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XXXI REUNION ANUAL
DELA
SOCIEDAD DE BIOQUIMICA
Y BIOLOGIA MOLECULAR
DE CHILE
23-26 de Septiembre de 2008
Termas de Chillan, Chile
Directorio
PRESIDENTE
PRESIDENTE ANTERIOR
VICE PRESIDENTE
SECRETARIO
TESORERA
DIRECTORES
Santiago
Concepción
Valdivia
Talca
Xavier Jordana
Claudio Vásquez
Juan Oíate
Marcelo López-Lastra
Ana Preller
Pilar Carvallo
Gino Corsini
JGloria
osé Martínez-Oyanedel
León
Simón Ruiz
AUSPICIADORES
INSTITUCIONES
Fundación Chilena para Biología Celular
Universidad de Talca
Universidad Diego Portales
Facultad de Ciencias Biológicas y Vicerrectoría Académica,
Universidad de Concepción
Facultad de Ciencias, Universidad de Chile
Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de
Chile
Universidad Nacional Andrés Bello, Vicerrectoría de Investigación
y Postgrado
SDT-USACH y Vicerrectoría de Investigación y Desarrollo,
Universidad de Santiago de Chile
Pan American Association for Biochemistry and Molecular Biology
PABMB
EMPRESAS
FERMELO S.A.
GENESYS
BIOSCAN
BIOS CHILE I.G.S.A.
GENEXPRESS
TCL
XXXI Reunión
Anual
Programa
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
MARTES 23 DE SEPTIEMBRE
11:00-14:00
INSCRIPCIONES
13:00-14:30
ALMUERZO
15:00-17:00
COMUNICACIONES LIBRES I
Sala A
MICROBIOLOGÍA Y VIROLOGÍA
Presidente: Claudio Vásquez
Secretario: Nicolás Guiliani
15:00 CLONALIDAD DE CEPAS DE ACINETOBACTER BAUMANNII PRODUCTORAS DE
CARBAPENEMASAS
AISLADAS
EN HOSPITALES
CHILENOS
(Clonality of
carbapenemase-producer strains of Acinetobacter baumannii isolated from Chilean
hospitals) Opazo, A. , Flores, M. , Bello, H. , Domínguez, M. , García, P. , San Martín,
M. , Sakurada, A , González, G. . Depto Microbiología, Fac. Cs. Biológicas, Universidad
de Concepción , Fac. Medicina, P. Universidad Católica de Chile , Lab. Centralizado,
Hospital Barros Luco , Unid. Microbiología, Hosp. Clínico Universidad de Chile .
Patrocinante: Martínez, J.
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15:15 LOS COMPONENTES DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA
DE
Aeromonas
caviae MEDIAN RESISTENCIA A TELURITO DE POTASIO EN
Escherichia
coli (The components of the pyruvate dehydrogenase complex of
Aeromonas caviae medíate resistance to potassium tellurite in Escherichia coli.) Molina,
R. , Castro, M. , Díaz, W. , Vásquez, C. . Laboratorio de Microbiología Molecular.
Facultad de Química y Biología. USACH .
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15:30 ESTUDIO DE TRANSPORTE IN VITRO EN PROTEOLIPOSOMAS DE LAS PORINAS
OMPD, OMPW Y OMPL DE SALMONELLA ENTERICA SV. TYPHIMURIUM (In vitro
transport studies using protegí i poso mes containing OmpD, OmpW or OmpL porins from
Salmonella entérica sv Typhimurium) Gutiérrez, J.l. , Villarreal, J.M. , Collao, B.
Parra, S. , Aspee, A. , Saavedra, C. . Laboratorio de Microbiología Molecular, Dpto
Ciencias Biológicas, \ Universidad Andrés Bello , Laboratorio de cinética y fotoquímica
molecular, Dpto. de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile , Laboratorio de
Microbiología Molecular, Dpto. Ciencias Biológicas, Universidad Andrés Bello .
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15:45 REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA GLUTAMIL-TRNA SINTETASA DE A.
ferrooxidans POR EL ESTADO REDOX. (Regulation of GluRSI of A. ferrooxidans by the
redox status) Katz, A. , Ibba, M. , Orellana, O. . Programa de Biología Celular y
Molecular. ICBM. Facultad de Medicina, Universidad de Chile , Department of
Microbiology, Ohio State University, USA. .
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XXXI Reunión
Anual
16:00 UTILIZACIÓN DE HERRAMIENTAS BIOINFORMÁTICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN
DE FUNCIONES GÉNICAS QUE PODRÍAN SER REGULADAS POR EL SISTEMA
QUORUM SENSING afel/afeR DE Acidithiobacillus ferrooxidans (Using bioinformatic
tools to identify genes that might be regulated by the afel/afeR quorum sensing system
from Acidithiobacillus
ferrooxidans)
Banderas, A. , Guiliani, N. . Lab. Microbiología
Molecular y Biotecnología. Facultad de Ciencias. Universidad de Chile, Ins. Dinámica
Celular y Biotecnología (ICDB) . Patrocinante: Preller, A..
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16:15 COMPRENDIENDO LA VIDA QUIMIOLITOAUTOTROFICA A PH 1 A TRAVES DE LA
GENOMICA COMPARATIVA (Insights into chemolithoautotrophic life at pH 1 using
comparative genomics) Quatrini, R. , Holmes, D. , Valdés, J.2. Centro de Bioinformática y
Biología Genómica, Fundación Ciencia para la Vida. Programa de doctorado en
Biotecnología, Universidad Andrés Bello. \ Centro de Bioinformática y Biología Genómica,
Fundación Ciencia para la Vida. Programa de doctorado en Biotecnología, Universidad
Andrés Bello. . Patrocinante: JedlickL E..
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16:30 LA PROTEINA
HUR, ES UN MODULADOR DEL INICIO DE LA TRADUCCION
MEDIADA POR IRES EN HIV-1 Y HCV (The Elav-like protein, HuR, is a modulator of HIV
and HCV IRES-mediated translation initiation.) Rivas,. A. , Ramdohr, P. , Vallejos, M. ,
Dormoy-Raclet, V. , Rodríguez, F. , Valiente, F. , Huidobro-Toro, J.P. , .Gallouzi, I. ,
López-Lastra, M. . Laboratorio de Virología Molecular, Facultad de Medicina, Pontificia
Universidad Católica de Chile , Department of Biochemistry, Faculty of Medicine, McGill
University, Montreal, Quebec, Canadá. , Departamento de Fisiología, Facultad de
Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile .
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16:45 IDENTIFICACIÓN DE UN SITIO INTERNO DE ENTRADA DEL RIBOSOMA EN LA
REGIÓN 5'UTR DEL mRNA COMPLETO DEL VIRUS DEL TUMOR MAMARIO MURINO
(Identification of an IRES element in the mRNA of murine mammary tumor virus) Vallejos,
M. , Ramdohr, P. , Tapia, K. , Valiente-Echeverría, F. , Lopéz-Lastra, M. . Laboratorio de
Virología Molecular, Centro de Investigaciones Médicas, Facultad de Medicina, Pontificia
Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile .
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15:00-17:00
COMUNICACIONES LIBRES II
Sala 1
SEÑALIZACIÓN CELULAR Y REGULACIÓN METABÓLICA
Presidente: Sergio Lavandero
Secretaria: María Victoria Hinrichs
15:00 CA2+ MEDIA LA INCORPORACIÓN DE GLUCOSA ESTIMULADA POR INSULINA EN
CARDIOMIOCITOS Y L6GLUT4MYC (Ca2+ mediates insulin-stimulated glucose uptake in
cardiac myocytes and L6GLUT4myc) Contreras-Ferrat, A. , Jaimovich, E. , Klip, A. ,
Lavandero, S. . FONDAP CEMC, Universidad de Chile , The Hospital for Sick Children,
Toronto, ON, Canadá .
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Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
15:15 RIC-8B ES TRANSLOCADO DESDE EL CITOSOL A LA MEMBRANA PLASMATICA
EN RESPUESTA A ISOPROTERENOL Y CARBACOL (RIC-8B is translocated from the
cytosol to the plasma membrane in response to isoproterenol and carbachol) Pasten, P.\
Oíate, J. , Hinrichs, M.V. . Laboratorio de Genética Molecular. Facultad de Ciencias
Biológicas, Universidad de Concepción. Anillo de Investigación de Estudios Avanzados en
Señalización Celular y Regulación Génica.
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15:30 NUEVAS ACCIONES DE ALDOSTERONA EN CÉLULAS MONONUCLEARES (New
actions of aldosterone in mononuclear cells) Díaz-Elizondo, J.1,
Olea-Azar, C. ,
Lavandero , S. , Michea, L. . Centro FONDAP CEMC. Facultades de Ciencias Químicas
y Farmacéuticas y Medicina, Universidad de Chile , Facultades de Ciencias Químicas y
Farmacéuticas , Universidad de Chile , Centro FONDAP CEMC. Facultades de ,
Medicina, Universidad de Chile .
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15:45 PRIVACIÓN DE GLUCOSA ACTIVA DIVERSAS FORMAS DE AUTOFAGIA EN EL
CARDIOMIOCITO (Different types of autophagy are activated in glucose-deprivated
cardiomyocytes) Toro, B . \ Rodríguez, A. , Troncoso, R. , Cuervo, A.M. , Lavandero, S. .
Centro FONDAP CEMC, Facultad Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de
Chile \ Albert Einstein College of Medicine, NY, USA .
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16:00 NAD(P)H OXIDASA ESTA INVOLUCRADA EN EL AUMENTO DE LA EXPRESION Y
ACTIVIDAD DE HCAT-1 POR D-GLUCOSA EN ENDOTELIO FETAL HUMANO (NAPH
oxidase is involved in the increased expresión and activity of hCAT-1 by D-glucose in
human fetal endotelium) González, M . \ Sobrevia, L. . Laboratorio de Fisiología Celular y
Molecular (CMPL), Departamento de Obstetricia y Ginecología, Facultad de Medicina,
Escuela
de
Medicina,
Pontificia
Universidad
Católica
de
Chile .
Patrocinante: Lopez-Lastra, M.
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16:15 REGULACIÓN DEL METABOLISMO ENERGÉTICO CARDIACO POR INSULINA Y SU
RELACIÓN CON FUSIÓN Y FISIÓN MITOCONDRIAL (Regulation of cardiac energetic
metabolism by insulin and its relationship with mitochodrial fussion and fisión) Parra, V. ,
Morales, C. , Eisner, V. , Zorzano, A. , Lavandero, S. . Centro FONDAP CEMC,
Universidad de Chile, Chile. \ Instituto de Investigación Biomédica, Barcelona, España.
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16:30 INHIBICIÓN DE LA A C T M D A D ENZIMÁTICA DE CK1<* POR AUTOFOSFORILACIÓN
EN SU EXTREMO C-TERMINAL. (The Inhibition of Enzymatic Activity of CK1« by Cterminal Autophosphorylation) Budini, M . \ Jacob , G. , Jedlicki, A. , Allende, J.E. . ICBM,
Programa de Biología Celular y Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. .
Patrocinante: Jacob, G..
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16:45 DEGRADACIÓN DEL RECEPTOR DE RYANODINA TIPO 2 EN CULTIVOS DE
CARDIOMIOCITOS (Degradation of RyR2 in cultured cardiomyocytes) Pedrozo, Z. ,
Sánchez, G. , Fernández, C. , Donoso, P . , Lavandero, S .
Programa de Biología
Celular y Molecular, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile , Centro FONDAP
CEMC, Universidad de Chile , Programa de Fitopatología, ICBM, Facultad de Medicina,
Universidad de Chile , Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de
Chile .
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XXXI Reunión
17:15 19:00
Anual
SIMPOSIO I
Sala A
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE RNAs EN EUCARIONTES
Coordinador: Marcelo López-Lastra
17:15 MAMMALIAN SELENOPROTEIN SYNTHESIS: TRANSLATIONAL RECODING OF UGA
AS SELENOCYSTEINE (Mammalian selenoprotein synthesis: translational recoding of
UGA as selenocysteine) Chavatte, L. . Centre de Génétique Moléculaire (CGM-UPR2167)
Gif sur Yvette-France.
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17:50 HCV IRES RELIES ON PRIMARY SEQUENCE AND STRUCTURE FOR DRIVING
TRANSLATION INITIATION. (HCV IRES relies on primary sequence a n o structure for
driving translation initiation.) Barría, M.l. , González, A. , Vera-Otarola, J. , León, U. ,
Vollrath, V. , Marsac, D.\ Pérez-Arce, T. , Monasterio, O. , Soza, A. , López-Lastra, M. .
Laboratorio de Virología Molecular, Centro de Investigaciones Médicas,
Pontificia
Universidad Católica de Chile. , Centro de Bioinformática, Facultad de Ciencias
Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Departamento de Biología, Facultad
de Ciencias, Universidad de Chile. , Departamento de Gastroenterología, Facultad de
Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. .
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18:25 MOLECULAR MECHANISM OF HIV-2 GENOMIC RNA TRANSLATION INITIATION
(Molecular Mechanism of HIV-2 Genomic RNA Translation Initiation) Locker N, J.L. ,
Sargueil, B. . CNRS, UMR 8015, Faculté de pharmacie, 4 avenue de l'observatoire 75270
Paris cedex 06 .
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19:00-19:30
CAFÉ
19:30-20:45
CONFERENCIA INAUGURAL
Sala A
RNA CHAPERONES, THE AIDS VIRUS AND THE PEOPLE (RNA chaperones, the AIDS virus
and the people) Darlix , J.\ Gabus-Darlix, cA LaboRetro, Unité de Virologie Humaine INSERM,
IFR 128, ENS LYON, 46 Allée d'ltalie, 69364 Lyon, France .
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Presenta: Xavier Jordana
20:45
CÓCTEL DE BIENVENIDA
21:30
CENA
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
MIÉRCOLES 24 DE SEPTIEMBRE
9:00-11:00
COMUNICACIONES LIBRES III
Sala A
ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE PROTEÍNAS
Presidente: Victoria Guixé
Secretaria: Elena Uribe
09:00 EL SECRETOMA DE Penicillium purpurogenum: ANALISIS POR ELECTROFORESIS
BIDIMENSIONAL ACOPLADO A ESPECTROMETRIA DE MASAS (The secretóme from
Penicillium purpurogenum: analysis by two-dimensional electrophoresis coupled to mass
spectrometry) Navarrete, M. , Callegari, E. , Zhang, M. , Black, G. , Eyzaguirre, J .
Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad Andrés Bello, Santiago. , Universidad
de Dakota del Sur, Vermillion, SD, U.S.A. , Universidad de Northumbria, Newcastle,
Inglaterra. .
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09:15 MAPEO COMPARATIVO DE GRUPOS FUNCIONALES EN PROTEÍNAS DE FUSIÓN
VIRAL CLASE II (Comparative functional group mapping of Class II viral fusión proteins)
Lagos, O F . , Huenchuñir, P. , López-Lastra, M. , Pérez-Acle, T . . Centro de
Bioinformática, Facultad de Ciencias Biológicas, PUC , Laboratorio de Química Médica,
Facultad de Química, PUC , Laboratorio de Virología Molecular, Facultad de Medicina,
PUC , Fundación Ciencia para la Vida .
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09:30 ROL DE RESIDUOS BASICOS EN EL SENSADO DE PH EN LOS CANALES TASK2 Y
TASK3 (Role of basic residues in pH sensing of Task2 and Task3 channels) Sepulveda,
F. , González-Nilo, F. , Navarro, C. , Chipot, C. , Niemeyer, M.l. . CECS, Valdivia \
CBSM, Universidad de Talca , CNRS/UHP, Francia , CECS, Valdivia .
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09:45 DIFERENCIAS DE LA UNIDAD SENSORA DEL PH EXTRACELULAR ENTRE LOS
CANALES DE ENTRADA DE POTASIO PRESENTES EN LOS ESTOMAS. (Differences
in extracellular pH sensor units between the stomatal inward potassium channels)
González, W. , Morales, S . \ Alzate, J . , González-Nilo, F.D. , Dreyer, I. . Centro de
Bioinformática y Simulación Molecular, Universidad de Talca , Universitat Potsdam, Instituí
fur Biochemie und Biologie, Heisenberg-Gruppe
Biophysik und Molekulare
Pflanzenbiologie, Germany.
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10:00 ESTUDIOS in silico E in vitro DEL DESPLEGAMIENTO TÉRMICO DE LA
FOSFOFRUCTOQUINASA-2 DE Escherichia coli: IMPORTANCIA DE LA INTERFAZ
MONÓMERO-MONÓMERO. (in silico and in vitro studies of the thermal unfolding of
phosphofructokinase-2 from Escherichia
coli: importance of the monomer-monomer
interface.) Merino, F. , Baez, M. , Babul, J . . Laboratorio de Bioquímica y Biología
Molecular, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile .
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XXXI Reunión
10:15 UNIÓN DE
ESTUDIOS
from E. coli.
Guixé, V. .
Facultad de
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Anual
METALES DIVALENTES EN FOSFOFRUCTOQUINASA-2 DE E. coli
CINÉTICOS Y DE EPR. (Binding of divalent metáis in phosphofructokinase-2
Kinetic and EPR studies) Rivas-Pardo, J.A. , Wilson, C.A.M. , Caniuguir, A. ,
Laboratorio de bioquímica y biología molecular, departamento de Biología,
Ciencias, Universidad de Chile .
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10:30 ANÁLISIS DE LA FUNCIÓN DEL ASA FLEXIBLE DE LA INTEGRASA DE M-MuLV
POR MUTAGENESIS. (Analysis of the function of the flexible loop of M-MuLV integrase by
mutagenesis.) Acevedo, M.L. , León, O. . Laboratorio de Retrovirus, Programa de
Virología, Facultad de Medicina, Universidad de Chile .
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10:45 EFECTO DEL PH EN EL ESTADO DE OLIGOMERIZACIÓN DE INSULINA. (pH effects
in oligomerization state of Insulin) Cifuentes-Huerta, J.J. , Martinez-Oyanedel, J . .
Universidad de Concepción .
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9:00-11:00
COMUNICACIONES LIBRES IV
Sala 1
EXPRESIÓN GÉNICA
Presidente: Loreto Holuigue
Secretario: José Leonardo Gutiérrez
09:00 ANALISIS GENOMICO DE LA FAMILIA SDG Y SU EXPRESION EN EL DESARROLLO
DEL FRUTO EN Vitis vinifera (Genomic analysis of SDG family and its expression during
grape development in Vitis vinifera) Aquea, F.\ Vega, A. , Arce-Johnson, P. .
Departamento de Genética Molecular y Microbiología. Pontificia Universidad Católica de
Chile .
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09:15 ANÁLISIS FUNCIONAL DEL PROMOTOR DEL GEN GRXC9 DE ARABIDOPSIS
(Functional Promoter Analysis of GRXC9
Gene In Arabidopsis) Herrera, A. , Blanco, F. ,
Holuigue, L. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología. Facultad Ciencias
Biológicas. Pontificia Universidad Católica de Chile. .
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09:30 REGULACIÓN
DE
LA ACTIVIDAD
TRANSCRIPCIONAL
DE NURR1
POR
SUMOILACIÓN Y LA PROTEÍNA DJ-1 (Regulation of the transcriptional activity of Nurrl
by sumoylation and the protein DJ-1) Arredondo, C . \ Pereira, L. , Fuenzalida, N. ,
Andrés, M.E. . Departamento de Biología Celular y Molecular, Facultad de Ciencias
Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile .
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09:45 REGULACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN DE GENES DE DIFERENCIACIÓN
MIOBLÁSTICA
Y
OSTEOBLÁSTICA
POR
ACETILACIÓN
DE
HISTONAS
((Transcriptional regulation of myoblastic and osteoblastic differentiation genes by histone
acetylation).) Cruzat, F.\ Henriquez, B. , Sepulveda, H. , Oíate, J . , Montecino, M. . Anillo
de Investigación de Estudios Avanzados en Señalización Celular y Regulación Génica,
Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile. .
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Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
10:00 HIPERMETILACION DEL PROMOTOR DE BRCA1 SE CORRELACIONA CON LA
AUSENCIA DE SU EXPRESIÓN EN TUMORES DE CANCER DE MAMA
HEREDITARIO. (Promoter hypermethylation of
BRCA1 correlates with absence of
expression in hereditary breast cáncer tumors) Tapia, f . \ Smalley, S. , Kohen, P. ,
Muñoz, A. , Solis, L. , Corvalan, A. , Faundez, P. , Devoto, L. , Camus, M. , Alvarez, M. ,
Can/alio, P. . Departamento Biología Celular y Molecular, Ciencias Biológicas, Pontificia
Universidad Católica de Chile. , Instituto Investigaciones Materno Infantil, Universidad de
Chile. , Facultad Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. , Centro de Cáncer,
Pontificia Universidad Católica de Chile. .
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10:15 EFECTO
DEL
HIERRO
EN
LA
EXPRESION
DE
LAS
FERROXIDASAS
PERTENECIENTES A LA FAMILIA DE LAS OXIDASAS MULTICOBRE (MCO) DEL
HONGO LIGNINOLITICO PHANEROCHAETE
CHRYSOSPORIUM.
(Effect of iron on the
expression of ferroxidases belonging to multicopper oxidase family (MCO) from the
ligninolytic fungus Phanerochaete
chrysosporium) Canessa, P. , Larrondo, L. , Vicuña,
R. . Depto Genética Molecular y Microbiología, Fac. Ciencias Biológicas, P. Univ. Católica
de Chile. .
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10:30 ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN GÉNICA EN EMBRIONES BOVINOS CLONADOS
TRANSFERIDOS A RECEPTORAS TEMPORALES (Gene expression in cloned embryos
transferred to temporary recipients) Bertin Benavides, A. , Rodríguez, L. , Navarrete, F. ,
Castro, F. . Universidad de Concepción . Patrocinante: PuchiThiele, M.
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10:45 EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE GENES DEL HONGO Penicillium
purpurogenum
CRECIDO EN GLUCOSA Y UNA FUENTE DE CARBONO NATURAL, COSETA DE
REMOLACHA (Differential expression of genes of the fungus Penicillium purpurogenum
grown in glucose and a natural carbón source, sugar beet pulp) Klagges, C. , Eyzaguirre,
J. . Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad Andrés Bello, Santiago. .
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CAFE
11:00-11:30
11:30-12:45
CONFERENCIA SEVERO OCHOA
Sala A
BUSQUEDA DE CLAVES ESENCIALES PARA LA ASIMILACIÓN DE NITRATO EN PLANTAS
CON UN ALGA VERDE (Searching for essential keys in nitrate assimilation of plants with a
green alga) Fernández, E.\ Galván, A. , Llamas, A. , Tejada-Jiménez, M. , Higuera, J.J. ,
González-Ballester, D. , de Montaigu, A. , Sanz-Luque, E. . Departamento de Bioquímica y
Biología Molecular, Facultad de Ciencias, Universidad de Córdoba. Campus de Rabanales, Edif.
Severo Ochoa, 14071-Córdoba, Spain .
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Presenta: Juan Oíate
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XXXI Reunión
13:00- 14:30
ALMUERZO
14:30-16:30
PANELES SESIÓN I
16:30-18:15
Anual
SIMPOSIO II
Sala A
TRANSDUCCIÓN DE SEÑALES: ACCIONES NO GENÓMICAS DE ESTEROIDES
Coordinador: Juan Oíate
16:30 COMO LOS RECEPTORES ACOPLADOS A PROTEÍNAS G Y RECEPTORES
ESTEROIDALES REGULAN LA MEIOSIS (How G Protein-Cóupled and Steroid
Receptors Regúlate Meiosis) Hammes, S. . Department of Infernal Medicine, División of
Endocrinology and Metabolism, University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas,
TX, USA. .
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%
17:05 EL RECEPTOR CLÁSICO DE PROGESTERONA XPR SE ASOCIA A LA MEMBRANA
PLASMÁTICA A TRAVÉS DE SU DOMINIO DE UNIÓN A LIGANDO E INTERACCIONA
CON G0y (The Classic Xenopus laevis Progesterone Receptor Associates to the Plasma
Membrane through its Ligand Binding Domain and Interacts with G£y) Oíate, J . , Martínez,
S. , Montecino, M. , Hinrichs, M.V. . Departmento de Bioquímica y Biología Molecular,
Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile. .
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17:40 VÍAS
DE
SEÑALIZACIÓN
INTRACELULARES
PARA
RECEPTORES
DE
ANDRÓGENO: UN MODELO INTEGRADO PARA LA HIPERTROFIA CARDÍACA
(Androgens and androgen receptor intracellular signaling pathways: An integrated model
for cardiac hypertrophy) Estrada, M. . ICBM, FONDAP, Programa de Fisiología y
Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Chile. .
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18:15-18:45
18:45-20:30
CAFÉ
SIMPOSIO III
Sala A
QUORUM SENSING Y BIOFILMS
Coordinador: Nicolás Guiliani
18:45 BIOPELÍCULAS Y QUORUM SENSING EN MICROORGANISMOS BIOMINEROS:
REALIDAD Y DESAFÍOS (Biofilms and Quorum Sensing in Biomining Microorganisms:
Realities and Challenges) Guiliani, N. . Unidad de Comunicación Bacteriana, Laboratorio
de Microbiología y Biotecnología Molecular, Departamento de Biología, Instituto de
Dinámica Celular y Biotecnología, Universidad de Chile. .
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1
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
19 20 CONTROL DE BIOPELÍCULAS MICROBIANAS POR METABOLITOS SECUNDARIOS
DE LA FLORA NATIVA CHILENA (Control de biopelículas microbianas por metabolitos
secundarios de la flora nativa chilena) Urrutia B, H. . Laboratorio e Biopelículas y
Microbiología Ambiental, Departamento de Microbiología/Centro de Biotecnología,
Universidad de Concepción, Casilla 160-c, fono: 041 2204249, email: [email protected] .
1
19:55 SOCIOMICROBIOLOGY: A NEW TWIST ON QUORUM SENSING SIGNALS THAT
COORDINATE
GENE
EXPRESSION
IN
BACTERIAL
POPULATIONS
(Sociomicrobiology: A new twist on quorum sensing signáis that coordínate gene
expression in bacterial populations) Greenberg, E.P. . Department of Microbiology,
University of Washington, Seattle, USA .
1
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21:00
CENA
JUEVES 25 DE SEPTIEMBRE
COMUNICACIONES LIBRES V
Sala A
9:00-11:00
BIOMEDICINA
Presidente: María Antonieta Valenzuela
Secretaria: Leda Guzmán
09:00 EXPLORANDO UN MÉTODO ALTERNATIVO DE DIAGNOSTICO DE CÁNCER
VESICAL BASADO EN LA DETECCIÓN DIFERENCIAL DE RNAS MITOCONDRIALES
NO CODIFICANTES (Exploring an alternative method of bladder cáncer diagnosis based
in the differential expression of non coding mitocondrial RNAs) Rivas, A. , Landerer,
E. ' ' , López , O , Burzio , V. - - , Burzio, L .
, Villegas, j . - - - . Fundación Ciencia
Para la Vida , Instituto Milenio (MIFAB) , Universidad Andrés Bello , Grupo BIOS .
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4
09:15 LA EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE UNA NOVEDOSA FAMILIA DE RNAs
MITOCONDRIALES NO CODIFICANTES PARA EL DIAGNÓSTICO DE CÁNCER
PROSTÁTICO (The differential expression of a novel family of non coding mitochondrial
RNAs for the diagnosis of prostate cáncer) Landerer, E. , Rivas, A. , Burzio, V . ,
Burzio, L. ' ' , Villegas, J .
. Fundación Ciencia para la Vida , Instituto Milenio MIFAB ,
Facultad de Ciencias de la Salud, UNAB , Grupo BIOS .
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2
4
09:30 ANALISIS GENETICO Y GENOMICO EN TUMORES DESMOIDES DE PACIENTES
CON POLIPOSIS ADENOMATOSA FAMILIAR: COMPARACION CON EL CANCER
COLORRECTAL (Genetic and genomic analysis in desmoid tumors from patients with
familial
adenomatous
polyposis:
a
comparison
with
colorectal
cáncer)
XXXI Reunión
1,2
1
Anual
2
1,2
12
3
Alvarez, K. , Orellana, P. - , De la Fuente, M. , Wielandt, A . M . , Oyarzo, M. ,
Church, J. , López-Kostner, F. , Carvallo, P. . Unidad de Coloproctología, Clínica Las
Condes , Departamento de Biología Celular y Molecular, Pontificia Universidad Católica
de Chile , Departamento Anatomía Patológica, Clínica Alemana , Cleveland Clinic
Foundation, Cleveland-Ohio, USA. .
4
1
2
1
2
3
4
09:45 ALTERACIONES GENÓMICAS EN TUMORES DE CÁNCER DE MAMA: ANÁLISIS
POR MICROARREGLOS DE DNA (Genomic profile of breast cáncer tumors: an
array-CGH analysis) Hurtado, C . \ Alvarez, C. , Solis, L. , Henriquez, I. , Corvalán, A. ,
Alvarez, M. , Rozenblum, E , Munroe, D , Carvallo, P. . Depto. Biología Celular y
Molecular, Fac. Cs. Biológicas, P. Universidad Católica de Chile , Facultad de Medicina,
P. Universidad Católica de Chile , Centro de Cáncer, Fac. Medicina, P. Universidad
Católica de Chile , Lab. Mol. Technology, SAIC-Frederick, NCI-Frederick, USA .
1
3
4
2
4
2
2
1
1
2
3
4
10:00 CONCERTACIÓN ENTRE MUERTE CELULAR TIPO I Y II EN CÉLULAS TUMORALES
AL INTERFERIR CON EL RNA MITOCONDRIAL NO-CODIFICANTE ANTISENTIDO
(RNAmtnc) (Cross-talk between cell death type I and II of tumor cells by interference of
antisense non-coding mitochondrial RNA (ncmtRNA)) Vidaurre, S . \ Burzio, V. , Villegas,
J. , Burzio, L. . Fundación Ciencia Para La Vida, MIFAB, GRUPOBIOS, UNAB .
1
1
1
1
10:15 DETECCION PRECOZ DEL CANCER DE CUELLO DE UTERO ASOCIADO A LA
INFECCIÓN DE HPV (early detection of cervix cáncer associated to the HPV infection)
Villota, C . \ Villa, I. , Boccardo, E. , Gaete, F. , Burzio, L. . Fundación Ciencia para la
Vida , Ludwig Institute for Cáncer Research , Hospital Luis Tizne .
2
2
3
1
1
2
3
10:30 LINFOCITOS INFECTADOS CON VIRUS HTLV-1 PRODUCEN CAMBIOS EN EL
CITO ESQUELETO NEURÍTICO DE CÉLULAS PC12 (HTLV-I infected lymphocytes
produce changes in the neuritic cytoskeleton of PC12 cells) Pando , M.E. , Kettlun, A.M. ,
Maldonado, H. , Ramírez, E. , Cartier, L. , Alberti, C. , Escudero, C. , Collados, L. ,
Valenzuela, M.A. . Depto Bioquímica y Biología Molecular, Facultad Ciencias Químicas y
Farmacéuticas. Universidad de Chile. , Programa de Virología, Facultad Medicina,
Universidad de Chile. ISP , Depto Ciencias Neurológcias, Facultad Medicina , Depto
Fisiología, Fac Ciencias Biológicas, PUC .
1
2
3
1
1
1
4
1
1
1
2
3
4
10:45 EL VIRUS RESPIRATORIO SINCICIAL INHIBE LA ACTIVACION DE LINFOCITOS T
MEDIANTE INTERFERENCIA DE LA SINAPSIS INMUNOLOGICA CON CELULAS
DENDRITICAS (Respiratory Syncytial Virus Impairs T Cell Activation By Preventing
Synapse Assembly With Dendritic Cells) González , P.A. , Prado, C E . , Leiva, E.D. ,
Carreño, L.J. , Bueno, S.M. , Riedel, C.A. , Kalergis, A . M . . Departamento de Genética
Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica
de Chile. , Departamento de Ciencias. Biológicas, Universidad Andrés Bello ,
Departamento de Reumatología, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de
Chile .
1
1
1
3
1
2
1
1 3
2
Sociedad
9:00-11:00
de Bioquímica y Biología Molecular -
COMUNICACIONES LIBRES VI
Sala 1
BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR DE PLANTAS
Presidente: Patricio Arce
Secretario: José Casaretto
09:00 ANÁLISIS ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE TRANSPORTADORES DE BORO EN
FRUTALES (Structural and functional analysis of boron transporter in fruit crops) Cañón,
P. , Aquea, F. , Rodríguez, A. , Bisquertt, A. , Arce-Johnson, P. . Departamento de
Genética Molecular y Microbiología. Pontificia Universidad Católica de Chile .
1
1
1
1
1
1
09.15 CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DEL GEN VvZIP INVOLUCRADO
EN TRANSPORTE DE ZINC EN BAYAS DE Vitis vinifera CV. CARMENERE. (Structural
and functional characterization of the gen VvZIP involved in zinc transport in grapes of
Vitis vinifera cv. Carmenere) Gainza, F.l. , Pérez, R. , González, E. , Ruiz-Lara, S. .
Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca .
1
1
1
1
1
09:30 UNA MUTANTE EN LA UGGT DE ARABIDOPSIS THALIANA, UNA ENZIMA CLAVE EN
CONTROL
DE
CALIDAD
EN
RETÍCULO
ENDOPLASMATICO,
MUESTRA
ALTERACIONES MORFOLÓGICAS. (An Arabidopsis thaliana mutant in the UGGT, a key
enzyme in quality control at the endoplasmic reticulum, shows morphological alterations.)
Tapia, R.\ Reyes, F. , Orellana, A. . Universidad Nacional Andrés Bello .
1
1
1
09:45 EFECTO DEL ETILENO EN LA FORMACIÓN DE AROMAS Y ALCOHOL ACIL
TRANSFERASA EN PERAS PACKHAM^S TRIUMPH (Effect of ethylene on aroma
formation and alcohol acyl transferase in Packham s Triumph pears) Fuentes, L. ,
Valdenegro, M. , Herrera, R. , Moya-León, M. . Laboratorio de Fisiología Vegetal, Instituto
de Biología Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca. \
1
1
1
1
10.00 DEFICIENCIA EN LA FUNCIÓN DEL COMPLEJO II MITOCONDRIAL PRODUCE UN
AUMENTO DE LA ACTIVIDAD FOTOSINTETICA EN Arabidopsis thaliana (Impairment
in mitochondrial complex II produces an increase of photosynthetic activity in Arabidopsis
thaliana) Fuentes, D. , Nunes-Nesi, A. , Araujo, W. , Gómez, I. , Fernie, A. , Jordana,
X. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias
Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile , Max Planck Instituí fur Molekulare
Pflanzenphysiologie, Alemania .
1,2
2
2
1
2
1
1
2
10:15 EL GEN LOCHI CODIFICA PARA UNA ENDOQUITINASA DE CLASE III QUE ES
EXPRESADO ESPECÍFICAMENTE EN RAÍCES Y NODULOS DE LOTUS SP. E
INDUCIDO POR EFECTO DEL DÉFICIT HÍDRICO. (LoChi gen coding for Class III
endochitinase that is speeifically expressed in roots and nodules of Lotus sp. and is
induced by effect of water déficit.) Tapia, G . \ Acuña, H. . Instituto de Investigaciones
Agropecuarias, INIA-Quilamapu . Patrocinante: Ruiz-Lara, S..
1
1
1
XXXI Reunión
Anual
10:30 ANALISIS FUNCIONAL DE UNA PROTEINA TIPO LECTINA (LLP) INDUCIDA POR
ACIDO SALICILICO
EN LA RESPUESTA DE DEFENSA A ESTRES EN
ARABIDOPSIS (Functional analysis of a SA-inducible lectin like protein (LLP) in the stress
defense response in Arabidopsis) Armijo, G. , Salinas, P. , Leiva, D. , Tapia, J. , León,
L. , Holuigue, L. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de
Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile .
1
1
1
1
1
1
1
10:45 ANALISIS DE EXPRESIÓN GÉNICA GLOBAL EN RESPUESTA A LA INFECCIÓN
VIRAL DURANTE EL PROCESO DE MADURACIÓN EN Vitis vinifera (Analysis of gene
expression in response to viral infection through ripening in grape berries) Vega, A. ,
Medina, C. , Arce-Johnson, P. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología.
Facultad de Ciencias Biológicas. Pontificia Universidad Católica de Chile. .
1
1
1
1
11:00-11:30
11:30-12:45
CAFÉ
CONFERENCIA PABMB
Sala A
FORCE-CLAMP SPECTROSCOPY OF SINGLE PROTEINS (Force-clamp spectroscopy of
single proteins) Fernández, J.M. . Columbia University, New York .
1
Presenta: José Martínez-Oyanedel
13:00- 14:30
ALMUERZO
14:30-16:30
PANELES SESIÓN II
16:30-18:15
SIMPOSIO IV
Sala A
INFERENCIA DE CONOCIMIENTO Y MINERÍA DE DATOS MEDIANTE BIOINFORMÁTICA:
EJEMPLOS DE DESARROLLOS Y APLICACIONES
Coordinador: Francisco Meló
16:30 POTENCIALES
ESTADISTICOS:
UNA
PODEROSA
HERRAMIENTA
BIOINFORMATICA QUE PERMITE OBTENER BENEFICIOS DE LO ABUNDANTE, AL
ELIMINAR LO REDUNDANTE Y EXTRAER LO RELEVANTE (Statistical Potentials:
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
A Powerful Bioinformatic Tool That Generates Useful Information From The Abundant, By
Eliminating
The
Redundant
And
Extracting
The
Relevant)
Meló,
F. ,
Slater, A.W. , Norambuena, T. , Martínez, P. , Pérez, N. , Castellanos, J . , Panjkovich,
A. , Ferrada, E. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de
Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. .
1
1
1
1
1
1
1
1
17:05 MARCOS
DE
LECTURA
ABIERTOS
ALTERNATIVOS:
UNA
PESADILLA
BIOINFORMATICA PERO UNA POTENCIAL MINA DE ORO PARA LA EVOLUCION DE
GENES (Altérnate Open Reading Frames: A Bioinformatics Nightmare But A Potential
Goldmine For Gene Evolution) Holmes, D.S. , Rivera, G. , Ossandón, F. . Center for
Bioinformatics and Genome Biology (CBGB), Fundación Ciencia para la Vida
(www.cienciavida.cl) and Depto. de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias de la Salud,
Universidad de Andrés Bello. .
1
1
1
1
17:40 IDENTIFICACION Y LOCALIZACION DE LOS COMPONENTES CLAVES DEL
SISTEMA
DE
ENDOMEMBRANAS
DE
EUCARIOTAS
EN
BACTERIAS
COMPARTIMENTALIZADAS (Identification And Localization Of Key Components Of The
Eukaryotic Endomembrane System In Compartmentalized Bacteria) Devos, D.\ Franke,
J. , Chait, B. , Sali, A. , Rout, M. . EMBL, Meyerhofstrasse 1, D-69117 Heidelberg,
Germany. , Laboratory of Cellular and Structural Biology, The Rockefeller University, 1230
York Avenue, New York, NY 10021-6399, USA. , Departments of Biopharmaceutical
Sciences and Pharmaceutical Chemistry, and California Institute for Quantitative
Biomedical Research, UCSF, San Francisco, CA 94143-2552, USA. .
2
2
3
2
1
2
3
CAFE
18:15-18:45
18:45-20:00
CONFERENCIA OSVALDO CORI
Sala A
EL ACIDO SALICILICO EN LA RESPUESTA DE DEFENSA A ESTRES EN ARABIDOPSIS
(Salicylic acid in the stress defense response in Arabidopsis) Blanco, F. , Laporte, D. , Armijo,
G. , Herrera, A. , Merabachvili, G. , Holuigue, L. . Departamento de Genética Molecular y
Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile .
1
1
1
1
1
1
1
Presenta: Luz María Pérez
XXXI Reunión
20:00-20:30
Anual
CONFERENCIA CIENCIA DE FRONTERA
(ACADEMIA DE CIENCIAS)
Sala A
MAS ALLÁ DEL PLANETA TIERRA
Patricio Rojo, Universidad de Chile.
Presenta: Danilo González-Nilo
21:30
CENA Y FIESTA
VIERNES 26 DE SEPTIEMBRE
10:00-11:00
TRABAJOS DE INCORPORACIÓN
Sala A
Presidente: Jaime Eyzaguirre
Secretario: Enrique González
10:00 ANÁLISIS GENÓMICO FUNCIONAL DEL DESARROLLO DEL POLEN EN Arabidopsis
thaliana (Functional genomic analysis of pollen development in Arabidopsis
thaliana)
León,
G. .
Centro
de
Biotecnología
Vegetal,
Universidad
Andrés
Bello .
Patrocinante: Jordana, X..
1
1
10:30 IDENTIDAD DE ÓRGANOS FLORALES EN Vitis vinifera: CARACTERIZACIÓN DE
UNA RED DE GENES INVOLUCRADOS (Floral organ identity in V. vinifera:
Cha ráete rization of a network of genes involved) Poupin, M.J. , Leiva-Ampuero, A. ,
Timmermann, T. , Dauelsberg, P. , Matus, J.T. , Arce-Johnson, P. . Pontificia Universidad
Católica de Chile. Facultad de Ciencias Biológicas. Depto. Genética Molecular
y
Microbiología. , Pontificia Universidad Católica de Chile.
Facultad de Agronomía e
Ingenería Forestal. Depto. Fruticultura y Enología. . Patrocinante: Arce-Johnson, P.
1
1
2
2
1
1
2
11:00-11:30
11:30-12:30
CAFÉ
MEDALLA HERMANN NIEMEYER
PREMIOS FERMELO-SBBM
1
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
Conferencias
XXXI Reunión
CONFERENCIA SEVERO OCHOA
CONFERENCIA INAUGURAL
RNA
CHAPERONES,
Darilx
THE
AIDS
1
,
J . L , Gabus-Dariix,
VIRUS
1
C. .
AND
LaboRetro,
THE
Unité
PEOPLE.
de
Virologie
H u m a i n e I N S E R M , IFR 1 2 8 , E N S L Y O N , 4 6 a l l é e d l t a l i e , 6 9 3 6 4 L y o n ,
BÚSQUEDA D E C L A V E S E S E N C I A L E S PARA LA ASIMILACIÓN D E
NITRATO
EN
essential
PLANTAS
keys
in
CON
nitrate
UN
ALGA
assimilation
1
of
1
VERDE
plants
(Searching
with
a
green
1
for
alga)
1
Fernández, E . , Galván, A. , Llamas, A. , Tejada-Jiménez, M. , Higuera,
1
France .
Recent
Anual
intense
biochemical
and
structural
studies
on
the
basic
1
J.J. ,
1
González-Ballester,
de
1
C i e n c i a s , U n i v e r s i d a d d e C ó r d o b a . C a m p u s d e R a b a n a l e s , Edif. S e v e r o
Ochoa, 14071-Córdoba, Spain .
acid
N u m e r o s o s o r g a n i s m o s , e s p e c i a l m e n t e las plantas de c o s e c h a , a s i m i l a n
crowding
and
chaperoning
nitrato
c a u s a t i v e a g e n t of A I D S , t h e role o f l U P ' s a n d R N A
evolucionado utilizando
como
la
will b e i l l u s t r a t e d . R e s u l t s will b e p r e s e n t e d t o ¡Ilústrate h o w e s s e n t i a l
una
viral factors s u c h a s t h e T a t t r a n s - a c t i v a t o r
estructural m e n t e
and the structural
NC
Facultad
de
1
properties ( R N A - C H A P E R O N E S ) . B a s e d on investigations on HIV, the
CHAPERONES
Molecular,
E. .
i n t r i n s i c a l l y u n s t r u c t u r e d ( I U P ) a n d s e c o n d l y t h a t a c l a s s of n u c l e i c
potent
Biología
Sanz-Luque,
c o n c e p t s in b i o l o g y , f i r s t l y t h e f a c t t h a t a l a r g e n u m b e r of p r o t e i n s a r e
have
y
A. ,
Departamento
proteins
Bioquímica
1
Montaigu,
m e c h a n i s m s of life h a v e l e d t o t h e e m e r g e n c e of t w o e n t i r e l y n o v e l
binding
de
D. ,
asimilación
forma
nitrogenada
preferente.
Así
éstos
una dosis específica de genes que
eficiente.
sencilla.
La
ruta
El
de
interés
asimilación
de
la
de
han
aseguran
nitrato
investigación
es
en
los
p r o t e i n s , t h a t a r e b o t h I U P ? s a n d R N A C H A P E R O N E S , f u n c t i o n in
m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s d e e s t e p r o c e s o h a c a m b i a d o d e s d e los p a s o s
vitro and control virus
de r e d u c c i ó n , de nitrato a a m o n i o y hasta su incorporación a e s q u e l e t o s
replication from entry to particle
production,
dissemination and variability. T h u s targeting Tat and N C by specific
c a r b o n a d o s , a los d e t r a n s p o r t e .
molecules
p a s a d o a los m e c a n i s m o s r e g u l a d o r e s d e la r u t a , p o s i t i v o p o r n i t r a t o y
should
ensure
a
sustained
high
level
inhibition
of
Más
recientemente
este interés
ha
H l V r e p l i c a t i ó n in i n f e c t e d p e r s o n s . T w o s u c h r n o l e c u l e s h a v e r e c e n t l y
negativo p o r a m o n i o y sus derivados. Al ser
b e e n d i s c o v e r e d that t a r g e t N C in i n f e c t e d cells in a highly specific
unicelular,
m a n n e r w i t h a n I C 5 0 of 0 . 2 n M . B a s e d o n t h e s e r e s u l t s , w e s h o u l d
secuenciado, y filogenéticamente emparentado con plantas, estas tareas
consider developing similar molecules targeting
d e i d e n t i f i c a c i ó n d e e l e m e n t o s e s e n c i a l e s p a r a la a s i m i l a c i ó n d e n i t r a t o
RNA-CHAPERONES
haploide,
de
genética
C h l a m y d o m o n a s u n alga
relativamente
fácil
y
genomio
essential for t h e replication of h u m a n p a t h o g e n i c v i r u s e s a n d a g e n t s ,
se v e n f a c i l i t a d a s . D e e s t a f o r m a , n u e s t r o g r u p o ha p o d i d o i d e n t i f i c a r l o s
s u c h as H C V , H B V , W N V a n d the P r i o n . W o r k s u p p o r t e d by I N S E R M ,
transportadores
Europe, A N R S and Sidact.ion
p l a s m á t i c a c o m o s i s t e m a s d e u n o y d o s c o m p o n e n t e s , el t r a n s p o r t a d o r
de
n i t r a t o y nitrito
de alta afinidad
d e la
membrana
d e n i t r i t o al c l o r o p l a s t o , y r e c i e n t e m e n t e u n t r a n s p o r t a d o r d e m o l i b d a t o ,
micronutriente esencial de e s t a ruta. A s i m i s m o c o n objeto de d e t e r m i n a r
los
factores
transcripcionales
reguladores,
hemos
generado
una
c o l e c c i ó n d e 2 2 0 0 0 m u t a n t e s i n s e r c i o n a l e s q u e c u b r e n la m a y o r p a r t e
del
genoma
y que
están afectados
en
la s e ñ a l i z a c i ó n
por nitrato
amonio. Así h e m o s identificado a NIT2 c o m o factor transenpcional
media
la s e ñ a l d e n i t r a t o y d i v e r s o s
negativa
compleja.
Financiado
elementos
MEC
para una
(BFU2005-07521)
y
o
que
regulación
Junta
de
Andalucía (CVI-1609).
CONFERENCIA OSVALDO CORI
CONFERENCIA PABMB
FORCE-CLAMP
SPECTROSCOPY
OF
SINGLE
1
PROTEINS.
EL ACIDO SALIClLICO EN LA R E S P U E S T A DE D E F E N S A A ESTRÉS
EN ARABIDOPSIS
1
F e r n a n d e z , J . M . . Columbia University, N e w York .
Arabidopsis)
forces
affect
the
dynamics
and
chemistry
of
,
1
F. ,
acid
in t h e s t r e s s d e f e n s e r e s p o n s e
1
Laporte,
1
D. ,
Armijo,
G.\
Herrera,
in
1
A. ,
1
how
Merabachvili, G . , H o l u i g u e , L . . D e p a r t a m e n t o de Genética Molecular y
proteins.
M i c r o b i o l o g í a , F a c u l t a d d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a
W e have developed single m o l e c u l e A F M t e c h n i q u e s to study
mechanical
(Salicylic
Blanco
Using molecular biological techniques, w e engineer tándem
modular
1
de Chile .
p r o t e i n s t h a t a r e m a d e o f i d e n t i c a l r e p e a t s o f a p r o t e i n of i n t e r e s t .
El á c i d o
These
genes de respuesta a estrés biótico (patógenos) y abiótico en plantas.
polyproteins
act
as
handles
for a t o m i c
forcé
microscopes,
without the n e e d for linkers o r special a t t a c h m e n t c h e m i s t r y .
When
En
salicílico ( S A ) es
nuestro
grupo
una hormona
hemos
identificado
c l a v e p a r a la a c t i v a c i ó n
un
grupo
de
217
de
genes
de
el a n á l i s i s d e l t r a n s c r i p t o m a
de
s u c h polyproteins are e x t e n d e d by a n A F M , t h e i r forcé properties are
respuesta temprana
unique mechanical fingerphnts that u n a m b i g u o u s l y distinguish them
Arabidopsis
from
single
c o a c t i v a d o r m a e s t r o d e la v í a d e l S A ( N P R 1 ) , n o s p e r m i t i ó i d e n t i f i c a r d o s
the
more
frequent
non-specific
events
that
plague
en
a SA,
respuesta
mediante
a
SA.
El
uso
de
una
mutante
en
un
molecule studies. W e combine polyprotein engineering together with
vías de activación t e m p r a n a de g e n e s p o r SA, una dependiente y otra
a c t i v e f o r c e c l a m p A F M t e c h n i q u e s . W t h t h i s a p p r o a c h , t h e l e n g t h of
independiente de N P R 1 . Estos dos grupos de genes se diferencian en
a n e x t e n d i n g p o l y p r o t e i n is m e a s u r e d w h i l e t h e p u l l i n g f o r c é is a c t i v e l y
s u s c a t e g o r í a s f u n c i o n a l e s , e n la c i n é t i c a d e a c t i v a c i ó n p o r S A y e n la
kept
presencia
constant
technique
poweríul
by
combined
approach
force-dependeney
reactions.
negative
to
of
From the
transition state
mechanisms.
with
feedback
polyprotein
study
proteins.
protein
folding,
data
will
help
The
engineering
We
have
unfolding
force-dependence,
of t h e s e r e a c t i o n s
Our
control.
we
force-clamp
has
become
investigated
and
extract
of
the
the
chemical
fe a t u r e s
that reveal underlying
guide
a
of
the
molecular
development
of
new
de
promotores.
evaluando
defensa
a
elementos
Mediante
regulatorios
análisis
de
sobrerepresentados
genómica
funcional
en
sus
estamos
la f u n c i ó n d e u n p a r d e e s t o s g e n e s e n la r e s p u e s t a
estrés.
Para
esto
se
obtuvieron
y
caracterizaron
de
líneas
m u t a n t e s y s o b r e - e x p r e s o r a s d e l o s g e n e s s e l e c c i o n a d o s y s e e v a l ú a el
fenotipo d e resistencia o tolerancia a estrés en estas líneas. En paralelo
e s t u d i a m o s el m e c a n i s m o d e a c t i v a c i ó n t r a n s c r i p c i o n a l d e e s t o s g e n e s
theories on á r e a s s u c h as t h e statistical d y n a m i c s of a folding p o l y m e r
por
and
transgénicas de A r a b i d o p s i s . E s t a s estrategias nos permitirán identificar
ab-initio studies
stretching
forcé.
of a c h e m i c a l
References:
1-
reaction while
Fernandez,
J.M.
placed
and
under a
Li,
H.
B.
SA, mediante
análisis
funcionales
de
sus promotores e n
líneas
g e n e s c l a v e s p a r a la p r o t e c c i ó n al e s t r é s c e l u l a r , a s í c o m o d e t e r m i n a r el
F o r c e - c l a m p s p e c t r o s c o p y m o n i t o r s t h e f o l d i n g t r a j e c t o r y of a s i n g l e
mecanismo
protein (2004), S c i e n c e , 3 0 3 : 1 6 7 4 - 1 6 7 8 2 - W i i t a et al, (2007) Probing
F O N D E C Y T - C O N I C Y T (1060494) y Núcleo Milenio Genómica Funcional
t h e c h e m i s t r y of t h i o r e d o x i n c a t a l y s i s w i t h f o r c é . N a t u r e , 4 5 0 : 1 2 4 - 7 .
de Plantas ( P 0 6 - 0 0 9 - F ) .
de
su
activación
por
SA.
Financiado
por
Sociedad
de Bioquímica y Biología
CONFERENCIA CIENCIA DE FRONTERA (ACADEMIA
DE CIENCIAS)
M A S A L L Á D E L P L A N E T A T I E R R A (Mas Alia del Planeta Tierra)
Rojo, P.
1
1
U n i v e r s i d a d de C h i l e .
N u e s t r o p l a n e t a T i e r r a es el ú n i c o c u e r p o a s t r o n ó m i c o e n el q u e
e s t a m o s s e g u r o s q u e la v i d a s e d e s a r r o l l a y p r o s p e r a
en
a b u n d a n c i a . L a m a y o r í a de los otros c u e r p o s del S i s t e m a S o l a r
p r e s e n t a n , en forma evidente, su inhabilidad de m a n t e n e r o
desarrollar vida. Sin e m b a r g o , nuevos descubrimientos sugieren
que
en
ciertos
lugares
de
estos
mundos,
aparentemente
i n h ó s p i t o s , s e p o d r í a n t e n e r las c o n d i c i o n e s b á s i c a s en las q u e
algunos organismos podrían prosperar.
A d e m á s d e r e s u m i r los
d e s c u b r i m i e n t o s m á s r e l e v a n t e s e n el S i s t e m a S o l a r , e n e s t a
c h a r l a t a m b i é n h a b l a r é de los d e s c u b r i m i e n t o s m á s i m p o r t a n t e s en
el á r e a d e planetas extrasolares. E s t a á r e a se e s t a b l e c i ó t a n solo
a m e d i a d o s d e los n o v e n t a , c o n el d e s c u b r i m i e n t o d e l p r i m e r
planeta e n t o m o a una estrella m a d u r a . D e s d e e n t o n c e s , esta área
h a tenido u n c r e c i m i e n t o explosivo y m u c h o s de sus i n e s p e r a d o s
descubrimientos lograron d e r r u m b a r viejas teorías e hicieron surgir
n u e v a s ideas. Pero quizá m á s importante, nos ha permitido tener,
h o y en día, u n a mejor idea de qué esperar de otros m u n d o s .
Molecular
XXXI Reunión
Anual
Simposios
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
SIMPOSIO I: REGULACION DE LA EXPRESION DE RNAs EN EUCARIONTES
MAMMALIAN
SELENOPROTEIN
SYNTHESIS:
T R A N S LATI O NAL R E C O D I N G O F U G A A S S E L E N O C Y S T E I N E
( M a m m a l i a n s e l e n o p r o t e i n s y n t h e s i s : t r a n s l a t i o n a l r e c o d i n g of U G A
a s selenocysteine) C h a v a t t e , L . . Centre de G é n é t i q u e Moléculaire
( C G M - U P R 2 1 6 7 ) Gif s u r Y v e t t e - F r a n c e . .
1
1
S e l e n i u m is a n e s s e n t i a l t r a c e e l e m e n t , w h i c h is c o - t r a n s l a t i o n a l l y
incorporated
into t w e n t y
five sel eno p r o t e i n s
in
human
as
selenocysteine
(Sec), the
21st
amino
acid.
Selenoproteins
synthesis
follows
a remarkable
mechanism
which
involves
t r a n s l a t i o n a l r e c o d i n g of a U G A c o d o n , n o r m a l l y u s e d a s a s t o p
s i g n a l , i n t o a s e l e n o c y s t e i n e i n s e r t i o n s i g n a l . In e u k a r y o t e s , a
s p e c i f i c s e c o n d a r y s t r u c t u r e in t h e 3 ' U T R o f t h e s e l e n o p r o t e i n
m R N A ( n a m e d S E C I S ) is r e q u i r e d t o d i r e c t f a i t h f u l r e c o d i n g .
Several c o m p o n e n t s of the eukaryotic S e c insertion machineny
h a v e b e e n c h a r a c t e n z e d s o far: a S e c - t R N A S e c , a n e l o n g a t i o n
factor EF-Sec, and two S E C I S binding proteins ( S B P 2
and
r i b o s o m a l p r o t e i n L 3 0 ) . In o u r m o d e l , S B P 2 a n d L 3 0 p e r f o r m
d i f f e r e n t t u n c t i o n s in t h e U G A r e c o d i n g m e c h a n i s m , w i t h t h e S E C I S
acting as a molecular switch c h a r a c t e n z e d by a conformational
t r a n s i t i o n u p o n p r o t e i n b i n d i n g . O u r d a t a i n d í c a t e t h a t t h e n a t u r e of
t h e S E C I S acts at the translational level to m o d u l a t e s e l e n o p r o t e i n
e x p r e s s i o n , w h i c h is h i g h l y t u n e d in m a m m a l i a n c e l l s . T o d e f i n e t h e
p r e c i s e d e t e r m i n a n t s of t h e S E C I S e l e m e n t on U G A ' S e c r e c o d i n g
a c t i v i t y , w e h a v e u s e d a l u c i f e r a s e - b a s e d r e p ó r t e r g e n e s y s t e m in
t r a n s f e c t e d c e l l s a n d in i n v i t r o t r a n s l a t i o n . U s i n g t h i s s y s t e m , w e
h a v e s h o w e d that h u m a n S E C I S can be classified into w e a k ,
m o d é r a t e a n d s t r o n g e l e m e n t s for S e c i n s e r t i o n efficiency. W i t h i n
the
SECIS, w e have
identified the
structural
determinants
r e s p o n s i b l e for positive a n d n e g a t i v e r e g u l a t i o n of U G A r e c o d i n g
e f f i c i e n c y i n c e l l s a n d in v i t r o . F u n c t i o n a l i m p l i c a t i o n s of t h e s e
s t r u c t u r a l d e t e r m i n a n t s will b e a n a l y s e d a n d d i s c u s s . e d .
MOLECULAR
MECHANISM
OF
HIV^2
GENOMIC
RNA
T R A N S L A T I O N INITIATION (Molecular M e c h a n i s m
of
HIV-2
G e n o m i c R N A Translation Initiation) L o c k e r N, J.L. , S a r g u e i l , B . .
CNRS,
UMR
8015,
Faculté
de
pharmacie,
4
avenue
de
l'observatoire 75270 Paris cedex 0 6 .
1
1
1
T r a n s l a t i o n o f t h e H I V - 2 g e n o m i c R N A r e s u l t s i n t h e s y n t h e s i s of a
l a r g e p o l y p r o t e i n t h a t is c l e a v e d t o y i e l d s t r u c t u r a l p r o t e i n s ( G a g )
a n d e n z y m e s ( P o l ) . A n a l y s i s of H I V - 2 i m m a t u r e v i n o n p a r t i ó l e s
g e n e r a t e d in p r o t e a s e inhibitors t r e a t e d cells r e v e a l e d t h e p r e s e n c e
of three isoforms of the G a g polyprotein: the e x p e c t e d G a g p57 and
t w o s h o r t e r i s o f o r m s of 5 0 a n d 4 4 k D a a p p a r e n t m o l e c u l a r w e i g h t .
W e h a v e p r e v i o u s l y s h o w n that t h e s e t h r e e G a g i s o f o r m s are
p r o d u c e d by an internal
nbosomal
e n t r y site
(IRES)-driven
m e c h a n i s m . T h e H I V - 2 I R E S e l e m e n t is l o c a t e d w i t h i n t h e G a g
c o d i n g r e g i ó n a n d d o w n s t r e a m t h e first A U G . M o r e o v e r , it d i r e c t s
t h e t r a n s l a t i o n of t h e t h r e e G a g i s o f o r m s w i t h no n e e d for u p s t r e a m
5' untranslated R N A s e q u e n c e a n d this I R E S e l e m e n t c a n recruit
three independent initiation c o m p l e x e s onto the gag
mRNA.
T h e molecular mechanism by which such a peculiar
initiation process occurs remains elusive. D u r i n g internal
ribosome
e n t r y , i n t e r a c t i o n b e t w e e n t h e I R E S a n d t h e r i b o s o m e is m e d i a t e d
b y eukaryotic initiation factors ( e l F ) that c a n be assisted b y I R E S
transacting
factors.
To
try
and
understand
the
molecular
m e c h a n i s m s i n v o l v e d in i n t e r n a l e n t r y o f t h e r i b o s o m e o n t o G a g
g e n o m i c R N A w e m o d e l l e d t h e s e c o n d a r y s t r u c t u r e of t h e c o d i n g
r e g i ó n . T o d e f i n e t h e r o l e of i n d i v i d u a l s e c o n d a r y
structure
elements, we introduced mutations disrupting the structure of the
o p e n reading frame. The mechanistic and physiological significance
o f t h o s e r e s u l t s will b e d i s c u s . s e d
H C V I R E S R E L I E S ON P R I M A R Y S E Q U E N C E AND S T R U C T U R E
F O R D R I V I N G T R A N S L A T I O N INITIATION. ( H C V I R E S relies on
p r i m a r y s e q u e n c e a n d structure for driving translation initiation.)
Barría, M I . , González, A . , V e r a - O t a r o l a , J . , L e ó n , U. , Vollrath,
V. , Marsac, D . \ Pérez-Arce, T. , Monasteno, O. , Soza, A. ,
L ó p e z - L a s t r a , M. . L a b o r a t o r i o d e V i r o l o g í a M o l e c u l a r , C e n t r o d e
Investigaciones M é d i c a s , Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de Chile. ,
Centro
de
Bioinformática,
Facultad
de
Ciencias
Biológicas,
Pontificia
Universidad
Católica
de
Chile. , Departamento
de
Biología,
Facultad
de
Ciencias,
Universidad
de
Chile. ,
Departamento
de
Gastroenterología,
Facultad
de
Medicina,
Pontificia Universidad Católica de Chile. .
1
2
1
1
2
1
3
4
1
1
2
3
4
T h e H C V i n t e r n a l r i b o s o m e e n t r y s i t e ( I R E S ) s p a n s a r e g i ó n of
a p p r o x i m a t e l y 3 4 0 n t t h a t e n c o m p a s s e s m o s t of t h e 5 ? u n t r a n s l a t e d
r e g i ó n ( U T R ) of t h e v i r a l m R N A a n d t h e first 2 4 - 4 0 nt of t h e c o d i n g
r e g i ó n . T o i n v e s t í g a t e t h e e f f e c t s of a l t e r a t i o n s t o t h e p r i m a r y
sequence of the 5 7 U T R on IRES activity naturally occurring
m u t a t i o n s w e r e identified a n d their effect on translation initiation w a s
e v a l ú a t e in t h e c o n t é x t of R L u c / F L u c b i c i s t r o n i c R N A s . R e s u l t s
s h o w that d e p e n d i n g on their location within the R N A structure,
m u t a t i o n s c a u s e a r a n g e of e f f e c t s o n I R E S a c t i v i t y . H o w e v e r ,
mutations within the IRES llld s u b d o m a i n totally abolish H C V IRES
a c t i v i t y . In a n a t t e m p t t o e x p l a i n t h e s e o b s e r v a t i o n s t h e d y n a m i c
b e h a v i o r of I R E S l l l d s u b d o m a i n w a s a n a l y z e d b y m e a n s o f a 6 - n s
m o l e c u l a r d y n a m i c s i m u l a t i o n ( M D S ) . S t r i k i n g l y , a n d d e s p i t e of t h e
l o s s of f u n c t i o n M D S a n a l y s i s p r e d i c t e d t h a t t h e G 2 6 6 A / G 2 6 8 U
m u t a n t e x h i b i t s s t r u c t u r a l c o n s e r v a t i o n w i t h r e s p e c t to t h e w t - I R E S .
V a l i d a t i o n of t h i s p r e d i c t i o n w a s
obtained by analyzing
the
secondary structure of the isolated H C V llld R N A s b y circular
d i c h r o i s m ( C D ) s p e c t r o s c o p y i n p r e s e n c e o r a b s e n c e of M g 2 + i o n s .
R e s u l t s s u g g e s t that t h e p r i m a r y s e q u e n c e of s u b d o m a i n llld plays
a r o l e , a n d is r e q u i r e d , f o r I R E S - m e d i a t e d t r a n s l a t i o n i n i t i a t i o n .
T o g e t h e r results confirm the stringent structure/function relationship
exhibited by the H C V IRES, but also suggest that the primary
s e q u e n c e o f s u b d o m a i n l l l d p l a y s a r o l e , a n d ¡s r e q u i r e d , for
I R E S - m e d i a t e d translation initiation.
XXXI Reunión
Anual
SIMPOSIO II: TRANSDUCCIÓN DE SEÑALES: ACCIONES NO GENÓMICAS DE ESTEROIDES
COMO L O S R E C E P T O R E S A C O P L A D O S A PROTEÍNAS G Y
R E C E P T O R E S E S T E R O I D A L E S R E G U L A N L A M E I O S I S (How G
Protein-Coupled
and
Steroid
Receptors
Regúlate
Meiosis)
Hammes, S.
Department
of I n t e r n a l M e d i c i n e , D i v i s i ó n
of
E n d o c r i n o l o g y a n d M e t a b o l i s m , U n i v e r s i t y of T e x a s S o u t h w e s t e r n
Medical Center, Dallas, TX. U S A . .
1
1
Classical steroid receptors medíate m a n y transcription-independent
( n o n g e n o m i c ) s t e r o i d r e s p o n s e s in v i t r o . A m a j o r p r o b l e m in t h i s
f i e l d h a s b e e n t o j u s t i f y t h e b i o l o g i c a l s i g n i f i c a n c e of t h e s e
n o n g e n o m i c p r o c e s s e s , s i n c e d i s s e c t i n g t h e r e l a t i v e i m p o r t a n c e of
g e n o m i c v e r s u s n o n g e n o m i c s t e r o i d r e c e p t o r - m e d i a t e d s i g n a l i n g is
difficult. T o c i r c u m v e n t t h e s e c o n c e r n s , our laboratory studies the
biologically
important
and
accepted
transcription-independent
p r o c e s s of s t e r o i d - i n d u c e d m a t u r a t i o n , o r m e i o t i c
resumption.
U s i n g X e n o p u s l a e v i s o o c y t e s , w e h a v e s h o w n t h a t : 1) X e n o p u s
o o c y t e s a r e h e l d in m e i o t i c a r r e s t b y c o n s t i t u t i v e G « s a n d G0y
s i g n a l i n g t h a t r a i s e s i n t r a c e l l u l a r c A M P l e v é i s , 2) t h i s c o n s t i t u t i v e G
p r o t e i n s i g n a l i n g is r e g u l a t e d in p a i t by t h e G p r o t e i n - c o u p l e d
r e c e p t o r , G P R 3 , 3) a n d r o g e n s a r e c r i t i c a l i n - v i v o r e g u l a t o r s of
oocyte maturation, signaling via classical a n d r o g e n receptors; 4)
androgens
and progestins
rapidly
suppress
the
constitutive
i n h i b i t o r y G p r o t e i n s i g n a l i n g in a R e l é a s e o f I n h i b i t i o n f a s h i o n to
p r o m o t e m e i o t i c p r o g r e s s i o n ; a n d 5) t h e s c a f f o l d m o l e c u l e t e r m e d
M N A R ( M o d u l a t o r of N o n g e n o m i c A c t i o n s of s t e r o i d R e c e p t o r s )
regulates the cross-talk between classical steroid receptors and G
p r o t e i n s . F i n a l l y , w e h a v e d e m o n s t r a t e d t h a t s t e r o i d s can s i m i l a r l y
p r o m o t e m o u s e o o c y t e m a t u r a t i o n i n d e p e n d e n t of t r a n s c r i p t i o n ,
s u g g e s t m g t h a t t h e p r o c e s s of n o n g e n o m i c
steroid-triggered
m a t u r a t i o n is c o n s e r v e d f r o m l o w e r t o h i g h e r v e r t e b r a t e s .
