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RPR Test Kits
100 pruebas
500 pruebas
72505
72506
KITS PARA LA DETECCIÓN CUALITATIVA Y SEMICUANTITATIVA DE
ANTICUERPO DE LA SÍFILIS EN SUERO O PLASMA HUMANOS MEDIANTE
AGLUTINACIÓN MICROSCÓPICA EN TARJETAS DESECHABLES
Las muestras de suero y plasma humanos deben ser tratadas como
microbiológicamente peligrosas y manipuladas según reglamentación correspondiente.
No use el kit después de su fecha de caducidad.
No combine o intercambie reagentes de kits de diferentes números de lote.
Control de calidad del fabricante
Todos los reactivos fabricados y comercializados están sujetos a un completo
sistema de calidad que se inicia al recibir las materias primas y se extiende hasta
la comercialización final del producto.
Cada lote se somete a un control de calidad y únicamente se aprueba su
introducción en el mercado cuando cumple los criterios de aceptación.
La empresa posee los registros relativos a la producción y el control de cada uno
de los lotes.
ALMACENAMIENTO
Almacenar a temperaturas de 2 a 8oC cuando no se use. Las botellas deben estar en
posición vertical. No congelar.
TRASFONDO CLÍNICO
La sífilis es una infección crónica que progresa a través de distintas etapas de infecciosas:
primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. Estas etapas producen síntomas clínicos
diferentes, normalmente chancros iniciales, seguidos de una exantema sifilítica o erupción
cutánea y largos períodos de latencia. La infección no tratada puede resultar en
problemas cardiovasculares y neurosífilis.
Rotador para girar las tarjetas de prueba a 100 rpm en un círculo de aproximadamente
1 cm de diámetro.
La infección es provocada por la espiroqueta Treponema pallidum, y se adquiere
normalmente mediante contacto sexual, aunque puede también transmitirse mediante
transfusión de sangre infectada. También ocurre la infección intrauterina. Ha sido
virtualmente imposible cultivar el organismo en medios artificiales y el diagnóstico de la
infección depende comúnmente de la aparición de anticuerpos en la sangre, que
aparecen después de la infección inicial y pueden persistir durante muchos años.
La prueba RPR es una prueba “no treponémica” en cuanto a que los anticuerpos que
detecta no son específicos para el T pallidum, aunque la presencia de los anticuerpos
que detecta en el suero o plasma del paciente está fuertemente asociada con la infección
de ese organismo. Este tipo de prueba mide anticuerpos (IgG y IgM) producidos como
respuesta al material lipoideo liberado de células anfitrionas dañadas, así como material
tipo lipoproteína liberado por las espiroquetas. Estos anticuerpos tienden a desaparecer
después de una curación satisfactoria de la infección.
Vida útil válida hasta la fecha indicada en la etiqueta del kit.
EQUIPO NECESARIO
Sistema de pipetas apropiadamente calibrado y mantenido (o cuentagotas desechables)
para introducir volúmenes de 50 μL.
MUESTRAS
Las muestras de suero o plasma no deben contener células de la sangre ni
contaminación micróbica obvia. Se deben almacenar a temperaturas de 2 a 8°C hasta
7 días antes de la prueba. Las muestras que necesiten más tiempo de almacenamiento
deben permanecer congelados a una temperatura mínima de -20°C. Las muestras
congeladas deben ser descongeladas y estar bien mezcladas antes de proceder.
MÉTODO DE PRUEBA
Poner todos los reagentes, controles y muestras a temperatura ambiente antes de usar.
No usar muestras que estén muy contaminadas, excesivamente hemolizadas,
extremadamente turbias o lipémicas.
PRUEBA CUALITATIVA
1. Los controles negativos y positivos del kit se deben probar con cada lote de prueba.
2. Poner 50 μL de muestra o control en un círculo en la tarjeta de prueba.
3. Esparcir la muestra de forma pareja sobre toda el área del círculo de prueba.
4. Agitar el vial de antígeno RPR para mezclar bien.
USO PREVISTO
Estos kits están previstos para ser utilizados por personal idóneamente formado y
cualificado para la detección de anticuerpos asociados con la sífilis en suero y plasma
humanos.
5. Fijar la aguja cuentagotas en la botella escanciadora de plástico y recoger antígeno
RPR mediante succión.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Los kits RPR 100 & 500 usan partículas de carbono recubiertas con una mezcla de
antígenos lípidos que se habrán de combinar con el anticuerpo presente en el suero o
plasma del paciente. Las partículas se suspenden en un medio que contiene
componentes para eliminar reacciones no específicas. Las reacciones positivas se
muestran mediante el agregado macroscópico de las partículas. Aunque el kit está
previsto principalmente para ser usado como prueba cualitativa, los niveles de
anticuerpos pueden ser titulados duplicando la solución. Los patrones de aglutinación
se interpretan visualmente.
