una m a s a aproximada de g e les que gicina A y C 8000 D a , en de 3 0 0 0 D a a p r o x i m a d a m e n t e . cambio Mediante H P L C e n fase reversa y espectrometría de m a s a determinamos gicina A posee una m a s a m o l e c u l a r de termoestables en un amplio rango de p r e s e n t a n u n p H ó p t i m o d e 7. E s t a s que 7924 Da. Gicina A y C son temperatura bacteriocinas (4-100 son °C) y antimicrobianas, revela bacterias su acción sobre niveles g e n é t i c a . P o r otro lado, c e p a s mostraron m a y o r resistencia a K T e 0 2 que y a PQ, 3 d e u n a d i s m i n u c i ó n e n la o x i d a c i ó n d e p r o t e í n a s y e n l a s actividades S O D y F u m C . Estos y otros resultados sugieren que Y g g E podría tener Escherichia una potencial participación en la resistencia de coii a K T e 0 . E s t a p r o t e í n a f o r m a r í a p a r t e d e u n s i s t e m a 2 3 e n c a r g a d o de e x p u l s a r t ó x i c o s g e n e r a d o r e s de s u p e r ó x i d o , en este caso los producidos durante la exposición a telurito y paraquat. Financiado por Fondecyt 1060022 y D i c y t - U S A C H . de crecimiento de cepas tratadas c o n estas proteínas gicina A y C ejercen muestran fumarasa C (FumC) y producidas d u r a n t e f a s e e x p o n e n c i a l d e c r e c i m i e n t o , y el a n á l i s i s del perfil que y e s p e c i e s r e a c t i v a s d e o x í g e n o . E s t o s v a l o r e s se r e d u j e r o n a n i v e l e s S. cereus yggE aumentados de superóxido dismutasa (SOD), g i c i n a s p u r i f i c a d a s p r e s e n t a n a c t i v i d a d s o b r e c e p a s d e S. aureus, B. estudió p a r a q u a t ( P Q ) . Y g g E s e e n c u e n t r a c o n s e r v a d a en otras bacterias y su purificado 3 de estas proteínas (gicina A , gícina B y gicina C). Las tres poliacrilamida-SDS y activiogramas determinamos se Gram positivas, mediante un efecto bacteriolítico. Financiamiento: V R A - U D P CG13.03.25.013. 27. E S T U D I O D E P R O T E Ó M I C A D I F E R E N C I A L E N sp. B4 CON NIVELES DEFICIENTES DE ( D i f f e r e n t i a l p r o t e o m i c s t u d i e s i n Pseudomonas 1 Pseudomonas POLIFOSFATOS sp. B4 c o n t a i n i n g l o w 1 1 levéis of p o l y P ) V á r e l a , C . , J e r e z , C . A . , C h á v e z , F . P . . L a b o r a t o r i o de Microbiología Molecular y Biotecnología, Depto. Biología, Facultad 1 d e Ciencias e I C D B , Universidad de C h i l e . . (poliP) es un polímero distribuido en los sp. lineal de organismos residuos vivos. B4, sus niveles celulares p r e s e n t a n el m i c r o o r g a n i s m o . T a m b i é n MECANISMO DE ACCIÓN DEL and mechanism 24) of action of 1 1 antimicrobial 2 peptide Microcin 1 1 S a a v e d r a , J . M . , T e l l o , M . * , F e r n á n d e z , K. , C o r s i n i , G . . L a b o r a t o r i o de Bacteriología Molecular. Facultad de Ciencias de la Salud, 2 Ciencias, Universidad de Chile. . En L a s m i c r o c i n a s son un g r u p o de bacteriocinas de bajo p e s o m o l e c u l a r variaciones ( i n f e r i o r a 10 k D a ) p r o d u c i d a s p o r b a c t e r i a s e n t é r i c a s , q u e p r e s e n t a n i m p o r t a n t e s s e g ú n la c o n d i c i ó n f i s i o l ó g i c a y / o a m b i e n t a l e n q u e encuentre Y 1 ortofosfato Pseudomonas CARACTERIZACIÓN P É P T I D O ANTI M I C R O B I A N O M I C R O C I N A 24 (Characterization Universidad Diego P o r t a l e s . , D e p a r t a m e n t o de Biología, Facultad de El polifosfato inorgánico ampliamente 28. se ha d e m o s t r a d o células c o n niveles deficientes de poliP son i n c a p a c e s de que se las moverse, actividad bacteriostática estrechamente o relacionadas. bacteriolítica La m¡crocina sobre 24 especies (Mcc24) es una b a c t e r i o c i n a p r o d u c i d a p o r la c e p a E. coli 2 4 2 4 . L o s determinantes formar biopelículas y a d e m á s d i s m i n u y e su c a p a c i d a d de sobrevida genéticos fragmento en condiciones 5,25 global este de estrés. Para fenómeno realizamos d i f e r e n c i a l e n Pseudomonas en diferentes estudiar desde un punto kb para que su posee síntesis están 5 genes. contenidos Mediante en un experimentos de de RT-PCR proteómica d e t e r m i n a m o s q u e e l g e n m t f S , q u e c o d i f i c a p a r a la M c c 2 4 s e e x p r e s a en fase exponencial y estacionaria de crecimiento. La purificación y de cultivo y fases de vista sp. B 4 c o n n i v e l e s d e f i c e n t e s d e p o l i P y condiciones experimentos de del crecimiento E n c o n t r a m o s q u e la d i s m i n u c i ó n d e l o s p o l i P a u m e n t a l o s n i v e l e s d e posterior caracterización mediante espectrometría de masa de M c c 2 4 , determinó que este péptido antimicrobiano p o s e e una la masa l a s c h a p e r o n a s y los f a c t o r e s d e p r o t e c c i ó n c o n t r a el e s t r é s o x i d a t i v o ; m o l e c u l a r d e 7 2 7 4 , 2 3 lo c u a l , n o e s c o n c o r d a n t e c o n la m a s a t e ó r i c a d e l a s e n z i m a s i n v o l u c r a d a s e n e l c i c l o d e K r e b s y la b e t a o x i d a c i ó n ( 7 5 2 7 , 3 6 ) , d e d u c i d a a p a r t i r d e la s e c u e n c i a d e l G e n B a n k ( U 4 7 0 4 8 ) . d e á c i d o s g r a s o s ; a s í c o m o d e l a s í n t e s i s d e l A T P y la b i o s í n t e s i s d e Mediante los c o d i f i c a p a r a u n p é p t i d o d e 9 1 r e s i d u o s , c o n u n a m a s a d e 7 2 9 3 , 0 2 , lo aminoácidos. Por otro lado, estos bajos niveles de poliP d i s m i n u y e n la e x p r e s i ó n d e l o s t r a n s p o r t a d o r e s d e m e m b r a n a y d e l o s cual factores Mediante de degradación de las proteínas; la transcripción y la se secuenciación correlaciona ensayos de con DNA los determinamos datos colorimétricos en que experimentales placa el gen mtfS obtenidos. determinamos que la motilidad. Estos resultados s u g i e r e n que los poliP están relacionados Mcc24 c o n el m e t a b o l i s m o e n e r g é t i c o p r i m a r i o , c o n l o s p r o c e s o s c e l u l a r e s d e mediante ensayos de actividad betta-galactocidasa determinamos que respuesta Mcc24 membrana al e s t r é s y c o n el t r a n s p o r t e activo de moléculas celular. F i n a n c i a d o p o r p r o y e c t o s F O N D E C Y T 11070180 y proyecto ICM P05-001-F. e n la 1070986, posee un efecto bacteriolítico s e i n s e r t a e n la m e m b r a n a s o b r e las c é l u l a s s e n s i b l e s interna g e n e r a n d o poros e n y la b a c t e r i a . P o r o t r a p a r t e , e m p l e a n d o m u t a g e n e s i s s o b r e el s i s t e m a d e transporte del ferricromo hidroxarriato h e m o s podido esclarecer parte d e l s i s t e m a i n v o l u c r a d o e n el r e c o n o c i m i e n t o d e l r e c e p t o r y t r a n s p o r t e de la M c c 2 4 inserción en a través la CG13.03.25.007. d e la m e m b r a n a membrana externa hasta su interna.Financiamiento: eventual VRA-UDP XXXI Reunión 29. EL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA DE Escherichia coii E S U N B L A N C O I N T R A C E L U L A R D E T E L U R I T O D E P O T A S I O ( T h e p y r u v a t e d e h y d r o g e n a s e c o m p l e x of Escherichia coii is a n i n t r a c e l l u l a r t a r g e t of p o t a s s i u m t e l l u n t e ) D í a z , W . , C a s t r o , M. . Molina, R. , Vásquez, C. . Laboratorio de Microbiología M o l e c u l a r , Facultad de Q u í m i c a y Biología, U S A C H \ 1 I I 1 1 1 E l t e l u r i t o de p o t a s i o ( K T e 0 ) e s t ó x i c o p a r a la m a y o r í a d e las especies bacterianas, e s p e c i a l m e n t e G r a m negativas. Se ha descrito general que en bacterias que p r e s e n t a n m a y o r resistencia a este tóxico participarían e n z i m a s que p u e d e n reducir telurito ( T e ) a teluro m e t á l i c o ( T e ) . La c a p a c i d a d de r e d u c í r o s t e o x i a n i ó n de teluro ha sido ¿ s o d a d a c o n a c t i v i d a d e s s e c u n d a n as de a l g u n a s e n z i m a s c o m o nitrato r e d u c t a s a s y c a t a l a s a s . E n este t r a b a j o se presentan e v i d e n c i a s q u e el c o m p l e j o m u l t i e n z i m á t i c o p i r u v a t o d e s h i d r o g e n a s a ( P D H ) d e Esc henchí a coii p r e s e n t a a c t i v i d a d r e d u c t o r a d e t e l u r i t o . E x p e r i m e n t o s d e s u b c l o n a m i e n t o p e r m i t i e r o n d e t e r m i n a r q u e la c a p a c i d a d de r e d u c i r t e l u r i t o in vitro r a d i c a e x c l u s i v a m e n t e e n el : i m p o n e n t e E 3 (dihidrolipoamida d e s h i d r o g e n a s a) del complejo P D H . C u a n d o s e c o m p a r a n c o n la c e p a s i l v e s t r e , m u t a n t e s d e f i c i e n t e s e n el : e n tpd ( c o d i f i c a p a r a E 3 ) p o s e e n u n a m e n o r a c t i v i d a d r e d u c t o r a d e telurito, a d e m á s de una alta s e n s i b i l i d a d a K T e 0 . T a m b i é n se z e t e r m i n ó q u e E. coii e x p u e s t a s a c o n c e n t r a c i o n e s s u b l e t a l e s d e e x h i b e n m e n o r a c t i v i d a d p i r u v a t o d e s h i d r o g e n a s a, s u g i r i e n d o q u e el c o m p l e j o P D H p o d r í a r e p r e s e n t a r u n n u e v o b l a n c o i n t r a c e l u l a r del K T e 0 . Financiado por Fondecyt 1060022 y D i c y t - U S A C H . 2 I 3 + 4 0 I I ! I I 2 3 2 : i 2 3 31. T R A N S P O R T A D O R E S DE ARABINOSA: PARTICIPAN EN E L NGRES O DE TELURITO DE POTASIO (K2TE03)A COLI? ( A r a b i n o s e t r a n s p o r t e r s : d o t h e y p l a y a r o l e in t h e u p t a k e p o t a s s i u m t e l l u n t e ( K T e 0 ) i n Escherichia 2 I ' ESCHERICHIA cotí?) 3 of 1 Elias, A. , Vásquez, Laboratorio de Microbiología Molecular. F a c u l t a d de Q u í m i c a y 1 Biología. U n i v e r s i d a d de S a n t i a g o de C h i l e . . E •• T e 0 : 3 ipunta a de e n t r a d a es a ú n controversial. que el ingreso de este 30. VÍA D E S E Ñ A L I Z A C I Ó N M E D I A N T E C-DI-GMP E N B A C T E R I A S B I O M I N E R A S ( c - d i - G M P p a t h w a y in b i o m i n i n g b a c t e r i a ) C a s t r o , M. , 1 1 2 3 1 2 3 32. OXIDASAS FUSARIUM Y CICLASAS DE GIBERELINAS SUBGLUTINANS (Gibberellin from Fusarium subglutinans) G o n z á l e z , X . P . V. 1 , 2 , 3 , Rojas, M.C. 1 , 2 , 3 tóxico Evidencia estaría reciente relacionado al : stemas de la u t i l i z a c i ó n d e a r a b i n o s a r e q u i e r e la araBAD transporte). El (metabólico), transporte 1 , 2 , 3 , Acuña, 2 3 Fusarium fujikuroi Gibbereiia patógeno fujikuroi. F. del se araFGH lleva y/o a cabo por arroz fujikuroi perteneciente produce ácido al complejo giberélico cuya b i o s í n t e s i s h a s i d o c a r a c t e r i z a d a a n i v e l d e l o s g e n e s , las e n z i m a s y genes operón , Suazo, C. cyclases D e p a r t a m e n t o de Q u í m i c a . las r e a c c i o n e s q u í m i c a s . Las o t r a s del 1 , 2 , 3 HONGO and 1 o t r o s m e t a b o l i t o s . E n E. coii, resión EN E L oxidases . Universidad de Chile , Facultad de Ciencias , ransporte de moléculas biológicamente importantes como azúcares u : 1 Ruiz, L.M. , Barriga, A . , _aldos. D . _aldo. C . \ Guiliani, N. . Unidad de Comunicación Bacteriana, Laboratorio de Microbiología y B i o t e c n o l o g í a M o l e c u l a r , D e p a r t a m e n t o de B i o l o g í a , Instituto de Dinámica Celular y Biotecnología, Universidad de Chile. , C E P E D E Q , F a c u l t a d de C i e n c i a s Q u í m i c a s y F a r m a c é u t i c a s , U n i v e r s i d a d de C h i l e , Center of Bioinformatics a n d G e n o m e Biology, F C V - M I F A B , Universidad Andrés Bello. . Las bacterias quirniolitoautotróficas Acidithiobacillus ferrooxidans Acidithiobacillus thiooxidans y Acidithiobacillus _aldos están i n v o l u c r a d a s e n la b i o l i x i v i a c i ó n d e s u l f u r e s m e t á l i c o s . D i f e r e n t e s estudios indican q u e estas bacterias son c a p a c e s de c o n f o r m a r b i o p e l í c u l a s , e s t r u c t u r a s f u n d a m e n t a l e s e n la b i o l i x i v i a c i ó n . E n t o n c e s , i a c a r a c t e r i z a c i ó n d e los m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s i n v o l u c r a d o s e n la i n t e r a c c i ó n b a c t e r i a / m i n e r a l y la f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s a d q u i e r e r e l e v a n c i a p a r a d i s e ñ a r e s t r a t e g i a s b i o l ó g i c a s p a r a m e j o r a r la e f i c i e n c i a d e la b i o l i x i v i a c i ó n . El _ a l d o s s e n s i n g ( Q S ) y la v í a d e l m e n s a j e r o segundario diguanilato cíclico ( c - d i - G M P ) son reconocidos c o m o los p r i n c i p a l e s m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s d e r e g u l a c i ó n d e la f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s . N o o b s t a n t e , n o h a y e s t u d i o s al r e s p e c t o en m i c r o o r g a n i s m o s b i o m i n e r a s . P o r esto, nos h e m o s propuesto i n d a g a r si e s t o s m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s e s t á n i n v o l u c r a d o s e n la i n t e r a c c i ó n b a c t e r i a / m i n e r a l y la p o s t e r i o r f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s e n b a c t e r i a s b i o m i n e r a s . P r e v i a m e n t e , h e m o s identificado u n s i s t e m a de Q S t i p o A1-1 f u n c i o n a l e n la c e p a A T C C 2 3 2 7 0 d e A . f e r r o o x i d a n s (Farah y col., 2005. Valenzuela y col., 2007; Ruiz y col., 2008). U s a n d o h e r r a m i e n t a s b i o i n f o r m á t i c a s p a r a a n a l i z a r las s e c u e n c i a s genómicas de A . ferrooxidans ATTC 2 3 2 7 0 , A. Thiooxidans A T C C 19377 y A. _ a l d o s A T C C 5 1 7 5 6 , h e m o s identificado genes que c o d i f i c a n p a r a p r o t e í n a s p u t a t i v a s i n v o l u c r a d a s e n la v í a del c - d i - G M P e n e s t o s m i c r o o r g a n i s m o s . J u n t o c o n d e m o s t r a r la t r a n s c r i p c i ó n d e e s t o s g e n e s e n A . _ a l d o s y A . f e r r o o x i d a n s , h e m o s e v i d e n c i a d o la presencia de c-di-GMP en este último microorganismo. Estos r e s u l t a d o s s u g i e r e n la e x i s t e n c i a d e u n a v í a d e s e ñ a l i z a c i ó n m e d i a n t e c-di-GMP funcional en estas bacterias biomineras. Las giberelinas (Gas) son fitohormonas diterpénicas descubiertas en e j e r c e s u s e f e c t o s t ó x i c o s d e n t r o d e la c é l u l a . S i n e m b a r g o , el m e c a n i s m o Anual d e G a s sin e m b a r g o , e s p e c i e s del complejo contienen excepto e n F. proiiferatum, no se ha araE i n v e s t i g a d o la dos s e i n v e s t i g a r o n las f u n c i o n e s catalíticas d e m o n o o x i g e n a s a s de G a s funcionalidad de oxidasas y ciclasas. E n este trabajo m e c a n i s m o s diferentes: u n sistema de simporte asociado a protones y en u n s i s t e m a d e p e n d i e n t e de e n e r g í a a s o c i a d o a p r o t e í n a s de u n i ó n . productora. Resultados e r / f - k a u r e n o i d e s e n el f i l t r a d o o el m i c e l i o y m e d i a n t e la a d m i n i s t r a c i ó n preliminares de nuestro laboratorio indican que la la especie aislada Se del analizó maíz, F. mediante subgiutinans, GC-MS la una presencia especie de no Gas y p r e s e n c i a d e a r a b i n o s a e n el m e d i o d e c u l t i v o a u m e n t a la s e n s i b i l i d a d de p r e c u r s o r e s m a r c a d o s c o n d e Escherichia reacciones e n z i m á t i c a s . Las dos c e p a s investigadas ( E 0 0 9 9 y E 2 1 9 2 ) cedria ingresar coii a a telurito de potasio, sugiriendo través del(los) transportador(es) que el K Te0 2 asociado(s) 3 al i g r e s o d e e s t e a z ú c a r a la c é l u l a . E s t e e f e c t o s e r í a e s p e c í f i c o p a r a reSunto y n o p a r a o t r o s m e t a l o i d e s "ondecyt 1060022 y Dicyt-USACH. como arsenito. Financiado por no producen transformados Gas. s u s t r a t o s d e la G A productos sería 1 4 C a l o s c u l t i v o s , s e i n v e s t i g a r o n las precursores productos o 1 4 C-GA y 1 2 de oxidación 1 4 C-GAi fueron en tanto que los sintetasa m o s t r a r o n una baja metabolización a d e la v í a lo q u e s u g i e r e inactiva subgiutinans. Los en varios 1 4 presentaría La biosíntesis un q u e la m o n o o x i g e n a s a bajo de Gas nivel de expresión estaría bloqueada á c i d o e / ? f - k a u r e n o i c o e n e s t a e s p e c i e a d i f e r e n c i a d e F. P450-1 en a nivel F. del proiiferatum. Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular i MOLECULAR 33. DISTRIBUCION I N T R A C E L U L A R D E L P R O T E A S O M A 2 0 S D E 3 4 . E S T U D I O D E L A P R O L I F E R A C I Ó N D E Trichomonas Trypanosoma ( S T U D I E S O F Trichomonas cruzi 20S cruzi proteasome.) 3 Mortara, (Intracellular R. , Osorio, 2 S a g ú a, distnbution H. . L.\ 2 Araya. J. , of the Trypanosoma 2 Gutiérrez, B , González, J . 2 2 Muñoz, C. , Unidad de 1 Parasitología Molecular. Universidad de Antofagasta, Chile , Unidad de Chile , Parasitología Departamento Molecular, de Universidad Microbiología, de 2 Antofagasta, Immunologia y Parasitología, 3 U N I F E S P , Escola Paulista de Medicina. S A £ o Paulo, SP, B r a z i l . La diferenciación de Trypanosoma cruzi, de e inhibido lactacistina. E n células eucari óticas los proteas ornas se e n núcleo y c i t o p l a s m a , no o b s t a n t e T.cruzi la d i s t r i b u c i ó n T. cruzi, por intracelular 7 E 5 , dirigido contra u n a s u b u n i d a d alfa de 2 7 k D a del a encuentran n o e s c o n o c i d a . M é t o d o s : U t i l i z a n d o el a n t i c u e r p o L. , 2 Sagua, H. . en monoclonal proteas orna de s e e s t u d i ó m e d i a n t e in m u ñ o el e c t r o m i c r o s c o p i a y m i c r o s c o p í a c o n f o c a l . la d i s t r i b u c i ó n i n t r a c e l u l a r d e l p r o t e a s o r n a 2 0 S . I g u a l m e n t e , vaginaíis 1 PROLIFERATION) Muñoz, C . . 2 Araya, J. , 2 González, J. . Unidad de 1 Parasitología Molecular, Universidad de Antofagasta. C H I L E , Unidad 2 de P a r a s i t o l o g í a Molecular. U n i v e r s i d a d de A n t o f a g a s t a , Chile . Trichomonas vaginaíis e s u n p r o t o z o o f l a g e l a d o q u e i n f e c t a el t r a c t o urogenital h u m a n o , r e p o r t á n d o s e 170 millones de n u e v o s c a s o s c a d a a ñ o . E n c u l t i v o a x é n i c o , la p r o l i f e r a c i ó n d e T. vaginaíis tripomastigotes a m a s t i g o t e s , es un p r o c e s o p r o t e a s o m a - d e p e n d i e n t e 2 Osorio, vaginaíis depende de pH y temperatura. No obstante, observaciones preliminares laboratorio parásitos factores sugieren que que afectan de 6 2 . 