VIAS
DE
SEÑALIZACION
INTRACEL ULARES
PARA
R E C E P T O R E S D E A N D R Ó G E N O : UN M O D E L O INTEGRADO
P A R A L A H I P E R T R O F I A CARDÍACA (Androgens and androgen
receptor intracellular s i g n a l i n g p a t h w a y s : An i n t e g r a t e d m o d e l for
c a r d i a c h y p e r t r o p h y ) E s t r a d a , M. . I C B M , F O N D A P , P r o g r a m a d e
Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile,
Chile. .
1
1
D e s p i t e a d v a n c e s in t r e a t m e n t , c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e still is t h e
n u m b e r o n e c a u s e of m o r t a l i t y a n d m o r b i d i t y w o r l d w i d e . C a r d i a c
c e l l s , not o n l y
must maintain
an
adequate balance
under
n e u r o - h u m o r a l s t i m u l a t i o n , but this m u s t t h e n b e m o d i f i e d a n d
c o n d i t i o n e d f u r t h e r by t h e c a r d i o m y o c y t e s t o m a i n t a i n n o r m a l
h o m e o s t a s i s . C a r d i a c h y p e r t r o p h y is p r o d u c e d in r e s p o n s e to
s e v e r a l p h y s i o - p h a t o l o g i c a l c o n d i t i o n s a n d is c h a r a c t e r i z e d by
i n c r e a s e s in c a r d i o m y o c y t e s i z e a n d p r o t e i n s y n t h e s i s , w h i c h is
a c c o m p a n i e d by a s w i t c h in t h e m e t a b o l i c s u b s t r a t e u t i l i z e d b y t h e
heart.
Although
initially
adaptive,
neuro-hormonal
activation
t o g e t h e r w i t h m e t a b o l i c d i s t u r b s h a v e d e l e t e r i o u s e f f e c t s on
c a r d i o v a s c u l a r s y s t e m . A b n o r m a l c a r d i o m y o c y t e s f u n c t i o n s r e s u l t in
cardiac
hypertrophy,
which
is
a
cardinal
manifestation
of
c a r d i o v a s c u l a r f a i l u r e H e a r t is a t a r g e t t i s s u e f o r a n a b o l i c s t e r o i d s .
Testosterone
elicits
significant
cardiovascular
effects,
and
a b n o r m a l i t i e s of p l a s m a c o n c e n t r a t i o n s c a n c a u s e c a r d i o v a s c u l a r
d i s e a s e . H o w e v e r , m o s t e v i d e n c e of t h e l i n k b e t w e e n t e s t o s t e r o n e
and metabolic
a c t i o n s is o b s e r v a t i o n a l . S t u d i e s t a r g e t e d
at
e s t a b l i s h i n g s u c h e f f e c t s at c e l l u l a r l e v e l a n d t h e i r c o r r e l a t i o n s w i t h
in v i v o m o d e l s , will b r o a d e n o u r u n d e r s t a n d i n g of t h e r o l e s p l a y e d
b y t h e s e m a l e s t e r o i d h o r m o n e s on t h e c a r d i o v a s c u l a r s y s t e m . I n
t h i s t a l k , e v i d e n c e f o r d i f f e r e n t s i g n a l i n g p a t h w a y s a c t i v a t e d by
t e s t o s t e r o n e d u r i n g t h e s h i f t f r o m n o r m a l to h y p e r t r o p h y p h e n o t y p e
in c a r d i o m y o c y t e s w i l l b e d i s c u s s e d . W e p r o p o s e a b a s i c m o d e l t h e
h o m e o s t a t i c a n d h y p e r t r o p h y m e c h a n i s m s of s t e r o i d s a c t i o n in
cardiac
cells.
Understanding
hypertrophy
mechanisms
are
p a r t i c u l a r l y i m p o r t a n t a s t h e y r e l a t e t o a v a r i e t y of p r o c e s s e s
r a n g i n g f r o m c e l l p h y s i o l o g y to h u m a n c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e .
EL
RECEPTOR
CLASICO
DE
PROGESTERONA
XPR SE
ASOCIA A L A MEMBRANA PLASMÁTICA A TRAVÉS DE S U
D O M I N I O D E U N I Ó N A L I G A N D O E I N T E R A C C I O N A C O N Gpy
(The Classic X e n o p u s laevis Progesterone Receptor Associates to
t h e P l a s m a M e r n b r a n e t h r o u g h its L i g a n d B i n d i n g D o m a i n a n d
I n t e r a c t s w i t h GPy)
Oíate, J . , Martínez, S. , Montecino, M. ,
Hinrichs, M V . . Departrnento de Bioquímica y Biología Molecular,
F a c u l t a d d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n ,
Concepción, Chile. .
1
1
1
1
1
D u r i n g t h e last d e c a d e , c o n s i d e r a b l y e x p e r i m e n t a l e v i d e n c e h a s
a c c u m u l a t e d that supports the view that classical steroid receptors
a r e m e d i a t i n g e x t r a - n u c l e a r a c t i o n s in d i f f e r e n t s y s t e m s
and
o r g a n i s m s . O n e of t h e b e s t c h a r a c t e r i z e d e x a m p l e s is p r o g e s t e r o n e
induced Xenopus
laevis
o o c y t e m a t u r a t i o n . In t h i s
system,
o v e r e x p r e s s i o n a n d d e p l e t i o n of c j a s s i c p r o g e s t e r o n e r e c e p t o r
(xPR)
have
been
shown
to
accelerate
and
to
block
p r o g e s t e r o n e - m d u c e d o o c y t e m a t u r a t i o n r e s p e c t i v e l y . In a d d i t i o n ,
r a p i d p r o g e s t e r o n e i n h i b i t i o n of a d e n y l y l c y c l a s e ( A C ) a c t i v i t y in
i so late d p l a s m a m e r n b r a n e p r e p a r a t i o n s s u p p o r t s t h e i d e a t h a t x P R
a n d s i g n a l G ^ s - A C c o m p o n e n t s s h o u l d b e l o c a l i z e d at t h e o o c y t e
p l a s m a m e r n b r a n e . T o test this hypothesis, we have cloned the
o o c y t e A C w h i c h is a c t i v a t e d by G a s a n d GPy a n d s t u d i e d its
p a r t i c i p a r o n in t h e m a t u r a t i o n p r o c e s s . In a d d i t i o n , w e h a v e
transiently t r a n s f e c t e d t h e x P R c D N A into C o s - 7 cells a n d a n a l y s e d
its
subcellular
distribution.
Through
western
blot
and
i m m u n o f l u o r e s c e n s e confocal m i c r o s c o p y analysis, w e w e r e able to
d e t e c t x P R a s s o c i a t e d t o t h e p l a s m a m e r n b r a n e of t r a n s f e c t e d
Cos-7 cells. W e also e x p r e s s e d t h e N-terminal a n d ligand b i n d i n g
d o m a i n ( L B D ) of t h e r e c e p t o r a n d f o u n d t h a t o n l y t h e L B D d i s p l a y e d
mernbrane
association, although the N-terminal
domain
was
e x p r e s s e d in e q u a l a m o u n t s . P r o g e s t e r o n e - B S A - F I T C
binding
s t u d i e s s h o w n s p e c i f i c s t e r o i d b i n d i n g at t h e p l a s m a m e r n b r a n e ,
s u g g e s t i n g t h a t x P R - L B D is e x p o s e d o n t h e o u t s i d e of t h e c e l l .
Finally, w e u s e d the T á n d e m Affinity Purification m e t h o d ( T A P - t a g )
a n d f o u n d GPy a s s o c i a t e d to x P R , w h i c h w a s c o r r o b o r a t e d in t h e
X e n o p u s l a e v i s o o c y t e by c o - i m m u n o p r e c i p i t a t i o n a n a l y s i s .
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
SIMPOSIO III: QUORUM SENSING Y BIOFILMS
BIOPELÍCULAS
Y
MICROORGANISMOS
(Biofilms
and
QUORUM
SENSING
BIOMINEROS: REALIDAD Y
Quorum
Sensing
in
Biomining
R e a l i t i e s a n d C h a l l e n g e s ) G u i l i a n i , N.
1
EN
DESAFÍOS
Microorganisms:
U n i d a d de
Comunicación
CONTROL
DE
BIOPELÍCULAS
METABOLITOS
CHILENA
SECUNDARIOS
(Control
de
MICROBIANAS
DE
biopelículas
LA
FLORA
microbianas
por
POR
NATIVA
metabolitos
1
s e c u n d a r i o s d e la flora n a t i v a c h i l e n a ) U r r u t i a B , H . . L a b o r a t o r i o e
B a c t e r i a n a , L a b o r a t o n o de Microbiología y B i o t e c n o l o g í a Molecular,
Biopelículas
Departamento
M i c r o b i o l o g í a / C e n t r o d e B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n .
de
Biología,
Instituto
de
Dinámica
Celular
y
y
Microbiología
Ambiental,
Departamento
1
Biotecnología, Universidad de Chile. .
Casilla 160-c, fono: 0 4 1 2 2 0 4 2 4 9 , email: h u r r u t i a @ u d e c . c l .
L a f o r m a h a b i t u a l d e c r e c i m i e n t o d e l a s b a c t e r i a s e n la n a t u r a l e z a
Una
e s b a j o el e s t a d o d e b i o p e l í c u l a s o b i o f i l m s . E s t a s s e d e f i n e n c o m o
microorganismos que viven adheridos a
c o m u n i d a d e s de m i c r o o r g a n i s m o s q u e c r e c e n e m b e b i d o s en una
desarrollando
su actividad i n m e r s o s en u n a matriz
matriz de exopolisacáridos y a d h e r i d o s a u n a superficie inerte o un
ellos
y expresando
tejido vivo. Las biopelículas han adquirido relevancia en diversos
habitat
1
biopelícula
mismos
c a m p o s d e i n v e s t i g a c i ó n s e a p o r s u p a p e l b e n e f i c i o s o o s e a , al
importancia
humanas
las
biopelículas
conformadas
por comunidades
de
procahontes
tienen
alto valor a g r e g a d o
producción
oro, uranio, cobalto) desde
mineral
m e d i a n t e el p r o c e s o d e b i o l i x i v i a c i ó n . N o o b s t a n t e e s t a s
mismas
biopelículas
son
también
responsables
de
las
contaminaciones
una
para
en
medicina,
bacterianas,
un
particular
agrupación
un
diversos
viven
impacto
agro forestal. Su
conglomerado
propio.
ámbitos
generada
por
Constituyen
el
de
industria
sobre
ecológico
formación,
económico
caracterizar
Como
poder
mecanismos
fomentar
moleculares
en
el p r o c e s o
involucrados
microorganismos
de
biolixiviación
en
biomineros
o aminorar
el
la
producto
del
trabajo
para
p l a n t a - m i c r o o r g a n i s m o , e n el
daño
Ambiental,
(Centro
de
área
de
interacción
Biotecnología
Universidad
algunos metabolitos s e c ú n d a n o s extraíbles, desde plantas
( e c o s i s t e m a de
Gram-negativas.
estrategias
Por
e s o . y c o n el d e s a f í o
biológicas
que
biopelúclas en bacterias
e s t a vía
biopelículas
está presente
permitan
de
regular
en
bacterias
generar
la
nuevas
formación
de
b i o m i n e r a s , n o s p r o p u s i m o s i n d a g a r si
en Acidithiobacillus
ferrooxidans
y
otras
caracterizado
P s e u d o m o n a s syringae D C 3 0 0 y P s e u d o m o n a s syringae C C 9 4 . En
extractos
que
mecanismos
han. sido
de a c c i ó n ,
activos
se
explorando
ha
comenzado
interferencia
c i r c u i t o Q S m e d i a n t e ( m e d i a n t e el u s o d e b i o s e n s o r e s ) .
THAT
BACTERIAL
COORDINATE
POPULATIONS
GENE
Greenberg,
SENSING
EXPRESSION
E.P.
1
IN
Department
of
1
Microbiology, University of W a s h i n g t o n . Seattle, U S A .
Acyl-homoserine lactone (acyl-HSL) q u o r u m - s e n s i n g systems have
b e e n found in over 6 0 bacterial s p e c i e s w h e r e t h e y function
regulators
of
a
range
of
phenotypes.
The
signáis
are
as
fatty
a c y l - H S L s a n d t h e f a t t y a c y l g r o u p d e t e r m i n e s s p e c i f i c i t y . P a i r s of
l i n k e d g e n e s e n c o d e t h e signalincj s y s t e m s ; a n R r e c e p t o r
and
an
I
signal
synthase
gene.
signal-dependent transcription factors
biosynthesis
intermediates
substrates. W e
utilizes
an
and
The
acid
from
the
function
gene
as
T h e s y n t h a s e s u s e fatty acid
S-adenosylmethionine
have recently discovered
organic
receptors
a signal synthase
environment.
the
as
that
aromatic
c o u m a r i c a c i d as a s u b s t r a t e for t h e s y n t h e s i s of c o u m a r y l - H S L .
Coumaryl-HSL
is d e t e c t e d b y t h e c o g n a t e
controls gene expression. W e
species
with
coumaryl-HSL
receptor protein
have discovered
synthases.
This
several
represents
and
bacterial
a
new
b r e a d t h i n t h e d i v e r s i t y o f a c y l - H S L s i g n á i s . T h i s d i s c o v e r y wiíl b e
d i s c u s s e d within the context of bacterial s o c i a l b e h a v i o r .
el
e f e c t o d e a l g u n o s e x t r a c t o s s o b r e la f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s d e
b1-04-321,
SIGNALS
nativas
d e la C o s t a V I I y V I I I r e g i o n e s ) . M e d i a n t e
e n s a y o s q u e i n v e s t i g a n la c a p a c i d a d d e f o r m a r B i o p e l í c u l a s ( c o l o n y
investigar
SOCIOMICROBIOLOGY: A N E W T W I S T ON QUORUM
de
químicamente
b l o t t i n g ) y la v i a b i l i d a d f i s i o l ó g i c a ( y o d u r o p r o p i d i o ) s e e s t u d i a
aquellos
bacterias biomineras.
cordillera
y
la
regulación
de
aislado
de
q u o r u m s e n s i n g ( Q S ) e s u n a d e l a s p r i n c i p a l e s v í a s m o l e c u l a r e s de
formación
han
el
L A B de Biopelículas y Microbiología
Concepción)
la
se
en
amigables
fitopatógenos.
a m b i e n t a l de las A M D s . L a c o m u n i c a c i ó n b a c t e r i a n a célula-célula o
de
la
el
m á s de d o s mil tipos de i n f e c c i o n e s y e n f e r m e d a d e s de plantas
p a r a c o n t r o l a r la a d h e r e n c i a d e b a c t e r i a s y h o n g o s
biopelículas
en
para
i n i c i o d e t o d o p r o c e s o f i t o p a t o g é n i c o y a u n q u e s o n , los c a u s a n t e s
de
e n sitios m i n e r o s d e s a f e c t a d o s o n o . A p a r e c e r e l e v a n t e , e n t o n c e s ,
los.
Las
terrestres,
fundamental
a ú n no e x i s t e n , e n el m e r c a d o , b i o c i d a s a m b i e n t a l m e n t e
de
tienen
actividades
vegetales
y
es
las
y
y agricultura.
ambientales [ A g u a acidas de drenaje de m i n a s , ( A M D ) ] generadas
formación
de
superficies inertes o vivas,
microorganismos,
ambiente,
que
o
fenotipo
muchos
económica
como
e x t r e m o f i l a s p e r m i t e a la i n d u s t r i a ( b i o ) m i n e r a r e c u p e r a r m e t a l e s d e
(cobre,
es
primario
contrario, p o r su papel perjudicial. Las actividades m e t a b ó l i c a s de
biopelículas
de
DIUC 208.142.026-1.0.
a
con
INNOVA
XXXI Reunión
Anual
SIMPOSIO IV: INFERENCIA DE CONOCIMIENTO Y MINERÍA DE DATOS MEDIANTE BIOINFORMÁTICA: EJEMPLOS DE
DESARROLLOS Y APLICACIONES
P O T E N C I A L E S ESTADISTICOS: UNA P O D E R O S A HERRAMIENTA
BIOINFORMATICA Q U E PERMITE O B T E N E R BENEFICIOS DE LO
ABUNDANTE, AL ELIMINAR LO REDUNDANTE Y E X T R A E R LO
R E L E V A N T E (Statistical Potentials: A Powerful Bioinformatic Tool
That
Generates
Useful
Information
From
The
Abundant,
By
Eliminating The Redundant And Extracting The Relevant) Meló, F . ,
Slater, A . W . , N o r a m b u e n a , T . , M a r t í n e z , P. , P é r e z , N. , C a s t e l l a n o s ,
J. , Panjkovich, A. , Ferrada, E. .
Departamento
de
Genética
Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia
Universidad Católica de Chile. .
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Los potenciales estadísticos constituyen una poderosa herramienta
q u e p e r m i t e la e x t r a c c i ó n d e i n f o r m a c i ó n útil a c e r c a d e u n s i s t e m a
c o m p l e j o q u e s e a e s t r u c t u r a d o y f u n c i o n a l . E l l o s r e l a c i o n a n la
probabilidad de o c u r r e n c i a de un e s t a d o discreto con una energía a
t r a v é s d e la a p l i c a c i ó n d e la ley i n v e r s a d e B o l t z m a n n . E s t a ú l t i m a , s e
e n c u e n t r a a su v e z e s t r e c h a m e n t e r e l a c i o n a d a c o n c o n c e p t o s d e
información y entropía propuestos
por Shannon.
Probabilidad,
energía, información y entropía son conceptos altamente relacionados
e n t r e s í , los c u a l e s en ú l t i m o g r a d o c o n f i e r e n p o d e r p r e d i c t i v o a c e r c a
d e la c o n d i c i ó n e s t á t i c a o e v o l u c i ó n d i n á m i c a d e un s i s t e m a . E n e s t a
c h a r l a p u n t u a l del s i m p o s i o , s e d e s c r i b i r á d e m a n e r a m u y s i m p l e en
q u é consisten y c ó m o se o b t i e n e n los p o t e n c i a l e s estadísticos. La
utilidad de los p o t e n c i a l e s e s t a d í s t i c o s s e r á e j e m p l i f i c a d a a t r a v é s de
la p r e s e n t a c i ó n d e t r e s a p l i c a c i o n e s d i f e r e n t e s d e é s t o s q u e s e h a n
e s t a d o d e s a r r o l l a n d o en l o s ú l t i m o s a ñ o s e n n u e s t r o l a b o r a t o r i o . L o s
e j e m p l o s i n c l u y e n : 1) p r e d i c c i ó n d e e s t r u c t u r a y f u n c i ó n d e p r o t e í n a s ,
2 ) p r e d i c c i ó n d e g e n e s y 3) p r e d i c c i ó n d e a u t o r í a d e t e x t o s en
disputa.Financiamiento: Proyecto F O N D E C Y T 1080158.
IDENTIFICACION Y LOCALIZACION DE L O S C O M P O N E N T E S
CLAVES D E L SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS DE EUCARIOTAS
E N B A C T E R I A S C O M P A RTIM E N T A L I Z A D A S (Identification
And
Localization Of K e y C o m p o n e n t s Of T h e E u k a r y o t i c E n d o m e m b r a n e
S y s t e m In C o m p a r t m e n t a l i z e d B a c t e r i a ) D e v o s , D . , F r a n k e , J . ,
Chait, B. , Sali, A , Rout, M. . E M B L , Meyerhofstrasse 1, D-69117
H e i d e l b e r g , G e r m a n y . , L a b o r a t o r y of C e l l u l a r a n d S t r u c t u r a l B i o l o g y ,
The
Rockefeller
University,
1230
York
Avenue,
New
York,
N Y 1 0 0 2 1 - 6 3 9 9 , U S A . , D e p a r t m e n t s of B i o p h a r m a c e u t i c a l S c i e n c e s
a n d P h a r m a c e u t i c a l C h e m i s t r y , and California Institute for Quantitative
Biomedical Research, U C S F , San Francisco, CA 94143-2552, U S A . .
P a t r o c i n a n t e : M e l ó , F..
1
2
3
2
2
1
2
3
A m a j o r s t e p in e u k a r y o t i c e v o l u t i o n w a s t h e d e v e l o p m e n t of
compartmentalization. S e q u e n c e b a s e d searches are uninformative
a b o u t t h e origin of t h e e u k a r y o t i c e n d o m e m b r a n e s y s t e m . B e c a u s e
s t r u c t u r e is m o r e c o n s e r v e d t h a n s e q u e n c e in e v o l u t i o n , w e u s e d
structure b a s e d searches to identify prokaryotic contributions to the
eukaryotic compartmentalization system. W e have discovered a
c o m b i n a t i o n of f o l d t y p e s t h a t is a s i g n a t u r e of t h e e u k a r y o t i c
e n d o m e m b r a n e s y s t e m in t w o c o m p a r t m e n t a l i z e d b a c t e r i a f r o m t h e
Planctomycetes
phylum,
Rhodopirellula
báltica
and
Gemmata
o b s c u r i g l o b u s . Our analysis provides a m o l e c u l a r link b e t w e e n the
eukaryotic and prokaryotic compartmentalization s y s t e m s , supporting
a n a u t o g e n o u s m o d e l of e u k a r y o t i c e v o l u t i o n .
MARCOS
DE
LECTURA
ABIERTOS
ALTERNATIVOS:
UNA
P E S A D I L L A B I O I N F O R M A T I C A P E R O UN P O T E N C I A L MINA D E
O R O P A R A L A E V O L U C I O N D E G E N E S (Altérnate O p e n R e a d i n g
F r a m e s : A Bioinformatics N i g h t m a r e But A Potential G o l d m i n e For
G e n e Evolution) H o l m e s , D . S . , R i v e r a , G . , O s s a n d ó n , F. . C e n t e r f o r
Bioinformatics and G e n o m e Biology (CBGB), Fundación Ciencia para
la V i d a ( w w w . c i e n c i a v i d a . c l ) a n d D e p t o . d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s ,
F a c u l t a d d e C i e n c i a s d e la S a l u d , U n i v e r s i d a d d e A n d r é s B e l l o . .
P a t r o c i n a n t e : M e l ó , F..
Altérnate open reading f r a m e s ( O R F s ) that genérate overlapping
g e n e s h a v e b e e n w e l l d o c u m e n t e d in v i r a l g e n o m e s . H o w e v e r , f e w
e x a m p l e s h a v e b e e n d e s c r i b e d in o t h e r o r g a n i s m s , p r o m p t i n g u s to
c a r r y o u t a l a r g e s c a l e , m u l t i - g e n o m e s u r v e y of B a c t e r i a a n d A r c h a e a
in a s e a r c h f o r a l t é r n a t e O R F s t h a t m i g h t b e f u n c t i o n a l g e n e s .
A n a l y s i s of o v e r 7 0 0 g e n o m e s ( > 2 m i l l i o n g e n e s ) r e v e á i s t h a t
s u b s t a n t i a l a l t é r n a t e O R F s (>-300 n u c l e o t i d e s w i t h o u t a s t o p c o d o n )
a r e s u r p r i s i n g l y c o m m o n , e s p e c i a l l y in G + C rich g e n o m e s . T h i s t a l k
will o u t l i n e t h e d i s c o v e r y a n d i n t e r p r e t a t i o n of a l t é r n a t e O R F s a n d will
describe
a publicly
available, searchable datábase
(AlterORF,
w w w . A l t e r O R F . c l ) of a l t é r n a t e O R F s . M a n y altérnate O R F s do n o t
e n c o d e p r o t e i n s a n d can be m i s a n n o t a t e d as hypothetical g e n e s
exacerbating the so-called "orphan g e n e " problem and confounding
t h e i n t e r p r e t a t i o n o f g e n o m e s . A l t e r O R F is h e l p i n g t o d e p ú r a t e t h e s e
incorrect gene identifications. H o w e v e r , altérnate O R F s also represent
a rich s o u r c e of p o t e n t i a l c o d i n g i n f o r m a t i o n t h a t c a n g i v e r i s e t o n o v e l
proteins w h e n c o u p l e d to appropriate regulatory s e q u e n c e s a n d , as
such, may represent an important contributor to gene evolution.
E x a m p l e s w i l l b e d e s c r i b e d of n e w g e n e s t h a t a r e h y p o t h e s i z e d t o
have arisen from altérnate O R F s . F u n d i n g : F O N D E C Y T 1050063,
D I - U N A B 3406-R, DI-02-08/I and a Microsoft Sponsored Research
Award.
1
1
1
1
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
Trabajos de
Incorporación
XXXI Reunión
IDENTIDAD
DE
ORGANOS
FLORALES
EN
Vitis
vinifera:
CARACTERIZACIÓN D E UNA R E D D E G E N E S I N V O L U C R A D O S
( F l o r a l o r g a n i d e n t i t y in V. v i n i f e r a : C h a r a c t e r i z a t i o n of a n e t w o r k of
g e n e s involved) P o u p i n , M.J. , L e i v a - A m p u e r o , A. , T i m m e r m a n n , T. .
Dauelsberg,
P. ,
Matus.
J.T. ,
Arce-Johnson,
P. .
Pontificia
Universidad Católica de Chile
F a c u l t a d de C i e n c i a s Biológicas.
Depto. Genética Molecular y Microbiología. , Pontificia Universidad
C a t ó l i c a de Chile.
F a c u l t a d de A g r o n o m í a e Ingenería F o r e s t a l .
D e p t o . F r u t i c u l t u r a y E n o l o g í a . . P a t r o c i n a n t e : A r c e - J o h n s o n . P.
L a i d e n t i d a d de ó r g a n o s f l o r a l e s es c o n t r o l a d a por distintos g e n e s ,
d o n d e factores tipo M A D S - b o x son p r o t a g o n i c e s É s t o s se clasifican
e n l o s s u b g r u p o s A, B y C , a p a r t i r d e l o s - c u a l e s f u e d e r i v a d o el
m o d e l o actual de floración. A u n q u e este p r o c e s o es c o n s e r v a d o ,
e x i s t e n d i f e r e n c i a s en e l n ú m e r o d e g e n e s i n v o l u c r a d o s , s u s
r e g u l a c i o n e s y f u n c i o n e s en las distintas e s p e c i e s . E s t e estudio
p r e s e n t a la c a r a c t e r i z a c i ó n d e la c l a s e B d e g e n e s M A D S - b o x e n Vitis
vinifera,
c l a s e r e s p o n s a b l e d e la f o r m a c i ó n d e p é t a l o s y e s t a m b r e s .
I d e n t i f i c a m o s los g e n e s VvPiSTiLLATA,
Vv TM6 y VvAPETALAS.
El
a n á l i s i s d e l g e n o m a d e la v i d r e v e l a q u e s ó l o e x i s t i r í a n e s t o s g e n e s en
la c l a s e y q u e s e e n c o n t r a r í a n en c o p i a ú n i c a . S e c o r r e l a c i o n a n s u s
p a t r o n e s d e e x p r e s i ó n c o n l o s e v e n t o s m i c r o s c ó p i c o s o b s e r v a d o s en
e l d e s a r r o l l o d e p é t a l o s y e s t a m b r e s . A n a l i z a m o s la r e g u l a c i ó n d e
e s t o s g e n e s p o r p o l i n i z a c i ó n . A d e m á s , i d e n t i f i c a m o s la e x p r e s i ó n d e
VvTM6
en f r u t o y s e m i l l a , s i e n d o é s t a la p r i m e r a e v i d e n c i a d e q u e un
g e n d e c l a s e B, s e e x p r e s e t a m b i é n d u r a n t e el d e s a r r o l l o y la
m a d u r a c i ó n del fruto. Adicionalmente, identificamos distintos genes
i n v o l u c r a d o s en f l o r a c i ó n y d e s c r i b i m o s s u s p a t r o n e s d e e x p r e s i ó n ,
e n c o n t r a n d o g e n e s q u e s e e n c o n t r a r í a n t a n t o río a r r i b a c o m o a b a j o
d e la c l a s e B . 0 7 G E N O M A 0 1 , C o n s o r c i o T e c n o l ó g i c o d e la F r u t a ,
Conicyt.
1
1
2
2
1
1
2
1
Anual
ANALISIS GENOMICO
FUNCIONAL DEL DESARROLLO
DEL
P O L E N E N Arabidopsis
thaiiana
( F u n c t i o n a l g e n o m i c a n a l y s i s of
p o l l e n d e v e l o p m e n t in Arabidopsis
thaiiana)
L e ó n , G . . Centro de
Biotecnología
Vegetal, Universidad
Andrés Bello .
Patrocinante:
J o r d a n a . X..
1
1
El
desarrollo
del
gametofito
masculino
de
las
plantas,
o
m i c r o e s p o r o g é n e s i s , e s un p r o c e s o c o m p l e j o q u e f i n a l i z a c o n la
p r o d u c c i ó n d e l o s g r a n o s d e p o l e n . A p e s a r d e la i m p o r t a n c i a
b i o l ó g i c a y a g r o n ó m i c a del p o l e n , n u e s t r o c o n o c i m i e n t o d e l o s
aspectos moleculares q u e gobiernan su desarrollo es escaso. La
principal razón para e s t o es q u e se h a n identificado p o c o s g e n e s
e s e n c i a l e s p a r a e s t e p r o c e s o , la m a y o r í a a t r a v é s d e l a n á l i s i s d e
m i l e s d e p l a n t a s m u t a n t e s a Ja v e z , u n a e s t r a t e g i a l e n t a y p o c o
e f i c i e n t e . P o r o t r a p a r t e , el a n á l i s i s f u n c i o n a l d e f a m i l i a s g é n i c a s a
p e r m i t i d o i d e n t i f i c a r o t r o s g e n e s c u y a f u n c i ó n e s e s e n c i a l p a r a la
m i c r o g a m e t o g é n e s i s ; sin e m b a r g o , en e s t e c a s o el f o c o d e la
i n v e s t i g a c i ó n n o e s el d e s a r r o l l o d e l p o l e n y el f e n o t i p o e s d e t e c t a d o
f o r t u i t a m e n t e . P a r a e n t e n d e r m e j o r la b i o g é n e s i s d e l p o l e n , h e m o s
d e s a r r o l l a d o u n a e s t r a t e g i a d i r i g i d a al d e s c u b r i m i e n t o d e g e n e s
e s e n c i a l e s p a r a su d e s a r r o l l o , b a s a d a e n el a n á l i s i s d e p e r f i l e s d e
acumulación de tmRNAs en diferentes etapas de este p r o c e s o seguido
d e un s e n c i l l o a n á l i s i s f e n o t í p i c o d e p l a n t a s m u t a n t e s e n g e n e s
candidatos. Usando esta estrategia h e m o s descubierto nuevos genes
e s e n c i a l e s p a r a el d e s a r r o l l o d e l p o l e n , l o s q u e h e m o s l l a m a d o
DPD
(DEFECTIVE
ÍN
POLLEN
DEVELOPMENT).
Actualmente
nos
e n c o n t r a m o s c a r a c t e r i z a n d o f u n c i o n a l m e n t e a l o s g e n e s DPD
y
e s p e r a m o s contribuir d e m a n e r a significativa a e n t e n d e r mejor los
a s p e c t o s m o l e c u l a r e s la m i c r o g a m e t o g é n e s i s .
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
Comunicaciones
Ubres Orales
XXXI Reunión
Anual
MICROBIOLOGIA Y VIROLOGIA
CLONALIDAD
DE CEPAS
DE ACINETOBACTER
BAUMANNII
PRODUCTORAS
DE
CARBAPE NEMAS AS
AISLADAS
EN
H O S P I T A L E S C H I L E N O S ( C l o n a l i t y of
carbapenemase-producer
strains of Acinetobacter baurnannii isolated from Chilean hospitals)
O p a z o , A . , Flores, M . . Bello. H . , D o m í n g u e z , M . , G a r c í a . P. . S a n
Martín, M. . Sakurada, A .
González, G. . Depto Microbiología, Fac.
C s . B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d ' d e . C o n c e p c i ó n . F a c . M e d i c i n a . P.
U n i v e r s i d a d Católica de Chile . L a b . C e n t r a l i z a d o , Hospital Barros
L u c o , U n i d . M i c r o b i o l o g í a , H o s p . Clínico U n i v e r s i d a d de C h i l e .
Patrocinante: Martínez. J..
1
1
3
1
1
4
2
1
1
2
3
4
A c i n e t o b a c t e r b a u r n a n n i i , c o c o b a c i l o Grarn n e g a t i v o no t e r m e n t a d o r ,
es c o n s i d e r a d o un p a t ó g e n o o p o r t u n i s t a y se ha
involucrado
frecuentemente en brotes epidémicos en unidades de cuidados
intensivos.
Es
agente
etiológico
de
septicemia,
neumonía
e
infecciones del tracto urinario en p a c i e n t e s hospitalizados.
Se
c a r a c t e r i z a p o r s e r m u l t i r e s i s t e n t e a l o s a n t i b i ó t i c o s , p o r lo q u e los
c a r b a p e n é m i c o s s o n i m p o r t a n t e s e n el t r a t a m i e n t o d e l a s i n f e c c i o n e s
que
causan.
Estos
betalactámicos
corresponden
a
potentes
c o m p u e s t o s p o r lo q u e h a n s i d o r e s e r v a d o s p a r a el t r a t a m i e n t o d e
pacientes hospitalizados con infecciones graves. Sin embargo,
d u r a n t e la ú l t i m a d é c a d a h a i n c r e m e n t a d o c o n s i d e r a b l e m e n t e el
n ú m e r o d e c e p a s m u l t i r e s i s t e n t e s , c u y o principal m e c a n i s m o de
r e s i s t e n c i a es la p r o d u c c i ó n d e c a r b a p e n e m a s a s , e n t r e e l l a s las
s e r i n - c a r b a p e n e m a s a s y m e t a l o - b e t a l a c t a m a s a s . E n este t r a b a j o se
investigó
la
clonalidad
de
37
cepas
de A.
baurnannii
por
macrorestricción y electroforesis en c a m p o pulsado, en cepas
m u l t i r e s i s t e n t e s a i s l a d a s e n t r e s h o s p i t a l e s d e la R e g i ó n M e t r o p o l i t a n a
y
se
relacionó
los
clones
con
la
producción
de
distintas
c a r b a p e n e m a s a s . La detección de c a r b a p e n e m a s a s
se
realizó
m e d i a n t e la p r u e b a d e H o d g e y la d e m e t a l o - b e t a l a c t a m a s a s p o r
s i n e r g i a entre i m i p e n e m y E D T A . T o d a s las c e p a s a n a l i z a d a s f u e r o n
productoras
de
carbapenemasas,
principalmente
s e r i n - c a r b a p e n e m a s a s . El p r i m e r h o s p i t a l a n a l i z a d o p r e s e n t ó m a y o r
p o l i c l o n a l i d a d (> 7 c l o n e s ) , i n d i c a n d o u n m e j o r m a n e j o d e l a s
i n f e c c i o n e s i n t r a h o s p i t a l a r i a s y q u e la r e s i s t e n c i a s e d i s e m i n a r í a p o r
t r a n s f e r e n c i a h o r i z o n t a l d e g e n e s m á s q u e p o r la d i s e m i n a c i ó n d e
c l o n e s r e s i s t e n t e s . E n los otros c e n t r o s h o s p i t a l a r i o s s ó l o se e n c o n t r ó
de 3 a 4 clones.
E S T U D I O D E T R A N S P O R T E IN V I T R O E N P R O T E O L I P O S O M A S
DE L A S PORINAS OMPD, O M P W Y O M P L D E S A L M O N E L L A
E N T E R I C A SV. TYPHIMURIUM
(In vitro transport studies using
p r o t e o l i p o s o m e s containing O m p D , O m p W or O m p L porins from
Salmonella entérica sv T y p h i m u r i u m ) Gutiérrez, J . l . . Villarreal, J . M . ,
C o l l a o , B. , P a r r a , S . \ A s p e e , A . , S a a v e d r a , C V Laboratorio de
Microbiología
Molecular, Dpto. Ciencias
Biológicas,
Universidad
A n d r é s Bello , Laboratorio de cinética y f o t o q u í m i c a molecular, Dpto.
de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile .
Las bacterias G r a m negativo, están cubiertas por dos m e m b r a n a s ,
u n a i n t e r n a q u e s e p a r a el a m b i e n t e r e d u c t o r del c i t o p l a s m a d e l
a m b i e n t e o x i d a n t e p e r i p l a s m á t i c o . S e p a r a d a d e la m e m b r a n a i n t e r n a
p o r el p e r i p l a s r n a , s e e n c u e n t r a la m e m b r a n a e x t e r n a e n c u y o
c o n t e n i d o proteico e s t á n las p o r i n a s . E s t a s c o r r e s p o n d e n a c a n a l e s
a c u o s o s q u e p e r m i t e n la d i f u s i ó n p a s i v a d e s o l u t o s a t r a v é s d e l o s
q u e s o n i m p o r t a d o s a z ú c a r e s y n u t r i e n t e s e s e n c i a l e s p a r a la b a c t e r i a
a s í c o m o t a m b i é n p e r m i t e n la e n t r a d a d e a l g u n o s t ó x i c o s y
antibióticos.Evidencia genética obtenida en nuestro laboratorio, indica
q u e los g e n e s q u e c o d i f i c a n p a r a las p o r i n a s O m p D , O m p L y O m p W
d e S a l m o n e l l a T y p h i m u r i u m , p a r t i c i p a n e n la r e s i s t e n c i a a m e t i l
v i o l ó g e n o ( M V ) lo q u e s u g i e r e u n rol d u a l d e e s t a s p r o t e í n a s ,
p e r m i t i e n d o la s a l i d a d e M V al e s p a c i o e x t r a c e l u l a r . P o r o t r o l a d o ,
c u a n d o S a l m o n e l l a se e n c u e n t r a c o l o n i z a n d o s u h o s p e d e r o dentro del
m a c r ó f a g o , c o m o p r i m e r a b a r r e r a d e f e n s i v a el g l u t a t i ó n r e d u c i d o q u e
e s t á e n el c i t o p l a s m a p u e d e s e r e x p o r t a d o al e s p a c i o e x t r a c e l u l a r , p o r
m e c a n i s m o ( s ) a ú n n o c a r a c t e r i z a d o ( s ) . E n e s t e t r a b a j o s e d e m o s t r ó in
v i t r o q u e O m p D y O m p W p e r m i t e n la d i f u s i ó n d e M V
desde
p r o t e o l i p o s o m a s reconstituidos. A diferencia de O m p L que no fue
c a p a z d e p e r m i t i r la s a l i d a d e e s t e t ó x i c o . A l u t i l i z a r g l u t a t i ó n c o m o
s u s t r a t o e n v e z d e M V , e l c a n a l O m p D p e r m i t e la s a l i d a d e e s t a
m o l é c u l a . L o que sugiere q u e esta proteína d e m e m b r a n a podría ser
responsable
in
vivo
de
la
exportación
de
glutatión
al
extracelular.Financiamiento F O N D E C Y T 1085131; DI-UNAB 39-06/R,
08-14/1.
1
1
1
2
1
2
LOS
COMPONENTES
DESHIDROGENASA
DE
RESISTENCIA A TELURITO
DEL
COMPLEJO
PIRUVATO
Aeromonas
caviae
MEDIAN
D E P O T A S I O E N Escherichia
coii
(The components
of t h e p y r u v a t e
dehydrogenase
complex
of
Aeromonas
caviae
m e d í a t e r e s i s t a n c e t o p o t a s s i u m t e l l u r i t e in
Escherichia
coii.) M o l i n a , R . , C a s t r o , M . , D í a z , W . , V á s q u e z . C . .
L a b o r a t o n o de M i c r o b i o l o g í a M o l e c u l a r . F a c u l t a d de Q u í m i c a y
Biología. U S A C H .
El t e l u r i t o d e p o t a s i o ( K T e 0 ) e s t ó x i c o p a r a la m a y o r í a d e l o s
o r g a n i s m o s . A la f e c h a s e d e s c o n o c e el m e c a n i s m o p o r el c u a l e j e r c e
s u t o x i c i d a d y s e s u g i e r e q u e p a r t e d e ella e s t a r í a d a d a p o r
g e n e r a c i ó n de e s t r é s o x i d a t i v o . U n a v í a de d e s i n t o x i c a c i ó n de K T e 0
es la r e d u c c i ó n d e t e l u r i t o a t e l u r o e l e m e n t a l ( T e ) , d e b a j a o n u l a
toxicidad. E n nuestro laboratorio aislamos una cepa de
Aeromonas
caviae r e s i s t e n t e a K T e 0 q u e r e d u c e e n z i m á t i c a m e n t e t e l u r i t o a T e .
L a p u r i f i c a c i ó n d e e s t a a c t i v i d a d i d e n t i f i c ó el c o m p l e j o d e la p i r u v a t o
d e s h i d r o g e n a s a ( P D H ) c o m o r e s p o n s a b l e d e la r e d u c c i ó n d e t e l u r i t o .
S e d e t e r m i n ó q u e la e x p r e s i ó n d e l o s g e n e s q u e e s p e c i f i c a n l o s
c o m p o n e n t e s E 1 , E 2 y E 3 del c o m p l e j o P D H d e A. caviae
{aceE,
aceFy
IpdA r e s p e c t i v a m e n t e ) c o n f i e r e r e s i s t e n c i a a K T e 0 e n E. coii.
E s t o e s t á d e a c u e r d o c o n la o b s e r v a c i ó n q u e c é l u l a s d e E.
coii
deficientes e n cada uno de estos g e n e s exhiben u n a gran sensibilidad
al t ó x i c o , la q u e e s r e v e r t i d a p o r c o m p l e m e n t a c i ó n c o n l o s r e s p e c t i v o s
g e n e s . U t i l i z a n d o c é l u l a s r e p o r t e r a s d e m o s t r a m o s q u e la e x p r e s i ó n d e
los g e n e s d e A. caviae
d i s m i n u y e n los niveles de e s p e c i e s reactivas
de
oxígeno
en
E.
coii.
Financiado
por
Fondecyt
1060022,
Dicyt-USACH.
1
1
1
1
1
2
3
2
3
0
0
2
3
2
REGULACIÓN
SINTETASA
DE
DE
LA
A.
(Regulation of G l u R S I
1
A. ,
2
Ibba,
M. ,
Molecular
ACTIVIDAD
ferrooxidans
of A
LA
EL
GLUTAMIL-tRNA
ESTADO
REDOX.
ferrooxidans b y the redox status) Katz,
1
Orellana,
ICBM.
DE
POR
3
O. .
Programa
de
de
Medicina,
Universidad
Facultad
Biología
Celular
y
1
de
Chile ,
2
Department of Microbiology, Ohio State University, USA. .
El h e m o
cumple
un papel importante
en las células d e b i d o a
que
participa en diversos p r o c e s o s m e t a b ó l i c o s . Sin e m b a r g o , t a m b i é n es
capaz
de
generar
especies
reactivas
de
o x í g e n o , p o r lo q u e
sus
n i v e l e s s e m o d u l a n f i n a m e n t e . El h e m o s e p r o d u c e a p a r t i r del á c i d o
óaminolevulínico
Acidithiobaciiius
y
tRNA
en
( A L A ) . E n la m a y o r í a d e las b a c t e r i a s ,
ferrooxidans,
una
vía
incluyendo
el A L A s e s i n t e t i z a a p a r t i r d e g l u t a m a t o
catalizada
por
tres
enzimas:
Glutamil-tRNA
sintetasa (GluRS), Glutamil-tRNA reductasa y Glutamatosemialdehido
a m i n o t r a n s f e r a s a . E s t u d i o s p r e v i o s i n d i c a n q u e e n A. ferrooxidans
la
s í n t e s i s d e h e m o s e r e g u l a e n p a r t e m e d i a n t e la m o d u l a c i ó n d e la
a c t i v i d a d d e la G l u R S I , u n a d e l a s d o s G l u R S p r e s e n t e s e n
microorganismo,
resultados
sin
afectar
i n d i c a n q u e in
vitro
su
concentración
celular.
este
Nuestros
la h e m i n a , u n a n á l o g o d e
hemo,
p u e d e i n h i b i r a c o n c e n t r a c i o n e s r e l a t i v a m e n t e a l t a s a la G l u R S I
embargo,
el
peróxido
de
hidrógeno
provoca
un
efecto
Sin
inhibidor
s i n é r g i c o c o n la h e m i n a . E s t e e f e c t o s e r e v i e r t e p o r la a c c i ó n d e D T T .
Estudios d e m o d i f i c a c i ó n c o n D T N B m u e s t r a n que sólo tres de las
cuatro
cisteínas
d e la G l u R S
son accesibles
y una
sola de
estas
c i s t e í n a s s e o x i d a p o r la m e z c l a d e h e m i n a y H 0 . A c t u a l m e n t e
2
2
se
r e a l i z a n e x p e r i m e n t o s p a r a i d e n t i f i c a r la c i s t e í n a o x i d a d a y el e s t a d o
r e d o x in vivo
A.K.
Financiado por Fondecyt
1070437 y becas Conicyt a
Sociedad
.
de Bioquímica y Biología Molecular
UTILIZACIÓN D E H E R R A M I E N T A S BIOINFORMATICAS PARA LA
IDENTIFICACIÓN D E F U N C I O N E S GÉNICAS Q U E PODRÍAN S E R
R E G U L A D A S P O R E L S I S T E M A Q U O R U M S E N S I N G afel/afeR
DE
Acidithiobaciiius
ferrooxidans
( U s i n g bioinformatic tools to identify
g e n e s t h a t m i g h t b e r e g u l a t e d b y t h e a fel/a fe R q u o r u m s e n s i n g s y s t e m
f r o m Acidithiobacillus
ferrooxidans)
B a n d e r a s , A . , G u i l i a n i , Ñ.V L a b
Microbiología
Molecular y Biotecnología.
F a c u l t a d de
Ciencias.
U n i v e r s i d a d d e Chile, Ins. D i n á m i c a Celular y B i o t e c n o l o g í a ( I C D B ) .
P a t r o c i n a n t e : P r e l l e r . A..
C O M P R E N D I E N D O L A VIDA Q U I M I O L I T O A U T O T R O F I C A A pH 1
A T R A V E S D E L A G E N O M I C A C O M P A R A T I V A (Insights into
c h e m o l i t h o a u t o t r o p h i c life at p H 1 u s i n g c o m p a r a t i v e g e n o m i c s )
Q u a t r i n i , R. , H o l m e s , D . , V a l d é s , J . . C e n t r o d e B i o i n f o r m á t i c a y
B i o l o g í a G e n ó m i c a , F u n d a c i ó n C i e n c i a p a r a la V i d a . P r o g r a m a d e
d o c t o r a d o en B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d A n d r é s B e l l o . \ C e n t r o d e
B i o i n f o r m á t i c a y B i o l o g í a G e n ó m i c a , F u n d a c i ó n C i e n c i a p a r a la V i d a .
P r o g r a m a d e d o c t o r a d o en B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d A n d r é s B e l l o . .
P a t r o c i n a n t e : J e d l i c k i . E..
L a s f u n c i o n e s fisiológicas r e g u l a d a s por el s i s t e m a q u o r u m s e n s i n g
(QS)
mediado
por
el
par
génico
afel/afeR
en
la
bacteria
quimiolitoautótrofa
Acidithiobaciiius
ferrooxidans
son
aún
desconocidas.
Como
se
ha
descrito
en
otras
bacterias
G r a m - n e g a t i v a s . e s p o s i b l e q u e e n e s t e m i c r o o r g a n i s m o el Q S r e g u l e
la p r o d u c c i ó n d e e x o p o l i s a c á r i d o s y la f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s ,
a m b o s f e n o t i p o s r e l a c i o n a d o s c o n el p r o c e s o d e b i o l i x i v i a c i ó n N o s
p r o p u s i m o s r e a l i z a r un a n á l i s i s b i o i n f o r m á t i c o d e la
secuencia
n u c l e o t í d i c a d e l g e n o m a d e A. ferrooxidans
A T C C 2 3 2 7 0 con el
o b j e t i v o d e i d e n t i f i c a r s i t i o s d e u n i ó n p u t a t i v o s p a r a el r e g u l a d o r
transcripcional de Q S AfeR. Para esto, c o n s t r u i m o s un conjunto de
Modelos Ocultos de Markov (HMM)
b a s a d o s en la
secuencia
o p e r a d o r a del g e n afei. L o s s i t i o s d e u n i ó n p u t a t i v o s i d e n t i f i c a d o s en la
b ú s q u e d a fueron agrupados de acuerdo a diferentes parámetros,
i n c l u y e n d o su p o s i c i ó n r e l a t i v a al c o d ó n d e i n i c i o m á s c e r c a n o y s u
v e c i n d a d con p r o m o t o r e s s i g m a 70. Se identificaron 7 6 g e n e s q u e
r e p r e s e n t a n 2 . 4 % d e los O R F s t o t a l e s d e A. ferrooxidans.
Éstos
codifican para proteínas que pertenecen a diferentes categorías
f u n c i o n a l e s . I n t e r e s a n t e m e n t e , y en d i r e c t a r e l a c i ó n c o n
nuestra
h i p ó t e s i s d e t r a b a j o , se i d e n t i f i c a r o n t r e s g e n e s c o d i f i c a n t e s p a r a
p r o t e í n a s q u e p a r t i c i p a n en el m e t a b o l i s m o d e p o l i s a c á r i d o s . A d e m á s ,
s e e n c o n t r a r o n 5 r e g u l a d o r e s t r a n s c r i p c i o n a l e s p e r t e n e c i e n t e s a la
familia LysR y dependientes de sigma 54. Estos resultados abren
n u e v a s p e r s p e c t i v a s r e s p e c t o del rol q u e p o d r í a t e n e r el s i s t e m a Q S
afel/afeR
de
A.
ferrooxidans.
Sin
embargo,
estos
resultados
bioinformáticos deberán ser c o n f i r m a d o s con e x p e r i m e n t o s biológicos.
L a s m i c r o o r g a n i s m o s p a r t i c i p a n t e s en p r o c e s o s
biogeoquímicos
a s o c i a d o s a la b i o m i n e r í a s e c a r a c t e r i z a n por p r o l i f e r a r en a m b i e n t e s
ácidos y por obtener energía d e s d e fuentes inorgánicas de hierro y
a z u f r e . El e s t u d i o d e e s t o s m i c r o o r g a n i s m o s y d e los p r o c e s o s
m o l e c u l a r e s r e s p o n s a b l e s d e la b i o l i x i v i a c i ó n h a n s i d o i m p e d i d o s p o r
la f a l t a d e u n s i s t e m a d e m a n i p u l a c i ó n g e n é t i c a . Sin e m b a r g o , la
s e c u e n c i a c i ó n d e los g e n o m a s d e a l g u n o s m i e m b r o s d e e s t e
consorcio
de
microorganismos
ha
permitido
descifrar
parte
i m p o r t a n t e d e los p r o c e s o s m e t a b ó l i c o s r e l e v a n t e s p a r a el p r o c e s o
d e b i o l i x i v i a c i ó n . C o n e l fin d e o b t e n e r u n a v i s i ó n m a s a m p l i a y
c o m p l e t a de las p o t e n c i a l e s a c t i v i d a d e s biológicas y su i m p a c t o en
los p r o c e s o s b i o g e o q u í m i c o s p r e s e n t e s en el n i c h o d e b i o l i x i v i a c i ó n
h e m o s s e c u e n c i a d o y analizado a través de diversas herramientas
b i o i n f o r m á t i c a s l o s g e n o m a s d e A. c a l d u s y A . t h i o o x i d a n s . L a
i n f o r m a c i ó n g e n e r a d a s e a n a l i z ó en c o n j u n t o c o n la i n f o r m a c i ó n
d i s p o n i b l e p a r a el g e n o m a d e A . f e r r o o x i d a n s m e d i a n t e h e r r a m i e n t a s
d e g e n ó m i c a c o m p a r a t i v a . L o s r e s u l t a d o s o b t e n i d o s m u e s t r a n la
p r e s e n c i a d e d i s t i n t o s m e c a n i s m o s p a r a la o b t e n c i ó n d e e n e r g í a a
partir de s u s t r a t o s m i n e r a l e s , a s i m i l a c i ó n de n u t r i e n t e s , m o t i l i d a d y
quimiotaxis.
El
análisis
de
los
tres
genomas
del
genero
A c i d i t h i o b a c i l l u s p e r m i t i ó e s t a b l e c e r y a n a l i z a r el ? p a n g e n o m a ?
( g e n o m a comunitario) d e este g e n e r o . Esta información nos permitió
identificar
funciones
conservadas
en
estas
bacterias
y
la
e s t r u c t u r a c i ó n d e r e d e s d e r e g u l a c i ó n t r a n s c r i p c i o n a l y m e t a b ó l i c a , lo
q u e en s u c o n j u n t o n o s e n t r e g a n l a s b a s e s f u n d a m e n t a l e s p a r a
descifrar
el
potencial
impacto
ecofisiológico
de
estos
microorganismos.
LA PROTEINA
H U R , E S U N M O D U L A D O R D E L INICIO D E L A
T R A D U C C I O N M E D I A D A P O R I R E S E N HIV-1 Y H C V ( T h e E l a v - l i k e
p r o t e i n , H u R , is a m o d u l a t o r of H I V a n d H C V
IRES-mediated
translation
initiation.) R i v a s , A . , R a m d o h r ,
P.\
Vallejos,
M. ,
D o r m o y - R a c l e t , V , R o d r í g u e z , F. , V a l i e n t e , F. ,
Huidobro-Toro,
J . P . , Gallouzi, I. , L ó p e z - L a s t r a , M . . L a b o r a t o r i o de
Virología
M o l e c u l a r , F a c u l t a d de M e d i c i n a , Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de
C h i l e , D e p a r t m e n t of B i o c h e m i s t r y , F a c u l t y of M e d i c i n e ,
McGill
University, Montreal, Q u e b e c , C a n a d á , D e p a r t a m e n t o de Fisiología,
Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de
Chile, Santiago, Chile .
IDENTIFICACIÓN D E UN SITIO I N T E R N O D E E N T R A D A D E L
RIBOSOMA EN LA REGIÓN 5'UTR DEL mRNA COMPLETO DEL
V I R U S D E L T U M O R M A M A R I O M U R I N O ( I d e n t i f i c a t i o n of an I R E S
e l e m e n t in t h e m R N A of m u r i n e m a m m a r y t u m o r v i r u s ) V a l l e j o s , M. ,
R a m d o h r , P. , T a p i a , K. , V a l i e n t e - E c h e v e r r í a , F. , L o p é z - L a s t r a , M . .
Laboratorio
de
Virología
Molecular,
C e n t r o de
Investigaciones
M é d i c a s , F a c u l t a d de Medicina, Pontificia Universidad Católica de
Chile, Santiago, Chile .
1
1
1
2
3
1
3
1
2
1
1
2
3
T h e h u m a n embryonic lethal abnormal visión (ELAV)-like protein,
H u R , is k n o w n t o e n h a n c e m R N A s t a b i l i t y t h r o u g h b i n d i n g to
c o n s e n s u s A U - r i c h e l e m e n t s in 3 - U T R s e q u e n c e s . M o s t r e c e n t l y H u R
h a s a l s o b e e n f o u n d t o p a r t i c í p a t e in t r a n s l a t i o n a l c o n t r o l of s p e c i f i c
m R N A s . In t h i s s t u d y w e s h o w t h a t H u R
p a r t i c i p a t e s in t h e
t r a n s l a t i o n a l c o n t r o l of t h e H I V - 1 a n d H C V I R E S e l e m e n t s . H u R
f u n c t i o n s a s a r e p r e s s o r o f H I V - 1 I R E S a c t i v i t y , h o w e v e r it a c t s a s an
a c t i v a t o r of H C V I R E S . T h e e f f e c t of H u R o n H I V - 1 a n d H C V
IRES-driven
translation
was
evaluated
in
three
independent
experimental m o d e l s y s t e m s , rabbit reticulocyte lysate. H e L a cells,
and Xenopus
leavis
oocytes.
using
both
overexpression
and
k n o c k d o w n a p p r o a c h e s . F u r t h e r m o r e , r e s u l t s o b t a i n e d in X e n o p u s
l a e v i s o o c y t e s s u g g e s t t h a t H u R m e d i a t e d r e g u l a t i o n of b o t h H I V - 1
a n d H C V I R E S e s d o e s n o t r e q u i r e t h e n u c l e a r t r a n s l o c a t i o n of t h e
I R E S - c o n t a i n i n g R N A s . T o g e t h e r our o b s e r v a t i o n s identify H u R as a
m o l e c u l a r m o d u l a t o r of b o t h H I V - 1 a n d H C V I R E S e l e m e n t s a n d y i e l d
novel
insights
into
the
role
of t h i s
cellular
protein
in
the
p o s t - t r a n s c r i p t i o n a l r e g u l a t i o n of v i r a l g e n e e x p r e s s i o n . S u p p o r t e d by
F O N D E C Y T - 1 0 6 0 6 5 5 , J E A I - I R D . J P H - T is a m e m b e r of M I F A B ; M L L
is m e m b e r of t h e I n s t i t u t o M i l e n i o d e I n m u n o l o g í a e I n m u n o t e r f :
la
1
1
2
2
1
1
1
1
1
1
El v i r u s d e l t u m o r m a m a r i o m u r i n o ( M M T V ) m i e m b r o d e la f a m i l i a
R e t r o v i r i d a e , es r e s p o n s a b l e del c á n c e r m a m a r i o de r a t ó n . E n este
e s t u d i o e v a l u a m o s si la r e g i ó n 5' n o t r a d u c i d a ( 5 ' U T R ) d e l m R N A d e
M M T V p o s e e un sitio i n t e r n o d e e n t r a d a de r i b o s o m a s ( I R E S ) .
N u e s t r a h i p ó t e s i s s e s u s t e n t a e n la p r e s e n c i a d e e l e m e n t o s I R E S en
o t r o s m R N A r e t r o v i r a l e s y r e p o r t e s q u e d e s c r i b e n q u e d u r a n t e la
i n f e c c i ó n v i r a l la p r o t e a s a d e M M T V e s c a p a z d e p r o c e s a r e l f a c t o r d e
i n i c i a c i ó n e l F 4 G i n h i b i e n d o a s í la t r a d u c c i ó n c a p - d e p e n d i e n t e , sin
a f e c t a r la t r a d u c c i ó n
IRES
d e p e n d i e n t e . U t i l i z a n d o un
mRNA
b i c i s t r ó n i c o q u e p o s e e e n su r e g i ó n i n t e r c i s t r ó n i c a e l s e g m e n t o 5 ' U T R
del m R N A de M M T V y lisado de reticulocitos d e conejo (RRL) c o m o
s i s t e m a d e t r a d u c c i ó n in v i t r o , d e m o s t r a m o s q u e la r e g i ó n 5 ' U T R d e
M M T V e s c a p a z d e i n i c i a r la s í n t e s i s d e p r o t e í n a s b a j o c o n d i c i o n e s
e x p e r i m e n t a l e s en las q u e la t r a d u c c i ó n c a p - d e p e n d i e n t e
esta
i n h i b i d a , c o m o s o n la p r e s e n c i a d e la p r o t e a s a L del v i r u s d e la f i e b r e
a f t o s a J F M D V ) y e n la p r e s e n c i a d e a n á l o g o d e c a p . L o s r e s u l t a d o s
d e l o s e n s a y o s in v i t r o s e r a t i f i c a r o n en u n c o n t e x t o c e l u l a r m e d i a n t e
e n s a y o s de t r a n s f e c c i ó n en c é l u l a s N M u M G y C o s - 7 . En r e s u m e n
e s t e e s t u d i o h a p e r m i t i d o i d e n t i f i c a r un n u e v o I R E S r e t r o v i r a l p r e s e n t e
en la r e g i ó n 5 ' U T R del m R N A d e l M M T V . P r o y e c t o F O N D E C Y T
1060655. M V y FV son becarios C O N I C Y T . PR e s becario U N A B .
XXXI Reunión
Anual
SEÑALIZACION CELULAR Y REGULACIÓN METABÓLICA
CA2+ MEDIA LA INCORPORACIÓN
POR
INSULINA
EN
DE GLUCOSA
CARDIOMIOCITOS Y
ESTIMULADA
L6GLUT4MYC
(Ca2+
m e d i a t e s i n s u l i n - s t i m u l a t e d g l u c o s e u p t a k e in c a r d i a c m y o c y t e s
L6GLUT4myc)
Contreras-Ferrat,
A.\
1
Jaimovich,
E. ,
1
and
2
Klip,
A. ,
1
L a v a n d e r o , S . . F O N D A P C E M C , U n i v e r s i d a d de C h i l e , T h e Hospital
for Sick C h i l d r e n , T o r o n t o , O N , C a n a d á
2
RIC-8B
ES
TRANSLOCADO
1
Oíate,
J. ,
por
de
Ca2+
se
MV. .
Laboratorio
de
Investigación de E s t u d i o s A v a n z a d o s
Ric-8
del
este trabajo
1
Hinrichs,
celular.
En
A
LA
ISOPROTERENOL
m e r n b r a n e in r e s p o n s e t o i s o p r o t e r e n o l a n d c a r b a c h o l ) P a s t e n ,
Regulación Génica. .
participación
CITOSOL
Y C A R B A C O L ( R I C - 8 B is t r a n s l o c a t e d f r o m t h e c y t o s o l t o t h e p l a s m a
m o v i l i z a c i ó n d e los t r a n s p o r t a d o r e s d e g l u c o s a G L U T 4 a la s u p e r f i c i e
La
EL
Genética
P.\
Molecular.
F a c u l t a d de C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n . Anillo
I n s u l i n a e s t i m u l a la c a p t a c i ó n d e g l u c o s a e n c é l u l a s m u s c u l a r e s
investigada.
DESDE
MEMBRANA PLASMATICA EN RESPUESTA A
en
este
evaluó
el
proceso
papel
no
del
ha
Ca2+
sido
en
la
i n c o r p o r a c i ó n de glucosa inducida p o r insulina, u s a n d o F L U 0 3 - A M y
en Señalización Celular y
1
es
una
C elegans,
canónica
familia
que
de
proteínas
cumplen
mediada
por
un
rol
descubiertas
importante
proteínas
G.
Al
en
inicialmente
en
la s e ñ a l i z a c i ó n
no
realizar
la
caracterización
c a p t a c i ó n de glucosa ( 3 H - 2 D G ) e n c a r d i o m i o c i t o s y cuantificación del
f u n c i o n a l d e la i s o f o m n a R i c 8 B h u m a n a , c l o n a d a r e c i e n t e m e n t e
G L U T 4 m y c en superficie de células L 6 G L U T 4 m y c . Insulina indujo un
n u e s t r o laboratorio, se e n c o n t r ó q u e ésta no fue c a p a z de i n c r e m e n t a r
aumento
p o r sí s o l a l o s n i v e l e s d e c A M P al s e r e x p r e s a d a e n c é l u l a s H E K , p e r o
bifásico
del
calcio
m á x i m o e n la i n t e n s i d a d d e
intracelular
([Ca2+]i),
fluorescencia
alcanzando
un
relativa de 2 2 4 ± 2 3 y 219
± 38 ( [ A F / F ] x 1 0 0 ) en m e d i o c o n y s í n - C a 2 + , r e s p e c t i v a m e n t e , s i e n d o
inhibido
por
genisteina
en
cardiomiocitos.
activada
por
el
complejo
Gas,
Isoproterenol-receptor
la
(3-adrenérgico. D a d o que R I C - 8 es u n a proteína cítosólica y q u e tiene
la c a p a c i d a d d e i n t e r a c c i o n a r c o n d i f e r e n t e s t i p o s d e s u b u n i d a d e s G a .
sin-Ca2+
nosotros
efecto
estimuló
previamente
c a p t a c i ó n d e 3 H - 2 D G e n 3,2 ± 0,2 y 3,5 ± 0 , 3 v e c e s e n m e d i o c o n y
en c a r d i o m i o c i t o s - E s t e
Insulina
s í d e p o t e n c i a r a t r a v é s d e s u a c t i v i d a d G E F a la s u b u n i d a d
en
fue inhibido
por
Indinavir,
citocalasina, B A P T A - A M , A k t i l / 2 , Adpark-ct, LY-294002, U-73122
y
quisimos
comparar
la
localización
subcelular
de
esta
proteína en condiciones no e s t i m u l a d a s y tratadas con agonistas para
2 - A P B . E n c é l u l a s L 6 G L U T 4 m y c , i n s u l i n a a u m e n t ó el t r a n s p o r t a d o r
distintos
e n superficie
cuales fueron incubadas con y sin Isoproterenol y Carbacol, ligandos
2,1 ± 0,2 y 2 , 0 ± 0,2 v e c e s e n m e d i o c o n y s i n - C a 2 + ,
G P C R s . Para
ello se t r a n s f e c t a r o n c é l u l a s H E K 2 9 3 T ,
las
r e s p e c t i v a m e n t e . B A P T A - A M , A k t i 1/2. L Y 2 9 4 0 0 2 y 2 - A P B i n h i b i e r o n
que
este efecto parcialmente.
r e s p e c t i v a m e n t e . Los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s indican q u e R I C - 8 B no se
Estos
resultados
s u g i e r e n q u e el
Ca2+
se
unen
l i b e r a d o d e s d e c o m p a r t i m i e n t o s i n t r a c e l u l a r e s r e g u l a el t r a n s p o r t e d e
encuentra
glucosa
estimuladas
inducido
por
insulina
1080436, Gradúate Student's
FONDAP
1501006,
FONDECYT
Exchange Program, Canadá. ACF
es
becano doctorado-CONI.CYT
asociado
diferentes
con
a receptores
que
activan
a la m e m b r a n a
y que
transloca
a la
a las
proteínas
plasmática
membrana
Gs
interaccionar
publicados,
que
con
las
DE
GLUCOSA
indican
subunidades
Ga
Gq
en condiciones
no
al s e r a c t i v a d a s
las
proteínas G p o r s u s respectivos G P C R s . Ello
resultados
y
que
concuerda
Ric8
sólo
moQoméhcas
y no
puede
con
el
hete rotrím ero.
NUEVAS
ACCIONES
MONONUCLEARES
DE
(New
ALDOSTERONA
actions
of
1
cells) Díaz-Elizondo, J . , Olea-Azar, C.
L
4 , 5
Centro
FONDAP
Farmacéuticas
y
CEMC.
Medicina,
2 , 3
Universidad
2
in
CÉLULAS
mononuclear
1
, Lavandero , S. , Michea,
Facultades
Ciencias Químicas y Farmacéuticas
EN
aldosterone
de Ciencias
de
1
Chile ,
Químicas
Facultades
y
de
3
, U n i v e r s i d a d de Chile , Centro
4
5
F O N D A P C E M C . Facultades d e , Medicina, U n i v e r s i d a d de Chile .
