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GRUPO ESPAÑOL DE TRABAJO EN HISTOCOMPATIBILIDAD
E INMUNOLOGIA DEL TRASPLANTE (GETHIT)
2014/15
Taller KIR
1er TALLER NACIONAL DE
GENOTIPAJE KIR
2014-2015
Organizadoras: Dolores Planelles & Francisca González-Escribano
Consultor: Carlos Vilches
Madrid, 25 de mayo de 2015
PARTICIPANTES TALLER KIR 2014-2015
Nº
RESPONSABLE
LABORATORIO
1
Dolores Planelles
CENTRO TRANSFUSION - VALENCIA
2
Fca. González-Escribano, Cristina Abad
H. U. VIRGEN ROCIO - SEVILLA
3
Rafael González Fernández
H.U. REINA SOFIA - CORDOBA
4
Ruth López, Florentino Sánchez
H.U. Dr. NEGRIN - GRAN CANARIA
5
J. Gonzalo Ocejo-Viñals
H.U. MARQUES VALDECILLA - SANTANDER
6
Adolfo Eiras, M Luisa Abad
CENTRO TRANSFUSION - GALICIA
7
José Luis Caro Oleas
BANC SANG I TEIXITS - BARCELONA
8
Eduard Palou, Carles Serra
H. CLINIC - BARCELONA
9
JA.Campillo, M.Muro, AM.García
H.CLINICO U. VIRGEN ARRIXACA - MURCIA
10
M.Dolores de Juan Echavarri
H. DONOSTIA - SAN SEBASTIAN
11
Olga Montes Ares
C.H.U.INSULAR MATERNO INFANTIL, LAS PALMAS G.C.
12
José Luis Vicario, Antonio Balas
CENTRO TRANSFUSION - MADRID
13
Marcos González, Luis Marín
H. CLINICO U. - SALAMANCA
14
Alberto Torío
H. REGIONAL U. - MALAGA
15
Miguel Fernández Arquero
H. CLINICO SAN CARLOS - MADRID
CARLOS VILCHES, del H.U. PUERTA DE HIERRO DE MADRID, participa como CONSULTOR
17 laboratorios inscritos en 2014, pero dos de ellos no envían resultados.
El Hospital Niño Jesús de Madrid comunica su interés el 16/01/2015, pero no participa en el programa HLA-GECLID
CÉLULAS ANALIZADAS
HLA-5AB: HLA class I and II DNA typing (Low resolution)
2014 round β (envío 24.06.2014)
HLA-5AB: HLA class I and II DNA typing (Low resolution)
2015 round α (envío 20.01.2015)
HLA14-5.06β HLA14-5.07β
HLA14-5.08β
HLA14-5.09β
HLA14-5.10β
HLA15-5.01α HLA15-5.02α
HLA15-5.03α
HLA15-5.04α
HLA15-5.05α
PLATAFORMA DE RECOGIDA DE RESULTADOS Y ANÁLISIS
FORMULARIO DE RECOGIDA DE RESULTADOS
GENES KIR DE TIPAJE OBLIGATORIO
VARIANTES GENES KIR DE TIPAJE OPCIONAL
2DL5A
2DL5B
2DL5A+DL5B
2DS4full
2DS4del
2DS4full+del
3DP1full
3DP1del
3DP1full+del
Confirmación envío formulario
A mejorar:
Para imprimir y/o guardar el formulario, hay que hacerlo desde el navegador antes de pulsar
“Enviar”. Desde Google Chrome es muy fácil: pulsar el botón derecho del ratón y seleccionar la
opción “imprimir” (tanto para guardar –seleccionar guardar como pdf-, como para imprimir seleccionar impresora-)
Registro de respuestas en la nube de g oo gle d riv e
Resumen de respuestas del formulario
Laboratorios y Responsables
Análisis de respuestas:
Técnicas utilizadas
Análisis de
respuestas:
Genes de tipaje
obligatorio
Análisis de
respuestas:
Variantes de
tipaje opcional
A mejorar en Google drive para el
análisis automático de respuestas:
Permitir sólo una entrada por persona!!!
Ojo!!!!
Contador de respuestas no-modificable
Células invalidadas para el análisis automático en go ogle d riv e
6
4
HLA15-5.01α
18R: 1lab2x,1lab3x
(2mal)
HLA15-5.02α
16R: 1lab2x
1 (20%)
HLA15-5.03α
1 (20%)
Válidas
Inválidas
17R: 1lab2x,1lab2x
3(1mal)
(60%)
HLA15-5.04α
16R: 1lab2x
De las 10 células, todas las HLA14-5.β y la HLA15-5.05α correctas
En las células invalidadas se suprimió “manualmente” del Excel la
entrada de respuestas incorrectas comunicadas por el laboratorio emisor
RESULTADOS: Grado de participación
•Todos los laboratorios participantes informaron todos los
genes obligatorios (ninguno se informó como “desconocido”)
de todas las células del Taller
•Cuatro laboratorios informaron las variantes de KIR2DS4
•Dos laboratorios informaron las variantes de KIR2DL5
•Ningún laboratorio informó las variantes de KIR3DP1
•Un laboratorio informó en comentarios el genotipo KIR
CRITERIOS PARA TIPAJE CONSENSO
•El asignado por el 75% o más de los laboratorios siempre que la
participación fuese de más del 75% de los participantes
• En caso de duda, se disponía de un consultor experto (Carlos
Vilches)
• En el CTCV se testaron las 10 células por las 4 técnicas diferentes
para analizar la variabilidad inherente al método
RESULTADOS: Genotipaje KIR
En todas las células analizadas hubo tipaje consenso en los genes obligatorios.