0 0 0 estudió crecimiento depende del de nuestro número de p r e s e n t e s e n el i n o c u l o i n i c i a l . C o n el o b j e t i v o d e identificarel crecimiento utilizando rango el el crecimiento inóculos a 500.000 secretoma de de 7. vaginaíis de diferente se parásitos/ml. Mediante T. vaginaíis. estudió el d e n s i d a d c e l u l a r e n el SDS-PAGE Finalmente se c r e c i m i e n t o del p r o t o z o o en p r e s e n c i a de Brefeldnna A . se estudió el El e s t u d i o d e el a n t i c u e r p o s e utilizó p a r a i n m u n o p r e c i p i t a r p r o t e a s ornas y e s t u d i a r la c u r v a s d e c r e c i m i e n t o , m o s t r ó q u e e l p a r á s i t o e s c a p a z d e p r o l i f e r a r la cuando actividad enzimática en los distintos F i n a l m e n t e , el c i n e t o p l a s t o d e T.cruzi de iodixanol y Resultados: 20S cinetoplasto. confirmada fue La presencia mediante cinetoplasto núcleo, proteasorna evaluación de de y confocal citoplasma en y cinetoplasto Conclusiones: Evidencias distribuyéndose iniciales que fueron escaso de 250.000 crecimiento se y 500.000 observó i n ó c u l o s m e n o r e s . El e s t u d i o del s e c r e t o m a d e T. vaginaíis con mostró el q u e u n a b a n d a de a p r o x i m a d a m e n t e 2 0 k D a se secreta sólo a partir en d e l t i e m p o 0 s i e n d o s u i n t e n s i d a d c r e c i e n t e e n el t i e m p o . F i n a l m e n t e fue un 5 9 , 4 % de i n h i b i c i ó n e n la p r o l i f e r a c i ó n s e o b s e r v ó cuando T. de vaginaíis A. Nuestras la a c t i v i d a d enzimática de o b s e r v a c i o n e s s u g i e r e n q u e e l c r e c i m i e n t o d e d e T . vaginaíis depende microscópicas núcleo, inóculos mientras purificadas está presente en los parásitos/ml fracciones de p r o t e a s o r n a utilizando S u c - L L V T - A M C m u e s t r a n que proteasorna T.cruzi, de electrónica en inmunoblot y mediante inmunoprecipitados sustrato. un parásito. revelado con anticuerpo 7E5. microscopía identificado del fue aislado mediante gradiente se realizó u n i n m u n o b l o t Mediante proteasorna estadios y como bioquímicas e n t o d o s los e s t a d i o s citoplasma fue cultivada del inoculo inicial en presencia de y probablemente de Brefeldina p r o d u c t o s de s e c r e c i ó n del parásito. Financiamiento: F U N A N D E S C13955/17. de y cinetoplasto. Se p o s t u l a q u e la p r e s e n c i a d e p r o t e a s o m e s e n c i n e t o p l a s t o , n o d e s c r i t a hasta hoy, evento tendría relación ocurre durante que con la el r e m o d el a m i e n t o diferenciación de del organelo, tripomastigote a amastigote. Financiamiento:VRA1321;Fundación Andes C13955/17. VIROLOGIA BIOQUIMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR DE PLANTAS 35. E S T U D I O D E LA INICIACIÓN D E L A T R A D U C C I Ó N D E L mRNA 36. A N A L I S I S M O L E C U L A R D E L A R E S P U E S T A DEL D E Pinus SEGMENTO (Mechanism S DE LOS VIRUS ANDES Y of t r a n s l a t i o n i n i t i a t i o n o f t h e BUNYAMWERA. S mRNA of A n d e s 1 and 1 Bunyamwera virus) Vera-Otarola, J . , López-Lastra, M. . Centro de Investigaciones Médicas, Facultad d e Medicina, Pontificia Universidad 1 Católica de Chile. . of Pinus 2 C. , radiata 1 radiata d e la f a m i l i a B u n y a v i n d a e p o s e e n u n genoma 1 R. . Instituto de Biología 2 1 Vegetal y Biotecnología, 2 Universidad de T a l c a , Forestal M i n i n c o . madera de compresión t r i p a r t i t o ( S , M y L ) . El m R N A d e l s e g m e n t o S ( m R N A S ) e s u t i l i z a d o genes e n a l g u n o s g é n e r o s c o m o t e m p l a d o p a r a la s í n t e s i s d e d o s p r o t e í n a s este fenómeno virales, N y N S s . Estas proteínas se sintetizan a partir del m R N A 1 D. D o n ) R a m o s , P . , C r u z , N. , E m h a r t , V . , G a n t z , Herrera, E n la n a t u r a l e z a , á r b o l e s Los virus miembros GRAVITRÓPICA D. D O N ( M o l e c u l a r a n a l y s i s of g r a v i t r o p i c r e s p o n s e involucrados d e la f a m i l i a d e l a s c o n i f e r a s en respuesta y los al e s t í m u l o mecanismos aún se desconocen. desarrollan gravitrópico. moleculares Los subyacentes a E n este t r a b a j o se e s t u d i ó la S e x p r e s i ó n d e g e n e s e n r e s p u e s t a al e s t i m u l o g r a v i t r ó p i c o i n d u c i d o p o r u t i l i z a n d o d o s c o d o n e s d e i n i c i o d e la t r a d u c c i ó n d i f e r e n t e s el A U G N y i n c l i n a c i ó n d e 4 5 ° e n p l á n t u l a s d e p i n o r a d i a t a . C o m o la r e s p u e s t a d e e l A U G N S s . El m e c a n i s m o m o l e c u l a r r e s p o n s a b l e d e la s e l e c c i ó n d e l reorientación p r i m e r ( A U G N ) ó s e g u n d o ( A U G N S s ) c o d ó n de inicio realizó una e x t r a c c i ó n R N A total a los t i e m p o s d e 2,5h, 10h, 24h y 30 n o ha sido aún del tallo se observa alrededor de las 2,5 horas, d i l u c i d a d o . C o n e l o b j e t i v o d e d e t e r m i n a r la e s t r a t e g i a r e s p o n s a b l e d e días la s e l e c c i ó n d e l c o d ó n d e i n i c i o e n el m R N A S d e H a n t a v i r u s A n d e s curvándose (ANDV) m u e s t r a d e la m i t a d s u p e r i o r e i n f e r i o r . A p a r t i r d e e s t o s R N A s y Bunyamwera (Bunyavirus) se diseñaron RNA c o m p u e s t o s d e la r e g i ó n 5' n o t r a d u c i d a ( 5 ' U T R ) d e l o s v i r u s de la región que codifica para el reportero de la sintéticos seguido luciferasa de de inducido generaron y, el estímulo mediante bibliotecas un de corte supresivas la zona del longitudinal substractivas tallo que de éste, (SSH) conteniendo u n total de 2 6 5 3 clones c o n un t a m a ñ o de se responde se de extrajo se ESTs, fragmentos l u c i é r n a g a ( F L u c ) . L o s R N A s s e e v a l u a r o n e n e n s a y o s in v i t r o y e x e n t r e 3 0 0 y 1 5 0 0 p b , y u n a r e d u n d a n c i a c e r c a n a al 4 0 % . A n á l i s i s d e vivo. PCR Los resultados sugieren que el mecanismo de inicio de la traducción a partir del A U G N del m R N A S de B u n y a m w e r a y A N D V corresponde a un mecanismo q u e la s e l e c c i ó n d e l A U G N S s scanning. USACH Financiamiento: cap-dependiente canónico, mientras se ajusta a un m e c a n i s m o de JEAI-IRD. JVO es Becario leaky Mecesup. en t i e m p o real de a l g u n o s g e n e s de t r a n s d u c c i ó n de hormonales y e n z i m a s involucradas en rutas metabólicas ser efectivamente expresados diferencial mente. Este señales mostraron trabajo c o n t r i b u y e al e n t e n d i m i e n t o d e la r e s p u e s t a g r a v i t r ó p i c a y f o r m a c i ó n de madera de compresión en p. radiata. Financiamiento: Fondecyt 1071026, Ecos-Conicyt C 0 7 B 0 1 . Conicyt Doctoral PR y N C . XXXI Reunión 37. CARACTERIZACIÓN HOMÓLOGO MOLECULAR DE AL GRUPO PREFERENCIALMENTE Pinus radiata. PrTRAUCO, UN TRITHORAX DURANTE LA GEN EXPRESADO EMBRIOGENESIS ( M o l e c u l a r C h a r a c t e r i z a t i o n o f PrTRAUCO, EN a trithorax g r o u p h o m o l o g u e g e n e e x p r e s s e d p r e f e r e n t l y d u r i n g e m b r i o g e n e s i s in Pinus 1 radiata) 1 1 Matte, J . P . ' , A q u e a , F. , 1 2 C a ñ ó n . P. , 1 Gutiémez, 2 F. , 1 R i c o , S . , L a m p r e c h t , M . . S á n c h e z , C , A r c e - J o h n s o n , P. . Pontificia Universidad Católica 1 de Chile , Instituto de Investigaciones 2 A g r o b i o l ó g i c a s de G a l i c i a . Anual 38. E X P R E S I Ó N D I F E R E N C I A L D E G E N E S A C C O X I D A S A Y A C C S I N T A S A E N Pinus DE Radiata VERTICALIDAD synthase in Pinus D. D O N E N R E S P U E S T A (Differential radiata 1 1 2 , V. , Gantz, C. , Herrera, 1 y 1 R. . 2 L a s s i n g u l a r i d a d e s y p r o p i e d a d e s d e la m a d e r a d e c o m p r e s i ó n ( C W ) difieren a las presentes en madera opuesta (OVV) c o m o madera normal, con un complejo p r o c e s o de f o r m a c i ó n que involucran varias mecanismo de sugieren involucramiento etapas tempranas de la embriogenesis p l a n t a s , u s a n d o c o m o m o d e l o la e m b r i o g e n e s i s Mediante oxidase Lab. Fisig. V e g . & G e n M o l , I B V B , U T a l c a , Forestal Mininco . etapas radiata. A PERDIDA ACC 2 V a l e n z u e l a , C . , R a m o s , P. , Emhart expresan las of D . D O N i n r e s p o n s e t o l o s t of v e r t i c a l i t y ) E n n u e s t r o l a b o r a t o r i o e s t a m o s i n t e r e s a d o s en e s t u d i a r g e n e s q u e se durante expression la t é c n i c a de c D N A - A F L P s o m á t i c a en identificamos en Pinus un gen que estarían el moduladas respuesta e m b a r g o , los p a t r o n e s es por un control desconocido de fitohormonas de expresión hormonal. pero El investigaciones como Etileno. de g e n e s r e l a c i o n a d o s c o n Sin la h o m ó l o g o al g r u p o T r i t h o r a x , d e s c r i t o p r e v i a m e n t e s ó l o e n a n i m a l e s y b i o s í n t e s i s d e E t i l e n o n o h a n s i d o d e m o s t r a d o s . C o n el fin d e v a l i d a r l e v a d u r a s , q u e s e e x p r e s a d u r a n t e el d e s a r r o l l o e m b r i o n a r i o . E s t e t i p o la p r e s e n c i a d e e s t o s g e n e s , p l á n t u l a s d e Pinus de genes s o m e t i d a s a inclinación d e 4 5 Á ° p o r 2,5h y 10h (tiempos t e m p r a n o s ) , está involucrado e n el re m o d e l a m i e n t o de c r o m a t i n a . A radiata D.Don, fueron p a r t i r del f r a g m e n t o i d e n t i f i c a d o e n el a n á l i s i s d e c D N A - A F L P , h e m o s 24h y 1 mes (tiempos tardíos), donde clonado de expresión 4 2 6 a m i n o á c i d o s que p r e s e n t a en su e x t r e m o a m i n o una señal de 1-aminociclopropano-1-carboxilato oxidasa y sintasa (ACC oxidasa y l o c a l i z a c i ó n n u c l e a r y e n el e x t r e m o c a r b o x i l o u n d o m i n i o S P R Y de ACC real. el gen completo y codifica para una proteína de sintasa) por se e v a l u a r o n los niveles de isoformas de distintas PCR tiempo Observándose un nivel de i n t e r a c c i ó n e n t r e p r o t e í n a s . U t i l i z a n d o la t é c n i c a d e Q D - P C R sabemos expresión que genoma. T C 7 5 0 5 9 ( A C 0 3 ) y P t a A C S I ( A C S 1 ) . A C 0 3 se r e p r i m i ó t a n t o en hoja el gen PrTRAUCO Mediante real-time alta expresión vegetativos tiene PCR más de determinamos en tejido una copia en el que este gen presenta ernbriogénico en comparación con d e P i n u s r a d i a t a . El p a t r ó n d e e x p r e s i ó n e n una tejidos embriones como diferencial raíz, en mientras tallo, las otras ACC oxidasa y sintasa por C07-B01 y Fondecyt 1071026. in situ. Esto demostró e n el p o l o r a d i c u l a r , que en el gen se el m e r i s t e m a m e r i s t e m a l a t e r a l del e m b r i ó n . F i n a l m e n t e expresa apical y se quiere d e m o s t r a r y isoformas presentan respuesta hibridación OW CW de para ACC los genes oxidasa no p r e s e n t a r o n e x p r e s i ó n p a r a t a l l o i n f e r i o r ni s u p e r i o r . D e m o s t r a n d o q u e z ¡ g ó t i c o s m a d u r o s y e n r a í c e s al i n i c i o d e s u d e s a m o l l o f u e e v a l u a d o preferentemente entre a la incitación. un patrón Financiamiento: de expresión Proyecto en Ecos-Conicyt el que e s t e g e n p e r t e n e c e al g r u p o T r i t h o r a x r e a l i z a n d o u n a n á l i s i s f u n c i o n a l c o m p l e m e n t a n d o levaduras mutantes. En conclusión, en este trabajo se presenta Trithorax la de primera coniferas. caracterización Núcleo molecular Milenium de Genómica un gen tipo Funcional de Plantas (P06-009-F). 3 9 . L A E X P R E S I O N D E Vitis vinifera CONSTANS-LÍKE1 U N H O M Ó L O G O D E L G E N CONSTANS, FOTOPERIODO Y EL DESARROLLO d e v e l o p m e n t a l r e g u l a t i o n of a C O N S T A N S 1 V.vinifera 1 E. . Instituto de Biología (Photoperiod and LIKE gene isolated 1 cv. C a r m e n e r e ) A l m a d a , R . D . , Villanueva, (VvCOLI), E S REGULADA POR EL Ruiz-Lara, S. , Vegetal y from González Biotecnología, 1 Universidad de Talca, 2 Norte N° 6 8 5 , T a l c a . . La luz influencia el d e s a r r o l l o desamollado exclusivos regúlatenos en respuesta Las proteínas y de las CONSTANS y EXPRESION sistemas y estas fotosensores del m e d i o a m b i e n t e CONSTANS-LIKE han DE CRECIMIENTO (Expression Chilean of Y GENES DE 1 Herrera, R. , EXPANSINAS MADURACION expansin genes DE during C.R. , 1 Moya-León, M.A. . DURANTE FRUTILLA growth 1 strawberry) Figueroa, Dotto, Laboratono and 2 M.C , EL CHILENA ripening of Civello, P.M. , de Fisiología the 2 Vegetal, Instituto de Biología V e g e t a l y B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d de T a l c a , Casilla angiospermas sofisticados a cambios 40. 747, 1 Talca, Chile. , Instituto Tecnológico de Chascomús, 2 B7130IWA, Chascomús, Argentina. . y Las e x p a n s i n a s , proteínas sin actividad e n z i m á t i c a conocida, han sido luminoso. e s t u d i a d a s p o r s u r e l a c i ó n c o n el p r o c e s o d e a b l a n d a m i e n t o d e f r u t o s (COL) son p o r s u p o s i b l e p a r t i c i p a c i ó n e n el d e s e n s a m b l a j e d e la p a r e d c e l u l a r . c o n s t i t u y e n t e s d e e s t a s v í a s . E n V i t i s s p p . , el f o t o p e r i o d o a f e c t a el Con crecimiento a b l a n d a m i e n t o d e frutilla c h i l e n a (Fragaria chifoensis), s e a n a l i z ó el nivel expansinas descritas FaEXP4, FaEXPó, embargo, estacional, las la bases dormíancia moleculares y fertilidad de estas de yemas, respuestas sin son el fin de de evaluar expresión de la participación cinco mRNAs de de las expansinas en el en d e s c o n o c i d a s . E n e s t e t r a b a j o , a n a l i z a m o s el perfil t r a n s c r i p c i o n a l d e Fragaria x un FaEXP6) d u r a n t e el d e s a m o l l o d e l f r u t o , y s e c o m p a r ó c o n e l d e F. x gen COL a través del desarrollo de V. vinifera cubriendo ananassa (FaEXPI, FaEXP2, i m p o r t a n t e s e v e n t o s del d e s a m o l l o c o m o la i n d u c c i ó n f l o r a l , d o r m a n c i a ananassa y el d e s a r r o l l o d e f l o r y f r u t o s , y t a m b i é n , b a j o d i f e r e n t e s f o t o p e r i o d o s . i n c r e m e n t o en los niveles de e x p r e s i ó n de m R N A y pérdida de Nuestros resultados sugieren que V v C O L I d e l f r u t o p a r a FaEXPI, t e n d r í a u n rol d u r a n t e la i n d u c c i ó n y desarrollo floral. A d e m á s , e n c o n d i c i o n e s de día largo y corto, los t r a n s c r i p t o s de V v C O L I ciclaron marcadamente con un p e r i o d o d e 24 h y c o n u n m á x i m o d e e x p r e s i ó n al i n i c i o d e l p e r i o d o luminoso. En condiciones de luz constante se observó un c o m p o r t a m i e n t o a r r í t m i c o e n la e x p r e s i ó n d e V v C O L I N u e s t r o t r a b a j o constituye fotoperiodo el p r i m e r i n t e n t o en vides. de disectar molecularrnente Agradecimientos: Proyecto Consorcio Biofrutales. Universidad la v í a de de Talca; cultivar Chandler. FaEXP2 el m R N A d e FaEXPd Se encontró y FaEXPd correlación ambas y FaEXPd, especies en a m b a s especies. Para y sin el a b l a n d a m i e n t o CONICYT/SECyT E n el c a s o de se o b s e r v ó u n p a t r ó n d e e x p r e s i ó n diferencial e n correlación P o d e m o s c o n c l u i r q u e FaEXPó, en el firmeza s e o b s e r v ó u n n i v e l d e e x p r e s i ó n m a y o r e n la e s p e c i e d e a b l a n d a m i e n t o m á s i n t e n s o (F. chihensis). FaEXP4 entre y de frutos (Programa con FaEXPI de de F. el a b l a n d a m i e n t o y FaEXP2 chifoensis. Cooperación del fruto. están implicados Agradecimientos: Internacional), Proyecto P B C T Anilto de Ciencia y T e c n o l o g í a (ACT-41). Sociedad 41. GENES vinifera PARA Y SU TRANSPORTADORES ASOCIACION PARTENOCARPIA transporter partenocarpic from F. , Ruiz-Lara, EL CULTIVAR vinifera in S.\ DE EL Vitis phenomenon 1 Gainza, EN genes CON BORO DE Vitis FENÓMENOS CARM ENERE. and their Carmenere E. . DE (Boron association cultivar.) 1 González, de Bioquímica y Biología with Pérez, Instituto de R.\ Biología ANÁLISIS p r e s e n t a a n o m a l í a s e n el d e s a r r o l l o r e p r o d u c t i v o (frutos p a r t e n o c á r p i c o s ) , q u e se chiioensis expressed nativo traducen en de a DE deficiencia de boro, cDNAS Fragaria involved in t h e Fragaria flavonoid chiioensis synthesis pathway 1 1 1 Fisiología Vegetal y Genética Molecular, in 1 L. ( D u c h . ) ) S a l v a t i e r r a , A. , Laboratorio Instituto de Biología 1 Vegetal y Biotecnología, Universidad de T a l c a . . Fragaria asociado cDNAs strawberny, El p r o c e s o sido EXPRESIÓN L . ( D U C H . ) ( A n a l y s i s of e x p r e s s i o n p r o f i l e s of d i f f e r e n t i a l l y racimo. ha DE D E SÍNTESIS D E F L A V O N O I D E S E N F R U T I L L A NATIVA, b a y a s s e m i l l a d a s y no s e m i l l a d a s de t a m a ñ o diferencial en un m i s m o evento PERFILES 1 Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca. . Tal DE D I F E R E N C I A L M E N T E E X P R E S A D O S I N V O L U C R A D O S E N L A VÍA P l m e n t e l , P. , M o y a - L e ó n , A . , C a l i g a n , P. , H e r r e r a , R. . 1 Vitis vinifera cv C a r m e n e r e , c o m ú n m e n t e 42. Molecular de desamollo chiioensis, y m a d u r a c i ó n d e f r u t o s d e frutilla n a t i v a , está a s o c i a d o a u n conjunto de c a m b i o s , entre m i c r o n u t n e n t e e s e n c i a l p a r a e l d e s a r r o l l o d e l t u b o p o l í n i c o , el c u a l e s e l l o s , a b l a n d a m i e n t o , a r o m a , s a b o r y c o l o r . E n el g é n e r o Fragaria, captado c o l o r del f r u t o s e o r i g i n a p o r la a c u m u l a c i ó n d e a n t o c i a n i n a s d u r a n t e y distribuido Arabidopsis thaliana el cual capta y mediante transportadores específicos. se ha identificado a los t r a n s p o r t a d o r e s distribuye boro en el tejido radicular y En NIP5;1, la m a d u r a c i ó n . L a g e n e r a c i ó n d e e s t o s BOR1, acción coordinada compuestos de u n a serie de e n z i m a s el r e s p o n d e a la codificadas por genes r e s p o n s a b l e d e s u m o v i l i z a c i ó n h a c i a el t e j i d o x i l e m á t i c o y p o s t e n o r e s t r u c t u r a l e s d e la v í a d e b i o s í n t e s i s d e f l a v o n o i d e s . C o n m o t i v o d e transporte ampliar nuestro c o n o c i m i e n t o acerca del proceso de m a d u r a c i ó n de al t e j i d o a é r e o . caracterización Esta estructural investigación esta enfocada y funcional de ortólogos en la de A t B O R I y los frutos de Fragaria chiioensis, se generaron diversas librerías A t N I P 5 ; 1 e n V i t i s v i n i f e r a cv. C a r m e n e r e . G e n e s h o m ó l o g o s h a n s i d o s u b s t r a c t i v a s s u p res i v a s ( l i b r e r í a s S S H ) c o n t r a s t a n d o c u a t r o e s t a d i o s i d e n t i f i c a d o s e n V. v i n i f e r a c v . C a r m e n e r e ( V v B O R I y V v N I P 5 ; 1 ) , l o s de q u e s o n e x p r e s a d o s e n t e j i d o s a é r e o s d e la p l a n t a i n c l u y e n d o f l o r e s y c D N A s diferencial m e n t e expresados se encontraron dos relacionados frutos. con El análisis semilladas el g e n de sus perfiles transcripcionales en bayas y no s e m i l l a d a s en V. vinifera cv. C a r m e n e r e , indica que VvBORI se e n c u e n t r a reprimido en bayas no semilladas, desarrollo la desde producción verde de pequeño hasta compuestos maduro. flavonoides: Dentro de Chalcona los sintasa ( C H S ) y A n t o c i a n i d i n a s i n t a s a ( A N S ) . L o s análisis de e x p r e s i ó n de estos g e n e s r e v e l a r o n u n a correlación entre sus niveles de transcritos i n d i c a n d o que a l t e r a c i o n e s del t r a n s p o r t e h a c i a tejidos sink, p u e d e n y la a c u m u l a c i ó n d e a n t o c i a n i n a s . A g r a d e c i m i e n t o s a P r o y e c t o P B C T s e r la c a u s a d e la d e f i c i e n c i a d e b o r o e n t e j i d o s r e p r o d u c t i v o s a la Anillo A C T - 4 1 g e n e r a c i ó n del e v e n t o p a r t e n o c a r p i c o . P. P i m e n t e l . 