PRIVACIÓN
are
activated
FONDAP
clásicamente
por
un
cardiomyocytes)
Toro,
2
Facultad
Ciencias
Químicas
y
autofagia
2
mediada
con
una
por
chaperonas
secuencia
reconocimiento
al
(AMC)
aminoacídica
receptor
lisosomal
degrada
proteínas
consenso
especifica,
Lamp-2A.
Tanto
n i v e l e s d e la c h a p e r o n a H s c 7 0 c o m o l o s d e L A M P - 2 A s e
de
directamente
acción
sobre
células
sus
células monucleares
gradiente
de
del
efectos
Ficoll
sistema
sobre
las
inmune,
células
en
este
trabajo
mononucleares.Las
de s a n g r e p e r i f é r i c a de rata s e s e p a r a r o n
y
se
trataron
con
aldosterona.
Se
por
evaluó
la
1
B. ,
Farmacéuticas,
g e n ó m i c o . D a d o que se c o n o c e p o c o d e s u s a c c i o n e s y m e c a n i s m o s
investigamos
DE
1
1
La
mecanismo
glucose-deprivated
1
CEMC,
citosólicas
y vascular,
FORMAS
U n i v e r s i d a d d e C h i l e , A l b e r t E i n s t e i n C o l l e g e of M e d i c i n e , N Y , U S A .
previo
renal
in
1
sodio
nivel
DIVERSAS
Rodríguez, A . , T r o n c o s o , R. , C u e r v o , A . M , Lavandero, S. . Centro
A l d o s t e r o n a e s u n a h o r m o n a q u e r e g u l a la h o m e o s t a s i s d e l a g u a y
a
ACTIVA
A U T O F A G I A E N E L C A R D I O M I O C I T O ( D i f f e r e n t t y p e s of a u t o p h a g y
a cambios
los
asocian
e n la v e l o c i d a d d e a c t i v a c i ó n d e la A M C ,
e s p e c i a l m e n t e b a j o c o n d i c i o n e s d e e s t r é s . D a d o q u e el m e t a b o l i s m o
glicolítico e s c l a v e e n el c a r d i o m i o c i t o n e o n a t o , e n e s t e t r a b a j o
estudiaron
los
efectos
de
la
compensan
el
carencia
de
glucosa
sobre
se
procesos
g e n e r a c i ó n d e e s p e c i e s r e a c t i v a s del o x í g e n o ( R O S ) p o r c i t o m e t r í a d e
celulares
f l u j o y / o f l u o r i m e t r í a u s a n d o D C F - D A c o m o s e n s o r . A d e m á s las R O S
balance
s e c a r a c t e r i z a r o n p o r r e s o n a n c i a d e s p i n e l e c t r ó n i c o ( E S R ) u s a n d o el
r e a c t i v a s d e o x í g e n o , la c a r b o n i l a c i ó n
a t r a p a d o r D M P O . L a a c t i v a c i ó n d e la v í a E R K 1 / 2 s e e v a l u ó a t r a v é s
agregados
d e su fosforilación m e d i a n t e W e s t e r n b l o t . A L D O
p r i v a c i ó n , l o s n i v e l e s d e A T P d i s m i n u y e r o n m i e n t r a s q u e los d e L a m p
una
rápida
generación
de
ROS
desde
los
5
(100 nM)
hasta
los
estimuló
15
min,
que
redox
intracelular
proteicos
estrés.
dado
La
que
falta d e
glucosa alteró
aumentaron
el
las
especies
de proteínas y se
generaron
poliubiquitinados.
Después
de
18
h
2 A y H s c 70 a u m e n t a r o n a s í c o m o la m a s a total mitocondrial.
de
Los
p r i n c i p a l m e n t e e n los m o n o c i t o s , e f e c t o q u e f u e p r e v e n i d o t a n t o p o r el
niveles
antagonista
espironolactona
m o d i f i c a r o n . A u n q u e N a c e t i l c i s t e i n a p r e v i n o la g e n e r a c i ó n d e R O S ,
( 5 Á u M ) c o m o p o r N - a c e t i l c i s t e i n a . P o r E S R s e d e t e c t ó la g e n e r a c i ó n
h u b o u n a u m e n t o e n la m u e r t e c e l u l a r e i n h i b i c i ó n d e la d e g r a d a c i ó n
d e la e s p e c i e r a d i c a l a r i a h i d r o x i l o . T a m b i é n a l d o s t e r o n a e s t i m u l ó u n
d e la p r o t e í n a a u t o f á g i c a G F P - L C 3 . S e c o n c l u y e q u e la p r i v a c i ó n d e
aumento
de
del
receptor
de
la f o s f o r i l a c i ó n
de
mineralocorticoide
ERK1/2
a los 5 m i n . E s t o s
datos
s u g i e r e n un posible efecto no g e n ó m i c o d e a l d o s t e r o n a a través de su
receptor
Conicyt.
clásico
en
las
células
mononucleares.JDE
es
becaria
glucosa
de
CHOP
activa
retículo.
BT
1501006
y
24071082.
y
y
BIP,
la A M C
RT
beca
son
marcadores
y la
autofagia
becarios
CONICYT
de
estrés
no
pero no genera estrés
doctorado
apoyo
reticular,
tesis
'CONICYT.
doctoral
se
de
FONDAP
24080060
y
Sociedad
de Bioquímica y Biología
NAD(P)H OXIDASA E S T A I N V O L U C R A D A E N E L A U M E N T O D E L A
E X P R E S I O N Y ACTIVIDAD D E HCAT-1
P O R D-GLUCOSA EN
E N D O T E L I O F E T A L H U M A N O ( N A P H o x i d a s e is i n v o l v e d i n t h e
i n c r e a s e d e x p r e s i ó n a n d activity of h C A T - 1 b y D - g l u c o s e in h u m a n fetal
e n d o t e l i u m ) G o n z á l e z , M. , S o b r e v i a , L. . Laboratorio de Fisiología
Celular y Molecular (CMPL), Departamento d e Obstetricia y Ginecología,
Facultad de Medicina, Escuela d e Medicina. Pontificia Universidad
Católica de C h i l e . Patrocinante: Marcelo L o p e z - L a s t r a .
A l t a D - g l u c o s a a l t e r a la e x p r e s i ó n d e d i v e r s a s p r o t e í n a s , e n t r e é s t a s
y + / h C A T - 1 , i n v o l u c r a d a e n el t r a n s p o r t e d e L - a r g i n i n a , y N A D ( P ) H
o x i d a s a , i n v o l u c r a d a e n la s í n t e s i s d e e s p e c i e s r e a c t i v a s d e r i v a d a s d e l
oxígeno ( R O S ) en endotelio de vena umbilical humana ( H U V E C ) .
E s t u d i a m o s c a m b i o s en el p r o t e o m a (electroforesis b i d i m e n s i o n a l ) p o r
D-glucosa (25 m M , 24 horas) e insulina (1 n M , 8 horas) y los efectos de
e s t a s m o l é c u l a s e n la s í n t e s i s d e R O S , m R N A d e h C A T - 1 y t r a n s p o r t e
d e L-arginina e n H U V E C , en ausencia y e n presencia d e apocinina (10
Á u M , inhibidor d e N A D ( P ) H o x i d a s a ) . A l t a D - g l u c o s a a u m e n t ó la síntesis
d e R O S , e l n i v e l d e h C A T - 1 m R N A y el t r a n s p o r t e d e L - a r g i n i n a . E s t e
efecto de D-glucosa fue bloqueado por apocinina e insulina. La síntesis
d e R O S fue disminuida p o r insulina, un efecto q u e no fue bloqueado p o r
a p o c i n i n a . T a n t o alta D - g l u c o s a c o m o i n s u l i n a m o d i f i c a n l a e x p r e s i ó n d e
diferentes p r o t e í n a s e n H U V E C . El a u m e n t o d e la e x p r e s i ó n y a c t i v i d a d
de hCAT-1 podría ser mediado por R O S derivado de N A D ( P ) H oxidasa.
L a inhibición de los efectos de D-glucosa p o r insulina podrían deberse a
una
inhibición
de
la
actividad
de
NAD(P)H
oxidasa
en
HUVEC.FONDECYT
1070865,
1080534, 7080139, 7070249.
Beca
CONICYT 23070213.
1
1
1
INHIBICIÓN
DE
L A ACTIVIDAD
AUTOFOSFORILACIÓN
Inhibition
of
EN
SU
Enzymatic
Activity
1
of
1
Autophosphorylation) Budini,
JE. .
ENZIMÁTICA
EXTREMO
CK1a
CK1a
by
es
una
serina/treonina
subfamilia integrada
1
, G . , Jedlicki, A . , Allende,
Celular y Molecular, Facultad de
proteína
por 6 isoformas
quinasa
por genes
1
1
2
1
2
cultured cardiomyocytes) P e d r o z o , Z .
una
distintos
1 , 2
C . \ Donoso, P.
Molecular,
Centro
que conforma
codificadas
1
P O R DEGRADACIÓN D E L R E C E P T O R D E RYANODINA TIPO 2 E N
CULTIVOS
D E C A R D I O M I O C I T O S ( D e g r a d a t i o n of R y R 2 in
Medicina, Universidad d e Chile. V Patrocinante: Jacob. G..
CK1
REGULACIÓN D E L METABOLISMO ENERGÉTICO CARDIACO
P O R INSULINA Y S U RELACIÓN C O N FUSIÓN Y FISIÓN
M I T O C O N D R I A L ( R e g u l a t i o n of c a r d i a c energetic m e t a b o l i s m b y
i n s u l i n a n d its r e l a t i o n s h i p w i t h m i t o c h o d r i a l f u s s i o n a n d f i s i ó n )
Parra, V . , Morales, C. , Eisner, V. , Zorzano, A . , Lavandero, S. .
Centro F O N D A P C E M C , U n i v e r s i d a d d e Chile, Chile. \ Instituto d e
Investigación Biomédica, Barcelona, España. .
El n ú m e r o , e s t r u c t u r a y f u n c i ó n d e l a s m i t o c o n d r i a s d e p e n d e n d e
eventos d i n á m i c o s y b a l a n c e a d o s de fusión y fisión. Evidencias
r e c i e n t e s m u e s t r a n q u e la m a q u i n a r i a d e l a f u s i ó n m i t o c o n d r i a l
t a m b i é n regula su m e t a b o l i s m o ; sin e m b a r g o , a ú n n o existe u n a
relación directa entre a m b o s p r o c e s o s . D a d o que insulina regula
e n z i m a s c l a v e s d e l m e t a b o l i s m o i n t e r m e d i a r i o del c a r d i o m i o c i t o , e s
p o s i b l e p r o p o n e r q u e e s t a h o r m o n a t a m b i é n c o n t r o l e la m o r f o l o g í a
m i t o c o ridrial. E n
este
trabajo
se
investigaron
parámetros
metabólicos y morfológicos d e mitocondrias de cardiomiocitos d e
r a t a e x p u e s t o s a i n s u l i n a 1-10 n M p o r 0 - 2 4 h. A l u t i l i z a r la s o n d a
m i t o t r a c k e r g r e e n - A M , m i c r o s c o p í a c o n focal y r e c o n s t r u c c i ó n 3 D ,
s e o b s e n / ó q u e i n s u l i n a p r o m o v i ó l a f u s i ó n m i t o c o n d r i a l , lo q u e s e
tradujo e n u n a u m e n t o significativo del v o l u m e n p r o m e d i o del
o r g a n e l o a las 3 h d e t r a t a m i e n t o . El p o t e n c i a l de m e m b r a n a
m i t o c o n d r i a l y el c o n t e n i d o i n t r a c e l u l a r d e A T P s e u t i l i z a r o n p a r a
d e t e r m i n a r el m e t a b o l i s m o m i t o c o n d r i a l , o b s e r v á n d o s e q u e e s t o s
p a r á m e t r o s a u m e n t a r o n d u r a n t e el m i s m o p e r í o d o d e t i e m p o . S e
e s t a b l e c e a s í , p o r p r i m e r a v e z , u n a r e l a c i ó n d i r e c t a e n t r e la
m o r f o l o g í a y la f u n c i ó n m i t o c o n d r i a l , s i e n d o a m b o s
procesos
regulados por insulina. Parra V. es becada C O N I C Y T . F O N D A P
1501006,
FONDECYT
1080436,
Proyecto
Colaboración
Internacional P C I 2 0 0 7 A 7 0 5 1 5 , Ministerio de Educación y Ciencia,
España.
(The
C-terminal
1
M. , Jacob
ICBM, P r o g r a m a de Biología
DE
C-TERMINAL.
Molecular
, Lavandero, S .
ICBM,
Facultad
FONDAP
2 , 4
1 , 2
, Sánchez, G
de Medicina,
CEMC,
2 , 3
, Fernández,
P r o g r a m a de Biología Celular y
1
Universidad
2
Universidad
de Chile ,
de Chile ,
Programa
de
3
Fisiopatología, I C B M , Facultad de Medicina, Universidad de Chile ,
Facultad de Ciencias
Químicas
y Farmacéuticas, Universidad de
4
( C K 1 a , y 1 , y 2 , y 3 5 y s). C K 1 a p u e d e
procesamiento
alternativo
de
generar cuatro variantes p o r
su m R N A
(CK1a.
CK1aL,
CK1aS
y
Chile .
Los canales de calcio/receptores de ryanodina ( R y R 2 ) del retículo
C K I a L S ) . E l e s t u d i o d e la r e g u l a c i ó n d e la a c t i v i d a d e n z i m á t i c a d e C K 1
sarcoplasmático
se
excitación-contracción
ha
centrado
en su
autofosforilación.
Está
demostrado
q u e la
a u t o f o s f o r i l a c i ó n d e l e x t r e m o c a r b o x i l o t e r m i n a l de C K 1 5 y C K 1 s causa
u n a i n h i b i c i ó n d e s u a c t i v i d a d c a t a l í t i c a . P o r e s p e c t r o m e t r í a d e m a s a se
identificaron sitios d e a u t o f o s f o r i l a c i ó n e n e l e x t r e m o carboxilo terminal
d e C K 1 a y s u s variantes. M e d i a n t e la c r e a c i ó n d e m u t a n t e s puntuales y
de
deleción
de
CK1a10-325,
CK1a
(CK1 1-325(S311A,S312A,T321A,T323A),
a
CK1a10-325(S311A.S312A.T321A.T323A)),
se
confirmó
q u e estos s o n los principales sitios de autofosforilación y q u e son los
responsables
pierden
de inhibir
estos
sitios
la a c t i v i d a d
enzimática.
(CK1a10-325(S311A,S312A,T321A,T323A)
CK1a1-325(S311A,S312A,T321A,T323A))
presentan
el doble
Las mutantes
de actividad
no
se
q u e la enzima
autofosfonlan
nativa
que
y
y
(CK1a1-325),
r e s u l t a d o q u e s e r í a e x p l i c a d o p o r el a u m e n t o e n c o n t r a d o e n la e f i c i e n c i a
catalítica
(k
c a t
/K ).
m
Este
es
el
primer
reporte
de
inhibición
por
a u t o f o s f o r i l a c i ó n d e la a c t i v i d a d d e C K 1 a , s u g i r i e n d o q u e este podría s e r
un
mecanismo
estudiadas
N° 1060107.
de
hasta
regulación
ahora.
común
para
Patrocinado
las
por
isoformas
Proyecto
de C K 1
Fondecyt
son protagonistas
del
claves
e n el
cardiomiocito.
acoplamiento
Durante
la
isquemia/re perfusión (l/R) ocurre una rápida disminución del RyR2,
s i n e m b a r g o l a s v í a s d e d e g r a d a c i ó n i m p l i c a d a s se d e s c o n o c e n . E n
estados
fisiológicos
degradación
lisosoma
y
patológicos,
de proteínas
(autofagia).
En
las
intracelulares
este
principales
vías
s o n el p r o t e o s o m a
trabajo
estudiamos
de
y el
las vías
de
d e g r a d a c i ó n d e l R y R 2 e n el c a r d i o m i o c i t o b a j o c o n d i c i o n e s b á s a l e s
y
de
l/R.
Se
utilizaron
cardiomiocitos
D M E / M 1 9 9 bajo 9 5 % aire y 5 % C 0
2
cultivados
en
medio
(condición basal) o expuestos
a l/R s i m u l a d a p o r 8 y 1 6 h , r e s p e c t i v a m e n t e . L a v i d a m e d i a d e l
RyR2
3 5
se
determinó
S-metionina
por
como
ensayos
trazador.
de
Para
pulso
y
determinar
caza
las
usando
vías
de
d e g r a d a c i ó n i m p l i c a d a s s e utilizaron inhibidores del p r o t e o s o m a y la
autofagia.
Los niveles
proteicos
del R y R 2
se determinaron por
W e s t e r n Blot. L a v i d a m e d i a d e l R y R 2 cardiaco fue de 3 0 Á ± 1 2 h,
siendo a u m e n t a d a significativamente p o r inhibidores d e calpaínas
p e r o n o p o r i n h i b i d o r e s d e l p r o t e o s o m a o la a u t o f a g i a . S i n e m b a r g o ,
durante
la
previnieron
condiciones
mediante
l/R
simulada,
la
degradación
básales,
proteasas
el
tipo
sólo
del
RyR2
los
inhibidores .del
RyR2.
se
calpaína,
Se
degradaría
en
proteosoma
concluye
cambio
que
bajo
principalmente
durante
la
l/R
simulada, este canal de calcio/receptor tendría c o m o principal vía
de
degradación
al
proteosoma.FONDECYT
1080481,
FONDAP
1501006, B e c a A T C O N I C Y T 2 4 0 8 0 0 4 4 . Z P e s becaria C O N I C Y T .
XXXI Reunión Anual -
ESTRUCTURA Y FUNCION DE PROTEINAS
E L S E C R E T O M A D E Peniciüium
ELECTROFORESIS
purpurogenum:
ANALISIS
BIDIMENSIONAL
ESPECTROMETRIA
DE
MASAS
(The secretóme
from
coupled
:
mass
spectrometry)
3
Black,
G. ,
1
Navarrete,
2
M. ,
3
Callegari, E. , Z h a n g ,
1
Eyzaguirre,
A
Penicillium
p u r p u r o g e n u m : analysis by t w o d i m e n s i o n a l electrophoresis
to
POR
ACOPLADO
J. . Departamento
de
Ciencias
U S A
2
,
Universidad
de
Northumbna,
Newcastle,
3
Es
FUNCIONALES
group
mapping
of
2
Huenchuñir,
P. ,
Class
II
viral
fusión
3
López-Lastra,
M. ,
proteins)
1
Lagos,
1
Pérez-Acle,
EN
functional
4
T. - .
C.F. ,
Centro
de
Q u í m i c a M é d i c a , F a c u l t a d de Q u í m i c a , P U C , Laboratorio de Virología
1
2
3
Molecular, Facultad de M e d i c i n a , P U C , F u n d a c i ó n Ciencia para
la
4
Vida .
E n v e l o p e d v i r u s e s infect cells via f u s i ó n of t h e virus m e r n b r a n e w i t h a
- " ¡ c i l l i u m p u r p u r o g e n u m e s u n h o n g o a i s l a d o d e s u e l o s del s u r d e
Chile.
GRUPOS
Bioinformática, Facultad de Ciencias Biológicas, P U C , Laboratorio de
Inglaterra. .
1
DE
M. ,
1
SD,
COMPARATIVO
P R O T E Í N A S D E F U S I Ó N V I R A L C L A S E II ( C o m p a r a t i v e
Biológicas,
Universidad A n d r é s Bello, S a n t i a g o . , U n i v e r s i d a d de Dakota del Sur,
Vermillion,
MAPEO
un
activo
secretor
de
enzimas
que
permiten
al
hongo
h o s t cell m e r n b r a n e t h r o u g h v i r a l f u s i ó n p r o t e i n s . U p o n
appropriate
tnggering, the fusión protein interacts with the target mernbrane
and
d e g r a d a r s u s t r a t o s d e d i s t i n t a c o m p l e j i d a d c o n el o b j e t i v o d e o b t e n e r
undergoes a conformational c h a n g e that drives the mernbrane fusión
los nutrientes
r e a c t i o n . T h e s t r u c t u r e s o f t h e e c t o d o m a i n s of f u s i ó n p r o t e i n s
necesarios
para
su m e t a b o l i s m o .
Los sustratos
que
: r'ntienen h e m i c e l u l o s a s i n d u c e n u n a activa s e c r e c i ó n de e n z i m a s por
flaviviruses
:arte
amino
del
hongo.
Uno
de
los
componentes
importantes
de
las
revealed
acid
" - • n i c e l u l o s a s e s el x i l a n o , el c u a l r e q u i e r e p a r a s u d e g r a d a c i ó n d e la
structures
participación
construction
"asas:
de
distintas
endo
xilanasas,
oil e s t e r a s a s
utilizada
enzimas,
y acetil
en
el
cultivo
degradación
lo
que
denominadas
beta-xilosidasas,
xilano
induce
influye
arabinofuranosidasas,
esterasas.
las
en
La
enzimas
la
genéricamente
fuente
de
carbono
requeridas
composición
del
para
that
sequence
although
these
conservation,
are
remarkably
of
consensus
similar.
proteins
their
In
functionality
lack
secondary
this
work
maps
and
we
for
from
detectable
tertiary
report
functional
the
group
b i n d i n g in c l a s s II f u s i ó n p r o t e i n s . T h e c a l c u l a t i o n s w e r e d o n e f o r t h r e e
flavivirus
class
II
envelope
glycoproteins:
Dengue
virus
(DENV),
su
Tick-Borne Encephalitis Virus ( T B E V ) a n d W e s t Nile Virus ( W N V ) . The
secretoma.
results g a v e c o n s e n s u s m a p s that i n d í c a t e functional g r o u p s that are
Utilizando electroforesis b i d i m e n s i o n a l se ha c o m p a r a d o el s e c r e t o m a
insensitive to the specific protein conformation a n d the existence
d e l h o n g o al c r e c e r l o e n d i s t i n t a s f u e n t e s d e c a r b o n o . D e e s t a f o r m a
alternative b i n d i n g sites that c o u l d be t a r g e t e d in t h e rational d e s i g n of
se
aprecia
la
sobre-expresión
o
inhibición
de
la
expresión
de
broad-spectrum
inhibitors.Acknowledgments:
d i f e r e n t e s p r o t e í n a s r e p r e s e n t a d a s p o r m a n c h a s al t e ñ i r l o s g e l e s c o n
W81XWH-08-1-0285
S y p r o R u b y . M e d i a n t e el u s o d e u n a t i n c i ó n e s p e c í f i c a t a m b i é n
C i e n c i a p a r a la V i d a ( P F B - 1 6 ) .
sido posible detectar
manchas
el g r a d o d e g l i c o s i l a c i ó n
ha
del s e c r e t o m a .
USAMRMC.
Funding
from
C F L is a f e l l o w of t h e
of
grant
Fundación
Las
son cortadas p a r a p r o c e s a r l a s c o n tripsina y s o m e t e r los
péptidos
a
análisis
identificación.
identificar
por
Utilizando
algunas
diferencialmente
espectrometría
la b a s e
da
xilanasas,
expresadas
cultivo.Financiamiento:
las
en
FONDECYT
de
datos
masas
Mascot,
cuales
para
hemos
se
distintas
su
podido
encuentran
condiciones
1040201
y
1070368,
Proyectos Internos 03-05R y 07-06/I y Vicerrectoría
de
UNAB
de Investigación
y Postgrado U N A B
R O L D E R E S I D U O S B A S I C O S E N E L S E N S A D O D E pH E N L O S
DIFERENCIAS
C A N A L E S T A S K 2 Y T A S K 3 ( R o l e of b a s i c r e s i d u e s i n p H s e n s i n g of
EXTRACELULAR
Task2
and
Task3
channels)
2
1
Sepulveda,
3
Navarro, C. , Chipot, C. , Niemeyer, M I
4
F. ,
2
González-Nilo,
. C E C S , Valdivia \
F. ,
CBSM,
POTASIO
DE
LA
UNIDAD
ENTRE
LOS
PRESENTES
EN
SENSORA
CANALES
LOS
DE
DEL
pH
ENTRADA
ESTOMAS.
DE
(Differences
in
extracellular pH sensor units between the stomatal inward potassium
F . D . , D r e y e r , I. . C e n t r o de B i o i n f o r m á t i c a y S i m u l a c i ó n
estado
U n i v e r s i d a d de T a l c a , U n i v e r s i t a t P o t s d a m , Instituí f u r B i o c h e m i e u n d
de
3
protonación
de
4
aminoácidos
básicos
explicaría
el
1
W. ,
Morales,
Nuestro
Biologie,
estados
Pflanzenbiologie, G e r m a n y .
barreras
P a r a que se a b r a n los e s t o m a s
y
neutro
de
la
energéticas importantes
Arg224
cuando
de
TASK2,
pasa de estado
genera
activado (aprox
6
González-Nilo,
Molecular,
1
estudio demuestra
cargado
Alzate, J. ,
2
m e c a n i s m o de a c t i v a c i ó n de los c a n a l e s T A S K 2 y T A S K 3 .
q u e el p e r f i l d e e n e r g í a l i b r e e n t r e los
S.\
1
channels)
L a a c t i v a c i ó n d e los c a n a l e s d e K s e n s a d o s p o r p H p o r c a m b i o s d e
2
González,
1
Universidad de T a l c a , C N R S / U H P , F r a n c i a , C E C S , Valdivia .
Heisenberg-Gruppe
Biophysik
und
Molekulare
2
acidificación
del a p o p l a s m a ,
e n las p l a n t a s , es prerrequisito
lo c u a l
garantiza que los canales
la
de
K c a l / m o l ) a estado inactivado (sobre 2 0 Kcal/mol). Estos perfiles de
entrada d e potasio d e p e n d i e n t e s de voltaje (canales K ) perciban esta
energía libre d e m u e s t r a n que existe una p e r t u r b a c i ó n electrostática y
acidificación y se a b r a n c o n u n m e n o r g a s t o de energía. Las u n i d a d e s
i n
e s t r u c t u r a l i m p o r t a n t e e n el filtro d e s e l e c t i v i d a d d u r a n t e el p r o c e s o d e
s e n s o r a s del p H extracelular en los c a n a l e s K
c a m b i o d e e s t a d o d e p r o t o n a c i ó n d e la A r g , q u e e x p l i c a la i n a c t i v a c i ó n
h i s t i d i n a s e x p u e s t a s al a p o p l a s m a . S i n e m b a r g o , e n el c a n a l K A T 1 d e
tipo-C observada
Arabidosis
experimental mente. De
esta
misma
forma
hemos
r e a l i z a d o u n e s t u d i o s i s t e m á t i c o de D i n á m i c a M o l e c u l a r del canal de
K TASK3.
sensor
Nuestros resultados
durante
el
conformacionales
inaccesible
proceso
importantes,
demuestran
de
pasando
al s o l v e n t e a u n e s t a d o
q u e el r e s i d u o d e
protonación,
de
un
sufre
electrostático
que
importantes
no
cambios
e n el p o r o d e l c a n a l K A T 1 , f o r m a n d o p a r t e d e la s e c u e n c i a c o n s e n s o
neutro
solvente;
demuestra
la
a c t i v a c i ó n d e l c a n a l . N u e s t r o e s t u d i o c o n c l u y e q u e la a c t i v a c i ó n
de
esta
electrostáticos
gobernada
conformacionales
del
filtro
fundamentalmente
de
selectividad
y
no
por
por
cambios
el
potencial
electrostático producido durante el p r o c e s o d e c a m b i o d e e s t a d o de
protonación
de
la
Científico A C T / 4 6 .
His
sensorAgradecimientos:
la m u t a c i ó n d e la ú n i c a h i s t i d i n a ( H 2 6 7 ) e x p u e s t a
al m e d i o e x t r a c e l u l a r n o a f e c t a la d e p e n d e n c i a d e p H . L a H 2 6 7 e s t á
T V G Y G D X H . E n la p o s i c i ó n X d e e s t a s e c u e n c i a K A T 1 p r e s e n t a u n a
durante
TASK3
existen
son
His,
e s t e c a m b i o c o n f o r m a c i o n a l g e n e r a u n a r e o r g a n i z a c i ó n d e la r e d d e
e n l a c e s d e H . L a e v a l u a c i ó n del p o t e n c i a l
d e los e s t o m a s
cambios
estado
c a r g a d o a c c e s i b l e al
thaliana
i n
Proyecto
Anillo
fenilalanina, mientras
que
el r e s t o d e l o s
canales
K
posee
j n
l e u c i n a e n X. U n m o d e l o p o r h o m o l o g í a d e K A T 1 p e r m i t i ó
una
distinguir
q u e las c a d e n a s l a t e r a l e s d e la F 2 6 6 y la H 2 6 7 d i s t a n m e n o s d e 5 A . . . .
S e p l a n t e ó la h i p ó t e s i s q u e la H 2 6 7 d e K A T 1 n o p o d í a s e n s a r el p H
porque
la F 2 6 6
hipótesis
se
desplaza
corroboró
su
pK
a
a valores
mediante
no
mutagénesis
detectables.
sitio
Está
dirigida
y
experimentos de voltaje-clamp con dos electrodos. Mediante cálculos
de
Mecánica
establecer
sensora
que
puede
Cuántica-Mecánica
si
en
la
posición
protonarse
y
Molecular
X
hay
(QM/MM),
una
deprotonarse,
leucina,
mientras
se
la
que
pudo
histidina
si
está
p r e s e n t e u n a f e n i l a l a n i n a , e s t o s e v e n t o s n o s e p r o d u c e n p o r q u e la
fenilalanina
H267.
estaría
formando
una
i n t e r a c c i ó n tipo catión-pi c o n
la
Sociedad
de Bioquímica y Biología
E S T U D I O S in sitico E in vitro D E L D E S P L E G A M I E N T O T É R M I C O
DE
LA
FOSFOFRUCTOQUINASA-2
DE
Escherichia
coii:
IMPORTANCIA
D E LA INTERFAZ
MONÓMERO-MONÓMERO.
{in
silico
a n d in vitro
studies
of t h e t h e r m a l
unfolding
of
p h o s p h o f r u c t o k i n a s e - 2 f r o m Escherichia
coii
i m p o r t a n c e of t h e
m o n o m e r - m o n o m e r interface.) Merino, F . . Baez. M . , Babul, J . \
Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad d e Ciencias,
Universidad de Chile .
1
1
1
L a f o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 d e Escherichia
coli e s u n h o m o d í m e r o , c u y o
m o n ó m e r o e s t á c o m p u e s t o p o r u n d o m i n i o g r a n d e y u n o p e q u e ñ o . El
sitio activo s e e n c u e n t r a en un s u r c o entre e s t o s d o m i n i o s . La mterfaz
entre los m o n ó m e r o s c o m p r o m e t e a a m b o s d o m i n i o s m e n o r e s en u n a
i n t e r a c c i ó n p r i n c i p a l m e n t e a p o l a r . P a r a e s t u d i a r la i m p o r t a n c i a d e e s t a
i n t e r f a z e n la e s t a b i l i d a d d e f o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 s e d i s e ñ ó l a m u t a n t e
L 9 3 A q u e i n t r o d u c e u n a c a v i d a d h i d r o f ó b i c a en la interfaz. Esta
mutante e s m o n o m é r i c a y posee u n a cantidad menor de estructura
s e c u n d a r i a q u e el d í m e r o . E x p e r i m e n t o s d e d e s p l e g a m i e n t o p o r
t e m p e r a t u r a d e la m u t a n t e m u e s t r a n q u e , a d i f e r e n c i a d e la e n z i m a
s i l v e s t r e , el p r o c e s o o c u r r e m e d i a n t e u n a t r a n s i c i ó n n o c o o p e r a t i v a . El
d e s p l e g a m i e n t o d e la f o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 i n d u c i d o p o r t e m p e r a t u r a
fue s i m u l a d o m e d i a n t e d i n á m i c a m o l e c u l a r utilizando la función de
energía efectiva E E F 1 i m p l e m e n t a d a en C H A R M M . Simulaciones del
m o n ó m e r o a 3 0 0 K muestran un reordenamiento del dominio menor
a u n q u e n o c a p t u r a n la p é r d i d a d e e s t r u c t u r a s e c u n d a r i a o b s e r v a d a e n
la m u t a n t e L 9 3 A . E x p e r i m e n t o s d e d e s p l e g a m i e n t o a p a r t i r d e l d í m e r o
m u e s t r a n q u e la disociación d e los m o n ó m e r o s ocurre l u e g o de u n a
g r a n p é r d i d a d e e s t r u c t u r a s e c u n d a r i a , s u g i r i e n d o q u e el p a s o
limitante del d e s p l e g a m i e n t o es la ruptura d e la interfaz. E x p e r i m e n t o s
d e d e s p l e g a m i e n t o a partir d e l m o n ó m e r o m u e s t r a n q u e é s t e sigue un
c a m i n o d i s t i n t o al d e l d í m e r o . l o q u e s u g i e r e q u e l a i n t e r f a z e n t r e
m o n ó m e r o s e s i m p o r t a n t e t a n t o para la ruta d e d e s p l e g a m i e n t o c o m o
p a r a la estabilidad de la e n z i m a . F o n d e c y t 1 0 5 0 8 1 8
ANÁLISIS
D E L A FUNCIÓN
D E L ASA FLEXIBLE
DE LA
I N T E G R A S A D E M - M u L V P O R M U T A G E N E S I S . ( A n a l y s i s of t h e
f u n c t i o n o f t h e f l e x i b l e l o o p of M - M u L V i n t e g r a s e b y m u t a g e n e s i s . )
A c e v e d o , M.L. , León, O. . Laboratorio de Retrovirus, Programa de
Virología, Facultad de Medicina, Universidad de Chile .
L a integrasa (IN) del virus de l e u c e m i a m u r i n a de M o l o n e y ( M - M u L V )
e s e s e n c i a l p a r a el c i c l o r e p l i c a t i v o d e l v i r u s . P o s e e t r e s d o m i n i o s , el
N - t e r m i n a l , C - t e r m i n a l y el d o m i n i o c e n t r a l q u e p r e s e n t a l a a c t i v i d a d
c a t a l í t i c a d e l a e n z i m a . D e n t r o d e s u e s t r u c t u r a e n l a I N d e H I V - 1 , el
dominio catalítico
presenta un a s a flexible q u e podría
estar
involucrada en la unión del e x t r e m o del L T R . P o r h o m o l o g í a de
s e c u e n c i a s e n t r e l a s I N s s e e s t a b l e c i ó q u e el a s a
d e la IN de
M-MuLV corresponde a los aminoácidos 2 0 8 a 218. S e seleccionaron
los residuos T y r 2 1 1 , A r g 2 1 2 , G l n 2 1 4 , S e r 2 1 5 , S e r 2 1 6 y G l n 2 1 8 d e l
a s a d e la IN d e M - M u L V p a r a h a c e r m u t a g e n e s i s sitio dirigida y s e
a n a l i z ó la actividad e n z i m á t i c a d e c a d a m u t a n t e . S e o b s e r v ó q u e las
e n z i m a s c o n las m u t a c i o n e s Y 2 1 1 A, R 2 1 2 A , R 2 1 2 Q y Q 2 1 4 A poseen
m e n o s de un 2 0 % de actividad de integración concertada y
t r a n s f e r e n c i a d e h e b r a . N i n g u n a m u t a n t e a f e c t ó s i g n i f i c a t i v a m e n t e la
a c t i v i d a d d e p r o c e s a m i e n t o 3 ' A l a n a l i z a r el e f e c t o d e l a s m u t a c i o n e s
en la desintegración, las mutantes Y 2 1 1 A , Q 2 1 4 A y Q 2 1 4 N fueron
inactivas c u a n d o se utilizó un sustrato d u m b b e l l sin la cola 5'. A d e m á s
la
mutante
Q214A
presentó
una
disminución
en
el
f o t o - e n t r e c r u z a m i e n t o c o n u n s u s t r a t o c o n y o d o - u r i d i n a e n el e x t r e m o
5' p r o c e s a d o . Nuestros r e s u l t a d o s d e m u e s t r a n q u e el a s a flexible de
la I N d e M - M u L V e s t á e n c o n t a c t o c o n e l e x t r e m o 5 ' p r o c e s a d o d e l
L T R . P r o b a b l e m e n t e T y r 2 1 1 , A r g 2 1 2 y G l n 2 1 4 e s t a b i l i z a r í a n el D N A
p r o c e s a d o p a r a q u e o c u r r a la i n t e g r a c i ó n . F o n d . e c y t 1 0 4 0 4 0 9
1
1
1
1»!
Molecular
UNIÓN
DE
METALES
DIVALENTES
EN
F O S F O F R U C T O Q U I N A S A - 2 D E E. coii. E S T U D I O S C I N É T I C O S Y
D E E P R . ( B i n d i n g of di v a l en t m e t a l s in p h o s p h o f r u c t o k i n a s e - 2 f r o r n E.
coii. K i n e t i c a n d E P R s t u d i e s ) R i v a s - P a r d o , J . A . . W i l s o n , C . A . M . ,
Caniuguir, A . , Guixé, V .
Laboratorio de bioquímica y biología
molecular,
departamento
de
Biología,
Facultad
de
Ciencias,
Universidad de Chile .
1
1
1
1
1
La f o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2
de E
coii
p e r t e n e c e a la s u p e r f a m i l i a
riboquinasa
e n la q u e el m o t i v o c o n s e r v a d o N X X E h a s i d o a s o c i a d o a
la u n i ó n d e M g
al sitio activo
D a t o s c i n é t i c o s s u g i e r e n el
r e q u e r i m i e n t o de u n ion M g
d i s t i n t o d e l i o n p r e s e n t e e n el c o m p l e j o
m e t a l - n u c l e ó t i d o p a r a la catálisis. E n este t r a b a j o e s t u d i a m o s la unión
d e m e t a l e s d i v a l e n t e s a P f k - 2 y a la m u í a n t e E 1 9 0 Q d e l m o t i v o
conservado. Sólo Mg * y M n
s o n catalíticamente activos con
p a r á m e t r o s c i n é t i c o s e s e n c i a l m e n t e i g u a l e s en la e n z i m a s i l v e s t r e , e n
t a n t o q u e e n l a m u t a n t e h a y a l t e r a c i o n e s en la K
para a m b o s
s u s t r a t o s ( A T P y f r u c t o s a - 6 - P ) y u n a d i s m i n u c i ó n en k . A t r a v é s d e
e s t u d i o s c i n é t i c o s y d e s u s t i t u c i ó n d e m e t a l e s d e m o s t r a m o s la
e x i s t e n c i a d e u n s e g u n d o s i t i o p a r a c a t i o n e s d i v a l e n t e s e n P f k - 2 al
que M n
se u n e c o n m a y o r afinidad q u e M g . E n condiciones de
s a t u r a c i ó n c o n los s u s t r a t o s la unión d e l m e t a l libre a e s t e s e g u n d o
sitio es n e c e s a r i a p a r a o b t e n e r la k
m á x i m a . La mutación E 1 9 0 Q
a f e c t a la c o n s t a n t e de a c t i v a c i ó n d e M n
y M g . Experimentos de
E P R m u e s t r a n q u e tanto Pfk-2 c o m o la m u t a n t e E 1 9 0 Q unen M n
en
a u s e n c i a d e l nucleótido. A m b a s e n z i m a s presentan u n a K de ~ 170
y u n a estequiometría d e unión de ~1 mol/mol. Los resultados
d e m u e s t r a n la e x i s t e n c i a d e u n s i t i o d e a l t a a f i n i d a d p o r M n
en Pfk-2
y e s t a b l e c e n la p a r t i c i p a c i ó n d e l r e s i d u o E 1 9 0 e n e s t a interacción
(Financiamiento Fondecyt 1070111).
2 +
2 +
2
2 +
M
cat
2 +
2 +
c a t
2 +
2 +
2 +
d
2 +
E F E C T O D E L pH E N E L E S T A D O D E OLIGOMERIZACIÓN D E
INSULINA.
(pH
effects
in
oligomerization
state
of
Insulin)
Cifuentes-Huerta, J . j . . Martinez-Oyanedel, J . . Universidad de
Concepción .
1
1
1
El m a y o r p r o b l e m a q u e e n f r e n t a l a c o m e r c i a l i z a c i ó n d e i n s u l i n a
r e c o m b i n a n t e e s la f o r m a c i ó n d e f i b r a s d e i n s u l i n a . E s t e p r o b l e m a
actualmente
tiene
un
altísimo
costo
para
las
empresas
b i o t e c n o l ó g i c a s q u e la f a b r i c a n , y a q u e e n su p r o d u c c i ó n , t a n t o c o m o
en su a l m a c e n a m i e n t o y distribución se p r o d u c e n c o n d i c i o n e s q u e
d e s e s t a b i l i z a n a la insulina y p r o m u e v e n la f o r m a c i ó n de a g r e g a d o s
fibrilares E n su e s t a d o n a t i v o a c t i v o , la i n s u l i n a se e n c u e n t r a e n f o r m a
de h e x á m e r o asociado a 2 á t o m o s de Zn+2.. Se ha d e m o s t r a d o que
e s n e c e s a r i o d e s o l i g o m e r i z a r el h e x á m e r o d e i n s u l i n a a m o n ó m e r o s
p a r a q u e el p r o c e s o f i b r i l a c i ó n o c u r r a . E x i s t e n v a r i a s c o n d i c i o n e s q u e
son capaces de inducir el proceso d e desoligomerización, entre estas
encontramos
el p H y l a t e m p e r a t u r a . M e d i a n t e c r o m a t o g r a f í a d e
filtración
molecular
hemos
seguido
la desoligomerización
del
h e x á m e r o d e la insulina c o m e r c i a l c o m o c o n s e c u e n c i a d e u n a
disminución
en el p H , e n c o n t r á n d o s e
u n a transición
total a
m o n ó m e r o s bajo p H 4 . 0 . P a r a l e l a m e n t e se h a n calculado los p K a s de
l o s a m i n o á c i d o s p r o t o n a b l e s m e d i a n t e v a r i o s m é t o d o s in s i l i c o ,
u t i l i z a n d o l a e s t r u c t u r a h e x á m e r i c a 1 m s o r e s u e l t a a 1.0 A m s t r o n g , c o n
el o b j e t o d e r e a l i z a r e s t u d i o s d e D i n á m i c a s M o l e c u l a r e s a d i s t i n t o s
pHs y estudios de potencial electrostático q u e entreguen información
a nivel a t ó m i c o a c e r c a de los s u c e s o s relevantes e n el proceso de
d e s o l i g o m e r i z a c i ó n i n d u c i d o p o r el p H .
XXXI Reunión
Anual
EXPRESION GENICA
ANALISIS G E N O M I C O D E LA FAMILIA S D G Y S U E X P R E S I O N E N
ANALISIS
E L D E S A R R O L L O D E L F R U T O E N Vitis
A R A B I D O P S I S (FUNCTIONAL P R O M O T E R A N A L Y S I S OF
vinifera
(Genomic analysis
j f S D G f a m i l y a n d its e x p r e s s i o n d u r i n g g r a p e d e v e l o p m e n t in
1
vinifera)
1
A q u e a , F . , V e g a , A . , A r c e - J o h n s o n , P.V
Vitis
Departamento
de
G e n é t i c a M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a . P o n t i f i c i a U n i v e r s i d a d Católica de
1
Chile .
GENE
FUNCIONAL
D E L P R O M O T O R D E L G E N GRXC9
1
IN A R A B I D O P S I S )
Departamento
de
Herrera, A. , Blanco, F . \
Genética
Molecular
y
DE
GRXC9
1
Holuigue,
Microbiología.
L. .
Facultad
1
Ciencias Biológicas. Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de Chile. .
L a s g l u t a r e d o x i n a s s o n u n a f a m i l i a d e o x i d o r e d u c t a s a s q u e u s a n el
L a r e g u l a c i ó n e p i g é n e t i c a es r e c o n o c i d a c o m o u n m e c a n i s m o n o r m a l
glutatión
y esencial
glutationiladas
p a r a el c o n t r o l
de
la e x p r e s i ó n g é n i c a
en
eucanontes,
(GSH)
reducir
proteínas,
disulfuro
del
GRXs
por á c i d o salicílico ( S A ) , una
hormona
flores,
a s o c i a d a a la r e s p u e s t a d e d e f e n s a a e s t r é s . A n á l i s i s d e
expresión
frutos.
Marcas
epigenéticas,
tales
como
la
n i v e l d e la o r g a n i z a c i ó n d e la c r o m a t i n a . L a m a y o r í a d e la m e t i l a c i ó n
t r a n s c r i p c i ó n b Z I P ( T G A 2 / 5 / 6 ) y es i n d e p e n d i e n t e t a n t o de
de
p r o t e i c a de novo
es
realizada
SDG
metiltransferasa
Arabidopsis,
con
o
una
dominio
levaduras
activadores
por
(SET-domain
y
familia
SET
han
humanos.
represores
de
group).
metiltransferasas
A
la
sido
Éstas
fecha,
varias
caracterizadas
se
transcripcionales.
clasifican
En
como
este
i d e n t i f i c a m o s y c a r a c t e r i z a m o s la f a m i l i a S D G e n Vitis
en
trabajo,
vinifera.
Esta
utilizando
proteínas
de
SDG1232.
plantas,
Análisis
levaduras
y
filogenéticos
animales
generan
g r u p o s , los q u e r e f l e j a n a p a r e n t e m e n t e la e s p e c i f i c i d a d d e
9
sustrato
y
en
forma
NPR1-independiente.
sobrerepresentada
región
proximal
mediante
la
con
y
H3K27,
versiones truncas
algunos
genes
asociados
transcripcional
como
:ndatos
y
represores.
pertenecientes
a
los
grupos
H3K9
Seleccionamos
los
distintos
grupos
funcionales
y
como
por
elementos
un
de
la
la v e r s i ó n
expresión
y versiones
tipo
as-1.
agrotransformación
todo
estable
transcripcional
REGULACIÓN D E LA ACTIVIDAD T R A N S C R I P C I O N A L D E NURR1
REGULACIÓN
POR
DIFERENCIACIÓN
DJ-1
(Regulation
of
the
transcriptional activity of N u r t i b y s u m o y l a t i o n and the protein DJ-1)
1
Arredondo,
C. ,
1
Pereira,
L. ,
Fuenzalida,
1
N. ,
identificar
de
respuesta
de
del
estos
gen
elementos
reportero
promotor
1
Andrés,
ME. .
D e p a r t a m e n t o de Biología Celular y M o l e c u l a r , F a c u l t a d de C i e n c i a s
1
Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile .
usando
Arabidopsis.
el
distal es u n i m p o r t a n t e motivo para
en
respuesta
a
y
Milenio
(1060494)
Núcleo
SA.Financiado
de
por
Genómica
DE
ACETILACIÓN
myoblastic
LA
DE
and
TRANSCRIPCIÓN
MIOBLÁSTICA
HISTONAS
osteoblastic
Y
acetylation). Cruzat, F . , Henriquez, B . \
1
M. . Anillo
de
GENES
(Transcriptional
differentiation
1
Montecino,
DE
OSTEOBLÁSTICA
Investigación
mesencefálicas,
que
Celular
y
Regulación
DE
POR
regulation
genes
by
of
histone
1
1
Sepulveda, H. , Oíate, J . ,
de Estudios A v a n z a d o s
Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile. .
dopaminérgicas
de
resultados
Señalización
neuronas
en los
sistema
Nuestros
sobrevida
las
+26),
sitio-dirigidas
N u r r l e s u n r e c e p t o r n u c l e a r h u é r f a n o e s e n c i a l p a r a el d e s a r r o l l o y
de
GUS,
(-1860 a
funcional de Plantas ( P 0 6 - 0 0 9 - F ) .
Núcleo Milenio G e n ó m i c a Funcional de Plantas ( P 0 6 - 0 0 9 - F ) .
PROTEÍNA
del
esto
en
FONDECYT-CONICYT
LA
permitió
con mutaciones
histonas metiltransferasas
activación
nos
funcionalidad
completa
la
Y
del
e n la
i n d i c a n q u e e l e l e m e n t o t i p o as-1
SUMOILACIÓN
NPR1-independiente.
(TGACGTCAnnnnTGACGTCA),
elemento
la
a n a l i z a m o s s u p a t r ó n d e e x p r e s i ó n d u r a n t e el d e s a r r o l l o del f r u t o d e
fruto.Financiamiento:
de
síntesis
SA.EI
v i d . E s t e t r a b a j o s u g i e r e p o r p r i m e r a v e z la p o s i b l e p a r t i c i p a c i ó n d e
e n el d e s a r r o l l o del
factores
a
evaluación
controlados
activación
de
c o n t i e n e 2 p u t a t i v o s e l e m e n t o s t i p o as-1
Analizamos
asociados
Esto
la c a j a t i p o as-1
previamente
d e s ú s miembros. Identificamos los'grupos H3K4 y H3K36
la
II
p r o m o t o r del c o n j u n t o de g e n e s q u e r e s p o n d e n t e m p r a n a m e n t e a S A
p r o m o t o r d e GRXC9
a
subclase
las
U t i l i z a n d o e l s o f t w a r e M o t i f s a m p l e r , r e a l i z a m o s u n a n á l i s i s in siiico
descrita
SDG1200
la
de
c o m o del coactivador N P R 1 , clasificándose c o m o un
les
como
de
gen inducido tempranamente por S A de forma
f a m i l i a t i e n e 3 2 m i e m b r o s y s e g ú n la h o m o l o g í a c o n o t r a s e s p e c i e s s e
nombró
requiere
una
indican
histonas
GRXC9
como
m o d i f i c a c i ó n d e h i s t o n a s , a f e c t a n el c o n t r o l d e la e x p r e s i ó n g é n i c a a
denominadas
que
inducidas
laboratorio
cisteínas
oxidativo.
GRXC9
altamente
por nuestro
y
daño
: : " t r o t a n d o el d e s a r r o l l o y la r e s p u e s t a a e s t í m u l o s a m b i e n t a l e s . E n
y
identificada
enlaces
protegiéndolas
c i a n t a s , este m e c a n i s m o es i m p o r t a n t e p a r a el d e s a r r o l l o n o r m a l de
semillas
fue
para
de
Génica,
Facultad
de
en
Ciencias
1
r e g u l a n f u n c i o n e s f i s i o l ó g i c a s f u n d a m e n t a l e s c o m o el c o n t r o l d e l o s
El p r o c e s o d e d i f e r e n c i a c i ó n c e l u l a r i n v o l u c r a la e x p r e s i ó n d e g e n e s
movimientos
Nurrl
tejido específicos cuyas regiones p r o m o t o r a s requieren de procesos
neurotransmisión
d e re m o d e l a c i ó n d e s u e s t r u c t u r a c r o m a t í n i c a . E n c é l u l a s e u c a r i o n t e s
regula
la
voluntarios,
expresión
de
emociones
genes
y
procesos
involucrados
en
cognitivos.
d o p a m i n é r g i c a , t a l e s c o m o , t i r o s i n a h i d r o x i l a s a y el t r a n s p o r t a d o r d e
p l u n p o t e n c i a l e s los e v e n t o s de r e m o d e l a c i ó n c r o m a t í n i c a p u e d e n s e r
d o p a m i n a . S i n e m b a r g o , los m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s que
controlan
regulados por complejos con actividades de acetiltransferasa (HAT) o
la actividad transcripcional d e N u r r l s o n p r á c t i c a m e n t e d e s c o n o c i d o s .
deacetilasa ( H D A C ) de h i s t o n a s . N u e s t r o laboratorio está interesado
Nuestro grupo de trabajo determinó que P I A S y , una proteína
en
SUMO
E 3 ligasa, interactúa c o n N u r r l y reprime su actividad transcripcional.
Nosotros
regulada
proponemos
por
q u e la a c t i v i d a d t r a n s c r i p c i o n a l
sumoilación,
una
modificación
de N u r r l
es
post-traduccional
definir
la
contribución
compromiso
fenotipos
de
células
osteoblástico
inmunoprecipitación
de
este
tipo
precursoras
y
muscular.
de c r o m a t i n a
de
complejos
durante
mesenquimáticas
el
con
los
Mediante
ensayos
de
(ChIP), RT-PCR,
y Western
Blot
c o v a l e n t e y r e v e r s i b l e , q u e r e g u l a la a c t i v i d a d d e u n a s e r i e d e f a c t o r e s
d e m o s t r a m o s q u e el t r a t a m i e n t o d e c é l u l a s p l u r i p o t e n c i a l e s
de
c o n el i n h i b i d o r g e n e r a l d e d e a c e t i l a s a s T r i c o s t a t i n a A ( T S A ) , p r o d u c e
transcripción.
efectivamente
Nuestros
sumoilado.
resultados
muestran
A d i c i ó n al m e n t e
que
planteamos
Nurrl
que
es
DJ-1
un estado de hiperacetilación global de histonas, que resulta en una
r e g u l a la a c t i v i d a d t r a n s c r i p c i o n a l d e N u r r l a t r a v é s d e r e g u l a c i ó n d e
disminución
en
la
su sumoilación. DJ-1 es una proteína multifuncional q u e
muscular
un
aumento
interactúa
C2C12
y
expresión
en
de
marcadores
la
expresión
de
de
diferenciación
marcadores
de
c o n m i e m b r o s d e la f a m i l i a P I A S , r e g u l a la s u m o i l a c i ó n d e a l g u n o s
diferenciación
f a c t o r e s d e t r a n s c r i p c i ó n y e s t á i n v o l u c r a d a e n c a s o s f a m i l i a r e s d e la
u n i ó n d e h i s t o n a s a c e t i l a d a s e n el p r o m o t o r d e l f a c t o r d e t r a n s c r i p c i ó n
e n f e r m e d a d d e P a r k i n s o n . M e d i a n t e e n s a y o s de g e n e s reporteros en
R u n x 2 lo q u e
células P C 1 2 y H E K 2 9 3 d e m o s t r a m o s q u e la s o b r e e x p r e s i ó n de D J - 1
i n d u c i e n d o c o n e l l o e l c o m p r o m i s o c o n el l i n e a j e ó s e o . E n c o n j u n t o ,
d i s m i n u y e la a c t i v i d a d t r a n s c r i p c i o n a l d e N u r r l . P o r lo t a n t o , n u e s t r o s
nuestros
resultados
pluripotenciales
sugieren
que
la
actividad
transcripcional
de
Nurrl
r e g u l a d a p o r s u m o i l a c i ó n y p o r la p r e s e n c i a d e la p r o t e í n a D J - 1 .
es
puede
osteoblástica. A d e m á s ,
promueve
resultados
indican
expresión
que
mesenquimáticas
ser favorecida
hiperacetilación
su
que
este tratamiento aumenta
la
hacia
y la de s u s
diferenciación
el
p o r s o b r e la m u s c u l a r ,
involucran
c r o m a t i n a del tipo H A T s y H D A C s .
genes
complejos
fenotipo
de
la
blanco,
células
osteoblástico
mediante eventos
de
remodeladores
de
Sociedad
de Bioquímica y Biología
HIPERMETILACIÓN
DEL
PROMOTOR
DE
BRCA1
SE
CORRELACIONA CON LA AUSENCIA DE SU EXPRESIÓN EN
T U M O R E S D E C A N C E R D E MAMA HEREDITARIO.
(Promoter
h y p e r m e t h y l a t i o n of B R C A 1 c o r r e l a t e s w i t h a b s e n c e of e x p r e s s i o n in
hereditary breast cáncer tumors) T a p i a , T. , Smalley, S. , Kohen, P ,
M u ñ o z , A . , Solis, L , C o r v a l a n , A . , F a u n d e z , P. , D e v o t o , L. ,
C a m u s , M , Alvarez, M , Carvallo, P. . Departamento
Biología
Celular y Molecular, Ciencias Biológicas, Pontificia
Universidad
Católica
de
Chile. ,
Instituto
Investigaciones
Materno
Infantil,
Universidad de Chile. , F a c u l t a d M e d i c i n a , Pontificia Universidad
Católica de Chile. , Centro de Cáncer, Pontificia Universidad Católica
de Chile. .
1
2
3
3
4
4
1
1
2
2
1
1
2
3
4
L a p a r t i c i p a c i ó n de B R C A 1
en el c á n c e r
de m a m a ha sido
a m p l i a m e n t e d e s c r i t a e n a q u e l l o s t u m o r e s q u e p r e s e n t a n m u t a c i ó n en
e s t e g e n e n la l í n e a g e r m i n a l . A d e m á s B R C A 1 h a s i d o i m p l i c a d o en el
desarrollo
de
tumores
de
mama
esporádicos,
debido
a
la
h i p e r m e t i l a c i ó n d e la r e g i ó n p r o m o t o r a d e e s t e g e n
j u n t o con la
a u s e n c i a de su expresión en e s t o s t u m o r e s . La participación de
B R C A 1 en el d e s a r r o l l o d e t u m o r e s h e r e d i t a r i o s sin m u t a c i ó n en la
línea g e r m i n a l , n o ha s i d o a ú n d e m o s t r a d o , e x i s t i e n d o sólo un estudio
e n el c u a l s e h a d e t e r m i n a d o la h i p e r m e t i l a c i ó n del p r o m o t o r d e
B R C A 1 e n el 4 2 % d e e s t o s t u m o r e s . N o s o t r o s e s t u d i a m o s la
h i p e r m e t i l a c i ó n d e la r e g i ó n p r o m o t o r a d e B R C A 1 en 4 7 t u m o r e s d e
m a m a h e r e d i t a r i o s y su c o r r e l a c i ó n c o n la e x p r e s i ó n d e la p r o t e í n a . El
p r o m o t o r del gen B R C A 1 s e amplificó m e d i a n t e P C R , a partir de D N A
tumoral modificado con bisulfito de sodio, utilizando
partidores
e s p e c í f i c o s p a r a la c o n d i c i ó n m e t i l a d a y la n o m e t i l a d a . A d e m á s , s e
analizó
la
expresión
de
la
proteína
BRCA1
mediante
i n m u n o h i s t o q u í m i c a . U n 5 1 % (24/47) d e los t u m o r e s
presenta
h i p e r m e t i l a c i ó n del p r o m o t o r d e B R C A 1 , d e l o s c u a l e s , un 6 7 %
( 1 6 / 2 4 ) n o e x p r e s a la p r o t e í n a ( p = 0 . 0 1 9 9 ) . E s t o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n
q u e la h i p e r m e t i l a c i ó n del p r o m o t o r d e B R C A 1 e s un
evento
i m p o r t a n t e en el s i l e n c i a m i e n t o d e e s t e g e n e n t u m o r e s h e r e d i t a r i o s ,
s u g i r i e n d o su p a r t i c i p a c i ó n n o s ó l o e n el i n i c i o d e l p r o c e s o t u m o r a l ,
s i n o t a m b i é n d u r a n t e el d e s a r r o l l o é s t e . F O N D E C Y T 1 0 8 0 5 9 5 , B e c a
doctorado CONICYT.
ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN GÉNICA EN E M B R I O N E S BOVINOS
CLONADOS TRANSFERIDOS A RECEPTORAS
TEMPORALES
( G e n e e x p r e s s i o n in c l o n e d e m b r y o s t r a n s f e r r e d t o
temporary
recipients) Bertin B e n a v i d e s , A. , Rodríguez. L . \ Navarrete, F. ,
Castro,
F. .
Universidad
de
Concepción .
1
1
1
1
Patrocinante: P u c h i Thiele. M..
Los
embriones
elongados
son
fuente
de información
de
la
proliferación trofoblástica, diferenciación, expresión génica y de
interacciones
embrión-maternales.
Dado
que
la
clonación
y
m a n t e n i m i e n t o de e m b r i o n e s bovinos son c o s t o s o s , u n a alternativa es
u t i l i z a r r e c e p t o r a s t e m p o r a l e s h e t e r ó l o g a s . C o n e l f i n d e d e t e r m i n a r el
e f e c t o d e l a m b i e n t e u t e r i n o h e t e r ó l o g o e n el e m b r i ó n c l o n a d o y
v i c e v e r s a , s e e s t u d i ó la e x p r e s i ó n d e m a r c a d o r e s e m b r i o n a r i o s .
Examinamos
marcadores
moleculares,
mediante
RT-PCR,
en
e m b r i o n e s bovinos c l o n a d o s . E s t o s f u e r o n o b t e n i d o s por transferencia
n u c l e a r s o m á t i c a sin m i c r o m a n i p u l a d o r e s . L o s e m b r i o n e s f u e r o n
transferidos a receptoras intermediarias y posteriormente recuperados
e n estadio d e e l o n g a c i ó n . S e logró la e l o n g a c i ó n de e m b r i o n e s
c l o n a d o s , t a n t o en a m b i e n t e h e t e r ó l o g o c o m o h o m ó l o g o . S e e n c o n t r ó
e x p r e s i ó n diferencial de m a r c a d o r e s e m b r i o n a r i o s e n t r e los e m b r i o n e s
recuperados de úteros bovinos y ovinos. Se d e m o s t r ó gran diferencia
e n la e x p r e s i ó n d e e s t o s m a r c a d o r e s e n los ú t e r o s d e a m b a s
especies,
d e t e c t a n d o la
p r e s e n c i a d e la m a y o r í a d e g e n e s
e m b r i o n a r i o s s ó l o en ú t e r o s o v i n o s . N u e s t r o s d a t o s c o n f i r m a n q u e l o s
o v i n o s p u e d e n ser u t i l i z a d o s c o m o r e c e p t o r e s t e m p o r a l e s . S i n
e m b a r g o el a m b i e n t e h e t e r ó l o g o p u e d e a f e c t a r l o s p a t r o n e s d e
expresión de los e m b r i o n e s c l o n a d o s . Un hito i m p o r t a n t e en esta
i n v e s t i g a c i ó n e s la d e t e c c i ó n d e m a r c a d o r e s e m b r i o n a r i o s en l o s
ú t e r o s r e c e p t o r e s , lo q u e i n d i c a u n a e s t r e c h a i n t e r a c c i ó n m o l e c u l a r
e n t r e el ú t e r o y el e m b r i ó n .
Molecular
EFECTO
DEL
HIERRO
EN
LA
EXPRESION
DE
LAS
FERROXIDASAS
P E R T E N E C I E N T E S A LA FAMILIA D E L A S
O X I D A S A S M U L T I C O B R E (MCO) D E L H O N G O LIGNINOLITICO
PHA ÑERO CHA EJE
CHRYSOSPORIUM.
( E f f e c t of iron on t h e
e x p r e s s i o n of f e r r o x i d a s e s b e l o n g i n g t o m u l t i c o p p e r o x i d a s e f a m i l y
( M C O ) f r o m t h e l i g n i n o l y t i c f u n g u s Phanerochaete
chrysosporium)
C a n e s s a , P . , L a r r o n d o , L. , V i c u ñ a , R. . D e p t o G e n é t i c a M o l e c u l a r y
M i c r o b i o l o g í a , F a c . C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v . C a t ó l i c a d e C h i l e . .
E n el g e n o m a d e P chrysosporium
h e m o s identificado 4 genes
transcnpcionalmente activos que codifican para oxidasas multicobre
( M C O ) . M e d i a n t e q R T - P C R , a n a l i z a m o s el e f e c t o del h i e r r o en l o s
n i v e l e s d e t r a n s c r i t o d e l o s g e n e s rncol,
mco2, mco4 y fet3. El m e t a l
indujo u n a i m p o r t a n t e d i s m i n u c i ó n en los niveles de transcrito de los
c u a t r o g e n e s m e n c i o n a d o s , s i e n d o mco4
y feí3 los g e n e s c u y o s
m R N A s s e v i e r o n m a y o r m e n t e a f e c t a d o s . E n e l c a s o d e é s t o s , el
análisis de sus respectivos p r o m o t o r e s permitió identificar e l e m e n t o s
regulatorios
en cis
idénticos
al r e c o n o c i d o
p o r el f a c t o r
de
t r a n s c r i p c i ó n U R B S 1 d e Ustilago
maydis,
el q u e h a s i d o i n v o l u c r a d o
en la r e p r e s i ó n t r a n s c r i p c i o n a l d e s u s g e n e s b l a n c o m e d i a d a p o r
h i e r r o E s t u d i o s a n i v e l d e la e s t r u c t u r a p r i m a r i a d e M C 0 1 , F E T 3 y
M C 0 4 permiten sugerir que ésta última enzima no poseería actividad
ferroxidasa c o m o h e m o s demostrado previamente para M C 0 1 . Estas
o b s e r v a c i o n e s s e b a s a n a d e m á s en e s t u d i o s b i o q u í m i c o s d e u n a
v e r s i ó n m u t a n t e d e M C 0 1 , d e n o m i n a d a M C 0 1 E 2 1 4 A , la q u e al i g u a l
q u e M C 0 4 , n o p o s e e un a m i n o á c i d o c l a v e i n v o l u c r a d o en la a c t i v i d a d
f e r r o x i d a s a . A c t u a l m e n t e n o s e n c o n t r a m o s e s t u d i a n d o la l o c a l i z a c i ó n
subcelular
de
MC04,
así
como
su
actividad
enzimática.FINANCIAMIENTO: Fondecyt 1070588 y MIFAB.
1
1
1
1
EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE G E N E S D E L HONGO
Penicillium
purpurogenum
C R E C I D O E N G L U C O S A Y UNA F U E N T E D E
CARBONO
NATURAL, C O S E T A DE REMOLACHA
(Differential
e x p r e s s i o n of g e n e s of t h e f u n g u s P e n i c i l l i u m p u r p u r o g e n u m g r o w n in
glucose a n d a natural carbón source, sugar beet pulp) K l a g g e s , C . ,
Eyzaguirre, J . . D e p a r t a m e n t o de Ciencias Biológicas, Universidad
Andrés Bello, Santiago. .
1
1
1
El h o n g o d e p u d r i c i ó n b l a n d a P e n i c i l l i u m p u r p u r o g e n u m c r e c e e n
diversos sustratos naturales, entre ellos coseta de r e m o l a c h a , y
produce una gran variedad de e n z i m a s hemicelulolíticas, que son
r e p r i m i d a s por g l u c o s a . E s t e trabajo p l a n t e a el estudio, a nivel
transcripcional, de las e n z i m a s q u e s o n producidas s e l e c t i v a m e n t e
p o r el h o n g o c u a n d o e s c r e c i d o e n c o s e t a . S e c o n s t r u y ó u n a
g e n o t e c a s u s t r a c t i v a d e c D N A m e d i a n t e la t é c n i c a d e s u p r e s i ó n p o r
sustracción
de
secuencias
mediante
hibridación
(PCR-SSH),
e l i m i n á n d o s e los g e n e s c o n s t i t u t i v o s q u e se e x p r e s a n con g l u c o s a .
S e s e l e c c i o n ó 1 0 1 c l o n e s p o r P C R y s e d e t e r m i n ó por d o t b l o t q u e 8 0
c l o n e s t e n í a n s e c u e n c i a s e x p r e s a d a s d i f e r e n c i a l m e n t e en c o s e t a .
Estos clones fueron s e c u e n c i a d o s , o b t e n i é n d o s e 62 s e c u e n c i a s de
i n t e r é s . E n t r e e l l a s : s e c u e n c i a s r e l a c i o n a d a s c o n la d e g r a d a c i ó n d e
lignocelulosa ( 2 7 , 4 % ) (arabinofuranosidasa, endoxilanasa, glicosil
transferasa, beta- galactosidasa, celobiohidrolasa, fructoquinasa,
pectina acetil esterasa y p r o t e a s a s ) , secuencias h o m o l o g a s
a
proteínas hipotéticas (35,5%) y proteínas reguladoras (6,5%), y otras
q u e n o p r e s e n t a n s i m i l i t u d c o n p r o t e í n a s d e las b a s e s d e d a t o s
(14,5%).