•En 9 de las 10 células analizadas se alcanzó un 100% de concordancia en el
tipaje de los genes obligatorios.
•En la célula HLA15-5.03α se detectó una discrepancia en KIR2DL3, tipado
como positivo por 14 laboratorios y negativo por un laboratorio.
No hubo suficiente participación de los laboratorios para el tipaje de las
variantes de KIR2DS4 y 2DL5 y por tanto no se llegó a un consenso.
Los 4 laboratorios participantes en tipaje de las variantes KIR2DS4 tuvieron
una concordancia del 100% salvo en la célula HLA15-5.04α, tipada como
2DS4del por 3 laboratorios y como 2DS4full+del por el cuarto.
Puede haber alguna terminología confusa: con GenProbe todos los alelos 2DS4 dan
positiva una sonda dirigida al exón 4, que identifican como “2DS4*all full length”.
La variantes alélicas de 2DS4 que tienen la secuencia completa en exón 5 se
identifican como “2DS4*full length Ex.5”, mientras que las que tienen una deleción
de 22 pb se identifican como “2DS4*deletion Ex.5”.
La concordancia entre las cuatro técnicas analizadas por el mismo
laboratorio fue del 100%.
RESULTADOS:
Distribución de los genotipos KIR de las células testadas
1
1
g6
3
g5
g4
g18
g71
1
g2
Identificación asignada
según la base de datos de
genotipos KIR Allele
Frequency Net Database,
2015 update
1
3
HLA14-5.10β
HLA15-5.04α
HLA15-5.05α
HLA14-5.10β
HLA15-5.04α
HLA15-5.05α
HLA14-5.06β
HLA14-5.07β
HLA14-5.09β
HLA14-5.08β
HLA15-5.03α
HLA15-5.02α
HLA15-5.01α
HLA15-5.01α
Semihaplotipos KIR comunes en
caucasoides
Lado telomérico
Lado centromérico
3DL3
2DL3
3DL3
2DS2 2DL2
3DL3
2DS2 2DL2
2DL5
2DS3
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DL1
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DS1
2DL5
3DP1
full
2DL4
3DS1
2DL5
2DS4
3DL2
2DS5
2DS1
3DL2
2DS3
2DS1
3DL2
Ordóñez et al. Genes & Immunity 2008
HLA14-5.10β
HLA15-5.04α
HLA15-5.05α
Haplotipos posibles
3DL3
2DL3
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DL1
3DL3
2DL3
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DS1
2DL5A
2DS5
2DS4
3DL2
2DS1
3DL2
HLA14-5.06β
HLA14-5.07β
HLA14-5.09β
Haplotipos posibles
3DL3
2DL3
3DL3
2DS2 2DL2
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DL1
2DS4
3DL2
3DP1
full
2DL4
3DL1
2DS4
3DL2
HLA14-5.08β
Haplotipos posibles
3DL3
3DL3
2DL3
2DS2 2DL2 2DL5B 2DS3
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DL1
2DS4
del
3DL2
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DL1
2DS4
del
3DL2
2DS4
del
3DL2
2DS1
3DL2
HLA15-5.03α
Haplotipos posibles
3DL3
3DL3
2DL3
2DS2 2DL2 2DL5B 2DS3
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DL1
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DS1
2DL5A
2DS5
HLA15-5.02α
Haplotipos posibles
3DL3
2DS2 2DL2 2DL5B 2DS3
3DL3
2DS2 2DL2
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DL1
2DS4
del
3DL2
3DP1
full
2DL4
3DL1
2DS4
del
3DL2
2DS1
3DL2
2DS4
del
3DL2
HLA15-5.01α
Haplotipos posibles
3DL3
2DL3
3DL3
2DL2
2DP1 2DL1
3DP1
del
2DL4
3DS1
3DP1
full
2DL4
3DL1
Pyo et al. BMC Genomics 2013, 14:89
Población Guinea Ecuatorial (Vilches et al. no
publicado)
2DL5A
2DS5
Agradecimientos:
Carmen Martín y Alfredo Corell, de GECLID-SEI, por la cesión de las células del Taller
Luis González Palacios, por el soporte informático
Elisa Cisneros, de IIS Puerta de Hierro, por el tipaje de los subtipos de 3DP1
Miguel Mainer (Diagnostica Longwood), Itziar Olea (Thermo Físher) y Nuria Montero
(Inmuno Hospitalar S.L.), por la cesión de reactivos al CTCV para contrastar el tipaje de
todas las células del Taller