43. UNA SUBUNIDAD EXPRESA HIERRO-AZUFRE DURANTE LA MADURACION REGULADO POR CONTROLAN THALIANA. FACTORES LA DEL COMPLEJO DE DE TRANSCRIPCION EMBRIOGENESIS EN factors ES QUE ARABIDOPSIS ( A c o m p l e x II i r o n - s u l f u r s u b u n i t is e x p r e s s e d d u r i n g s e e d m a d u r a t i o n a n d is r e g u l a t e d b y e m b r y o g e n e s i s - r e l a t e d i n Arabidopsis 1 Gómez, II S E LA SEMILLA Y I. , thaiiana) 1 Jordana, X. . Microbiología, Facultad Vásquez, Departamento de Ciencias M.\ de transcription Roschzttardtz, Genética Biológicas, H.\ Molecular P. y Universidad 1 C a t ó l i c a de Chile, S a n t i a g o , C h i l e . . por apoyo 44. F A C T O R E S financiero y Conicyt por beca doctoral DE TRANSCRIPCION BZIP INVOLUCRADOS RESPUESTA A ESTRES S A L I N O E N T O M A T E (bZIP a EN transcription 1 f a c t o r s i n v o l v e d in r e s p o n s e t o s a l i n i t y s t r e s s in t o m a t o ) O r e l l a n a , S . , 1 Yañez, 1 JA. . 1 M. , 1 Bastías, A. , 1 Espinoza, A. , Instituto de Biología Ruiz-Lara, S. , Casaretto, Vegetal y Biotecnología, Universidad de 1 Talca . La regulación plantas para Algunos de génica es una de las r e s p u e s t a s activar m e c a n i s m o s los g e n e s de tolerancia utilizadas por a estrés q u e se activan por estrés son las abiótico. factores de t r a n s c r i p c i ó n q u e p a r t i c i p a n en p u n t o s claves de vías de t r a n s d u c c i ó n E l c o m p l e j o II m i t o c o n d r i a l o S u c c i n a t o D e s h i d r o g e n a s e c a t a l i z a la de o x i d a c i ó n d e s u c c i n a t o a f u m a r a t o y la r e d u c c i ó n d e u b i q u i n o n a a r e s p u e s t a s d e los cultivos a estrés abiótico c o m o sequía y salinidad, u b i q u i n o l . T r e s g e n e s , SDH2-1, SDH2-2 y SDH2-3, c o d i f i c a n p a r a la s u b u n i d a d II o h i e r r o - a z u f r e d e e s t e c o m p l e j o e n Arabidopsis Previamente determinamos que y SDH2-2 se han Con el identificado [Solanum fin dos de tener factores iycopersicum), mayor conocimiento de transcripción denominados SIAREB1 bZIP sobre de las tomate y SIAREB2, que se expresan en t o d o s l o s t e j i d o s d e la p l a n t a a d u l t a , m i e n t r a s q u e el t r a n s c r i t o de d e s c n t o s en A r a b i d o p s i s y amoz ( A B I 5 / A R E B / A B F ) . S u expresión es solo es d e t e c t a d o e n semilla y s u e x p r e s i ó n e s t á r e g u l a d a por i n d u c i d a e n r e s p u e s t a a d e s hidra ta c i ó n y estrés salino. La e x p r e s i ó n SDH2-3 SDH2-1 thaiiana. señales. c o m p a r t e n alta h o m o l o g í a c o n u n g r u p o de factores de transcripción factores de transcripción que p r e s e n t a n u n dominio B 3 , c o m o A B I 3 y relativa F U S C A 3 . La e m b r i o g e n e s i s en A r a b i d o p s i s se p u e d e dividir en tres e n c o n t r á n d o s e m á s alta e n hojas, flores y raíces que en semillas y fases denominadas morfogénesis, maduración y desecación, con de ambos genes fue evaluada mediante qRT-PCR, frutos m a d u r o s . Los niveles de transcritos de S I A R E B 1 y SIAREB2 e x p r e s i ó n e s p e c í f i c a d e g e n e s e n c a d a u n a d e e l l a s . C o n el f i n d e fueron de edad d e t e r m i n a r la e t a p a d e l d e s a m o l l o d e la s e m i l l a e n q u e c o m i e n z a a sometidas y 30 días a estrés salino. A u n q u e dicho e x p r e s a r s e SDH2-3, tratamiento desamollo de transcrito de maduración, semillas fueron extraídas en distintas etapas del la s i l i c u a SDH2-3 aumenta y mediante comienza durante la a RT-PCR se determinó acumularse desecación y al es inicios que de abundante el la en evaluados en entre 6 h o r a s afectó la e x p r e s i ó n S I A R E B 1 fue m a y o r e n tejido iniciado el estrés. Para niveles de d o m i n i o B 3 , e s i m p o r t a n t e p a r a la e x p r e s i ó n d e SDH2-3 fueron seleccionadas f a s e m a d u r a c i ó n , p e r o n o e n la d e s e c a c i ó n . E n c o n t r a s t e , A B I 3 y F U S C A 3 s í s o n n e c e s a r i o s p a r a la e x p r e s i ó n d e SDH2-3 d u r a n t e la desecación. Financiado por Fondecyt P06-009-F 1060485 y Milenio (Núcleo Milenio en G e n ó m i c a Funcional de Plantas). de tomate de 2 la i n d u c c i ó n de de la genes, meses foliar y r a d i c u l a r y a las 6 h o r a s examinar ambos de función de SIAREB1 en la tolerancia a salinidad, se g e n e r a r o n plantas transgénicas c o n distintos semillas secas. Por otra parte, L E C 2 , otro factor de transcripción con d u r a n t e la plantas transcritos de para SIAREB1. comparar Líneas su sentido tolerancia y antisentido cuantificando parámetros fisiológicos fotosintética. F i n a n c i a d o por F o n d e c y t 1060843, IFS C-4075. c o m o c o n t e n i d o relativo de a g u a y eficiencia XXXI Reunión Anual 45. P A P E L D E L A G L U T A R E D O X I N A G R X S 1 3 E N L A R E S P U E S T A 46. DE D E F E N S A A ESTRÉS OXIDATIVO MADURACION giutaredoxin hrat S 1 3 in t h e d e f e n c e response 1 dopsis) Laporte, D. , Salinas 1 Holuigue, L. . Facultad de E N A R A B I D O P S I S (Role of to oxidative stress 1 depto Genética DE DE LA PARED CELULAR DOS ESPECIES DE DURANTE FRUTILLA LA (Cell wall in changes 1 M o y a - L e o n , M.A. , F i g u e r o a , C . . L a b o r a t o n o d e F i s i o l o g í a V e g e t a l y , P . \ Blanco, F. , Herrera, A , Biología, CAMBIOS Molecular, 1 during ripening of 1 Genética two strawberry species) 1 Molecular, Instituto de Biología Vegetal Pontificia U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e . Universidad de Talca. Casilla 747, T a l c a , Chile. . El á c i d o salicílico ( S A ) e s u n a d e las s e ñ a l e s p r o d u c i d a s e n r e s p u e s t a La i e s t r é s e n A r a b i d o p s i s , y j u e g a u n p a p e l c e n t r a l e n la a c t i v a c i ó n d e ablandamiento ;enes {Fragaria y Biotecnología, 1 de defensa. U n g e n q u e s e activa tempranamente por SA frutilla c h i l e n a [Fragaria chifoensis) exhibe al inicio d e la m a d u r a c i ó n x ananassa una mayor tasa de q u e la frutilla comercial c v . C h a n d l e r ) . El objetivo d e este estudio fue : : n r e s p o n d e a A t G r x S 1 3 . q u e c o d i f i c a p a r a la g l u t a r e d o x i n a ( G R X ) c o m p a r a r c a m b i o s d e la p a r e d c e l u l a r d u r a n t e el desarrollo del fruto, y "^onotiólica S 1 3 . Las G R X s o n oxidoreductasas que reducen enlaces correlacionarlos con los c a m b i o s de firmeza. Cuatro estadios de : J furos y cisteínas S-glutationizadas de proteínas. S e ha reportado desarrollo fueron analizados: fruto verde pequeño (VP), verde grande q u e G R X s s o n c a p a c e s d e m o d u l a r e l e s t a d o r e d o x d e la c é l u l a a ( V G ) , transición ( T ) y m a d u r o ( M ) . El c o n t e n i d o total de pared celular través de la directa r e d u c c i ó n del D H A y r e g u l a n d o la actividad d e fue aislado d e s d e frutos d e c a d a e s t a d i o d e desarrollo y s o m e t i d o a i'i-teínas extracción antioxidantes como dehidroascorbato reductasa y química zeroxiredoxina. Resultados de nuestro grupo indican que A t G r x S 1 3 polimenzación es F. chiioensis también t r a n s c r i p c i ó n al m e n t e inducida por inoculación c o n la : sotena P s e u d o m o n a s syringae ( A v r R p m 1 ) . P a r a d e t e r m i n a r el papel - esta p r o t e í n a e n la r e s p u e s t a a estrés, h e m o s obtenido líneas secuencial. de polímeros. Se analizó también el grado p a r e c i e r a e s t a r r e l a c i o n a d a c o n la rápida solubilización d e p e c t i n a s c o v a l e n t e m e n t e u n i d a s , m i e n t r a s q u e e n F. xananassa ablandamiento coincide de La m a y o r tasa de ablandamiento de con una despolimerización el de éstas. r a n s g é n i c a s homocigotas que sobre expresan y silencian AtGrxS13 y A d i c i o n a l m e n t e , F chibensis - e r n o s c o m e n z a d o a evaluar en estas líneas, los niveles de R O S y neutros e n el e s t a d i o T , p r o b a b l e m e n t e d e b i d o a la s o l u b i l i z a c i ó n d e 2-SH e n c o n d i c i o n e s b á s a l e s y b a j o e s t r é s . R e s u l t a d o s Eneren que AtGrxS13 podría estar implicada preliminares e n la r e s p u e s t a de E.a a e s t r é s . fragmentos pécticos metabolismo similar. exhibe un mayor contenido de azúcares con de celulosa ramificación de y hemicelulosa E n c o n c l u s i ó n , el m o d o azúcares neutros. El en ambas especies es del desensamblaje d e pectina en a m b a s e s p e c i e s d e frutilla podría e x p l i c a r l a s diferencias e n la t a s a d e ablandamiento de estos frutos. A g r a d e c i m i e n t o s a Proyecto PBCT Anillo de Ciencia y Tecnología (ACT-41). 47. EFECTO DE -ERRO-AZUFRE EN LA ARABIDOPSIS :~:ein INACTIVACIÓN DE LA S D H 2 ^ E N LA GERMINACIÓN THALIANA inactivation (Effects on seed 1 PROTEÍNA DE SEMILLAS of t h e S D H 2 - 3 germination iron-sulfur i n Arabidopsis thaiiana ) 1 Coryalán, C . , Jordana, X . Departamento de Genética Molecular y xobiología, Facultad de Ciencias Biológicas, P.Universidad 1 Zatólica de Chile . 48. INCREMENTO MADURACIÓN L. Duch.) Fuentes, L.\ Fisiología transcritos revelan adulto, m i e n t a s específico en Arabidopsis q u e SDH2-1 q u e SDH2-3 d e SDH2-3 thaiiana. y SDH2-2 Análisis se expresan e n tejido lo h a c e sólo e n semilla. Este sugiere que esta i so f o r m a de patrón del c o m p l e j o II : Ddría t e n e r u n rol d u r a n t e el d e s a r r o l l o d e l a s e m i l l a y l a g e r m i n a c i ó n , l e : do a e s t o , e v a l u a m o s arante aquellas etapas n s e r a o n a l e s sdh2-3 Ue g e r m i n a c i ó n utilizando dos y u n a m u t a n t e d o b l e sdh2-1/sdh2-3. de sal y luego E n todos refinación d e la i n a c t i v a c i ó n fue evaluada en medio : incensaciones hidrógeno. los efectos del desamollo los casos, de las m u t a n t e s de tratamientos observamos respecto a (Fragaria LA chiioensis 1 G o n z á l e z , M. , G a e t e y , 1 R. , fruit. (Fragaria 1 1 E., C , V a l d e n e g r o , M . , 1 Moya-León, M.A. . Laboratorio de Molecular, IBVB, Universidad de Genética a c e p t a c i ó n final d e l o s c o n s u m i d o r e s . D e ellos, los esteres cobran g r a n r e l e v a n c i a y a q u e t i e n e n el m a y o r i m p a c t o s e n s o r i a l , y e n frutilla x de CHILENA. ALCOHOL DURANTE i m p o r t a n c i a p a r a d e t e r m i n a r la c a l i d a d d e u n a f r u t a e i n f l u e n c i a n la florales en UNA Los c o m p u e s t o s volátiles se c o n s i d e r a n entre los factores de m a y o r ( Fragaria retraso las semillas Vegetal dulces y con peróxido un DE ACTIVIDAD 1 del gen La cinética SU FRUTILLA Herrera mutantes basal, m e d i o c o n distintas EXPRESION ((Increment of t h e expression of a n Alcohol Acyltransferase L Duch.)) Talca. . nucleares DE DE chibensis : ir genes LA Y a n d its a c t i v i t y d u r i n g r i p e n i n g o f t h e C h i l e a n s t r a w b e r r y L a p r o t e í n a h i e r r o - a z u f r e d e l c o m p l e j o II m i t o c o n d r i a l e s t á c o d i f i c a d a tres DE ACILTRANFERASA compuestos ananassa), son los responsables de entregar notas características d e s u aroma. La formación de estos está catalizada p o r la e n z i m a alcohol aciltransferasa (AAT) quien mediante u n a transacilación de un acil-CoA a un alcohol, g e n e r a u n a v a r i a d a m e z c l a d e e s t e r e s . L o s e s t u d i o s r e a l i z a d o s a la la fecha, silvestres, Fragaria se h a n llevado chiioensis, a cabo en Fragaria x ananassa, pero es la m a d r e d e esta v a r i e d a d comercial y especie - r e m a s , el r e t r a s o e s m a y o r e n l a s d o b l e s m u t a n t e s . L u e g o d e la e n d é m i c a p a r a n u e s t r o p a í s , la q u e p r e s e n t a u n a e x c e p c i o n a l calidad g e r m i n a c i ó n , las plántulas m u t a n t e s s e d e s a m o l l a n d e m a n e r a n o r m a l , o r g a n o l é p t i c a q u e s e r e f l e j a e n la p r e s e n c i a d e u n b u e n s a b o r y g r a n 5-rque a desamollo ;r-es, 5DH2-1 y los 8 días normal rcmplejo puede resultados aumentan ::servamos son más pequeñas deberse preliminares en semillas que embriones II d u r a n t e El a r o m a . E n el p r e s e n t e e s t u d i o s e o b s e r v ó u n i n c r e m e n t o e n c i e r t o s a la e x p r e s i ó n d e los otros dos e s t e r e s d e i m p a c t o s e n s o r i a l d u r a n t e la m a d u r a c i ó n d e frutilla c h i l e n a indican q u e los transcritos mutantes mutantes distintas que las silvestres. etapas sdh2-3. poseen m e n o r actividad del del desarrollo Proyecto M i l e n i o P 0 6 - 0 0 9 - F y F o n d e c y t 1 0 6 0 4 8 5 . de Finalmente, de semillas. (Fragaria chiioensis). E l l o c o i n c i d e c o n u n i n c r e m e n t o e n la a c t i v i d a d de la e n z i m a A A T y e n la e x p r e s i ó n d e l g e n , a n a l i z a d o m e d i a n t e P C R en t i e m p o real. L o s resultados i n d i c a n u n a participación relevante de AAT e n la g e n e r a c i ó n maduración ACT-41. en frutilla de volátiles chilena. durante el transcurso Financiamiento: Proyecto d e la Anillo Sociedad 49. ESTRUCTURA Y PERFIL DE de Bioquímica y Biología EXPRESIÓN DURANTE C O N D I C I O N E S D E ESTRÉS ABIÓTICO D E UN G E N D E lycopersicon pattem P E R T E N E C I E N T E A L A F A M I L I A E L I P (Structure and expression Solanum Solanum under licopersicon abiotic stress belonging conditions to the ELIP of a gen from 1 UNA SUBUNIDAD conserved arnong E s p i n o z a , A . , R u i z - L a r a , S . \ G o n z á l e z , E. . Instituto Biología Vegetal Departamento 1 1 Cuando la luz fotosintética absorbida se generan por las radicales DEL COMPLEJO II CONSERVADA E N A N G I O S P E R M A S . ( A s e e d s p e c i f i c c o m p l e x II i r o n - s u l f u r s u b u n i t is Roschzttardtz. y Biotecnología. Universidad de T a l c a . . HIERRO-AZUFRE MITOCONDRIAL ESPECÍFICA D E S E M I L L A ESTÁ R. , 1 family.) Chillan, 50. Molecular angiosperrns.) 1 H. . de Genética 1 Carrasco, Molecular P. , Clément. 1 Montenegro-Montero, A. , 1 P. . 1 J o r d á n a, X. . y Microbiología, Facultad de 1 C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e . plantas libres excede capaces de la capacidad ocasionar un En Arabidopsis thaiiana mitocondrial está la s u b u n i d a d codificada por hiemo-azufre tres genes del c o m p l e j o nucleares, II SDH2-1, SDH2-2 y SDH2-3. e f e c t o es a m p l i f i c a d o p o r c o n d i c i o n e s de e s t r é s a m b i e n t a l c o m o bajas distinto estructuralmente, t e m p e r a t u r a s , s a l i n i d a d o s e q u í a q u e f i n a l m e n t e i n h i b e n la a c t i v i d a d m a d u r a c i ó n d e la s e m i l l a , s u t r a n s c r i t o e s a b u n d a n t e e n s e m i l l a s e c a fotosintética. y d a ñ o oxidativo a proteínas, lípidos y p i g m e n t o s múltiples Bajo estas condiciones mecanismos acumulación de las reparación d e las p r o t e í n a s ELIP plantas y uno fotosintéticos. han desarrollado protección, de Este siendo ellos. L o s genes la que disminuye E s t e ú l t i m o , p r e s e n t a p r o p i e d a d e s particulares, es durante se la expresa específicamente g e mn i n a c i ó n . i d e n t i f i c a d o g e n e s o r t ó l o g o s d e SDH2-3 t i p o SDH2-3), Nuestro durante laboratorio en monocotiledóneas la ha (genes d e t e r m i n á n d o s e a d e m á s q u e p o s e e n un patrón similar codifican para tales proteínas s e t r a n s c r i b e n de forma transitoria bajo al d e A r a b i d o p s i s . C o n el fin d e c a r a c t e r i z a r la d i s t r i b u c i ó n f i l o g e n é t i c a las d e l g e n t i p o SDH2-3 condiciones señaladas y su función de protección estaría se identificaron secuencias aminoacídicas S D H 2 liberadas de plantas y s e c o n s t r u y ó un árbol filogenético no e n r a i z a d o . E n éste d u r a n t e el e s t r é s , p r e v i n i e n d o d e e s t e m o d o la f o r m a c i ó n d e r a d i c a l e s a g r u p a n c l a r a m e n t e s e p a r a d a s l a s s e c u e n c i a s t i p o S D H 2 - 3 y las t i p o l i b r e s y / o c o n la l i b e r a c i ó n d e l e x c e s o d e e n e r g í a e n f o r m a d e c a l o r . E n SDH2-1/2-2. e l p r e s e n t e t r a b a j o s e i n f o r m a s o b r e el a i s l a m i e n t o y la c a r a c t e r i z a c i ó n comparten a nivel m o l e c u l a r d e un c D N A de S o l a n u m l y c o p e r s i c o n que codifica responsables relacionada con la u n i ó n de las moléculas de clorofila Además, los promotores de los distintos elementos ( A B R E / R Y ) que en Arabidopsis de la expresión específica en SDH2-3 se s a b e semilla. p a r a u n a p r o t e í n a d e u n a h é l i c e ( o h p ) p e r t e n e c i e n t e a la f a m i l i a E L I P . R T - P C R c o n f i r m a m o s la e x p r e s i ó n e n s e m i l l a s del g e n t i p o E l p a t r ó n d e e x p r e s i ó n d e l o s m R N A s t r a n s c r i t o s a p o y a la f u n c i ó n d e d e Vitis protección propuesta para estas proteínas. específica de semilla e n a n g i o s p e r m a s sugiere un papel Financiamiento UTALCA. de vinifera. esta son Mediante SDH2-3 La amplia distribución de una proteína hierro-azufre proteína. Proyecto Fondecyt regular importante 1060485 y Núcleo Milenio en G e n ó m i c a Funcional de Plantas P06-009-F. EXPRESION GENICA 51. INTERACCIONES DIFERENCIALES HUMANAS D E C/EBPp CROMATINA isoforms S W I / S N F (Differential with the DE LAS ISOFORMAS CON E L COMPLEJO REMODELADOR DE SWI/SNF interactions chromatin of h u m a n C/EBPp remodeling complex) 52.IDENTIFICACIÓN, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN FUNCIONAL DE POTENCIALES SITIOS DE SUMOILACION EN E L FACTOR TRANSCRIPCIONAL NURR1 c h a r a c t e r i z a t i o n a n d f u n c t i o n a l e v a l u a t i o n of (Identification, SUMOylation potential 1 Steinberg, X. , Hepp, M. , Gutiérrez, J.L. . Laboratorio de Regulación sites in t h e t r a n s c r i p t i o n f a c t o r N u n i ) Transcripcional, Departamento A n d r é s , M.E. . N ú c l e o milenio en estrés y adicción. D e p a r t a m e n t o de 1 1 1 de B i o q u í m i c a y Biología Molecular, Pereira, L. , Amedondo, C.