Financiamiento:
Proyecto
FONDECYT
1070368
y
UNAB 02-08/R.
XXXI Reunión
E X P L O R A N D O UN M É T O D O
ALTERNATIVO DE DIAGNOSTICO
DE
CÁNCER
VESICAL
BASADO
EN
LA
DETECCIÓN
D I F E R E N C I A L D E R N A s M I T O C O N D R I A L E S NO C O D I F I C A N T E S
( E x p l o r i n g a n a l t e r n a t i v e m e t h o d of b l a d d e r c á n c e r d i a g n o s i s b a s e d in
the
differential
expression
of n o n
coding mitocondrial
RNAs)
R i v a s , A . , L a n d e r e r , E. - - , L ó p e z , C - , B u r z i o , V . ' , B u r z i o ,
L 1.2.3.4 V i l l e g a s , J .
F u n d a c i ó n C i e n c i a P a r a la V i d a , I n s t i t u t o
Milenio (MIFAB) , Universidad Andrés Bello , Grupo B I O S
Nuestro laboratorio
ha
descrito
una
n u e v a familia de
RNAs
m i t o c o n d r i a l e s no codificantes ( R N A m t n c ) , constituido por dos grupos:
el p r i m e r o d e n o m i n a d o R N A m t n c s e n t i d o c o r r e s p o n d i e n t e al r R N A
16S que tiene covalentemente
u n i d o un f r a g m e n t o p r o v e n i e n t e d e l
t r a n s c r i t o d e la h e b r a n o c o d i f i c a n t e d e l m i s m o g e n . P o r o t r o l a d o s e
i d e n t i f i c ó un s e g u n d o g r u p o d e n o m i n a d o R N A m t n c
antisentido,
c o r r e s p o n d i e n t e al t r a n s c r i t o d e la h e b r a n o c o d i f i c a n t e del g e n r R N A
1 6 S q u e t i e n e u n i d o un f r a g m e n t o p r o v e n i e n t e d e l t r a n s c r i t o d e l g e n
r R N A 1 6 S . H e m o s d e t e r m i n a d o q u e el p a t r ó n d e e x p r e s i ó n d e a m b a s
f a m i l i a s d e t r a n s c r i t o s e s d i f e r e n c i a d a d e p e n d i e n d o del t i p o c e l u l a r :
los R N A m t n c s e n t i d o s e e x p r e s a n e n c é l u l a s e n p r o l i f e r a c i ó n , t a n t o
n o r m a l e s c o m o t u m o r a l e s , s i n e m b a r g o n o s e e x p r e s a n en c é l u l a s
q u i e s c e n t e s . L o s R N A m t n c a n t i s e n t i d o s e e x p r e s a n s ó l o en c é l u l a s
q u e p r o l i f e r a n d e m a n e r a n o r m a l , y n o e n c é l u l a s t u m o r a l e s o en
r e p o s o . En c o n s e c u e n c i a , esto p u e d e constituir una
poderosa
h e r r a m i e n t a d e d i a g n o s t i c o . S i e n d o el c á n c e r v e s i c a l u n o d e l o s t i p o s
d e cáncer m a s f r e c u e n t e s y su d e t e c c i ó n b a s a d a principalmente
m e d i a n t e m e t o d o l o g í a s i n v a s i v a s , c o m o c i s t o s c o p i a o b i o p s i a s , el
p r e s e n t e t r a b a j o m u e s t r a l o s a v a n c e s r e a l i z a d o s en la r e c u p e r a c i ó n
d e c é l u l a s t u m o r a l e s y en la d e t e c c i ó n n o i n v a s i v a d e e s t e t i p o d e
células
p r e s e n t e s en m u e s t r a s d e o r i n a m e d i a n t e la t é c n i c a d e
h i b r i d a c i ó n in situ ( H I S ) e h i b r i d a c i ó n in situ f l u o r e s c e n t e ( F I S H ) y su
::rrelación
con
el
diagnóstico
del
paciente.
(PFB-16,
MIFAB
P-04-071-F.
FONDECYT
1085210,
UNAB
DI
30-06/R,
FONDEF D04I1338).
1
1
2
3
2
3
1 2
1 , 2 , 3 , 4
1
2
i
3
3
4
ANALISIS GENETICO Y GENOMICO EN T U M O R E S DESMOIDES
DE P A C I E N T E S C O N P O L I P O S I S A D E N O M A T O S A FAMILIAR:
C O M P A R A C I O N C O N E L C A N C E R C O L O R R E C T A L (Genetic and
g e n o m i c a n a l y s i s in d e s m o i d t u m o r s f r o m p a t i e n t s w i t h f a m i l i a l
adenomatous
polyposis:
a comparison
with
colorectal
cáncer)
A l v a r e z , K . , O r e l l a n a , P . - , D e la F u e n t e , M . , W i e l a n d t , A . M . * ,
O y a r z o , M . , C h u r c h , J , L ó p e z - K o s t n e r , F. , C a r v a l l o , P. . U n i d a d de
Coloproctología, Clínica Las C o n d e s , D e p a r t a m e n t o de Biología
Celular y Molecular, Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de C h i l e ,
Departamento Anatomía Patológica, Clínica A l e m a n a , Cleveland
Clinic F o u n d a t i o n , C l e v e l a n d - O h i o , U S A
1 2
3
1
2
1 , 2
4
1
1
2
2
1
2
3
4
U n a v a r i a n t e h e r e d i t a r i a d e l c á n c e r c o l o r r e c t a l e s la p o l i p o s i s
a d e n o m a t o s a familiar q u e se origina d e b i d o a m u t a c i o n e s en el gen
A P C , y cuyos pacientes
pueden
además
desarrollar
tumores
d e s m o i d e s . H a s t a a h o r a s e s a b e q u e e n el d e s a r r o l l o d e l c á n c e r
colorrectal ocurren a l t e r a c i o n e s en g e n e s e s p e c í f i c o s tales c o m o
A P C , K R A S , D C C y P 5 3 , sin e m b a r g o e l c o n o c i m i e n t o g e n é t i c o
m o l e c u l a r es e s c a s o p a r a los t u m o r e s d e s m o i d e s . C o n s i d e r a n d o q u e
a m b o s t u m o r e s c o m p a r t e n la m i s m a m u t a c i ó n e n el g e n A P C , n o s
p r o p u s i m o s estudiar las a l t e r a c i o n e s g e n é t i c a s que ocurren en los
t u m o r e s d e s m o i d e s e n c o m p a r a c i ó n c o n la i n f o r m a c i ó n p u b l i c a d a
p a r a el c á n c e r c o l o r r e c t a l . P a r a e s t o s e e s t u d i a r o n 6 b i o p s i a s d e
t u m o r e s d e s m o i d e s , en l a s c u a l e s s e e v a l ú o la p r e s e n c i a d e
m u t a c i o n e s s o m á t i c a s y / o d e l e c i o n e s e n el g e n A P C , a d e m á s d e
d e l e c i o n e s d e l o s loci p a r a D C C y P 5 3 , y m u t a c i o n e s s o m á t i c a s p a r a
el protón c o g e n K R A S . P a r a esto se r e a l i z a r o n las t é c n i c a s S S C P y
secuenciación de D N A , y detección m a r c a d o r e s S T R . A d e m á s se
d e t e r m i n a r o n las a l t e r a c i o n e s g e n ó m i c a s en el D N A d e los t u m o r e s
m e d i a n t e a r r a y - C G H . I d e n t i f i c a m o s 4 t u m o r e s c o n a l t e r a c i o n e s en el
g e n A P C , u n a m u t a c i ó n s o m á t i c a y 3 c a s o s c o n d e l e c i ó n , lo c u a l
s u g i e r e la p a r t i c i p a c i ó n d e e s t e s u p r e s o r d e t u m o r e s en e l d e s a r r o t l o
d e l t u m o r d e s m o i d e . N o d e t e c t a m o s m u t a c i o n e s en K R A S , ni
d e l e c i o n e s de los g e n e s D C C y P 5 3 . A d e m á s , i d e n t i f i c a m o s ,
d e l e c i o n e s y g a n a n c i a s g e n ó m i c a s , s i e n d o l a s m á s r e c u r r e n t e s la
d e l e c i ó n 2 q 2 1 - 3 2 y la g a n a n c i a 1 1 q 1 2 - 1 3 . F O N D E C Y T 1 0 4 0 8 2 7 , T h e
C l e v e l a n d Clinic F o u n d a t i o n .
Anual
LA EXPRESIÓN D I F E R E N C I A L D E UNA N O V E D O S A FAMILIA D E
RNAs
MITOCONDRIALES
NO
CODIFICANTES
PARA
EL
DIAGNÓSTICO
DE
CÁNCER
PROSTÁTICO
(The
differential
e x p r e s s i o n of a n o v e l f a m i l y of n o n c o d i n g m i t o c h o n d r i a l R N A s f o r t h e
d i a g n o s i s of p r o s t a t e c á n c e r ) L a n d e r e r , E .
, Rivas, A. , Burzio,
V.
, Burzio, L.
, Villegas, J .
F u n d a c i ó n c i e n c i a p a r a la V i d a ,
I n s t i t u t o M i l e n i o M I F A B , F a c u l t a d d e C i e n c i a s d e la S a l u d , U N A B ,
G r u p o B I O S . Patrocinante: J a i m e . V..
1 , 2 , 3
1 , 2 , 3
1 , 2 , 3 , 4
1
1 , 2 , 3 , 4
1
2
3
4
N u e s t r o l a b o r a t o r i o h a d e m o s t r a d o la e x i s t e n c i a d e u n a n u e v a f a m i l i a
de R N A s no c o d i f i c a n t e s m i t o c o n d r i a l e s ( R N A n c m t ) , c o n s t i t u i d o s por
el R N A r i b o s o m a l 1 6 S m i t o c o n d r i a l , y a s e a en o r i e n t a c i ó n s e n t i d o
( R N A n c m t S) o a n t i s e n t i d o ( R N A n c m t A S ) , c o v a l e n t e m e n t e unido a un
r e p e t i d o i n v e r t i d o t r a n s c r i t o a p a r t i r d e la c a d e n a c o m p l e m e n t a r i a d e l
m i s m o g e n . E s t u d i o s b a s a d o s e n h i b r i d a c i ó n in situ ( H i S ) h a n
d e m o s t r a d o q u e la e x p r e s i ó n d e e s t a s m o l é c u l a s en c é l u l a s h u m a n a s
se e n c u e n t r a r e l a c i o n a d a c o n el e s t a d o proliferativo d e las m i s m a s ; d e
tal f o r m a , l a s c é l u l a s n o r m a l e s p r o l i f e r a t i v a s e x p r e s a n en f o r m a
equivalente los R N A n c m t S y A S y las células n o r m a l e s q u i e s c e n t e s
no e x p r e s a n n i n g u n o . Sin e m b a r g o , las células t u m o r a l e s reprimen
s e l e c t i v a m e n t e la e x p r e s i ó n del R N A n c m t A S , a b r i e n d o la p u e r t a al
desarrollo de m é t o d o s
diagnósticos
selectivos basados en
la
v i s u a l i z a c i ó n d e la e x p r e s i ó n d i f e r e n c i a l d e a m b a s
moléculas.
C o n s i d e r a n d o q u e el c á n c e r d e p r ó s t a t a e s la s e g u n d a c a u s a d e
m u e r t e p o r c á n c e r en C h i l e ; q u e la p r o y e c c i ó n p a r a los p r ó x i m o s 10
a ñ o s m u e s t r a un i n c r e m e n t o
en la m o r t a l i d a d e s p e c í f i c a p o r la
p a t o l o g í a , y q u e la d i s c o r d a n c i a e n t r e el a n á l i s i s del e s t a d i a j e c l í n i c o
b a s a d o en la b i o p s i a p o r p u n c i ó n v e r s u s el e s t a d i a j e p a t o l ó g i c o l l e g a
al 4 0 % , n u e s t r o l a b o r a t o r i o
c o m e n z ó a desarrollar una nueva
a p r o x i m a c i ó n d i a g n ó s t i c a b a s a d a e n la e v a l u a c i ó n d e la e x p r e s i ó n d e
los n c m t R N A S y A S , m e d i a n t e H i S e n b i o p s i a s p r o s t é t i c a s en a r a s d e
m e j o r a r el d i a g n o s t i c o . P B F - 1 6 , M I F A B P - 0 4 - 0 7 1 - F ;
FONDECYT
1 0 8 5 2 1 0 . F O N D E F D 0 4 I 1 3 3 8 , U N A B D I 3 2 - 0 6 / R , Clínica Las C o n d e s .
ALTERACIONES GENÓMICAS EN TUMORES DE CÁNCER DE
MAMA: ANÁLISIS P O R M I C R O A R R E G L O S D E DNA (Genomic
p r o f i l e of b r e a s t c á n c e r t u m o r s : a n a r r a y - C G H a n a l y s i s ) H u r t a d o , C . ,
Alvarez, C . \ Solis, L. , H e n r i q u e z , I. , C o r v a l á n , A . , Alvarez, M ,
R o z e n b l u m , E , M u n r o e , D. , Carvallo, P. . Depto. Biología Celular y
Molecular, Fac. C s . Biológicas, P. Universidad Católica de Chile ,
F a c u l t a d d e M e d i c i n a , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e , C e n t r o d e
C á n c e r , F a c . M e d i c i n a , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e , L a b . M o l .
Technology, SAIC-Frederick, NCI-Frederick, USA .
U n a d e l a s e s t r a t e g i a s m á s u s a d a s e n la i d e n t i f i c a c i ó n d e g e n e s
s u p r e s o r e s d e t u m o r y p r o t o n c o g e n e s q u e p a r t i c i p a n e n el d e s a r r o l l o
d e l c á n c e r d e m a m a e s la b ú s q u e d a d e a l t e r a c i o n e s g e n ó m i c a s , t a l e s
c o m o d e l e c i o n e s y a m p l i f i c a c i o n e s g é n i c a s . N o s o t r o s a n a l i z a m o s el
D N A g e n ó m i c o d e 7 7 b i o p s i a s t u m o r a l e s d e 5 2 p a c i e n t e s con c á n c e r
de m a m a hereditario (45 B R C A X , 3 B R C A 1 , 4 B R C A 2 ) y de 25
esporádicos
mediante
la
técnica
de
Hibridación
Genómica
C o m p a r a t i v a en m i c r o a r r e g l o s d e D N A ( a r r a y - C G H ) p a r a i d e n t i f i c a r
deleciones y amplificaciones g e n ó m i c a s . Nuestro análisis reveló que
l a s b i o p s i a s d e c á n c e r h e r e d i t a r i o p r e s e n t a n un perfil d e d e l e c i o n e s y
g a n a n c i a s diferente a las de t u m o r e s e s p o r á d i c o s . E s t a s diferencias
incluyen deleciones en: 8p23, 11p15-p14, 12p13, 16p13 y 17p12,
(BRCAX); 2q22, 3 p 2 1 , 10q21, 12q13 y 17q21 (BRCA1); 1q32-q41,
2q34-q35, 3p12, 4q28, 13q12-q13 (BRCA2); 1p36-p33, 1q24-q25,
3p14,
7q11-q21,
11p15,
11q22-q24,
17p13
(esporádicos).
Adicionalmente,
observamos
distintas
ganancias
genómicas,
i n c l u y e n d o las regiones: 1q, 3 q 2 5 , 1 6 p t e r - p 1 3 , 1 7 q 1 2 - q 2 1 , 1 7 q 2 4 ,
19p13-ter y 20q11 ( B R C A X ) ; 3q25, 6q22, 11q12 y 22q12 (BRCA1);
1q32, 2q24, 6p21 y 9p21 ( B R C A 2 ) ; 1 p 2 1 , 7 q 3 1 , 17q21 y 19p13
(esporádicos). Identificamos algunos g e n e s supresores de t u m o r de
c o n o c i d a p a r t i c i p a c i ó n en cáncer; M L H 1 , A T M y R A S S F 1 ; así c o m o
protoncogenes; W N T 2 , V A V 1 , C C N L 1 y SRC. Las
diferencias
g e n ó m i c a s e n c o n t r a d a s e n t r e a m b o s g r u p o s d e t u m o r e s s u g i e r e la
p a r t i c i p a c i ó n d e m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s d i f e r e n t e s en el d e s a r r o l l o
de tumores esporádicos y hereditarios, probablemente influenciado
p o r la p r e s e n c i a d e m u t a c i o n e s e n la l í n e a g e r m i n a l e n l o s t u m o r e s
hereditarios. F O N D E C Y T 1080595 y 3 0 7 0 0 2 1 .
1
2
4
2
4
2
3
1
1
2
3
4
Sociedad
CONCERTACIÓN
CÉLULAS
ENTRE
MUERTE
TUMORALES
MITOCONDRIAL
(Cross-talk
AL
CELULAR
INTERFERIR
NO-CODIFICANTE
between
cell
death
type
I
and
II
of a n t i s e n s e n o n - c o d i n g m i t o c h o n d r i a l
S. - , Burzio, V ,
1
CIENCIA
PARA
FUNDACIÓN
LA
EL
tumor
RNA
3
LA
3
by
(ncmtRNA)
FUNDACIÓN
2
GRUPOBIOS, ,
VIDA,
EN
RNA
cells
1
MIFAB,
PARA
II
(RNAmtnc)
V i l l e g a s , J . , B u r z i o , L. .
VIDA,
CIENCIA
I Y
of
interference
3
TIPO
CON
ANTI SENTI D O
Vidaurre,
2
de Bioquímica y Biología
MIFAB,
UNAB ,
GRUPOBIOS,
Molecular
DETECCION
PRECOZ
ASOCIADO
cáncer
A
associated
Hemos
descrito
no-codificante
y
de
caracterizado
origen
una
nueva
mitocondrial,
los
familia
cuales
de
RNAs
presentan
un
r e p e t i d o i n v e r t i d o ( R l ) , d e l o n g i t u d v a r i a b l e , c o v a l e n t e m e n t e u n i d o al
e x t r e m o s 5? del r R N A
1 6 S m i t o c o n d r i a l . E s t u d i o s d e h i b r i d a c i ó n in
to
2
CANCER
the
DE
DE HPV
HPV
CUELLO
infection)
3
DE
UTERO
(eariy detection
of
cervix
1
Villota,
2
C . , villa,
I. ,
4
1
b o c e a r d o , e . , g a e t e , f. , b u r z i o . L . . f u n d a c i ó n c i e n c i a p a r a la V i d a ,
2
ludwig institute
3
for c á n c e r r e s e a r c h , hospital
luis t i z n e ,
fundación
4
c i e n c i a p a r a la v i d a .
hemos
identificado y caracterizado
una nueva familia de R N A s
no
codificantes d e origen m i t o c o n d r i a l ( R N A m t n c , de R N A mitocondria no
codificante),
3
UNAB .
DEL
LA INFECCIÓN
formada
por
transcritos
sentido
y
antisentidos.
Al
c o m p a r a r la e x p r e s i ó n d e e s t o s R N A s e n c é l u l a s t e j i d o s n o r m a l e s y
en t u m o r e s (biopsias) h e m o s d e m o s t r a d o q u e existe una
expresión
diferencial de estos transcritos. L a s células presentes en tejido normal
expresan
niveles
muy
semejantes
de
los
RNAmtnc
Sentido
y
situ r e v e l a n u n p a t r ó n de e x p r e s i ó n d i f e r e n c i a l e n t r e c é l u l a s n o r m a l e s
A n t i s e n t i d o . S i n e m b a r g o , la c o n t r a p a r t e t u m o r a l , e x p r e s a el R N A m t n c
e n proliferación y células tumorales. Células normales e n proliferación
sentido pero repnme
expresan u n transcrito sentido y dos tipos de transcritos
sido encontrado en u n a gran cantidad de tipos tumorales analizados,
antisentido,
los
R N A m t n c Antisentido.
Este fenómeno
ha
e n c a m b i o , e n c é l u l a s t u m o r a l e s s ó l o s e e x p r e s a n el t r a n s c r i t o s e n t i d o
tanto en h u m a n o c o m o en m o d e l o murino.
r e p r i m i e n d o los t r a n s c r i t o s a n t i s e n t i d o . E l t r a t a m i e n t o in v i t r o e n l í n e a s
r e s u l t a d o s , h e m o s d e t e r m i n a d o q u e u n n u e v o R N A m t n c , el c u a l n o s e
Conjuntamente con estos
celulares tumorales con oligonucleótidos induce una masiva
muerte
e x p r e s a e n c é l u l a s t u m o r a l e s ni e n c é l u l a s n o r m a l e s , e s e x p r e s a d o e n
c e l u l a r , m i e n t r a s q u e c é l u l a s n o r m a l e s n o s o n a f e c t a d a s p o r el m i s m o
c é l u l a s i n m o r t a l i z a d a s c o n el Virus, d e l P a p i l o m a H u m a n o ( H P V ) . L a
t r a t a m i e n t o . L a m u e r t e c e l u l a r i n d u c i d a p o r el t r a t a m i e n t o p r e s e n t a los
expresión
típicos c a m b i o s m o r f o l ó g i c o s y m o l e c u l a r e s de una m u e r t e c e l u l a r tipo
i n m o r t a l i z a d a s o p r e t u m o r a l e s t a n t o e n in vitro. c o m o en biopsias de
I
cuello
(translocación
condensación
hemos
de
observado
asociados
a
fosfatidilsenna,
nuclear
y
que
esta
autofagia,
observación
de
activación
fragmentación
muerte
tal
como,
estructuras
del
está
de
DNA).
precedida
vacuolización
multilamelares,
caspasas,
Adicional mente
por
eventos
(Neoplasia
establecer
De
esta
ha
manera
en Biopsias
grado
relación
1
permitido
hemos
de
e n el d e s a r r o l l o
intraepitelial
una
RNA
y
identificar
podido
pacientes
células
identificar
estas
correspondientes
del c á n c e r d e c u e l l o d e
2)
y
esto
e n t r e la e x p r e s i ó n
nos
ha
a
útero
permitido
d e los R N A m t n c
y los
e s t a d i o s d e d e s a m o l l o d e l c á n c e r u t e r i n o , lo q u e e n c o n j u n t o c o n l o s
-análisis
a s o c i a d o s a la m u e r t e c e l u l a r t i p o I y II.
útero.
nuevo
estadios tempranos
y
N u e s t r o s resultados indican q u e habría una c o n c e r t a c i ó n de eventos
este
células pretumorales
mitocondria.
citoplasmática
y colapso
de
de
anatomopatológicos
realizados
en
la
actualidad,
podrían
m e j o r a r e n o r m e m e n t e la d e t e c c i ó n d e l e s i o n e s p r e c u r s o r a s del c á n c e r
de cuello de útero.
LINFOCITOS
CAMBIOS
INFECTADOS
EN
CON
VIRUS
EL CITOESQUELETO
HTLV-1
PRODUCEN
NEURÍTICO
DE
CÉLULAS
P C 1 2 ( H T L V - I i n f e c t e d l y m p h o c y t e s p r o d u c e c h a n g e s in t h e neuritic
1
1
cytoskeleton of P C 1 2 cells) P a n d o , M . E . , K e t t l u n , A . M . , M a l d o n a d o ,
2
3
4
H . \ Ramírez, E. , Cartier, L. , Alberti, C . \ E s c u d e r o , C . , C o l l a d o s , L . \
1
Valenzuela, M.A. . Depto Bioquímica y Biología Molecular,
Ciencias
Químicas
y
Farmacéuticas.
Universidad
Facultad
de
3
paraparesia
espástica
Syncytial
Virus
CON
Impairs
INTERFERENCIA
CELULAS
T
Cell
DE
LA
DENDRITICAS
Activation
By
SINAPSIS
(Respiratory
Preventing
Synapse
1
1
E.D. ,
1
1
Carreño, L.J. , Bueno,
Universidad
Fac Ciencias Biológicas, P U C .
MEDIANTE
1
A s s e m b l y W i t h Dendritic Cells) G o n z á l e z , P.A. , Prado, C E . , Leiva,
2
Fisiología,
T
INMUNOLOGICA
Departamento
4
La
LINFOCITOS
1
Chile. ,
P r o g r a m a d e Virología, F a c u l t a d M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de Chile. I S P .
Depto Ciencias Neurológcias, Facultad Medicina , Depto
E L V I R U S R E S P I R A T O R I O SINCICIAL INHIBE L A ACTIVACION D E
de
Genética
Católica
Universidad Andrés
2
S.M. , Riedel, C A ,
Molecular
de Chile.
\
y
Microbiología,
Departamento
2
Bello , Departamento
de C s .
de Genética
Biológicas,
Molecular
asociada
a
al
retrovirus
HTLV-1
se
3
Biológicas y M e d i c i n a , Pontificia U n i v e r s i d a d Católica de C h i l e .
se propone
m u n d i a l e s de h o s p i t a l i z a c i ó n infantil y constituye un serio
d e b i d o a la a c c i ó n d e la p r o t e í n a viral T a x
infectados.
Alteraciones
en
la
secretada
dinámica
de
los
vitro
degeneración
células T. P o r otro l a d o , las c é l u l a s
diferenciadas
con
células
utilizó
como
modelo
células
y cocultivadas a través de m e m b r a n a
linfocitarias
control K-562. Mediante
diferentes
Se
formas
MT2
que
contienen
PC12
semipermeable
el p r o v i r u s , o c o n
su
" w e s t e m blot" de P C 1 2 usadas se determinó
modificadas
de
tubulina
relacionadas
con
la
causas
problema
e c o n ó m i c o p a r a l o s s i s t e m a s d e s a l u d p ú b l i c a . E s t u d i o s r e c i e n t e s in
microtúbulos y m a n t e n c i ó n del citoesqueleto de actina p u e d e n c a u s a r
neurítica.
y
Microbiología y D e p a r t a m e n t o de R e u m a t o l o g í a , Facultad de Ciencias
El V i r u s R e s p i r a t o r i o S i n c i c i a l ( V R S ) e s u n a d e las p r i m e r a s
linfocitos
A.M. .
Pontificia
c a r a c t e r i z a p o r la d e g e n e r a c i ó n a x o n a l e n e l h a z c ó r t i c o - e s p i n a l , q u e
desde
3
Kalergis,
e in v i v o
sugieren
que
VRS
puede
p r e v e n i r la a c t i v a c i ó n
dendríticas (DCs) son
de
células
p r e s e n t a d o r a s d e a n t í g e n o p r o f e s i o n a l e s q u e p o s e e n la c a p a c i d a d d e
m o d u l a r y activar linfocitos T helper (Th) antígeno-específicos.
Por
e s t e m o t i v o , s e r í a p r o v e c h o s o p a r a V R S i n t e r f e r i r c o n la f u n c i ó n d e
DCs
e i m p e d i r la i n d u c c i ó n d e u n a
respuesta
immune T. En
este
e s t a b i l i d a d d e m i c r o t ú b u l o s , y d e la f o r m a a c t i v a d e G S K - 3 p q u e j u n t o
e s t u d i o c a r a c t e r i z a m o s el e f e c t o d e V R S s o b r e D C s y s u c a p a c i d a d
c o n C D K 5 f o s f o r i l a a M A P 1 B , a s o c i a d a c o n la e s t a b i l i d a d del c o n o d e
de
crecimiento
por
O b s e r v a m o s que D C s i n f e c t a d a s c o n V R S s o n i n c a p a c e s de activar
Se encontró u n a u m e n t o de tubulina tirosinada
linfocitos T antígeno-especificos y c o m o resultado de esta interacción,
( m a y o r inestabilidad) en P C 1 2 e x p u e s t a s a M T 2 y u n a disminución de
l o s l i n f o c i t o s T a d q u i r i e r o n u n f e n o t i p o a n é r g i c o . M á s a u n , la a c c i ó n d e
axonal.
inmunofluorescencia.
La
detectó
Tax
en
los
cultivos
de
MT2
activar a linfocitos
T
naÁ~ve
mediante
ensayos
de
co-cultivo.
la f o r m a a c t i v a d e la G S K - 3 p s e ñ a l a n d o q u e p o d r í a e s t a r a f e c t a d a la
V R S i n v o l u c r ó la i n h i b i c i ó n d e la f o r m a c i ó n d e s i n a p s i s
n o r m a l f u n c i ó n d e la M A B 1 B , p r o t e í n a q u e a s o c i a l o s c i t o e s q u e l e t o s
e n t r e D C s y l i n f o c i t o s T . N u e s t r o s d a t o s s u g i e r e n q u e la i n t e r f e r e n c i a
de microtúbulos-actina.
La presencia
de productos
secretables
inmunológica
de
c o n la f o r m a c i ó n d e s i n a p s i s i n m u n o l ó g i c a e n t r e e s t a s c é l u l a s p o d r í a
M T 2 t a m b i é n r e t a r d a r o n el i n i c i o d e la d i f e r e n c i a c i ó n . T o d o e s t o h a c e
c o n t r i b u i r a la p a t o g é n e s i s d e V R S e v a d i e n d o la r e s p u e s t a i n m u n e y
p e n s a r q u e T a x p u e d e c a u s a r c a m b i o s e n el c o n o
r e d u c i e n d o la e l i m i n a c i ó n d e v i r u s m e d i a d a p o r l i n f o c i t o s T .
de
crecimiento
a x o n a l , c a u s a n d o r e t r o t r a c c i ó n e n las n e u r i t a s . A c t u a l m e n t e s e esta
trabajando
e n la s í n t e s i s
de Tax
recombinante
a partir del
RNAm
o b t e n i d o d e M T 2 p a r a v e r el e f e c t o d i r e c t o d e T a x s o b r e los c u l t i v o s
d e P C 1 2 . F i n a n c i a m i e n t o F o n d e c y t 108 0 3 9 6 .
XXXI Reunión
Anual
BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR DE PLANTAS
ANÁLISIS
ESTRUCTURAL
TRANSPORTADORES
functional
A
quea,
analysis
1
F .
FUNCIONAL
EN FRUTALES
of b o r o n t r a n s p o r t e r
1
Rodríguez,
Departamento
Y
DE BORO
de
A. ,
Genética
DE
(Structural a n d
1
Molecular
A. ,
y
Arce-Johnson,
Microbiología.
ESTRUCTURAL
Vitis
Pontificia
vinifera
CV.
CARMENERE.
Universidad de Talca .
p o r lo q u e e s u n
and
functional
1
of V i t i s v i n i f e r a c v . C a r m e n e r e ) G a i n z a , F . l . , P é r e z , R . , G o n z á l e z ,
E.\
polínico,
(Structural
1
El b o r o e s t á i n v o l u c r a d o p r i n c i p a l m e n t e e n la f o r m a c i ó n de la p a r e d
del tubo
DELGEN
c h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e g e n V v Z I P i n v o l v e d in z i n c t r a n s p o r t i n g r a p e s
1
y e n la e l o n g a c i ó n
FUNCIONAL
1
P. .
Universidad Católica d e Chile .
íelular
Y
1
i n fruit c r o p s ) C a ñ ó n , P . ,
Bisquertt.
CARACTERIZACIÓN
VvZIP I N V O L U C R A D O E N T R A N S P O R T E D E ZINC E N B A Y A S D E
1
Ruiz-Lara,
S . . Instituto
de Biología
Vegetal
y
Biotecnología,
1
E n Vitis vinifera, la d e f i c i e n c i a e n z i n c , m i c r o n u t r i e n t e e s e n c i a l , se
m i c r o nutrí e n t e f u n d a m e n t a l p a r a e l d e s a r r o l l o n o r m a l d e l a s p l a n t a s .
manifiesta
S e cree q u e es a b s o r b i d o c o m o ácido bórico p o r las raíces e n forma
d e s a r r o l l o d e l a s b a y a s . E l l o o t o r g a e s p e c i a l r e l e v a n c i a a la a b s o r c i ó n
pasiva, aunque evidencias
y t r a n s p o r t e d e z i n c t a n t o e n el p r o c e s o d e c u a j a d e f r u t o s c o m o e n el
sustentan
la p r e s e n c i a d e u n t r a n s p o r t e
fundamental mente,
afectando
la
fructificación
y
el
a c t i v o . E l r a n g o e n t r e d é f i c i t y t o x i c i d a d al b o r o e s m u y e s t r e c h o , p o r
desarrollo d e bayas partenocárpicas
lo q u e la r e g u l a c i ó n e n t r e la a b s o r c i ó n y e x c l u s i ó n e n la c é l u l a s o n
mecanismos
\jndamentales
Se ha descrito que
participación
de una variedad
^ e n t e al d é f i c t d e b o r o e n el m e d i o , e x i s t e u n t r a n s p o r t a d o r d e b o r o
homeostasis
de Z n .
. 3 0 R 1 ) r e s p o n s a b l e de m o v i l i z a r el boro d e s d e las raíces hacia los
relacionados c o n la c a p t a c i ó n d e este m e t a l
: r o t e s , p e r m i t i e n d o el c r e c i m i e n t o n o r m a l d e la p l a n t a . Si b i e n e s t e
V v Z I P que codifica para u n a proteína similar a transportadores Z I P ha
proceso
para mantener su homeostasis.
se
ha
de sentó
monocotiledóneas,
Homólogos
a BOR1.
identificado
y
en
en frutales
Utilizando
clonado
nacrophyfla y Vitis
bases
genes
vinifera.
Arabidopsis
thaliana
no s e h a n identificado
de datos
homólogos
a
y
en
aún genes
de ESTs
BOR1
hemos
en
Citrus
Estos genes p o s e e n u n O R F de 2145pb
2148pb respectivamente. A m b o s codifican para una posible proteína
sido
de captación
identificado
levaduras
corresponde
no semilladas. E n plantas, los
distribución
de zinc
de transportadores
involucran
la
que controlan
la
U n grupo de ellos, denominados
en
indican
y
vides.
que
Estudios
a nivel radicular. El g e n
de
funcionalmente
ZIP, están
complementación
la
proteína
en
codificada
a u n t r a n s p o r t a d o r d e e n t r a d a d e z i n c . A l a n a l i z a r la
expresión de este g e n s e estableció s u expresión e n diferentes tejidos
de
Vitis
vinifera
determinándose
cv
que
C a r m é n Á re
su
actividad
incluyendo
flores
transcripcional
se
y
frutos
encuentra
d e 10 d o m i n i o s t r a n s m e m b r a n a y m e d i a n t e f u s i ó n a G F P , p r e s e n t a n
r e p r i m i d a e n b a y a s n o s e m i l l a d a s , lo q u e sugiere u n a a s o c i a c i ó n d e l
localización e n m e m b r a n a plasmática. E n s a y o s funcionales, utilizando
evento
complementación
homeostasis d e zinc.
jenes
en levaduras
codifican
para
Agradecimientos:
mutantes,
transportadores
Conicyt,
Proyecto
demuestran
de
boro
INNOVA
que ambos
en
CHILE
parten oca rpico
con
alteraciones
en
el
transporte
y
DE AROMAS
Y
plantas.
204-4037,
:!eo M i l e n o en G e n ó m i c a F u n c i o n a l d e P l a n t a s .
UNA M U T A N T E E N L A U G G T D E A R A B I D O P S I S THALIANA, U N A
EFECTO
ENZIMA
ALCOHOL
CLAVE
EN
CONTROL
ENDOPLASMATICO,
DE
CALIDAD
EN
MUESTRA
RETÍCULO
ALTERACIONES
D E L ETILENO
TRIUMPH
ACIL
EN LA FORMACIÓN
TRANSFERASA
EN
PERAS
PACKHAM S
(Effect of ethylene o n a r o m a formation a n d alcohol
acyl
M O R F O L Ó G I C A S . ( A n A r a b i d o p s i s thaliana mutant in t h e U G G T , a
transferase in P a c k h a m s T n u m p h pears) F u e n t e s , L . , Valdenegro,
k e y e n z y m e i n q u a l i t y c o n t r o l at t h e e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m ,
M. , Herrera, R. , M o y a - L e ó n , M . . Laboratorio d e Fisiología Vegetal,.
morphological
alterations.)
1
Tapia,
R. ,
Reyes,
shows
1
F.\
Orellana. A . .
1
Universidad Nacional Andrés Bello .
1
1
1
1
1
Instituto d e Biología V e g e t a l y B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d d e T a l c a . .
La
pera es u n fruto
climatérico
cuya m a d u r a c i ó n es regulado p o r
La presencia de un residuo terminal de glucosa en N-oligosacáridos
e t i l e n o . D u r a n t e é s t a s e p r o d u c e u n a l z a e n la p r o d u c c i ó n d e e t i l e n o lo
de polipéptidos recientemente sintetizados, constituye u n a señal para
q u e v a a c o m p a ñ a d o d e l d e s a r r o l l o d e a r o m a s . E n p e r a s el a r o m a e s
la a s i s t e n c i a d e c h a p e r o n a s d u r a n t e el p r o c e s o d e p l e g a m i e n t o e n el
p r o p o r c i o n a d o p r i n c i p a l m e n t e p o r e s t e r e s , s i n t e t i z a d o s p o r la e n z i m a
l u m e n del retículo e n d o p l a s m á r t i c o ( E R ) . L a e n z i m a r e s p o n s a b l e d e l
a l c o h o l - a c i l - t r a n s f e r a s a ( A A T ) . P a r a d i l u c i d a r el r o l d e e t i l e n o s o b r e la
r e c o n o c i m i e n t o de p r o t e í n a s m a l p l e g a d a s y d e la a d i c i ó n del r e s i d u o
p r o d u c c i ó n d e v o l á t i l e s y a c t i v i d a d d e A A T , s e e v a l u ó el e f e c t o d e
de
glucosa
es
la
UDP-glucosa
glicoproteína:
glucosiltransferasa
1-MCP
(bloqueador
del
receptor
de
etileno).
Para
esto,
peras
( U G G T ) . E s t a e n z i m a e s u n a p i e z a c l a v e e n el p r o c e s o d e c o n t r o l d e
Packharn s Triumph
:¿!idad q u e ocurre al interior del E R y s u función h a sido estudiada
E t h r e l ( 2 0 0 0 p p m ) . L u e g o d e e l l o la f r u t a f u e m a n t e n i d a 1 3 d í a s a
principalmente
en
eucanontes
unicelulares
y
no
en
individuos
fueron
tratadas
c o n 1-MCP (200 p p b ) o con
20°C, evaluando periódicamente la producción de etileno, c o m p u e s t o s
m u l t i c e l u l a r e s . P o r e s t o , d e c i d i m o s a n a l i z a r e l r o l d e e s t a e n z i m a e n la
volátiles y
Dlanta
m e n o r tasa d e producción d e etileno y de compuestos volátiles q u e
modelo
Arabidopsis
thaliana.
b i o q u í m i c a m e n t e la a c t i v i d a d U G G T
Primero,
detectamos
actividad A A T . Fruta tratada con 1-MCP presentó una
en fracciones enriquecidas de
fruta t r a t a d a c o n E t h r e l . L o a n t e r i o r c o i n c i d i ó c o n u n a m e n o r a c t i v i d a d
E R d e A r a b i d o p s i s . El a n á l i s i s de N - o l i g o s a c á r i d o s p r o d u c i d o s e n este
d e A A T e n f r u t o s t r a t a d o s c o n 1 - M C P . A d e m á s la a c t i v i d a d A A T d e
ensayo,
confirmó
^-abidopsis
Líneas
posee
la e s p e c i f i c i d a d
u n único
homocigotas
d e la e n z i m a .
gen q u e codifica
mutantes
fueron
aisladas
El g e n o m a
para
y
esta
de
pulpa supera a la d e piel. E s t o s r e s u l t a d o s indican q u e etileno tiene
enzima.
un rol i m p o r t a n t e s o b r e la a c t i v i d a d d e A A T y e n la g e n e r a c i ó n d e
posteriormente
caracterizadas. L a s plantas m u t a n t e s p o s e e n raíces m á s cortas que
las plantas silvestres y a d e m á s s o n p l a n t a s de m e n o r t a m a ñ o , esto
s u g i e r e u n r o l i m p o r t a n t e p a r a la U G G T e n l a e l o n g a c i ó n c e l u l a r y la
secresión de proteínas
en Arabidopsis thaliana Fondecyt
PCB-MN ICM P06-065-F, PFB-16.
1070379,
esteres
en pera. Agradecimientos
(PSD-61) y a Claudia Moggia.
a Proyecto
PBCT-Postdoctorado
Sociedad
de Bioquímica y Biología
DEFICIENCIA
EN
LA
FUNCIÓN
DEL
COMPLEJO
II
MITOCONDRIAL P R O D U C E UN A U M E N T O D E L A ACTIVIDAD
FOTO SINTETICA
EN
Arabidopsis
thaliana
(Impairment
in
m i t o c h o n c i r i a l c o m p l e x II p r o d u c e s a n i n c r e a s e of
photosynthetic
a c t i v i t y in Arabidopsis
thaiiana)
F u e n t e s , D. , Nunes-Nesi, A. ,
A r a u j o , W . , G ó m e z , I. , Fernie, A. , J o r d a n a , X . . D e p a r t a m e n t o de
G e n é t i c a Molecular y Microbiología, F a c u l t a d de Ciencias Biológicas.
Pontificia U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a de C h i l e . M a x P l a n c k Instituí fur
Molekulare Pflanzenphysiologie. Alemania .
1 2
2
1
2
2
1
1
2
SDH1-1
e s u n g e n q u e c o d i f i c a p a r a la f l a v o p r o t e í n a . u n a d e las
subunidades
de
la
succinato
deshidrogenasa
o
complejo
II
mitocondrial. En
n u e s t r o g r u p o h e m o s c a r a c t e r i z a d o u n a línea
h e t e r o c i g o t a m u t a n t e S D H 1 - 1 / s d h 1 - 1 y d o s l í n e a s s i l e n c i a d a s en el
g e n SDH1-1,
y l a s u t i l i z a m o s a h o r a p a r a e s t u d i a r el rol d e l c o m p l e j o II
e n t e j i d o f o t o s i n t é t i c o . O b s e r v a m o s q u e l a s p l a n t a s d e la l í n e a
m u t a n t e y de las s i l e n c i a d a s s o n d e m a y o r t a m a ñ o q u e las plantas
silvestres. Cuando analizamos
distintos
parámetros
fisiológicos
e n c o n t r a m o s q u e la a s i m i l a c i ó n d e C 0
y la c o n d u c t a n c i a e s t o m á t i c a
e s t á n a u m e n t a d a s t a n t o e n l a s p l a n t a s m u t a n t e s c o m o en l a s
silenciadas, y
esto
se
correlaciona
con
una mayor
apertura
e s t o m á t i c a . F i n a l m e n t e , c u a n d o f u s i o n a m o s el p r o m o t o r del g e n
SDH1-1
al g e n reportero G U S o b s e r v a m o s u n a e x p r e s i ó n e l e v a d a
d e l g e n SDH1-1
en los e s t o m a s . L o s r e s u l t a d o s de e s t e trabajo
m u e s t r a n q u e u n a a l t e r a c i ó n e n la f u n c i ó n d e c o m p l e j o II m i t o c o n d r i a l
p r o d u c e u n a u m e n t o e n la f o t o s í n t e s i s , p r o b a b l e m e n t e m e d i a d o p o r
u n c a m b i o e n la f u n c i ó n e s t o m á t i c a . F o n d e c y t 1 0 6 0 4 8 5 , B e c a d e
p a s a n t í a al e x t r a n j e r o C O N I C Y T y V R A I D , B e c a A T 2 4 0 8 0 1 0 0 .
Núcleo Milenio P06-009-F.
2
ANALISIS FUNCIONAL D E UNA P R O T E I N A TIPO L E C T I N A (LLP)
INDUCIDA P O R ACIDO SALICILICO E N L A R E S P U E S T A D E
D E F E N S A A E S T R E S E N A R A B I D O P S I S ( F u n c t i o n a l a n a l y s i s of a
S A - i n d u c i b l e l e c t i n like p r o t e i n ( L L P ) in t h e s t r e s s d e f e n s e r e s p o n s e in
A r a b i d o p s i s ) A r m i j o , G . , S a l i n a s , P. , L e i v a , D. , T a p i a , J . , L e ó n , L. ,
Loreto, H. . Departamento de Genética Molecular y Microbiología,
F a c u l t a d d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e .
E l á c i d o salicílico ( S A ) e s u n a h o r m o n a crucial p a r a el e s t a b l e c i m i e n t o
d e la r e s p u e s t a d e d e f e n s a a e s t r é s , y a q u e p o s e e la c a p a c i d a d d e
i n d u c i r la e x p r e s i ó n d e g e n e s c l a v e s e n e s t e p r o c e s o . E n e s t u d i o s
a n t e r i o r e s , m e d i a n t e un análisis del t r a n s c r i p t o m a de A r a b i d o p s i s ,
n u e s t r o laboratorio identificó un g r u p o d e g e n e s t e m p r a n a m e n t e
i n d u c i d o s p o r S A . D e n t r o d e e l l o s , el g e n L L P p o s e e el m a y o r n i v e l d e
a c t i v a c i ó n y es t r a n s c r i p c i o n a l m e n t e i n d u c i d o p o r S A y por inoculación
c o n Pseudomonas
syringae
p v t o m a t o ( A v r R p m 1 ) . El p r o d u c t o d e
L L P n o h a s i d o a s o c i a d o a u n a f u n c i ó n b i o l ó g i c a . P a r a e v a l u a r la
f u n c i ó n d e L L P e n la r e s p u e s t a d e d e f e n s a a p a t ó g e n o s , h e m o s
desarrollado líneas transgénicas sobreexpresoras, fusionadas
al
e p í t o p e c - M y c o a la p r o t e í n a G F P . E n p a r a l e l o , h e m o s a i s l a d o y
c a r a c t e r i z a d o u n a l í n e a h o m o c i g o t a , m u t a n t e i n s e r s i o n a l p a r a el g e n .
A c t u a l m e n t e e v a l u a m o s la r e s p u e s t a d e e s t a s l í n e a s a la i n o c u l a c i ó n
c o n la b a c t e r i a Pseudomonas
syringae
pv t o m a t o ( A v r R p m l ) . Los
r e s u l t a d o s o b t e n i d o s i n d i c a n q u e L L P e s t a r í a i n v o l u c r a d a en la
respuesta
de
defensa
contra
esta
bacteria.
Financiado
por
FONDECYT-CONICYT
(1060494)
y
Núcleo
Milenio
Genómica
Funcional Plantas (P06-009-F).
1
1
1
1
1
1
1
Molecular
E L G E N LOCHI C O D I F I C A P A R A UNA ENDOQUITINASA D E
C L A S E III Q U E E S E X P R E S A D O E S P E C Í F I C A M E N T E E N R A Í C E S
Y N O D U L O S D E L O T U S S P . E INDUCIDO P O R E F E C T O D E L
D É F I C I T H Í D R I C O . ( L o C h i g e n c o d i n g f o r C l a s s III e n d o c h i t i n a s e t h a t
is s p e c i f i c a l l y e x p r e s s e d in r o o t s a n d n o d u l e s of L o t u s s p . a n d is
i n d u c e d b y e f f e c t of w a t e r d é f i c i t . ) T a p i a , G . , A c u ñ a , H . . I n s t i t u t o d e
Investigaciones
Agropecuarias,
INIA-Quilamapu .
1
1
1
Patrocinante: R u i z - L a r a . S..
L a s q u i t m a s a s s o n e n z i m a s q u e c a t a l i z a n la h i d r ó l i s i s d e e n l a c e s
B-1,4-glicósidos,
presentes
en
biopolímeros
de
N-acetil-Dg l u c o s a m i n a ( Q u i t i n a ) . L a s q u i t i n a s a s p u e d e n s e r c l a s i f i c a d a s en d o s
c a t e g o r í a s : E x o q u i t i n a s a s y E n d o q u i t i n a s a s s e g ú n su c a p a c i d a d d e
atacar e n l a c e s entre m o n ó m e r o s de los e x t r e m o s o internos. En
p l a n t a s , e s t a s e n z i m a s c u m p l e n u n a f u n c i ó n i m p o r t a n t e en la d e f e n s a
c o n t r a e l a t a q u e por p a t ó g e n o s , a u n q u e t a m b i é n s e h a d e s c r i t o su
i n d u c c i ó n frente a d a ñ o m e c á n i c o , o z o n o , metales p e s a d o , frío y
s a l i n i d a d . A s í m i s m o , s e h a d e s c r i t o su rol e n la r e g u l a c i ó n d e la
c o n c e n t r a c i ó n d e f a c t o r e s d e n o d u l a c i ó n ( N o d ) en a l g u n a s e s p e c i e s
l e g u m i n o s a s . U t i l i z a n d o u n a m e t o d o l o g í a b a s a d a en a n n e a l i n g c o n t r o l
p r i m e r , s e a i s l ó un f r a g m e n t o g é n i c o c u y a s e c u e n c i a t r a d u c i d a p o s e e
u n a a l t a h o m o l o g í a c o n la s u p e r f a m i l i a 1 8 d e las g l i c o s i l h i d r o l a s a s .
Mas
específicamente,
la
secuencia
aislada
posee
una
alta
conservación
en
residuos
aminoacídicos
con
la
familia
de
e n d o q u i t i n a s a s d e c l a s e III e n d i v e r s a s e s p e c i e s l e g u m i n o s a s , t a l e s
c o m o Sesbania rostrata, M e d i c a g o sativa, Glycine max y Vigna
unguiculata. L o s análisis de expresión g é n i c a muestran q u e este gen
es s o b r e e x p r e s a d o d u r a n t e estrés h í d n c o en n o d u l o s de Lotus sp. Así
m i s m o , su e x p r e s i ó n es a c o t a d a a raíces y n o d u l o s . Los análisis
b i o i n f o r m á t i c a s h a n p r e d i c h o c o n u n a a l t a c o n f i a b i l i d a d la p r e s e n c i a
d e un p é p t i d o s e ñ a l d e l o c a l i z a c i ó n e x t r a c e l u l a r . L o s r e s u l t a d o s
sugieren que esta endoquitinasa actuaría c o m o una nodulina de
e x p r e s i ó n t a r d í a , d e f o r m a s i m i l a r a S r c h i 1 3 d e S. r o s t r a t a l i m i t a n d o la
acción de factores Nod Agradecimientos:Proyecto L O T A S S A .
ANALISIS D E EXPRESIÓN GÉNICA G L O B A L E N R E S P U E S T A A
LA
INFECCIÓN
VIRAL
DURANTE
EL
PROCESO
DE
M A D U R A C I Ó N E N Vitis
vinifera
( A n a l y s i s of g e n e e x p r e s s i o n in
r e s p o n s e to v i r a l i n f e c t i o n t h r o u g h r i p e n i n g in g r a p e b e r r i e s ) V e g a , A . ,
Medina, C. , A r c e - J o h n s o n , P. . D e p a r t a m e n t o de Genética Molecular
y
Microbiología.
Facultad
de
Ciencias
Biológicas.
Pontificia
Universidad Católica de C h i l e . .
1
1
1
1
L o s v i r u s c a u s a n e n f e r m e d a d e s c r ó n i c a s en v i d e s , sin q u e s e h a y a n
descrito reacciones
de resistencia. Estas infecciones
generan
c a m b i o s e n la p l a n t a , q u e s e t r a d u c e n e n u n a d i s m i n u c i ó n en el
c r e c i m i e n t o , d e f o r m a c i ó n d e h o j a s y a l t e r a c i o n e s e n la c a l i d a d d e l o s
frutos, entre o t r o s . Los s í n t o m a s q u e c a u s a n los virus han sido
p r e v i a m e n t e descritos p e r o se d e s c o n o c e n los p r o c e s o s fisiológicos
i n v o l u c r a d o s , e s p e c i a l m e n t e su e f e c t o en el d e s a r r o l l o y m a d u r a c i ó n
d e l f r u t o . El o b j e t i v o d e e s t e t r a b a j o e s e s t u d i a r c a m b i o s m o l e c u l a r e s
q u e o c u r r e n e n l o s f r u t o s d e Vitis vinifera
cv. C a b e r n e t S a u v i g n o n
d u r a n t e la i n f e c c i ó n p o r el v i r u s G L R a V 3 . S e r e a l i z ó un a n á l i s i s d e la
e x p r e s i ó n g é n i c a g l o b a l en f r u t o s p r o v e n i e n t e s de p l a n t a s s a n a s e
i n f e c t a d a s m e d i a n t e el m i c r o a r r e g l o G e n e C h i p d e A f f y m e t r i x en d o s
e s t a d o s d e m a d u r a c i ó n . S e i d e n t i f i c a r o n u n t o t a l d e 1 1 6 g e n e s e n el
e s t a d o d e p i n t a ( i n i c i o d e m a d u r a c i ó n ) y 9 0 6 g e n e s en b a y a m a d u r a
con e x p r e s i ó n diferencial entre los frutos d e plantas i n f e c t a d a s y
p l a n t a s s a n a s . El a n á l i s i s f u n c i o n a l d e e s t o s g e n e s i n d i c a q u e la
respuesta de d e f e n s a , estrés y s e n e s c e n c i a , c o m o t a m b i é n ,
la
biosíntesis de metabolitos primarios y secundarios, se encuentran
a f e c t a d o s . E s t a e x p r e s i ó n d i f e r e n c i a l p o d r í a e x p l i c a r los c a m b i o s
fisiológicos
observados
en
frutos
de
plantas
infectadas.
A g r a d e c i m i e n t o s : C O N I C Y T , 0 7 G E N O M A 0 1 , C o n s o r c i o del V i n o
INNOVA 05CTE01-03, VINNOVA.
XXXI Reunión
Anual
Paneles
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE PROTEÍNAS; ENZIMOLOGÍA
1. E N Z I M A
B I F U N C I O N A L D E L A F A M I L I A 43 D E L A S G L I C O S I L
HIDROLASAS
DE
PeniciUium
BETA-D-XILOSIDASA
PURIFICACIÓN,
( B i f u n c t i o n al
purpurogenum
Y
43
purpurogenum
ACTIVIDAD
ALFA-L-ARABINOFURANOSIDASA:
PROPIEDADES
family
CON
Y
SECUENCIA
glycoside
AMINOACIDICA
hydrolase
with
from
Penicillium
beta-D-xylosidase
alpha-L-arabinofuranosidase
activities:
Purification,
properties
1
2.
IDENTIFICACIÓN
Y
MULTIENZIMÁTICOS
purpurogenum
secreted
1
M. ,
ANÁLISIS
DE
SECRETADOS
COMPLEJOS
POR
Penicilliurr
( I d e n t i f i c a t i o n a n d a n a l y s i s of m u l t i e n z y r n e c o m p l e x e s
1
by Penicillium
2
p u r p u r o g e n u m ) González, Á. ' ,
1
Eyzaguirre.
J. .
Departamento
de
Navarrete
Ciencias
Biológicas
1
and
U n i v e r s i d a d A n d r é s Bello, S a n t i a g o . , Pontificia Universidad Católica
and
de Valparaíso. .
1
a m i n o acid sequence) R a v a n a l , M.C. , Eyzaguirre, J . . Departamento
2
El h o n g o P e n i c i l l i u m p u r p u r o g e n u m e s u n a c t i v o s e c r e t o r d e e n z i m a s
de Ciencias Biológicas, Universidad A n d r é s Bello, Santiago. .
h e m i c e l u l o l í t i c a s q u e s o n p r o d u c i d a s al c u l t i v a r l o e n d i v e r s a s
fuentes
E l h o n g o P e n i c i l l i u m p u r p u r o g e n u m s e c r e t a al m e d i o d e c u l t i v o u n a
de
en
gran
enzimas
1
variedad
de
enzimas
xilanolíticas,
entre
ellas
tres
carbono.
Nuestro
grupo
hemicelulosas).
a
cooperación de múltiples
3 (ABF3).
Esta
enzima
fue
purificada
a
orientado
su
investigación
las
c a p a c e s d e d e g r a d a r el x i l a n o ( m a y o r c o m p o n e n t e d e las
a r a b i n o f u r a n o s i d a s a s ( A B F 1, 2 y 3). E n e s t e trabajo n o s r e f e r i r e m o s
la a r a b i n o f u r a n o s i d a s a
ha
La
degradación
completa
enzimas
del
xilano
requiere
que actúan sinérgicamente
\e
pare
h o m o g e n e i d a d y c a r a c t e r i z a d a , es un m o n ó m e r o glicosilado c o n un
m e j o r a r la h i d r ó l i s i s d e e s t a s c o m p l e j a s e s t r u c t u r a s . N u e s t r o e s t u d i e
peso
i n d i c a q u e e s t a s e n z i m a s p u e d e n f o r m a r p a r t e de c o m p l e j o s proteicos
molecular
(medido
por
de 47.500
(determinado
isoelectroenfoque)
de
por SDS-PAGE),
5.8.
La A B F 3
es
y un
una
enzima
b i f u n c i o n a l q u e a c t ú a s o b r e los s u s t r a t o s artificiales p-nitrofenil
arabinofuranósido
(pNPAra)
(Km:
0.65+-0.075
mM)
y
pl
alfa-L
p-nitrofenil
beta-D xilopiranósido (pNPXyl) (Km de 12.03+-2.68 mM). En
ambos
casos
El
la e n z i m a
sigue
una
cinética tipo
Michaelis-Menten.
pH
(xilanosomas)
esterasas,
que
contienen
xilanasas,
acetil
xilano
beta-xilosidasas,
esterasas,
feruloi
arabinofuranosidasas
),
c e l u l a s a s . E s t e t i p o d e o r g a n i z a c i ó n m i n i m i z a la p e r d i d a p o r d i f u s i ó r
d e los p r o d u c t o s y f a c i l i t a el s i n e r g i s m o y la e s t a b i l i d a d . P o c o s e s a b e
s o b r e los x i l a n o s o m a s y las i n t e r a c c i o n e s e n z i m a - e n z i m a
presentes
ó p t i m o e s 5 , 0 y la t e m p e r a t u r a ó p t i m a d e 5 0 ° C . S e e v a l u ó la a c c i ó n
en este tipo de c o m p l e j o s . S e aislaron 2 x i l a n o s o m a s provenientes d e
sobre
cultivo e n c o s e t a de r e m o l a c h a , 2 de c o r o n t a de m a í z y 3 d e xilanc
sustratos
desrramificado
hidroliza
naturales
de
tales
remolacha
preferentemente
unida a otra arabinosa,
como
arabinano
y arabinoxilano
arabinosa
lo q u e
unida
y
arabinano
de trigo. L a
a xilosa
se d e t e r m i n ó
que
enzima
arabinosa
enzimáticamente.
Se
acetilado determinando
electroforesis
Blue
cromatográficos.
su peso molecular (400-750 kDa)
Native
acoplada
Los ensayos
a
zimogramas
enzimáticos
mediante
y
análisis
y d o t b l o t s m u e s t r a n \e
s e c u e n c i ó el g e n d e la a b f ó y s u c D N A . N o s e o b s e r v a r o n i n t r o n e s y
p r e s e n c i a d e m ú l t i p l e s e n z i m a s y la c o - i n m u n o p r e c i p i t a c i ó n c o r r o b o r a
la p r o t e í n a m a d u r a c o n s t a d e 3 8 8 a m i n o á c i d o s c o n u n p e s o m o l e c u l a r
s u existencia. Diferencias en actividades enzimáticas y composiciones
calculado
proteicas
de
42.226.
Se
han
encontrado
5
posibles
sitios
de
N
de acuerdo
al s u s t r a t o u t i l i z a d o p a r a c u l t i v a r el h o n g o e
g l i c o s i l a c i o n e s y el a l i n e a m i e n t o d e la s e c u e n c i a d e A B F 3 c o n o t r a s
i n t e r a c c i o n e s pro t e í n a - p r o t e í n a reflejan u n a sofisticada
p r o t e í n a s h o m o l o g a s m u e s t r a q u e la e n z i m a p e r t e n e c e a la f a m i l i a 4 3
U n a m a y o r c o m p r e n s i ó n de este tipo de interacciones podría llevar e
de
primera
u n a m e j o r a e n la f o r m u l a c i ó n d e m e z c l a s e n z i m á t i c a s c o n p r o p ó s i t o s
familia.
biotecnológicos, tales c o m o
las
glicosil
enzima
hidrolasas.
bifuncional
Financiamiento:
de
Este
trabajo
eucariontes
FONDECYT
informa
sobre
descrita
(1040201
y
en
la
esta
1070368)
la s a c a r i f i c a c i ó n d e la l i g n o c e l u l o s a
Universidad
otros. Financiamiento: Proyecto F O N D E C Y T
ESTERASA
4.
y
organización
\
1070368.
A n d r é s Bello (01-05/1).
3. PURIFICACIÓN Y P R O P I E D A D E S D E L A F E R U L O I L
4
DE
PeniciUium
purpurogenum
Penicillium purpurogenum
A.
1 , 2
,
1
Eyzaguirre,
J. .
(Purification
and
feruloyl esterase 4 ) R o s a ,
Departamento
de
properties
L.\
González,
Ciencias
Biológicas,
1
Universidad A n d r é s Bello, S a n t i a g o , Pontificia Universidad
Católica
2
de Valparaíso
FUNCION
DE
TIROSINA207
FOSFOENOLPIRUVICA
5.
cerevisiae
Cardemil,
DE
phosphoenolpyruvate
1
E. .
Jabalquinto,
EN
LA
CARBOXIQUINASA
S . C E R E V I S I A E ( R o l e of t y r o s i n e 2 0 7 in
1
A. .
carboxykinase)
Facultad
de
Andrade,
Química
y
1
C. ,
Biología,
1
U n i v e r s i d a d de S a n t i a g o de C h i l e .
L a c a r b o x i q u i n a s a f o s f o e n o l p i r ú v i c a ( P E P C K ) c a t a l i z a la r e a c c i ó n d e
La degradación
permite
of
de
utilizar
la l i g n o c e l u l o s a
estas
(biocombustibles)
residuos
generar
Mn2+
para dar fosfoenolpiruvato
(PEP), ADP/GDP
y C0 .
2
El sitio
c o n s e r v a d o , p a r a el c u á l s e h a n s u g e r i d o d i s t i n t a s f u n c i o n e s . A s í , a
partir d e las estructuras cristalinas de e s t a s e n z i m a s en c o m p l e j o con
y pectinas). L a hidrólisis c o m p l e t a
d i s t i n t o s s u s t r a t o s , s e h a p r o p u e s t o q u e el e x t r e m o e l e c t r o p o s i t i v o d e l
hemicelulosas
y
su
pectinas,
de estos
cadena
sus
polisacáridos
principal
y,
en
ramificaciones
desrramificantes incluyen glicanasas y esterasas
e s t á n las
Los
d e s c a r b o x i l a c i ó n d e o x a l o a c e t a t o ( O A A ) en p r e s e n c i a de A T P / G T P y
l o s p o l i s a c á r i d o s d e la p a r e d c e l u l a r v e g e t a l ( c e l u l o s a , h e m i c e l u l o s a s
sobre
químicos.
renovable
p o s e e n un gran potencial para producir e n z i m a s c a p a c e s de d e g r a d a r
actúen
compuestos
agroindustriales
energía
activo de estas e n z i m a s p r e s e n t a un residuo d e tirosina estrictamente
que
obtener
y de
para
hongos
enzimas
y
fuentes
requiere
el c a s o
Las
enzimas
a n i l l o a r o m á t i c o d e la t i r o s i n a i n t e r a c t ú a c o n e l g r u p o c a r b o x i l a t o d e l
P E P , por otra parte se ha propuesto
que
el g r u p o h i d r o x i l o d e
la
Entre estas últimas
t i r o s i n a e s t a b l e c e u n e n l a c e d e h i d r ó g e n o c o n el C 0 . E n e s t e t r a b a j o
feruloil e s t e r a s a s ( F A E s , E C 3 . 1 . 1 . 7 3 ) q u e l i b e r a n á c i d o s
s e e v a l ú a el rol d e T i r 2 0 7 , e l i m i n a n d o el a n i l l o a r o m á t i c o y e l g r u p o
h i d r o x i c i n á m i c o s , e n p a r t i c u l a r el á c i d o f e r ú l i c o y d i f e r u l a t o s .
ácidos
de
son
de
sobrenadantes
Penicillium
interés
de
por
cultivo
sus
en
purpurogenum
propiedades
coseta
se
ha
de
hidroxilo,
al
En
dirección
de
hongo
presenta
una
antioxidantes.
remolacha
descrito
Estos
la
del
2
presencia
de
aumento de
reemplazarlo
formación
de
disminución
9
por
leucina.
OAA
de
el M n c o n r e s p e c t o a la e n z i m a
d e d e s e c h o d e la i n d u s t r i a a z u c a r e r a q u e c o n t i e n e u n 1 % d e
para
bicarbonato
25
veces
estudios
que
cinéticos
la m u t a n t e
e n la V m a x
en
Y207L
y con
un
v e c e s e n la c o n s t a n t e d e a f i n i d a d d e la e n z i m a p o r
a p r o x i m a d a m e n t e 5 isoenzimas de F A E s . La coseta es un producto
ácido
Los
muestran
aumentó
silvestre, respectivamente. La
significativamente.
Se
concluye
Km
que
f e r ú l i c o . N u e s t r o g r u p o e s t á a b o c a d o al e s t u d i o d e l a s p r o p i e d a d e s d e
t i r o s i n a 2 0 7 e s r e l e v a n t e p a r a la a f i n i d a d d e la e n z i m a p o r el m e t a l y
e s t a s e n z i m a s . E n este trabajo s e i n f o r m a n los resultados
obtenidos
e s t á i m p l i c a d a e n la i n t e r a c c i ó n c o n C 0 2 . F i n a n c i a d o p o r F O N D E C Y T
con
enzima
1070202 y DICYT-USACH 02-0741JL.
una
de
ellas,
denominada
FAE
4.
Se
purificó
la
a
h o m o g e n e i d a d . E s t a t i e n e u n a m a s a m o l e c u l a r de 5 0 k D a , u n pl de
5,9, un p H ó p t i m o de 8,0, T° ó p t i m a de 30°C y un m ó d u l o de unión a
celulosa.
Es
dihidroferulato
activa
(dMUF)
frente
a
y metil
umbeliferil
los
sustratos
acetato
metil
r a z ó n de actividad d M U F / M U A d e 0,07. F i n a n c i a m i e n t o :
Proyectos 1040201 y 1070368 y Proyecto.
umbeliferil
(MUA), con
una
FONDECYT
XXXI Reunión
5. P R O P I E D A D E S D E U N A I N U S U A L A G M A T I N A S A ( P r o p e r t i e s
1
1
of
2
:•- u n u s u a l a g m a t i n a s e ) M e l l a , C . , C a s t r o , V . , M a r t í n e z , F . , G a r c í a ,
2
M.d.lA ,
3
Bustos,
P. ,
4
Carvajal,
N. ,
Cifuentes,
M.
5
6
Uribe,
E .
1
D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i c a y Biología M o l e c u l a r . , D e p a r t a m e n t o de
2
3¡ología
Celular. ,
Departamento
de
Bioquímica
4
D e p a r t a m e n t o de Bioquímica y Biología Molecular.
je
3
,
Clínica ,
Departamento
5
Biología Celular, G e n é t i c a y Fisiología, U n i v e r s i d a d de M a l a g a . ,
Departamento
de Bioquímica
y Biología
Molecular.
Universidad
de
6
Concepción .
La a g m a t i n a
asocia
a
una
serie
la d e s c a r b o x i l a c i ó n
de
acciones
d e la a r g i n i n a
biológicas,
incluso
a
y se
nivel
: : Jría r e g u l a r s u s n i v e l e s e n el c e r e b r o .
no tiene
relación
de
Aunque presenta
secuencia
con
las
LIM
que
une
Zn2+.
