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Agar THAYER MARTIN
Medio Thayer Martin
INTRODUCCIÓN:
El medio de THAYER MARTIN preparado por MEDIBAC LAB es medio selectivo que permite el crecimiento de Neisserias
patógenas. Está recomendado universalmente para recuperar Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis.
COMPONENTES
1. Funda por 10 unidades
2. Inserto
MATERIALES REQUERIDOS NO
SUMINISTRADOS:
1. Asas Bacteriológicas
2. Guantes Estériles
3. Tapa bocas
4. Estufa a 37°C
5. Mechero de Bunsen.
METODOLOGÍA:
Principio del método: El diagnóstico cultural de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis ofrece serias dificultades al bacteriólogo debido a las exigencias
nutricionales de estos gérmenes. En los materiales de origen genital (especialmente femenino) la dificultad se incrementa por la abundante flora de contaminación
presente en estos especímenes; ello explica las numerosas fallas en la recuperación de gonococo al quedar enmascarado por el desarrollo invasor de la flora
saprófita. El medio de cultivo es altamente nutritivo ya que contiene agar base GC, hemoglobina y el suplemento de enriquecimiento VITOX.
El agregado de la mezcla antimicrobiana V.C.N.T. (vancomicina, colistina, nistatina y trimetoprima) le otorga selectividad ya que inhibe el desarrollo de
microorganismos Gram-positivos y Gram-negativos (aún el swarming de Proteus spp.) y Candida spp, mientras que no tiene efecto inhibitorio en el desarrollo de
Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis, las cuales son aisladas en plazos de 18 a 24 horas con una ausencia casi total de contaminantes. Debido a que los
requerimientos nutricionales de Neisseria meningitidis son similares a los de Neisseria gonorrhoeae, este medio puede ser utilizado para aislar el microorganismo
principalmente cuando existe otra flora microbiana u organismo de contaminación.
-GC agar Base: este medio de cultivo se emplea como medio basal para la preparación del medio Thayer Martin (original o modificado) y Agar Chocolate con o sin
enriquecimiento para la recuperación de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis. El agar GC Base para agar THAYER MARTIN se prepara a partir del medio
de cultivo deshidratado, materia prima producida por la casa OXOID y tiene la siguiente composición:g/ l
Special peptone........................................15.0
Corn starch..................................................1.0 g
Sodium Chloride..........................................5.0 g
Di-potassium hydrigen phosphate...............4.0 g
Potassium hydrogen phosphate..................4.0 g
Agar...........................................................10.0 g
Nota: La fórmula detallada corresponde al GC Agar Base simple concentración. En el Medio TM se encuentra en doble concentración.
-Solución de Hemoglobina al 2%: solución estéril, lista para usar. Está preparada a partir de una materia prima deshidratada de origen bovino y es un
enriquecimiento adecuado para el cultivo de Neisserias, Haemophilus influenzae y estreptococos. Las soluciones de hemoglobina tienen la ventaja que se pueden
esterilizar por autoclave pero no son útiles como un indicador de la hemólisis bacteriana
-Suplemento VITOX: suplemento estéril liofilizado que se usa para el aislamiento de bacterias nutricionalmente exigentes. Es particularmente recomendado para la
preparación de Agar Chocolate Enriquecido a partir de Agar Base GC y hemoglobina para la detección y aislamiento de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria
meningitidis.
También se utiliza como enriquecimiento para el cultivo de Haemophilus influenzae.
VITOX SUPPLEMENT (OXOID)
REHYDRATION FLUID
Distilled water……………….10.0ml
Glucose……………………….1.0g
VITOX
Vitamin B12……………………..0.1mg
Adenine SO4…………………..10.0mg
L- glutamine………………….100.0mg
Guanine HCl…………………….0.3mg
p- Aminobenzoic acid…………0.13mg
L- cystine……………………….11.0mg
NAD (Coenzyme I)………………2.5mg
Cocarboxylase………………….1.0mg
Ferric nitrate…………………..…0.2mg
Thiamine HCl……………………0.03mg
Cysteine HCl……………………259.0mg
VCNT SELECTIVE SUPPLEMENT (OXOID). Los antimicrobianos que constituyen este suplemento son utilizados en el medio Thayer Martin Modificado como
inhibidores de los organismos contaminantes de la muestra
Vancomycin………………………….1.5mg
Colistin methane sulphonate………3.75mg
Nystatin……………………………….6,250 IU
Trimethoprim………………………….2.5mg
CRITERIOS DE DESEMPEÑO Y LIMITACIONES DEL MÉTODO
- La mezcla antimicrobiana VCNT difiere de las mezclas empleadas en otros medios selectivos, en la inhibición casi total del desarrollo de contaminantes comunes:
Proteus, Candida spp., Neisserias saprófitas, Moraxella (Branhamella) catarrhalis, Staphylococcus spp, etc. De todas maneras deben extremarse las precauciones de
asepsia durante la toma de la muestra para evitar una contaminación masiva.
- Si no se cuenta con equipos especiales, (cámara húmeda y atmósfera de CO2) puede subsanarse el inconveniente, colocando las placas en un recipiente hermético
(desecadores, envases de hoja lata, etc.), con un algodón humedecido y una vela encendida, que al consumir el oxígeno del ambiente brinda una atmósfera
adecuada de CO2 (3-7 %).