\ 1 1 Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción . Biología Molecular y Celular, Facultad de Ciencias Biológicas . C/EBPp 1 de La s u m o i l a c i ó n es u n a m o d i f i c a c i ó n post-traduccional consistente en t r a n s c r i p c i ó n C / E B P . E s t á codificado por u n g e n sin intrones y se h a n la u n i ó n c o v a l e n t e d e l p é p t i d o S U M O ( S m a l l u b i q u i t i n - l i k e m o d i f i e r s ) d e s c r i t o 3 i s o f o r m a s d i s t i n t a s d e la p r o t e í n a : C / E B P p 1 , C / E B P p 2 en usinas e s una proteína p e r t e n e c i e n t e a la familia de factores CE/BPp3. El relacionado que estas en la expresión de la se del A R N m de región producen de N-terminal. La generando proteína largo las proteínas sustrato. Esta modificación ha observado t r a n s c r i p c i o n a l , a s í c o m o e n la v i d a m e d i a y l o c a l i z a c i ó n s u b c e l u l a r d e se en diferencias de de c o b r a d o u n a i m p o r t a n c i a f u n d a m e n t a l e n la r e g u l a c i ó n d e la a c t i v i d a d 2 a partir de traducción C / E B P p, blanco ha ¡soforma c o n la a p a r i c i ó n d e c á n c e r m a m a r i o . S e h a isoformas alternativos contenido aumento y sitios en su completo, numerosos factores de transcripción. Nurrl es un t r a n s c r i p c i ó n e s e n c i a l e n el d e s a r r o l l o de n e u r o n a s m e sen cefálicas. Este factor pertenece a la factor de dopaminérgicas familia de receptores C / E B P p 1 , posee sólo 23 residuos m á s que C / E B P p 2 (21 residuos en n u c l e a r e s , p e r o al s u b t i p o h u é r f a n o , e s d e c i r , c a r e n t e d e l i g a n d o y e s r a t a ) . S e h a p o s t u l a d o q u e C / E B P ( 3 1 e s la ú n i c a i s o f o r m a c a p a z constitutivamente interaccionar dependiente con el complejo remodelador de SWI/SNF. Dado que este complejo cromatina de ATP- está implicado en regulación d e expresión génica, esta interacción diferencial podría dar c u e n t a d e l a s a c c i o n e s d i s í m i l e s q u e s o b r e la e x p r e s i ó n d e d i s t i n t o s g e n e s t i e n e n las i s o f o r m a s d e t e r m i n a r o n esta 1 y 2. S i n e m b a r g o , l o s interacción diferencial estudios fueron realizados con que las i s o f o r m a s de gallina y no se ha estudiado este f e n ó m e n o e n C/EBPf3 de mamífero. Mediante estudios de G S T pull-down, h e m o s observado que las isoformas 1 y 2 de rata interaccionan con el complejo S W I / S N F c o n a f i n i d a d s i m i l a r . H e m o s s u b c l o n a d o y p r o d u c i d o las 3 isoformas de C / E B P p d e h u m a n o c o m o proteínas de fusión c o n G S T , c o n e l o b j e t o d e e s t a b l e c e r si e s t e p a t r ó n s e p r e s e n t a d e i g u a l f o r m a e n el c a s o d e l a s i s o f o r m a s h u m a n a s . F O N D E C Y T 1085092. que PIAS7, activo. E n nuestro laboratorio h e m o s una S U M O - E 3 l l e v a a p l a n t e a r la h i p ó t e s i s q u e N u r r l Para buscar potenciales identificado l i g a s a i n t e r a c t ú a c o n N u r r l , lo q u e sitios de nos es regulado p o r S U M O i l a c i ó n . SUMOilación en Nurrl hemos utilizado dos b a s e s de datos S U M O s p y S U M O p l o t . Utilizando estas b a s e s i d e n t i f i c a m o s 5 p o s i b l e s sitios e n N u n i . H e m o s realizado las m u t a c i o n e s s i t i o - d i n g i d a s d e c a d a s i t i o c a m b i a n d o la l i s i n a b l a n c o p o r arginina. C a d a mutante ha sido transfectado en líneas celulares para evaluar su e x p r e s i ó n , u b i c a c i ó n s u b c e l u l a r y actividad transcripcional en un reportero luciferasa c o m a n d a d o por un p r o m o t o r que contiene e l e m e n t o s d e r e s p u e s t a a N u r r l . N u e s t r o s r e s u l t a d o s i n d i c a n que las p o t e n c i a l e s u s i n a s b l a n c o d e S U M O i l a c i ó n s o n r e s i d u o s c l a v e s d e la r e g u l a c i ó n d e la a c t i v i d a d d e N u r r l puede regular a evaluando la este SUMOilación transcripción/traducción vitro. y s u g i e r e n q u e la SUMOilación factor transcripcional. Actualmente de acoplado Nurrl usando a un sistema un estamos sistema de S U M O i l a c i ó n de in XXXI Reunión 53. EL FACTOR CERIPORIOPSIS PROMOTORA transcription DE TRANSCRIPCIÓN SUBVERMISPORA DE GENES factor from SE TIPO UNE LIGNINOLÍTICOS. Cenporiopsis ACE1 A LA (The subvermispora DE REGIÓN ACEI-like binds to the 1 1 p r o m o t e r r e g i ó n of l i g n i n o l y t i c g e n e s ) S a n t i b á ñ e z , P . , A l v a r e z , J . M . , 1 1 1 1 '. a n e s s a , P . , M a n c i l l a , R. , P o l a n c o , R. , V i c u ñ a , R. . D e p . G e n é t i c a M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a , F a c . d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d CLONAMIENTO REGULATORIAS 5'UTR DEL Y EN GEN EL EVALUACION PROMOTOR RUNX1 (Cloning DE DISTAL and REGIONES (P1) evaluation Y REGION of regulative r e g i o n s in t h e d i s t a l ( P 1 ) p r o m o t e r a n d 5 ' U T R o f t h e RUNX1 1 1 1 gene) 1 M a r t í n e z , M. , H i n o j o s a , M . , M o n t e c i n o , M . , G u t i é m e z , S . . A n i l l o d e Investigación de Estudios Avanzados en Señalización Celular y R e g u l a c i ó n G é n i c a , Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de 1 basidiomicete Ceriporiopsis subvermispora tiene un g n o l í t i c o c o m p u e s t o p o r las i s o e n z i m a s d e m a n g a n e s o sistema peroxidasa M n P ) y l a c a s a ( L e s ) . M e d i a n t e q R T - P C R , a n a l i z a m o s el e f e c t o de : r e y p l a t a e n los n i v e l e s d e t r a n s e n t o d e l o s g e n e s m n p l , m n p 2 y :s L o s g e n e s m n p 2 y les s e c o m p o r t a n s i m i l a r m e n t e , : js niveles de 54. Concepción . 1 ". a t ó l i c a d e C h i l e . El Anual transcrito con ambos metales. aumentando Análisis de sus i ' o m o t o r e s p e r m i t i ó i d e n t i f i c a r e l e m e n t o s r e g u l a t o r i o s e n cis t i p o A C E . R U N X 1 e s u n f a c t o r d e t r a n s c r i p c i ó n c l a v e e n la h e m a t o p o y e s i s junto a RUNX2 y RUNX3 forman o r g a n i z a c i ó n g e n ó m i c a d e RUNX1 (distal o P1 y proximal o la f a m i l i a de genes RUNX. y La muestra que posee 2 promotores P2) de uso alternativo permitiendo la g e n e r a c i ó n de distintas i s o f o r m a s de R U N X 1 . E s t u d i o s p a r a d i l u c i d a r el mecanismo enfocado regulatorio para principalmente en la la expresión de RUNX1 identificación y se han caracterización E ste e l e m e n t o e s el s i t i o d e u n i ó n p a r a el f a c t o r d e t r a s c r i p c i ó n A C E 1 , funcional de r e g i o n e s regulatorias intrónicas; pero a ú n no esta claro el q u e e n l e v a d u r a e s t á i n v o l u c r a d o e n la a c t i v a c i ó n t r a n s c r i p c i o n a l d e como g e n e s r e l a c i o n a d o s c o n la h o m e o s t a s i s d e c o b r e . U t i l i z a n d o t é c n i c a s evaluar g e n ó m i c a s c l á s i c a s , a i s l a m o s y c a r a c t e r i z a m o s el factor tipo realizamos Cs-ACE1), examinando su funcionalidad mediante le levadura. Adicionalmente, analizamos I s - A C E I mediante ensayos E M S A la ACE1 complementación unión a DNA de Los resultados permiten reportar p o r p r i m e r a v e z la i n t e r a c c i ó n e s p e c í f i c a e n t r e u n f a c t o r t i p o A C E I y se regula la su expresión. actividad del análisis m Por consiguiente, promotor silico del P1 del gen promotor nos propusimos RUNX1. P1 y Primero, región 5'UTR, e n c o n t r a m o s que e x i s t e n sitios d e u n i ó n a l t a m e n t e c o n s e r v a d o s para p r o t e í n a s R U N X a s í c o m o m o t i v o s p a r a la u n i ó n d e d i s t i n t o s f a c t o r e s d e t r a n s c r i p c i ó n h e m a t o p o y é t i c o s . A f i n d e e v a l u a r si el g e n es a u t o r r e g u l a d o se c l o n ó el p r o m o t o r P 1 y 5 ' U T R RUNX1 en v e c t o r e s de u n e l e m e n t o t i p o A C E e n el p r o m o t o r d e u n g e n d e l a c a s a y o t r o d e e x p r e s i ó n que t i e n e n luciferasa c o m o g e n reportero y su actividad fue M n P , sugiriendo u n posible cross-talk transcripcional entre dos genes evaluada g n i n o l í t i c o s f u n c i o n a l m e n t e d i s t i n t o s , m e d i a d o p o r c o b r e y el f a c t o r por realizamos ensayos estudios de t r a n s f e c c i ó n de transiente. inmunoprecipitación de Adicionalmente, cromatina (ChIP) d e transcripción identificado. F O N D E C Y T 1 0 7 0 5 8 8 e Instituto Milenio usando anticuerpo a n t i - R U N X l Nuestros resultados demuestran que (MIFAB). RUNX1 I es capaz de modular la expresión de un gen reportero, c u a n d o s u e x p r e s i ó n e s t á c o n t r o l a d a p o r la r e g i ó n P 1 y/o 5 ' U T R . M á s a ú n , la p r o t e í n a R U N X 1 e s r e c l u t a d a in vivo en estas regiones en c é l u l a s m i e l o i d e s . N u e s t r o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n q u e R U N X 1 es c a p a z de a u t o r e g u l a r s u e x p r e s i ó n en células m i e l o i d e s . 55. ESTIMULACIÓN RE M O D E L A D O R E S (Stimulation of 1 LA ACTIVIDAD CROMATINA chromatin : : e i n s ) H e p p , M. , z DE DE remodeling DE POR COMPLEJOS PROTEINAS complexes activity 1 by DE HMG C H R Y S O S P O R I U M ( C h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e t r a n s a c t i v a t i o n site o f t h e 1 Steinberg, X. , Gutiémez, J . L . Laboratorio de e g u l a c i ó n Transcripcional, Departamento de Bioquímica y Biología M o l e c u l a r , F a c u l t a d de C s . B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d d e Concepción, 1 "oncepción, Chile. . _2 compactación i-rectos básica la e n la c r o m a t i n a cromatina y están i n f l u y e e n los distintos L o s n ú c l e o s o r n a s s o n la u n i d a d conformados por ADN enrollado = ' e d e d o r de un o c t á m e r o de h i s t o n a s . L a f o r m a c i ó n y d e s e n s a m b l e d e n u c l e o s o m a s c o r r e s p o n d e n a u n p r o c e s o d i n á m i c o e n el q u e , e n t r e ::~: i TRANSCRIPCIÓN transenption factor PcACEl PcACEl from DE PHAN E R O C H A E T E Phanerochaete 1 1 p a r t i c i p a n c o m p l e j o s r e m o d el a d o r e s d e c r o m a t i n a d e p e n d i e n t e s T : - - P c o m o S W I / S N F . S e h a o b s e r v a d o q u e e s t e c o m p l e j o p o s e e la c a p a c i d a d de m o v e r o c t á m e r o s d e h i s t o n a s a lo l a r g o d e la doble chrysosporium) 1 B a r h a m , F . \ Cifuentes, A. , Canessa, P , Bull, P. . Laboratorio de 1 B i o q u í m i c a . Pontificia Universidad Católica de Chile. . El f a c t o r d e t r a n s c r i p c i ó n A C E I d e l e v a d u r a del A D N del m e t a b o l i s m o d e l A D N . de 56. B Ú S Q U E D A D E L SITIO D E T R A N S A C T I V A C I Ó N D E L F A C T O R HMG r e g u l a la e x p r e s i ó n d e g e n e s b l a n c o c a p t a d o r e s d e c o b r e c u a n d o la c o n c e n t r a c i ó n d e Á s t e alcanza niveles de 200 ^iM. D i s p o n e m o s del ortólogo de A C E I del hongo por Phanerochaete chrysosporium (PcACEl) aislado c o m p l e m e n t a c i ó n en levadura. E n esta comunicación e s t u d i a m o s la l o c a l i z a c i ó n d e la r e g i ó n d e t r a n s a c t i v a c i ó n d e P c A C E . El utilizado fue a) i n t r o d u c c i ó n método de sitios B a m H I por m u t a g e n e s i s sitio dirigida en diferentes p o s i c i o n e s e n el c D N A de P c A C E y t a m b i é n en s u s e x t r e m o s , c o n el fin d e o b t e n e r p o r P C R f r a g m e n t o s d e d i f e r e n t e h e b r a d e A D N (sliding) y t a m b i é n de transferir o c t á m e r o s d e histonas tamaño entre c l o n a m i e n t o d e l o s f r a g m e n t o s e n e l v e c t o r p M A 4 2 4 e n el sitio ú n i c o distintos segmentos tetonas).Estudios : : ~ i n a d a rteracciona elos realizados una (transferencia proteína nuclear de humana, de PcACE c o n n u c l e o s o m a s y f a c i l i t a el d e s p l a z a m i e n t o q u e s o b r e levaduras la acción estudiar recombinantes este (NHP6B, remodeladores catalítica de fenómeno, HM01 de cromatina, aunque SWI/SNF se no generaron -ambas de está proteínas levadura- su definido y HMG HMGB1) pero conservando el carboxilo terminal, b) B a m H I , el c u a l e s t á d e s p u é s d e l s i t i o d e u n i ó n a D N A del f a c t o r d e transenpción sobre 5-" P a r a con ADN H M G B 1 (High Mobility G r o u p B 1 ) , d e m o s t r a r o n que ésta catalizan complejos efecto de GAL4 YM335:171 y transformación de que p o s e e n el p r o m o t o r de G A L 4 antes ligándolo en fase, c) del c D N A d e la p - g a l a c t o s i d a s a y d ) d e t e r m i n a c i ó n d e la a c t i v i d a d d e e s t e g e n r e p o r t e r o e n el e x t r a c t o . H a s t a el m o m e n t o t e n e m o s clonados 8 fragmentos de P c A C E en p M A 4 2 4 . H e m o s t r a n s f o r m a d o levaduras c o n c i n c o d e e l l o s y h e m o s d e t e r m i n a d o s u a c t i v i d a d p-g al a c t o s i d a s a. u n i d a s a l e p í t o p e H i s , el c u a l f u e u t i l i z a d o p a r a s u p u r i f i c a c i ó n . C o m o La ¡-r/i:o c a r b o x i l o t e r m i n a l q u e c o m p r e n d e 10 c i s t e í n a s a g r u p a d a s d e a d o s . de la mononucleo somas actividad sobre remodeladora segmentos de se reconstituyó ADN marcados t a c t i v a m e n t e . S e e s t u d i ó la i n f l u e n c i a d e la p r o t e í n a a actividad remodeladora -• :-:-jra, observándose un del c o m p l e j o S W I / S N F aumento de la a c t i v i d a d de His-HMGB1 e ISWI de sliding de ~ : : > c o m p le jo s e n p re s e n ci a d e H M G B 1 . N u e s t r o t r a b aj o i n el u i rá : e - = l efecto que sobre estos c o m p l e j o s r e m o d e l a d o r e s :E y H M 0 1 . P a t r o c i n a n t e : F O N D E C Y T 1085092 poseen región de transactivación de Financiado por Proyecto F O N D E C Y T PcACE incluiría 1085236. una parte del Sociedad 57. IDENTIFICACION CONSERVADAS conserved EN non DE SECUENCIAS E L INTRON coding 5 DE sequences 1 in NO RUNX1 the 1 de Bioquímica y Biología Molecular CODIFICANTES 58. (Identification of E M B R I O G E N E S I S T E M P R A N A D E E R I Z O D E M A R (Gene Encoding RUNX1) A N u c l e a r C y s t e i n e P r o t e a s e I n v o l v e d In M a l e C h r o m a t i n R e m o d e l i n g intron 5 of 1 1 Rebolledo, B . , Stuardo, M. , Martínez, M. . Hinojosa, M. . Vergara, EXPRESION ESPACIO-TEMPORAL After Fertilization Sea Señalización Geneviere, A.M. , 1 Celular y Regulación Génica. Facultad de Ciencias un c o d i f i c a p a r a la s u b u n i d a d a l f a d e Core factor de transcripción hematopoyesis cuya embrionaria. expresión Este Development) 2 Observatone 1 Biológicas, Universidad de C o n c e p c i ó n . RUNX1 Urchin Is F u r t h e r E x p r e s s e d In S p e c i f i c T e r r i t o r i e s V . , Gutiérrez. S . . Anillo de I n v e s t i g a c i ó n de E s t u d i o s A v a n z a d o s en 1 gen es Binding es Factor (CBF). esencial blanco para la Sánchez, 4 Imschenetzky, Oceanologique M. . de 1 , 2 A. , 3 Morin, V. , Banyuls, During 1 Puchi, M. , 1 Universidad de Concepción , Laboratorie 2 EN Arago, 3 U n i v e r s i d a d de P a n s V I , U n i v e r s i d a d d e C o n c p e c i ó n , U n i v e r s i d a d de 4 Concepción . de L a r e m o d e l a c i ó n d e la c r o m a t i n a e s p e r m á t i c a p o s e e u n rol c r u c i a l e n quiebres la r e s t a u r a c i ó n d e la d i p l o i d í a e n e u c a r i o n t e s . E n e r i z o s d e m a r e s t a frecuente t r a n s l o c a c i o n e s c r o m o s ó m i c a s c o m o t ( 8 ; 2 1 ) e n la c u a l l o s DE SpH PROTEASA o c u r r e n en su intrón 5 e n tres r e g i o n e s particulares definidas como proteasa cataliza la degradación de histonas específicas del R e g i o n e s de Q u i e b r e C r o m o s o m a l ( B C R ) . E s t e intrón p r e s e n t a sitios e s p e r m a t o z o i d e ( S p H ) c o n c o m i t a n t e a su r e e m p l a z o por vanantes de hipersensibles histonas nuestros a DNAsa resultados I y sitios de corte para T O P O h i s t o n a s , la u n i ó n in vivo II, a d e m á s maternas (CS). Esta proteasa caracterizada en nuestro laboratorio, d e m o s t r a n d o que esta d e R U N X 1 a s u s s i t i o s p r e d i c h o s in siiico en e s r e s p o n s a b l e d e la r e m o d e l a c i ó n d e l p r o n ú c l e o alto grado de persiste u n g e n r e p o r t e r o . L a s c a r a c t e r í s t i c a s d e la c r o m a t i n a d e l i n t r ó n 5 s e desconocen las etapas codificando para esta asociado reguladores frecuentemente de la puesta en evidencia de un e l i n t r ó n y q u e e s t o s s i t i o s s o n c a p a c e s d e m o d u l a r la t r a n s c r i p c i ó n d e han fue acetilación muestran con transcripción, la por existencia ello, B i o i n f o r m á t i c a s s e c o m p a r ó l o s g e n e s RUNX1 de usando elementos herramientas d e h u m a n o , ratón y hasta los estados t e m p o r a l de estos en larvales de que inicia se proteasa, así masculino desarrollo. A la y que la f e c h a , la t r a n s c r i p c i ó n como y enzima se del distribución gen espacio t r a n s c r i t o s e n l o s d i f e r e n t e s t e r r i t o r i o s d u r a n t e la e m b r i o g e n e s i s . E n e s t e e s c e n a r i o , l o s o b j e t i v o s del s i g u i e n t e t r a b a j o rata e n b ú s q u e d a de s e c u e n c i a s c o n s e r v a d a s no c o d i f i c a n t e s ( C N S ) f u e r o n : D e t e r m i n a r la e x i s t e n c i a d e t r a n s c r i t o s en Los e s t a p r o t e a s a d u r a n t e la e m b r i o g e n e s i s d e e r i z o s d e m a r y e s p e c i f i c a r genómicamente el p a t r ó n d e e x p r e s i ó n e s p a c i o - t e m p o r a l . L o s r e s u l t a d o s o b t e n i d o s e n el intrón resultados 5 como predictores muestran la de elementos de once presencia ú n i c a s , d i s t n b u i d a s e n ciusters reguladores CNS, y a s o c i a d a s a los B C R . A d e m á s la que codifiquen para h u e v o s s i n f e c u n d a r y e n c i g o t o s n o s i n d i c a r o n q u e los t r a n s c r i t o s q u e C N S m á s c o n s e r v a d a incluye sitios d e u n i ó n para R U N X 1 d e probada codifican unión r e p r e s e n t a n d o parte de los A R N m e n m a s c a r a d o s q u e c o n s t i t u y e n una in vivo. Los resultados sugieren que el intrón 5 presenta para esta proteasa existen en huevos sin fecundar p a r t e d e la d o t a c i ó n d e R N A m a t e m o s q u e s e e x p r e s a n d u r a n t e l a s e l e m e n t o s reguladores cuya funcionalidad ha de ser d e t e r m i n a d a . etapas de s e g m e n t a c i ó n . Los resultados obtenidos en etapas más tardías de desarrollo i n d i c a n q u e esta p r o t e a s a es transcrita e n e t a p a s p o s t - e c l o s i ó n y l a s h i b r i d a c i o n e s in situ p e r m i t i e r o n d e t e r m i n a r q u e la trascripción de esta proteasa está confinada a regiones específicas del e m b n ó n , las c u a l e s e s t á n d e f i n i d a s e s p a c i o - t e m p o r a l m e n t e . 