Sin
a n t i c u e r p o a n t i - a g m a t i n a s a de
embargo,
E. c o l i .
es
que
actividad
agmatinasas
: - ¡ a d a s h a s t a a h o r a y, a d i f e r e n c i a d e e s t a s , p r e s e n t a u n
tipo
le
de
neurotransmisión. Recientemente, h e m o s clonado una proteína
-
PARTICIPACIÓN
DEL
ASP^204
EN
LAS
INTERACCIONES
I N T E R M O N O M E R I C A S D E L A A R G I N A S A T I P O I:
DE
LA
MUTANTE
intermonomeric
D204A.
interactions
(Participation
of
1
type
PROPIEDADES
Asp
dominio
reconocida
por
un
P o r su parte, un anticuerpo
c o n t r a n u e s t r a p r o t e í n a r e c o n o c e a la a g m a t í n a s a b a c t e r i a n a , p e r o n o
a a r g i n a s a , q u e p e r t e n e c e a la m i s m a f a m i l i a d e p r o t e í n a s . A m b o s
204
in
I: P r o p e r t i e s
1
D 2 0 4 A m u t a n t . ) L o b o s , M. ,
1
arginase
of
the
of
the
1
1
U r i b e , E. , G a r c í a , D. , Orellana, M . S . ,
1
F u e n t e a l b a , P. , Carvajal, N. . D e p a r t a m e n t o de Bioquímica y Biología
1
Molecular. Universidad de C o n c e p c i ó n . .
La a r g i n a s a tipo I es t r i m é r i c a y en la interfaz
subunidad-subunidad
presenta u n motivo C-terminal e n f o r m a de S. E n
resulta de
agnatinasa,
6.
Anual
él s e d e s t a c a la
A r g - 3 0 8 , q u e f o r m a u n e n l a c e s a l i n o i n t e r m o n ó m e r o c o n el A s p - 2 0 4
de
la s u b u n i d a d
adyacente, y cuyo
reemplazo
por alanina
genera
m o n ó m e r o s . E n este t r a b a j o , d e s c r i b i m o s los e f e c t o s e s t r u c t u r a l e s y
c i n é t i c o s del r e e m p l a z o d e A s p - 2 0 4 p o r a l a n i n a . L a m u t a n t e
D204A
r e s u l t ó a c t i v a y, p r á c t i c a m e n t e , e q u i v a l e n t e a la e n z i m a s i l v e s t r e e n
cuanto a valores de K m ,
guandina
(análogo
tnptófanos.
resultó
Sin
ser
activador
kcat, afinidad por omitina y clorhidrato de
de
la
embargo,
rnonomérica.
(Kd
un
orden
urea)
y
emisión
a diferencia
con
de
una
de
menor
magnitud
de
fluorescencia
la s i l v e s t r e ,
afinidad
mayor). A
la
por
de
mutante
el
metal
diferencia
de
la
anticuerpos r e c o n o c e n a u n a proteína en cortes d e cerebro de rata.
mutante
P o r o t r o l a d o , la d e p e n d e n c i a
proteína
h i p e r b ó l i c a a ú n e n p r e s e n c i a de b a j a s c o n c e n t r a c i o n e s de g u a n i d i n a .
- c o m b i n a n t e de c e r e b r o no e s t á r e l a c i o n a d a c o n el d o m i n i o tipo L I M .
L o s r e s u l t a d o s a p o y a n u n rol c l a v e d e l A s p - 2 0 4 e n la e s t a b i l i z a c i ó n
de Mn2+
que
presenta
E n e f e c t o , u n a p r o t e í n a t r u n c a d a , q u e n o lo c o n t i e n e ,
la
es inactivada
R308A,
la
cinética
de
la
especie
D204A
a
al g r u p o g u a n i d i n o d e la A r g 3 0 8 e n la m u t a n t e R 3 0 8 A .
Concluímos
1070467.
oroteína
y
la
agmatinasa
bacteriana
- o m o l o g í a s estructurales F O N D E C Y T
7.
PREFERENCIA
POR
en secuencia,
comparten
coii
2
1
R. ,
C a b r e r a , R. .
FONDECYT
importantes
EN
GLUCOSA-6-P
( P r e f e r e n c e for c o f a c t o r s
i n g l u c o s e - 6 - P d e h y d r o g e n a s e f r o m Escherichia
Muñoz,
fue
11070069.
COFACTORES
D E S H I D R O G E N A S A D E Escherichia
nuestra
7,5
del t r í m e r o d e a r g i n a s a , y c o r r o b o r a n la a c c i ó n de g u a n i d i n a i m i t a n d o
p o r d i á l i s i s c o n t r a u n q u e l a n t e , s i e n d o r e a c t i v a d a p o r el i o n m e t á l i c o .
que, a p e s a r de las d i f e r e n c i a s
pH
Departamento
1
coli)
O l a v a m a , K. ,
de Biología, Facultad
1
de
2
C i e n c i a s , U n i v e r s i d a d de C h i l e , U n i v e r s i d a d A n d r é s B e l l o .
8. A N Á L I S I S T E R M O D I N Á M I C O
DEL DESPLEGAMIENTO DE
LA
FOSFOFRUCTOQUINASA-2 A TEMPERATURAS BAJAS Y ALTAS.
(Thermodynamic
analysis
phosphofructokinase-2
1
Wilson,
C.A. ,
at
low
of
the
and
high
thermal
1
Babul,
unfolding
temperatures.)
J. . Departamento
de
of
1
Baez,
M. ,
Biología, Facultad
de
L a g l u c o s a - 6 - P d e s h i d r o g e n a s a ( G 6 P D H ) d e la v í a d e l a s p e n t o s a s - P
Ciencias, Universidad de Chile, S a n t i a g o , Chile .
s e c o n s i d e r a una d e las p r i n c i p a l e s f u e n t e s de N A D P H .
F o s f o f r u c t o q u i n a s a - 2 ( P f k - 2 ) d e E. coli es u n h o m o d í m e r o e s t a b i l i z a d o
Homólogos
+
: e esta e n z i m a en distintos o r g a n i s m o s p u e d e n u s a r N A D P
sustrato,
aunque
en vanos
pueden usar N A D P
enzima
de
+
y NAD
Escherichia
coli
casos
+
se
han
reportado
como
enzimas
que
( d u a l e s ) . A u n q u e s e c o n s i d e r a q u e la
es
específica
+
para
NADP ,
no
1
por un
dominio
grande
y uno
pequeño
que
provee
los
contactos
interfaciales entre las s u b u n i d a d e s . La estabilidad de a m b o s d o m i n i o s
parece
depender
de
la
formación
de
la
interfaz
a juzgar
por
la
se
ha
disociación y d e s p l e g a m i e n t o c o n c e r t a d o o b s e r v a d o en presencia de
: - * ' i n i d o la p r e f e r e n c i a e n t é r m i n o s d e k c a t / K m . E n e s t e t r a b a j o
se
c l o r u r o d e g u a n i d i n i o ( G d n H C I ) . N o o b s t a n t e , s e h a p r o p u e s t o q u e el
o b s e r v ó la d i s t r i b u c i ó n f i l o g e n é t i c a d e la e s p e c i f i c i d a d p o r c o f a c t o r e s
desplegamiento
en
la
familia
caracterizó
G6PDH
de
G6PDHs,
cinéticamente
de
E.
coli.
Se
así
como
también
la p r e f e r e n c i a
recopilaron
se
por N A D P
purificó
+
o NAD
bibliográficamente
los
: " é t i c o s p a r a 17 o r g a n i s m o s . E n g e n e r a l , l a s K m p a r a N A D P
o r d e n m i c r o m o l a r , e n tanto que las d e N A D
+
+
+
y
se
temperatura
en
la
Mediciones
datos
s o n del
presentan una variación
de
ocurre
de
proteínas
inducido
a
de
través
dicroísmo
un
circular
por
la
disminución
mecanismo
muestran
no
que
el
de
la
cooperativo.
contenido
de
estructura s e c u n d a r i a d e la P f k - 2 d i s m i n u y e p o r d e b a j o de 15 y por
sobre de
37
gradC
llegando
a valores
similares a 3 y 53
gradC.
A m b a s t r a n s i c i o n e s f u e r o n s i g m o i d e a s y s e n s i b l e s a la c o n c e n t r a c i ó n
m a y o r . S e o b s e r v a e n u n d e n d r o g r a m a f i l o g e n é t i c o ( r e a l i z a d o p o r el
d e p r o t e í n a , s u g i r i e n d o la f o r m a c i ó n c o o p e r a t i v a d e m o n ó m e r o s
método
s i m i l a r c o n f o r m a c i ó n a t e m p e r a t u r a s b a j a s y e l e v a d a s . El a j u s t e d e
de
neighbor
joining)
para
secuencias
bacterianas
y
e u c a r i o n t e s a l i n e a d a s c o n C l u s t a l W , q u e las e n z i m a s c o n d u a l i d a d no
+
ambas
transiciones
a
un
modelo
concertado
de
de
disociación
y
se distribuyen en u n ciado s e g r e g a d o de las N A D P - e s p e c í f i c a s . La
d e s p l e g a m i e n t o p r o d u c e u n d e l t a C p d e 7,8 k c a l / m o l / K y u n d e l t a H d e
G6PDH
620
de
E.
coli
fue
expresada
punficada e n tres etapas
desde
el v e c t o r p S U 1 8 ,
de s e p a r a c i ó n c r o m a t o g r á f i c a . e n
y
fue
DEAE,
kcal/mol,
indicando
que
el
dímero
está
estabilizado
n i d r o x i l a p a t i t a y s e p h a c r y l - 2 0 0 . L a e n z i m a p u r a (> 9 5 % d e p u r e z a ) f u e
que
caracterizada
h i d r a t a d o , lo q u e e s c o h e r e n t e c o n e l v o l u m e n c a l c u l a d o p a r a
usando N A D P
cinéticamente
+
o NAD
+
en
condiciones
de
velocidad
inicial
c o m o sustrato, resultando en una preferencia
d e alrededor de 5500 v e c e s por N A D P
2 06/02-2 Universidad de Chile.
+
sobre
+
N A D . Proyecto
DI
por
10,5 k c a l / m o l a 2 0 g r a d C . P o r o t r a p a r t e , el v a l o r d e d e l t a C p p r e d i c e
el
especie
monómero
en
obtenido
presencia
de
a bajas
GdnHCI
a
temperaturas
20
gradC.
está
Estos
altamente
esta
resultados
i n d i c a n q u e la d i s o c i a c i ó n d e la P f k - 2 i n d u c i d a p o r frío p r o c e d e s i n
intermediarios
adicionales
respecto
calory GdnHCI. Fondecyt 1050818.
al d e s p l e g a m i e n t o
inducido
por
Sociedad
9.ANÁLISIS
UNIÓN
DEL
FUNCIONAL Y
ESTRUCTURAL
de Bioquímica y Biología
D E L O S SITIOS
DE LIGANDOS EN QUINASAS DEPENDIENTES
DOMINIO
ARQUAEA
(Structural
and
l i g a n d b i n d i n g s i t e s in A D P - d e p e n d e n t
1
2
domain) Oíate, F . , Guixé, V. .
1
Universidad Andrés
Bello ,
functional
glucokinases
Facultad
Facultad
analysis
of t h e
de Ciencias
de
Ciencias,
DE
DE ADP
10.
Molecular
FOSFORILACION
DE
LA
SUBUNIDAD
CK2p
POR
LA
P R O T E I N A Q U I N A S A C K 1 a (Phosphorylation of the C K 2 p subunlt by
of
protein kinase C K 1 a ) Pérez, C . , Jedlicki, A. , Budini, M. , Allende,
archaea
J E . . P r o g r a m a de Biología Celular y Molecular, ICBM, Facultad de
d e la S a l u d ,
Universidad
de
1
1
1
1
1
M e d i c i n a , U. de C h i l e .
Las
caseína
quinasas
CK1
y
CK2
son
serina/treonina
quinasas
2
Chile .
c o n s e r v a d a s e n la e v o l u c i ó n y u n i v e r s a l m e n t e e x p r e s a d a s e n c é l u l a s
L a s a r q u a e a s Thermococcus
una
vía
de
litoraíis
y Pyrococcus
Embden-Meyerhoff
furiosus
modificada,
presentan
donde
la
actividad
eucariontes.
mientras
Con
que
respecto
CK2
es
a estructura,
un
CK1
heterotetrámero
es
un
monómero,
compuesto
por
dos
g l u c o q u i n a s a utiliza A D P . e n v e z de A T P , c o m o d a d o r de fosforilo. E n
s u b u n i d a d e s catalítcas ( a , a ' ) y dos s u b u n i d a d e s r e g u l a d o r a s (P). E n
e s t e trabajo las e n z i m a s de a m b o s m i c r o o r g a n i s m o s s e purificaron a
la p r o t e í n a q u i n a s a C K 2 , la s u b u n i d a d (3 t i e n e p o r f u n c i ó n i n c r e m e n t a r
homogeneidad
la e s t a b i l i d a d t é r m i c a y m o d u l a r la a c t i v i d a d c a t a l í t i c a d e la s u b u n i d a d
y se caracterizaron
e n z i m a d e T. iitorafis
cinética
y estructuraImente
La
es u n m o n ó m e r o c o n u n a m a s a m o l e c u l a r de
5 2 k D a , m i e n t r a s q u e la e n z i m a d e P. furiosus
es un h o m o dímero de
a p r o x i m a d a m e n t e 93 k D a , c u y o e s t a d o d e a g r e g a c i ó n no c a m b i a en
presencia
de glucosa, A D P
ó DTT. A m b a s
enzimas
utilizan
ADP,
C D P , glucosa y maltosa en forma significativa, en tanto que ninguna
d e e l l a s r e c o n o c e al A T P c o m o s u s t r a t o . L a e f i c i e n c i a c a t a l í t i c a p a r a
A D P , C D P y g l u c o s a e s 2, 1,7 y 3 v e c e s m a y o r p a r a la e n z i m a d e P
furiosus.La
unión
de
los
ligan dos
se
determinó
por
equilibrio
de
diálisis ya que a u n q u e a m b a s e n z i m a s p o s e e n 4 triptofanos, éstos no
s o n s e n s i b l e s a la u n i ó n d e A D P o g l u c o s a . L a u n i ó n d e g l u c o s a s ó l o
p u d o d e t e r m i n a r s e e n p r e s e n c i a d e A M P , c o n K d d e 1,2 y 0,9
mM
para
Los
la e n z i m a s
resultados
como
de
sugieren
pirimidinas
y
T. iitorafis
y P.
que
ambas
que
la
furiosus
enzimas
estructura
respectivamente.
reconocen
de
los
tanto
grupos
punnas
fosfatos
es
f u n d a m e n t a l e n el r e c o n o c i m i e n t o d e e s t e l i g a n d o . A d e m á s , d e los
experimentos
de
unión
se
predice
un
mecanismo
de
unión
de
a. No obstante, t a m b i é n se ha observado que tanto C K 2 a c o m o C K 2 p
tienen funciones
independientes
d e la h o l o e n z i m a . E n c u a n t o
a la
r e g u l a c i ó n d e C K 2 , s e h a s u g e r i d o q u e e s t a s e e f e c t u a r í a m e d i a n t e la
interacción de sus s u b u n i d a d e s con otras proteínas. Esta hipótesis no
ha
sido
comprobada.
mostraron
que
espectrometría
fosforilación:
estructura
Estudios
CK1a
de
fosforila
masas
S205
y
iniciales
a
fue
T213.
en
CK2p,
y
posible
identificar
Considerando
hete rotetram erica
nuestro
laboratorio
mediante
dos
estos
determinada
análisis
resultados
por
de
sitios
de
y
la
cristalografía,
p o s t u l a m o s un posible m e c a n i s m o de r e g u l a c i ó n de C K 2
mediante
fosforilación de C K 2 p e n u n a s e c u e n c i a necesaria para unir C K 2 a .
Experimentos
preliminares
de
coinmunoprecipitación
con
CK2a
i n d i c a n q u e la f o s f o r i l a c i ó n d e C K 2 p p o r C K 1 a d i s m i n u y e la a f i n i d a d
entre las s u b u n i d a d e s d e C K 2 . T r a b a j o s e n m a r c h a se
encuentran
e n f o c a d o s a la r e a l i z a c i ó n d e m u t a c i o n e s d e los s i t i o s d e f o s f o r i l a c i ó n
a á c i d o g l u t á m i c o , y a a n a l i z a r si C K 2 p es c a p a z de s e r fosforila d a p o r
s u s t r a t o s d e tipo o r d e n a d o . P r o y e c t o F o n d e c y t 1 0 7 0 1 1 1 .
C K 1 a f o r m a n d o p a r t e d e la h o l o e n z i . m a .
11.
ESTUDIOS
ESTRUCTURALES
DE
FICOBILISOMA
DE
G R A C I L A R I A C H I L E N S I S ( S t r u c t u r a l s t u d i e s o f p h y c o bilis o r n e s f r o m
1
1
1
Gracilaria chilensis) M e z a , C . , Martinez-Oyanedel, J . , Bunster,
Laboratorio
de Biofísica
Molecular,
Departamento
cantidad
de
mediante
y algas rojas h a n debido
luz
presente
complejos
en
su habitat
multiproteicos
de Bioquímica
y
1
Biología Molecular, Universidad de C o n c e p c i ó n
Cianobacterias
M. .
a la c a l i d a d
optimizando
su
y
captación
ficobilisomas
q u e p r e s e n t a n a l t a e f i c i e n c i a ( > 9 5 % ) e n la c o n d u c c i ó n d e
(PBS),
energía
DE PARAMETROS
R - F I C O E R I T R I NA
DE
ESPECTROSCOPICOS
GRACILARIA
CHILENSIS
(DETERMINARON OF THE ESPECTROSCOPIO PARAMETERS OF
R-PHYCOERYTHRIN
OF
1
S e p u l v e d a-Ug arte,
adaptarse
llamados
12. D E T E R M I N A C I Ó N
DE
J. ,
Laboratorio d e Biofísica
GRACILARIA
Martinez-Oyanedel,
Molecular,
CHILENSIS)
J.\
Departamento
1
Bunster,
M. .
de B i o q u í m i c a
y
Biología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de
1
Concepción .
L o s F i c o b i l i s o m a s s o n c o m p l e j o s p r o t e i c o s a c c e s o r i o s de
captación
h a c i a los c e n t r o s f o t o s i n t é t i c o s . L o s P B S de Gracilaria chilensis e s t á n
d e luz p r e s e n t e s e n a l g a s r o j a s y c i a n o b a c t e r i a s .
compuestos
r e c o l e c t a n y t r a n s f i e r e n luz h a c i a l o s s i s t e m a s f o t o s i n t é t i c o s d e e s t o s
por
3
ficobiliproteínas
organizadas
en
un
centro
de
Estos
complejos
Aloficocianina, del cual irradian varillas c o m p u e s t a s por Ficocianina y
o r g a n i s m o s , c o n u n a e f i c i e n c i a > 9 5 % . E s t a a l t a e f i c i e n c i a s e d e b e a la
F i c o e r i t r i n a . A d e m á s p r e s e n t a n p r o t e í n a s l i n k e r q u e d e t e r m i n a r í a n la
presencia de c r o m ó f o r o s , tetrapirroles lineales unidos a residuos de
e s t r u c t u r a d e l P B S . S e h a v i s t o u n a r e l a c i ó n e n t r e la p r e s e n c i a
cisteina.
ciertas
proteínas
l i n k e r y el t i p o
de
organización
centro del P B S . Estudios previos realizados
han
permitido
determinar
core-membrana (L
C M
la
presencia
que
presenta
en nuestro
de
una
avale
estudios
esto.
Es
por esto
estructurales
utilizando estas
esta hipótesis
gradiente
laboratorio
proteína
del
PBS
que
y
es
importante
linker
plantear
un
experimental
realizar
modelo
nuevos
estructural
nuevas evidencias experimentales. Para
confirmar
se e s t a n d a r i z ó u n a t é c n i c a de u l t r a c e n t r i f u g a c i ó n
discontinuo
enriquecidas
de
el
) d e 110 k D a , q u e s e g ú n bibliografía corresponde
c o n un centro pentacilíndrico, pero a ú n falta evidencia
que
de
de s a c a r o s a
ficobilisomas
donde
se obtuvieron
completos,
los
en
fracciones
cuales
fueron
caracterizados mediante técnicas e s p e c t r o s c ó p i c a s de fluorescencia y
a b s o r c i ó n y estudios de
electroforesis
g r a d i e n t e ( 6 - 1 5 % ) . D e las
completos,
se
seleccionan
fracciones
algunas
en geles de poliacrilamida en
enriquecidas en
para
ser
ficobilisomas
analizadas
por
m i c r o s c o p í a e l e c t r ó n i c a d e t r a n s m i s i ó n , d o n d e se b u s c a n las m e j o r e s
c o n d i c i o n e s p a r a o b t e n e r u n a f o t o g r a f í a q u e n o s m u e s t r e la e s t r u c t u r a
del P B S . Financiamiento: F O N D E C Y T
108.0267.
R-Ficoeritrina,
ficobilisoma,
subunidad
presenta
a
y
en
uno
como
la
de
los
componentes
cromóforos
subunidad
Ficourobilina. La conducción
p
proteicos
dos Ficoeritrobilinas
dos
Ficoeritrobilinas
d e luz e n el f i c o b i l i s o m a
se
m e d i a n t e el m e c a n i s m o d e n o m i n a d o F R E T ( f l u o r e s c e n c e
energy
transfer),
el
cual
considera
parámetros
del
en
y
la
una
describe
resonance
estructurales
y
e s p e c t r o s c ó p i c o s de los c r o m ó f o r o s . S e d e s c o n o c e n los p a r á m e t r o s
e s p e c t r o s copíeos d e los c r o m ó f o r o s
cálculos
de
las
vías
de
d e F i c o e r i t r i n a , p o r lo q u e
transferencia
aproximados. Para obtener estos
de
luz
son
parámetros debemos
los
bastante
contar con
c a d a c r o m o f o r o a i s l a d o y e n u n a m b i e n t e s e m e j a n t e al d e la p r o t e í n a .
E n el p r e s e n t e t r a b a j o s e p u r i f i c ó F i c o e r i t r i n a d e Graciíaria
chilensis.
A d e m á s s e aislaron sus s u b u n i d a d e s y se obtuvieron c r o m o p e p t i d o s ,
los
cuales
fueron
Finalmente,
cromopeptidos
aislados
R-Ficoeritrina
fueron
mediante
nativa,
HPLC
sus
caracterizados
en
fase
subunidades
reversa.
y
los
espectroscopicamente,
d e t e r m i n a d o s e los e s p e c t r o s d e a b s o r c i ó n , espectros d e e m i s i ó n de
fluorescencia, T i e m p o de vida media
de fluorescencia,
cuántico e integral de s o l a p a m i e n t o e n cada caso. Estos
rendimiento
parámetros
nos permiten d e s c r i b i r l o s cromóforos presentes en Ficoeritrina, y a su
vez
las
vias
preferenciales
de
Transferencia
Ficobilisoma.Financiamiento: Fondecyt 108.0267.
de
Luz
en
el
XXXI Reunión
Anual
BIOINFORMATICA-ESTRUCTURA DE PROTEINAS
13.MODELAMIENTO
VASCONCELLEA
MECANISMO
MOLECULAR
PUBESCENS:
CATALITICO
DE
LA
PREDICCIÓN
(Molecular
VPAAT1
D E UN
modelling
of
DE
POSIBLE
VpAAT1
from
. a s c o n c e l l e a p u b e s c e n s : p r e d i c t i o n of a p o s s i b l e c a t a l i t i c m e c h a n i s m )
Morales-Quintana,
1
Moya-León,
M. .
L.\
Instituto
u n i v e r s i d a d de T a l c a .
El
aroma
otiles
es
de
coducido
Gaete-Eastman,
de
Vegetal
y
peso
complejo,
molecular.
por
Transferasa
determinado
En
por
Vasconcellea
esteres,
compuestos
pubescens
ESTRUCTURA
DE
DE
WNT3A
UTILIZANDO
MODELAMIENTO
(Structure
p r e d i c t i o n of W n t 3 a u s i n g c o m b i n a t o r y m e t h o d s o f p r o t e i n m o d e l l i n g )
1
Burgos Arias, F . \ Cárdenas
2
Inostroza, P. , Martínez-Oyanedel, J . ,
1
D e Ferrari V a l e n t i n i , G . . L a b o r a t o r i o de G e n é t i c a y T r a n s d u c c i ó n de
Señales,
Universidad
1
de
Concepción ,
Laboratorio
de
Biofísica
mediante
reacciones
(VpAAT).
la e n z i m a ,
la
cual
fue validada
uso
de
herramientas
de
modelamiento
molecular
de
d e s e ñ a l i z a c i ó n W n t . D a d a la a u s e n c i a d e e s t r u c t u r a s r e l a c i o n a d a s s e
enzima
comparativo
de
conocer
el
c o m b i n a d a s s e h a g e n e r a d o u n m o d e l o d e W n t 3 a , l i g a n d o d e la v í a
m o l e c u l a r de a c c i ó n de V p A A T , se utilizó m o d e l a m i e n t o
la e s t r u c t u r a
Para
Mediante
es
mecanismo
construir
DE
COMBINADOS
2
el
: ara
PREDICCION
MÉTODOS
Molecular. Universidad de C o n c e p c i ó n .
principalmente
Acil
R. ,
Biotecnología,
e s t e r i f i c a c i ó n e n t r e a l c o h o l e s y a c i l C o A s c a t a l i z a d a s p o r la
-Icohol
1
Herrera,
1
un carácter
bajo
Biología
C.\
14.
y
hace
necesario
realizar un
enfoque
múltiple
utilizando
información
obtenida de predicciones de estructura secundaria ( J U F O , J P R e d 3 ,
PSIPred)
y
Modeller
y P h y r e ) . E n p r i m e r a i n s t a n c i a se g e n e r ó un p r i m e r set de
programas
de
modelamiento
molecular
(l-TASSER,
mostró
5 estructuras u s a n d o l - T A S S E R , d e los c u a l e s 3 m o d e l o s se u s a r o n
q u e la p r o t e í n a e s t á f o r m a d a p o r 15 h o j a s ? y 14 ? h é l i c e s , el sitio
en las s i g u i e n t e s e t a p a s y c u y a e l e c c i ó n se realizó b a s a d a en cálculos
refinada m e d i a n t e d i n á m i c a molecular. El m o d e l o resultante
a c t i v o d e la p r o t e í n a e s e l s e g m e n t o H T M S D y s e e n c u e n t r a e n u n
:op
entre
la h o j a
7 y la h é l i c e
5,
además
H166
se
encontraría
e x p u e s t a e n u n c a n a l d e s o l v e n t e p r e s e n t e e n la e n z i m a , p e r m i t i e n d o
energéticos y estructurales obtenidos por Anolea, Prosa y Procheck.
Adicionalmente
obtenida
en
se c o m p a r ó
los
modelos
la e s t r u c t u r a
secundaria
predicha
observándose
correlación
entre
y la
ambos
a i n t e r a c c i ó n c o n el s u s t r a t o . P o r D o c k i n g m o l e c u l a r s e e x p l o r a r o n las
p a r á m e t r o s , p r i n c i p a l m e n t e e n la r e g i ó n N - t e r m i n a l d o n d e s e l o c a l i z a n
c o n f o r m a c i o n e s d e i n t e r a c c i ó n e n t r e la p r o t e í n a y s u s l i g a n d o s . P a r a
h é l i c e s q u e p o d r í a n e s t a r a s o c i a d a s a s u f u n c i ó n . A c o n t i n u a c i ó n , los
a
interacción
con
alcoholes
y
acil
CoAs,
se
sugiere
que
la
c o n f o r m a c i ó n m á s estable del complejo se produciría uniendo primero
Acil
CoA
a
la p r o t e í n a ,
a
cuyo
complejo,
debido
a los
cambios
modelos
seleccionados
paso
refinamiento
de
fueron
con
utilizados
Modeller
como templados
donde
se generó
para
un
un
segundo
g r u p o d e e s t r u c t u r a s y s e c o m p l e m e n t ó el m o d e l a m i e n t o del e x t r e m o
z o n f o r m a c i o n a l e s p r o d u c i d o s p o r e s t e l i g a n d o , i n g r e s a r í a el a l c o h o l .
C-terminal
- nanciado por Proyecto Anillo ACT^I-1.
Posteriormente,
con
la
predicción
las
de
cadenas
estructura
laterales
se
dada
por
adicionaron
Phyre.
utilizando
S C W R L 3 . 0 . F i n a l m e n t e , se realizó un p r o c e s o de minimización
energía
usando
trabaja
GROMACS,
con
el c a m p o
de
fuerza O P L S
de
y
se
e n la p a r a m e t r i z a c i ó n d e l g r u p o p r o s t é t i c o p a l m i t o i l q u e
es
a g r e g a d o p o s t r a d u c c i o n a l m e n t e al e s q u e l e t o p r o t e i c o . E s t a e s t r u c t u r a
permitirá estudiar posibles sitios de i n t e r a c c i ó n c o n otros m i e m b r o s de
la v í a y d e t e r m i n a r r e g i o n e s i m p l i c a d a s
en su función.
Financiado:
Anillo A C T - 0 4 .
1 5 . E S T U D I O S IN S I L I C O D E R E S I D U O S I N V O L U C R A D O S E N L A
16.
UNIÓN
CANALES
DE
SUSTRATOS
HIDROXIMETILPIRIMIDINA
^volved
in
PARA
PIRIDOXAL
E
Q U I N A S A S . (In silico s t u d i e s of r e s i d u e s
binding
of
substrate
for
pyridoxal
1
and
1
"ydroxymethylpyhmidine kinases.) Ramírez, C . , Guixé, V. , Cabrera,
1
R. .
Laboratorio
de
Bioquímica
y
Biología
Molecular.
Facultad
de
1
I encias. Universidad de Chile. .
lentro
de
la
superfamilia
ESTUDIO
ARABIDOPSIS
se
agrupan
enzimas
cuya
LA
1
S. ,
THALIANA
1
González,
Bioinformática
DINAMICA
POTASIO
voltage-gated potassium
Universitat
riboquinasa
DE
DE
W ,
y
(Study
of
POR
DE
VOLTAJE
conformational
EN
dynamics
of
channels in A r a b i d o p s i s thaliana) M o r a l e s ,
2
Dreyer,
Simulación
Potsdam,
Heisenberg-Gruppe
CONFORMACIONAL
ACTIVADOS
I. ,
Institut
fur
Biophysik
und
1
González,
Molecular.
F. .
Centro
Universidad
Biochemie
Molekulare
de
1
de
Talca. ,
und
Biologie,
Pflanzenbiologie,
2
e s t r u c t u r a t e r c i a r i a e s a l t a m e n t e c o n s e r v a d a , l a s c u a l e s c a t a l i z a n la
Germany
ransferencia
El p o t a s i o ( K + ) e s c r u c i a l e n m u c h o s p r o c e s o s m e t a b ó l i c o s e n l a s
de u n grupo
fosforilo h a c i a
un sustrato
determinado.
Estas enzimas pueden ser distinguidas de acuerdo a su especificidad
células
: e s u s t r a t o , la a d i c i ó n d e e l e m e n t o s
s e c u n d a r i a y la
m a y o r í a d e l a s c o m i e n t e s d e K + e n la m e m b r a n a p l a s m á t i c a d e e s t o s
^ e s e n c i a de un d o m i n i o de m e n o r t a m a ñ o . Se ha s u g e r i d o que los
organismos, siendo activados por voltaje y con topología consistente
de estructura
m e m b r o s m á s p e q u e ñ o s d e esta s u p e r f a m i l i a s o n r e p r e s e n t a t i v o s de
a topología ancestral.
1
En
este trabajo, se
estudiaron
in silico
las
vegetales.
Los
en cuatro s u b u n i d a d e s
cada
una,
siendo
S4
canales
de
la
familia
Shaker,
median
de seis s e g m e n t o s t r a n s m e m b r a n a
el
sensor
de
voltaje,
y
S5-S6,
la
(S1-S6)
el
poro
de
- j i n a s a s d e p i r i d o x a l e h i d r o x i m e t i l p i r i m i d i n a , m e d i a n t e la u t i l i z a c i ó n
c o n d u c c i ó n d e l o s i o n e s q u e a l b e r g a el m o t i v o G Y G D q u e le c o n f i e r e
: e un alfabeto estructural unidimensional ( P B E ; d e Brevern y cois), en
la s e l e c t i v i d a d
:orrelato c o n u n alineamiento derivado de las estructuras
rectificadores
presentes
a K + . La familia S h a k e r en plantas, incluye
de
entrada
(Kin),
activados
a voltajes
canales
negativos,
y
e n l a b a s e d e d a t o s . L o s m o t i v o s N X X E y G X G D , c o m u n e s p a r a la
canales rectificadores de salida ( K o u t ) , activados a voltajes positivos.
= j p e r f a m i l i a , s e e n c u e n t r a n d e f i n i d o s p o r el m i s m o p a t r ó n e s t r u c t u r a l
Kin
similitud
estructural,
en
d i f i e r e n e n la s e n s i b i l i d a d a l v o l t a j e y a l a c o n c e n t r a c i ó n
extracelular
todos
los
miembros
sin
~etodología, se determinó
: ¡ n d o x a l {d/d/f/f/M/h)
es
posible
código
de
zd/d/d/c/l/h),
~~nte
a
zaron
este
2I5B)
que
la p i r i d o x a l
un
es
coherente
grupo
de
enzimas
de
verificar
unión
la
de
con
su
(Rice
y
de
de
Además,
Baciiius
de
subtiiis
Kout,
aunque
presentan
una
estrecha
de K + p a r a su a p e r t u r a , lo q u e a u m e n t a las i n t e r r o g a n t e s s o b r e las
razones
moleculares
que
involucran
contexto, KAT1 (Kin) y S K O R
estas
diferencias.
En
este
( K o u t ) , s o n s i s t e m a s m o d e l o p a r a el
análisis e s t r u c t u r a - f u n c i ó n . El p r o c e s o de activación de los canales de
K+ puede ocurrir f r e c u e n t e m e n t e a escala d e t i e m p o fisiológico, pero
in
de
unión
y
de
semejanza
sustratos
esta
hidroximetilpirimidina
cois).
importancia
de
p a r a la u n i ó n
estructural
al
de
través
{c/d/d/d/c/f/h).
quinas a
motivo
semejanza
lo c u a l
para
A
un motivo estructural
presenta
mayor
experimentos
^-UTODOCK
menor.
e hidroximetilpirimidina
distinguir
PDB
sndoxal
dominio
estructural
Finalmente,
silico
los
son menos
frecuentes
a escala
de tiempo de dinámica
molecular
se
( D M ) . U n a h e r r a m i e n t a de D M q u e intenta s u p e r a r e s t e p r o b l e m a , es
mediante
T a r g e t e d Molecular D y n a m i c s ( T M D ) , que permite guiar una proteína
residuos
hacia u n a c o n f o r m a c i ó n de interés. D e e s t a m a n e r a , T M D fue u s a d o
: erres p o n di e n t e s a c a d a m o t i v o e s t r u c t u r a l , t r a b a j a n d o s o b r e d i v e r s o s
p a r a a c e l e r a r la t r a n s i c i ó n c o n f o r m a c i o n a l
~odelos
de
cerrado de K A T 1 y S K O R , p e r m i t i é n d o n o s a n a l i z a r a nivel molecular,
r
1070111.
ondecyt
mutantes
generados
por
métodos
bioinformáticos.
sus diferencias funcionales.
e n t r e el e s t a d o abierto y
Sociedad
17.DETERMINACIÓN
DE
LA
ENERGÍA
LIBRE
de Bioquímica y Biología
DE
UNIÓN
DE
Molecular
18.ESTUDIO
DE LA DESCARBOXILACIÓN
(HLOX) A TRAVÉS DE MÉTODOS P E R T U R B A C I O N D E ENERGÍA
PROTEÍNA
L I B R E ( F E P ) . (free e n e r g y d e t e r m i n a t i o n of
( D e s c a r b o x i l a t i o n s t u d y of o x a l o a c e t a t e a n d M n + +
human
12
and
15
lipoxigenase
selective inhibitor unión
(hLOX)
through
1
m o l e c u l a r d y n a m i c s (FEP)) P o b l e t e , H. , N u ñ e z , G .
2
F. ,
1
Mascayano,
C. .
Universidad
de
Santiago
1 , 2
methods
(LOX)
son
una
familia
CATALIZADOR
FOSFOENOLPIRUVATO
EN
LA
CARBOXIQUINASA
a s c a t a l i z a t o r in
, González-Nilo,
E. , G o n z á l e z , D. . U n i v e r s i d a d de T a l c a , T a l c a , Instituto de Q u í m i c a ,
1
de
de
COMO
fosfoenolpiruvate carboxykinase) López, X. , Henriquez, J. , Cardemil,
Chile ,
CBSM
2
Lipoxigenasas
MN++
of
U n i v e r s i d a d d e T a l c a . P a t r o c i n a n t e : G o n z a l e z - N i l o . F..
Las
DE
OXALOACETATO
EN
of
PRESENCIA
DE
I N H I B I D O R E S S E L E C T I V O S D E 1 2 Y 15 L I P O X I G E N A S A H U M A N A
dioxigenasas
c o n t i e n e n hierro no h é m i c o Fe(III) en su sitio activo y
que
c a t a l i z a n la
1
3
2
4
1
2
Universidad
de
Talca,
Universidad
de
Santiago,
Talca ,
Facultad
3
Santiago. ,
de
Química
Centro
de
y
Biología,
Bioinformática
y
4
S i m u l a c i ó n Molecular, U n i v e r s i d a d de T a l c a , T a l c a . .
Este
trabajo
evalúa
la
influencia
del
catión
Mn++
en
la
i n s e r c i ó n e s t é r e o e s p e c i f i c a de o x i g e n o s o b r e el s u s t r a t o natural ácido
descarboxilación
araquidónico. Las Lipoxigenasas h u m a n a s ( h L O X ) están relacionadas
r e d u c i d o es u n a p r i m e r a
a d i f e r e n t e s e n f e r m e d a d e s s e g ú n la p o s i c i ó n e n q u e e s t a d i o x i g e n a d o
p r o t e í n a f o s f o e n o l p i r u v a t o c a r b o x i q u i n a s a ( P E P C K ) , la c u a l p a r t i c i p a
el acido
en
araquidónico,
asma; 15-hLOX
d e tórax
y
por
ejemplo:
5-hLOX
a cáncer
prostético
y
c á n c e r rectal y arteriosclorsis, y 1 2 - h L O X a c á n c e r
soriasis. Las
estructuras
de
hidrofóbica
d o n d e el á c i d o a r a q u i d ó n i c o
coordinado
de
forma
octaédrica.
Los
LOX
muestran
interacciona
flavonoides
poseer variadas aplicaciones terapéuticas,
han
debido
una
zona
c o n el
hierro
demostrado
principalmente
a
la v í a
de
de
la
la
descarboxilación/carboxilación
con
los
aminoácidos
utiliza
introducción
favorece
de
la
grupos
electroatractores
selectividad
frente
en
a12-hLOX.
de
revelaron que
dichas
Mediante
del
para
la
oxaloacetato
esenciales
s o n p o t e n t e s y s e l e c t i v o s i n h i b i d o r e s d e 12 y 1 5 - h L O X . M e d i d a s
isoflavonoides,
esencial
sistema
formación
gracias
p r o t e í n a , el c a t i ó n M n + + , e l q u e c o m p l e t a u n a g e o m e t r í a
modelo por homología
e
Este
de
a
una
c o o r d i n a c i ó n d e l c o m p u e s t o o r g á n i c o c o n p a r t e del sitio a c t i v o d e la
pesados. Estudios biológicos han demostrado que dichos compuestos
flavonoides
oxaloacetato.
a p r o x i m a c i ó n a l p r o c e s o r e a l i z a d o p o r la
gluconeogénesis,
estudiado
c o n distintos
de
g l u c o s a a p a r t i r d e p r e c u r s o r e s n o g l u c o c í d i c o s . L a P E P C K c a t a l i z a la
s u poder antioxidante y su c a p a c i d a d para coordinarse c o n metales
IC50
molécula
de
esta
proteína.
octaédrica
El
sistema
e s u n a r e d u c c i ó n d e l s i t i o a c t i v o , el c u a l p r o v i e n e d e
como
hecho
estructura
de
para la P E P C K
referencia
los
de S.cerevisiae,
datos
un
que
cristalográfica
de
la
P E P C K de E.coli [Matte et al. J. Mol. Biol 2 5 6 , 126-143, 1996]. E n una
moléculas
p r i m e r a a p r o x i m a c i ó n a la c o o r d i n a c i ó n del c o m p u e s t o o r g á n i c o , l o s
técnicas
de
aminoácidos
circundantes
al
centro
metálico
de
interés
han
sido
s i m u l a c i ó n d e a c o p l a m i e n t o pro teína-I i g a n d o " d o c k i n g " se analizaron
r e e m p l a z a d o s p o r m o l é c u l a s de a g u a . U n a etapa m á s a v a n z a d a se
las
h a r e a l i z a d o i n c l u y e n d o l o s a m i n o á c i d o s q u e s e c o o r d i n a n al M n + +
interacciones
Posteriormente,
generadas
se
realizó
método
de
perturbación
energía
libre
grupos
electroatractores
claramente
de
de
unión
más
entre
un
los
estudio
energía
obtenidos
en
favorables
la
flavonoides
más
libre
(FEP)
muestran,
posición
y
la
detallado,
los
que
4?
energéticamente
la
del
enzima.
usando
indican
de
q u e la c o o r d i n a c i ó n d e la m o l é c u l a
presencia
de
m e d i o de dos á t o m o s de oxígeno c a r g a d o s negativamente. D e esta
B
fueron
compuestos
c a r e c í a n de dicha s u s t i t u c i ó n . A g r a d e c i m i e n t o s : P r o y e c t o
que
Fondecyt
11075047.
misma
forma se observa
de oxaloacetato se realiza
u n a f u e r t e i n f l u e n c i a d e los
por
aminoácidos
c o o r d i n a d o s e n las p r o p i e d a d e s e l e c t r ó n i c a s del M n + + , lo c u a l i n f l u y e
en
la
reacción
de
descarboxilación.
Agradecimientos:
Proyecto
F O N D E C Y T N° 1070202, Proyecto AnilloACT/24.
19.ESTUDIO
HUMANA
DE
LA
INHIBICION
(HLOX)
MOLECULAR
MEDIANTE
DIRIGIDA
(SMD)
DE
12
Y
15
DOCKING
(study
of
LIPOXIGENASA
Y
SIMULACION
imbition
of
12
h u m a n lipoxigenase (hLOX) through Docking and Steered
1
2
and
15
Molecular
2
Dynamics) Nuñez, G . , Poblete, H. , Mascayano, C. , González-Nilo,
1
1
D. . U N I V E R S I D A D DE T A L C A , U N I V E R S I D A D D E S A N T I A G O
CHILE
(K213, K256, H233, D264). Los resultados de este sistema
resultados
anillo
que
el
DE
2
20. E S T U D I O D E P E R F I L
DE ENERGÍA LIBRE DE IONES DE K+
E N E L C A N A L D E P O T A S I O T A S K - 2 . ( F r e e e n e r g y profile of a K+
ion in T A S K - 2
potassium
channel.)
3
1
Navarro,
2
C . , Sepúlveda,
1
F. ,
1
Chipot, C , González-Nilo, D. . U N I V E R S I D A D D E T A L C A , C E N T R O
DE
ESTUDIOS
2
CIENTÍFICOS,
VALDIVIA ,
UMR
CNRS/UHP,
3
FRANCIA .
T A S K - 2 e s u n c a n a l d e p o t a s i o p e r t e n e c i e n t e a la f a m i l i a K C N K , la
L a s lipoxigenasas ( h L O X ) s o n d i o x i g e n a s a s q u e c o n t i e n e n hierro no
que
h é m i c o e n s u s i t i o a c t i v o , c a t a l i z a n la i n s e r c i ó n e s t é r e o - e s p e c i f i c a d e l
cuatro
oxigeno
TASK-2
m o l e c u l a r al a c i d o a r a q u i d ó n i c o .
En mamíferos
las
hLOX
se
caracteriza
por
formar dímeros.
segmentos transmembranales
pertenece
a
la
e s t á n c l a s i f i c a d a s d e a c u e r d o a la p o s i c i ó n d e d i o x i g e n a c i ó n e n el
alcalino-activados.Experimentalmente
se
de
han
(P).
Canales
propuesto
varios
Estas
sensores
e n f e r m e d a d e s , tales
como
n e u t r a l i z a c i ó n d e u n a a r g i n i n a ( A R G 2 2 4 ) c e r c a n a a l p o r o , e s el s e n s o r
c á n c e r prostético, a s m a , c á n c e r de tórax, soriasis, c á n c e r colorectal y
d e p H d e T A S K - 2 . E s t u d i a n d o la c o n d u c t a n c i a d e l o s i o n e s d e p o t a s i o
están involucradas
arterosclerosis.
La
en
8-LOX,
contiene
de poro
12-LOX y 15-LOX.
hLOX
5-LOX,
subunidad
subfamilia
acido araquidónico
como
Cada
y dos dominios
diferentes
dioxigenación
del
acido
araquidónico
de
pH
para
TASK-2.
Nuestro
grupo
demostró
que
la
es
e n T A S K - 2 , s e p u e d e d e d u c i r q u e el p o t e n c i a l e l e c t r o e s t á t i c o y l a s
c o n s e c u e n c i a d e u n a s e r i e d e r e a c c i o n e s e n d o n d e el h i e r r o c u m p l e
p e r t u r b a c i o n e s g e n e r a d a s p o r el c a m b i o del e s t a d o de p r o t o n a c i ó n de
u n rol f u n d a m e n t a l . E n la l i t e r a t u r a e x i s t e n i n h i b i d o r e s
para
5-hLOX
inhibidores
y
de
aplicaciones
15-hLOX,
gran
no
importancia
medicas
anticancerigenos,
pero
son
los
por
12hLOX.
su
amplia
flavonoides
antioxidantes,
específicos
Un
grupo
variedad
Se
estabilidad
conformacional
de
g e n e r a r la i n a c t i v a c i ó n t i p o C d e l c a n a l . P a r a e s t e e s t u d i o s e a p l i c ó el
(antimicrobianos,
etc).
l o s r e s i d u o s s e n s o r e s r e g u l a n e l n i v e l d e o c u p a n c i a y/o
de
del
filtro
de
selectividad,
lo
que
además
podría
método A B F (Adaptive Biasing Forcé) implementado en N A M D .
En
realizaron
l o s c á l c u l o s d e A B F r e a l i z a d o s p a r a o b t e n e r el perfil d e e n e r g í a l i b r e ,
e n s a y o s de IC50 con a l r e d e d o r 4 0 c o m p u e s t o s frente a 1 2 - h L O X y
s e i m p l e m e n t o u n a seria de r e s t r i c c i o n e s s o b r e los i o n e s de potasio
1 5 - h L O X , r e v e l a n d o u n a i n t e r e s a n t e s e l e c t i v i d a d . D e b i d o a lo a n t e r i o r ,
a l t e r n a d o s c o n a g u a , e s t o s f u e r o n u b i c a d o s e n s i t i o s e s p e c í f i c o s e n el
se
antivirales,
para
e s c o g i e r o n los i s o f l a v o n o i d e s q u e e x h i b i e r o n d i c h a s e l e c t i v i d a d y
filtro d e s e l e c t i v i d a d . S e r e a l i z a r o n s i m u l a c i o n e s
para
los
s e o b s e r v ó q u e la p r e s e n c i a d e u n g r u p o e l e c t r o a t r a c t o r e n la p o s i c i ó n
estados
4 del a n i l l o B d e la c r o m o n a f a v o r e c e la s e l e c t i v i d a d h a c i a
12-hLOX.
s u g i e r e n q u e t r a s l a d a r el i o n d e s d e el s i t i o SO c o n a m b a s
Para
mediante
neutras
validar
estos
datos
experimentales,
se
trabajó
"docking" y simulación molecular dirigida (Steered)
a partir de los
m o d e l o s de 1 2 - h L O X y 15-hLOX. Análisis c o m p a r a t i v o s entre
energías de "docking" y fuerzas
forma
de
entrada
estructurales
de
de
dichos
importancia
IC50,
( " S t e e r e d " ) , n o s p e r m i t i e r o n d e f i n i r la
inhibidores
para
y cuáles
generar
la
son
las
selectividad
h L O X A g r a d e c i m i e n t o s Proyecto F O N D E C Y T N° 11075047.
claves
en
las
de
protonación
presenta
ARG224
cargadas,
experimentales
nivel
una
atómico
de
menor
lo
que
observados.
los
la A R G 2 2 4 . L o s
eventos
barrera
sé
energética
correlaciona
Estos
resultados
que
TASK-2.Agradecimientos: FONDECYT
resultados
gobiernan
que
con
los
permiten
la
N/1070722.
distintos
obtenidos
ARG224
con
ambas
resultados
analizar
activación
a
de
X X X / Reunión
21.ROL
DE RESIDUOS
HIDRÓFOBOS
EN
LA
CONDUCTANCIA
D E L C A N A L D E P O T A S I O H S L O (Role of h y d r o p h o b i c r e s i d u e s
conductance
1
W. ,
of h S l o p o t a s s i u m
2
Latorre, R. ,
1
channel) Márquez,
1
Gonzalez-Nilo,
F. .
V. ,
UNIVERSIDAD
in
González,
1
DE
TALCA ,
2
Anual
22. P R O P I E D A D E S
ESTRUCTURALES Y ELECTROSTATICAS
LA VÍA D E C O N D U C C I Ó N IÓNICA D E L C A N A L D E P O T A S I O
SHAKER
Y
EL
MUTANTE
P475D.
(Structural
and
Electrostatic
p r o p e r t i e s in t h e p e r m e a t i o n p a t h w a y of S h a k e r p o t a s s i u m
UNIVERSIDAD DE VALPARAISO .
and
L o s c a n a l e s d e K + d e p e n d i e n t e s d e v o l t a j e y d e c a l c i o i n t r a c e l u l a r se
González-Nilo, D. .
the
mutant
P475D)
1
1
Vergara^Jaque,
A. ,
EN
(K+)
channel
2
Naranjo,
D. ,
1
UNIVERSIDAD
DE TALCA , UNIVERSIDAD
DE
2
c a r a c t e r i z a n p o r p r e s e n t a r u n a a l t a c o n d u c t a n c i a , q u e e n el c a s o d e l
VALPARAÍSO .
c a n a l d e p o t a s i o h u m a n o h S l o a l c a n z a los 2 5 0 p S . T o d o s l o s c a n a l e s
L o s C a n a l e s p o t a s i o d e p e n d i e n t e s d e v o l t a j e a b r e n y c i e r r a n el p o r o
d e p o t a s i o p r e s e n t a n r e s i d u o s c o n s e r v a d o s e n el filtro d e s e l e c t i v i d a d ,
e n r e s p u e s t a a c a m b i o s e n e l v o l t a j e d e la m e m b r a n a , p e r m i t i e n d o a s í
indispensables
la
en
el
reconocimiento
del
ion
K+.
Estudios
conducción
e x p e r i m e n t a l e s e n el c a n a l d e p o t a s i o h S l o q u e el r e s i d u o F 3 8 0 p o s e e
selectividad
u n rol c r í t i c o e n la c i n é t i c a d e a c t i v a c i ó n d e l c a n a l . M u t a c i o n e s
de
sobre
iones.
Estos
el
potasio,
ion
canales
presentan
determinada
una
por
la
elevada
secuencia
sitio
aminoacídica T V G Y G altamente conservada entre dichos canales. De
dirigidas de este residuo han revelado u n a disminución significativa en
a c u e r d o a e s t o la c o n d u c t a n c i a u n i t a r i a e n t r e e l l o s d e b e r í a s e r s i m i l a r ,
la
sin e m b a r g o varía c o n s i d e r a b l e m e n t e
conductancia
intracelular.
Nuestro
estudio
se
enfoca
en
la
entre u n canal y otro. E n
el
c a r a c t e r i z a c i ó n d e la f u n c i ó n d e l r e s i d u o F 3 8 0 e n la c o n d u c t a n c i a a
canal
t r a v é s del c a n a l d e p o t a s i o h S l o s i l v e s t r e y la m u t a n t e F 3 8 0 A . P a r a t a l
compuerta
e f e c t o , se realizaron s i m u l a c i o n e s
m e m b r a n a , n o o b s t a n t e la m u t a c i ó n d e la s e g u n d a p r o l i n a p o r a c i d o
de D i n á m i c a
Molecular
Dirigida,
Shaker
la
de
secuencia
entrada
que
PVP
se
del
cierra
segmento
ante
un
S6,
forma
una
negativo voltaje
de
t é c n i c a q u e aplica fuerzas e x t e r n a s a s i s t e m a s , e n u n c o n t e x t o d e no
aspártico,
r : u i l i b r i o , o b t e n i é n d o s e a s í u n perfil d e e n e r g í a l i b r e a lo l a r g o d e u n a
~ 1 0 v e c e s m a y o r a la d e l c a n a l s i l v e s t r e . El o b j e t i v o d e e s t e t r a b a j o e s
coordenada
de
determinar
Jarzynski.
Resultados
reacción,
utilizando
la
identidad
preeliminares
han
determinada
concluido
por
que
la
bajo
estas
las
condiciones,
propiedades
muestra
estructurales
una
y
conductancia
electrostáticas
g o b i e r n a n las v a r i a c i o n e s e n la c o n d u c t a n c i a e n t r e el c a n a l
que
Shaker
c o n d u c t a n c i a e n el t i p o s i l v e s t r e e s t á m á s f a v o r e c i d a e n e r g é t i c a m e n t e
silvestre y el m u t a n t e P 4 7 5 D . P a r a r e a l i z a r este e s t u d i o s e utilizaron
q u e e n la m u t a n t e . P a r a c a r a c t e n z a r la i n t e r a c c i ó n c a t i o n - p i e n t r e el
técnicas
- : i d u o F 3 8 0 y el c a t i ó n K + , y d e e s t a f o r m a , o b t e n e r u n a
relación
entre
importancia
sus
propiedades
aromáticas
p a r a la c o n d u c t a n c i a
químico-cuánticos
de
e
energías
de
interacción.
simulación
molecular,
acompañadas
de
cálculos
de
p o t e n c i a l e l e c t r o e s t á t i c o e n la v í a d e c o n d u c c i ó n i ó n i c a . El a n á l i s i s d e
en
su
l a s p r o p i e d a d e s e s t r u c t u r a l e s y e l e c t r o s t á t i c a s c o r r e l a c i o n a d a s c o n la
estudios
c o n d u c t a n c i a d e l c a n a l , m u e s t r a q u e el i n c r e m e n t o d e é s t a s e d e b e al
hidrófobas
del c a n a l , s e a p l i c a r o n
de
posible
Agradecimientos:
P r o y e c t o F O N D E C Y T N° 1070049, Proyecto Anillo Científico A C T / 2 4 .
anillo de cargas n e g a t i v a s f o r m a d o p o r r e s i d u o s a s p a r t a t o , los c u a l e s
a u m e n t a n el p o t e n c i a l e l e c t r o s t á t i c o e n la c a v i d a d i n t e r n a del p o r o ,
g e n e r a n d o c o m o c o n s e c u e n c i a u n a u m e n t o e n la c o n c e n t r a c i ó n l o c a l
d e i o n e s K + y, p o r lo t a n t o , u n a m a y o r p r o b a b i l i d a d d e e s t e c a t i ó n e n
e s t a r e g i ó n del c a n a l . A g r a d e c í m i e n t o s A C T / 4 6.
MICROBIOLOGIA
23.ESTUDIO
EXTERNA
BIOFISICO
OMPW
TYPHIMURIUM
DE
DE
LA
PROTEÍNA
SALMONELLA
DE
MEMBRANA
ENTERICA
SEROVAR
INCORPORADA EN BICAPAS PLANAS
LIPÍDICAS
24. L A C A R E N C I A
DE POLIFOSFATOS
LA
RESISTENCIA
A
sp.
B4
(Lack
of
METALES
inorganic
INORGÁNICOS
PESADOS
polyphosphates
metal
1
outer mernbrane
OmpW
Viologen toxic) Delgado, M.G.
1
Saavedra, C. . Laboratorio
1 , 2
from
Salmonella
entérica
1
serovar
1
2
, P a c h e c o . N . , Gil. F. , Vergara, C ,
de M i c r o b i o l o g í a
Molecular,
Universidad
1
A n d r é s B e l l o , Laboratorio de Fisiología Celular, U n i v e r s i d a d de Chile
caracterización
de
porinas
de
bacterias
Gram
negativo
ha
C . \ Chávez,
F.P. ,
1
1
D e p t o . Biología. F a c u l t a d de C i e n c i a s e I C D B , Universidad de Chile. .
Todos
los
seres
vivos
biopolímeros lineales
enlaces
poseen
polifosfatos
(poliP),
que
son
f o r m a d o s p o r r e s i d u o s de orto fosfato u n i d o s por
fosfoanhídrido
bacteria
La
Mauriaca,
heavy
Jerez, C.A. . Laboratorio de Microbiología Molecular y Biotecnología,
protein
B4)
affeets
resistance
i n c o r p o r a t e d o n p l a n a r lipidie b i l a y e r s a f e c t e d b y M e t i l
sp.
AFECTA
Pseudomonas
F R E N T E A L T O X I C O M E T I L V I O L O G E N O ( B i o p h i s i c a l S t u d y of t h e
Typhimurium
i n Pseudomonas
EN
La
degradadora
bacteria
de
Pseudomonas
los
sp.
contaminantes
B4
es
una
ambientales
policlorobifenilos ( P C B s ) , y es c a p a z de a c u m u l a r una gran cantidad
c o n t r i b u i d o a la c o m p r e n s i ó n d e la f i s i o l o g í a b a c t e r i a n a . S o n c a n a l e s
de
acuosos
c o m p a r a t i v a m e n t e el e f e c t o q u e t i e n e la c a r e n c i a d e p o l i P e n c é l u l a s
que
permiten
la
difusión
pasiva
de
solutos
hidrofílicos,
poliP
en
diferentes
p a t o g e n i c i d a d e n el h o s p e d e r o . S e
de
N u e s t r o s r e s u l t a d o s i n d i c a n q u e la p r e s e n c i a d e l p o l i P e n la c é l u l a e s
metil
i m p o r t a n t e p a r a la r e s i s t e n c i a a a l g u n o s m e t a l e s p e s a d o s c o m o el C u ,
d e m o s t r ó q u e el g e n o m p W
compuesto
gatillador
viológeno
(MV),
expresión
se
transporte
in
expulsado
d e la c é l u l a y c e p a s
induce
vivo
en
con
presencia
[14C]-MV
para
la r e s i s t e n c i a
de
de
estrés
este
demostraron
mutantes
en
a
oxidativo
y
tóxico.Estudios
que
el
tóxico
el g e n o m p W
Fe y Cd. La presencia de C u d e s d e
de
fenómeno
es
latencia, que
ven
Además,
adaptación,
generó
fue m a y o r para
cuando
cultivos
un
la c e p a
crecidos
cepa
control
y
otra
niveles deficientes en los poliP.
su
de
una
estudiar
r e c o m b i n a n t e de esta bacteria, c o n
requerido
utilizado
Para
enfrentadas
es
hemos
cultivo.
a m b i e n t e s d i v e r s o s , la r e s i s t e n c i a a d r o g a s y a l g u n o s a s p e c t o s d e s u
Typhimurium
metales,
de
n u t r i e n t e s o t ó x i c o s . S u n a t u r a l e z a e x p l i c a el d e s a m o l l o b a c t e r i a n o e n
Salmonella
a
condiciones
sin
el c o m i e n z o
alargamiento
con niveles
Cu
se
del
crecimiento,
d e la f a s e
nulos de
enfrentaron
de
poliP.
a
dicho
d i s m i n u i d a s u s a l i d a . E n e s t e t r a b a j o , m e d i a n t e la r e c o n s t i t u c i ó n d e la
metal, ocurrió una baja considerable del n ú m e r o de células viables en
proteína O m p W purificada en bicapas lipídicas planas y condiciones
el c u l t i v o ,
de
d e p e n d e r í a d e l o s n i v e l e s d e l o s p o l i P e n la c é l u l a p r e v i o al e s t r é s
voltaje
electro
controlado,
fisiológicas
conductancia
se
establecieron
las
características
d e é s t a , la c u a l p r e s e n t a al m e n o s d o s n i v e l e s d e
(130
y
40
pS
en
100
mM
KCI).
Se
analizó
c o m p o r t a m i e n t o de O m p W frente a M V . E n presencia del tóxico
inducido
lo q u e
por
el
de
fue
seguido
metal.
los
poliP
de
Los
como
una recuperación, cuya
resultados
una
obtenidos
molécula
rapidez
apoyan
protectora
frente
la
el
participación
a
d i v e r s o s t i p o s d e e s t r é s , y e n p a r t i c u l a r e n la f u n c i ó n r e g u l a t o r i a d e la
a
c o n c e n t r a c i o n e s e n el r a n g o d e 6 0 a 1 0 0 m M , e l c a n a l c a m b i a
su
resistencia frente a los m e t a l e s p e s a d o s . F i n a n c i a d o p o r p r o y e c t o s
c i n é t i c a , p e r m a n e c i e n d o u n m a y o r t i e m p o e n el e s t a d o abierto.
El
F O N D E C Y T 1070986, 11070180
nrvel
mayor
de
conductancia
de
Potasio
disminuye
en
un
50%.
- - . a l m e n t e , d a t o s p r e l i m i n a r e s i n d i c a n q u e el t ó x i c o e s c o n d u c i d o a
t r a v é s d e la p r o t e í n a e n u n s o l o s e n t i d o .
y proyecto ICM P05-001-F.
Sociedad
25.
PURIFICACIÓN
PEPTIDOS
Y
de Bioquímica y Biología
CARACTERIZACIÓN
ANTIMICROBIANOS
DE
NUEVOS
PRODUCIDOS
POR
Molecular
2 6 . E L G E N yggE
EL
D E Escherichia
ESTRÉS OXIDATIVO
coli:
( T h e yggE
UNA D E F E N S A
CONTRA
g e n e f r o m Escherichia
1
coii
: a
2
1
P S E U D O M O N A S A E R U G I N O S A ( P u r i f i c a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n of
d e f e n s e a g a i n s t o x i d a t i v e s t r e s s . ) A c u ñ a , L . , C a l d e r ó n , I. , E l i a s , A . ,
novel antimicrobial peptides secreted by P s e u d o m o n a s
Sandoval,
1
1
1
Ferrer, A. , Navarro, M. . Saavedra, J.M. , Tello, M.
Laboratorio
Salud,
de Bacteriología Molecular.
Universidad
1
, Corsiru, G . .
F a c u l t a d d e C i e n c i a s d e la
1
Diego
1 , 2
aeruginosa)
Portales. ,
Departamento
de
Biología,
2
Facultad de Ciencias, U n i v e r s i d a d de C h i l e . .
Pseudomonas
aeruginosa
es
una
p e r t e n e c i e n t e a la r a m a g a m m a
laboratorio
nos
ha
interesado
1
Castro,
M. ,
1
Vásquez,
C. .
Laboratorio
de
Microbiología Molecular, F a c u l t a d de Q u í m i c a y Biología, Universidad
1
d e S a n t i a g o d e C h i l e , F a c u l t a d d e C i e n c i a s d e la S a l u d , U n i v e r s i d a d
2
Andrés Bello, Santiago, Chile .
El t e l u r i t o d e p o t a s i o ( K T e 0 ) e s t ó x i c o p a r a m u c h o s o r g a n i s m o s y a
2
bactena
Gram
negativa
de las p r o t e o b a c t e r i a s . E n
analizar
1
M. ,
aislados
nuestro
clínicos
de
esta
la
fecha
no
se
3
conocen
mecanismos
específicos
de
resistencia
bacteriana a K T e 0 . N o o b s t a n t e , se h a postulado que su toxicidad
2
se
debería
3
en
parte
a
la
generación
de
superóxido
que
ocurre
bacteria c o m o m o d e l o para e s t u d i a r un n u e v o tipo de bacteriocinas,
concomitantemente
producidas por G r a m negativas pero que tiene su efecto sólo sobre
elemental
la p o t e n c i a l
función
b a c t e r i a s G r a m positivas. A n a l i z a n d o u n a c o l e c c i ó n de 120 aislados
anti o x i d a n t e d e la p r o t e í n a p en p l a s m á t i c a Y g g E d e Escherthia
coli
c l í n i c o s d e P.
frente a los g e n e r a d o r e s d e a n i ó n s u p e r ó x i d o telurito d e p o t a s i o
encontrado
aeruginosa
35
termoestables
mediante
aislados
que
producen
de naturaleza
denominado
gicinas,
ensayos
sobre césped
sustancias
hemos
anti b a c t e r i a ñas
proteica. Estas proteínas, que
poseen
actividad
antimicrobiana
hemos
sólo
sobre
bacterias G r a m positivas. E m p l e a n d o c o l u m n a s hidrofóbicas
hemos
c o n la r e d u c c i ó n i n t r a c e l u l a r d e t e l u r i t o a t e l u r o
(TeK°). En este trabajo,
función
es
desconocida.
Mutantes
normales por complementación
s o b r e e x p r e s a n yggE
pyogenes,
de
además
y
L
monocytogenes.
Mediante
poseen
una
masa molecular
gicina B tiene una m a s a
aproximada
de
g e les
que gicina A y C
8000
D a , en
de 3 0 0 0 D a a p r o x i m a d a m e n t e .
cambio
Mediante
H P L C e n fase reversa y espectrometría de m a s a determinamos
gicina A posee una m a s a m o l e c u l a r de
termoestables
en
un
amplio
rango
de
p r e s e n t a n u n p H ó p t i m o d e 7. E s t a s
que
7924 Da. Gicina A y C son
temperatura
bacteriocinas
(4-100
son
°C)
y
antimicrobianas,
revela
bacterias
su acción
sobre
niveles
g e n é t i c a . P o r otro lado, c e p a s
mostraron m a y o r resistencia a K T e 0
2
que
y a PQ,
3
d e u n a d i s m i n u c i ó n e n la o x i d a c i ó n d e p r o t e í n a s y e n l a s
actividades S O D y F u m C . Estos y otros resultados sugieren que Y g g E
podría
tener
Escherichia
una
potencial
participación
en
la
resistencia
de
coii a K T e 0 . E s t a p r o t e í n a f o r m a r í a p a r t e d e u n s i s t e m a
2
3
e n c a r g a d o de e x p u l s a r t ó x i c o s g e n e r a d o r e s de s u p e r ó x i d o , en este
caso
los
producidos
durante
la
exposición
a telurito
y
paraquat.
Financiado por Fondecyt 1060022 y D i c y t - U S A C H .
de
crecimiento de cepas tratadas c o n estas proteínas
gicina A y C ejercen
muestran
fumarasa C (FumC) y
producidas
d u r a n t e f a s e e x p o n e n c i a l d e c r e c i m i e n t o , y el a n á l i s i s del perfil
que
y
e s p e c i e s r e a c t i v a s d e o x í g e n o . E s t o s v a l o r e s se r e d u j e r o n a n i v e l e s
S.
cereus
yggE
aumentados de superóxido dismutasa (SOD),
g i c i n a s p u r i f i c a d a s p r e s e n t a n a c t i v i d a d s o b r e c e p a s d e S. aureus,
B.
estudió
p a r a q u a t ( P Q ) . Y g g E s e e n c u e n t r a c o n s e r v a d a en otras bacterias y su
purificado 3 de estas proteínas (gicina A , gícina B y gicina C). Las tres
poliacrilamida-SDS y activiogramas determinamos
se
Gram
positivas, mediante un efecto bacteriolítico. Financiamiento: V R A - U D P
CG13.03.25.013.