Fecha: 06/05/2015 Rev.01
- La temperatura de la estufa de cultivo debe ser de 35-36ºC para el mejor desarrollo de las Neisserias patógenas. A esta temperatura desarrollan perfectamente en
los otros medios, todos los demás gérmenes que habitualmente se cultivan a 37ºC.
- No se recomienda el empleo del medio selectivo TM para la siembra de L.C.R, ya que de estar presentes Neisseria meningitidis o Neisseria gonorrhoeae será en
cultivo monomicrobiano. En tales casos se recomienda el agar chocolate suplementado de VITOX.
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS:
La placa de agar THAYER MARTIN viene lista para ser utilizada.
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS:
- GC Agar Base (doble concentración) y Solución de Hemoglobina al 2%: a 10-35 ºC.
- Suplemento VITOX, Suplemento V.C.N.T. y Solvente estéril: a 2-8 ºC.
Nota: en caso de haber reconstituido los suplementos VITOX y V.C.N.T., pueden ser conservados a -20 ºC hasta 3 semanas.
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro, colocando las placas en posición invertida para evitar que el agua de condensación pueda caer sobre la
superficie del medio, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la etiqueta en el
paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Este producto debe manipularse con cuidado evitando movimientos bruscos o caídas que puedan resquebrajar la capa del medio
De acuerdo al estudio (Condiciones de Almacenamiento de los Medios) realizados por Medibac Lab. Los medios de cultivos preparados para su transportación tienen
una tolerancia de hasta 24 horas con una temperatura de 2 a 35°C, una vez llegado a su destino final el mismo debe ser almacenado a una temperatura de 4 a 8°C.
Nota: El producto debe evitar temperaturas inferiores a -0°C para evitar congelación del medio, lo que ocasionaría el deterioro del mismo, y evitar temperaturas
superiores a 35°C para que no produzca condensación interna en la placa lo que podría afectar la fidelidad de los resultados.
Conservado en condiciones óptimas el medio es estable hasta la fecha de expiración señalada.
PROCEDIMIENTO:
En superficie, estriar directamente el material en estudio.
En general podemos detallar:
1) Exudados nasales, faríngeos y conjuntivales: las muestras se toman con hisopos pretratados y se procede a su siembra directa.
2) Orinas: se toman los primeros 5 a 10 ml de la orina matinal y se siembra con ansa una gota del sedimento centrifugado.
3) Muestras de genitales masculinos: si se efectúa la siembra directa, la muestra se recoge con ansa. Cuando la siembra no se realiza de inmediato, el material debe
tomarse con hisopos pretratados, y transportarse en el Medio de Stuart o Amies.
4) Muestras de genitales femeninos: las muestras se toman con hisopos pretratados utilizando espéculos sin lubricantes. Si el material no se procesa directamente,
proceder como en 3.
5) Muestras de rectales: proceder como en 3 y 4.
Siembra y método de aislamiento
La siembra inicial con hisopo o ansa, se practica sobre un tercio de la superficie de la placa, completando el aislamiento con ansa.
Incubación
En atmósfera con 3-7 % de CO2, a 35-36 ºC durante 18-48 horas entre las 18 y 24 horas de incubación.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ANALÍTICOS:
Observar las características de las colonias. Las colonias de gonococos y meningococos obtenidas en este medio selectivo son usualmente opacas, grisáceas,
convexas, de 1-4 mm de diámetro, luego de 48 horas de incubación pueden transformarse en colonias mucoides.
CONTROL DE CALIDAD:
El agar THAYER MARTIN tiene un estricto control de calidad a lo largo del proceso de producción. El producto final tiene un cuidadoso control para asegurar que
cada lote llene las especificaciones del medio: Color, consistencia, tersura, esterilidad, pH.
ASPECTOS FISICOS DEL MEDIO
ESTADO
Medio solido de color marrón, envasado en placa de petri.
CUMPLE
Color del medio solido
Marron
CUMPLE
pH
6,8 - 7,3
7,2
La consistencia del medio debe ser ligeramente dura, para que permita la
siembra de muestras sin romperse.
CUMPLE
Apariencia
Consistencia
4,5 mm
Volumen del medio
Tersura
Esterilidad
18cc que deben dar con una capa de 4 - 5 mm de agar en placa de petri.
El medio debe ser completamente liso, no debe presentar rugosidad ni
burbujas que dificulten la siembra.
CUMPLE
El medio antes de usarse debe encontrarse libre de cualquier crecimiento
microbiano
CUMPLE
El desempeño del medio se controla mediante el cultivo de cepas control ATCC de:
Neisseria gonorrhoeae 19424
Staphylococcus epidermidis 25923
Escherichia coli 25922
Candida albicans 10231
Proteus mirabilis 12453
VALOR DE REFERENCIA:
Este medio al usarse, debe ser estéril y permitir un desarrollo óptimo de las cepas de referencia.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS:
Ya que para la utilización de este medio se deben manipular muestras clínicas y microorganismos patógenos, se deben guardar las más estrictas normas de asepsia
y antisepsia, los cultivos una vez leídos deben esterilizarse y luego colocarse en bolsa roja identificada y entregada a la compañía especializada en recolección de
productos biológicos de desecho.
Laboratorio Fabricante: Medibac
Química Responsable: Dra. Juana Cedeño Vélez.
Fecha: 06/05/2015 Rev.01