59. LOS COMPUESTOS AFECTAN OXIDANTES HIDROQUINONA DIFERENCIALMENTE EXPRESIÓN DE BADISIOM ICETE LOS Y LA ULTRAESTRUCTURA GENES LIGNINOLITICOS CERIPORIOPSIS H202 60. Y LA ACETILADAS EL binding sequences EN SUBVERMISPORA. (The oxidative c o m p o u n d s h y d r o q u i n o n e a n d H 2 0 2 differentially affect the ultrastructure and the expression of ligninolytic genes in the 1 basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora.) Mancilla, R. , A m o r o s o , 1 1 LAS SECUENCIAS DEL DE UNIÓN INTRÓN 5 in acetilated 1 A SON RUNX1 EN REGIONES FUNCIONALES. regions of intron 5 are 1 1 1 Vengara, V. . Hinojosa, M. , Martínez, M. , Stuardo, M. , 1 S. . Anillo de investigación d e estudios a v a n z a d o s celular y regulación génica, Facultad de (RUNX1 functional) Gutiérrez, en señalización Ciencias Biológicas, 1 Universidad de C o n c e p c i ó n . . A , V i c u ñ a , R. . D e p a r t a m e n t o d e G e n é t i c a M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a . El g e n RUNX1 Facultad de Ciencias Biológicas. Pontificia Universidad Católica es blanco f r e c u e n t e de t r a n s l o c a c i o n e s c r o m o s ó m i c a s . U n a de ellas, de 1 e s e s e n c i a l p a r a el d e s a m o l l o d e la h e m a t o p o y e s i s y Chile . la t ( 8 , 2 1 ) a f e c t a L a b i o d e g r a d a c i ó n d e l i g n i n a e s u n p r o c e s o a l t a m e n t e o x i d a t i v o e n el r e a l i z a d o s e n n u e s t r o l a b o r a t o r i o h a n d e m o s t r a d o la e x i s t e n c i a d e u n cual varias oxidasas y peroxidasas j u e g a n un importante rol. Durante p a t r ó n e s p e c í f i c o d e a c e t i l a c i ó n a lo l a r g o d e e s t e i n t r ó n . C o n el o b j e t o este de identificar factores d e t r a n s c r i p c i ó n r e s p o n s a b l e s del reclutamiento proceso, se generan compuestos aromáticos y especies e s p e c í f i c a m e n t e al i n t r ó n 5 d e RUNX1. Trabajos reactivas de oxigeno que p r o d u c e n estrés oxidativo. E n este trabajo, d e a c e t i l a s a s d e h i s t o n a s s e r e a l i z ó u n a n á l i s i s in silico s e e s t u d i ó el e f e c t o d e l o s c o m p u e s t o s o x i d a n t e s h i d r o q u i n o n a ( H Q ) y encontrándose H 2 0 2 s o b r e el h o n g o l i g n i n o l í t i c o C e r i p o n o p s i s s u b v e r m i s p o r a , a n i v e l d i s t r i b u i d o s a lo l a r g o d e l i n t r ó n . P a r a e v a l u a r la f u n c i o n a l i d a d in estructural d e las d i s t i n t a s s e c u e n c i a s d e u n i ó n a R U N X p r e s e n t e s e n e l i n t r ó n y transmisión de expresión (TEM) reveló génica. la La microscopía presencia de electrónica microvesículas y de una 5 numerosos sitios de unión de e s t e g e n , s e r e a l i z a r o n e n s a y o s para de esta región proteínas RUNX d e r e t a r d o e n gel p a r a vitro las e x t e n s a d e g e n e r a c i ó n del c i t o p l a s m a l u e g o del t r a t a m i e n t o c o n H Q , distintas s e c u e n c i a s d e u n i ó n las que p o s t e r i o r m e n t e fueron c l o n a d a s p e r o n o c o n H 2 0 2 . E s t u d i o s del e s t a d o r e d o x i n t r a c e l u l a r del h o n g o e n el v e c t o r d e e x p r e s i ó n e u c a r i o n t e p G L 3 b a s i c y s u a c t i v i d a d mostraron evaluó que los t r a t a m i e n t o s con HQ causan una disminución por transfección en células HeLa.Nuestros se resultados t r a n s i e n t e d e la r a z ó n G S H / G S S G y u n i n c r e m e n t o d e l o s n i v e l e s d e d e m u e s t r a n que t o d a s las s e c u e n c i a s analizadas s o n c a p a c e s de unir m R N A de glutatión-S-transferasa RUNX1 (GST). Estos resultados sugieren in vitro, s i n e m b a r g o s o l o t r e s d e l a s 6 r e g i o n e s a c t i v a n la q u e la H Q p r o d u c e e s t r é s o x i d a t i v o e n e s t e m i c r o o r g a n i s m o . P o r o t r a e x p r e s i ó n del g e n r e p o r e r o l u c i f e r a s a . I n t e r e s a n t e m e n t e , los sitios de p a r t e , s e o b s e r v ó q u e la H Q , p e r o n o e l H 2 0 2 , a f e c t a l o s n i v e l e s d e unión transcritos de los g e n e s ligninol íticos m a n g a n e s o p e r o x i d a s a y l a c a s a . s e c u e n c i a s q u e in vivo Nosotros i n t r ó n 5 del g e n proponemos que el mecanismo por el cual el hongo r e a c c i o n a al e s t r é s o x i d a t i v o , c o n t r i b u y e a la s e l e c t i v i d a d q u e éste p o s e e p o r la l i g n i n a d u r a n t e la d e g r a d a c i ó n d e la m a d e r a . F i n a n c i a d o por: F O N D E C Y T 1 0 3 0 4 9 5 - 1 0 7 0 5 8 8 y M I F A B . que exhiben actividad transcripcional corresponden a se e n c u e n t r a n e n regiones hiperacefiladas del RUNX1. XXXI Reunión 61. S p H - P R O T E A S A E X I S T E E N C É L U L A S C A C O - 2 . (SpH-protease e x i s t s in C a c o - 2 c e l l s . ) M o r í n , V.' , D u f e y , E . \ S o l í s , C . \ J a ñ a , C . , Puchi, M. , Imschenetzky, M. , Rivas, C. . Departamento de B i o q u í m i c a y Biología Molecular, U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n . H e m o s descrito u n a S p H - p r o t e a s a en erizo de m a r de 60 K D a en su f o r m a activa que p o s e e p r e c u r s o r e s i n a c t i v o s d e 90 K D a y 70 K D a en n ú c l e o s d e ó v u l o s s i n f e c u n d a r . E s t a e n z i m a se l o c a l i z a e n el h u s o m i t ó t i c o d u r a n t e la m i t o s i s y s e g r e g a a a m b o s n ú c l e o s d u r a n t e la d i v i s i ó n c e l u l a r . El g e n q u e c o d i f i c a p a r a S p H - p r o t e a s a , e x h i b e u n a h o m o l o g í a c o n el g e n d e c a t e p s i n a L h u m a n a s . C o m o O b j e t i v o d e l p r e s e n t e t r a b a j o se i n v e s t i g ó la e x i s t e n c i a d e e s t a proteasa en c é l u l a s C a c o - 2 . S e u t i l i z a r o n a n t i c u e r p o s d i r i g i d o s c o n t r a la r e g i ó n N - t e r m i n a l d e e s t a p r o t e a s a q u e c o n f i r m a n la p r e s e n c i a de u n a m o l é c u l a de 60 k D a , e n distintas e t a p a s del ciclo c e l u l a r de células C a c o - 2 . S e m u e s t r a q u e e n e t a p a G 0 , e s t a p r o t e a s a se e n c u e n t r a e n e l c i t o p l a s m a y n ú c l e o d e la c é l u l a , d u r a n t e la m i t o s i s s e v i s u a l i z a a s o c i a d o c o n el h u s o m i t ó t i c o y d u r a n t e la e t a p a S se l o c a l i z a e n el n ú c l e o . L a i n c o r p o r a c i ó n d e B r o m o d e s o x i u n d i n a , m u e s t r a n q u e la s í n t e s i s d e A D N d i s m i n u y e al t r a t a r l a s c é l u l a s c o n u n i n h i b i d o r e s p e c í f i c o d e c a t e p s i n a L. P a r a l e l a m e n t e , c é l u l a s s i n c r o n i z a d a s c o n N o c o d a z o l , d i s m i n u y e n su c a p a c i d a d de salir de mitosis d e s p u é s del t r a t a m i e n t o c o n el i n h i b i d o r . E s t o s r e s u l t a d o s d e m u e s t r a n q u e la v a n a n t e n u c l e a r de catepsina L descrita en erizos de m a r , existe en c é l u l a s C a c o - 2 y su l o c a l i z a c i ó n es similar. 1 1 1 1 1 1 63. AISLAMIENTO TRANSCRITOS E DE IDENTIFICACIÓN Saccharomyces DE NUEVOS cerevisiae S O B R E - E X P R E S A D O S E N LA F A S E ESTACIONARIA TARDÍA D E L A F E R M E N T A C I Ó N V Í N I C A (Isolation a n d identificatión of novel t r a n s c r i p t s of Saccharomyces cerevisiae u p - r e g u l a t e d i n t h e late s t a t i o n a r y p h a s e of w i n e f e r m e n t a t i o n ) M o l i n e t t , S . , N o r a m b u e n a , T. , Meló, F. , Agosin, E. . Laboratorio de Biotecnología, d e p a r t a m e n t o de Ingeniería Q u í m i c a y B i o p r o c e s o s , E s c u e l a de I n g e n i e r í a , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e , D e p a r t a m e n t o d e Ciencias Biológicas, Universidad A n d r é s Bello , Laboratono de Bioinformática aplicada, departamento de Genética Molecular y M i c r o b i o l o g í a , F a c u l t a d de Ciencias B i o l ó g i c a s , P. Universidad Católica de Chile . 1 , 2 3 3 1 1 2 Anual 62. E L R O L D E L MN2+ E N L A S E C R E C I Ó N D E L A ENZIMA MANGANESO PEROXIDASA DEL BASIDIOM I C E T E L I G N I N O L Í T I C O C E R I P O R I O P S I S S U B V E R M I S P O R A . ( T h e r o l e of M n 2 + on t h e M a n g a n e s e P e r o x i d a s e e n z y m e s e c r e t i o n of t h e ligninolytic b a s i d i o m y c e t e Ceriporiopsis s u b v e r m i s p o r a ) Mancilla, R. , M a n u b e n s . A . . S a l a s , L . , M u ñ o z , F . , V i c u ñ a , R. . D e p a r t a m e n t o d e G e n é t i c a M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a . F a c u l t a d de C i e n c i a s B i o l ó g i c a s . Pontificia Universidad Católica de C h i l e . 1 1 1 1 1 1 Ceriporiopsis s u b v e r m i s p o r a es un h o n g o basidiomicete de pudrición blanca ampliamente usado en estudios de biopulpaje. S u maquinaria ligninolítica extracelular esta compuesta por dos tipos de glicoproteínas: m a n g a n e s o peroxidasa ( M n P ) y lacasa (Les). En este t r a b a j o , e s t u d i a m o s el e f e c t o d e l c a t i ó n M n 2 + e n la s e c r e c i ó n d e la M n P . E n cultivos crecidos en a u s e n c i a del metal, ensayos de q R T - P C R r e v e l a n altos n i v e l e s d e e x p r e s i ó n de t r a n s c r i t o s m n p . E n los correspondientes micelios experimentos de microscopía electrónica de t r a n s m i s i ó n m u e s t r a n altos niveles de e n z i m a en c o m p a r t i m e n t o s i n t r a c e l u l a r e s del h o n g o . S i n e m b a r g o , n o e s posible d e t e c t a r la p r o t e í n a M n P e n el m e d i o e x t r a c e l u l a r p o r e n s a y o s d e actividad enzimática o hibridación tipo W e s t e r n . Estos resultados s u g i e r e n u n rol p o s t - t r a n s c r i p c i o n a l d e l M n 2 + d e b i d o a q u e s o l a m e n t e e n c u l t i v o s t r a t a d o s c o n e l m e t a l e s p o s i b l e d e t e c t a r la e n z i m a e n el m e d i o extracelular. E x p e r i m e n t o s adicionales en presencia del i n h i b i d o r d e la t r a d u c c i ó n c i c l o h e x i m i d a y M n 2 + m u e s t r a n q u e e s t e m e t a l e s n e c e s a r i o p a r a s e c r e t a r la M n P , c o r r o b o r a n d o que e n a u s e n c i a d e l m e t a l , la M n P e s r e t e n i d a e n el i n t r a c e l u l a r y q u e el M n 2 + p o d r í a s e r el f a c t o r q u e g a t i l l a s u s e c r e c i ó n . F i n a n c i a d o p o r : F O N D E C Y T 1070588 y M I F A B . 64. SINTESIS IN CODIFICANTE VITRO DEL HUMANO MITOCONDRIALES DE CELULAS human sense non-coding 1 para la vida, MITOCONDRIAL CON MIFAB, NO EXTRACTOS H E L A (In vitro s y n t h e s i s o f t h e mitochondrial m i t o c h o n d r i a l extract) A r a y a , M. , Ciencia ARN SENTIDO RNA with 1 Hela cells 1 Burzio, V. , Burzio, L. . Fundación Grupo BIOS, Universidad Nacional 1 A n d r é s B e l l o . P a t r o c i n a n t e : L u i s . B.. H e m o s caracterizado un A R N mitocondrial no codificante ( A R N m t n c ) humano, formado (proveniente por un repetido d e la t r a n s c r i p c i ó n mitocondrial) unido de invertido la h e b r a covalentemente al de 815 nucleótidos L del gen A R N r extremo 5?del 16S ARNr 16S (transcrito h e b r a H ) f o r m a n d o u n a estructura doble hebra de 815pb y 3 D u r a n t e la f e r m e n t a c i ó n v í n i c a la l e v a d u r a Saccharomyces cerevisiae es sometida a variables condiciones de estrés. Estudios t r a n s c r i p t ó m i c o s , r e a l i z a d o s m e d i a n t e S A G E , e v i d e n c i a r o n q u e al i n i c i o d e la f a s e e s t a c i o n a r i a s e i n d u c e u n a reprogramación transcripcional general. Interesantemente, tags de S A G E a s i g n a d o s a regiones sin O R F anotado (NORFs) aumentan su expresión s i g n i f i c a t i v a m e n t e en e s t a f a s e . E n e s t e e s t u d i o , se r e - a n a l i z a r o n los datos de SAGE, obteniéndose aquellos tags NORF más s o b r e - e x p r e s a d o s d u r a n t e e s t a f a s e d e la f e r m e n t a c i ó n y q u e m a p e a n d e m a n e r a ú n i c a e n el g e n o m a . S e o b t u v o R N A t o t a l r e p r e s e n t a t i v o de tres fases -medio exponencial, estacionario temprano y estacionario tardío- de un cultivo b a t c h e n c o n d i c i o n e s vínicas. Se a i s l a r o n t r a n s e n t o s c o m p l e t o s d e los c u a l e s p r o v e n í a n d i c h o s t a g s N O R F , l o s q u e f u e r o n c l o n a d o s y s e c u e n c i a d o s . M e d i a n t e a n á l i s i s in silico, é s t o s f u e r o n m a p e a d o s e n el g e n o m a d e l e v a d u r a , c o n f i r m a n d o el c o n t e x t o g e n é t i c o o b t e n i d o p r e v i a m e n t e p a r a c a d a t a g . D i s t i n t o s algoritmos de predicción d e g e n e s i n d i c a n que estos transcritos c o r r e s p o n d e r í a n a R N A s no c o d i f i c a n t e s . E s t a s e v i d e n c i a s , j u n t o con s u p a t r ó n d e e x p r e s i ó n d u r a n t e la f e r m e n t a c i ó n v í n i c a , s u g i e r e n q u e estos transcritos podrían corresponder a R N A s no codificante con a c t i v o s r o l e s r e g u l a t o r i o s e n Saccharomyces cerevisiae d u r a n t e la f a s e e s t a c i o n a r i a t a r d í a d e la f e r m e n t a c i ó n v í n i c a . F i n a n c i a m i e n t o : Proyecto F O D E C Y T 1058688. un asa de 40nt. corresponde cultivando al Hemos producto células H e L a demostrado de un que pseudogen en presencia este transcrito mitocondrial, de bromuro no pues d e etidio no se d e t e c t a la e x p r e s i ó n d e l A R N m t n c . A d e m á s , h e m o s d e t e r m i n a d o q u e e s t e A R N n o e s t á c o d i f i c a d o e n el g e n o m a m i t o c o n d r i a l , p u e s si e s t o f u e r a c i e r t o el f r a g m e n t o e x t r a d e 8 1 5 n t d e b e r í a e s t a r u b i c a d o e n t r e l a s r e g i o n e s A R N t V a l y el e x t r e m o 5 ? d e l A R N r 1 6 S , a m p l i f i c á n d o s e p o r P C R u n f r a g m e n t o d e 9 4 5 p b , s i e n d o el ú n i c o a m p l i c ó n g e n e r a d o u n o de 1 3 0 p b . E n c o n s e c u e n c i a , h e m o s p o s t u l a d o q u e la s í n t e s i s d e e s t e A R N r e q u i e r e d e los t r a n s c r i t o s d e las h e b r a s H y L del A D N m t , donde el t r a n s c r i t o 16S de la h e b r a L se procesaría y ligaría al e x t r e m o 5 ? d e l t r a n s c r i t o d e la h e b r a H ( A R N r i b o s o m a l 1 6 S m a d u r o ) mediante un procesamiento post-transenpeional que ocurriría p r o b a b l e m e n t e d e n t r o d e la m i t o c o n d r i a . E n c o n s e c u e n c i a e l o b j e t i v o de este trabajo Resultados considera preliminares dilucidar sugieren la síntesis que la de este ligación ARNmtnc. de ambos f r a g m e n t o s ocurre e n p r e s e n c i a d e l i s a d o m i t o c o n d r i a l y q u e no se r e q u i e r e la l o n g i t u d c o m p l e t a d e a m b o s t r a n s c r i t o s p a r a d a r o r i g e n al ARNmtnc. Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular SEÑALIZACIÓN CELULAR, Bl O MED I CIÑA, REGULACIÓN METABOLIC A 65. EXPRESIÓN MÚSCULO DE NEUREGULINA-1B E T A ESQUELÉTICO ESTIMULADAS ELECTRICAMENTE. electrically stimulated 1 Juretic, N. , normal Jorquera, CELULAS Y Jaimovich, expression skeletal muscle 1 E. , DE DISTRÓFICO ( N R G - 1 beta and dystrophic G.\ EN NORMAL Riveras, in cells) 1 N. . Centro 66. ESTUDIO DE LA INTERACCION COMPLEJO C P C (Interaction studies of b o t h R I C - 8 de 1 with 1 1 Hinrichs, M V . . L a b o r a t o r i o de G e n é t i c a Molecular. D e p a r t a m e n t o de Biológicas, Universidad de C o n c e p c i ó n . . Universidad isoforms 1 Bioquímica Medicina, DOS 1 Celular y Molecular, de LAS I N C E N P , a c o m p o n e n t o f t h e C P C ) C a m p o s , T . , L a r a , P. , Oíate, J . , F O N D A P d e E s t u d i o s M o l e c u l a r e s d e la C é l u l a , P r o g r a m a d e B i o l o g í a ICBM, Facultad ENTRE I S O F O R M A S D E RIC-8 E INCENP, PROTEÍNA C O M P O N E N T E D E L y Biología Celular y Molecular. Facultad de Ciencias 1 Chile. . RIC-8 N e u r e g u l i n a - 1 ( N R G - 1 ) e s u n f a c t o r d e c r e c i m i e n t o q u e p o t e n c i a la citosólica que m i o g é n e s i s e i n d u c e la e x p r e s i ó n d e u t r o f l n a , p r o t e í n a e s t r u c t u r a l y especies, desde funcíonalmente relacionada con s u p e r i o r e s se h a n e n c o n t r a d o d o s i s o f o r m a s , d e n o m i n a d a s R I C - 8 A y esquelético. Investigamos la d i s t r o f i n a . e n c é l u l a s del m ú s c u l o el efecto de la despolarización y en (Resistant RIC-8B, las to se Inhibitors of C h o l i n e s t e r a s e ) , encuentra C. altamente elegans cuales hasta poseen H. actividad es una conservada sapiens. GEF en proteína diferentes En organismos (Guanine nucleotide p a r t i c u l a r la p a r t i c i p a c i ó n d e la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o i n t r a c e l u l a r , e n la E x c h a n g e F a c t o r ) , e s d e c i r la c a p a c i d a d d e e s t i m u l a r e l i n t e r c a m b i o expresión y de G D P p o r G T P e n diversas s u b u n i d a d e s G a . A p e s a r de que a m b a s músculo isoformas c o m p a r t e n gran similitud de secuencia, éstas actúan c o m o de NRG-1beta en utilizaron líneas distróficas. Se esquelético normal (RCMH) células musculares celulares y distrófico normales humanas de (RCDMD), despolarizadas GEF sobre diferentes proteínas G. P o r otra parte, e n organismos eléctricamente (400 pulsos, 1 m s , 4 5 H z ) . La expresión de N R G - 1 b e t a m e n o s e v o l u c i o n a d o s , s e h a o b s e r v a d o una sola f o r m a de RIC-8 que se determinó mediante PCR-semicuantitativo, Q-PCR y Westem-blot. cumpliría a m b a s f u n c i o n e s . R e c i e n t e m e n t e en nuestro laboratorio, se Observamos que la despolarización produce un aumento en los clonó RIC-8 desde ovocitos de Xenopus laevis (xRIC-8), y se n i v e l e s d e N R G - 1 b e t a m R N A y u n i n c r e m e n t o e n la e x p r e s i ó n d e la d e m o s t r ó q u e é s t e p a r t i c i p a e n la a c t i v a c i ó n d e G a s . P o r o t r o l a d o , proteína, buscando en ambos tipos celulares. Se observa una inducción proteínas interactoras de x R I C - 8 , se encontró que ésta m á x i m a d e l m R N A (2 v e c e s r e s p e c t o al c o n t r o l s i n e s t í m u l o ) a l a s 4 p u e d e a s o c i a r s e a d o s p r o t e í n a s q u e f o r m a n p a r t e del c o m p l e j o C P C horas. (Chromosomal Passenger Complex), denominadas INCENP yDasra. BAPTA-AM, quelante Ly-294002, inhibidores niveles de de calcio intracelular y 2-APB y d e la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o , d i s m i n u y e n NRG-1 beta mRNA inducidos por los despolarización. Basado en los proponemos antecedentes que una de anteriormente las dos expuestos, isoformas de nosotros RIC-8 humana, miotubos i n t e r a c c i o n a c o n el C P C y p o r lo t a n t o c u m p l e u n a f u n c i ó n i m p o r t a n t e distróficos es m a y o r que en miotubos normales. Nuestros resultados d u r a n t e la m i t o s i s . P o r e s t a r a z ó n , s e e s t u d i ó la i n t e r a c c i ó n i n v i v o s u g i e r e n q u e la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o , i n d u c i d a p o r d e s p o l a r i z a c i ó n , entre r e g u l a la e x p r e s i ó n g é n i c a d e N R G - 1 b e t a t a n t o e n c é l u l a s m u s c u l a r e s coinmunoprecipitación. Demostramos que el nivel basal de NRG-1 beta en n o r m a l e s c o m o distróficas. P u e s t o q u e los niveles de N R G - 1 b e t a encuentran expresión alterados del gen en miotubos podría ser distróficos, importante en estrategias terapéuticas. Bicentenario P S D - 2 4 . 