27. E S T U D I O D E P R O T E Ó M I C A D I F E R E N C I A L E N
sp.
B4
CON
NIVELES
DEFICIENTES
DE
( D i f f e r e n t i a l p r o t e o m i c s t u d i e s i n Pseudomonas
1
Pseudomonas
POLIFOSFATOS
sp. B4 c o n t a i n i n g l o w
1
1
levéis of p o l y P ) V á r e l a , C . , J e r e z , C . A . , C h á v e z , F . P . . L a b o r a t o r i o
de Microbiología Molecular y Biotecnología, Depto. Biología, Facultad
1
d e Ciencias e I C D B , Universidad de C h i l e . .
(poliP) es
un
polímero
distribuido
en
los
sp.
lineal de
organismos
residuos
vivos.
B4, sus niveles celulares p r e s e n t a n
el m i c r o o r g a n i s m o . T a m b i é n
MECANISMO
DE
ACCIÓN
DEL
and
mechanism
24)
of
action
of
1
1
antimicrobial
2
peptide
Microcin
1
1
S a a v e d r a , J . M . , T e l l o , M . * , F e r n á n d e z , K. , C o r s i n i , G . . L a b o r a t o r i o
de
Bacteriología
Molecular.
Facultad
de
Ciencias
de
la
Salud,
2
Ciencias, Universidad de Chile. .
En
L a s m i c r o c i n a s son un g r u p o de bacteriocinas de bajo p e s o m o l e c u l a r
variaciones
( i n f e r i o r a 10 k D a ) p r o d u c i d a s p o r b a c t e r i a s e n t é r i c a s , q u e p r e s e n t a n
i m p o r t a n t e s s e g ú n la c o n d i c i ó n f i s i o l ó g i c a y / o a m b i e n t a l e n q u e
encuentre
Y
1
ortofosfato
Pseudomonas
CARACTERIZACIÓN
P É P T I D O ANTI M I C R O B I A N O M I C R O C I N A 24 (Characterization
Universidad Diego P o r t a l e s . , D e p a r t a m e n t o de Biología, Facultad de
El polifosfato inorgánico
ampliamente
28.
se ha d e m o s t r a d o
células c o n niveles deficientes de poliP son i n c a p a c e s de
que
se
las
moverse,
actividad
bacteriostática
estrechamente
o
relacionadas.
bacteriolítica
La
m¡crocina
sobre
24
especies
(Mcc24)
es
una
b a c t e r i o c i n a p r o d u c i d a p o r la c e p a E. coli 2 4 2 4 . L o s
determinantes
formar biopelículas y a d e m á s d i s m i n u y e su c a p a c i d a d de sobrevida
genéticos
fragmento
en condiciones
5,25
global
este
de estrés. Para
fenómeno
realizamos
d i f e r e n c i a l e n Pseudomonas
en
diferentes
estudiar desde
un punto
kb
para
que
su
posee
síntesis
están
5 genes.
contenidos
Mediante
en un
experimentos
de
de
RT-PCR
proteómica
d e t e r m i n a m o s q u e e l g e n m t f S , q u e c o d i f i c a p a r a la M c c 2 4 s e e x p r e s a
en fase exponencial y estacionaria de crecimiento. La purificación y
de
cultivo
y
fases
de
vista
sp. B 4 c o n n i v e l e s d e f i c e n t e s d e p o l i P y
condiciones
experimentos
de
del
crecimiento
E n c o n t r a m o s q u e la d i s m i n u c i ó n d e l o s p o l i P a u m e n t a l o s n i v e l e s d e
posterior
caracterización
mediante
espectrometría
de
masa
de
M c c 2 4 , determinó que este péptido antimicrobiano p o s e e una
la
masa
l a s c h a p e r o n a s y los f a c t o r e s d e p r o t e c c i ó n c o n t r a el e s t r é s o x i d a t i v o ;
m o l e c u l a r d e 7 2 7 4 , 2 3 lo c u a l , n o e s c o n c o r d a n t e c o n la m a s a t e ó r i c a
d e l a s e n z i m a s i n v o l u c r a d a s e n e l c i c l o d e K r e b s y la b e t a o x i d a c i ó n
( 7 5 2 7 , 3 6 ) , d e d u c i d a a p a r t i r d e la s e c u e n c i a d e l G e n B a n k ( U 4 7 0 4 8 ) .
d e á c i d o s g r a s o s ; a s í c o m o d e l a s í n t e s i s d e l A T P y la b i o s í n t e s i s d e
Mediante
los
c o d i f i c a p a r a u n p é p t i d o d e 9 1 r e s i d u o s , c o n u n a m a s a d e 7 2 9 3 , 0 2 , lo
aminoácidos.
Por
otro
lado,
estos
bajos
niveles
de
poliP
d i s m i n u y e n la e x p r e s i ó n d e l o s t r a n s p o r t a d o r e s d e m e m b r a n a y d e l o s
cual
factores
Mediante
de
degradación
de
las
proteínas;
la
transcripción
y
la
se
secuenciación
correlaciona
ensayos
de
con
DNA
los
determinamos
datos
colorimétricos
en
que
experimentales
placa
el
gen
mtfS
obtenidos.
determinamos
que
la
motilidad. Estos resultados s u g i e r e n que los poliP están relacionados
Mcc24
c o n el m e t a b o l i s m o e n e r g é t i c o p r i m a r i o , c o n l o s p r o c e s o s c e l u l a r e s d e
mediante ensayos de actividad betta-galactocidasa determinamos que
respuesta
Mcc24
membrana
al e s t r é s y c o n el t r a n s p o r t e
activo de moléculas
celular. F i n a n c i a d o p o r p r o y e c t o s F O N D E C Y T
11070180 y proyecto ICM P05-001-F.
e n la
1070986,
posee un efecto bacteriolítico
s e i n s e r t a e n la m e m b r a n a
s o b r e las c é l u l a s s e n s i b l e s
interna g e n e r a n d o
poros e n
y
la
b a c t e r i a . P o r o t r a p a r t e , e m p l e a n d o m u t a g e n e s i s s o b r e el s i s t e m a d e
transporte del ferricromo hidroxarriato h e m o s podido esclarecer parte
d e l s i s t e m a i n v o l u c r a d o e n el r e c o n o c i m i e n t o d e l r e c e p t o r y t r a n s p o r t e
de
la M c c 2 4
inserción
en
a través
la
CG13.03.25.007.
d e la m e m b r a n a
membrana
externa hasta su
interna.Financiamiento:
eventual
VRA-UDP
XXXI Reunión
29.
EL
COMPLEJO
PIRUVATO
DESHIDROGENASA
DE
Escherichia
coii E S U N B L A N C O I N T R A C E L U L A R D E T E L U R I T O
D E P O T A S I O ( T h e p y r u v a t e d e h y d r o g e n a s e c o m p l e x of
Escherichia
coii is a n i n t r a c e l l u l a r t a r g e t of p o t a s s i u m t e l l u n t e ) D í a z , W . , C a s t r o ,
M. .
Molina,
R. ,
Vásquez,
C. .
Laboratorio
de
Microbiología
M o l e c u l a r , Facultad de Q u í m i c a y Biología, U S A C H \
1
I
I
1
1
1
E l t e l u r i t o de p o t a s i o ( K T e 0 ) e s t ó x i c o p a r a la m a y o r í a d e las
especies bacterianas, e s p e c i a l m e n t e G r a m negativas. Se ha descrito
general que en bacterias que p r e s e n t a n m a y o r resistencia a este
tóxico participarían e n z i m a s que p u e d e n reducir telurito ( T e ) a teluro
m e t á l i c o ( T e ) . La c a p a c i d a d de r e d u c í r o s t e o x i a n i ó n de teluro ha sido
¿ s o d a d a c o n a c t i v i d a d e s s e c u n d a n as de a l g u n a s e n z i m a s c o m o
nitrato r e d u c t a s a s y c a t a l a s a s . E n este t r a b a j o se
presentan
e v i d e n c i a s q u e el c o m p l e j o m u l t i e n z i m á t i c o p i r u v a t o d e s h i d r o g e n a s a
( P D H ) d e Esc henchí a coii p r e s e n t a a c t i v i d a d r e d u c t o r a d e t e l u r i t o .
E x p e r i m e n t o s d e s u b c l o n a m i e n t o p e r m i t i e r o n d e t e r m i n a r q u e la
c a p a c i d a d de r e d u c i r t e l u r i t o in vitro r a d i c a e x c l u s i v a m e n t e e n el
: i m p o n e n t e E 3 (dihidrolipoamida d e s h i d r o g e n a s a) del complejo P D H .
C u a n d o s e c o m p a r a n c o n la c e p a s i l v e s t r e , m u t a n t e s d e f i c i e n t e s e n el
: e n tpd ( c o d i f i c a p a r a E 3 ) p o s e e n u n a m e n o r a c t i v i d a d r e d u c t o r a d e
telurito, a d e m á s de una alta s e n s i b i l i d a d a K T e 0 . T a m b i é n
se
z e t e r m i n ó q u e E. coii e x p u e s t a s a c o n c e n t r a c i o n e s s u b l e t a l e s d e
e x h i b e n m e n o r a c t i v i d a d p i r u v a t o d e s h i d r o g e n a s a, s u g i r i e n d o
q u e el c o m p l e j o P D H p o d r í a r e p r e s e n t a r u n n u e v o b l a n c o i n t r a c e l u l a r
del K T e 0 . Financiado por Fondecyt 1060022 y D i c y t - U S A C H .
2
I
3
+ 4
0
I
I
!
I
I
2
3
2
:
i
2
3
31. T R A N S P O R T A D O R E S
DE ARABINOSA:
PARTICIPAN EN E L
NGRES O DE TELURITO DE POTASIO (K2TE03)A
COLI?
( A r a b i n o s e t r a n s p o r t e r s : d o t h e y p l a y a r o l e in t h e u p t a k e
p o t a s s i u m t e l l u n t e ( K T e 0 ) i n Escherichia
2
I
'
ESCHERICHIA
cotí?)
3
of
1
Elias, A. , Vásquez,
Laboratorio de Microbiología Molecular. F a c u l t a d de Q u í m i c a y
1
Biología. U n i v e r s i d a d de S a n t i a g o de C h i l e . .
E •• T e 0
:
3
ipunta
a
de e n t r a d a es a ú n controversial.
que
el
ingreso
de
este
30. VÍA D E S E Ñ A L I Z A C I Ó N M E D I A N T E C-DI-GMP E N B A C T E R I A S
B I O M I N E R A S ( c - d i - G M P p a t h w a y in b i o m i n i n g b a c t e r i a ) C a s t r o , M. ,
1
1
2
3
1
2
3
32.
OXIDASAS
FUSARIUM
Y
CICLASAS
DE GIBERELINAS
SUBGLUTINANS
(Gibberellin
from Fusarium subglutinans) G o n z á l e z , X . P .
V.
1 , 2 , 3
, Rojas, M.C.
1 , 2 , 3
tóxico
Evidencia
estaría
reciente
relacionado
al
: stemas
de
la u t i l i z a c i ó n d e a r a b i n o s a r e q u i e r e la
araBAD
transporte).
El
(metabólico),
transporte
1 , 2 , 3
, Acuña,
2
3
Fusarium
fujikuroi
Gibbereiia
patógeno
fujikuroi.
F.
del
se
araFGH
lleva
y/o
a cabo
por
arroz
fujikuroi
perteneciente
produce
ácido
al
complejo
giberélico
cuya
b i o s í n t e s i s h a s i d o c a r a c t e r i z a d a a n i v e l d e l o s g e n e s , las e n z i m a s y
genes
operón
, Suazo, C.
cyclases
D e p a r t a m e n t o de Q u í m i c a .
las r e a c c i o n e s q u í m i c a s . Las o t r a s
del
1 , 2 , 3
HONGO
and
1
o t r o s m e t a b o l i t o s . E n E. coii,
resión
EN E L
oxidases
. Universidad de Chile , Facultad de Ciencias ,
ransporte de moléculas biológicamente importantes como azúcares u
:
1
Ruiz, L.M. , Barriga, A . , _aldos. D . _aldo. C . \ Guiliani, N. . Unidad
de
Comunicación
Bacteriana,
Laboratorio
de
Microbiología
y
B i o t e c n o l o g í a M o l e c u l a r , D e p a r t a m e n t o de B i o l o g í a , Instituto de
Dinámica Celular y Biotecnología, Universidad de Chile. , C E P E D E Q ,
F a c u l t a d de C i e n c i a s Q u í m i c a s y F a r m a c é u t i c a s , U n i v e r s i d a d de
C h i l e , Center of Bioinformatics a n d G e n o m e Biology, F C V - M I F A B ,
Universidad Andrés Bello. .
Las bacterias
quirniolitoautotróficas
Acidithiobacillus
ferrooxidans
Acidithiobacillus
thiooxidans
y
Acidithiobacillus
_aldos
están
i n v o l u c r a d a s e n la b i o l i x i v i a c i ó n d e s u l f u r e s m e t á l i c o s . D i f e r e n t e s
estudios indican q u e estas bacterias son c a p a c e s de c o n f o r m a r
b i o p e l í c u l a s , e s t r u c t u r a s f u n d a m e n t a l e s e n la b i o l i x i v i a c i ó n . E n t o n c e s ,
i a c a r a c t e r i z a c i ó n d e los m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s i n v o l u c r a d o s e n la
i n t e r a c c i ó n b a c t e r i a / m i n e r a l y la f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s a d q u i e r e
r e l e v a n c i a p a r a d i s e ñ a r e s t r a t e g i a s b i o l ó g i c a s p a r a m e j o r a r la
e f i c i e n c i a d e la b i o l i x i v i a c i ó n . El _ a l d o s s e n s i n g ( Q S ) y la v í a d e l
m e n s a j e r o segundario diguanilato cíclico ( c - d i - G M P ) son reconocidos
c o m o los p r i n c i p a l e s m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s d e r e g u l a c i ó n d e la
f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s . N o o b s t a n t e , n o h a y e s t u d i o s al r e s p e c t o
en m i c r o o r g a n i s m o s b i o m i n e r a s . P o r esto, nos h e m o s propuesto
i n d a g a r si e s t o s m e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s e s t á n i n v o l u c r a d o s e n la
i n t e r a c c i ó n b a c t e r i a / m i n e r a l y la p o s t e r i o r f o r m a c i ó n d e b i o p e l í c u l a s e n
b a c t e r i a s b i o m i n e r a s . P r e v i a m e n t e , h e m o s identificado u n s i s t e m a de
Q S t i p o A1-1 f u n c i o n a l e n la c e p a A T C C 2 3 2 7 0 d e A . f e r r o o x i d a n s
(Farah y col., 2005. Valenzuela y col., 2007; Ruiz y col., 2008).
U s a n d o h e r r a m i e n t a s b i o i n f o r m á t i c a s p a r a a n a l i z a r las s e c u e n c i a s
genómicas
de A .
ferrooxidans
ATTC
2 3 2 7 0 , A.
Thiooxidans
A T C C 19377 y A. _ a l d o s A T C C 5 1 7 5 6 , h e m o s identificado genes que
c o d i f i c a n p a r a p r o t e í n a s p u t a t i v a s i n v o l u c r a d a s e n la v í a del c - d i - G M P
e n e s t o s m i c r o o r g a n i s m o s . J u n t o c o n d e m o s t r a r la t r a n s c r i p c i ó n d e
e s t o s g e n e s e n A . _ a l d o s y A . f e r r o o x i d a n s , h e m o s e v i d e n c i a d o la
presencia de c-di-GMP
en este último microorganismo.
Estos
r e s u l t a d o s s u g i e r e n la e x i s t e n c i a d e u n a v í a d e s e ñ a l i z a c i ó n m e d i a n t e
c-di-GMP funcional en estas bacterias biomineras.
Las giberelinas (Gas) son fitohormonas diterpénicas descubiertas en
e j e r c e s u s e f e c t o s t ó x i c o s d e n t r o d e la c é l u l a . S i n e m b a r g o ,
el m e c a n i s m o
Anual
d e G a s sin e m b a r g o ,
e s p e c i e s del complejo contienen
excepto
e n F. proiiferatum,
no se
ha
araE
i n v e s t i g a d o la
dos
s e i n v e s t i g a r o n las f u n c i o n e s catalíticas d e m o n o o x i g e n a s a s de G a s
funcionalidad de oxidasas y ciclasas. E n este trabajo
m e c a n i s m o s diferentes: u n sistema de simporte asociado a protones y
en
u n s i s t e m a d e p e n d i e n t e de e n e r g í a a s o c i a d o a p r o t e í n a s de u n i ó n .
productora.
Resultados
e r / f - k a u r e n o i d e s e n el f i l t r a d o o el m i c e l i o y m e d i a n t e la a d m i n i s t r a c i ó n
preliminares
de
nuestro
laboratorio
indican
que
la
la
especie
aislada
Se
del
analizó
maíz,
F.
mediante
subgiutinans,
GC-MS
la
una
presencia
especie
de
no
Gas
y
p r e s e n c i a d e a r a b i n o s a e n el m e d i o d e c u l t i v o a u m e n t a la s e n s i b i l i d a d
de p r e c u r s o r e s m a r c a d o s c o n
d e Escherichia
reacciones e n z i m á t i c a s . Las dos c e p a s investigadas ( E 0 0 9 9 y E 2 1 9 2 )
cedria
ingresar
coii
a
a telurito de potasio, sugiriendo
través
del(los)
transportador(es)
que el
K Te0
2
asociado(s)
3
al
i g r e s o d e e s t e a z ú c a r a la c é l u l a . E s t e e f e c t o s e r í a e s p e c í f i c o p a r a
reSunto y n o p a r a o t r o s m e t a l o i d e s
"ondecyt 1060022 y Dicyt-USACH.
como
arsenito.
Financiado
por
no
producen
transformados
Gas.
s u s t r a t o s d e la G A
productos
sería
1 4
C
a l o s c u l t i v o s , s e i n v e s t i g a r o n las
precursores
productos
o
1 4
C-GA
y
1 2
de oxidación
1 4
C-GAi
fueron
en tanto que
los
sintetasa m o s t r a r o n una baja metabolización a
d e la v í a lo q u e s u g i e r e
inactiva
subgiutinans.
Los
en varios
1 4
presentaría
La biosíntesis
un
q u e la m o n o o x i g e n a s a
bajo
de Gas
nivel
de
expresión
estaría bloqueada
á c i d o e / ? f - k a u r e n o i c o e n e s t a e s p e c i e a d i f e r e n c i a d e F.
P450-1
en
a nivel
F.
del
proiiferatum.
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
i MOLECULAR
33. DISTRIBUCION I N T R A C E L U L A R D E L P R O T E A S O M A 2 0 S D E
3 4 . E S T U D I O D E L A P R O L I F E R A C I Ó N D E Trichomonas
Trypanosoma
( S T U D I E S O F Trichomonas
cruzi
20S
cruzi
proteasome.)
3
Mortara,
(Intracellular
R. ,
Osorio,
2
S a g ú a,
distnbution
H. .
L.\
2
Araya.
J. ,
of the
Trypanosoma
2
Gutiérrez,
B ,
González,
J .
2
2
Muñoz,
C. ,
Unidad
de
1
Parasitología Molecular. Universidad de Antofagasta, Chile ,
Unidad
de
Chile ,
Parasitología
Departamento
Molecular,
de
Universidad
Microbiología,
de
2
Antofagasta,
Immunologia
y
Parasitología,
3
U N I F E S P , Escola Paulista de Medicina. S A £ o Paulo, SP, B r a z i l .
La
diferenciación
de
Trypanosoma
cruzi,
de
e inhibido
lactacistina. E n células eucari óticas los proteas ornas se
e n núcleo y c i t o p l a s m a , no o b s t a n t e
T.cruzi
la d i s t r i b u c i ó n
T. cruzi,
por
intracelular
7 E 5 , dirigido contra u n a s u b u n i d a d alfa de 2 7 k D a del
a
encuentran
n o e s c o n o c i d a . M é t o d o s : U t i l i z a n d o el a n t i c u e r p o
L. ,
2
Sagua,
H. .
en
monoclonal
proteas orna de
s e e s t u d i ó m e d i a n t e in m u ñ o el e c t r o m i c r o s c o p i a y m i c r o s c o p í a
c o n f o c a l . la d i s t r i b u c i ó n i n t r a c e l u l a r d e l p r o t e a s o r n a 2 0 S . I g u a l m e n t e ,
vaginaíis
1
PROLIFERATION) Muñoz, C . .
2
Araya,
J. ,
2
González,
J. .
Unidad
de
1
Parasitología Molecular, Universidad de Antofagasta. C H I L E , Unidad
2
de P a r a s i t o l o g í a Molecular. U n i v e r s i d a d de A n t o f a g a s t a , Chile .
Trichomonas
vaginaíis
e s u n p r o t o z o o f l a g e l a d o q u e i n f e c t a el t r a c t o
urogenital h u m a n o , r e p o r t á n d o s e 170 millones de n u e v o s c a s o s c a d a
a ñ o . E n c u l t i v o a x é n i c o , la p r o l i f e r a c i ó n d e T. vaginaíis
tripomastigotes
a m a s t i g o t e s , es un p r o c e s o p r o t e a s o m a - d e p e n d i e n t e
2
Osorio,
vaginaíis
depende de pH
y temperatura. No obstante, observaciones preliminares
laboratorio
parásitos
factores
sugieren
que
que
afectan
de 6 2 . 0 0 0
estudió
crecimiento
depende
del
de
nuestro
número
de
p r e s e n t e s e n el i n o c u l o i n i c i a l . C o n el o b j e t i v o d e identificarel
crecimiento utilizando
rango
el
el
crecimiento
inóculos
a 500.000
secretoma
de
de
7.
vaginaíis
de diferente
se
parásitos/ml. Mediante
T.
vaginaíis.
estudió
el
d e n s i d a d c e l u l a r e n el
SDS-PAGE
Finalmente
se
c r e c i m i e n t o del p r o t o z o o en p r e s e n c i a de Brefeldnna A .
se
estudió
el
El e s t u d i o d e
el a n t i c u e r p o s e utilizó p a r a i n m u n o p r e c i p i t a r p r o t e a s ornas y e s t u d i a r
la c u r v a s d e c r e c i m i e n t o , m o s t r ó q u e e l p a r á s i t o e s c a p a z d e p r o l i f e r a r
la
cuando
actividad
enzimática
en
los
distintos
F i n a l m e n t e , el c i n e t o p l a s t o d e T.cruzi
de iodixanol y
Resultados:
20S
cinetoplasto.
confirmada
fue
La
presencia
mediante
cinetoplasto
núcleo,
proteasorna
evaluación
de
de
y
confocal
citoplasma
en
y
cinetoplasto
Conclusiones:
Evidencias
distribuyéndose
iniciales
que
fueron
escaso
de
250.000
crecimiento
se
y
500.000
observó
i n ó c u l o s m e n o r e s . El e s t u d i o del s e c r e t o m a d e T. vaginaíis
con
mostró
el
q u e u n a b a n d a de a p r o x i m a d a m e n t e 2 0 k D a se secreta sólo a partir
en
d e l t i e m p o 0 s i e n d o s u i n t e n s i d a d c r e c i e n t e e n el t i e m p o . F i n a l m e n t e
fue
un
5 9 , 4 % de
i n h i b i c i ó n e n la p r o l i f e r a c i ó n s e o b s e r v ó
cuando
T.
de
vaginaíis
A.
Nuestras
la a c t i v i d a d
enzimática
de
o b s e r v a c i o n e s s u g i e r e n q u e e l c r e c i m i e n t o d e d e T . vaginaíis
depende
microscópicas
núcleo,
inóculos
mientras
purificadas
está presente
en
los
parásitos/ml
fracciones
de p r o t e a s o r n a utilizando S u c - L L V T - A M C
m u e s t r a n que proteasorna
T.cruzi,
de
electrónica
en
inmunoblot
y mediante
inmunoprecipitados
sustrato.
un
parásito.
revelado con anticuerpo 7E5.
microscopía
identificado
del
fue aislado mediante gradiente
se realizó u n i n m u n o b l o t
Mediante
proteasorna
estadios
y
como
bioquímicas
e n t o d o s los e s t a d i o s
citoplasma
fue
cultivada
del inoculo inicial
en
presencia
de
y probablemente de
Brefeldina
p r o d u c t o s de s e c r e c i ó n del
parásito. Financiamiento: F U N A N D E S C13955/17.
de
y cinetoplasto.
Se
p o s t u l a q u e la p r e s e n c i a d e p r o t e a s o m e s e n c i n e t o p l a s t o , n o d e s c r i t a
hasta
hoy,
evento
tendría
relación
ocurre
durante
que
con
la
el
r e m o d el a m i e n t o
diferenciación
de
del
organelo,
tripomastigote
a
amastigote. Financiamiento:VRA1321;Fundación Andes C13955/17.
VIROLOGIA
BIOQUIMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR DE PLANTAS
35. E S T U D I O D E LA INICIACIÓN D E L A T R A D U C C I Ó N D E L mRNA
36. A N A L I S I S M O L E C U L A R D E L A R E S P U E S T A
DEL
D E Pinus
SEGMENTO
(Mechanism
S DE LOS VIRUS ANDES Y
of t r a n s l a t i o n i n i t i a t i o n o f t h e
BUNYAMWERA.
S mRNA
of A n d e s
1
and
1
Bunyamwera virus) Vera-Otarola, J . , López-Lastra, M. . Centro
de
Investigaciones Médicas, Facultad d e Medicina, Pontificia Universidad
1
Católica de Chile. .
of Pinus
2
C. ,
radiata
1
radiata
d e la f a m i l i a B u n y a v i n d a e p o s e e n u n
genoma
1
R. .
Instituto
de
Biología
2
1
Vegetal
y
Biotecnología,
2
Universidad de T a l c a , Forestal M i n i n c o .
madera
de
compresión
t r i p a r t i t o ( S , M y L ) . El m R N A d e l s e g m e n t o S ( m R N A S ) e s u t i l i z a d o
genes
e n a l g u n o s g é n e r o s c o m o t e m p l a d o p a r a la s í n t e s i s d e d o s p r o t e í n a s
este fenómeno
virales, N y N S s . Estas proteínas se sintetizan a partir del m R N A
1
D. D o n ) R a m o s , P . , C r u z , N. , E m h a r t , V . , G a n t z ,
Herrera,
E n la n a t u r a l e z a , á r b o l e s
Los virus miembros
GRAVITRÓPICA
D. D O N ( M o l e c u l a r a n a l y s i s of g r a v i t r o p i c r e s p o n s e
involucrados
d e la f a m i l i a d e l a s c o n i f e r a s
en respuesta
y los
al e s t í m u l o
mecanismos
aún se desconocen.
desarrollan
gravitrópico.
moleculares
Los
subyacentes
a
E n este t r a b a j o se e s t u d i ó
la
S
e x p r e s i ó n d e g e n e s e n r e s p u e s t a al e s t i m u l o g r a v i t r ó p i c o i n d u c i d o p o r
u t i l i z a n d o d o s c o d o n e s d e i n i c i o d e la t r a d u c c i ó n d i f e r e n t e s el A U G N y
i n c l i n a c i ó n d e 4 5 ° e n p l á n t u l a s d e p i n o r a d i a t a . C o m o la r e s p u e s t a d e
e l A U G N S s . El m e c a n i s m o m o l e c u l a r r e s p o n s a b l e d e la s e l e c c i ó n d e l
reorientación
p r i m e r ( A U G N ) ó s e g u n d o ( A U G N S s ) c o d ó n de inicio
realizó una e x t r a c c i ó n R N A total a los t i e m p o s d e 2,5h, 10h, 24h y 30
n o ha sido aún
del tallo
se
observa
alrededor de
las
2,5
horas,
d i l u c i d a d o . C o n e l o b j e t i v o d e d e t e r m i n a r la e s t r a t e g i a r e s p o n s a b l e d e
días
la s e l e c c i ó n d e l c o d ó n d e i n i c i o e n el m R N A S d e H a n t a v i r u s A n d e s
curvándose
(ANDV)
m u e s t r a d e la m i t a d s u p e r i o r e i n f e r i o r . A p a r t i r d e e s t o s R N A s
y Bunyamwera
(Bunyavirus)
se
diseñaron
RNA
c o m p u e s t o s d e la r e g i ó n 5' n o t r a d u c i d a ( 5 ' U T R ) d e l o s v i r u s
de
la
región
que
codifica
para
el
reportero
de
la
sintéticos
seguido
luciferasa
de
de
inducido
generaron
y,
el
estímulo
mediante
bibliotecas
un
de
corte
supresivas
la
zona
del
longitudinal
substractivas
tallo
que
de éste,
(SSH)
conteniendo u n total de 2 6 5 3 clones c o n un t a m a ñ o de
se
responde
se
de
extrajo
se
ESTs,
fragmentos
l u c i é r n a g a ( F L u c ) . L o s R N A s s e e v a l u a r o n e n e n s a y o s in v i t r o y e x
e n t r e 3 0 0 y 1 5 0 0 p b , y u n a r e d u n d a n c i a c e r c a n a al 4 0 % . A n á l i s i s d e
vivo.
PCR
Los
resultados
sugieren
que
el
mecanismo
de
inicio
de
la
traducción a partir del A U G N del m R N A S de B u n y a m w e r a y A N D V
corresponde
a un mecanismo
q u e la s e l e c c i ó n d e l A U G N S s
scanning.
USACH
Financiamiento:
cap-dependiente
canónico,
mientras
se ajusta a un m e c a n i s m o de
JEAI-IRD.
JVO
es
Becario
leaky
Mecesup.
en t i e m p o real de a l g u n o s g e n e s de t r a n s d u c c i ó n de
hormonales y e n z i m a s involucradas en rutas metabólicas
ser
efectivamente
expresados
diferencial mente.
Este
señales
mostraron
trabajo
c o n t r i b u y e al e n t e n d i m i e n t o d e la r e s p u e s t a g r a v i t r ó p i c a y f o r m a c i ó n
de
madera
de
compresión
en
p.
radiata.
Financiamiento:
Fondecyt 1071026, Ecos-Conicyt C 0 7 B 0 1 . Conicyt Doctoral PR y N C .
XXXI Reunión
37.
CARACTERIZACIÓN
HOMÓLOGO
MOLECULAR DE
AL
GRUPO
PREFERENCIALMENTE
Pinus
radiata.
PrTRAUCO,
UN
TRITHORAX
DURANTE
LA
GEN
EXPRESADO
EMBRIOGENESIS
( M o l e c u l a r C h a r a c t e r i z a t i o n o f PrTRAUCO,
EN
a trithorax
g r o u p h o m o l o g u e g e n e e x p r e s s e d p r e f e r e n t l y d u r i n g e m b r i o g e n e s i s in
Pinus
1
radiata)
1
1
Matte, J . P . ' , A q u e a , F. ,
1
2
C a ñ ó n . P. ,
1
Gutiémez,
2
F. ,
1
R i c o , S . , L a m p r e c h t , M . . S á n c h e z , C , A r c e - J o h n s o n , P. . Pontificia
Universidad
Católica
1
de
Chile ,
Instituto
de
Investigaciones
2
A g r o b i o l ó g i c a s de G a l i c i a .
Anual
38. E X P R E S I Ó N D I F E R E N C I A L D E G E N E S A C C O X I D A S A Y A C C
S I N T A S A E N Pinus
DE
Radiata
VERTICALIDAD
synthase
in Pinus
D. D O N E N R E S P U E S T A
(Differential
radiata
1
1
2
, V. , Gantz, C. , Herrera,
1
y
1
R. .
2
L a s s i n g u l a r i d a d e s y p r o p i e d a d e s d e la m a d e r a d e c o m p r e s i ó n ( C W )
difieren
a las
presentes
en
madera
opuesta
(OVV) c o m o
madera
normal, con un complejo p r o c e s o de f o r m a c i ó n que involucran varias
mecanismo
de
sugieren
involucramiento
etapas
tempranas
de
la
embriogenesis
p l a n t a s , u s a n d o c o m o m o d e l o la e m b r i o g e n e s i s
Mediante
oxidase
Lab. Fisig. V e g . & G e n M o l , I B V B , U T a l c a , Forestal Mininco .
etapas
radiata.
A PERDIDA
ACC
2
V a l e n z u e l a , C . , R a m o s , P. , Emhart
expresan
las
of
D . D O N i n r e s p o n s e t o l o s t of v e r t i c a l i t y )
E n n u e s t r o l a b o r a t o r i o e s t a m o s i n t e r e s a d o s en e s t u d i a r g e n e s q u e se
durante
expression
la t é c n i c a
de c D N A - A F L P
s o m á t i c a en
identificamos
en
Pinus
un
gen
que
estarían
el
moduladas
respuesta
e m b a r g o , los p a t r o n e s
es
por
un
control
desconocido
de
fitohormonas
de expresión
hormonal.
pero
El
investigaciones
como
Etileno.
de g e n e s r e l a c i o n a d o s c o n
Sin
la
h o m ó l o g o al g r u p o T r i t h o r a x , d e s c r i t o p r e v i a m e n t e s ó l o e n a n i m a l e s y
b i o s í n t e s i s d e E t i l e n o n o h a n s i d o d e m o s t r a d o s . C o n el fin d e v a l i d a r
l e v a d u r a s , q u e s e e x p r e s a d u r a n t e el d e s a r r o l l o e m b r i o n a r i o . E s t e t i p o
la p r e s e n c i a d e e s t o s g e n e s , p l á n t u l a s d e Pinus
de genes
s o m e t i d a s a inclinación d e 4 5 Á ° p o r 2,5h y 10h (tiempos t e m p r a n o s ) ,
está involucrado
e n el re m o d e l a m i e n t o
de c r o m a t i n a .
A
radiata
D.Don, fueron
p a r t i r del f r a g m e n t o i d e n t i f i c a d o e n el a n á l i s i s d e c D N A - A F L P , h e m o s
24h y 1 mes (tiempos tardíos), donde
clonado
de
expresión
4 2 6 a m i n o á c i d o s que p r e s e n t a en su e x t r e m o a m i n o una señal
de
1-aminociclopropano-1-carboxilato
oxidasa y sintasa (ACC oxidasa y
l o c a l i z a c i ó n n u c l e a r y e n el e x t r e m o c a r b o x i l o u n d o m i n i o S P R Y
de
ACC
real.
el
gen
completo
y
codifica
para
una
proteína
de
sintasa)
por
se e v a l u a r o n los niveles
de
isoformas
de
distintas
PCR
tiempo
Observándose
un
nivel
de
i n t e r a c c i ó n e n t r e p r o t e í n a s . U t i l i z a n d o la t é c n i c a d e Q D - P C R
sabemos
expresión
que
genoma.
T C 7 5 0 5 9 ( A C 0 3 ) y P t a A C S I ( A C S 1 ) . A C 0 3 se r e p r i m i ó t a n t o en hoja
el
gen
PrTRAUCO
Mediante real-time
alta
expresión
vegetativos
tiene
PCR
más
de
determinamos
en tejido
una
copia
en
el
que este gen presenta
ernbriogénico
en comparación
con
d e P i n u s r a d i a t a . El p a t r ó n d e e x p r e s i ó n e n
una
tejidos
embriones
como
diferencial
raíz,
en
mientras
tallo,
las
otras
ACC
oxidasa
y
sintasa
por
C07-B01 y Fondecyt 1071026.
in
situ.
Esto
demostró
e n el p o l o r a d i c u l a r ,
que
en
el
gen
se
el m e r i s t e m a
m e r i s t e m a l a t e r a l del e m b r i ó n . F i n a l m e n t e
expresa
apical y
se quiere d e m o s t r a r
y
isoformas
presentan
respuesta
hibridación
OW
CW
de
para
ACC
los
genes
oxidasa
no
p r e s e n t a r o n e x p r e s i ó n p a r a t a l l o i n f e r i o r ni s u p e r i o r . D e m o s t r a n d o q u e
z ¡ g ó t i c o s m a d u r o s y e n r a í c e s al i n i c i o d e s u d e s a m o l l o f u e e v a l u a d o
preferentemente
entre
a
la
incitación.
un
patrón
Financiamiento:
de
expresión
Proyecto
en
Ecos-Conicyt
el
que
e s t e g e n p e r t e n e c e al g r u p o T r i t h o r a x r e a l i z a n d o u n a n á l i s i s f u n c i o n a l
c o m p l e m e n t a n d o levaduras mutantes. En conclusión, en este trabajo
se
presenta
Trithorax
la
de
primera
coniferas.
caracterización
Núcleo
molecular
Milenium
de
Genómica
un
gen
tipo
Funcional
de
Plantas (P06-009-F).
3 9 . L A E X P R E S I O N D E Vitis
vinifera
CONSTANS-LÍKE1
U N H O M Ó L O G O D E L G E N CONSTANS,
FOTOPERIODO
Y
EL
DESARROLLO
d e v e l o p m e n t a l r e g u l a t i o n of a C O N S T A N S
1
V.vinifera
1
E. .
Instituto
de
Biología
(Photoperiod
and
LIKE gene isolated
1
cv. C a r m e n e r e ) A l m a d a , R . D . ,
Villanueva,
(VvCOLI),
E S REGULADA POR EL
Ruiz-Lara, S. ,
Vegetal
y
from
González
Biotecnología,
1
Universidad de Talca, 2 Norte N° 6 8 5 , T a l c a . .
La
luz
influencia
el d e s a r r o l l o
desamollado
exclusivos
regúlatenos
en respuesta
Las
proteínas
y
de
las
CONSTANS
y
EXPRESION
sistemas
y estas
fotosensores
del m e d i o a m b i e n t e
CONSTANS-LIKE
han
DE
CRECIMIENTO
(Expression
Chilean
of
Y
GENES
DE
1
Herrera, R. ,
EXPANSINAS
MADURACION
expansin
genes
DE
during
C.R. ,
1
Moya-León, M.A. .
DURANTE
FRUTILLA
growth
1
strawberry) Figueroa,
Dotto,
Laboratono
and
2
M.C ,
EL
CHILENA
ripening
of
Civello,
P.M. ,
de Fisiología
the
2
Vegetal,
Instituto de Biología V e g e t a l y B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d de T a l c a ,
Casilla
angiospermas
sofisticados
a cambios
40.
747,
1
Talca,
Chile. ,
Instituto
Tecnológico
de
Chascomús,
2
B7130IWA, Chascomús, Argentina. .
y
Las e x p a n s i n a s , proteínas sin actividad e n z i m á t i c a conocida, han sido
luminoso.
e s t u d i a d a s p o r s u r e l a c i ó n c o n el p r o c e s o d e a b l a n d a m i e n t o d e f r u t o s
(COL)
son
p o r s u p o s i b l e p a r t i c i p a c i ó n e n el d e s e n s a m b l a j e d e la p a r e d c e l u l a r .
c o n s t i t u y e n t e s d e e s t a s v í a s . E n V i t i s s p p . , el f o t o p e r i o d o a f e c t a el
Con
crecimiento
a b l a n d a m i e n t o d e frutilla c h i l e n a (Fragaria
chifoensis),
s e a n a l i z ó el
nivel
expansinas
descritas
FaEXP4,
FaEXPó,
embargo,
estacional,
las
la
bases
dormíancia
moleculares
y
fertilidad
de
estas
de
yemas,
respuestas
sin
son
el
fin
de
de
evaluar
expresión
de
la
participación
cinco
mRNAs
de
de
las
expansinas
en
el
en
d e s c o n o c i d a s . E n e s t e t r a b a j o , a n a l i z a m o s el perfil t r a n s c r i p c i o n a l d e
Fragaria
x
un
FaEXP6)
d u r a n t e el d e s a m o l l o d e l f r u t o , y s e c o m p a r ó c o n e l d e F. x
gen
COL
a
través
del
desarrollo
de
V.
vinifera
cubriendo
ananassa
(FaEXPI,
FaEXP2,
i m p o r t a n t e s e v e n t o s del d e s a m o l l o c o m o la i n d u c c i ó n f l o r a l , d o r m a n c i a
ananassa
y el d e s a r r o l l o d e f l o r y f r u t o s , y t a m b i é n , b a j o d i f e r e n t e s f o t o p e r i o d o s .
i n c r e m e n t o en los niveles de e x p r e s i ó n de m R N A y pérdida de
Nuestros resultados sugieren que V v C O L I
d e l f r u t o p a r a FaEXPI,
t e n d r í a u n rol d u r a n t e la
i n d u c c i ó n y desarrollo floral. A d e m á s , e n c o n d i c i o n e s de día largo y
corto,
los t r a n s c r i p t o s
de V v C O L I
ciclaron
marcadamente
con
un
p e r i o d o d e 24 h y c o n u n m á x i m o d e e x p r e s i ó n al i n i c i o d e l p e r i o d o
luminoso.
En
condiciones
de
luz
constante
se
observó
un
c o m p o r t a m i e n t o a r r í t m i c o e n la e x p r e s i ó n d e V v C O L I N u e s t r o t r a b a j o
constituye
fotoperiodo
el p r i m e r i n t e n t o
en
vides.
de
disectar molecularrnente
Agradecimientos:
Proyecto Consorcio Biofrutales.
Universidad
la v í a
de
de
Talca;
cultivar
Chandler.
FaEXP2
el m R N A d e FaEXPd
Se
encontró
y FaEXPd
correlación
ambas
y FaEXPd,
especies
en a m b a s especies. Para
y sin
el a b l a n d a m i e n t o
CONICYT/SECyT
E n el c a s o de
se o b s e r v ó u n p a t r ó n d e e x p r e s i ó n diferencial e n
correlación
P o d e m o s c o n c l u i r q u e FaEXPó,
en
el
firmeza
s e o b s e r v ó u n n i v e l d e e x p r e s i ó n m a y o r e n la
e s p e c i e d e a b l a n d a m i e n t o m á s i n t e n s o (F. chihensis).
FaEXP4
entre
y
de
frutos
(Programa
con
FaEXPI
de
de
F.
el a b l a n d a m i e n t o
y FaEXP2
chifoensis.
Cooperación
del fruto.
están implicados
Agradecimientos:
Internacional),
Proyecto P B C T Anilto de Ciencia y T e c n o l o g í a (ACT-41).
Sociedad
41.
GENES
vinifera
PARA
Y
SU
TRANSPORTADORES
ASOCIACION
PARTENOCARPIA
transporter
partenocarpic
from
F. ,
Ruiz-Lara,
EL
CULTIVAR
vinifera
in
S.\
DE
EL
Vitis
phenomenon
1
Gainza,
EN
genes
CON
BORO
DE
Vitis
FENÓMENOS
CARM ENERE.
and
their
Carmenere
E. .
DE
(Boron
association
cultivar.)
1
González,
de Bioquímica y Biología
with
Pérez,
Instituto
de
R.\
Biología
ANÁLISIS
p r e s e n t a a n o m a l í a s e n el
d e s a r r o l l o r e p r o d u c t i v o (frutos p a r t e n o c á r p i c o s ) , q u e se
chiioensis
expressed
nativo
traducen en
de
a
DE
deficiencia
de
boro,
cDNAS
Fragaria
involved
in t h e
Fragaria
flavonoid
chiioensis
synthesis
pathway
1
1
1
Fisiología
Vegetal
y
Genética
Molecular,
in
1
L. ( D u c h . ) ) S a l v a t i e r r a ,
A. ,
Laboratorio
Instituto
de
Biología
1
Vegetal y Biotecnología, Universidad de T a l c a . .
Fragaria
asociado
cDNAs
strawberny,
El p r o c e s o
sido
EXPRESIÓN
L . ( D U C H . ) ( A n a l y s i s of e x p r e s s i o n p r o f i l e s of d i f f e r e n t i a l l y
racimo.
ha
DE
D E SÍNTESIS D E F L A V O N O I D E S E N F R U T I L L A NATIVA,
b a y a s s e m i l l a d a s y no s e m i l l a d a s de t a m a ñ o diferencial en un m i s m o
evento
PERFILES
1
Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca. .
Tal
DE
D I F E R E N C I A L M E N T E E X P R E S A D O S I N V O L U C R A D O S E N L A VÍA
P l m e n t e l , P. , M o y a - L e ó n , A . , C a l i g a n , P. , H e r r e r a , R. .
1
Vitis vinifera cv C a r m e n e r e , c o m ú n m e n t e
42.
Molecular
de desamollo
chiioensis,
y m a d u r a c i ó n d e f r u t o s d e frutilla n a t i v a ,
está a s o c i a d o a u n conjunto de c a m b i o s , entre
m i c r o n u t n e n t e e s e n c i a l p a r a e l d e s a r r o l l o d e l t u b o p o l í n i c o , el c u a l e s
e l l o s , a b l a n d a m i e n t o , a r o m a , s a b o r y c o l o r . E n el g é n e r o Fragaria,
captado
c o l o r del f r u t o s e o r i g i n a p o r la a c u m u l a c i ó n d e a n t o c i a n i n a s d u r a n t e
y
distribuido
Arabidopsis thaliana
el
cual
capta
y
mediante
transportadores
específicos.
se ha identificado a los t r a n s p o r t a d o r e s
distribuye
boro
en
el
tejido
radicular
y
En
NIP5;1,
la m a d u r a c i ó n . L a g e n e r a c i ó n d e e s t o s
BOR1,
acción coordinada
compuestos
de u n a serie de e n z i m a s
el
r e s p o n d e a la
codificadas por
genes
r e s p o n s a b l e d e s u m o v i l i z a c i ó n h a c i a el t e j i d o x i l e m á t i c o y p o s t e n o r
e s t r u c t u r a l e s d e la v í a d e b i o s í n t e s i s d e f l a v o n o i d e s . C o n m o t i v o d e
transporte
ampliar nuestro c o n o c i m i e n t o acerca del proceso de m a d u r a c i ó n de
al t e j i d o a é r e o .
caracterización
Esta
estructural
investigación
esta
enfocada
y funcional de ortólogos
en
la
de A t B O R I
y
los
frutos
de
Fragaria
chiioensis,
se
generaron
diversas
librerías
A t N I P 5 ; 1 e n V i t i s v i n i f e r a cv. C a r m e n e r e . G e n e s h o m ó l o g o s h a n s i d o
s u b s t r a c t i v a s s u p res i v a s ( l i b r e r í a s S S H ) c o n t r a s t a n d o c u a t r o e s t a d i o s
i d e n t i f i c a d o s e n V. v i n i f e r a c v . C a r m e n e r e ( V v B O R I y V v N I P 5 ; 1 ) , l o s
de
q u e s o n e x p r e s a d o s e n t e j i d o s a é r e o s d e la p l a n t a i n c l u y e n d o f l o r e s y
c D N A s diferencial m e n t e expresados se encontraron dos relacionados
frutos.
con
El
análisis
semilladas
el g e n
de
sus
perfiles
transcripcionales
en
bayas
y no s e m i l l a d a s en V. vinifera cv. C a r m e n e r e , indica que
VvBORI
se e n c u e n t r a
reprimido
en
bayas
no
semilladas,
desarrollo
la
desde
producción
verde
de
pequeño
hasta
compuestos
maduro.
flavonoides:
Dentro de
Chalcona
los
sintasa
( C H S ) y A n t o c i a n i d i n a s i n t a s a ( A N S ) . L o s análisis de e x p r e s i ó n
de
estos g e n e s r e v e l a r o n u n a correlación entre sus niveles de transcritos
i n d i c a n d o que a l t e r a c i o n e s del t r a n s p o r t e h a c i a tejidos sink, p u e d e n
y la a c u m u l a c i ó n d e a n t o c i a n i n a s . A g r a d e c i m i e n t o s a P r o y e c t o P B C T
s e r la c a u s a d e la d e f i c i e n c i a d e b o r o e n t e j i d o s r e p r o d u c t i v o s a la
Anillo A C T - 4 1
g e n e r a c i ó n del e v e n t o p a r t e n o c a r p i c o .
P. P i m e n t e l .
43.
UNA
SUBUNIDAD
EXPRESA
HIERRO-AZUFRE
DURANTE LA MADURACION
REGULADO
POR
CONTROLAN
THALIANA.
FACTORES
LA
DEL COMPLEJO
DE
DE
TRANSCRIPCION
EMBRIOGENESIS
EN
factors
ES
QUE
ARABIDOPSIS
( A c o m p l e x II i r o n - s u l f u r s u b u n i t is e x p r e s s e d d u r i n g s e e d
m a d u r a t i o n a n d is r e g u l a t e d b y e m b r y o g e n e s i s - r e l a t e d
i n Arabidopsis
1
Gómez,
II S E
LA SEMILLA Y
I. ,
thaiiana)
1
Jordana, X. .
Microbiología,
Facultad
Vásquez,
Departamento
de
Ciencias
M.\
de
transcription
Roschzttardtz,
Genética
Biológicas,
H.\
Molecular
P.
y
Universidad
1
C a t ó l i c a de Chile, S a n t i a g o , C h i l e . .
por apoyo
44. F A C T O R E S
financiero
y Conicyt por beca doctoral
DE TRANSCRIPCION BZIP INVOLUCRADOS
RESPUESTA A ESTRES
S A L I N O E N T O M A T E (bZIP
a
EN
transcription
1
f a c t o r s i n v o l v e d in r e s p o n s e t o s a l i n i t y s t r e s s in t o m a t o ) O r e l l a n a , S . ,
1
Yañez,
1
JA. .
1
M. ,
1
Bastías, A. ,
1
Espinoza, A. ,
Instituto de Biología
Ruiz-Lara, S. ,
Casaretto,
Vegetal y Biotecnología, Universidad
de
1
Talca .
La
regulación
plantas
para
Algunos
de
génica es
una
de
las r e s p u e s t a s
activar m e c a n i s m o s
los g e n e s
de
tolerancia
utilizadas
por
a estrés
q u e se activan por estrés
son
las
abiótico.
factores
de
t r a n s c r i p c i ó n q u e p a r t i c i p a n en p u n t o s claves de vías de t r a n s d u c c i ó n
E l c o m p l e j o II m i t o c o n d r i a l o S u c c i n a t o D e s h i d r o g e n a s e c a t a l i z a
la
de
o x i d a c i ó n d e s u c c i n a t o a f u m a r a t o y la r e d u c c i ó n d e u b i q u i n o n a
a
r e s p u e s t a s d e los cultivos a estrés abiótico c o m o sequía y salinidad,
u b i q u i n o l . T r e s g e n e s , SDH2-1,
SDH2-2
y SDH2-3,
c o d i f i c a n p a r a la
s u b u n i d a d II o h i e r r o - a z u f r e d e e s t e c o m p l e j o e n Arabidopsis
Previamente determinamos que
y SDH2-2
se han
Con
el
identificado
[Solanum
fin
dos
de
tener
factores
iycopersicum),
mayor
conocimiento
de transcripción
denominados
SIAREB1
bZIP
sobre
de
las
tomate
y SIAREB2,
que
se expresan
en
t o d o s l o s t e j i d o s d e la p l a n t a a d u l t a , m i e n t r a s q u e el t r a n s c r i t o
de
d e s c n t o s en A r a b i d o p s i s y amoz ( A B I 5 / A R E B / A B F ) . S u expresión es
solo es d e t e c t a d o e n semilla y s u e x p r e s i ó n e s t á r e g u l a d a por
i n d u c i d a e n r e s p u e s t a a d e s hidra ta c i ó n y estrés salino. La e x p r e s i ó n
SDH2-3
SDH2-1
thaiiana.
señales.
c o m p a r t e n alta h o m o l o g í a c o n u n g r u p o de factores de transcripción
factores de transcripción que p r e s e n t a n u n dominio B 3 , c o m o A B I 3 y
relativa
F U S C A 3 . La e m b r i o g e n e s i s en A r a b i d o p s i s se p u e d e dividir en tres
e n c o n t r á n d o s e m á s alta e n hojas, flores y raíces que en semillas y
fases
denominadas
morfogénesis,
maduración
y
desecación,
con
de
ambos
genes
fue
evaluada
mediante
qRT-PCR,
frutos m a d u r o s . Los niveles de transcritos de S I A R E B 1 y
SIAREB2
e x p r e s i ó n e s p e c í f i c a d e g e n e s e n c a d a u n a d e e l l a s . C o n el f i n d e
fueron
de
edad
d e t e r m i n a r la e t a p a d e l d e s a m o l l o d e la s e m i l l a e n q u e c o m i e n z a a
sometidas
y 30 días a estrés salino. A u n q u e
dicho
e x p r e s a r s e SDH2-3,
tratamiento
desamollo
de
transcrito
de
maduración,
semillas fueron extraídas en distintas etapas del
la s i l i c u a
SDH2-3
aumenta
y mediante
comienza
durante
la
a
RT-PCR
se determinó
acumularse
desecación
y
al
es
inicios
que
de
abundante
el
la
en
evaluados
en
entre 6 h o r a s
afectó
la e x p r e s i ó n
S I A R E B 1 fue m a y o r e n tejido
iniciado
el
estrés.
Para
niveles
de
d o m i n i o B 3 , e s i m p o r t a n t e p a r a la e x p r e s i ó n d e SDH2-3
fueron
seleccionadas
f a s e m a d u r a c i ó n , p e r o n o e n la d e s e c a c i ó n . E n c o n t r a s t e , A B I 3
y
F U S C A 3 s í s o n n e c e s a r i o s p a r a la e x p r e s i ó n d e SDH2-3
d u r a n t e la
desecación. Financiado por Fondecyt
P06-009-F
1060485 y Milenio
(Núcleo Milenio en G e n ó m i c a Funcional de Plantas).
de
tomate
de
2
la i n d u c c i ó n
de
de
la
genes,
meses
foliar y r a d i c u l a r y a las 6 h o r a s
examinar
ambos
de
función
de
SIAREB1
en
la
tolerancia a salinidad, se g e n e r a r o n plantas transgénicas c o n distintos
semillas secas. Por otra parte, L E C 2 , otro factor de transcripción con
d u r a n t e la
plantas
transcritos
de
para
SIAREB1.
comparar
Líneas
su
sentido
tolerancia
y
antisentido
cuantificando
parámetros
fisiológicos
fotosintética.
F i n a n c i a d o por F o n d e c y t 1060843, IFS C-4075.
c o m o c o n t e n i d o relativo de a g u a y eficiencia
XXXI Reunión
Anual
45. P A P E L D E L A G L U T A R E D O X I N A G R X S 1 3 E N L A R E S P U E S T A
46.
DE D E F E N S A A ESTRÉS OXIDATIVO
MADURACION
giutaredoxin
hrat
S 1 3 in t h e d e f e n c e
response
1
dopsis) Laporte, D. , Salinas
1
Holuigue,
L. .
Facultad
de
E N A R A B I D O P S I S (Role of
to oxidative
stress
1
depto
Genética
DE
DE
LA
PARED
CELULAR
DOS ESPECIES
DE
DURANTE
FRUTILLA
LA
(Cell
wall
in
changes
1
M o y a - L e o n , M.A. , F i g u e r o a , C . . L a b o r a t o n o d e F i s i o l o g í a V e g e t a l y
, P . \ Blanco, F. , Herrera, A ,
Biología,
CAMBIOS
Molecular,
1
during
ripening
of
1
Genética
two
strawberry
species)
1
Molecular,
Instituto
de Biología
Vegetal
Pontificia U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e .
Universidad de Talca. Casilla 747, T a l c a , Chile. .
El á c i d o salicílico ( S A ) e s u n a d e las s e ñ a l e s p r o d u c i d a s e n r e s p u e s t a
La
i e s t r é s e n A r a b i d o p s i s , y j u e g a u n p a p e l c e n t r a l e n la a c t i v a c i ó n d e
ablandamiento
;enes
{Fragaria
y
Biotecnología,
1
de defensa. U n g e n q u e s e activa
tempranamente
por SA
frutilla c h i l e n a
[Fragaria
chifoensis)
exhibe
al inicio d e la m a d u r a c i ó n
x ananassa
una mayor tasa de
q u e la frutilla
comercial
c v . C h a n d l e r ) . El objetivo d e este estudio fue
: : n r e s p o n d e a A t G r x S 1 3 . q u e c o d i f i c a p a r a la g l u t a r e d o x i n a ( G R X )
c o m p a r a r c a m b i o s d e la p a r e d c e l u l a r d u r a n t e el desarrollo del fruto, y
"^onotiólica S 1 3 . Las G R X s o n oxidoreductasas que reducen enlaces
correlacionarlos
con los c a m b i o s
de firmeza.
Cuatro
estadios
de
: J furos y cisteínas S-glutationizadas de proteínas. S e ha reportado
desarrollo fueron analizados: fruto verde pequeño (VP), verde grande
q u e G R X s s o n c a p a c e s d e m o d u l a r e l e s t a d o r e d o x d e la c é l u l a a
( V G ) , transición ( T ) y m a d u r o ( M ) . El c o n t e n i d o total de pared celular
través de la directa r e d u c c i ó n del D H A y r e g u l a n d o la actividad d e
fue aislado d e s d e frutos d e c a d a e s t a d i o d e desarrollo y s o m e t i d o a
i'i-teínas
extracción
antioxidantes
como
dehidroascorbato
reductasa
y
química
zeroxiredoxina. Resultados de nuestro grupo indican que A t G r x S 1 3
polimenzación
es
F. chiioensis
también
t r a n s c r i p c i ó n al m e n t e
inducida
por inoculación
c o n la
: sotena P s e u d o m o n a s syringae ( A v r R p m 1 ) . P a r a d e t e r m i n a r el papel
-
esta p r o t e í n a e n la r e s p u e s t a
a estrés, h e m o s
obtenido
líneas
secuencial.
de polímeros.
Se
analizó
también
el
grado
p a r e c i e r a e s t a r r e l a c i o n a d a c o n la rápida
solubilización
d e p e c t i n a s c o v a l e n t e m e n t e u n i d a s , m i e n t r a s q u e e n F. xananassa
ablandamiento
coincide
de
La m a y o r tasa de ablandamiento de
con
una
despolimerización
el
de
éstas.
r a n s g é n i c a s homocigotas que sobre expresan y silencian AtGrxS13 y
A d i c i o n a l m e n t e , F chibensis
- e r n o s c o m e n z a d o a evaluar en estas líneas, los niveles de R O S y
neutros e n el e s t a d i o T , p r o b a b l e m e n t e d e b i d o a la s o l u b i l i z a c i ó n d e
2-SH e n c o n d i c i o n e s b á s a l e s y b a j o e s t r é s . R e s u l t a d o s
Eneren
que AtGrxS13
podría estar implicada
preliminares
e n la r e s p u e s t a de
E.a a e s t r é s .
fragmentos
pécticos
metabolismo
similar.
exhibe un mayor contenido de azúcares
con
de celulosa
ramificación
de
y hemicelulosa
E n c o n c l u s i ó n , el m o d o
azúcares
neutros.
El
en ambas
especies
es
del desensamblaje
d e pectina en
a m b a s e s p e c i e s d e frutilla podría e x p l i c a r l a s diferencias e n la t a s a d e
ablandamiento
de estos
frutos. A g r a d e c i m i e n t o s
a Proyecto
PBCT
Anillo de Ciencia y Tecnología (ACT-41).
47.
EFECTO
DE
-ERRO-AZUFRE
EN
LA
ARABIDOPSIS
:~:ein
INACTIVACIÓN
DE
LA
S D H 2 ^ E N LA GERMINACIÓN
THALIANA
inactivation
(Effects
on seed
1
PROTEÍNA
DE SEMILLAS
of t h e S D H 2 - 3
germination
iron-sulfur
i n Arabidopsis
thaiiana
)
1
Coryalán, C . , Jordana, X . Departamento de Genética Molecular y
xobiología,
Facultad
de
Ciencias
Biológicas,
P.Universidad
1
Zatólica de Chile .
48.
INCREMENTO
MADURACIÓN
L. Duch.)
Fuentes,
L.\
Fisiología
transcritos
revelan
adulto, m i e n t a s
específico
en
Arabidopsis
q u e SDH2-1
q u e SDH2-3
d e SDH2-3
thaiiana.
y SDH2-2
Análisis
se expresan
e n tejido
lo h a c e sólo e n semilla. Este
sugiere
que esta
i so f o r m a
de
patrón
del c o m p l e j o
II
: Ddría t e n e r u n rol d u r a n t e el d e s a r r o l l o d e l a s e m i l l a y l a g e r m i n a c i ó n ,
l e : do a e s t o , e v a l u a m o s
arante
aquellas
etapas
n s e r a o n a l e s sdh2-3
Ue g e r m i n a c i ó n
utilizando
dos
y u n a m u t a n t e d o b l e sdh2-1/sdh2-3.
de sal y luego
E n todos
refinación
d e la i n a c t i v a c i ó n
fue evaluada en medio
: incensaciones
hidrógeno.
los efectos
del desamollo
los
casos,
de las m u t a n t e s
de tratamientos
observamos
respecto
a
(Fragaria
LA
chiioensis
1
G o n z á l e z , M. , G a e t e
y
,
1
R. ,
fruit.
(Fragaria
1
1
E., C , V a l d e n e g r o , M . ,
1
Moya-León,
M.A. .
Laboratorio
de
Molecular,
IBVB,
Universidad
de
Genética
a c e p t a c i ó n final d e l o s c o n s u m i d o r e s .
D e ellos, los esteres
cobran
g r a n r e l e v a n c i a y a q u e t i e n e n el m a y o r i m p a c t o s e n s o r i a l , y e n frutilla
x
de
CHILENA.
ALCOHOL
DURANTE
i m p o r t a n c i a p a r a d e t e r m i n a r la c a l i d a d d e u n a f r u t a e i n f l u e n c i a n la
florales
en
UNA
Los c o m p u e s t o s volátiles se c o n s i d e r a n entre los factores de m a y o r
( Fragaria
retraso
las semillas
Vegetal
dulces y
con peróxido
un
DE
ACTIVIDAD
1
del gen
La cinética
SU
FRUTILLA
Herrera
mutantes
basal, m e d i o c o n distintas
EXPRESION
((Increment of t h e expression of a n Alcohol Acyltransferase
L Duch.))
Talca. .
nucleares
DE
DE
chibensis
: ir
genes
LA
Y
a n d its a c t i v i t y d u r i n g r i p e n i n g o f t h e C h i l e a n s t r a w b e r r y
L a p r o t e í n a h i e r r o - a z u f r e d e l c o m p l e j o II m i t o c o n d r i a l e s t á c o d i f i c a d a
tres
DE
ACILTRANFERASA
compuestos
ananassa),
son los responsables
de entregar
notas
características d e s u aroma. La formación de estos
está
catalizada
p o r la e n z i m a
alcohol
aciltransferasa
(AAT) quien mediante u n a transacilación de un acil-CoA a un alcohol,
g e n e r a u n a v a r i a d a m e z c l a d e e s t e r e s . L o s e s t u d i o s r e a l i z a d o s a la
la
fecha,
silvestres,
Fragaria
se h a n llevado
chiioensis,
a cabo
en
Fragaria
x ananassa,
pero es
la m a d r e d e esta v a r i e d a d comercial y especie
- r e m a s , el r e t r a s o e s m a y o r e n l a s d o b l e s m u t a n t e s . L u e g o d e la
e n d é m i c a p a r a n u e s t r o p a í s , la q u e p r e s e n t a u n a e x c e p c i o n a l calidad
g e r m i n a c i ó n , las plántulas m u t a n t e s s e d e s a m o l l a n d e m a n e r a n o r m a l ,
o r g a n o l é p t i c a q u e s e r e f l e j a e n la p r e s e n c i a d e u n b u e n s a b o r y g r a n
5-rque
a
desamollo
;r-es,
5DH2-1
y
los 8 días
normal
rcmplejo
puede
resultados
aumentan
::servamos
son más pequeñas
deberse
preliminares
en
semillas
que embriones
II d u r a n t e
El
a r o m a . E n el p r e s e n t e e s t u d i o s e o b s e r v ó u n i n c r e m e n t o e n c i e r t o s
a la e x p r e s i ó n d e los otros dos
e s t e r e s d e i m p a c t o s e n s o r i a l d u r a n t e la m a d u r a c i ó n d e frutilla c h i l e n a
indican
q u e los transcritos
mutantes
mutantes
distintas
que las silvestres.
etapas
sdh2-3.
poseen
m e n o r actividad del
del desarrollo
Proyecto M i l e n i o P 0 6 - 0 0 9 - F y F o n d e c y t 1 0 6 0 4 8 5 .
de
Finalmente,
de
semillas.
(Fragaria
chiioensis).
E l l o c o i n c i d e c o n u n i n c r e m e n t o e n la a c t i v i d a d
de la e n z i m a A A T y e n la e x p r e s i ó n d e l g e n , a n a l i z a d o m e d i a n t e P C R
en t i e m p o real. L o s resultados i n d i c a n u n a participación relevante de
AAT
e n la g e n e r a c i ó n
maduración
ACT-41.
en
frutilla
de volátiles
chilena.
durante
el transcurso
Financiamiento:
Proyecto
d e la
Anillo
Sociedad
49.
ESTRUCTURA
Y
PERFIL
DE
de Bioquímica y Biología
EXPRESIÓN
DURANTE
C O N D I C I O N E S D E ESTRÉS ABIÓTICO D E UN G E N D E
lycopersicon
pattem
P E R T E N E C I E N T E A L A F A M I L I A E L I P (Structure and
expression
Solanum
Solanum
under
licopersicon
abiotic
stress
belonging
conditions
to the
ELIP
of
a
gen
from
1
UNA
SUBUNIDAD
conserved
arnong
E s p i n o z a , A . , R u i z - L a r a , S . \ G o n z á l e z , E. . Instituto Biología Vegetal
Departamento
1
1
Cuando
la
luz
fotosintética
absorbida
se generan
por
las
radicales
DEL
COMPLEJO
II
CONSERVADA
E N A N G I O S P E R M A S . ( A s e e d s p e c i f i c c o m p l e x II i r o n - s u l f u r s u b u n i t
is
Roschzttardtz.
y Biotecnología. Universidad de T a l c a . .
HIERRO-AZUFRE
MITOCONDRIAL ESPECÍFICA D E S E M I L L A ESTÁ
R. ,
1
family.) Chillan,
50.
Molecular
angiosperrns.)
1
H. .
de
Genética
1
Carrasco,
Molecular
P. ,
Clément.