7. Sujetando la botella verticalmente sobre la muestra de prueba, poner una gota de
antígeno.
Antígeno RPR
Control positivo
Control negativo
Botella escanciadora
Aguja cuentagotas
Tarjetas de prueba (10 círculos)
Instrucciones de uso
8. Poner la tarjeta en el rotador y girar a 100 rpm durante 8 minutos.
9. Leer e interpretar los resultados visualmente con buena luz. (Véase “Interpretación”)
10. Devolver el antígeno no utilizado de la botella al vial de vidrio.
11. Limpiar la botella y aguja con agua destilada y dejar que se seque antes de volver a
utilizar.
PRUEBA SEMIGCUANTITATIVA
1. Hacer diluciones dobles de no diluido de 1:16 en solución salina normal.
CONTENIDO
R1
R2
R3
6. Invertir la botella escanciadora y presionar suavemente para expulsar el aire de la
aguja.
72505
100 pruebas
1 x 2 mL
1 x 1 mL
1 x 1 mL
1
1
10
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500 pruebas
1 x 10 mL
1 x 2 mL
1 x 2 mL
1
1
50
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Sólo para uso de diagnóstico in-vitro.
Todos los reagentes contienen azida sódica (< 0,1% p/v). El líquido de desecho resultante
del uso del kit debe ser eliminado con grandes cantidades de agua para evitar la
acumulación de compuestos potencialmente explosivos en las tuberías del laboratorio.
Los materiales de control suministrados derivan del suero humano. Han sido probados
a nivel de donante, con resultados negativos para la hepatitis B y C, y para el VIH 1 y 2.
No obstante, se deben tratar como si fueran capaces de transmitir enfermedad.
2. Poner 50 μL de cada dilución en un círculo separado de la tarjeta de prueba.
3. Esparcir cada dilución de forma pareja sobre el círculo de prueba.
4. Continuar como en la sección 3 de la Prueba Cualitativa.
El título de la muestra es el recíproco a la dilución más alta que se muestra en el agregado
de partículas de carbono.
Si la dilución mas alta analizada (1:16) es reactiva, proceda con otra serie de dilución
preparando diluciones dobles de la muestra desde 1:16 hasta 1:512 usando salina
fisiológica. Mezcle bien y continúe desde el 2 en la Prueba Semi-Cuantitativa.
INTERPRETACIÓN Y VALIDACIÓN DE LA PRUEBA
Reactivo fuerte (RF): Grumos grandes de partículas de carbono con fondo claro.
Reactivo (R): Grumos grandes de partículas de carbono algo más disperses que en
Reactivo fuerte.
Reactivo débil (RD): Pequeños grumos de partículas de carbono en un fondo gris claro.
Trazo Reactivo (TR): Leve aglomeración de partículas de carbono, normalmente
semejan un botón de agregado en el centro del círculo de prueba o disperso alrededor
del borde del círculo de prueba.
No Reactivo (NR): Normalmente una forma gris lisa o un botón de partículas de carbono
no agregadas en el centro del círculo de prueba.
Las muestras reactivas deben anotarse como anticuerpo positivas y, debido a la
naturaleza no específica de los anticuerpos detectados, se deben realizar más pruebas
para determinar la presencia o ausencia de anticuerpo antitreponémico.
Para que la prueba sea válida el control positivo del kit debe dar un fuerte patrón positivo
y el control negativo debe dar un resultado claramente negativo.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Los siguientes materiales han sido probados independientemente para comparar el
rendimiento de los kits RPR (3 lotes diferentes) con el de un reagente de referencia de
CDC Atlanta, y un reagente de otro fabricante.
Panel de plasma de referencia (n=20) de CDC Atlanta
Panel de prueba positiva de un hospital Británico (n=50)
Plasma normal de donante (n=50)
Control 3.1980 de la OMS
Todos las muestras dieron resultados cualitativos 100% concordantes con todos los
reagentes. (Límites de confianza al 95% entre 98.04 y 100 %). Los títulos de las muestras
positivas no varían entre reagentes en más de una dilución duplicada.
PRECISIÓN Y EXACTITUD
Para N = 10 pruebas con una muestra positiva: %CV = 0% Exactitud = ± 0%
BIBLIOGRAFÍA
1. Larsen SA.,Pettit , et coll., EDTA –treated plasma in the rapid plasm regain card test
and the toluidine red unheated serum test for serodiagnosis syphilis. J Clin
Microbiology 1983;17;431-5
2. Portnoy J. Modifications of the rapid plasma regain (RPR) card test for syphilis, for use
in large-scale testing.Am J Clin Pathol;1963;40;473-9
3. Larsen S.A., Pope V., et coll., A manual of Tests for Syphilis 9th Edition ;1998; 193 - 207
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