67. HSP70 INDUCCION DE ESQUELETICO. EN EFECTO la r e g u l a c i ó n el depolarization Jaimovich, 1 E. , or IL-6 treatment) 1 Riveras, N. . con INCENP mediante ensayos de la desarrollo de DE MUSCULO DESPOLARIZACION 1 Jorquera, Centro Ric-8B se de Y T R A T A M I E N T O C O N I L - 6 ( H s p 7 0 e x p r e s s i o n in s k e l e t a l m u s c l e c e l l s by y FONDAP-15010006. CELULAS DE Ric-8A G. , FONDAP Juretic, de 1 N. , Estudios M o l e c u l a r e s d e la C é l u l a , P r o g r a m a d e B i o l o g í a C e l u l a r y M o l e c u l a r , 6 8 . I G F - 1 A C T I V A A HIFot Y N A D P H O X I D A S A V Í A P L C C a 2 + P K C E N E L C A R D I O M I O C I T O (IGF-1 activates H I F a a n d N A D P H oxidase through P L C - C a 2 D. , + 2 1 - P K C in c a r d i o m y o c y t e s ) B u c a r e y , J . L . , M a t u r a n a , 2 Muñoz, J.P. , 2 Hidalgo, C. , 1 2 Lavandero, S. . Universidad de 2 Valparaíso , Universidad de Chile . O b j e t i v o s : IGF-1 es u n p o t e n t e a g e n t e prohipertrófico y antiapoptótico 1 I C B M , F a c u l t a d de M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de C h i l e . . en H s p 7 0 c o n t r i b u y e a la h o m e o s t a s i s c e l u l a r d e l m ú s c u l o durante el Estudiamos estrés el fisiológico efecto de la asociado a la esquelético contracción despolarización, muscular. específicamente la p a r t i c i p a c i ó n d e s e ñ a l e s d e c a l c i o y d e P K C , a s í c o m o el e f e c t o d e I L - 6 e n la e x p r e s i ó n d e H s p 7 0 en células m u s c u l a r e s e n cultivo. Se a n a l i z ó la e x p r e s i ó n d e H s p 7 0 e n m i o t u b o s d e s p o l a r i z a d o s c o n K + o eléctricamente, en presencia y ausencia de inhibidores de señales de c a l c i o y d e P K C y el e f e c t o d e I L - 6 r e c o m b i n a n t e s o b r e l o s n i v e l e s d e l mRNA de Hsp70. Westem-Blotting e El estudio inmuno se realizó fluorescencia. despolarización aumenta significativamente mediante RT-PCR, Observamos que la l o s n i v e l e s del m R N A y d e la p r o t e í n a H s p 7 0 , lo q u e n o o c u r r e al d e s p o l a r i z a r l o s m i o t u b o s e n p r e s e n c i a d e i n h i b i d o r e s d e la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o o i n h i b i d o r e s d e P K C . La i n c u b a c i ó n de los m i o t u b o s c o n IL-6 produce un incremento e n los niveles del m R N A de H s p 7 0 . N u e s t r o s resultados sugieren que la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o , i n d u c i d a p o r d e s p o l a r i z a c i ó n , estimula la el cardiomiocito. transduccionales investigamos: generadora a) de cardiomiocito, señalización Nuestro implicadas si IGF-1 especies b) cuáles objetivo la NADPH reactivas y las c) es respuesta activa son involucradas transcripcional en de oxígeno estas de ROS las IGF-1. oxidasa, isoformas si analizar a una y activan ello fuente (ROS) NOX vías Para en el vías de al factor H I F - 1 a . M e t o d o l o g í a : La expresión de isoformas de N A D P H oxidasa y H I F I a s e d e t e r m i n a r o n por R T - P C R . La producción de R O S se d e t e r m i n ó m e d i a n t e s o n d a s fluorescentes químicas (DCF) y b i o l ó g i c a s ( H y p e r ) . P a r a e v a l u a r la p a r t i c i p a c i ó n d e N O X 2 s e u s ó el péptido gp91ds-tat y un s i R N A para N O X 4 . La activación de HIF 1a s e e s t u d i ó c o n u n g e n r e p o r t e r o H I F 1 a-lux y las vías de s e ñ a l i z a c i ó n mediante inhibidores farmacológicos ResultadosLos cardiomiocitos e x p r e s a n las i s o f o r m a s N O X 2 y N O X 4 d e N A D P H o x i d a s a y H I F 1 a . I G F - 1 a u m e n t ó la p r o d u c c i ó n d e R O S e n t r e 0 - 3 0 m i n y s i e n d o i n h i b i d a p a r c i a l m e n t e p o r g p 9 1 d s - t a t o el s i R N A para N O X 4 y en conjunto en e x p r e s i ó n d e H s p 7 0 , m e d i a n t e a c t i v a c i ó n d e P K C , e i n d i c a n q u e IL-6 un 8 0 % . L a p r o d u c c i ó n de R O S d e p e n d i e n t e de IGF-1 fue aumenta c o m p l e t a m e n t e p o r A G 5 3 8 y g e n i s t e í n a y, p a r c i a l m e n t e , p o r U 7 3 1 1 2 , la e x p r e s i ó n d e l m R N A d e H s p 7 0 . S e h a o b s e r v a d o disminución del contenido muscular de Hsp70 en una patologías BIM, Go6976 del y BAPTA-AM y no por LY294002. tipo 2. E s t e t r a b a j o a p o r t a al c o n o c i m i e n t o d e las b a s e s m o l e c u l a r e s g p 9 1 d s - t a t . C o n c l u s i o n e s I G F - 1 e s t i m u l a la p r o d u c c i ó n d e R O S p o r l a s isoformas cardiomiocito. FONDAP 15010006. NOX2/4 de NADPH HIF1 a-lux oxidasa siendo y activa bloqueada la activación de nuevas estrategias terapéuticas. reportero IGF-1 estimuló a s o c i a d a s a e s t r é s o x i d a t i v o , c o m o r e s i s t e n c i a a la i n s u l i n a y d i a b e t e s i n v o l u c r a d a s e n la r e g u l a c i ó n d e l g e n y p o d r í a c o n t r i b u i r al d e s a m o l l o gen inhibida HIF-1a por en E n e s t a s r e s p u e s t a s p a r t i c i p a la v í a P L C - C a + 2 - P K C . el XXXI Reunión 69. IGF-1 REGULA CARDIOMIOCITO LA AUTOFAGIA INDUCIDA POR Y MUERTE PRIVACIÓN DE DEL GLUCOSA ( I G F - 1 r e g u l a t e s a u t o p h a g y a n d d e a t h in g l u c o s e - d e p n v a t e d 1 1 1 m y o c y t e s ) G o n z á l e z , L . , T o r o , B . , T r o n c o s o, R. , Centro FONDAP CEMC, Facultades cardiac 1 Lavandera, Ciencias S. . Químicas y Anual 70. ACTIVIDAD D E L P O R O D E T R A N S I C I O N D E P E R M E A B I L I D A D MITOCONDRIAL EFECTO EN MITOCONDRIAS AISLADAS DE REDOX. (mPTP P. , Hidalgo, C . 1 , 3 in cardiac 1 modulation) Fernández, 2 activity CORAZÓN: rnitochondria: 1 2 C . , P e d r o z o , Z . , D o m e n e c h , R. , , Donoso, P. 1 , 3 , Sánchez, G. . P r o g r a m a de Biología Celular y Molecular, L a a u t o f a g i a e s u n a v í a ele d e g r a d a c i ó n i n t r a c e l u l a r p a r a el r e c a m b i o Chile. , d e proteínas y organelos y de e j e c u c i ó n de m u e r t e en r e s p u e s t a a U n i v e r s i d a d d e C h i l e . , C e n t r o d e E s t u d i o s M o l e c u l a r e s d e la C é l u l a , e s t r é s n u t r i c i o n a l . S u e x c e s i v a i n d u c c i ó n e s u n m e c a n i s m o p a r a el Facultad de M e d i c i n a , Universidad d e Chile. . desarrollo L a t r a n s i c i ó n d e la p e r m e a b i l i d a d m i t o c o n d r i a l de patologías cardioprotector que cardiacas. promueve la IGF-1 es hipertrofia un agente fisiológica del cardiomiocito e inhibe su apoptosis, sin e m b a r g o , se d e s c o n o c e si 1 Programa de Facultad redox Macho, Farmacéuticas y Medicina, Universidad de Chile . 1 ICBM, 2 , 3 de Medicina, Universidad Fisiopatología, ICBM, Facultad de 2 3 de es el a u m e n t o b r u s c o p e r m e a b i l i d a d a m o l é c u l a s < 1,5 k D a , q u e p r o d u c e la p é r d i d a d e l potencial de membrana mitocondrial oxidativa. El y el desacoplamiento fosforilación c a r d i o m i o c i t o s s e p r i v a r o n d e g l u c o s a e n t r e 2 y 24 h y s e d e t e r m i n ó la permeabilidad a u t o f a g i a a t r a v é s d e la r e d i s t r i b u c i ó n d e la p r o t e í n a L C 3 - G F P p r e v i a m e c a n i s m o de apertura no están c o m p l e t a m e n t e identificados. t r a n s d u c c i ó n a d e n o v i r a l del g e n a s í c o m o p o r el p r o c e s a m i e n t o d e la a u m e n t o de p e r m e a b i l i d a d proteína e n d ó g e n a L C 3 por W e s t e r n blot. Los r e s u l t a d o s una q u e la p r i v a c i ó n d e g l u c o s a a c t i v ó la a u t o f a g i a , s i e n d o inhibida por es isquemia un responsable poro (mPTP) esto del es corazón. hacerse IGF-1. reactivas oxígeno determinantes celular inducida siendo atenuado por activa la a u t o f a g i a ambas acciones IGF-1. En y estimula resumen, la m u e r t e por estrés 3-metiladeriina, la p r i v a c i ó n d e glucosa del c a r d i o m i o c i t o , siendo de (ROS), las que son episodios el p r e c o n d i c i o n a m i e n t o actividad determinando el modifican cambio de al m P T P , volumen puede cortos d e s a r r o l l o d e la p r o t e c c i ó n . P a r a i n v e s t i g a r si l a s R O S durante y Este isquemia se producen la v i a b i l i d a d realizan una D u r a n t e el p r e c o n d i c i o n a m i e n t o de se corazón a si La disminución ella El resistente prolongada, n u t r i c i o n a l s e i n c r e m e n t ó a l i n h i b i r la a u t o f a g i a c o n de molecular taquicardia. PKB y de identidad p70-S6K en los n i v e l e s de A T P , la aumento fosforiladas inducidos p o r privación de glucosa fueron prevenidas por I G F - 1 . Las disminuciones antes cuya este d e s e n c a d e n a la m u e r t e c e l u l a r l u e g o d e prolongada precondicionarse, de de t a m b i é n c o n t r o l a la a u t o f a g i a . P a r a p r o b a r e s t a h i p ó t e s i s , c u l t i v o s d e mostraron de Medicina, de especies para el generadas evaluamos de su mitocondrias becarios aisladas de c o r a z o n e s de a n i m a l e s controles y precondicionados con doctorado CONICYT. F O N D A P 1501006, Becas Apoyo Tesis Doctoral t a q u i c a r d i a . E n c o n t r a m o s que en m i t o c o n d r i a s de a n i m a l e s s o m e t i d o s 24071082 y 24080060. a t a q u i c a r d i a , el c a m b i o d e v o l u m e n g a t i l l a d o p o r u n a s o b r e c a r g a d e bloqueadas por IGF-1. BT y TR son calcio ocurre más lentamente que en controles. Además, la incubación de mitocondrias d e a n i m a l e s controles c o n un reductor de grupos SH velocidad (DTT) del disminuye, cambio sobrecarga de calcio. de mientras volumen que el H 0 2 mitocondrial 2 aumenta, gatillado por la una Estos resultados sugieren que cambios redox d e las p r o t e í n a s q u e c o n f o r m a n el m P T P r e g u l a n s u a p e r t u r a , h e c h o q u e p o d r í a s e r r e s p o n s a b l e d e la p r o t e c c i ó n m e d i a d a p o r t a q u i c a r d i a . Financiado por Fondecyt 1080497, 1080481 y Fondap 5010006. 71. A N A L I S I S M O L E C U L A R D E L G E N M S H 6 E N FAMILIAS CON 72. ABERRANTE C A N C E R C O L O R R E C T A L H E R E D I T A R I O NO P O L I P O S O (HNPCC) TUMOR (Molecular (DNA aberrant breast cáncer s c r e e n i n g of t h e M S H 6 g e n e i n f a m i l i e s w i t h non-polyposis K. 1 , 2 colorectal cáncer, 1 HNPCC) 3 1 , Church, J. , López-Kostner, F. , hereditary 2 Orellana, P. - , 2 Carvallo, P. . Alvarez, Laboratorio de EN METILACION PACIENTES methylation Chilean 2 DE GENES CHILENAS profiles patients) CON of t u m o r Guzman, 2 SUPRESORES CÁNCER DE DE MAMA suppressor genes 1 L.M. , 2 in 2 Maturana, M.J. , 3 3 Castillo, D. , R o d r í g u e z , L. , C o r d e r o , E . , del C a m p o , G . , O d d ó , O . O n c o l o g í a y Genética Molecular, Clínica las C o n d e s , Laboratorio de Laboratorio Genética V a l p a r a í s o , Laboratorio de I n m u n o l o g í a . Instituto de Salud Pública de 1 Molecular Humana, Departamento Biología Celular y 2 Molecular, Pontificia Universidad Católica de C h i l e , Cleveland Clinic 3 de Bioquímica, Pontificia Universidad Católica de 1 2 3 C h i l e , Instituto N a c i o n a l del C á n c e r . Foundation, Cleveland.Ohio, USA . El c á n c e r d e m a m a ( C M ) c o n s t i t u y e l a s e g u n d a c a u s a d e m u e r t e e n El C á n c e r Colorrectal Hereditario No Poliposo ( H N P C C ) se origina por m u j e r e s p o r c á n c e r e n C h i l e . El d e s a r r o l l o c a r c i n o g é n i c o s e p r o d u c e m u t a c i o n e s e n la l í n e a g e r m i n a l e n l o s g e n e s M L H 1 , M S H 2 y M S H 6 p o r alteraciones m o l e c u l a r e s c o m o s o b r e - e x p r e s i ó n de o n c o g e n e s y/o q u e codifican para e n z i m a s de r e p a r a c i ó n del D N A . U n e s t u d i o previo inactivación r e a l i z a d o e n n u e s t r o l a b o r a t o r i o e n 5 0 f a m i l i a s c h i l e n a s r e v e l ó q u e el s i l e n c i a m i e n t o g é n i c o p o r a b e r r a n t e m e t i l a c i ó n d e la r e g i ó n p r o m o t o r a 4 5 % de é s t a s , presenta m u t a c i o n e s e n los g e n e s E n t r e las 2 6 familias que no p r e s e n t a n MLH1 o MSH2. m u t a c i ó n e n u n o de estos de genes, por mutaciones o s i le nci a m i e n t o génico. El de g e n e s s u p r e s o r e s de t u m o r ( G S T ) , es un m e c a n i s m o c o m ú n en c á n c e r y se ha descrito e s t e tipo de inactivación en u n a serie neoplasias c o l o r r e c t a l , q u e es u n a c a r a c t e r í s t i c a f r e c u e n t e e n a q u e l l a s estado de metilación de un panel de 7 genes G S T , en un grupo de q u e p r e s e n t a n m u t a c i ó n e n el g e n M S H 6 . familias El objetivo de este estudio c o n s i s t e e n a n a l i z a r la p r o b a b l e p r e s e n c i a d e m u t a c i o n e s e n la l í n e a germinal en el g e n MSH6, presentan mutaciones en en los pacientes genes MLH1 de 14 familias y MSH2. Para pacientes como C M . El p r o p ó s i t o con C M comparado para los g e n e s : p 1 6 ( 9 0 % ; p < 0 . 0 0 0 0 1 ) , B R C A - 1 ( 1 0 0 % ; p < 0 . 0 0 0 0 1 ) , R A S S F 1 - A ( 8 7 % ; p < 0 . 0 0 0 0 1 ) y C D H 1 ( 7 9 % ; p<0.0117), en muestras pronóstico en C M . c.3439-16C>T y familias, dos dos cambios silentes, c.1449G>T (V483V), c.3249G>T (P1082P), todos producidos por sustituciones nucleotídícas, que no han sido descritos anteriormente para este tipo de pacientes. A d e m á s , otras alteraciones genéticas no encontrado patogénicas, en otros desentas pacientes. como Los polimorfismos, cambios se han n u c í eot id i c o s e n c o n t r a d o s n e c e s i t a n e s t u d i o s p o s t e r i o r e s , ya s e a n funcionales y/o d e f r e c u e n c i a en la p o b l a c i ó n . F i n a n c i a d o p o r T h e C l e v e l a n d Foundation. un positiva se de D N A . S e identificaron alteraciones c.2693-18T>A, control. Utilizando el no genes intrónicos fue evaluar que de tejido de p a c i e n t e s cambios con un grupo estudio esto a m p l i f i c a r o n p o r P C R los e x o n e s del g e n M S H 6 , y s e a n a l i z a r o n p o r la en 4 este m é t o d o de P C R - m e t i l a c i ó n s e n s i b l e o b s e r v a m o s metilación t é c n i c a de c o n f o r m ó m e r o s d e h e b r a s i m p l e ( S S C P ) y s e c u e n c i a c i ó n genéticas de de g e n e s , s e e n c u e n t r a n 13 c o n c a s o s d e c á n c e r d e e n d o m e t r i o y c á n c e r Clinic podrían ser c o n C M . L o s resultados sugieren que utilizados como biomarcadores con estos valor Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular 73. B U S Q U E D A D E M U T A C I O N E S E N L A LINEA G E R M I N A L E N 74. M E T I L A C I O N D E L P R O M O T O R D E L G E N ATM Y E L G E N MYH E N PACIENTES C O N POLIPOS D E E X P R E S I Ó N E N C Á N C E R D E MAMA H E R E D I T A R I O ( S c r e e n i n g of germline m u t a t i o n s in t h e M Y H g e n e i n p a t i e n t s colorectal polyposis) De l a F u e n t e , M. 1 COLORRECTALES 1,2 , Alvarez, K. 1 , 2 with 3 , Church, J. , 2 López-Kostner, F. , Carvallo, P . Laboratorio d e Oncología y Genética AUSENCIA (Promoter m e t h y l a t i o n o f t h e A T M g e n e a n d a b s e n c e of e x p r e s s i o n in hereditary 1 1 2 2 breast cáncer) Smalley, S . V . , Tapia. T . . Kohen, P. , Muñoz, A . , 3 Solis. 3 1 L. , Corvalan, A . , F a u n d e z , 4 2 P. , Devoto, 4 L. , C a m u s , M. , 1 M o l e c u l a r , Clínica las C o n d e s . , L a b o r a t o r i o de G e n é t i c a Molecular Alvarez, M . , Carvallo, P. . Departrnento Biología Celular y Molecular, Humana, Departamento Pontificia Facultad de Ciencias 1 Universidad d e Biología Católica Celular y Molecular, 2 de Chile. , Cleveland Clinic Foundation, 1 Chile , IDIMI, Biológicas, Pontificia Universidad 2 de Chile , Universidad Católica de Departrnento de Anatomía Patológica, Facultad d e Medicina, Pontificia Universidad Católica de 3 Cleveland-Ohio, USA. . 3 4 Pacientes c o n múltiples pólipos colorrectales pueden corresponder a Chile , Centro de Cáncer, Pontificia Universidad Católica de Chile . las variantes hereditarias Poliposis A d e n o m a t o s a El g e n A T M h a s i d o a s o c i a d o a c á n c e r d e m a m a h e r e d i t a r i o c o m o u n Familiar, causada p o r m u t a c i o n e s e n el g e n A P C o P o l i p o s i s A d e n o m a t o s a a s o c i a d a a gen M Y H , c u y a s m u t a c i o n e s e n l a l í n e a g e r m i n a l s e e n c u e n t r a n e n el g e n mutaciones y MYH. aminoácido, para La poliposis autosómica asociada dominante a MYH o recesiva. puede Nuestro presentar objetivo herencia es identificar de baja función de penetrancia. Pacientes variantes la alélicas los cuales proteína. c o n este que se ha sugerido Se ha cáncer derivan en presentan cambios u n a alteración determinado que las de e n la personas m u t a c i o n e s e n l a l í n e a g e r m i n a l e n el g e n M Y H e n p a c i e n t e s c h i l e n o s portadoras c o n m ú l t i p l e s p ó l i p o s c o l o r r e c t a l e s , e n l o s c u a l e s el a n á l i s i s p r e v i o d e l m a y o r d e d e s a r r o l l a r c á n c e r d e m a m a q u e la p o b l a c i ó n s i n m u t a c i ó n . gen P o r otra p a r t e la e x p r e s i ó n del g e n A T M s e h a visto d i s m i n u i d a a nivel APC no reveló mutación. Para esto se seleccionaron de u n a m u t a c i ó n e n este g e n tienen un riesgo 5 v e c e s 11 pacientes c o n múltiples pólipos c o l o r r e c t a l e s , a los cuales se les de r e a l i z ó el e s t u d i o g e n é t i c o d e l g e n M Y H . P a r a e s t o s e a m p l i f i c a r o n p o r e s p o r á d i c o s . A d i c i o n a l m e n t e la h i p e r m e t i l a c i ó n d e l p r o m o t o r de A T M PCR ha los 1 6 e x o n e s d e este g e n , y s e a n a l i z a r o n p o r la t é c n i c a d e mRNA sido y de proteína descrita en en cerca cáncer de del 8 0 % en tumores mama esporádico de mama y otros. Para conformómeros de hebra simple ( S S C P ) y secuenciación de D N A . Se d e t e r m i n a r el e s t a d o de metilación del p r o m o t o r de A T M en c á n c e r detectaron cuatro e n el g e n mama MYH. paciente en modificó Un pacientes portadores presentó un de alteraciones cambio nucleotídico estado hereditario, con h o m o c i g o t o , el c u a l p r o d u c e u n c a m b i o d e a m i n o á c i d o d e t i r o s i n a p o r específicos h i s t i d i n a e n el c o d ó n 1 1 4 ( Y 1 1 4 H ) . L o s o t r o s t r e s c a s o s secuenciación cambios nucleotídicos correspondientes en un a. c . 1 0 5 9 d u p C solo alelo (R354QfsX), presentan (hetero cigoto), c.827G>A (C276Y). se extrajo bisulfito de p o r P C R . El el D N A t u m o r a l sodio y estado se de de 4 9 biopsias, amplificó metilación con se se partidores confirmó por d e D N A . S e d e t e r m i n ó q u e el p r o m o t o r d e A T M s e encuentra metilado en u n 8 7 , 5 % de las biopsias. A d e m á s se detectó la p r e s e n c i a d e la p r o t e í n a A T M p o r I H Q u t i l i z a n d o u n a n t i c u e r p o c.1145-27C>T. La mutación Y 1 1 4 H ha sido previamente descrita en monoclonal. La proteína u n a familia en Portugal, e n la cual se p r e s e n t a e n f o r m a h o m o c i g o t a normales de ductos m a m a r i o s , y se encontró ausente en un 9 6 % de en dos hermanas. aminoacídicas e Para determinar intrónicas e n la el de en células epiteliales las variantes los t u m o r e s . E s t o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n q u e A T M e s u n s u p r e s o r de M Y H se requieren t u m o r i n v o l u c r a d o e n el d e s a m o l l o d e c á n c e r d e m a m a efecto función A T M fue detectada de posteriores estudios funcionales. F i n a n c i a d o p o r T h e C l e v e l a n d Clinic hereditario. F O N D E C Y T J 080595. Foundation. 