1
Montenegro-Montero,
A. ,
1
P. .
1
J o r d á n a,
X. .
y Microbiología, Facultad
de
1
C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e .
plantas
libres
excede
capaces
de
la
capacidad
ocasionar
un
En
Arabidopsis
thaiiana
mitocondrial
está
la s u b u n i d a d
codificada
por
hiemo-azufre
tres
genes
del c o m p l e j o
nucleares,
II
SDH2-1,
SDH2-2
y SDH2-3.
e f e c t o es a m p l i f i c a d o p o r c o n d i c i o n e s de e s t r é s a m b i e n t a l c o m o bajas
distinto
estructuralmente,
t e m p e r a t u r a s , s a l i n i d a d o s e q u í a q u e f i n a l m e n t e i n h i b e n la a c t i v i d a d
m a d u r a c i ó n d e la s e m i l l a , s u t r a n s c r i t o e s a b u n d a n t e e n s e m i l l a s e c a
fotosintética.
y
d a ñ o oxidativo a proteínas, lípidos y p i g m e n t o s
múltiples
Bajo
estas
condiciones
mecanismos
acumulación
de
las
reparación
d e las p r o t e í n a s
ELIP
plantas
y
uno
fotosintéticos.
han
desarrollado
protección,
de
Este
siendo
ellos. L o s
genes
la
que
disminuye
E s t e ú l t i m o , p r e s e n t a p r o p i e d a d e s particulares, es
durante
se
la
expresa
específicamente
g e mn i n a c i ó n .
i d e n t i f i c a d o g e n e s o r t ó l o g o s d e SDH2-3
t i p o SDH2-3),
Nuestro
durante
laboratorio
en monocotiledóneas
la
ha
(genes
d e t e r m i n á n d o s e a d e m á s q u e p o s e e n un patrón similar
codifican para tales proteínas s e t r a n s c r i b e n de forma transitoria bajo
al d e A r a b i d o p s i s . C o n el fin d e c a r a c t e r i z a r la d i s t r i b u c i ó n f i l o g e n é t i c a
las
d e l g e n t i p o SDH2-3
condiciones
señaladas
y
su
función
de
protección
estaría
se identificaron secuencias aminoacídicas S D H 2
liberadas
de plantas y s e c o n s t r u y ó un árbol filogenético no e n r a i z a d o . E n éste
d u r a n t e el e s t r é s , p r e v i n i e n d o d e e s t e m o d o la f o r m a c i ó n d e r a d i c a l e s
a g r u p a n c l a r a m e n t e s e p a r a d a s l a s s e c u e n c i a s t i p o S D H 2 - 3 y las t i p o
l i b r e s y / o c o n la l i b e r a c i ó n d e l e x c e s o d e e n e r g í a e n f o r m a d e c a l o r . E n
SDH2-1/2-2.
e l p r e s e n t e t r a b a j o s e i n f o r m a s o b r e el a i s l a m i e n t o y la c a r a c t e r i z a c i ó n
comparten
a nivel m o l e c u l a r d e un c D N A de S o l a n u m l y c o p e r s i c o n que codifica
responsables
relacionada
con
la u n i ó n
de
las
moléculas
de
clorofila
Además,
los
promotores
de
los
distintos
elementos ( A B R E / R Y ) que en Arabidopsis
de
la
expresión
específica
en
SDH2-3
se s a b e
semilla.
p a r a u n a p r o t e í n a d e u n a h é l i c e ( o h p ) p e r t e n e c i e n t e a la f a m i l i a E L I P .
R T - P C R c o n f i r m a m o s la e x p r e s i ó n e n s e m i l l a s del g e n t i p o
E l p a t r ó n d e e x p r e s i ó n d e l o s m R N A s t r a n s c r i t o s a p o y a la f u n c i ó n d e
d e Vitis
protección propuesta para estas proteínas.
específica de semilla e n a n g i o s p e r m a s sugiere un papel
Financiamiento UTALCA.
de
vinifera.
esta
son
Mediante
SDH2-3
La amplia distribución de una proteína hierro-azufre
proteína.
Proyecto
Fondecyt
regular
importante
1060485
y
Núcleo
Milenio en G e n ó m i c a Funcional de Plantas P06-009-F.
EXPRESION GENICA
51.
INTERACCIONES
DIFERENCIALES
HUMANAS D E C/EBPp
CROMATINA
isoforms
S W I / S N F (Differential
with
the
DE
LAS
ISOFORMAS
CON E L COMPLEJO REMODELADOR DE
SWI/SNF
interactions
chromatin
of h u m a n
C/EBPp
remodeling
complex)
52.IDENTIFICACIÓN,
CARACTERIZACIÓN
Y
EVALUACIÓN
FUNCIONAL DE POTENCIALES SITIOS DE SUMOILACION EN E L
FACTOR
TRANSCRIPCIONAL
NURR1
c h a r a c t e r i z a t i o n a n d f u n c t i o n a l e v a l u a t i o n of
(Identification,
SUMOylation
potential
1
Steinberg, X. , Hepp, M. , Gutiérrez, J.L. . Laboratorio de Regulación
sites in t h e t r a n s c r i p t i o n f a c t o r N u n i )
Transcripcional, Departamento
A n d r é s , M.E. . N ú c l e o milenio en estrés y adicción. D e p a r t a m e n t o de
1
1
1
de B i o q u í m i c a
y Biología
Molecular,
Pereira, L. , Amedondo,
C.\
1
1
Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción .
Biología Molecular y Celular, Facultad de Ciencias Biológicas .
C/EBPp
1
de
La s u m o i l a c i ó n es u n a m o d i f i c a c i ó n post-traduccional consistente en
t r a n s c r i p c i ó n C / E B P . E s t á codificado por u n g e n sin intrones y se h a n
la u n i ó n c o v a l e n t e d e l p é p t i d o S U M O ( S m a l l u b i q u i t i n - l i k e m o d i f i e r s )
d e s c r i t o 3 i s o f o r m a s d i s t i n t a s d e la p r o t e í n a : C / E B P p 1 , C / E B P p 2
en usinas
e s una proteína p e r t e n e c i e n t e a la familia de factores
CE/BPp3.
El
relacionado
que
estas
en
la
expresión
de
la
se
del A R N m
de
región
producen
de
N-terminal.
La
generando
proteína
largo
las
proteínas
sustrato.
Esta
modificación
ha
observado
t r a n s c r i p c i o n a l , a s í c o m o e n la v i d a m e d i a y l o c a l i z a c i ó n s u b c e l u l a r d e
se
en
diferencias
de
de
c o b r a d o u n a i m p o r t a n c i a f u n d a m e n t a l e n la r e g u l a c i ó n d e la a c t i v i d a d
2
a partir de traducción
C / E B P p,
blanco
ha
¡soforma
c o n la a p a r i c i ó n d e c á n c e r m a m a r i o . S e h a
isoformas
alternativos
contenido
aumento
y
sitios
en
su
completo,
numerosos
factores
de
transcripción.
Nurrl
es
un
t r a n s c r i p c i ó n e s e n c i a l e n el d e s a r r o l l o de n e u r o n a s
m e sen cefálicas.
Este
factor pertenece
a la
factor
de
dopaminérgicas
familia
de
receptores
C / E B P p 1 , posee sólo 23 residuos m á s que C / E B P p 2 (21 residuos en
n u c l e a r e s , p e r o al s u b t i p o h u é r f a n o , e s d e c i r , c a r e n t e d e l i g a n d o y e s
r a t a ) . S e h a p o s t u l a d o q u e C / E B P ( 3 1 e s la ú n i c a i s o f o r m a c a p a z
constitutivamente
interaccionar
dependiente
con
el
complejo
remodelador
de
SWI/SNF. Dado que este complejo
cromatina
de
ATP-
está implicado
en
regulación d e expresión génica, esta interacción diferencial podría dar
c u e n t a d e l a s a c c i o n e s d i s í m i l e s q u e s o b r e la e x p r e s i ó n d e d i s t i n t o s
g e n e s t i e n e n las i s o f o r m a s
d e t e r m i n a r o n esta
1 y 2. S i n e m b a r g o , l o s
interacción
diferencial
estudios
fueron realizados
con
que
las
i s o f o r m a s de gallina y no se ha estudiado este f e n ó m e n o e n C/EBPf3
de mamífero. Mediante estudios de G S T pull-down, h e m o s observado
que
las
isoformas
1 y
2
de
rata
interaccionan
con
el
complejo
S W I / S N F c o n a f i n i d a d s i m i l a r . H e m o s s u b c l o n a d o y p r o d u c i d o las 3
isoformas de C / E B P p d e h u m a n o c o m o proteínas de fusión c o n G S T ,
c o n e l o b j e t o d e e s t a b l e c e r si e s t e p a t r ó n s e p r e s e n t a d e i g u a l f o r m a
e n el c a s o d e l a s i s o f o r m a s h u m a n a s . F O N D E C Y T
1085092.
que
PIAS7,
activo. E n nuestro laboratorio h e m o s
una S U M O - E 3
l l e v a a p l a n t e a r la h i p ó t e s i s q u e N u r r l
Para
buscar
potenciales
identificado
l i g a s a i n t e r a c t ú a c o n N u r r l , lo q u e
sitios
de
nos
es regulado p o r S U M O i l a c i ó n .
SUMOilación
en
Nurrl
hemos
utilizado dos b a s e s de datos S U M O s p y S U M O p l o t . Utilizando estas
b a s e s i d e n t i f i c a m o s 5 p o s i b l e s sitios e n N u n i . H e m o s realizado las
m u t a c i o n e s s i t i o - d i n g i d a s d e c a d a s i t i o c a m b i a n d o la l i s i n a b l a n c o p o r
arginina. C a d a mutante ha sido transfectado en líneas celulares para
evaluar su e x p r e s i ó n , u b i c a c i ó n s u b c e l u l a r y actividad transcripcional
en un reportero luciferasa c o m a n d a d o por un p r o m o t o r que contiene
e l e m e n t o s d e r e s p u e s t a a N u r r l . N u e s t r o s r e s u l t a d o s i n d i c a n que las
p o t e n c i a l e s u s i n a s b l a n c o d e S U M O i l a c i ó n s o n r e s i d u o s c l a v e s d e la
r e g u l a c i ó n d e la a c t i v i d a d d e N u r r l
puede
regular a
evaluando
la
este
SUMOilación
transcripción/traducción
vitro.
y s u g i e r e n q u e la
SUMOilación
factor transcripcional. Actualmente
de
acoplado
Nurrl
usando
a un sistema
un
estamos
sistema
de S U M O i l a c i ó n
de
in
XXXI Reunión
53.
EL
FACTOR
CERIPORIOPSIS
PROMOTORA
transcription
DE
TRANSCRIPCIÓN
SUBVERMISPORA
DE
GENES
factor
from
SE
TIPO
UNE
LIGNINOLÍTICOS.
Cenporiopsis
ACE1
A
LA
(The
subvermispora
DE
REGIÓN
ACEI-like
binds
to
the
1
1
p r o m o t e r r e g i ó n of l i g n i n o l y t i c g e n e s ) S a n t i b á ñ e z , P . , A l v a r e z , J . M . ,
1
1
1
1
'. a n e s s a , P . , M a n c i l l a , R. , P o l a n c o , R. , V i c u ñ a , R. . D e p . G e n é t i c a
M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a , F a c . d e C i e n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d
CLONAMIENTO
REGULATORIAS
5'UTR
DEL
Y
EN
GEN
EL
EVALUACION
PROMOTOR
RUNX1
(Cloning
DE
DISTAL
and
REGIONES
(P1)
evaluation
Y
REGION
of
regulative
r e g i o n s in t h e d i s t a l ( P 1 ) p r o m o t e r a n d 5 ' U T R o f t h e RUNX1
1
1
1
gene)
1
M a r t í n e z , M. , H i n o j o s a , M . , M o n t e c i n o , M . , G u t i é m e z , S . . A n i l l o d e
Investigación
de
Estudios
Avanzados
en
Señalización
Celular
y
R e g u l a c i ó n G é n i c a , Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de
1
basidiomicete
Ceriporiopsis
subvermispora
tiene
un
g n o l í t i c o c o m p u e s t o p o r las i s o e n z i m a s d e m a n g a n e s o
sistema
peroxidasa
M n P ) y l a c a s a ( L e s ) . M e d i a n t e q R T - P C R , a n a l i z a m o s el e f e c t o
de
: r e y p l a t a e n los n i v e l e s d e t r a n s e n t o d e l o s g e n e s m n p l , m n p 2 y
:s
L o s g e n e s m n p 2 y les s e c o m p o r t a n s i m i l a r m e n t e ,
: js
niveles
de
54.
Concepción .
1
". a t ó l i c a d e C h i l e .
El
Anual
transcrito
con
ambos
metales.
aumentando
Análisis
de
sus
i ' o m o t o r e s p e r m i t i ó i d e n t i f i c a r e l e m e n t o s r e g u l a t o r i o s e n cis t i p o A C E .
R U N X 1 e s u n f a c t o r d e t r a n s c r i p c i ó n c l a v e e n la h e m a t o p o y e s i s
junto
a RUNX2
y RUNX3
forman
o r g a n i z a c i ó n g e n ó m i c a d e RUNX1
(distal
o
P1
y
proximal
o
la f a m i l i a
de
genes
RUNX.
y
La
muestra que posee 2 promotores
P2)
de
uso
alternativo
permitiendo
la
g e n e r a c i ó n de distintas i s o f o r m a s de R U N X 1 . E s t u d i o s p a r a d i l u c i d a r
el
mecanismo
enfocado
regulatorio
para
principalmente
en
la
la
expresión
de
RUNX1
identificación
y
se
han
caracterización
E ste e l e m e n t o e s el s i t i o d e u n i ó n p a r a el f a c t o r d e t r a s c r i p c i ó n A C E 1 ,
funcional de r e g i o n e s regulatorias intrónicas; pero a ú n no esta claro
el q u e e n l e v a d u r a e s t á i n v o l u c r a d o e n la a c t i v a c i ó n t r a n s c r i p c i o n a l d e
como
g e n e s r e l a c i o n a d o s c o n la h o m e o s t a s i s d e c o b r e . U t i l i z a n d o t é c n i c a s
evaluar
g e n ó m i c a s c l á s i c a s , a i s l a m o s y c a r a c t e r i z a m o s el factor tipo
realizamos
Cs-ACE1), examinando su funcionalidad mediante
le
levadura.
Adicionalmente,
analizamos
I s - A C E I mediante ensayos E M S A
la
ACE1
complementación
unión
a
DNA
de
Los resultados permiten reportar
p o r p r i m e r a v e z la i n t e r a c c i ó n e s p e c í f i c a e n t r e u n f a c t o r t i p o A C E I
y
se
regula
la
su
expresión.
actividad
del
análisis
m
Por
consiguiente,
promotor
silico
del
P1
del
gen
promotor
nos
propusimos
RUNX1.
P1
y
Primero,
región
5'UTR,
e n c o n t r a m o s que e x i s t e n sitios d e u n i ó n a l t a m e n t e c o n s e r v a d o s para
p r o t e í n a s R U N X a s í c o m o m o t i v o s p a r a la u n i ó n d e d i s t i n t o s f a c t o r e s
d e t r a n s c r i p c i ó n h e m a t o p o y é t i c o s . A f i n d e e v a l u a r si el g e n
es a u t o r r e g u l a d o
se c l o n ó el p r o m o t o r P 1 y 5 ' U T R
RUNX1
en v e c t o r e s
de
u n e l e m e n t o t i p o A C E e n el p r o m o t o r d e u n g e n d e l a c a s a y o t r o d e
e x p r e s i ó n que t i e n e n luciferasa c o m o g e n reportero y su actividad fue
M n P , sugiriendo u n posible cross-talk transcripcional entre dos genes
evaluada
g n i n o l í t i c o s f u n c i o n a l m e n t e d i s t i n t o s , m e d i a d o p o r c o b r e y el f a c t o r
por
realizamos
ensayos
estudios
de t r a n s f e c c i ó n
de
transiente.
inmunoprecipitación
de
Adicionalmente,
cromatina
(ChIP)
d e transcripción identificado. F O N D E C Y T 1 0 7 0 5 8 8 e Instituto Milenio
usando anticuerpo a n t i - R U N X l Nuestros resultados demuestran que
(MIFAB).
RUNX1
I
es
capaz
de
modular
la
expresión
de
un gen
reportero,
c u a n d o s u e x p r e s i ó n e s t á c o n t r o l a d a p o r la r e g i ó n P 1 y/o 5 ' U T R . M á s
a ú n , la p r o t e í n a R U N X 1
e s r e c l u t a d a in vivo
en estas regiones
en
c é l u l a s m i e l o i d e s . N u e s t r o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n q u e R U N X 1 es c a p a z
de a u t o r e g u l a r s u e x p r e s i ó n en células m i e l o i d e s .
55.
ESTIMULACIÓN
RE M O D E L A D O R E S
(Stimulation
of
1
LA
ACTIVIDAD
CROMATINA
chromatin
: : e i n s ) H e p p , M. ,
z
DE
DE
remodeling
DE
POR
COMPLEJOS
PROTEINAS
complexes
activity
1
by
DE
HMG
C H R Y S O S P O R I U M ( C h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e t r a n s a c t i v a t i o n site o f t h e
1
Steinberg, X. , Gutiémez, J . L . Laboratorio
de
e g u l a c i ó n Transcripcional, Departamento de Bioquímica y Biología
M o l e c u l a r , F a c u l t a d de C s . B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d d e
Concepción,
1
"oncepción, Chile. .
_2
compactación
i-rectos
básica
la
e n la c r o m a t i n a
cromatina
y
están
i n f l u y e e n los
distintos
L o s n ú c l e o s o r n a s s o n la u n i d a d
conformados
por ADN
enrollado
= ' e d e d o r de un o c t á m e r o de h i s t o n a s . L a f o r m a c i ó n y d e s e n s a m b l e
d e n u c l e o s o m a s c o r r e s p o n d e n a u n p r o c e s o d i n á m i c o e n el q u e , e n t r e
::~: i
TRANSCRIPCIÓN
transenption
factor
PcACEl
PcACEl
from
DE
PHAN E R O C H A E T E
Phanerochaete
1
1
p a r t i c i p a n c o m p l e j o s r e m o d el a d o r e s d e c r o m a t i n a d e p e n d i e n t e s
T
: - - P c o m o S W I / S N F . S e h a o b s e r v a d o q u e e s t e c o m p l e j o p o s e e la
c a p a c i d a d de m o v e r o c t á m e r o s
d e h i s t o n a s a lo l a r g o d e la
doble
chrysosporium)
1
B a r h a m , F . \ Cifuentes, A. , Canessa, P ,
Bull, P. . Laboratorio
de
1
B i o q u í m i c a . Pontificia Universidad Católica de Chile. .
El f a c t o r d e t r a n s c r i p c i ó n A C E I d e l e v a d u r a
del A D N
del m e t a b o l i s m o d e l A D N .
de
56. B Ú S Q U E D A D E L SITIO D E T R A N S A C T I V A C I Ó N D E L F A C T O R
HMG
r e g u l a la e x p r e s i ó n d e
g e n e s b l a n c o c a p t a d o r e s d e c o b r e c u a n d o la c o n c e n t r a c i ó n d e Á s t e
alcanza niveles de 200 ^iM. D i s p o n e m o s del ortólogo de A C E I
del
hongo
por
Phanerochaete
chrysosporium
(PcACEl)
aislado
c o m p l e m e n t a c i ó n en levadura. E n esta comunicación
e s t u d i a m o s la
l o c a l i z a c i ó n d e la r e g i ó n d e t r a n s a c t i v a c i ó n d e P c A C E . El
utilizado
fue a) i n t r o d u c c i ó n
método
de sitios B a m H I por m u t a g e n e s i s
sitio
dirigida en diferentes p o s i c i o n e s e n el c D N A de P c A C E y t a m b i é n en
s u s e x t r e m o s , c o n el fin d e o b t e n e r p o r P C R f r a g m e n t o s d e d i f e r e n t e
h e b r a d e A D N (sliding) y t a m b i é n de transferir o c t á m e r o s d e histonas
tamaño
entre
c l o n a m i e n t o d e l o s f r a g m e n t o s e n e l v e c t o r p M A 4 2 4 e n el sitio ú n i c o
distintos
segmentos
tetonas).Estudios
: : ~ i n a d a
rteracciona
elos
realizados
una
(transferencia
proteína
nuclear
de
humana,
de
PcACE
c o n n u c l e o s o m a s y f a c i l i t a el d e s p l a z a m i e n t o q u e s o b r e
levaduras
la
acción
estudiar
recombinantes
este
(NHP6B,
remodeladores
catalítica
de
fenómeno,
HM01
de
cromatina, aunque
SWI/SNF
se
no
generaron
-ambas
de
está
proteínas
levadura-
su
definido
y
HMG
HMGB1)
pero
conservando
el
carboxilo
terminal,
b)
B a m H I , el c u a l e s t á d e s p u é s d e l s i t i o d e u n i ó n a D N A del f a c t o r d e
transenpción
sobre
5-" P a r a
con
ADN
H M G B 1 (High Mobility G r o u p B 1 ) , d e m o s t r a r o n que ésta
catalizan complejos
efecto
de
GAL4
YM335:171
y
transformación
de
que p o s e e n el p r o m o t o r de G A L 4 antes
ligándolo
en
fase,
c)
del
c D N A d e la p - g a l a c t o s i d a s a y d ) d e t e r m i n a c i ó n d e la a c t i v i d a d d e e s t e
g e n r e p o r t e r o e n el e x t r a c t o . H a s t a el m o m e n t o t e n e m o s
clonados
8 fragmentos de P c A C E en p M A 4 2 4 . H e m o s t r a n s f o r m a d o
levaduras
c o n c i n c o d e e l l o s y h e m o s d e t e r m i n a d o s u a c t i v i d a d p-g al a c t o s i d a s a.
u n i d a s a l e p í t o p e H i s , el c u a l f u e u t i l i z a d o p a r a s u p u r i f i c a c i ó n . C o m o
La
¡-r/i:o
c a r b o x i l o t e r m i n a l q u e c o m p r e n d e 10 c i s t e í n a s a g r u p a d a s d e a d o s .
de
la
mononucleo somas
actividad
sobre
remodeladora
segmentos
de
se
reconstituyó
ADN
marcados
t a c t i v a m e n t e . S e e s t u d i ó la i n f l u e n c i a d e la p r o t e í n a
a actividad remodeladora
-• :-:-jra,
observándose
un
del c o m p l e j o S W I / S N F
aumento
de
la a c t i v i d a d
de
His-HMGB1
e ISWI
de
sliding
de
~ : : > c o m p le jo s e n p re s e n ci a d e H M G B 1 . N u e s t r o t r a b aj o i n el u i rá
:
e
-
=
l
efecto que sobre estos c o m p l e j o s r e m o d e l a d o r e s
:E y H M 0 1 . P a t r o c i n a n t e : F O N D E C Y T
1085092
poseen
región
de
transactivación
de
Financiado por Proyecto F O N D E C Y T
PcACE
incluiría
1085236.
una
parte
del
Sociedad
57.
IDENTIFICACION
CONSERVADAS
conserved
EN
non
DE
SECUENCIAS
E L INTRON
coding
5
DE
sequences
1
in
NO
RUNX1
the
1
de Bioquímica y Biología
Molecular
CODIFICANTES
58.
(Identification
of
E M B R I O G E N E S I S T E M P R A N A D E E R I Z O D E M A R (Gene Encoding
RUNX1)
A N u c l e a r C y s t e i n e P r o t e a s e I n v o l v e d In M a l e C h r o m a t i n R e m o d e l i n g
intron
5
of
1
1
Rebolledo, B . , Stuardo, M. , Martínez, M. . Hinojosa, M. .
Vergara,
EXPRESION
ESPACIO-TEMPORAL
After Fertilization
Sea
Señalización
Geneviere, A.M. ,
1
Celular
y
Regulación
Génica.
Facultad
de
Ciencias
un
c o d i f i c a p a r a la s u b u n i d a d a l f a d e Core
factor
de
transcripción
hematopoyesis
cuya
embrionaria.
expresión
Este
Development)
2
Observatone
1
Biológicas, Universidad de C o n c e p c i ó n .
RUNX1
Urchin
Is F u r t h e r E x p r e s s e d In S p e c i f i c T e r r i t o r i e s
V . , Gutiérrez. S . . Anillo de I n v e s t i g a c i ó n de E s t u d i o s A v a n z a d o s en
1
gen
es
Binding
es
Factor
(CBF).
esencial
blanco
para
la
Sánchez,
4
Imschenetzky,
Oceanologique
M. .
de
1 , 2
A.
,
3
Morin,
V. ,
Banyuls,
During
1
Puchi,
M. ,
1
Universidad de
Concepción ,
Laboratorie
2
EN
Arago,
3
U n i v e r s i d a d de P a n s V I , U n i v e r s i d a d d e C o n c p e c i ó n , U n i v e r s i d a d de
4
Concepción .
de
L a r e m o d e l a c i ó n d e la c r o m a t i n a e s p e r m á t i c a p o s e e u n rol c r u c i a l e n
quiebres
la r e s t a u r a c i ó n d e la d i p l o i d í a e n e u c a r i o n t e s . E n e r i z o s d e m a r e s t a
frecuente
t r a n s l o c a c i o n e s c r o m o s ó m i c a s c o m o t ( 8 ; 2 1 ) e n la c u a l l o s
DE SpH PROTEASA
o c u r r e n en su intrón 5 e n tres r e g i o n e s particulares definidas
como
proteasa
cataliza
la
degradación
de
histonas
específicas
del
R e g i o n e s de Q u i e b r e C r o m o s o m a l ( B C R ) . E s t e intrón p r e s e n t a sitios
e s p e r m a t o z o i d e ( S p H ) c o n c o m i t a n t e a su r e e m p l a z o por vanantes de
hipersensibles
histonas
nuestros
a DNAsa
resultados
I y sitios de corte para T O P O
h i s t o n a s , la u n i ó n in vivo
II, a d e m á s
maternas
(CS). Esta proteasa
caracterizada en nuestro laboratorio, d e m o s t r a n d o que esta
d e R U N X 1 a s u s s i t i o s p r e d i c h o s in siiico
en
e s r e s p o n s a b l e d e la r e m o d e l a c i ó n d e l p r o n ú c l e o
alto
grado
de
persiste
u n g e n r e p o r t e r o . L a s c a r a c t e r í s t i c a s d e la c r o m a t i n a d e l i n t r ó n 5 s e
desconocen
las
etapas
codificando
para
esta
asociado
reguladores
frecuentemente
de
la
puesta en evidencia
de
un
e l i n t r ó n y q u e e s t o s s i t i o s s o n c a p a c e s d e m o d u l a r la t r a n s c r i p c i ó n d e
han
fue
acetilación
muestran
con
transcripción,
la
por
existencia
ello,
B i o i n f o r m á t i c a s s e c o m p a r ó l o s g e n e s RUNX1
de
usando
elementos
herramientas
d e h u m a n o , ratón y
hasta
los
estados
t e m p o r a l de estos
en
larvales
de
que
inicia
se
proteasa,
así
masculino
desarrollo. A
la
y que
la f e c h a ,
la t r a n s c r i p c i ó n
como
y
enzima
se
del
distribución
gen
espacio
t r a n s c r i t o s e n l o s d i f e r e n t e s t e r r i t o r i o s d u r a n t e la
e m b r i o g e n e s i s . E n e s t e e s c e n a r i o , l o s o b j e t i v o s del s i g u i e n t e t r a b a j o
rata e n b ú s q u e d a de s e c u e n c i a s c o n s e r v a d a s no c o d i f i c a n t e s ( C N S )
f u e r o n : D e t e r m i n a r la e x i s t e n c i a d e t r a n s c r i t o s
en
Los
e s t a p r o t e a s a d u r a n t e la e m b r i o g e n e s i s d e e r i z o s d e m a r y e s p e c i f i c a r
genómicamente
el p a t r ó n d e e x p r e s i ó n e s p a c i o - t e m p o r a l . L o s r e s u l t a d o s o b t e n i d o s e n
el
intrón
resultados
5
como
predictores
muestran
la
de
elementos
de
once
presencia
ú n i c a s , d i s t n b u i d a s e n ciusters
reguladores
CNS,
y a s o c i a d a s a los B C R . A d e m á s
la
que codifiquen
para
h u e v o s s i n f e c u n d a r y e n c i g o t o s n o s i n d i c a r o n q u e los t r a n s c r i t o s q u e
C N S m á s c o n s e r v a d a incluye sitios d e u n i ó n para R U N X 1 d e probada
codifican
unión
r e p r e s e n t a n d o parte de los A R N m e n m a s c a r a d o s q u e c o n s t i t u y e n una
in
vivo.
Los
resultados
sugieren
que
el
intrón
5
presenta
para
esta
proteasa
existen
en
huevos
sin
fecundar
p a r t e d e la d o t a c i ó n d e R N A m a t e m o s q u e s e e x p r e s a n d u r a n t e l a s
e l e m e n t o s reguladores cuya funcionalidad ha de ser d e t e r m i n a d a .
etapas de s e g m e n t a c i ó n . Los resultados
obtenidos en etapas
más
tardías de desarrollo i n d i c a n q u e esta p r o t e a s a es transcrita e n e t a p a s
p o s t - e c l o s i ó n y l a s h i b r i d a c i o n e s in situ
p e r m i t i e r o n d e t e r m i n a r q u e la
trascripción de esta proteasa está confinada a regiones
específicas
del e m b n ó n , las c u a l e s e s t á n d e f i n i d a s e s p a c i o - t e m p o r a l m e n t e .
59.
LOS COMPUESTOS
AFECTAN
OXIDANTES HIDROQUINONA
DIFERENCIALMENTE
EXPRESIÓN
DE
BADISIOM ICETE
LOS
Y
LA ULTRAESTRUCTURA
GENES
LIGNINOLITICOS
CERIPORIOPSIS
H202
60.
Y
LA
ACETILADAS
EL
binding sequences
EN
SUBVERMISPORA.
(The
oxidative c o m p o u n d s h y d r o q u i n o n e a n d H 2 0 2 differentially affect the
ultrastructure
and
the
expression
of
ligninolytic
genes
in
the
1
basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora.) Mancilla, R. , A m o r o s o ,
1
1
LAS
SECUENCIAS
DEL
DE
UNIÓN
INTRÓN
5
in acetilated
1
A
SON
RUNX1
EN
REGIONES
FUNCIONALES.
regions of intron 5 are
1
1
1
Vengara, V. . Hinojosa, M. , Martínez, M. , Stuardo, M. ,
1
S. . Anillo de investigación d e estudios a v a n z a d o s
celular
y
regulación
génica,
Facultad
de
(RUNX1
functional)
Gutiérrez,
en
señalización
Ciencias
Biológicas,
1
Universidad de C o n c e p c i ó n . .
A , V i c u ñ a , R. . D e p a r t a m e n t o d e G e n é t i c a M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a .
El g e n RUNX1
Facultad de Ciencias Biológicas. Pontificia Universidad Católica
es blanco f r e c u e n t e de t r a n s l o c a c i o n e s c r o m o s ó m i c a s . U n a de ellas,
de
1
e s e s e n c i a l p a r a el d e s a m o l l o d e la h e m a t o p o y e s i s y
Chile .
la t ( 8 , 2 1 ) a f e c t a
L a b i o d e g r a d a c i ó n d e l i g n i n a e s u n p r o c e s o a l t a m e n t e o x i d a t i v o e n el
r e a l i z a d o s e n n u e s t r o l a b o r a t o r i o h a n d e m o s t r a d o la e x i s t e n c i a d e u n
cual varias oxidasas y peroxidasas j u e g a n un importante rol. Durante
p a t r ó n e s p e c í f i c o d e a c e t i l a c i ó n a lo l a r g o d e e s t e i n t r ó n . C o n el o b j e t o
este
de identificar factores d e t r a n s c r i p c i ó n r e s p o n s a b l e s del reclutamiento
proceso,
se
generan
compuestos
aromáticos
y
especies
e s p e c í f i c a m e n t e al
i n t r ó n 5 d e RUNX1.
Trabajos
reactivas de oxigeno que p r o d u c e n estrés oxidativo. E n este trabajo,
d e a c e t i l a s a s d e h i s t o n a s s e r e a l i z ó u n a n á l i s i s in silico
s e e s t u d i ó el e f e c t o d e l o s c o m p u e s t o s o x i d a n t e s h i d r o q u i n o n a ( H Q ) y
encontrándose
H 2 0 2 s o b r e el h o n g o l i g n i n o l í t i c o C e r i p o n o p s i s s u b v e r m i s p o r a , a n i v e l
d i s t r i b u i d o s a lo l a r g o d e l i n t r ó n . P a r a e v a l u a r la f u n c i o n a l i d a d in
estructural
d e las d i s t i n t a s s e c u e n c i a s d e u n i ó n a R U N X p r e s e n t e s e n e l i n t r ó n
y
transmisión
de
expresión
(TEM)
reveló
génica.
la
La
microscopía
presencia
de
electrónica
microvesículas
y
de
una
5
numerosos
sitios
de
unión
de e s t e g e n , s e r e a l i z a r o n e n s a y o s
para
de esta región
proteínas
RUNX
d e r e t a r d o e n gel p a r a
vitro
las
e x t e n s a d e g e n e r a c i ó n del c i t o p l a s m a l u e g o del t r a t a m i e n t o c o n H Q ,
distintas s e c u e n c i a s d e u n i ó n las que p o s t e r i o r m e n t e fueron c l o n a d a s
p e r o n o c o n H 2 0 2 . E s t u d i o s del e s t a d o r e d o x i n t r a c e l u l a r del h o n g o
e n el v e c t o r d e e x p r e s i ó n e u c a r i o n t e p G L 3 b a s i c y s u a c t i v i d a d
mostraron
evaluó
que
los t r a t a m i e n t o s
con
HQ
causan
una
disminución
por
transfección
en
células
HeLa.Nuestros
se
resultados
t r a n s i e n t e d e la r a z ó n G S H / G S S G y u n i n c r e m e n t o d e l o s n i v e l e s d e
d e m u e s t r a n que t o d a s las s e c u e n c i a s analizadas s o n c a p a c e s de unir
m R N A de glutatión-S-transferasa
RUNX1
(GST). Estos resultados
sugieren
in vitro,
s i n e m b a r g o s o l o t r e s d e l a s 6 r e g i o n e s a c t i v a n la
q u e la H Q p r o d u c e e s t r é s o x i d a t i v o e n e s t e m i c r o o r g a n i s m o . P o r o t r a
e x p r e s i ó n del g e n r e p o r e r o l u c i f e r a s a . I n t e r e s a n t e m e n t e , los sitios de
p a r t e , s e o b s e r v ó q u e la H Q , p e r o n o e l H 2 0 2 , a f e c t a l o s n i v e l e s d e
unión
transcritos de los g e n e s ligninol íticos m a n g a n e s o p e r o x i d a s a y l a c a s a .
s e c u e n c i a s q u e in vivo
Nosotros
i n t r ó n 5 del g e n
proponemos
que
el
mecanismo
por
el
cual
el
hongo
r e a c c i o n a al e s t r é s o x i d a t i v o , c o n t r i b u y e a la s e l e c t i v i d a d q u e
éste
p o s e e p o r la l i g n i n a d u r a n t e la d e g r a d a c i ó n d e la m a d e r a . F i n a n c i a d o
por: F O N D E C Y T 1 0 3 0 4 9 5 - 1 0 7 0 5 8 8 y M I F A B .
que
exhiben
actividad
transcripcional
corresponden
a
se e n c u e n t r a n e n regiones hiperacefiladas del
RUNX1.
XXXI Reunión
61. S p H - P R O T E A S A E X I S T E E N C É L U L A S C A C O - 2 . (SpH-protease
e x i s t s in C a c o - 2 c e l l s . ) M o r í n , V.' , D u f e y , E . \ S o l í s , C . \ J a ñ a , C . ,
Puchi,
M. ,
Imschenetzky,
M. ,
Rivas,
C. .
Departamento
de
B i o q u í m i c a y Biología Molecular, U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n .
H e m o s descrito u n a S p H - p r o t e a s a en erizo de m a r de 60 K D a en su
f o r m a activa que p o s e e p r e c u r s o r e s i n a c t i v o s d e 90 K D a y 70 K D a en
n ú c l e o s d e ó v u l o s s i n f e c u n d a r . E s t a e n z i m a se l o c a l i z a e n el h u s o
m i t ó t i c o d u r a n t e la m i t o s i s y s e g r e g a a a m b o s n ú c l e o s d u r a n t e la
d i v i s i ó n c e l u l a r . El g e n q u e c o d i f i c a p a r a S p H - p r o t e a s a , e x h i b e u n a
h o m o l o g í a c o n el g e n d e c a t e p s i n a L h u m a n a s . C o m o O b j e t i v o d e l
p r e s e n t e t r a b a j o se i n v e s t i g ó la e x i s t e n c i a d e e s t a
proteasa en
c é l u l a s C a c o - 2 . S e u t i l i z a r o n a n t i c u e r p o s d i r i g i d o s c o n t r a la r e g i ó n
N - t e r m i n a l d e e s t a p r o t e a s a q u e c o n f i r m a n la p r e s e n c i a de u n a
m o l é c u l a de 60 k D a , e n distintas e t a p a s del ciclo c e l u l a r de células
C a c o - 2 . S e m u e s t r a q u e e n e t a p a G 0 , e s t a p r o t e a s a se e n c u e n t r a e n
e l c i t o p l a s m a y n ú c l e o d e la c é l u l a , d u r a n t e la m i t o s i s s e v i s u a l i z a
a s o c i a d o c o n el h u s o m i t ó t i c o y d u r a n t e la e t a p a S se l o c a l i z a e n el
n ú c l e o . L a i n c o r p o r a c i ó n d e B r o m o d e s o x i u n d i n a , m u e s t r a n q u e la
s í n t e s i s d e A D N d i s m i n u y e al t r a t a r l a s c é l u l a s c o n u n i n h i b i d o r
e s p e c í f i c o d e c a t e p s i n a L. P a r a l e l a m e n t e , c é l u l a s s i n c r o n i z a d a s c o n
N o c o d a z o l , d i s m i n u y e n su c a p a c i d a d de salir de mitosis d e s p u é s del
t r a t a m i e n t o c o n el i n h i b i d o r . E s t o s r e s u l t a d o s d e m u e s t r a n q u e la
v a n a n t e n u c l e a r de catepsina L descrita en erizos de m a r , existe en
c é l u l a s C a c o - 2 y su l o c a l i z a c i ó n es similar.
1
1
1
1
1
1
63.
AISLAMIENTO
TRANSCRITOS
E
DE
IDENTIFICACIÓN
Saccharomyces
DE
NUEVOS
cerevisiae
S O B R E - E X P R E S A D O S E N LA F A S E ESTACIONARIA TARDÍA D E
L A F E R M E N T A C I Ó N V Í N I C A (Isolation a n d identificatión of novel
t r a n s c r i p t s of Saccharomyces
cerevisiae
u p - r e g u l a t e d i n t h e late
s t a t i o n a r y p h a s e of w i n e f e r m e n t a t i o n ) M o l i n e t t , S . , N o r a m b u e n a ,
T. ,
Meló,
F. ,
Agosin,
E. .
Laboratorio
de
Biotecnología,
d e p a r t a m e n t o de Ingeniería Q u í m i c a y B i o p r o c e s o s , E s c u e l a de
I n g e n i e r í a , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e , D e p a r t a m e n t o d e
Ciencias
Biológicas, Universidad A n d r é s Bello , Laboratono
de
Bioinformática aplicada, departamento de Genética Molecular y
M i c r o b i o l o g í a , F a c u l t a d de Ciencias
B i o l ó g i c a s , P.
Universidad
Católica de Chile .
1 , 2
3
3
1
1
2
Anual
62. E L R O L D E L MN2+ E N L A S E C R E C I Ó N D E L A ENZIMA
MANGANESO
PEROXIDASA
DEL
BASIDIOM I C E T E
L I G N I N O L Í T I C O C E R I P O R I O P S I S S U B V E R M I S P O R A . ( T h e r o l e of
M n 2 + on t h e M a n g a n e s e P e r o x i d a s e e n z y m e s e c r e t i o n of t h e
ligninolytic b a s i d i o m y c e t e Ceriporiopsis s u b v e r m i s p o r a ) Mancilla, R. ,
M a n u b e n s . A . . S a l a s , L . , M u ñ o z , F . , V i c u ñ a , R. . D e p a r t a m e n t o d e
G e n é t i c a M o l e c u l a r y M i c r o b i o l o g í a . F a c u l t a d de C i e n c i a s B i o l ó g i c a s .
Pontificia Universidad Católica de C h i l e .
1
1
1
1
1
1
Ceriporiopsis s u b v e r m i s p o r a es un h o n g o basidiomicete de pudrición
blanca ampliamente usado en estudios de biopulpaje. S u maquinaria
ligninolítica
extracelular
esta
compuesta
por
dos
tipos
de
glicoproteínas: m a n g a n e s o peroxidasa ( M n P ) y lacasa (Les). En este
t r a b a j o , e s t u d i a m o s el e f e c t o d e l c a t i ó n M n 2 + e n la s e c r e c i ó n d e la
M n P . E n cultivos crecidos en a u s e n c i a del metal, ensayos de
q R T - P C R r e v e l a n altos n i v e l e s d e e x p r e s i ó n de t r a n s c r i t o s m n p . E n
los
correspondientes
micelios
experimentos
de
microscopía
electrónica de t r a n s m i s i ó n m u e s t r a n altos niveles de e n z i m a en
c o m p a r t i m e n t o s i n t r a c e l u l a r e s del h o n g o . S i n e m b a r g o , n o e s posible
d e t e c t a r la p r o t e í n a M n P e n el m e d i o e x t r a c e l u l a r p o r e n s a y o s d e
actividad enzimática o hibridación tipo W e s t e r n . Estos resultados
s u g i e r e n u n rol p o s t - t r a n s c r i p c i o n a l d e l M n 2 + d e b i d o a q u e s o l a m e n t e
e n c u l t i v o s t r a t a d o s c o n e l m e t a l e s p o s i b l e d e t e c t a r la e n z i m a e n el
m e d i o extracelular. E x p e r i m e n t o s
adicionales en presencia
del
i n h i b i d o r d e la t r a d u c c i ó n c i c l o h e x i m i d a y M n 2 + m u e s t r a n q u e e s t e
m e t a l e s n e c e s a r i o p a r a s e c r e t a r la M n P , c o r r o b o r a n d o que e n
a u s e n c i a d e l m e t a l , la M n P e s r e t e n i d a e n el i n t r a c e l u l a r y q u e el
M n 2 + p o d r í a s e r el f a c t o r q u e g a t i l l a s u s e c r e c i ó n . F i n a n c i a d o p o r :
F O N D E C Y T 1070588 y M I F A B .
64.
SINTESIS
IN
CODIFICANTE
VITRO
DEL
HUMANO
MITOCONDRIALES DE CELULAS
human
sense
non-coding
1
para
la
vida,
MITOCONDRIAL
CON
MIFAB,
NO
EXTRACTOS
H E L A (In vitro s y n t h e s i s o f t h e
mitochondrial
m i t o c h o n d r i a l extract) A r a y a , M. ,
Ciencia
ARN
SENTIDO
RNA
with
1
Hela
cells
1
Burzio, V. , Burzio, L. . Fundación
Grupo
BIOS,
Universidad
Nacional
1
A n d r é s B e l l o . P a t r o c i n a n t e : L u i s . B..
H e m o s caracterizado un A R N mitocondrial no codificante ( A R N m t n c )
humano,
formado
(proveniente
por
un
repetido
d e la t r a n s c r i p c i ó n
mitocondrial)
unido
de
invertido
la h e b r a
covalentemente
al
de
815
nucleótidos
L del gen A R N r
extremo
5?del
16S
ARNr
16S
(transcrito h e b r a H ) f o r m a n d o u n a estructura doble hebra de 815pb y
3
D u r a n t e la f e r m e n t a c i ó n v í n i c a la l e v a d u r a Saccharomyces
cerevisiae
es
sometida
a
variables
condiciones
de
estrés.
Estudios
t r a n s c r i p t ó m i c o s , r e a l i z a d o s m e d i a n t e S A G E , e v i d e n c i a r o n q u e al
i n i c i o d e la f a s e e s t a c i o n a r i a s e i n d u c e u n a
reprogramación
transcripcional general. Interesantemente, tags de S A G E a s i g n a d o s a
regiones
sin O R F
anotado
(NORFs)
aumentan
su
expresión
s i g n i f i c a t i v a m e n t e en e s t a f a s e . E n e s t e e s t u d i o , se r e - a n a l i z a r o n los
datos
de
SAGE,
obteniéndose
aquellos
tags
NORF
más
s o b r e - e x p r e s a d o s d u r a n t e e s t a f a s e d e la f e r m e n t a c i ó n y q u e m a p e a n
d e m a n e r a ú n i c a e n el g e n o m a . S e o b t u v o R N A t o t a l r e p r e s e n t a t i v o
de
tres
fases
-medio
exponencial,
estacionario
temprano
y
estacionario tardío- de un cultivo b a t c h e n c o n d i c i o n e s vínicas. Se
a i s l a r o n t r a n s e n t o s c o m p l e t o s d e los c u a l e s p r o v e n í a n d i c h o s t a g s
N O R F , l o s q u e f u e r o n c l o n a d o s y s e c u e n c i a d o s . M e d i a n t e a n á l i s i s in
silico, é s t o s f u e r o n m a p e a d o s e n el g e n o m a d e l e v a d u r a , c o n f i r m a n d o
el c o n t e x t o g e n é t i c o o b t e n i d o p r e v i a m e n t e p a r a c a d a t a g . D i s t i n t o s
algoritmos de predicción d e g e n e s i n d i c a n que estos transcritos
c o r r e s p o n d e r í a n a R N A s no c o d i f i c a n t e s . E s t a s e v i d e n c i a s , j u n t o con
s u p a t r ó n d e e x p r e s i ó n d u r a n t e la f e r m e n t a c i ó n v í n i c a , s u g i e r e n q u e
estos transcritos podrían corresponder a R N A s no codificante con
a c t i v o s r o l e s r e g u l a t o r i o s e n Saccharomyces
cerevisiae
d u r a n t e la
f a s e e s t a c i o n a r i a t a r d í a d e la f e r m e n t a c i ó n v í n i c a . F i n a n c i a m i e n t o :
Proyecto F O D E C Y T 1058688.
un
asa
de
40nt.
corresponde
cultivando
al
Hemos
producto
células H e L a
demostrado
de
un
que
pseudogen
en presencia
este
transcrito
mitocondrial,
de bromuro
no
pues
d e etidio no
se
d e t e c t a la e x p r e s i ó n d e l A R N m t n c . A d e m á s , h e m o s d e t e r m i n a d o q u e
e s t e A R N n o e s t á c o d i f i c a d o e n el g e n o m a m i t o c o n d r i a l , p u e s si e s t o
f u e r a c i e r t o el f r a g m e n t o e x t r a d e 8 1 5 n t d e b e r í a e s t a r u b i c a d o e n t r e
l a s r e g i o n e s A R N t V a l y el e x t r e m o 5 ? d e l A R N r 1 6 S , a m p l i f i c á n d o s e
p o r P C R u n f r a g m e n t o d e 9 4 5 p b , s i e n d o el ú n i c o a m p l i c ó n g e n e r a d o
u n o de 1 3 0 p b . E n c o n s e c u e n c i a ,
h e m o s p o s t u l a d o q u e la s í n t e s i s d e
e s t e A R N r e q u i e r e d e los t r a n s c r i t o s d e las h e b r a s H y L del A D N m t ,
donde
el t r a n s c r i t o
16S
de
la h e b r a
L
se
procesaría
y ligaría
al
e x t r e m o 5 ? d e l t r a n s c r i t o d e la h e b r a H ( A R N r i b o s o m a l 1 6 S m a d u r o )
mediante
un
procesamiento
post-transenpeional
que
ocurriría
p r o b a b l e m e n t e d e n t r o d e la m i t o c o n d r i a . E n c o n s e c u e n c i a e l o b j e t i v o
de
este trabajo
Resultados
considera
preliminares
dilucidar
sugieren
la
síntesis
que
la
de
este
ligación
ARNmtnc.
de
ambos
f r a g m e n t o s ocurre e n p r e s e n c i a d e l i s a d o m i t o c o n d r i a l y q u e no se
r e q u i e r e la l o n g i t u d c o m p l e t a d e a m b o s t r a n s c r i t o s p a r a d a r o r i g e n al
ARNmtnc.
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
SEÑALIZACIÓN CELULAR, Bl O MED I CIÑA, REGULACIÓN METABOLIC A
65.
EXPRESIÓN
MÚSCULO
DE
NEUREGULINA-1B E T A
ESQUELÉTICO
ESTIMULADAS
ELECTRICAMENTE.
electrically stimulated
1
Juretic,
N. ,
normal
Jorquera,
CELULAS
Y
Jaimovich,
expression
skeletal muscle
1
E. ,
DE
DISTRÓFICO
( N R G - 1 beta
and dystrophic
G.\
EN
NORMAL
Riveras,
in
cells)
1
N. .
Centro
66.
ESTUDIO
DE
LA
INTERACCION
COMPLEJO
C P C (Interaction studies
of b o t h R I C - 8
de
1
with
1
1
Hinrichs, M V . . L a b o r a t o r i o de G e n é t i c a Molecular. D e p a r t a m e n t o de
Biológicas, Universidad de C o n c e p c i ó n . .
Universidad
isoforms
1
Bioquímica
Medicina,
DOS
1
Celular y Molecular,
de
LAS
I N C E N P , a c o m p o n e n t o f t h e C P C ) C a m p o s , T . , L a r a , P. , Oíate, J . ,
F O N D A P d e E s t u d i o s M o l e c u l a r e s d e la C é l u l a , P r o g r a m a d e B i o l o g í a
ICBM, Facultad
ENTRE
I S O F O R M A S D E RIC-8 E INCENP, PROTEÍNA C O M P O N E N T E D E L
y
Biología
Celular
y
Molecular.
Facultad
de
Ciencias
1
Chile. .
RIC-8
N e u r e g u l i n a - 1 ( N R G - 1 ) e s u n f a c t o r d e c r e c i m i e n t o q u e p o t e n c i a la
citosólica
que
m i o g é n e s i s e i n d u c e la e x p r e s i ó n d e u t r o f l n a , p r o t e í n a e s t r u c t u r a l y
especies,
desde
funcíonalmente relacionada con
s u p e r i o r e s se h a n e n c o n t r a d o d o s i s o f o r m a s , d e n o m i n a d a s R I C - 8 A y
esquelético.
Investigamos
la d i s t r o f i n a . e n c é l u l a s del m ú s c u l o
el
efecto
de
la
despolarización
y
en
(Resistant
RIC-8B,
las
to
se
Inhibitors
of C h o l i n e s t e r a s e ) ,
encuentra
C.
altamente
elegans
cuales
hasta
poseen
H.
actividad
es
una
conservada
sapiens.
GEF
en
proteína
diferentes
En
organismos
(Guanine
nucleotide
p a r t i c u l a r la p a r t i c i p a c i ó n d e la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o i n t r a c e l u l a r , e n la
E x c h a n g e F a c t o r ) , e s d e c i r la c a p a c i d a d d e e s t i m u l a r e l i n t e r c a m b i o
expresión
y
de G D P p o r G T P e n diversas s u b u n i d a d e s G a . A p e s a r de que a m b a s
músculo
isoformas c o m p a r t e n gran similitud de secuencia, éstas actúan c o m o
de
NRG-1beta
en
utilizaron
líneas
distróficas.
Se
esquelético
normal
(RCMH)
células
musculares
celulares
y distrófico
normales
humanas
de
(RCDMD),
despolarizadas
GEF
sobre
diferentes proteínas
G.
P o r otra parte, e n
organismos
eléctricamente (400 pulsos, 1 m s , 4 5 H z ) . La expresión de N R G - 1 b e t a
m e n o s e v o l u c i o n a d o s , s e h a o b s e r v a d o una sola f o r m a de RIC-8 que
se determinó mediante PCR-semicuantitativo, Q-PCR y Westem-blot.
cumpliría a m b a s f u n c i o n e s . R e c i e n t e m e n t e en nuestro laboratorio, se
Observamos
que
la
despolarización
produce
un
aumento
en
los
clonó
RIC-8
desde
ovocitos
de
Xenopus
laevis
(xRIC-8),
y
se
n i v e l e s d e N R G - 1 b e t a m R N A y u n i n c r e m e n t o e n la e x p r e s i ó n d e la
d e m o s t r ó q u e é s t e p a r t i c i p a e n la a c t i v a c i ó n d e G a s . P o r o t r o l a d o ,
proteína,
buscando
en
ambos
tipos
celulares.
Se
observa
una
inducción
proteínas
interactoras
de x R I C - 8 , se encontró
que
ésta
m á x i m a d e l m R N A (2 v e c e s r e s p e c t o al c o n t r o l s i n e s t í m u l o ) a l a s 4
p u e d e a s o c i a r s e a d o s p r o t e í n a s q u e f o r m a n p a r t e del c o m p l e j o C P C
horas.
(Chromosomal Passenger Complex), denominadas INCENP yDasra.
BAPTA-AM,
quelante
Ly-294002, inhibidores
niveles
de
de
calcio
intracelular
y
2-APB
y
d e la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o , d i s m i n u y e n
NRG-1 beta
mRNA
inducidos
por
los
despolarización.
Basado
en
los
proponemos
antecedentes
que
una
de
anteriormente
las
dos
expuestos,
isoformas
de
nosotros
RIC-8
humana,
miotubos
i n t e r a c c i o n a c o n el C P C y p o r lo t a n t o c u m p l e u n a f u n c i ó n i m p o r t a n t e
distróficos es m a y o r que en miotubos normales. Nuestros resultados
d u r a n t e la m i t o s i s . P o r e s t a r a z ó n , s e e s t u d i ó la i n t e r a c c i ó n i n v i v o
s u g i e r e n q u e la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o , i n d u c i d a p o r d e s p o l a r i z a c i ó n ,
entre
r e g u l a la e x p r e s i ó n g é n i c a d e N R G - 1 b e t a t a n t o e n c é l u l a s m u s c u l a r e s
coinmunoprecipitación.
Demostramos
que
el
nivel
basal
de
NRG-1 beta
en
n o r m a l e s c o m o distróficas. P u e s t o q u e los niveles de N R G - 1 b e t a
encuentran
expresión
alterados
del
gen
en
miotubos
podría
ser
distróficos,
importante
en
estrategias terapéuticas.
Bicentenario P S D - 2 4 .
67.
HSP70
INDUCCION
DE
ESQUELETICO.
EN
EFECTO
la r e g u l a c i ó n
el
depolarization
Jaimovich,
1
E. ,
or
IL-6
treatment)
1
Riveras,
N. .
con
INCENP
mediante
ensayos
de
la
desarrollo
de
DE
MUSCULO
DESPOLARIZACION
1
Jorquera,
Centro
Ric-8B
se
de
Y
T R A T A M I E N T O C O N I L - 6 ( H s p 7 0 e x p r e s s i o n in s k e l e t a l m u s c l e c e l l s
by
y
FONDAP-15010006.
CELULAS
DE
Ric-8A
G. ,
FONDAP
Juretic,
de
1
N. ,
Estudios
M o l e c u l a r e s d e la C é l u l a , P r o g r a m a d e B i o l o g í a C e l u l a r y M o l e c u l a r ,
6 8 . I G F - 1 A C T I V A A HIFot Y N A D P H O X I D A S A V Í A P L C C a 2 + P K C
E N E L C A R D I O M I O C I T O (IGF-1 activates H I F a a n d N A D P H oxidase
through P L C - C a
2
D. ,
+ 2
1
- P K C in c a r d i o m y o c y t e s ) B u c a r e y , J . L . , M a t u r a n a ,
2
Muñoz,
J.P. ,
2
Hidalgo,
C. ,
1
2
Lavandero,
S. .
Universidad
de
2
Valparaíso , Universidad de Chile .
O b j e t i v o s : IGF-1 es u n p o t e n t e a g e n t e prohipertrófico y antiapoptótico
1
I C B M , F a c u l t a d de M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de C h i l e . .
en
H s p 7 0 c o n t r i b u y e a la h o m e o s t a s i s c e l u l a r d e l m ú s c u l o
durante
el
Estudiamos
estrés
el
fisiológico
efecto
de
la
asociado
a
la
esquelético
contracción
despolarización,
muscular.
específicamente
la
p a r t i c i p a c i ó n d e s e ñ a l e s d e c a l c i o y d e P K C , a s í c o m o el e f e c t o d e
I L - 6 e n la e x p r e s i ó n d e H s p 7 0
en células m u s c u l a r e s e n cultivo. Se
a n a l i z ó la e x p r e s i ó n d e H s p 7 0 e n m i o t u b o s d e s p o l a r i z a d o s c o n K + o
eléctricamente, en presencia y ausencia de inhibidores de señales de
c a l c i o y d e P K C y el e f e c t o d e I L - 6 r e c o m b i n a n t e s o b r e l o s n i v e l e s d e l
mRNA
de
Hsp70.
Westem-Blotting
e
El
estudio
inmuno
se
realizó
fluorescencia.
despolarización aumenta significativamente
mediante
RT-PCR,
Observamos
que
la
l o s n i v e l e s del m R N A
y
d e la p r o t e í n a H s p 7 0 , lo q u e n o o c u r r e al d e s p o l a r i z a r l o s m i o t u b o s e n
p r e s e n c i a d e i n h i b i d o r e s d e la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o o i n h i b i d o r e s d e
P K C . La i n c u b a c i ó n de los m i o t u b o s c o n IL-6
produce un incremento
e n los niveles del m R N A de H s p 7 0 . N u e s t r o s resultados sugieren que
la s e ñ a l l e n t a d e c a l c i o , i n d u c i d a p o r d e s p o l a r i z a c i ó n ,
estimula
la
el
cardiomiocito.
transduccionales
investigamos:
generadora
a)
de
cardiomiocito,
señalización
Nuestro
implicadas
si
IGF-1
especies
b)
cuáles
objetivo
la
NADPH
reactivas
y
las
c)
es
respuesta
activa
son
involucradas
transcripcional
en
de
oxígeno
estas
de
ROS
las
IGF-1.
oxidasa,
isoformas
si
analizar
a
una
y
activan
ello
fuente
(ROS)
NOX
vías
Para
en
el
vías
de
al
factor
H I F - 1 a . M e t o d o l o g í a : La expresión de isoformas
de
N A D P H oxidasa y H I F I a s e d e t e r m i n a r o n por R T - P C R . La producción
de R O S se d e t e r m i n ó m e d i a n t e s o n d a s
fluorescentes
químicas (DCF)
y b i o l ó g i c a s ( H y p e r ) . P a r a e v a l u a r la p a r t i c i p a c i ó n d e N O X 2 s e u s ó el
péptido gp91ds-tat
y un s i R N A para N O X 4 . La activación de HIF
1a
s e e s t u d i ó c o n u n g e n r e p o r t e r o H I F 1 a-lux y las vías de s e ñ a l i z a c i ó n
mediante
inhibidores
farmacológicos ResultadosLos
cardiomiocitos
e x p r e s a n las i s o f o r m a s N O X 2 y N O X 4 d e N A D P H o x i d a s a y H I F 1 a .
I G F - 1 a u m e n t ó la p r o d u c c i ó n d e R O S e n t r e 0 - 3 0 m i n y s i e n d o i n h i b i d a
p a r c i a l m e n t e p o r g p 9 1 d s - t a t o el s i R N A para N O X 4 y en conjunto en
e x p r e s i ó n d e H s p 7 0 , m e d i a n t e a c t i v a c i ó n d e P K C , e i n d i c a n q u e IL-6
un 8 0 % . L a p r o d u c c i ó n de R O S d e p e n d i e n t e de IGF-1 fue
aumenta
c o m p l e t a m e n t e p o r A G 5 3 8 y g e n i s t e í n a y, p a r c i a l m e n t e , p o r U 7 3 1 1 2 ,
la e x p r e s i ó n d e l m R N A d e H s p 7 0 . S e h a o b s e r v a d o
disminución
del
contenido
muscular
de
Hsp70
en
una
patologías
BIM, Go6976
del
y BAPTA-AM
y no por LY294002.
tipo 2. E s t e t r a b a j o a p o r t a al c o n o c i m i e n t o d e las b a s e s m o l e c u l a r e s
g p 9 1 d s - t a t . C o n c l u s i o n e s I G F - 1 e s t i m u l a la p r o d u c c i ó n d e R O S p o r l a s
isoformas
cardiomiocito.
FONDAP
15010006.
NOX2/4
de
NADPH
HIF1 a-lux
oxidasa
siendo
y
activa
bloqueada
la
activación
de nuevas estrategias terapéuticas.
reportero
IGF-1 estimuló
a s o c i a d a s a e s t r é s o x i d a t i v o , c o m o r e s i s t e n c i a a la i n s u l i n a y d i a b e t e s
i n v o l u c r a d a s e n la r e g u l a c i ó n d e l g e n y p o d r í a c o n t r i b u i r al d e s a m o l l o
gen
inhibida
HIF-1a
por
en
E n e s t a s r e s p u e s t a s p a r t i c i p a la v í a P L C - C a + 2 - P K C .
el
XXXI Reunión
69.
IGF-1
REGULA
CARDIOMIOCITO
LA
AUTOFAGIA
INDUCIDA
POR
Y
MUERTE
PRIVACIÓN
DE
DEL
GLUCOSA
( I G F - 1 r e g u l a t e s a u t o p h a g y a n d d e a t h in g l u c o s e - d e p n v a t e d
1
1
1
m y o c y t e s ) G o n z á l e z , L . , T o r o , B . , T r o n c o s o, R. ,
Centro
FONDAP
CEMC,
Facultades
cardiac
1
Lavandera,
Ciencias
S. .
Químicas
y
Anual
70. ACTIVIDAD D E L P O R O D E T R A N S I C I O N D E P E R M E A B I L I D A D
MITOCONDRIAL
EFECTO
EN MITOCONDRIAS AISLADAS DE
REDOX.
(mPTP
P. , Hidalgo, C .
1 , 3
in
cardiac
1
modulation) Fernández,
2
activity
CORAZÓN:
rnitochondria:
1
2
C . , P e d r o z o , Z . , D o m e n e c h , R. ,
, Donoso, P.
1 , 3
, Sánchez, G.
. P r o g r a m a de Biología
Celular y Molecular,
L a a u t o f a g i a e s u n a v í a ele d e g r a d a c i ó n i n t r a c e l u l a r p a r a el r e c a m b i o
Chile. ,
d e proteínas y organelos y de e j e c u c i ó n de m u e r t e en r e s p u e s t a a
U n i v e r s i d a d d e C h i l e . , C e n t r o d e E s t u d i o s M o l e c u l a r e s d e la C é l u l a ,
e s t r é s n u t r i c i o n a l . S u e x c e s i v a i n d u c c i ó n e s u n m e c a n i s m o p a r a el
Facultad de M e d i c i n a , Universidad d e Chile. .
desarrollo
L a t r a n s i c i ó n d e la p e r m e a b i l i d a d m i t o c o n d r i a l
de
patologías
cardioprotector
que
cardiacas.
promueve
la
IGF-1
es
hipertrofia
un
agente
fisiológica
del
cardiomiocito e inhibe su apoptosis, sin e m b a r g o , se d e s c o n o c e
si
1
Programa
de
Facultad
redox
Macho,
Farmacéuticas y Medicina, Universidad de Chile .
1
ICBM,
2 , 3
de Medicina, Universidad
Fisiopatología,
ICBM, Facultad
de
2
3
de
es el a u m e n t o b r u s c o
p e r m e a b i l i d a d a m o l é c u l a s < 1,5 k D a , q u e p r o d u c e la p é r d i d a d e l
potencial
de
membrana
mitocondrial
oxidativa.
El
y
el
desacoplamiento
fosforilación
c a r d i o m i o c i t o s s e p r i v a r o n d e g l u c o s a e n t r e 2 y 24 h y s e d e t e r m i n ó la
permeabilidad
a u t o f a g i a a t r a v é s d e la r e d i s t r i b u c i ó n d e la p r o t e í n a L C 3 - G F P p r e v i a
m e c a n i s m o de apertura no están c o m p l e t a m e n t e identificados.
t r a n s d u c c i ó n a d e n o v i r a l del g e n a s í c o m o p o r el p r o c e s a m i e n t o d e la
a u m e n t o de p e r m e a b i l i d a d
proteína e n d ó g e n a L C 3 por W e s t e r n blot. Los r e s u l t a d o s
una
q u e la p r i v a c i ó n d e g l u c o s a a c t i v ó la a u t o f a g i a , s i e n d o
inhibida por
es
isquemia
un
responsable
poro
(mPTP)
esto
del
es
corazón.
hacerse
IGF-1.
reactivas
oxígeno
determinantes
celular inducida
siendo
atenuado
por
activa
la a u t o f a g i a
ambas
acciones
IGF-1.
En
y estimula
resumen,
la m u e r t e
por
estrés
3-metiladeriina,
la p r i v a c i ó n d e
glucosa
del c a r d i o m i o c i t o ,
siendo
de
(ROS),
las
que
son
episodios
el p r e c o n d i c i o n a m i e n t o
actividad
determinando
el
modifican
cambio
de
al m P T P ,
volumen
puede
cortos
d e s a r r o l l o d e la p r o t e c c i ó n . P a r a i n v e s t i g a r si l a s R O S
durante
y
Este
isquemia
se producen
la v i a b i l i d a d
realizan
una
D u r a n t e el p r e c o n d i c i o n a m i e n t o
de
se
corazón
a
si
La disminución
ella
El
resistente
prolongada,
n u t r i c i o n a l s e i n c r e m e n t ó a l i n h i b i r la a u t o f a g i a c o n
de
molecular
taquicardia.
PKB y
de
identidad
p70-S6K
en los n i v e l e s de A T P ,
la
aumento
fosforiladas inducidos p o r privación de glucosa fueron prevenidas por
I G F - 1 . Las disminuciones
antes
cuya
este
d e s e n c a d e n a la m u e r t e c e l u l a r l u e g o d e
prolongada
precondicionarse,
de
de
t a m b i é n c o n t r o l a la a u t o f a g i a . P a r a p r o b a r e s t a h i p ó t e s i s , c u l t i v o s d e
mostraron
de
Medicina,
de
especies
para
el
generadas
evaluamos
de
su
mitocondrias
becarios
aisladas de c o r a z o n e s de a n i m a l e s controles y precondicionados con
doctorado CONICYT. F O N D A P 1501006, Becas Apoyo Tesis Doctoral
t a q u i c a r d i a . E n c o n t r a m o s que en m i t o c o n d r i a s de a n i m a l e s s o m e t i d o s
24071082 y 24080060.
a t a q u i c a r d i a , el c a m b i o d e v o l u m e n g a t i l l a d o p o r u n a s o b r e c a r g a d e
bloqueadas
por
IGF-1.
BT
y
TR
son
calcio
ocurre
más
lentamente
que
en
controles.
Además,
la
incubación de mitocondrias d e a n i m a l e s controles c o n un reductor de
grupos
SH
velocidad
(DTT)
del
disminuye,
cambio
sobrecarga de calcio.
de
mientras
volumen
que
el
H 0
2
mitocondrial
2
aumenta,
gatillado
por
la
una
Estos resultados sugieren que cambios redox
d e las p r o t e í n a s q u e c o n f o r m a n el m P T P r e g u l a n s u a p e r t u r a , h e c h o
q u e p o d r í a s e r r e s p o n s a b l e d e la p r o t e c c i ó n m e d i a d a p o r t a q u i c a r d i a .
Financiado por Fondecyt 1080497, 1080481 y Fondap 5010006.
71. A N A L I S I S M O L E C U L A R D E L G E N M S H 6 E N FAMILIAS
CON
72.
ABERRANTE
C A N C E R C O L O R R E C T A L H E R E D I T A R I O NO P O L I P O S O (HNPCC)
TUMOR
(Molecular
(DNA
aberrant
breast
cáncer
s c r e e n i n g of t h e M S H 6 g e n e i n f a m i l i e s w i t h
non-polyposis
K.
1 , 2
colorectal
cáncer,
1
HNPCC)
3
1
, Church, J. , López-Kostner,
F. ,
hereditary
2
Orellana, P. - ,
2
Carvallo, P. .
Alvarez,
Laboratorio
de
EN
METILACION
PACIENTES
methylation
Chilean
2
DE
GENES
CHILENAS
profiles
patients)
CON
of t u m o r
Guzman,
2
SUPRESORES
CÁNCER
DE
DE
MAMA
suppressor genes
1
L.M. ,
2
in
2
Maturana,
M.J. ,
3
3
Castillo, D. , R o d r í g u e z , L. , C o r d e r o , E . , del C a m p o , G . , O d d ó , O .