75. ANÁLISIS FUNCIONAL D E V A R I A N T E S ALÉLICAS D E L G E N 76. ATM AL EN LÍNEAS LINFOBLASTOIDES PROVENIENTES P A C I E N T E S C O N CÁNCER D E MAMA HEREDITARIO. analysis of A T M allelic variants hereditary breast cáncer 1 o n lymphoblastoid patients) 2 F a ú n d e z , P. , López, M . , Barría, M I Biología Celular Pontificia Universidad Católica y Molecular, 2 A. . Mejías. Facultad de Ciencias 1 resistance Virología Universidad 2 D E LA SENSIBILIDAD A LA EXPRESIÓN MULTIRRESISTENCIA (Recovery Biológicas, de INHIBIR C . \ 1 de Chile. , Laboratorio RECUPERACIÓN from , Carvallo, P. . Departamento de Molecular, Centro de Investigaciones M é d i c a s , Pontificia Católica de Chile. (Functional cell lines 1 Sánchez, DE of A DROGAS chemotherapy proteins QUIMIOTERAPIA PROTEÍNAS EN CÁNCER sensitivity expression 1 DE by in prostatic 1 DE PROSTÁTICO inhibiting multidrug 1 cáncer) Sánchez, C . , 2 2 Contreras, H. , M e n d o z a , P. , C a b e z a s , J . , A c e v e d o , C. , Huidobro, 2 C. , 1 Castellón, E. . Laboratorio ICBM, Facultad de Andrologia de M e d i c i n a , Universidad Celular y 1 de Chile , Molecular, Servicio de 2 Urología, Hospital Clínico Universidad de Chile . L a b a j a r e s p u e s t a a la q u i m i o t e r a p i a q u e p r e s e n t a el c á n c e r prostático A T M e s u n a p r o t e í n a - q u i n a s a a c t i v a d a p o r q u i e b r e s e n la doble h e b r a avanzado del D N A , que fosforila a P 5 3 , y activa la transcripción de P 2 1 entre proteínas de multirresistencia a drogas (MDR), c o m o G p - P , M R P 1 y o t r a s f u n c i o n e s q u e l l e v a n al a r r e s t o d e l c i c l o c e l u l a r . S e h a d e s c r i t o LRP, q u e p e r s o n a s p o r t a d o r a s d e m u t a c i o n e s e n el g e n A T M p o s e e n u n a quimioterapéuticos. ( C A P ) s e debe, entre otros que disminuyen la f a c t o r e s , a la p r e s e n c i a d e concentración intracelular de C o n el f i n d e e s t u d i a r l a p o s i b l e r e v e r s i ó n d e l mayor susceptibilidad a desarrollar cáncer de m a m a . U n estudio de fenotipo nuestro laboratorio realizado e n 80 familias chilenas c o n cáncer de m e d i a n t e R N A de interferencia ( s i R N A ) en cultivos primarios de C A P M D R en C A P , inhibimos la e x p r e s i ó n d e e s t a s proteínas m a m a hereditario, reveló la p r e s e n c i a d e variantes alélicas del g e n y d e l a l í n e a P C 3 . E v a l u a m o s s u s e n s i b i l i d a d f r e n t e la e x p o s i c i ó n a u n A T M a s o c i a d a s a e s t a p a t o l o g í a . E n el p r e s e n t e e s t u d i o a n a l i z a m o s la panel funcionalidad s o b r e v i d a ( M T T ) . T r a s c o m p r o b a r u n a d i s m i n u c i ó n c e r c a n a al 6 0 % d e S707P, L694L pacientes ATM, d e las v a r i a n t e s en linfocitos alélicas F582L, inmortalizados D1853N, provenientes p o r t a d o r e s . P a r a e s t u d i a r la f u n c i o n a l i d a d se trataron radiomimético los linfocitos que induce quiebres con D1853V, bleomicina, de doble evaluaron los niveles de P 5 3 y p-ser15-P53 de los d e la proteína hebra un agente del D N A . S e m e d i a n t e W e s t e r n , la de drogas quimioterapéuticas a través de un ensayo de la e x p r e s i ó n d e l a s 3 p r o t e í n a s l u e g o d e la t r a n s f e c c i ó n , s e o b s e r v ó que los cultivos de CAP y P C 3 transfectados presentaron una d i s m i n u c i ó n d e l 1 0 % e n l a s o b r e v i d a al s e r t r a t a d o s c o n M i t o x a n t r o n a y Docetaxel patología), (drogas Cisplatino de elección y Metotrexato, para el respecto tratamiento de esta de los cultivos sin e x p r e s i ó n d e p 2 1 m e d i a n t e q R T - P C R , y la síntesis d e D N A a través transfectar. d e la i n c o r p o r a c i ó n d e [ 3 H ] t i m i d i n a e n l a s l í n e a s l i n f o b l a s t o i d e s . N o proteínas M D R revierte e n parte la resistencia de los cultivos de C A P , o b s e r v a m o s diferencias significativas e n el a u m e n t o d e la c a n t i d a d de i n c r e m e n t a n d o s u s e n s i b i l i d a d a l a q u i m i o t e r a p i a . E s t o d e m u e s t r a el P 5 3 , d e s u fosforilación, y de la e x p r e s i ó n de p 2 1 entre m u e s t r a s y p a p e l d e l a s p r o t e í n a s M D R e n el d e s a m o l l o d e l f e n o t i p o M D R y s u controles luego linfoblastoides de la inducción del daño tratadas, c o n bleomicina al muestran DNA. resultados afectan la indican actividad Fondecyt 1080595. que las variantes proteína-quinasa la de la e x p r e s i ó n de las líneas p o s i b l e u t i l i z a c i ó n c o m o b l a n c o t e r a p é u t i c o p a r a la r e c u p e r a c i ó n d e la un retardo e n la sensibilidad alélicas de q u e la i n h i b i c i ó n Las síntesis d e D N A c o n respecto a las no tratadas, c o m o era esperado. Estos Concluimos estudiadas proteína no ATM. a la quimioterapia en pacientes con CAP horm ono-resistente. Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1070827. XXXI Reunión 77. EFECTO DE CUATRO MEYENII) EN E L CICLO VARIEDADES CELULAR DE MACA (LEPIDIUM D E LÍNEAS C E L U L A R E S DE C Á N C E R P R O S T Á T I C O . ( E f f e c t o n c e l l u l a r c y c l e of f o u r v a r i e t i e s of 1 M a c a ( L e p i d i u m m e y e n i i ) on prostate c á n c e r cell lines) V a l d e s , S . , 2 Sánchez. C.\ 3 Del Valle, L. , 3 Cabezas, J . , A c e v e d o , C. , Huidobro, 1 1 Tastellon, E. , Contreras, H. . Laboratorio de A n d r o l o g i a Celular y Molecular, ICBM, Facultad r-sidad Politécnica de Medicina, Universidad de 2 de Catalunya. B a r c e l o n a . E s p a ñ a , 1 Chile , Servicio Hospital Clínico U n i v e r s i d a d de Chile . : s u c c i ó n . M a c a ( L e p i d i u m m e y e n i i ) e s u n a p l a n t a q u e c r e c e en los a n d e s p e r u a n o s a la q u e s e h a a t r i b u i d o la c a p a c i d a d d e d i s m i n u i r el -^arrollo del cáncer prostático. Objetivo. Estudiar - : a d e s d e M a c a s o b r e el c i c l o c e l u l a r y ares aP de cáncer prostático. y PC3 con 500 el efecto de la a p o p t o s i s d e l í n e a s de extractos ARGINASA: DE POSIBLE LA solubles de PARTICIPACION EN LA DETERMINACION INTOLERANCIA INTERMITENTE CRONICA A LA (Effect HIPOXIA of A D M A HIPOBARICA and Homocystein on A r g i n a s e activity: P o s s i b l e R o l e in d e t e r m i n i n g i n t o l e r a n c e to C h r o n i c 1 1 1 H y p o b a r i c I n t e r m i t t e n t H y p o x i a ) N a v e a s , N. , P u l i d o , R. , S i q u e s , P . , 1 1 1 B r i t o , J . , C a r v a l l o , C . , L ó p e z , V . . I n s t i t u t o d e E s t u d i o s d e la S a l u d 1 ( U N A P ) . Patrocinante: Vasthi López. E.U.. La Hipoxia produce vasoconstricción piulmonar p a r a m e j o r a r el m t r e r c a m b i o d e 0 2 , p u d i e n d o p r o d u c i r s e h i p e r t e n s i ó n pulmonar. En animales genéticamente adaptados (Llama), las r e s p u e s t a s v a s o n s t r i c t o r a s n o se o b s e r v a n , sugiriendo participación de hipertensión mecanismos moleculares, aún no conocidos. En de p u l m o n a r se c o n o c e q u e existe u n a m e n o r concentración plasmática cuatro del oxido nitricof N O ) , y a u m e n t o d e metilarginina asimétrica ( A D M A ) M é t o d o s . Se incubaron cultivos Áug/ml 78. E F E C T O D E A D M A Y H O M O C I S T E I N A S O B R E L A A C T I V I D A D INTRODUCCION: 3 úeUrología, Anual - j a d e s de M a c a ( b l a n c a , m o r a d a , n e g r a y roja) durante 4 8 hrs, y y de h o m o c i s t e í n a , - • a l u ó s u e f e c t o e n el c i c l o c e l u l a r m e d i a n t e c i t o m e t r i a d e f l u j o y efecto " r la e x p r e s i ó n d e p r o t e í n a s r e l a c i o n a d a s c o n a p o p t o s i s m e d i a n t e participación ; : e m blot. R e s u l t a d o s . Se o b s e r v o en P C 3 q u e t a n t o M a c a M E T O D O L O G I A : Se e x p u s i e r o n por un m e s ratas W i s t a r en c á m a r a roja ~ : m o r a d a i n d u c e n a u n a r r e s t o e n G 1 . E n L N C a P se p r o d u c e un e:o e n G 2 p o r M a c a b l a n c a , e n c a m b i o , M a c a r o j a i n d u c e a u n - - arresto tanto en G 1 c o m o G 2 . E n c é l u l a s L N C a P ~3ca tratadas con r o j a s e o b s e r v a u n a d i s m i n u c i ó n d e la e x p r e s i ó n d e b c l - 2 , a s í de A D M A en i n h i b i d o r e s d e la e N O S . E s t e e s t u d i o , a n a l i z ó el y homocisteína el desarrollo hipobarica (428 (Siques al, 2006). La et calonmétrico torr), de homocisteína. la a r g i n a s a , hipertensión clasificándose en en pulmones se posible por e y de fueron altura. intolerantes, midió, por presencia llama y su inducida tolerantes actividad arginasa Archival, Los sobre de ausencia método de ADM y por el donados, de INCA-Putre, Universidad d e Chile. R E S U L T A D O S : La A D M A , resultó : : a s a 9 en M a c a B l a n c a c o m o M o r a d a . L a s 4 v a r i e d a d e s de M a c a s e r p o b r e i n h i b i d o r d e la a c t i v i d a d a r g i n a s a I y I I , e n p u l m ó n d e r a t a s - r ' o n a p o p t o s i s e n a m b a s líneas c e l u l a r e s . S i n e m b a r g o , el efecto control, tolerantes y L l a m a . Sin e m b a r g o , A D M A presentó u n fuerte •:r s e o b s e r v a e n M a c a r o j a y n e g r a . C o n c l u s i ó n . E x i s t e u n e f e c t o e f e c t o a c t i v a d o r s o b r e la a r g i n a s a I I , d e r a t a s i n t o l e r a n t e s . P o r o t r o un aumento 2:optotico rr - de p-53. T a m b i é n , se y antiproliferativo prostático h u m a n o , lo de M a c a que observa un aumento sobre sugiere líneas celulares su uso como de potencial l a d o , la h o m o c i s t e í n a a c t i v a a a m b a s i s o f o r m a s de a r g i n a s a en r a t a s t o l e r a n t e s e i n t o l e r a n t e s . P o r el c o n t r a r i o , inhibió a ambas isoformas, p a r a el c a s o d e L l a m a . C O N C L U S I O N : E l e f e c t o a c t i v a d o r d e A D M A y :erapéutico para esta patología. homocisteína sobre la a r g i n a s a II, de ratas intolerante a HHIC, s u g i e r e u n a n u e v a v í a d e r e g u l a c i ó n p a r a el d e s a m o l l o d e h i p e r t e n s i ó n p u l m o n a r de altura. '5 DETERMINACION ACTIVIDAD DEL DE OXIDO LOS NIVELES NÍTRICO DE SINTASA EXPRESION Y ENDOTELIAL EN 80. AISLAMIENTO DE NEUROFILAMENTOS CEFALORRAQUIDEO DE PACIENTES DESDE CON LIQUIDO PARAPARESIA 3ATAS E X P U E S T A A LA HIPOXIA HIPOBARICA INTERMITENTE ASOCIADA CRONICA: POSIBLE PARTICIPACION E N LA DETERMINACION A (Neurofilament L- H T L V - l - a s s o c i a t e d p a r a p a r e s i s for p r o t e o m i c analysis) M e d i n a , ^ T O L E R A N C I A A L A E X P O S I C I O N A L A A L T U R A (Endothelial ü t n c O x i d e S y n t h a s e e x p r e s s i o n a n d a c t i v i t y l e v é i s i n r a t s e x p o s e d to :~ic Intermitten Hypobaric Hypoxia: A Possible Role in 1 1 é e t e m i i n i n g of I n t o l e r a n c e t o H i g h A l t i t u d e ) P u l i d o , R . , N a v e a s , N . , _rs, 1 1 1 P . , B r i t o , J . , L ó p e z , V . . I n s t i t u t o d e E s t u d i o s d e la S a l u d Alberti AL HTLV-1 isolation PARA from 1 ANALISIS cerebrospinal 1 PROTEOMICO fluid of patients 1 , C. , Barriga, A. , Kettlun, A . M . , Collados, L.\ 1 Puente, J. , 1 Valenzuela, M.A. . Departamento de Biología Molecular, Facultad de Ciencias Químicas y Universidad 1 de Chile. , Departamento de with F.\ 2 Cartier, L , Bioquímica y Farmacéuticas, Ciencias Neurológicas, 1 f U Ñ A P ) . P a t r o c i n a n t e : U r i b e , E.. " = JDUCCIONla :'::_:e Hipoxia Hipobánca vasoconstricción, « m b a r g o , se o b s e r v a n aonca. esta 2 Facultad de M e d i c i n a , Universidad d e Chile. . Intermitente Crónica p a r a m e j o r a r el i n t e r c a m b i o casos de hipertensión (HHIC) de 0 2 p u l m o n a r en Sin hipoxia El ó x i d o n í t r i c o ( N O ) s e r í a f a c t o r c l a v e e n e l d e s a r r o l l o enfermedad. . :":-oración La de regulación inhibidores de de la la enzima síntesis de NO, eNOS, tales por de La Paraparesia Espástica Tropical producida p o r la i n f e c c i ó n con H T L V - I e s u n a n e u r o m i e l o p a t í a d e g e n e r a t i v a q u e a f e c t a al S N C . S e caracteriza por componentes la estos, corno (Nf-L), los degeneración intracelulares neurofilamentos, mediana y axonal y al l í q u i d o consecuente cefalorraquídeo compuestos pesada, definen de liberación (LCR). subunidades forma y de Entre pequeña tamaño axonal, " : * " : : ¡ s t e í n a , es c o n s i d e r a d o u n f a c t o r c l a v e e n la r e g u l a c i ó n d e la participando largos. En «aso c o n s t r i c c i ó n , e n f e r m e d a d e s d e g e n e r a t i v a s se a n a l i z a n estas p r o t e í n a s c o m o una en modelos de hipertensión arterial sistemica pxJmonar. El objetivo de e s t e e s t u d i o fue d e t e r m i n a r los niveles £ < p r e s i ó n y a c t i v i d a d d e la e N O S e n r a t a s i n t o l e r a n t e s , a la y de HHIC. además en el transporte en axones e s t r a t e g i a d i a g n ó s t i c a y p a r a el d i s e ñ o d e t r a t a m i e n t o s terapéuticos. La fosforilación de Nf-L e n r e s i d u o s d e S del e x t r e m o a m i n o - t e r m i n a l V E T O DO LOGIA: Se expusieron por u n m e s ratas W i s t a r e n cámara regula su ensamblaje c o n otras subunidades, por ende, alteraciones ~íx>bárica (428 torr) y se clasificaron en tolerantes e n e s t a r e g u l a c i ó n d a n c u e n t a d e la d i s f u n c i ó n a x o n a l . P a r a e s t u d i a r e intolerantes J a q u e s et a l . , 2 0 0 6 ) . L a e x p r e s i ó n d e e N O S s e d e t e r m i n ó 1 Í - P C R y W e s t e r n Blot desde p a r é n q u i m a de mediante p u l m ó n . La actividad s u fosforilación d e c i d i m o s i n m u n o - a i s l a r l o del L C R de p a c i e n t e s p a r a posteriormente - : Pática , f u e d e t e r m i n a d a p o r m é t o d o r a d i o a c t i v o . L o s n i v e l e s d e masas - nocisteína fueron determinados por Elisa. R E S U L T A D O S A n á l i s i s análisis de RT-PCR y Westem-Blot, no mostraron diferencias significativas e r t r e r a t a s t o l e r a n t e s , i n t o l e r a n t e s a l a H H I C y el c o n t r o l ( p < 0 . 0 1 i n t o l :ontrol) La actividad especifica de e N O S m e n o r e n las ratas Homocisteína |p intolerantes plasmática <0.05) C O N C L U S I O N E S : rtDlerancia fue (p fue < 0 . 0 5 ) y la resultados mediante espectrometría de Nf-L, por sus masas moleculares similares y concentración de incrementada sugieren que la a l a H H I C , y p r o b a b l e m e n t e el d e s a m o l l o d e h i p e r t e n s i ó n albúmina método más mediante según SDS/PAGE convincente "western blot" y "western p a r a el análisis y MS blot". Sin proteómico, resultó ser 10% embargo, el demostrado inmunoprecipitar Nf-L E n c o n t r a r un a u m e n t o de fosforilación en Nfs permitiría asociarlo u m o n a r de altura, podría s e r e x p l i c a d o p o r una m e n o r p r o d u c c i ó n de activación *. I tratamiento d e b i d o a u n a i n h i b i c i ó n d e la e n z i m a p o r h o m o c i s t e í n a . por e v a l u ó la e l i m i n a c i ó n d e a l b ú m i n a d e l L C R m e d i a n t e c r o m a t o g r a f í a d e afinidad y las f r a c c i o n e s eluídas p r e s e n t a r o n un r e m a n e n t e de de de f o s f o r i l a c i o n e s e n r e s i d u o s d e S , lo q u e t a m b i é n s e r e f l e j ó p o r M S . S e significativamente significativamente Nuestros analizar fosforilaciones ( M S ) . L o s e n s a y o s m u e s t r a n i n t e r f e r e n c i a d e a l b ú m i n a e n el hi p e r f o s f o de quinasas terapéutico rilantes, más permitiendo que selectivo así la búsqueda reduzca que estas el de algún actividades actual corticoides.Financiamiento: Fondecyt 105-0784 y 108-0396. uso de Sociedad 81. CARACTERIZACIÓN Y E V A L U A C I Ó N DE de Bioquímica y Biología NEUROBLASTOMA 82. INFECCIÓN HUMANO SH-SY5Y COMO M O D E L O D E ESTUDIO DE CAMBIOS POR EN DE LA FOSFORILACIÓN PARAPARESIA DE ASOCIADA TAU AL OBSERVADOS VIRUS HTLV-I EN LA (Characterization a n d e v a l u a t i o n of S H - S Y 5 Y h u m a n n e u r o b l a s t o m a a s a s t u d y m o d e l of changes in Tau paraparesis-associated phosphorylation with 1 HTLV-I virus) 2 observed in Maldonado, H. , 1 1 P a n d o , M.E. , E u g e n i o , R. . K e t t l u m , A . M . , C o l l a d o s , I. , Cartier, Molecular DE CÉLULAS HANTAVIRUS ANDES: CITOQUINAS infection of cytokines Y human and DENDRÍTICAS EFECTO M E TAL O PROTE ASAS. dendritics matrix (DCs): effect metalloproteases.) 1 HUMANAS SOBRE 2 LA (ANDES on Marsac, the Hantavirus production 1 D. , 2 (DCS) PRODUCCIÓN Garda, of S.\ 3 4 P i n o , K. , G o n z á l e z , M . , E b e n s p e n g e r , R. , C a m ó n , F . , K a l e r g i s , A . , 1 5 1 López-Lastra 2 Medicina, P U C , L a b . F a r m a c o l o g í a , Facultad de Química, P U C , Lab. L. , , M . , V e a s , F. . Lab. Virología Molecular, Facultad de 1 2 Inmunología, Facultad Inmunogenética, Fac. Ciencias Biológicas, P U C , IRD/UM1, University 1 de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, 1 Universidad de Espástica Tropical (TSP/HAM) Medicina, U de los Andes , Lab. 4 Montpellierl . 2 Paraparesia de 5 C h i l e . , Facultad de M e d i c i n a , Universidad d e Chile. . La Facultad 3 Valenzuela, M.A. . Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, afecta crónica y Ante una infección viral el hospedero exhibe una variedad de p r o g r e s i v a m e n t e al S N C c a u s a n d o d e g e n e r a c i ó n a x o n a l . T a u e s u n a d e f e n s a s . S i n e m b a r g o , h a y c a s o s e n l o s c u a l e s la e x a c e r b a c i ó n d e l proteína s i s t e m a d e d e f e n s a s a n t i v i r a l e s r e s p o n s a b l e d i r e c t a d e la p a t o l o g í a que participa en la polimerización microtúbulos, nuestro grupo demostró residuo T181 en T S P / H A M . P r o p o n e m o s H T V L - I , c o m o la p r o t e í n a T a x , y estabilización de h i p e r f o s f o r i l a c i ó n d e e l l a e n el que productos virales de p r o v o c a n c a m b i o s e n la f o s f o r i l a c i ó n d e T a u q u e p o d r í a a s o c i a r s e a la d e g e n e r a c i ó n a x o n a l . C é l u l a s S Y - 5 Y diferenciadas fueron tratadas con MT2 ( p o s e e n el provirus inserto SH m e d i o de cultivo de células y secretan Tax), como utilizó medio d e cultivo de células K 5 6 2 . S e control midió largo se neurítico, asociada a la i n f e c c i ó n . C o n Cardiopulmonar por infección por Hantavirus de una respuesta el fin Hantavirus no de establecer (HCPS) patología si el Síndrome asociada a la A n d e s ( A N D V ) es, en parte, consecuencia controlada del sistema inmune contra el p a t ó g e n o , e s t a m o s e s t u d i a n d o el e f e c t o q u e e j e r c e la i n f e c c i ó n v i r a l sobre las asociadas características morfológicas a la r e s p u e s t a i n m u n e c o m o y funcionales s o n las células de células dendríticas y ( D C s ) y l i n f o c i t o s T . N u e s t r a h i p ó t e s i s d e t r a b a j o p o s t u l a q u e las D C s participación de q u i n a s a s , e s t o último p o r w e s t e r n blot. L a s células p a r t i c i p a n e n la p a t o g e n i a d e l H C P S a t r a v é s d e u n i n c r e m e n t o d e la e x p u e s t a s a los p r o d u c t o s virales p r e s e n t a n r e t r a c c i ó n neurítica. p r o d u c c i ó n de citoquinas y de m e t a l o p r o t e a s a s ( M M P s ) c o n d u c i e n d o estabilidad de microtúbulos, fosforilación de Tau en T181 El contenido de tubulina tirosilada, m a r c a d o r de microtúbulos inestables, a n o presenta diferencias entre los g r u p o s c o n m e d i o de M T 2 y control demuestran K 5 6 2 . S e e n c o n t r ó h i p e r f o s f o r i l a c i ó n d e T 1 8 1 r e s p e c t o al c o n t r o l . El a u m e n t o de m a r c a d o r e s estudio de quinasas c o n la d i s m i n u c i ó n d e la f a g o c i t o s i s p o r l a s D C s i n f e c t a d a s . M á s a ú n , asociadas a fosforilación de T 1 8 1 , n o mostró un aumento de que la p e r m e a b i l i d a d ANDV es capaz vascular. Nuestros de infectar DCs, resultados induciendo de m a d u r a c i ó n efecto que se un correlaciona c a m b i o s e n la f o r m a a c t i v a d e l a G S K 3 ? . S i n e m b a r g o , la i n h i b i c i ó n d e s e o b s e r v ó q u e p o s t e r i o r a l c o n t a c t o c o n el v i r u s l a s D C i i n c r e m e n t a n la C D K - 5 i m p i d i ó la h i p e r f o s f o r i l a c i ó n d e t a u y b l o q u e ó la r e t r a c c i ó n la p r o d u c c i ó n d e M M P - 9 y d e T N F - a . E n l i n f o c i t o s T , s e o b s e r v ó q u e involucrada la i n f e c c i ó n p o r A N D V i n d u c e u n a a c t i v a c i ó n p o l i c l o n a l d e l o s C D 4 + y c o n el c o n o d e c r e c i m i e n t o n e u r í t i c o . L a r e t r a c c i ó n y h i p e r f o s f o r i l a c i ó n C D 8 + . E n r e s u m e n n u e s t r o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n q u e la i n f e c c i ó n p o r d e T a u T 1 8 1 s e o b s e r v a n e n e l m o d e l o d e e s t u d i o p r o p u e s t o , al i g u a l A N D V e s c a p a z d e m o d i f i c a r la f u n c i ó n d e l a s c é l u l a s a s o c i a d a s que en pacientes c o n T S P / H A M . C D K - 5 podría estar involucrada sistema n e u r í t i c a . E s t o m i s m o o c u r r i ó al i n h i b i r la R o c k , q u i n a s a en FONDECYT 3085029. este proceso. Fondecyt 105-0784. 108 0396. 83. CARACTERIZACION LOXOCELES POR LAETA BIOQUIMICA (ARAÑA DE ELECTROESTIMULACION Loxosceles López, C. Sección DEL VENENO L O S RINCONES) (Biochemical DE OBTENIDO caracterization , de Riveros, B. 1 , 2 3 Salud Ambiental, Parasitología 3 1 e Instituto Inmunobiologicos , de Salud Publica Molecular, 1 , 2 A. Departamento . de 2 de Universidad 2 M. - , , Sagua, H , Araya, J. , Vásquez, biotecnología of 1 laeta poison obtain by electrostimulation) A c u ñ a , 1 , 2 Chile , Unidad de 3 de Antofagasta . Patrocinante: Lopez-Lastra. M.. L o x o s c e l e s laeta o A r a ñ a de los R i n c o n e s p r o v o c a s e v e r o s c a s o s de envenenamiento. especies Con presentes desamollado un vivos. en para la (veneno Se d e c a r a c t e r i z a r el v e n e n o Chile, modelo electroestimulación arácnidos el o b j e t i v o en nuestro laboratorio, obtención de electroestimulado) caracterizaron proteínas desde se veneno de ha por ejemplares constituyentes del v e n e n o electroestimulado, su actividad de producir dermonecrosis y letalidad en m o d e l o a n i m a l . L o s r e s u l t a d o s m u e s t r a n que el v e n e n o e l e c t r o e s t i m u l a d o s e c o m p o n e p r i n c i p a l m e n t e de proteínas de entre 3 0 a 35 kDa. C o n este v e n e n o se realizaron e n s a y o s d e dermonecrótica, observando q u e el v e n e n o actividad obtenido desde arañas h e m b r a s produjo una lesión necrótica a las p o c a s h o r a s , mientras que el v e n e n o d e arañas m a c h o s no p r o d u j o lesión n e c r ó t i c a . A d e m á s , se determinó su letalidad, calculando la Dosis Letal 50 (DL50) en 1 , 1 2 m g / K , m a y o r a la q u e p r e s e n t a el v e n e n o o b t e n i d o d e g l á n d u l a macerada, que western blot reconocieron e s el m é t o d o realizado los con de un componentes extracción más suero policlonal proteicos este actividad veneno, se enzimática. metodología de ha determinado Estos obtención de que resultados veneno usado. Mediante anti-veneno, presentes electroestimulado. Al realizar estudios de actividad con en el se veneno esfingomielinasa presenta entregan biológicamente una una fuerte nueva activo, que p u e d e s e r u s a d o e n la f o r m u l a c i ó n d e a n t í d o t o s c o n t r a e l v e n e n o d e Loxosceles laeta. F O N D E F D 0 4 I 1 2 4 7 . inmune. Proyecto financiado por NMII, al JEAI-IRD, XXX/ Reunión Anuat BIOTECNOLOGIA =4 O P T I M I Z A C I Ó N DE LA PRODUCCIÓN DE LA PROTEÍNA R= C O M B I N A N T E N D E V I R U S R E S P I R A T O R I O SINCICIAL E N ESCHERICHIA COLI UTILIZANDO L A C T O S A C O M O INDUCTOR. Z c t i m i z a t i o n of p r o d u c t i o n of r e c o m b i n a n t p r o t e i n N r e s p i r a t o r y v^zytial virus in E s c h e r i c h i a coli using lactose as inducer) E s c ñ e i r a , I. , R i v e r o s , B , P a p i c , L , V á s q u e z , A . . S e c c i ó n d e 5 r e c n o l o g i a e Inmunobiologicos, Departamento de Salud Ambiental, "s:tuto de S a l u d P u b l i c a , U n i v e r s i d a d T e c n o l o g í a de C h i l e . ¿ r o c i n a n t e : L o o e z - L a s t r a . M.. _a p r o d u c c i ó n de proteínas r e c o m b i n a n t e s r e p r e s e n t a u n d e s a f í o e n r : e s a r r o l l o del p r o c e s o f e r m e n t a t i v o . C o m o E c o l i n a t u r a l m e n t e n o secreta grandes c a n t i d a d e s d e p r o t e í n a , las c o n d i c i o n e s de cultivo sefcen s e r e s t u d i a d a s p a r a o p t i m i z a r la p r o d u c c i ó n . L a c o n c e n t r a c i ó n - n j u c t o r , la f u e n t e d e c a r b o n o y la t e m p e r a t u r a d e i n d u c c i ó n , a f e c t a n d i r e c t a m e n t e la p r o d u c c i ó n d e p r o t e í n a s r e c o m b i n a n t e s . El WTG i n d u c e a l p r o m o t o r l a c y e s a m p l i a m e n t e u t i l i z a d o e n la r v e s t i g a c i ó n p r i m a r i a . S i n e m b a r g o , s u t o x i c i d a d y a l t o c o s t o lo h a c e n re-inveniente en producciones a escala, siendo reemplazado por ~ : : : i d L a g l u c o s a es utilizada c o m o f u e n t e d e c a r b o n o , sin e m b a r g o * a c e t a t o e s u n s u b p r o d u c t o d e s u m e t a b o l i s m o q u e a f e c t a la : " : : j c t i v i d a d d e la f e r m e n t a c i ó n i n h i b i e n d o el c r e c i m i e n t o b a c t e r i a n o : : síntesis de proteína r e c o m b i n a n t e . La lenta t a s a de t r a n s p o r t e del ? i : e r o l d e n t r o d e la c é l u l a , r e d u c e el flujo d e c a r b o n o e n la g l i c ó l i s i s , :i l u y e n d o la f o r m a c i ó n d e a c e t a t o . T e m p e r a t u r a s d e i n d u c c i ó n b a j o l>y C r e d u c e la s í n t e s i s d e p r o t e í n a s e x t r a ñ a s , a u m e n t a la s o l u b i l i d a d • e s t a b i l i d a d d e la p r o t e í n a d e i n t e r é s y s e r e d u c e la d e g r a d a c i ó n p r o t e o lítica. E n e s t e t r a b a j o s e o p t i m i z ó la p r o d u c c i ó n d e pro t e í n a " r c o m b i n a n t e N del v i r u s r e s p i r a t o r i o s i n c i c i a l , c o n u n d i s e ñ o d e s..xerficie de r e s p u e s t a B o x - B e h n k e n con tres factores; t e m p e r a t u r a De r d u c c i ó n , c o n c e n t r a c i ó n d e g l i c e r o l c o m o f u e n t e d e c a r b o n o y icrcentración de lactosa como inductor. Se realizaron 1 1 2 1 1 2 = e x p e r i m e n t o s , o b t e n i e n d o c o m o c o n d i c i o n e s ó p t i m a s , 17°C , una : r : e n t r a d ó n d e g l i c e r o l d e 2 g/l y u n a i n d u c c i ó n c o n 4 g/l d e 8 5 . E X P R E S I O N D E UN G E N D E QUITINASA E N E. COLI Y S U E F E C T O S O B R E E L H O N G O F I T O P A T O G E N O Botrytis cinérea y Alternaría aiternata ( E x p r e s s i o n o f a g e n e of c h i t i n a s e s on E.coli a n d its e f f e c t o n p l a n t p a t h o g e n i c f u n g í Botrytis cinérea and Alternaria aiternata) N i e d m a n n , L . \ C o r d e r o , C . , V e r d u g o , I. , S a n d o v a l , C . , Prieto, H. , Ruiz. S , M e z a - B a s s o , L. Instituto de Biología V e g e t a l y B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d de T a l c a , F a c u l t a d de Ciencias A g r a r i a s , U n i v e r s i d a d de T a l c a , INIA, La P l a t i n a , Instituto de Biología V e g e t a l y Biotecnología, Universidad de T a l c a 1 3 4 1 2 4 1 2 3 4 L a q u i t i n a ( N - a c e t i l - D - g l u c o s a - 2 - a m i n a ) e s el s e g u n d o p o l i s a c á r i d o m á s a b u n d a n t e e n la n a t u r a l e z a d e s p u é s d e la c e l u l o s a . S e e n c u e n t r a en organismos tales c o m o : h o n g o s , insectos, nematodos, crustáceos y m o l u s c o s , p r i n c i p a l m e n t e . L a p a r t i c i p a c i ó n d e la q u i t i n a e n la c o n s t i t u c i ó n d e la p a r e d c e l u l a r v a r i a d e a c u e r d o al o r g a n i s m o . L a s q u i t i n a s a s s o n c a p a c e s d e h i d r o l i z a r l o s e n l a c e s f¿-(1, 4 ) q u e u n e n a las u n i d a d e s d e N - a c e t i l g l u c o s a m i n a p r e s e n t e s e n la q u i t i n a . E s t a s enzimas p e r t e n e c e n a las p r o t e í n a s a n t i f u n g a l e s l l a m a d a s P R , e s p e c í f i c a m e n t e a las d e n o m i n a d a s P R - 3 . U n gen que codifica para u n a quitinasa, aislado d e s d e T r i c h o d e r m a , fue clonado en un v e c t o r p a r a s u e x p r e s i ó n e n E. coi. L a p r o t e í n a r e c o m b i n a n t e f u e e v a l u a d a in v i t r o a t r a v é s d e s u a c c i ó n c o n t r a el h o n g o f i t p o p a t o g é n i c o Botrytis cinérea y Afternaria aiternata. Los resultados indicarían una s i g n i f i c a t i v a r e d u c c i ó n d e la v e l o c i d a d d e c r e c i m i e n t o d e a m b o s h o n g o s . E n e s t e m o m e n t o s e e s t á e n la e v a l u a c i ó n d e p l a n t a s d e tabaco transgénicas sobre estos m i s m o s patógenos. INDICE GENERAL PAG B u r g o s A r i a s , F. B u r z i o . V. Programa Conferencias Simposios Incorporaciones C. Libres orales C. Libres orales C. Libres paneles LockerN.J.L L ó p e z - L a s t r a , M. 9,24 7, 9, 1 0 , 2 4 , 3 2 , D e la F u e n t e , M . 15, 3 9 , 6 2 D e l V a l l e . L. 63 49 B u r z i o , L. 14, 15, 3 9 , 4 0 , 5 9 Delgado, M.G. B u r z i o , V. 1 4 , 15, 3 9 , 4 0 , 5 9 D e v o s , D. 18, 2 7 45 D e v o t o , L. 12, 3 8 , 6 2 B u s t o s , P. Autores 47 14, 3 9 C a b e z a s , J. 62, 63 D o m e n e c h , R. C a b r e r a , R. 45,47 D o m í n g u e z , M. C a l d e r ó n . I. 50 D o n o s o , P. Caligari.P. 54 D o r m o y - R a c l e t , V. Dotto, M.C. Callegan.E. 10,35 Campos, T. 60 D r e y e r , I. Camus.M. 12.38,62 D u f e y , E. C a n e s s a , P. 12, 38, 57 Díaz, W . 61 6, 3 1 8,34,61 7, 3 2 53 10, 3 5 , 4 7 59 6,31,51 35, 52 57,58 Caniuguir, A. 1 1 , 36 Díaz-Elizondo, J. A c e v e d o , C. 62,63 C a r d e m i l , E. 44, 48 E b e n s p e n g e r , R. A c e v e d o , M.L. 1 1 . 36 C a r r a s c o , P. 56 A c u ñ a , H. 16,42 C a r r e ñ o , L.J. 15,40 Martínez, M. Acuña,L. 50 C a m i ó n , F. Acuña, M. 64 C a r t i e r , L. A c u ñ a , V. 51 Carvajal, N. A g o s i n , E. 59 C a r v a l l o , C. A l b e r t i , C. 63 C a r v a l l o , P. 64 15, 4 0 , 6 3 , 6 4 E i s n e r , V. Elias, A. E m h a r t , V. E m h a r t , V. 8, 3 3 64 8, 3 4 50,51 53 52 45 E s c u d e r o , C. 15, 4 0 63 Espinoza, A. 54, 56 12, 15, 3 8 , 3 9 , 6 1 . E s p i ñ e i r a , I. 65 62 Alberti.C. Allende, J E A l m a d a , R.D. A l v a r e z , C. Alvares, J . M . 15,40 Casaretto, J A . 54 Estrada, M. 8,34,46 Castellanos, J. 18, 2 7 E u g e n i o , R. C a s t e l l ó n , E. 62, 63 Evzaguirre, J. 53 15,39 C a s t i l l o , D. 61 F a u n d e z , P. 13,25 64 10, 1 2 , 3 5 , 3 8 , 44 12, 3 8 , 6 2 57 A l v a r e z , K. 15,39.61,62 Alvarez, M. 12, 1 5 . 3 8 , 3 9 , C a s t r o . F. Castro, M. 12,38 6, 3 1 , 5 0 , 5 1 Faúndez.P. Fernandez, J.M. 62 21 62 Alzate, J. Amoroso, A. A n d r a d e , C. A n d r é s , M.E. A q u e a , F. Femie, A. 16,42 10,35 C a s t r o , V. 45 58 C a ñ ó n , P. 16,41 F e r n á n d e z , C. 8, 3 4 , 6 1 44 C a ñ ó n , P. 53 F e r n á n d e z , E. 12,21 18,27 F e r n á n d e z , K. 11,37,56 1 1 , 16, 3 7 , 4 1 , 53 C h a i t , B. C h a v a t t e , L. 9, 2 4 F e m a d a , E. 50 18, 2 7 Araujo, W . 16,42 C h i l i a n , R. 56 Araya, J. 52,64 C h i p o t , C. 10, 3 5 , 4 8 59 C h u r c h , J. 15, 3 9 , 6 1 , 6 2 Flores, M. 6,31 49,50 F r a n k e , J. 18, 2 7 Araya, M. A r c e - J o h n s o n , P. 1 1 , 1 6 , 1 7 , 1 9 , 29, Chávez.F.P. Femer, A. 50 Figueroa, C.R. 53 37,41,42,53 Armijo, G. A r r e d o n d o , C. A s p e e , A. 17, 1 8 , 2 1 , 4 2 Cifuentes, A. 57 F u e n t e a l b a , P. 1 1 , 37, 56 C i f u e n t e s , M. 45 F u e n t e s , D. 16,42 11,36 F u e n t e s , L. 1 6 , 4 1 , 55 6,31 Cifuentes- 45 H u e r t a , J.j. Babul.J. 10,36,45 Civello, P.M. 53 F u e n z a l i d a , N. Baez.M. 10,36,45 Clément.P. 56 G a b u s - D a r l i x , C. 7,32 C o l l a d o s , L. 15, 4 0 , 6 3 , 6 4 Banderas, A. Barham.F. 57 Barriga, A. 51,63 Barría, M I . 9,24,62 Collao.B. Contreras.H. Contreras-Ferrat, 6,31 Gaete E., C . G a e t e - E a s t m a n , C. 62,63 G a i n z a , F. 7, 3 3 G a l l o u z i , I. 1 1 , 37 9, 2 1 55 47 16, 4 1 , 5 4 7, 3 2 A. Bastías, A. Bello, H. 54 C o r d e r o , C. 65 Galván.A. 12,21 6,31 C o r d e r o , E. 61 Gantz.C. 52,53 50 García, S. 64 Bisquertt, A. 16,41 Corvalán, A. 12, 38, 6 2 G a r c í a , D. 45 Black, G . 10,35 Corvalán, A. 15, 39 21 C o r v a l á n , C. 55 G a r c í a , P. C r u z , N. 52 Geneviere, A.M. 58 G i l . F. G ó m e z , I. 49 54 Bertin Benavides, A. B l a n c o , F. B l a n c o , F. Boccardo, E. 12, 38 11, 18,97,55 Corsini, G. 45 6, 3 1 15,40 Brito, J. 63 C r u z a t , F. B u c a r e y , J.L. 60 Cuervo, A.M. Budini.M. G a r c í a , M.d.l.A. 8,34,46 Cárdenas 11,37 8,33 47 González, A. 9, 2 4 48 I n o s t r o z a , P. Bueno, S.M. 15,40 Darlix , J. B u l l , P. 57 D a u e l s b e r g , P. Bunster, M. 46 D e Ferrari V a l e n t í n i, G . 9, 2 1 G o n z á l e z , D. 19, 2 9 González, M. 64 47 González, W. 49 G o n z a l e z - N i l o , F. González. M. G o n z á l e z . P.A. González Villanueva, E. González, A. G o n z á l e z , E. 48. 49 8. 3 4 , 5 5 15, 4 0 53 . 44 16, 4 1 , 5 4 , 5 6 J a i m o v i c h , E. Jan a, C. 7, 3 3 , 6 0 M a r t i n e z - O y a n e d e l , J. 11. 36,46 59 ^Martínez, M. 57, 58 Jedlicki, A. 8, 3 4 , 4 6 M a r t í n e z , P. 18,27 Jerez, C.A. 49. 50 M a r t í n e z - O y a n e d e l , J. 47 49, 50 M a s c a y a n o , C. 48 Matte, J.P. 53 J e r e z , C. J o r d a n a , X. 16, 19, 2 9 , 4 2 , 5 4 , 55, 56 G o n z á l e z , F. 47 González, G. 6, 3 1 Jorquera, G. 60 M a t u r a n a , D. 60 Juretic, N. 60 M a t u r a n a , M.J. 61 González, J. 52 Kalergis, A G o n z á l e z , L. 61 Katz.A. González, M. 8, 3 4 , 5 5 González, W. 10, 3 5 , 4 7 González, X.P. 51 Kettlun, A . M . K l a g a e s , C. Klip.A. González-Ballester, C 12, 21 K o h e n , P. G o n z á l e z - N i l o , D. 48, 49 Lagos, C.F. G o n z á l e z - N i l o , F. 10, 3 5 Lamprecht, M. G r e e n b e r g , E.P. 14, 2 6 L a n d e r e r , E. Guiliani, N. G u i x é , V. Gutiérrez, J.l. 7, 1 3 , 2 6 , 3 2 , 5 1 11, 3 6 , 4 6 . 47 6, 3 1 Laporte.D. L a r a , P. L a r r o n d o , L. 58 L a t o r r e , R. Gutiérrez, B. 52 L a v a n d e r a , S. G u t i é r r e z , F. 53 Lavandero, S. Gutiérrez, S. 15, 4 0 , 6 4 6,31 Matus, J.T. M a u r i a c a , C. M e d i n a . C. 17,42 12,38 M e d i n a , F. 63 7,33 12,38,62 10,35 53 14, 3 9 18, 2 1 , 5 5 60 12,38 Mejías.C. 62 M e l l a , C. 45 M e l ó , F. M e n d o z a , P. 17,27,59 62 M e r a b a c h v i l i , G. 18, 21 M e r i n o , F. 10,36 M e z a , C. M e z a - B a s s o , L. 46 65 49 M i c h e a , L. 8, 3 3 8, 3 3 M o l i n a , R. 6,31,51 7, 8, 3 3 , 3 4 , 6 0 , 6 1 M o l i n e t t . S. Monasterio, O. 56, 57 L e i v a , D. 17,42 Gutiérrez, S. 57,58 Leiva, E.D. 15,40 Montecino, M. Leiva-Ampuero, 19,29 Montenegro-Montero, 61 49 15, 4 0 , 6 3 Gutiérrez, J.L. Guzman, L.M. 19,29 59 9,24 1 1 . 13, 2 5 , 3 7 , 5 7 56 A. A. G ó m e z , I. 16,42 L e ó n , G. 19,29 M o r a l e s , C. 8,34 Harnmes, S. 13,25 L e ó n , L. 17,42 M o r a l e s , S. 10, 3 5 , 4 7 M o r a l e s - Q u i n t a n a , L. 47 M o r i n , V. 58 M o r t a r a , R. 52 H e n r i q u e z , B. 1 1 , 37 L e ó n , O. 11,36 H e n r i q u e z , I. 15, 3 9 L e ó n , U. 9,24 H e n r i q u e z , J. 48 Llamas, A. H e p p , M. 57 Lobos, M. 45 M o r í n , V. 59 Hepp, M. 56 L ó p e z , C. 64 M o y a - L e o n , M.A. 55 55 L ó p e z , X. 48 Moya-León, A. 54 7, 3 2 Moya-León, M. 16, 4 1 , 4 7 , 5 3 , 5 5 Hornera , R. Herrera, A. 1 1 , 18, 2 1 , 3 7 , 5 5 H e r r e r a , R. 16,41,47,52, L o p é z - L a s t r a , M. 12,21 Loreto, H. 42 Munroe.D. 15,39 53, 54 H i d a l g o , C. 60, 61 L ó p e z , C. 14,39 Muñoz, A. 12,38,62 Higuera, J.J. 12, 21 L ó p e z , M. 62 M u ñ o z , C. 52 Hinojosa, M. 57, 58 L ó p e z , V. 63 M u ñ o z , F. 59 Hinrichs, M V . H o l m e s , D. H o l u i g u e , L. 8, 1 2 , 2 5 , 3 3 , 6 0 L ó p e z - K o s t n e r , F. 15, 3 9 , 6 1 , 6 2 7, 18, 2 7 , 3 2 L ó p e z - L a s t r a , M. 64 1 1 , 1 7 . 18, 2 1 , L ó p e z - L a s t r a , M. 37, 55 7 , 9 , 1 0 , 2 4 , 32, Muñoz, J.P. 60 M u ñ o z , R. 45 N a r a n j o , D. 49 35, 52 H u e n c h u ñ i r , P. 10, 3 5 M a c h o , P. 61 N a v a r r e t e , F. 12,38 H u i d o b r o , C. 62, 63 M a l d o n a d o , H. 15, 4 0 , 6 4 N a v a m e t e , M. 10, 3 5 , 4 4 M a n c i l l a , R. 10,35,48 Huidobro-Toro, J.P. H u r t a d o , C. Ibba, M. Imschenetzky, M. Jabalquinto, A. J a c o b , G. 7, 3 2 15,39 6,31 58, 59 57, 58, 59 N a v a r r o , C. Manubens, A. 59 N a v a r r o , M. 50 M á r q u e z , V. 49 Naveas, N. 63 M a r s a c , D. 9, 2 4 , 6 4 44 M a r t í n e z , F. 45 8,34 M a r t í n e z , S. 13,25 N i e d m a n n , L. Niemeyer, M.l. N o r a m b u e n a , T. 65 10, 3 5 18, 2 7 , 5 9 Nunes-Nesi, A. Nuñez, G. Oddó, D. Oíate, F. Oíate, J. Olavarría, K. Olea-Azar, C. Opazo, A. Orellana, A. Orellana, M.S. Orellana, O. Orellana, P. Orellana, S. Osorio, L. Ossandón, F. Oyarzo, M. Pacheco, N. Pando, M.E. Pando, M.E. Panjkovich, A. Papic, L. Parra, S. Parra, V. Pasten, P. Pedrozo, Z. Pereira, L. Pimentel, P. Pino, K. Poblete, H. Polanco, R. Poupin, M.J. Prado, C E . Prieto, H. Puchi, M. Puente, J. Pulido, R. Pérez, C. Pérez, N. Pérez, R. Pérez-Acle, T. Pérez-Arce, T. Quatrini, R. Ramdohr, P. Ramírez, E. Ramos, P. Ramírez, C. Ravanal, M.C. Rebolledo, B. Reyes, F. Rico, S. 16,42 48 61 46 8, 11, 13, 25, 33, 37, 60 45 8, 33 6, 31 16,41 45 6, 31 15, 39, 61 54 52 18,27 15,39 49 15,40 64 18, 27 Riedel, C.A. Rivas, A. Rivas, C. Rivas-Pardo, J.A. Rivera, G. 15,40 7, 14, 32, 39 59 11, 36 18,27 Riveras, B. Riveras, N. Rodríguez, A. Rodríguez, L. Rodríguez, F. Rodríguez, L. Rojas, M.C. Rojo, P. Rosa, L. Roschzttardtz, H. Rout, M. Rozenblum, E. Ruiz, L.M. Ruiz, S. Ruiz-Lara, S. 65 31 34 33 61 56 54 64 48 57 19,29 15,40 65 58, 59 63 63 46 18,27 16,41,54 10, 35 9, 24 Saavedra, C. Saavedra, J.M. Sagua, H. Sakurada, A. Salas, L. Sali, A. Salinas , P. Salinas, P. Salvatierra, A. San Martín, M. Sánchez, A. Sánchez, C. Sandoval, C. Sandoval, M. Santibáñez, P. Sanz-Luque, E. Sargueil, B. Sepulveda, F. Sepulveda, H. Sepulveda, F. SepulvedaUgarte, J. Siques, P. Slater.A.W. Smalley, S. Sobrevia, L. Solis, L. Solís, C. Soza, A. Steinberg, X. Stuardo, M. 64, 65 60 8, 16, 33, 41 12, 38 7, 32 61 51 22 44 54, 56 18,27 15, 39 51 65 16, 41, 42, 53, 54, 56 6, 49 50 52, 64 6, 31 59 18,27 55 17,42 54 6, 31 58 62, 63 65 50 57 12, 21 9, 24 10, 35 11, 37 48 46 6, 8, 8, 8, 34, 11, 37, 7, 32 7, 32 15,40 52, 53 47 44 58 16,41 53 63 18,27 12, 38, 62 8, 34 12, 15, 38, 39 ,62 59 9, 24 56, 57 58 Suazo, C. Sánchez, A. Sánchez, C. Sánchez, G. Tapia, G. Tapia, J. Tapia, K. Tapia, R. Tapia, T. Tejada-Jiménez, M. Tello, M. Timmermann, T. Toro, B. Troncoso, R. Uribe, E. Urrutia B, H. Valdenegro, M. Valdes, S. Valdés, J. Valenzuela, C. Valenzuela, M.A. Valiente, F. Valiente-Echeverría, F. Vallejos, M. Várela, C. Vásquez, A. Vásquez, M. Veas, F. Vega, A. Vera-Otarola, J. Verdugo, I. Vergara, C. Vergara, V. Vergara-Jaque, A. Vicuña, R. Vidaurre, S. Villarreal, J.M. Villegas, J. Villota.C. Vollrath, V. Vásquez, C. Wielandt, A.M. Wilson, C.A.M. Yañez, M. Zhang, M. Zorzano, A. 51 62 53 8, 34, 61 16,42 17,42 7, 32 16,41 12, 38, 62 12, 21 50 19,29 8, 33, 61 8, 33, 61 45, 63 14, 26 16, 41, 55 63 7, 32 53 15, 40, 63, 7, 7, 7, 64 32 32 32 50 64, 65 54 64 11, 17, 37,42 9, 24, 52 65 49 58 49 12, 38, 57, 58, 59 15,40 6, 31 14, 15, 39, 40 15,40 9, 24 6, 31, 50, 51 15, 39 11, 36 54 10,35 8, 34
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