O n c o l o g í a y Genética Molecular, Clínica las C o n d e s , Laboratorio de
Laboratorio
Genética
V a l p a r a í s o , Laboratorio de I n m u n o l o g í a . Instituto de Salud Pública de
1
Molecular
Humana,
Departamento
Biología
Celular
y
2
Molecular, Pontificia Universidad Católica de C h i l e , Cleveland Clinic
3
de
Bioquímica,
Pontificia
Universidad
Católica
de
1
2
3
C h i l e , Instituto N a c i o n a l del C á n c e r .
Foundation, Cleveland.Ohio, USA .
El c á n c e r d e m a m a ( C M ) c o n s t i t u y e l a s e g u n d a c a u s a d e m u e r t e e n
El C á n c e r Colorrectal Hereditario No Poliposo ( H N P C C ) se origina por
m u j e r e s p o r c á n c e r e n C h i l e . El d e s a r r o l l o c a r c i n o g é n i c o s e p r o d u c e
m u t a c i o n e s e n la l í n e a g e r m i n a l e n l o s g e n e s M L H 1 , M S H 2 y M S H 6
p o r alteraciones m o l e c u l a r e s c o m o s o b r e - e x p r e s i ó n de o n c o g e n e s y/o
q u e codifican para e n z i m a s de r e p a r a c i ó n del D N A . U n e s t u d i o previo
inactivación
r e a l i z a d o e n n u e s t r o l a b o r a t o r i o e n 5 0 f a m i l i a s c h i l e n a s r e v e l ó q u e el
s i l e n c i a m i e n t o g é n i c o p o r a b e r r a n t e m e t i l a c i ó n d e la r e g i ó n p r o m o t o r a
4 5 % de é s t a s , presenta m u t a c i o n e s e n los g e n e s
E n t r e las 2 6 familias que no p r e s e n t a n
MLH1 o
MSH2.
m u t a c i ó n e n u n o de
estos
de genes, por mutaciones
o s i le nci a m i e n t o
génico.
El
de g e n e s s u p r e s o r e s de t u m o r ( G S T ) , es un m e c a n i s m o c o m ú n en
c á n c e r y se ha descrito e s t e tipo de inactivación en u n a serie
neoplasias
c o l o r r e c t a l , q u e es u n a c a r a c t e r í s t i c a f r e c u e n t e e n a q u e l l a s
estado de metilación de un panel de 7 genes G S T , en un grupo de
q u e p r e s e n t a n m u t a c i ó n e n el g e n M S H 6 .
familias
El objetivo de este estudio
c o n s i s t e e n a n a l i z a r la p r o b a b l e p r e s e n c i a d e m u t a c i o n e s e n la l í n e a
germinal
en
el g e n
MSH6,
presentan mutaciones
en
en los
pacientes
genes
MLH1
de
14
familias
y MSH2.
Para
pacientes
como
C M . El p r o p ó s i t o
con C M
comparado
para los g e n e s : p 1 6 ( 9 0 % ; p < 0 . 0 0 0 0 1 ) , B R C A - 1 ( 1 0 0 % ; p < 0 . 0 0 0 0 1 ) ,
R A S S F 1 - A ( 8 7 % ; p < 0 . 0 0 0 0 1 ) y C D H 1 ( 7 9 % ; p<0.0117), en muestras
pronóstico en C M .
c.3439-16C>T
y
familias,
dos
dos
cambios
silentes, c.1449G>T (V483V), c.3249G>T (P1082P), todos producidos
por
sustituciones
nucleotídícas,
que
no
han
sido
descritos
anteriormente para este tipo de pacientes. A d e m á s , otras alteraciones
genéticas
no
encontrado
patogénicas,
en
otros
desentas
pacientes.
como
Los
polimorfismos,
cambios
se
han
n u c í eot id i c o s
e n c o n t r a d o s n e c e s i t a n e s t u d i o s p o s t e r i o r e s , ya s e a n funcionales y/o
d e f r e c u e n c i a en la p o b l a c i ó n . F i n a n c i a d o p o r T h e C l e v e l a n d
Foundation.
un
positiva
se
de D N A . S e identificaron alteraciones
c.2693-18T>A,
control. Utilizando
el
no
genes
intrónicos
fue evaluar
que
de tejido de p a c i e n t e s
cambios
con un grupo
estudio
esto
a m p l i f i c a r o n p o r P C R los e x o n e s del g e n M S H 6 , y s e a n a l i z a r o n p o r la
en 4
este
m é t o d o de P C R - m e t i l a c i ó n s e n s i b l e o b s e r v a m o s metilación
t é c n i c a de c o n f o r m ó m e r o s d e h e b r a s i m p l e ( S S C P ) y s e c u e n c i a c i ó n
genéticas
de
de
g e n e s , s e e n c u e n t r a n 13 c o n c a s o s d e c á n c e r d e e n d o m e t r i o y c á n c e r
Clinic
podrían
ser
c o n C M . L o s resultados sugieren que
utilizados
como
biomarcadores
con
estos
valor
Sociedad
de Bioquímica y Biología
Molecular
73. B U S Q U E D A D E M U T A C I O N E S E N L A LINEA G E R M I N A L E N
74. M E T I L A C I O N D E L P R O M O T O R D E L G E N ATM Y
E L G E N MYH E N PACIENTES C O N POLIPOS
D E E X P R E S I Ó N E N C Á N C E R D E MAMA H E R E D I T A R I O
( S c r e e n i n g of germline m u t a t i o n s
in t h e M Y H g e n e i n p a t i e n t s
colorectal polyposis) De l a F u e n t e , M.
1
COLORRECTALES
1,2
, Alvarez, K.
1 , 2
with
3
, Church, J. ,
2
López-Kostner, F. , Carvallo, P . Laboratorio d e Oncología y Genética
AUSENCIA
(Promoter
m e t h y l a t i o n o f t h e A T M g e n e a n d a b s e n c e of e x p r e s s i o n in hereditary
1
1
2
2
breast cáncer) Smalley, S . V . , Tapia. T . . Kohen, P. , Muñoz, A . ,
3
Solis.
3
1
L. , Corvalan, A . , F a u n d e z ,
4
2
P. , Devoto,
4
L. , C a m u s ,
M. ,
1
M o l e c u l a r , Clínica las C o n d e s . , L a b o r a t o r i o de G e n é t i c a
Molecular
Alvarez, M . , Carvallo, P. . Departrnento Biología Celular y Molecular,
Humana, Departamento
Pontificia
Facultad de Ciencias
1
Universidad
d e Biología
Católica
Celular y Molecular,
2
de
Chile. ,
Cleveland
Clinic
Foundation,
1
Chile ,
IDIMI,
Biológicas, Pontificia
Universidad
2
de
Chile ,
Universidad Católica de
Departrnento
de
Anatomía
Patológica, Facultad d e Medicina, Pontificia Universidad Católica de
3
Cleveland-Ohio, USA. .
3
4
Pacientes c o n múltiples pólipos colorrectales pueden corresponder a
Chile , Centro de Cáncer, Pontificia Universidad Católica de Chile .
las variantes hereditarias Poliposis A d e n o m a t o s a
El g e n A T M h a s i d o a s o c i a d o a c á n c e r d e m a m a h e r e d i t a r i o c o m o u n
Familiar,
causada
p o r m u t a c i o n e s e n el g e n A P C o P o l i p o s i s A d e n o m a t o s a a s o c i a d a a
gen
M Y H , c u y a s m u t a c i o n e s e n l a l í n e a g e r m i n a l s e e n c u e n t r a n e n el g e n
mutaciones
y
MYH.
aminoácido,
para
La
poliposis
autosómica
asociada
dominante
a
MYH
o recesiva.
puede
Nuestro
presentar
objetivo
herencia
es
identificar
de
baja
función
de
penetrancia.
Pacientes
variantes
la
alélicas
los cuales
proteína.
c o n este
que
se ha sugerido
Se
ha
cáncer
derivan
en
presentan
cambios
u n a alteración
determinado
que
las
de
e n la
personas
m u t a c i o n e s e n l a l í n e a g e r m i n a l e n el g e n M Y H e n p a c i e n t e s c h i l e n o s
portadoras
c o n m ú l t i p l e s p ó l i p o s c o l o r r e c t a l e s , e n l o s c u a l e s el a n á l i s i s p r e v i o d e l
m a y o r d e d e s a r r o l l a r c á n c e r d e m a m a q u e la p o b l a c i ó n s i n m u t a c i ó n .
gen
P o r otra p a r t e la e x p r e s i ó n del g e n A T M s e h a visto d i s m i n u i d a a nivel
APC
no
reveló
mutación.
Para
esto
se
seleccionaron
de u n a m u t a c i ó n e n este g e n tienen un riesgo 5 v e c e s
11 pacientes c o n múltiples pólipos c o l o r r e c t a l e s , a los cuales se les
de
r e a l i z ó el e s t u d i o g e n é t i c o d e l g e n M Y H . P a r a e s t o s e a m p l i f i c a r o n p o r
e s p o r á d i c o s . A d i c i o n a l m e n t e la h i p e r m e t i l a c i ó n d e l p r o m o t o r de A T M
PCR
ha
los 1 6 e x o n e s d e este g e n , y s e a n a l i z a r o n p o r la t é c n i c a d e
mRNA
sido
y de proteína
descrita
en
en cerca
cáncer
de
del 8 0 % en tumores
mama
esporádico
de
mama
y otros.
Para
conformómeros de hebra simple ( S S C P ) y secuenciación de D N A . Se
d e t e r m i n a r el e s t a d o de metilación del p r o m o t o r de A T M en c á n c e r
detectaron
cuatro
e n el g e n
mama
MYH.
paciente
en
modificó
Un
pacientes
portadores
presentó
un
de alteraciones
cambio
nucleotídico
estado
hereditario,
con
h o m o c i g o t o , el c u a l p r o d u c e u n c a m b i o d e a m i n o á c i d o d e t i r o s i n a p o r
específicos
h i s t i d i n a e n el c o d ó n 1 1 4 ( Y 1 1 4 H ) . L o s o t r o s t r e s c a s o s
secuenciación
cambios
nucleotídicos
correspondientes
en
un
a. c . 1 0 5 9 d u p C
solo
alelo
(R354QfsX),
presentan
(hetero cigoto),
c.827G>A
(C276Y).
se extrajo
bisulfito
de
p o r P C R . El
el D N A t u m o r a l
sodio
y
estado
se
de
de 4 9 biopsias,
amplificó
metilación
con
se
se
partidores
confirmó
por
d e D N A . S e d e t e r m i n ó q u e el p r o m o t o r d e A T M s e
encuentra metilado en u n 8 7 , 5 % de las biopsias. A d e m á s se detectó
la p r e s e n c i a
d e la p r o t e í n a A T M p o r I H Q u t i l i z a n d o u n a n t i c u e r p o
c.1145-27C>T. La mutación Y 1 1 4 H ha sido previamente descrita en
monoclonal. La proteína
u n a familia en Portugal, e n la cual se p r e s e n t a e n f o r m a h o m o c i g o t a
normales de ductos m a m a r i o s , y se encontró ausente en un 9 6 % de
en
dos
hermanas.
aminoacídicas
e
Para
determinar
intrónicas
e n la
el
de
en células
epiteliales
las
variantes
los t u m o r e s . E s t o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n q u e A T M e s u n s u p r e s o r de
M Y H se
requieren
t u m o r i n v o l u c r a d o e n el d e s a m o l l o d e c á n c e r d e m a m a
efecto
función
A T M fue detectada
de
posteriores estudios funcionales. F i n a n c i a d o p o r T h e C l e v e l a n d Clinic
hereditario.
F O N D E C Y T J 080595.
Foundation.
75. ANÁLISIS FUNCIONAL D E V A R I A N T E S ALÉLICAS D E L G E N
76.
ATM
AL
EN
LÍNEAS
LINFOBLASTOIDES
PROVENIENTES
P A C I E N T E S C O N CÁNCER D E MAMA HEREDITARIO.
analysis
of A T M allelic variants
hereditary
breast
cáncer
1
o n lymphoblastoid
patients)
2
F a ú n d e z , P. , López, M . , Barría, M I
Biología
Celular
Pontificia
Universidad Católica
y
Molecular,
2
A. .
Mejías.
Facultad
de
Ciencias
1
resistance
Virología
Universidad
2
D E LA SENSIBILIDAD A
LA
EXPRESIÓN
MULTIRRESISTENCIA
(Recovery
Biológicas,
de
INHIBIR
C . \
1
de Chile. , Laboratorio
RECUPERACIÓN
from
, Carvallo, P. . Departamento de
Molecular, Centro de Investigaciones M é d i c a s , Pontificia
Católica de Chile.
(Functional
cell lines
1
Sánchez,
DE
of
A
DROGAS
chemotherapy
proteins
QUIMIOTERAPIA
PROTEÍNAS
EN CÁNCER
sensitivity
expression
1
DE
by
in prostatic
1
DE
PROSTÁTICO
inhibiting
multidrug
1
cáncer)
Sánchez, C . ,
2
2
Contreras, H. , M e n d o z a , P. , C a b e z a s , J . , A c e v e d o , C. , Huidobro,
2
C. ,
1
Castellón, E. . Laboratorio
ICBM,
Facultad
de Andrologia
de M e d i c i n a ,
Universidad
Celular y
1
de Chile ,
Molecular,
Servicio
de
2
Urología, Hospital Clínico Universidad de Chile .
L a b a j a r e s p u e s t a a la q u i m i o t e r a p i a q u e p r e s e n t a el c á n c e r prostático
A T M e s u n a p r o t e í n a - q u i n a s a a c t i v a d a p o r q u i e b r e s e n la doble h e b r a
avanzado
del D N A , que fosforila a P 5 3 , y activa la transcripción de P 2 1 entre
proteínas de multirresistencia a drogas (MDR), c o m o G p - P , M R P 1 y
o t r a s f u n c i o n e s q u e l l e v a n al a r r e s t o d e l c i c l o c e l u l a r . S e h a d e s c r i t o
LRP,
q u e p e r s o n a s p o r t a d o r a s d e m u t a c i o n e s e n el g e n A T M p o s e e n u n a
quimioterapéuticos.
( C A P ) s e debe, entre otros
que
disminuyen
la
f a c t o r e s , a la p r e s e n c i a d e
concentración
intracelular
de
C o n el f i n d e e s t u d i a r l a p o s i b l e r e v e r s i ó n d e l
mayor susceptibilidad a desarrollar cáncer de m a m a . U n estudio de
fenotipo
nuestro laboratorio realizado e n 80 familias chilenas c o n cáncer de
m e d i a n t e R N A de interferencia ( s i R N A ) en cultivos primarios de C A P
M D R en C A P , inhibimos
la e x p r e s i ó n d e e s t a s
proteínas
m a m a hereditario, reveló la p r e s e n c i a d e variantes alélicas del g e n
y d e l a l í n e a P C 3 . E v a l u a m o s s u s e n s i b i l i d a d f r e n t e la e x p o s i c i ó n a u n
A T M a s o c i a d a s a e s t a p a t o l o g í a . E n el p r e s e n t e e s t u d i o a n a l i z a m o s la
panel
funcionalidad
s o b r e v i d a ( M T T ) . T r a s c o m p r o b a r u n a d i s m i n u c i ó n c e r c a n a al 6 0 % d e
S707P,
L694L
pacientes
ATM,
d e las v a r i a n t e s
en
linfocitos
alélicas
F582L,
inmortalizados
D1853N,
provenientes
p o r t a d o r e s . P a r a e s t u d i a r la f u n c i o n a l i d a d
se
trataron
radiomimético
los
linfocitos
que induce
quiebres
con
D1853V,
bleomicina,
de doble
evaluaron los niveles de P 5 3 y p-ser15-P53
de
los
d e la proteína
hebra
un
agente
del D N A . S e
m e d i a n t e W e s t e r n , la
de
drogas
quimioterapéuticas
a través
de
un
ensayo
de
la e x p r e s i ó n d e l a s 3 p r o t e í n a s l u e g o d e la t r a n s f e c c i ó n , s e o b s e r v ó
que
los cultivos
de
CAP y
P C 3 transfectados
presentaron
una
d i s m i n u c i ó n d e l 1 0 % e n l a s o b r e v i d a al s e r t r a t a d o s c o n M i t o x a n t r o n a
y
Docetaxel
patología),
(drogas
Cisplatino
de
elección
y Metotrexato,
para
el
respecto
tratamiento
de
esta
de los cultivos
sin
e x p r e s i ó n d e p 2 1 m e d i a n t e q R T - P C R , y la síntesis d e D N A a través
transfectar.
d e la i n c o r p o r a c i ó n d e [ 3 H ] t i m i d i n a e n l a s l í n e a s l i n f o b l a s t o i d e s . N o
proteínas M D R revierte e n parte la resistencia de los cultivos de C A P ,
o b s e r v a m o s diferencias significativas e n el a u m e n t o d e la c a n t i d a d de
i n c r e m e n t a n d o s u s e n s i b i l i d a d a l a q u i m i o t e r a p i a . E s t o d e m u e s t r a el
P 5 3 , d e s u fosforilación, y de la e x p r e s i ó n de p 2 1 entre m u e s t r a s y
p a p e l d e l a s p r o t e í n a s M D R e n el d e s a m o l l o d e l f e n o t i p o M D R y s u
controles
luego
linfoblastoides
de
la
inducción
del
daño
tratadas, c o n bleomicina
al
muestran
DNA.
resultados
afectan
la
indican
actividad
Fondecyt 1080595.
que las variantes
proteína-quinasa
la
de la e x p r e s i ó n
de las
líneas
p o s i b l e u t i l i z a c i ó n c o m o b l a n c o t e r a p é u t i c o p a r a la r e c u p e r a c i ó n d e la
un retardo
e n la
sensibilidad
alélicas
de
q u e la i n h i b i c i ó n
Las
síntesis d e D N A c o n respecto a las no tratadas, c o m o era esperado.
Estos
Concluimos
estudiadas
proteína
no
ATM.
a
la
quimioterapia
en
pacientes
con
CAP
horm ono-resistente. Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1070827.
XXXI Reunión
77.
EFECTO
DE
CUATRO
MEYENII) EN E L CICLO
VARIEDADES
CELULAR
DE
MACA
(LEPIDIUM
D E LÍNEAS C E L U L A R E S
DE
C Á N C E R P R O S T Á T I C O . ( E f f e c t o n c e l l u l a r c y c l e of f o u r v a r i e t i e s of
1
M a c a ( L e p i d i u m m e y e n i i ) on prostate c á n c e r cell lines) V a l d e s , S . ,
2
Sánchez. C.\
3
Del Valle, L. ,
3
Cabezas, J . , A c e v e d o , C. , Huidobro,
1
1
Tastellon, E. , Contreras, H. . Laboratorio de A n d r o l o g i a Celular y
Molecular,
ICBM,
Facultad
r-sidad Politécnica
de
Medicina,
Universidad
de
2
de Catalunya. B a r c e l o n a . E s p a ñ a ,
1
Chile ,
Servicio
Hospital Clínico U n i v e r s i d a d de Chile .
: s u c c i ó n . M a c a ( L e p i d i u m m e y e n i i ) e s u n a p l a n t a q u e c r e c e en los
a n d e s p e r u a n o s a la q u e s e h a a t r i b u i d o la c a p a c i d a d d e d i s m i n u i r el
-^arrollo
del
cáncer
prostático.
Objetivo.
Estudiar
- : a d e s d e M a c a s o b r e el c i c l o c e l u l a r y
ares
aP
de cáncer prostático.
y
PC3
con
500
el
efecto
de
la a p o p t o s i s d e l í n e a s
de
extractos
ARGINASA:
DE
POSIBLE
LA
solubles
de
PARTICIPACION EN LA DETERMINACION
INTOLERANCIA
INTERMITENTE
CRONICA
A
LA
(Effect
HIPOXIA
of A D M A
HIPOBARICA
and
Homocystein
on
A r g i n a s e activity: P o s s i b l e R o l e in d e t e r m i n i n g i n t o l e r a n c e to C h r o n i c
1
1
1
H y p o b a r i c I n t e r m i t t e n t H y p o x i a ) N a v e a s , N. , P u l i d o , R. , S i q u e s , P . ,
1
1
1
B r i t o , J . , C a r v a l l o , C . , L ó p e z , V . . I n s t i t u t o d e E s t u d i o s d e la S a l u d
1
( U N A P ) . Patrocinante: Vasthi López. E.U..
La
Hipoxia
produce
vasoconstricción
piulmonar
p a r a m e j o r a r el m t r e r c a m b i o d e 0 2 , p u d i e n d o p r o d u c i r s e h i p e r t e n s i ó n
pulmonar.
En
animales
genéticamente
adaptados
(Llama),
las
r e s p u e s t a s v a s o n s t r i c t o r a s n o se o b s e r v a n , sugiriendo
participación
de
hipertensión
mecanismos
moleculares,
aún
no
conocidos.
En
de
p u l m o n a r se c o n o c e q u e existe u n a m e n o r concentración plasmática
cuatro
del oxido nitricof N O ) , y a u m e n t o d e metilarginina asimétrica ( A D M A )
M é t o d o s . Se incubaron cultivos
Áug/ml
78. E F E C T O D E A D M A Y H O M O C I S T E I N A S O B R E L A A C T I V I D A D
INTRODUCCION:
3
úeUrología,
Anual
- j a d e s de M a c a ( b l a n c a , m o r a d a , n e g r a y roja) durante 4 8 hrs, y
y de h o m o c i s t e í n a ,
- • a l u ó s u e f e c t o e n el c i c l o c e l u l a r m e d i a n t e c i t o m e t r i a d e f l u j o y
efecto
" r la e x p r e s i ó n d e p r o t e í n a s r e l a c i o n a d a s c o n a p o p t o s i s m e d i a n t e
participación
; : e m blot. R e s u l t a d o s . Se o b s e r v o en P C 3 q u e t a n t o M a c a
M E T O D O L O G I A : Se e x p u s i e r o n por un m e s ratas W i s t a r en c á m a r a
roja
~ : m o r a d a i n d u c e n a u n a r r e s t o e n G 1 . E n L N C a P se p r o d u c e un
e:o e n G 2 p o r M a c a b l a n c a , e n c a m b i o , M a c a r o j a i n d u c e a u n
- - arresto tanto en G 1 c o m o G 2 . E n c é l u l a s L N C a P
~3ca
tratadas con
r o j a s e o b s e r v a u n a d i s m i n u c i ó n d e la e x p r e s i ó n d e b c l - 2 , a s í
de A D M A
en
i n h i b i d o r e s d e la e N O S . E s t e e s t u d i o , a n a l i z ó el
y homocisteína
el
desarrollo
hipobarica
(428
(Siques
al, 2006). La
et
calonmétrico
torr),
de
homocisteína.
la a r g i n a s a ,
hipertensión
clasificándose
en
en
pulmones
se
posible
por
e
y
de
fueron
altura.
intolerantes,
midió, por
presencia
llama
y su
inducida
tolerantes
actividad arginasa
Archival,
Los
sobre
de
ausencia
método
de
ADM
y
por
el
donados,
de
INCA-Putre, Universidad d e Chile. R E S U L T A D O S : La A D M A , resultó
: : a s a 9 en M a c a B l a n c a c o m o M o r a d a . L a s 4 v a r i e d a d e s de M a c a
s e r p o b r e i n h i b i d o r d e la a c t i v i d a d a r g i n a s a I y I I , e n p u l m ó n d e r a t a s
- r ' o n a p o p t o s i s e n a m b a s líneas c e l u l a r e s . S i n e m b a r g o , el efecto
control, tolerantes y L l a m a . Sin e m b a r g o , A D M A presentó u n fuerte
•:r s e o b s e r v a e n M a c a r o j a y n e g r a . C o n c l u s i ó n . E x i s t e u n e f e c t o
e f e c t o a c t i v a d o r s o b r e la a r g i n a s a I I , d e r a t a s i n t o l e r a n t e s . P o r o t r o
un aumento
2:optotico
rr
-
de p-53. T a m b i é n , se
y antiproliferativo
prostático h u m a n o ,
lo
de M a c a
que
observa un aumento
sobre
sugiere
líneas celulares
su
uso
como
de
potencial
l a d o , la h o m o c i s t e í n a a c t i v a a a m b a s i s o f o r m a s de a r g i n a s a en r a t a s
t o l e r a n t e s e i n t o l e r a n t e s . P o r el c o n t r a r i o , inhibió a
ambas isoformas,
p a r a el c a s o d e L l a m a . C O N C L U S I O N : E l e f e c t o a c t i v a d o r d e A D M A y
:erapéutico para esta patología.
homocisteína
sobre
la a r g i n a s a
II,
de ratas
intolerante
a
HHIC,
s u g i e r e u n a n u e v a v í a d e r e g u l a c i ó n p a r a el d e s a m o l l o d e h i p e r t e n s i ó n
p u l m o n a r de altura.
'5
DETERMINACION
ACTIVIDAD
DEL
DE
OXIDO
LOS
NIVELES
NÍTRICO
DE
SINTASA
EXPRESION
Y
ENDOTELIAL
EN
80.
AISLAMIENTO
DE
NEUROFILAMENTOS
CEFALORRAQUIDEO
DE
PACIENTES
DESDE
CON
LIQUIDO
PARAPARESIA
3ATAS E X P U E S T A A LA HIPOXIA HIPOBARICA INTERMITENTE
ASOCIADA
CRONICA: POSIBLE PARTICIPACION E N LA DETERMINACION A
(Neurofilament
L-
H T L V - l - a s s o c i a t e d p a r a p a r e s i s for p r o t e o m i c analysis) M e d i n a ,
^ T O L E R A N C I A A L A E X P O S I C I O N A L A A L T U R A (Endothelial
ü t n c O x i d e S y n t h a s e e x p r e s s i o n a n d a c t i v i t y l e v é i s i n r a t s e x p o s e d to
:~ic
Intermitten
Hypobaric
Hypoxia:
A
Possible
Role
in
1
1
é e t e m i i n i n g of I n t o l e r a n c e t o H i g h A l t i t u d e ) P u l i d o , R . , N a v e a s , N . ,
_rs,
1
1
1
P . , B r i t o , J . , L ó p e z , V . . I n s t i t u t o d e E s t u d i o s d e la S a l u d
Alberti
AL
HTLV-1
isolation
PARA
from
1
ANALISIS
cerebrospinal
1
PROTEOMICO
fluid
of
patients
1
, C. , Barriga, A. , Kettlun, A . M . , Collados, L.\
1
Puente,
J. ,
1
Valenzuela,
M.A. .
Departamento
de
Biología Molecular, Facultad de Ciencias Químicas y
Universidad
1
de
Chile. ,
Departamento
de
with
F.\
2
Cartier,
L ,
Bioquímica
y
Farmacéuticas,
Ciencias
Neurológicas,
1
f U Ñ A P ) . P a t r o c i n a n t e : U r i b e , E..
"
=
JDUCCIONla
:'::_:e
Hipoxia Hipobánca
vasoconstricción,
« m b a r g o , se o b s e r v a n
aonca.
esta
2
Facultad de M e d i c i n a , Universidad d e Chile. .
Intermitente Crónica
p a r a m e j o r a r el i n t e r c a m b i o
casos
de
hipertensión
(HHIC)
de 0 2
p u l m o n a r en
Sin
hipoxia
El ó x i d o n í t r i c o ( N O ) s e r í a f a c t o r c l a v e e n e l d e s a r r o l l o
enfermedad.
. :":-oración
La
de
regulación
inhibidores
de
de
la
la
enzima
síntesis
de
NO,
eNOS,
tales
por
de
La
Paraparesia
Espástica
Tropical
producida
p o r la i n f e c c i ó n
con
H T L V - I e s u n a n e u r o m i e l o p a t í a d e g e n e r a t i v a q u e a f e c t a al S N C . S e
caracteriza
por
componentes
la
estos,
corno
(Nf-L),
los
degeneración
intracelulares
neurofilamentos,
mediana
y
axonal
y
al l í q u i d o
consecuente
cefalorraquídeo
compuestos
pesada,
definen
de
liberación
(LCR).
subunidades
forma
y
de
Entre
pequeña
tamaño
axonal,
" : * " : : ¡ s t e í n a , es c o n s i d e r a d o u n f a c t o r c l a v e e n la r e g u l a c i ó n d e la
participando
largos.
En
«aso c o n s t r i c c i ó n ,
e n f e r m e d a d e s d e g e n e r a t i v a s se a n a l i z a n estas p r o t e í n a s c o m o
una
en
modelos
de
hipertensión
arterial
sistemica
pxJmonar. El objetivo de e s t e e s t u d i o fue d e t e r m i n a r los niveles
£ < p r e s i ó n y a c t i v i d a d d e la e N O S e n r a t a s i n t o l e r a n t e s ,
a la
y
de
HHIC.
además
en
el
transporte
en
axones
e s t r a t e g i a d i a g n ó s t i c a y p a r a el d i s e ñ o d e t r a t a m i e n t o s
terapéuticos.
La fosforilación de Nf-L e n r e s i d u o s d e S del e x t r e m o a m i n o - t e r m i n a l
V E T O DO LOGIA: Se expusieron por u n m e s ratas W i s t a r e n cámara
regula su ensamblaje c o n otras subunidades, por ende, alteraciones
~íx>bárica (428 torr) y se clasificaron en tolerantes
e n e s t a r e g u l a c i ó n d a n c u e n t a d e la d i s f u n c i ó n a x o n a l . P a r a e s t u d i a r
e
intolerantes
J a q u e s et a l . , 2 0 0 6 ) . L a e x p r e s i ó n d e e N O S s e d e t e r m i n ó
1
Í - P C R y W e s t e r n Blot desde p a r é n q u i m a de
mediante
p u l m ó n . La actividad
s u fosforilación d e c i d i m o s i n m u n o - a i s l a r l o del L C R de p a c i e n t e s p a r a
posteriormente
-
: Pática , f u e d e t e r m i n a d a p o r m é t o d o r a d i o a c t i v o . L o s n i v e l e s d e
masas
-
nocisteína fueron determinados por Elisa. R E S U L T A D O S A n á l i s i s
análisis
de RT-PCR
y Westem-Blot, no mostraron diferencias
significativas
e r t r e r a t a s t o l e r a n t e s , i n t o l e r a n t e s a l a H H I C y el c o n t r o l ( p < 0 . 0 1 i n t o l
:ontrol) La actividad especifica de e N O S
m e n o r e n las ratas
Homocisteína
|p
intolerantes
plasmática
<0.05) C O N C L U S I O N E S :
rtDlerancia
fue
(p
fue
< 0 . 0 5 ) y la
resultados
mediante
espectrometría
de
Nf-L,
por
sus
masas
moleculares
similares
y
concentración
de
incrementada
sugieren
que
la
a l a H H I C , y p r o b a b l e m e n t e el d e s a m o l l o d e h i p e r t e n s i ó n
albúmina
método
más
mediante
según
SDS/PAGE
convincente
"western
blot"
y "western
p a r a el análisis
y
MS
blot". Sin
proteómico,
resultó
ser
10%
embargo,
el
demostrado
inmunoprecipitar
Nf-L E n c o n t r a r un a u m e n t o de fosforilación en Nfs permitiría asociarlo
u m o n a r de altura, podría s e r e x p l i c a d o p o r una m e n o r p r o d u c c i ó n de
activación
*. I
tratamiento
d e b i d o a u n a i n h i b i c i ó n d e la e n z i m a p o r h o m o c i s t e í n a .
por
e v a l u ó la e l i m i n a c i ó n d e a l b ú m i n a d e l L C R m e d i a n t e c r o m a t o g r a f í a d e
afinidad y las f r a c c i o n e s eluídas p r e s e n t a r o n un r e m a n e n t e de
de
de
f o s f o r i l a c i o n e s e n r e s i d u o s d e S , lo q u e t a m b i é n s e r e f l e j ó p o r M S . S e
significativamente
significativamente
Nuestros
analizar fosforilaciones
( M S ) . L o s e n s a y o s m u e s t r a n i n t e r f e r e n c i a d e a l b ú m i n a e n el
hi p e r f o s f o
de
quinasas
terapéutico
rilantes,
más
permitiendo
que
selectivo
así
la
búsqueda
reduzca
que
estas
el
de
algún
actividades
actual
corticoides.Financiamiento: Fondecyt 105-0784 y 108-0396.
uso
de
Sociedad
81. CARACTERIZACIÓN Y E V A L U A C I Ó N
DE
de Bioquímica y Biología
NEUROBLASTOMA
82.
INFECCIÓN
HUMANO SH-SY5Y COMO M O D E L O D E ESTUDIO DE CAMBIOS
POR
EN
DE
LA
FOSFORILACIÓN
PARAPARESIA
DE
ASOCIADA
TAU
AL
OBSERVADOS
VIRUS
HTLV-I
EN
LA
(Characterization
a n d e v a l u a t i o n of S H - S Y 5 Y h u m a n n e u r o b l a s t o m a a s a s t u d y m o d e l
of
changes
in
Tau
paraparesis-associated
phosphorylation
with
1
HTLV-I
virus)
2
observed
in
Maldonado,
H. ,
1
1
P a n d o , M.E. , E u g e n i o , R. . K e t t l u m , A . M . , C o l l a d o s , I. , Cartier,
Molecular
DE
CÉLULAS
HANTAVIRUS ANDES:
CITOQUINAS
infection
of
cytokines
Y
human
and
DENDRÍTICAS
EFECTO
M E TAL O PROTE ASAS.
dendritics
matrix
(DCs):
effect
metalloproteases.)
1
HUMANAS
SOBRE
2
LA
(ANDES
on
Marsac,
the
Hantavirus
production
1
D. ,
2
(DCS)
PRODUCCIÓN
Garda,
of
S.\
3
4
P i n o , K. , G o n z á l e z , M . , E b e n s p e n g e r , R. , C a m ó n , F . , K a l e r g i s , A . ,
1
5
1
López-Lastra
2
Medicina, P U C , L a b . F a r m a c o l o g í a , Facultad de Química, P U C , Lab.
L. ,
, M . , V e a s , F. . Lab. Virología Molecular, Facultad de
1
2
Inmunología,
Facultad
Inmunogenética, Fac. Ciencias Biológicas, P U C , IRD/UM1, University
1
de
Ciencias
Químicas
y
Farmacéuticas,
1
Universidad
de
Espástica
Tropical
(TSP/HAM)
Medicina,
U
de
los
Andes ,
Lab.
4
Montpellierl .
2
Paraparesia
de
5
C h i l e . , Facultad de M e d i c i n a , Universidad d e Chile. .
La
Facultad
3
Valenzuela, M.A. . Departamento de Bioquímica y Biología Molecular,
afecta
crónica
y
Ante
una
infección
viral
el
hospedero
exhibe
una
variedad
de
p r o g r e s i v a m e n t e al S N C c a u s a n d o d e g e n e r a c i ó n a x o n a l . T a u e s u n a
d e f e n s a s . S i n e m b a r g o , h a y c a s o s e n l o s c u a l e s la e x a c e r b a c i ó n d e l
proteína
s i s t e m a d e d e f e n s a s a n t i v i r a l e s r e s p o n s a b l e d i r e c t a d e la p a t o l o g í a
que
participa
en
la
polimerización
microtúbulos, nuestro grupo demostró
residuo T181
en T S P / H A M . P r o p o n e m o s
H T V L - I , c o m o la p r o t e í n a T a x ,
y
estabilización
de
h i p e r f o s f o r i l a c i ó n d e e l l a e n el
que
productos virales
de
p r o v o c a n c a m b i o s e n la f o s f o r i l a c i ó n
d e T a u q u e p o d r í a a s o c i a r s e a la d e g e n e r a c i ó n a x o n a l . C é l u l a s
S Y - 5 Y diferenciadas fueron tratadas con
MT2
( p o s e e n el provirus inserto
SH
m e d i o de cultivo de células
y secretan Tax), como
utilizó medio d e cultivo de células K 5 6 2 . S e
control
midió largo
se
neurítico,
asociada
a la i n f e c c i ó n . C o n
Cardiopulmonar
por
infección por Hantavirus
de
una
respuesta
el fin
Hantavirus
no
de
establecer
(HCPS)
patología
si el
Síndrome
asociada
a
la
A n d e s ( A N D V ) es, en parte, consecuencia
controlada
del
sistema
inmune
contra
el
p a t ó g e n o , e s t a m o s e s t u d i a n d o el e f e c t o q u e e j e r c e la i n f e c c i ó n v i r a l
sobre
las
asociadas
características
morfológicas
a la r e s p u e s t a i n m u n e c o m o
y
funcionales
s o n las células
de
células
dendríticas
y
( D C s ) y l i n f o c i t o s T . N u e s t r a h i p ó t e s i s d e t r a b a j o p o s t u l a q u e las D C s
participación de q u i n a s a s , e s t o último p o r w e s t e r n blot. L a s células
p a r t i c i p a n e n la p a t o g e n i a d e l H C P S a t r a v é s d e u n i n c r e m e n t o d e la
e x p u e s t a s a los p r o d u c t o s virales p r e s e n t a n r e t r a c c i ó n neurítica.
p r o d u c c i ó n de citoquinas y de m e t a l o p r o t e a s a s ( M M P s ) c o n d u c i e n d o
estabilidad
de
microtúbulos,
fosforilación
de
Tau
en
T181
El
contenido de tubulina tirosilada, m a r c a d o r de microtúbulos inestables,
a
n o presenta diferencias entre los g r u p o s c o n m e d i o de M T 2 y control
demuestran
K 5 6 2 . S e e n c o n t r ó h i p e r f o s f o r i l a c i ó n d e T 1 8 1 r e s p e c t o al c o n t r o l . El
a u m e n t o de m a r c a d o r e s
estudio de quinasas
c o n la d i s m i n u c i ó n d e la f a g o c i t o s i s p o r l a s D C s i n f e c t a d a s . M á s a ú n ,
asociadas
a fosforilación de T 1 8 1 , n o
mostró
un
aumento
de
que
la p e r m e a b i l i d a d
ANDV
es
capaz
vascular.
Nuestros
de infectar DCs,
resultados
induciendo
de m a d u r a c i ó n efecto que se
un
correlaciona
c a m b i o s e n la f o r m a a c t i v a d e l a G S K 3 ? . S i n e m b a r g o , la i n h i b i c i ó n d e
s e o b s e r v ó q u e p o s t e r i o r a l c o n t a c t o c o n el v i r u s l a s D C i i n c r e m e n t a n
la C D K - 5 i m p i d i ó la h i p e r f o s f o r i l a c i ó n d e t a u y b l o q u e ó la r e t r a c c i ó n
la p r o d u c c i ó n d e M M P - 9 y d e T N F - a . E n l i n f o c i t o s T , s e o b s e r v ó q u e
involucrada
la i n f e c c i ó n p o r A N D V i n d u c e u n a a c t i v a c i ó n p o l i c l o n a l d e l o s C D 4 + y
c o n el c o n o d e c r e c i m i e n t o n e u r í t i c o . L a r e t r a c c i ó n y h i p e r f o s f o r i l a c i ó n
C D 8 + . E n r e s u m e n n u e s t r o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n q u e la i n f e c c i ó n p o r
d e T a u T 1 8 1 s e o b s e r v a n e n e l m o d e l o d e e s t u d i o p r o p u e s t o , al i g u a l
A N D V e s c a p a z d e m o d i f i c a r la f u n c i ó n d e l a s c é l u l a s a s o c i a d a s
que en pacientes c o n T S P / H A M . C D K - 5 podría estar involucrada
sistema
n e u r í t i c a . E s t o m i s m o o c u r r i ó al i n h i b i r la R o c k , q u i n a s a
en
FONDECYT 3085029.
este proceso. Fondecyt 105-0784. 108 0396.
83.
CARACTERIZACION
LOXOCELES
POR
LAETA
BIOQUIMICA
(ARAÑA
DE
ELECTROESTIMULACION
Loxosceles
López, C.
Sección
DEL
VENENO
L O S RINCONES)
(Biochemical
DE
OBTENIDO
caracterization
,
de
Riveros, B.
1 , 2
3
Salud Ambiental,
Parasitología
3
1
e
Instituto
Inmunobiologicos ,
de
Salud Publica
Molecular,
1 , 2
A.
Departamento
.
de
2
de
Universidad
2
M. - ,
, Sagua, H , Araya, J. , Vásquez,
biotecnología
of
1
laeta poison obtain by electrostimulation) A c u ñ a ,
1 , 2
Chile , Unidad
de
3
de
Antofagasta .
Patrocinante: Lopez-Lastra. M..
L o x o s c e l e s laeta o A r a ñ a de los R i n c o n e s p r o v o c a s e v e r o s c a s o s de
envenenamiento.
especies
Con
presentes
desamollado
un
vivos.
en
para
la
(veneno
Se
d e c a r a c t e r i z a r el v e n e n o
Chile,
modelo
electroestimulación
arácnidos
el o b j e t i v o
en
nuestro
laboratorio,
obtención
de
electroestimulado)
caracterizaron
proteínas
desde
se
veneno
de
ha
por
ejemplares
constituyentes
del
v e n e n o electroestimulado, su actividad de producir dermonecrosis
y
letalidad en m o d e l o a n i m a l . L o s r e s u l t a d o s m u e s t r a n que el v e n e n o
e l e c t r o e s t i m u l a d o s e c o m p o n e p r i n c i p a l m e n t e de proteínas de entre
3 0 a 35 kDa. C o n este v e n e n o se realizaron e n s a y o s d e
dermonecrótica, observando
q u e el v e n e n o
actividad
obtenido desde
arañas
h e m b r a s produjo una lesión necrótica a las p o c a s h o r a s , mientras que
el v e n e n o d e arañas m a c h o s no p r o d u j o lesión n e c r ó t i c a . A d e m á s , se
determinó
su
letalidad,
calculando
la
Dosis
Letal
50
(DL50)
en
1 , 1 2 m g / K , m a y o r a la q u e p r e s e n t a el v e n e n o o b t e n i d o d e g l á n d u l a
macerada, que
western
blot
reconocieron
e s el m é t o d o
realizado
los
con
de
un
componentes
extracción más
suero
policlonal
proteicos
este
actividad
veneno,
se
enzimática.
metodología
de
ha
determinado
Estos
obtención
de
que
resultados
veneno
usado.
Mediante
anti-veneno,
presentes
electroestimulado. Al realizar estudios de actividad
con
en
el
se
veneno
esfingomielinasa
presenta
entregan
biológicamente
una
una
fuerte
nueva
activo,
que
p u e d e s e r u s a d o e n la f o r m u l a c i ó n d e a n t í d o t o s c o n t r a e l v e n e n o d e
Loxosceles laeta. F O N D E F D 0 4 I 1 2 4 7 .
inmune.
Proyecto
financiado
por
NMII,
al
JEAI-IRD,
XXX/ Reunión
Anuat
BIOTECNOLOGIA
=4 O P T I M I Z A C I Ó N
DE LA PRODUCCIÓN
DE LA
PROTEÍNA
R= C O M B I N A N T E N D E V I R U S
R E S P I R A T O R I O SINCICIAL E N
ESCHERICHIA COLI UTILIZANDO L A C T O S A C O M O INDUCTOR.
Z c t i m i z a t i o n of p r o d u c t i o n of r e c o m b i n a n t p r o t e i n N r e s p i r a t o r y
v^zytial
virus
in E s c h e r i c h i a
coli
using
lactose
as
inducer)
E s c ñ e i r a , I. , R i v e r o s , B , P a p i c , L , V á s q u e z , A . . S e c c i ó n d e
5 r e c n o l o g i a e Inmunobiologicos, Departamento de Salud Ambiental,
"s:tuto
de S a l u d P u b l i c a , U n i v e r s i d a d T e c n o l o g í a
de C h i l e .
¿ r o c i n a n t e : L o o e z - L a s t r a . M..
_a p r o d u c c i ó n de proteínas r e c o m b i n a n t e s r e p r e s e n t a u n d e s a f í o e n
r : e s a r r o l l o del p r o c e s o f e r m e n t a t i v o . C o m o E c o l i n a t u r a l m e n t e n o
secreta grandes c a n t i d a d e s d e p r o t e í n a , las c o n d i c i o n e s de cultivo
sefcen s e r e s t u d i a d a s p a r a o p t i m i z a r la p r o d u c c i ó n . L a c o n c e n t r a c i ó n
- n j u c t o r , la f u e n t e d e c a r b o n o y la t e m p e r a t u r a d e i n d u c c i ó n ,
a f e c t a n d i r e c t a m e n t e la p r o d u c c i ó n d e p r o t e í n a s r e c o m b i n a n t e s . El
WTG
i n d u c e a l p r o m o t o r l a c y e s a m p l i a m e n t e u t i l i z a d o e n la
r v e s t i g a c i ó n p r i m a r i a . S i n e m b a r g o , s u t o x i c i d a d y a l t o c o s t o lo h a c e n
re-inveniente en producciones a escala, siendo reemplazado por
~ : : : i d L a g l u c o s a es utilizada c o m o f u e n t e d e c a r b o n o , sin e m b a r g o
*
a c e t a t o e s u n s u b p r o d u c t o d e s u m e t a b o l i s m o q u e a f e c t a la
: " : : j c t i v i d a d d e la f e r m e n t a c i ó n i n h i b i e n d o el c r e c i m i e n t o b a c t e r i a n o
: : síntesis de proteína r e c o m b i n a n t e . La lenta t a s a de t r a n s p o r t e del
? i : e r o l d e n t r o d e la c é l u l a , r e d u c e el flujo d e c a r b o n o e n la g l i c ó l i s i s ,
:i
l u y e n d o la f o r m a c i ó n d e a c e t a t o . T e m p e r a t u r a s d e i n d u c c i ó n b a j o
l>y C r e d u c e la s í n t e s i s d e p r o t e í n a s e x t r a ñ a s , a u m e n t a la s o l u b i l i d a d
• e s t a b i l i d a d d e la p r o t e í n a d e i n t e r é s y s e r e d u c e la d e g r a d a c i ó n
p r o t e o lítica. E n e s t e t r a b a j o s e o p t i m i z ó la p r o d u c c i ó n d e pro t e í n a
" r c o m b i n a n t e N del v i r u s r e s p i r a t o r i o s i n c i c i a l , c o n u n d i s e ñ o d e
s..xerficie de r e s p u e s t a B o x - B e h n k e n con tres factores; t e m p e r a t u r a
De r d u c c i ó n , c o n c e n t r a c i ó n d e g l i c e r o l c o m o f u e n t e d e c a r b o n o y
icrcentración
de
lactosa
como
inductor.
Se
realizaron
1
1
2
1
1
2
=
e x p e r i m e n t o s , o b t e n i e n d o c o m o c o n d i c i o n e s ó p t i m a s , 17°C , una
: r : e n t r a d ó n d e g l i c e r o l d e 2 g/l y u n a i n d u c c i ó n c o n 4 g/l d e
8 5 . E X P R E S I O N D E UN G E N D E QUITINASA E N E. COLI Y S U
E F E C T O S O B R E E L H O N G O F I T O P A T O G E N O Botrytis
cinérea
y
Alternaría
aiternata
( E x p r e s s i o n o f a g e n e of c h i t i n a s e s on E.coli
a n d its e f f e c t o n p l a n t p a t h o g e n i c f u n g í Botrytis
cinérea
and
Alternaria
aiternata)
N i e d m a n n , L . \ C o r d e r o , C . , V e r d u g o , I. , S a n d o v a l , C . ,
Prieto, H. , Ruiz. S , M e z a - B a s s o , L.
Instituto de Biología V e g e t a l y
B i o t e c n o l o g í a , U n i v e r s i d a d de T a l c a , F a c u l t a d de Ciencias A g r a r i a s ,
U n i v e r s i d a d de T a l c a , INIA, La P l a t i n a , Instituto de Biología V e g e t a l
y Biotecnología, Universidad de T a l c a
1
3
4
1
2
4
1
2
3
4
L a q u i t i n a ( N - a c e t i l - D - g l u c o s a - 2 - a m i n a ) e s el s e g u n d o p o l i s a c á r i d o
m á s a b u n d a n t e e n la n a t u r a l e z a d e s p u é s d e la c e l u l o s a . S e e n c u e n t r a
en organismos tales c o m o : h o n g o s , insectos, nematodos, crustáceos
y m o l u s c o s , p r i n c i p a l m e n t e . L a p a r t i c i p a c i ó n d e la q u i t i n a e n la
c o n s t i t u c i ó n d e la p a r e d c e l u l a r v a r i a d e a c u e r d o al o r g a n i s m o . L a s
q u i t i n a s a s s o n c a p a c e s d e h i d r o l i z a r l o s e n l a c e s f¿-(1, 4 ) q u e u n e n a
las u n i d a d e s d e N - a c e t i l g l u c o s a m i n a p r e s e n t e s e n la q u i t i n a . E s t a s
enzimas
p e r t e n e c e n a las p r o t e í n a s a n t i f u n g a l e s l l a m a d a s P R ,
e s p e c í f i c a m e n t e a las d e n o m i n a d a s P R - 3 . U n gen que codifica para
u n a quitinasa, aislado d e s d e T r i c h o d e r m a , fue clonado en un v e c t o r
p a r a s u e x p r e s i ó n e n E. coi. L a p r o t e í n a r e c o m b i n a n t e f u e e v a l u a d a in
v i t r o a t r a v é s d e s u a c c i ó n c o n t r a el h o n g o f i t p o p a t o g é n i c o
Botrytis
cinérea
y
Afternaria
aiternata.
Los
resultados
indicarían
una
s i g n i f i c a t i v a r e d u c c i ó n d e la v e l o c i d a d d e c r e c i m i e n t o d e a m b o s
h o n g o s . E n e s t e m o m e n t o s e e s t á e n la e v a l u a c i ó n d e p l a n t a s d e
tabaco transgénicas sobre estos m i s m o s patógenos.
INDICE GENERAL
PAG
B u r g o s A r i a s , F.
B u r z i o . V.
Programa
Conferencias
Simposios
Incorporaciones
C. Libres orales
C. Libres orales
C. Libres paneles
LockerN.J.L
L ó p e z - L a s t r a , M.
9,24
7, 9, 1 0 , 2 4 , 3 2 ,
D e la F u e n t e , M .
15, 3 9 , 6 2
D e l V a l l e . L.
63
49
B u r z i o , L.
14, 15, 3 9 , 4 0 , 5 9
Delgado, M.G.
B u r z i o , V.
1 4 , 15, 3 9 , 4 0 , 5 9
D e v o s , D.
18, 2 7
45
D e v o t o , L.
12, 3 8 , 6 2
B u s t o s , P.
Autores
47
14, 3 9
C a b e z a s , J.
62, 63
D o m e n e c h , R.
C a b r e r a , R.
45,47
D o m í n g u e z , M.
C a l d e r ó n . I.
50
D o n o s o , P.
Caligari.P.
54
D o r m o y - R a c l e t , V.
Dotto, M.C.
Callegan.E.
10,35
Campos, T.
60
D r e y e r , I.
Camus.M.
12.38,62
D u f e y , E.
C a n e s s a , P.
12, 38, 57
Díaz, W .
61
6, 3 1
8,34,61
7, 3 2
53
10, 3 5 , 4 7
59
6,31,51
35, 52
57,58
Caniuguir, A.
1 1 , 36
Díaz-Elizondo, J.
A c e v e d o , C.
62,63
C a r d e m i l , E.
44, 48
E b e n s p e n g e r , R.
A c e v e d o , M.L.
1 1 . 36
C a r r a s c o , P.
56
A c u ñ a , H.
16,42
C a r r e ñ o , L.J.
15,40
Martínez, M.
Acuña,L.
50
C a m i ó n , F.
Acuña, M.
64
C a r t i e r , L.
A c u ñ a , V.
51
Carvajal, N.
A g o s i n , E.
59
C a r v a l l o , C.
A l b e r t i , C.
63
C a r v a l l o , P.
64
15, 4 0 , 6 3 , 6 4
E i s n e r , V.
Elias, A.
E m h a r t , V.
E m h a r t , V.
8, 3 3
64
8, 3 4
50,51
53
52
45
E s c u d e r o , C.
15, 4 0
63
Espinoza, A.
54, 56
12, 15, 3 8 , 3 9 , 6 1 .
E s p i ñ e i r a , I.
65
62
Alberti.C.
Allende, J E
A l m a d a , R.D.
A l v a r e z , C.
Alvares, J . M .
15,40
Casaretto, J A .
54
Estrada, M.
8,34,46
Castellanos, J.
18, 2 7
E u g e n i o , R.
C a s t e l l ó n , E.
62, 63
Evzaguirre, J.
53
15,39
C a s t i l l o , D.
61
F a u n d e z , P.
13,25
64
10, 1 2 , 3 5 , 3 8 ,
44
12, 3 8 , 6 2
57
A l v a r e z , K.
15,39.61,62
Alvarez, M.
12, 1 5 . 3 8 , 3 9 ,
C a s t r o . F.
Castro, M.
12,38
6, 3 1 , 5 0 , 5 1
Faúndez.P.
Fernandez, J.M.
62
21
62
Alzate, J.
Amoroso, A.
A n d r a d e , C.
A n d r é s , M.E.
A q u e a , F.
Femie, A.
16,42
10,35
C a s t r o , V.
45
58
C a ñ ó n , P.
16,41
F e r n á n d e z , C.
8, 3 4 , 6 1
44
C a ñ ó n , P.
53
F e r n á n d e z , E.
12,21
18,27
F e r n á n d e z , K.
11,37,56
1 1 , 16, 3 7 , 4 1 , 53
C h a i t , B.
C h a v a t t e , L.
9, 2 4
F e m a d a , E.
50
18, 2 7
Araujo, W .
16,42
C h i l i a n , R.
56
Araya, J.
52,64
C h i p o t , C.
10, 3 5 , 4 8
59
C h u r c h , J.
15, 3 9 , 6 1 , 6 2
Flores, M.
6,31
49,50
F r a n k e , J.
18, 2 7
Araya, M.
A r c e - J o h n s o n , P.
1 1 , 1 6 , 1 7 , 1 9 , 29,
Chávez.F.P.
Femer, A.
50
Figueroa, C.R.
53
37,41,42,53
Armijo, G.
A r r e d o n d o , C.
A s p e e , A.
17, 1 8 , 2 1 , 4 2
Cifuentes, A.
57
F u e n t e a l b a , P.
1 1 , 37, 56
C i f u e n t e s , M.
45
F u e n t e s , D.
16,42
11,36
F u e n t e s , L.
1 6 , 4 1 , 55
6,31
Cifuentes-
45
H u e r t a , J.j.
Babul.J.
10,36,45
Civello, P.M.
53
F u e n z a l i d a , N.
Baez.M.
10,36,45
Clément.P.
56
G a b u s - D a r l i x , C.
7,32
C o l l a d o s , L.
15, 4 0 , 6 3 , 6 4
Banderas, A.
Barham.F.
57
Barriga, A.
51,63
Barría, M I .
9,24,62
Collao.B.
Contreras.H.
Contreras-Ferrat,
6,31
Gaete
E., C .
G a e t e - E a s t m a n , C.
62,63
G a i n z a , F.
7, 3 3
G a l l o u z i , I.
1 1 , 37
9, 2 1
55
47
16, 4 1 , 5 4
7, 3 2
A.
Bastías, A.
Bello, H.
54
C o r d e r o , C.
65
Galván.A.
12,21
6,31
C o r d e r o , E.
61
Gantz.C.
52,53
50
García, S.
64
Bisquertt, A.
16,41
Corvalán, A.
12, 38, 6 2
G a r c í a , D.
45
Black, G .
10,35
Corvalán, A.
15, 39
21
C o r v a l á n , C.
55
G a r c í a , P.
C r u z , N.
52
Geneviere, A.M.
58
G i l . F.
G ó m e z , I.
49
54
Bertin Benavides, A.
B l a n c o , F.
B l a n c o , F.
Boccardo, E.
12, 38
11, 18,97,55
Corsini, G.
45
6, 3 1
15,40
Brito, J.
63
C r u z a t , F.
B u c a r e y , J.L.
60
Cuervo, A.M.
Budini.M.
G a r c í a , M.d.l.A.
8,34,46
Cárdenas
11,37
8,33
47
González, A.
9, 2 4
48
I n o s t r o z a , P.
Bueno, S.M.
15,40
Darlix , J.
B u l l , P.
57
D a u e l s b e r g , P.
Bunster, M.
46
D e Ferrari
V a l e n t í n i, G .
9, 2 1
G o n z á l e z , D.
19, 2 9
González, M.
64
47
González, W.
49
G o n z a l e z - N i l o , F.
González. M.
G o n z á l e z . P.A.
González Villanueva,
E.
González, A.
G o n z á l e z , E.
48. 49
8. 3 4 , 5 5
15, 4 0
53
. 44
16, 4 1 , 5 4 , 5 6
J a i m o v i c h , E.
Jan a, C.
7, 3 3 , 6 0
M a r t i n e z - O y a n e d e l , J.
11. 36,46
59
^Martínez, M.
57, 58
Jedlicki, A.
8, 3 4 , 4 6
M a r t í n e z , P.
18,27
Jerez, C.A.
49. 50
M a r t í n e z - O y a n e d e l , J.
47
49, 50
M a s c a y a n o , C.
48
Matte, J.P.
53
J e r e z , C.
J o r d a n a , X.
16, 19, 2 9 , 4 2 , 5 4 ,
55, 56
G o n z á l e z , F.
47
González, G.
6, 3 1
Jorquera, G.
60
M a t u r a n a , D.
60
Juretic, N.
60
M a t u r a n a , M.J.
61
González, J.
52
Kalergis, A
G o n z á l e z , L.
61
Katz.A.
González, M.
8, 3 4 , 5 5
González, W.
10, 3 5 , 4 7
González, X.P.
51
Kettlun, A . M .
K l a g a e s , C.
Klip.A.
González-Ballester, C
12, 21
K o h e n , P.
G o n z á l e z - N i l o , D.
48, 49
Lagos, C.F.
G o n z á l e z - N i l o , F.
10, 3 5
Lamprecht, M.
G r e e n b e r g , E.P.
14, 2 6
L a n d e r e r , E.
Guiliani, N.
G u i x é , V.
Gutiérrez, J.l.
7, 1 3 , 2 6 , 3 2 , 5 1
11, 3 6 , 4 6 . 47
6, 3 1
Laporte.D.
L a r a , P.
L a r r o n d o , L.
58
L a t o r r e , R.
Gutiérrez, B.
52
L a v a n d e r a , S.
G u t i é r r e z , F.
53
Lavandero, S.
Gutiérrez, S.
15, 4 0 , 6 4
6,31
Matus, J.T.
M a u r i a c a , C.
M e d i n a . C.
17,42
12,38
M e d i n a , F.
63
7,33
12,38,62
10,35
53
14, 3 9
18, 2 1 , 5 5
60
12,38
Mejías.C.
62
M e l l a , C.
45
M e l ó , F.
M e n d o z a , P.
17,27,59
62
M e r a b a c h v i l i , G.
18, 21
M e r i n o , F.
10,36
M e z a , C.
M e z a - B a s s o , L.
46
65
49
M i c h e a , L.
8, 3 3
8, 3 3
M o l i n a , R.
6,31,51
7, 8, 3 3 , 3 4 , 6 0 , 6 1
M o l i n e t t . S.
Monasterio, O.
56, 57
L e i v a , D.
17,42
Gutiérrez, S.
57,58
Leiva, E.D.
15,40
Montecino, M.
Leiva-Ampuero,
19,29
Montenegro-Montero,
61
49
15, 4 0 , 6 3
Gutiérrez, J.L.
Guzman, L.M.
19,29
59
9,24
1 1 . 13, 2 5 , 3 7 , 5 7
56
A.
A.
G ó m e z , I.
16,42
L e ó n , G.
19,29
M o r a l e s , C.
8,34
Harnmes, S.
13,25
L e ó n , L.
17,42
M o r a l e s , S.
10, 3 5 , 4 7
M o r a l e s - Q u i n t a n a , L.
47
M o r i n , V.
58
M o r t a r a , R.
52
H e n r i q u e z , B.
1 1 , 37
L e ó n , O.
11,36
H e n r i q u e z , I.
15, 3 9
L e ó n , U.
9,24
H e n r i q u e z , J.
48
Llamas, A.
H e p p , M.
57
Lobos, M.
45
M o r í n , V.
59
Hepp, M.
56
L ó p e z , C.
64
M o y a - L e o n , M.A.
55
55
L ó p e z , X.
48
Moya-León, A.
54
7, 3 2
Moya-León, M.
16, 4 1 , 4 7 , 5 3 , 5 5
Hornera , R.
Herrera, A.
1 1 , 18, 2 1 , 3 7 , 5 5
H e r r e r a , R.
16,41,47,52,
L o p é z - L a s t r a , M.
12,21
Loreto, H.
42
Munroe.D.
15,39
53, 54
H i d a l g o , C.
60, 61
L ó p e z , C.
14,39
Muñoz, A.
12,38,62
Higuera, J.J.
12, 21
L ó p e z , M.
62
M u ñ o z , C.
52
Hinojosa, M.
57, 58
L ó p e z , V.
63
M u ñ o z , F.
59
Hinrichs, M V .
H o l m e s , D.
H o l u i g u e , L.
8, 1 2 , 2 5 , 3 3 , 6 0
L ó p e z - K o s t n e r , F.
15, 3 9 , 6 1 , 6 2
7, 18, 2 7 , 3 2
L ó p e z - L a s t r a , M.
64
1 1 , 1 7 . 18, 2 1 ,
L ó p e z - L a s t r a , M.
37, 55
7 , 9 , 1 0 , 2 4 , 32,
Muñoz, J.P.
60
M u ñ o z , R.
45
N a r a n j o , D.
49
35, 52
H u e n c h u ñ i r , P.
10, 3 5
M a c h o , P.
61
N a v a r r e t e , F.
12,38
H u i d o b r o , C.
62, 63
M a l d o n a d o , H.
15, 4 0 , 6 4
N a v a m e t e , M.
10, 3 5 , 4 4
M a n c i l l a , R.
10,35,48
Huidobro-Toro, J.P.
H u r t a d o , C.
Ibba, M.
Imschenetzky, M.
Jabalquinto, A.
J a c o b , G.
7, 3 2
15,39
6,31
58, 59
57, 58, 59
N a v a r r o , C.
Manubens, A.
59
N a v a r r o , M.
50
M á r q u e z , V.
49
Naveas, N.
63
M a r s a c , D.
9, 2 4 , 6 4
44
M a r t í n e z , F.
45
8,34
M a r t í n e z , S.
13,25
N i e d m a n n , L.
Niemeyer, M.l.
N o r a m b u e n a , T.
65
10, 3 5
18, 2 7 , 5 9
Nunes-Nesi, A.
Nuñez, G.
Oddó, D.
Oíate, F.
Oíate, J.
Olavarría, K.
Olea-Azar, C.
Opazo, A.
Orellana, A.
Orellana, M.S.
Orellana, O.
Orellana, P.
Orellana, S.
Osorio, L.
Ossandón, F.
Oyarzo, M.
Pacheco, N.
Pando, M.E.
Pando, M.E.
Panjkovich, A.
Papic, L.
Parra, S.
Parra, V.
Pasten, P.
Pedrozo, Z.
Pereira, L.
Pimentel, P.
Pino, K.
Poblete, H.
Polanco, R.
Poupin, M.J.
Prado, C E .
Prieto, H.
Puchi, M.
Puente, J.
Pulido, R.
Pérez, C.
Pérez, N.
Pérez, R.
Pérez-Acle, T.
Pérez-Arce, T.
Quatrini, R.
Ramdohr, P.
Ramírez, E.
Ramos, P.
Ramírez, C.
Ravanal, M.C.
Rebolledo, B.
Reyes, F.
Rico, S.
16,42
48
61
46
8, 11, 13, 25, 33,
37, 60
45
8, 33
6, 31
16,41
45
6, 31
15, 39, 61
54
52
18,27
15,39
49
15,40
64
18, 27
Riedel, C.A.
Rivas, A.
Rivas, C.
Rivas-Pardo, J.A.
Rivera, G.
15,40
7, 14, 32, 39
59
11, 36
18,27
Riveras, B.
Riveras, N.
Rodríguez, A.
Rodríguez, L.
Rodríguez, F.
Rodríguez, L.
Rojas, M.C.
Rojo, P.
Rosa, L.
Roschzttardtz, H.
Rout, M.
Rozenblum, E.
Ruiz, L.M.
Ruiz, S.
Ruiz-Lara, S.
65
31
34
33
61
56
54
64
48
57
19,29
15,40
65
58, 59
63
63
46
18,27
16,41,54
10, 35
9, 24
Saavedra, C.
Saavedra, J.M.
Sagua, H.
Sakurada, A.
Salas, L.
Sali, A.
Salinas , P.
Salinas, P.
Salvatierra, A.
San Martín, M.
Sánchez, A.
Sánchez, C.
Sandoval, C.
Sandoval, M.
Santibáñez, P.
Sanz-Luque, E.
Sargueil, B.
Sepulveda, F.
Sepulveda, H.
Sepulveda, F.
SepulvedaUgarte, J.
Siques, P.
Slater.A.W.
Smalley, S.
Sobrevia, L.
Solis, L.
Solís, C.
Soza, A.
Steinberg, X.
Stuardo, M.
64, 65
60
8, 16, 33, 41
12, 38
7, 32
61
51
22
44
54, 56
18,27
15, 39
51
65
16, 41, 42, 53, 54,
56
6, 49
50
52, 64
6, 31
59
18,27
55
17,42
54
6, 31
58
62, 63
65
50
57
12, 21
9, 24
10, 35
11, 37
48
46
6,
8,
8,
8, 34,
11, 37,
7, 32
7, 32
15,40
52, 53
47
44
58
16,41
53
63
18,27
12, 38, 62
8, 34
12, 15, 38, 39 ,62
59
9, 24
56, 57
58
Suazo, C.
Sánchez, A.
Sánchez, C.
Sánchez, G.
Tapia, G.
Tapia, J.
Tapia, K.
Tapia, R.
Tapia, T.
Tejada-Jiménez, M.
Tello, M.
Timmermann, T.
Toro, B.
Troncoso, R.
Uribe, E.
Urrutia B, H.
Valdenegro, M.
Valdes, S.
Valdés, J.
Valenzuela, C.
Valenzuela, M.A.
Valiente, F.
Valiente-Echeverría, F.
Vallejos, M.
Várela, C.
Vásquez, A.
Vásquez, M.
Veas, F.
Vega, A.
Vera-Otarola, J.
Verdugo, I.
Vergara, C.
Vergara, V.
Vergara-Jaque, A.
Vicuña, R.
Vidaurre, S.
Villarreal, J.M.
Villegas, J.
Villota.C.
Vollrath, V.
Vásquez, C.
Wielandt, A.M.
Wilson, C.A.M.
Yañez, M.
Zhang, M.
Zorzano, A.
51
62
53
8, 34, 61
16,42
17,42
7, 32
16,41
12, 38, 62
12, 21
50
19,29
8, 33, 61
8, 33, 61
45, 63
14, 26
16, 41, 55
63
7, 32
53
15, 40, 63,
7,
7,
7,
64
32
32
32
50
64, 65
54
64
11, 17, 37,42
9, 24, 52
65
49
58
49
12, 38, 57, 58, 59
15,40
6, 31
14, 15, 39, 40
15,40
9, 24
6, 31, 50, 51
15, 39
11, 36
54
10,35
8, 34