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TRANS-BLOT TURBO
BLOTTING SYSTEM BIORAD
PNI-036
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DADES PRÒPIES DEL PNI
Títol: UTILITZACIÓ DEL TRANS-BLOT TURBO BLOTTING SYSTEM
Autor:
Càrreg: Càrreg: C 03 Tècniques
instrumentals
Signatura de l'autor:
Vist- i-plau de la direcció del centre:
Nom:
Data:
Signatura:
Centre: institut BONANOVA.
Data d'implantació del PNI :
Juny 2014
Índex:
1. INTRODUCCIÓ .................................................................................................. 3
2. RESPONSABILITAT .......................................................................................... 4
3. DESCRIPCIÓ ................................................................................................
3.1 Equipo y reactivos................................................................................... 5
3.2 Panel de mandos ..................................................................................... 6
4. PROCEDIMENTS D'UTILITZACIÓ ...................................................................
7
4.1 Transferencia utilizando pack del fabricante..........……...………………..
4.2 colocación Pack de transferencia .........................................................
4.3 Transferencia protocolo turbo ...........................................................…
4.4 Transferencia protocolo preprogramado ...........................................…
4.5 Transferencia protocolo Nuevo ..........................................................…
4.6 Transferencia sistema tradicional.......... ...........................................…
4.7 Mantenimiento......................................... ...........................................…
5. NORMES DE SEGURETAT ……………………………………………………….
7
8
11
11
12
12
13
13
6. ANEXES
6.1 Dades tècniques .................................................................................. 14
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1. INTRODUCCIÓ
Semi-Dry Western blotting
es una técnica muy empleada en los
laboratorios de diagnostico. Los protocolos convencionales de ésta técnica requieren
un tiempo de realización superior al sistema desarrollado por Bio-Rad. Con el
sistema Trans-Blot turbo se acelera el proceso sin perder rendimiento.
El sistema Trans-Blot turbo esta formado por el instrumento principal con
dos casetes de transferencia y kits con el material adicional necesario, que contiene
papeles/membranas impregnadas en tampón de transferencia.
Ambos casetes de transferencia se pueden acoplar tanto a 2 mini geles
como a 1 midi gel de Biorad.
Una vez cargado el casete de transferencia se pueden seleccionar los
protocolos de transferencia fácilmente a través del menú de la pantalla del aparato.
Este sistema muestra una gran eficiencia reduciendo el tiempo del proceso
a tan solo tres minutos, sin ser necesaria la equilibración del gel tras la
electroforesis.
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2. RESPONSABILITAT
2.1
Tota persona que utilitzi el trans-blot turbo blotting system en el
laboratori de pràctiques de l'escola és responsable de fer-ho segons la
norma que a continuació s'especificarà. És, per tant, responsable de
llegir, entendre i complir tots els requisits del present PNI.
2.2
El professorat que durant una pràctica del seu crèdit faci utilitzar
el trans-blot turbo blotting system, serà responsable de fer complir la
normativa. Estant sempre el PNI a l'abast de tots els usuaris.
2.3
Un ús inadequat o que no segueixi la normativa serà objecte de
sanció, obtenint-se una qualificació negativa en el crèdit en el qual
s'hagi incomplert la norma.
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3. DESCRIPCIÓ
3.1 Equipo y reactivos
El trans blot turbo system es un instrumento que transfiere de forma eficaz rápida y
reproducible.
Cada pack de transferencia contiene los materiales necesarios para transferir un
mini gel, un midi gel y/o dos mini geles a la vez. Este pack esta formado por dos
montones de láminas impregnadas cada uno en un tampón iónico de transferencia y
la membrana de nitrocelulosa o PVDF. Estas membranas no requieren tratamiento
previo.
El aparato consta de dos casetes de transferencia que pueden utilizarse
simultáneamente siempre que en ambos se emplee el mismo protocolo según las
combinaciones descritas en la tabla 1. El tiempo de inicio puede diferir.
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Las ranuras de los casetes se definen como A y B (ver Fig. 2) y ambos casetes son
intercambiables en dichas ranuras y una de ellas puede permanecer vacía mientras
funciona la otra.
3.2 Panel de mandos
El panel de mandos consiste en una pantalla LCD en la parte frontal del equipo. Hay
tres botones bajo la pantalla que permiten navegar por el menú. Otros tres botones a
la derecha de la pantalla se emplean para seleccionar protocolos. Por último el
teclado alfanumérico se emplea para introducir texto y números.
En el menú principal hay 3 opciones disponibles:
New mode: crea, inicia y guarda un nuevo protocolo.
List mode: Selección de protocolos a partir de la lista de biorad.
Turbo mode: acceso rápido a protocolo de transferencia para muestras de proteínas
entre 5-150kDa de peso molecular.
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4. PROCEDIMENTS D'UTILITZACIÓ
4.1. Transferencia utilizando packs del fabricante
Recomendaciones
•
•
•
usar guantes durante todo el procedimiento para prevenir
contaminaciones en geles y/o membranas.
los geles deben ser transferido directamente tras la electroforesis sin
equilibración.
Abrir el pack en el momento en que se vaya a utilizar.
Seleccione el pack de transferencia apropiado según la tabla 2. Estos packs son
estables durante varios meses a temperatura ambiente, sin embargo se recomienda
su almacenaje a 4ºC. ningún componente del pack requiere pretratamiento.
Mini transfer pack (Un mini Gel)
Contiene dos montones de láminas apiladas impregnadas en tampón, el de la
derecha contiene el tampón anódico (debajo del gel) y sobre éste se encuentra la
membrana. El pocillo de la izquierda contiene el montón para el cátodo (se
dispondrá sobre el gel).
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Midi transfer pack (Un midi Gel o dos mini geles)
Contiene dos montones de láminas apiladas impregnadas en tampón, uno sobre el
otro, el de la parte superior tiene una pestaña en la parte derecha y es el anódico
(debajo del gel). El que corresponde al catódico tiene la pestaña en la parte
izquierda y se dispone sobre el gel.
4. 2 colocar pack de transferencia en el casete
•
•
las membranas y pilas de láminas están diseñadas para pasar del envoltorio al
casete. no invertir el orden.
el pack de trasferencia se debe colocar lo más centrado posible sobre el ánodo
del casete. (Fig. 7)
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•
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no se recomienda mover las láminas una vez depositadas, puede generar
burbujas de aire entre las capas.
En la figura 8 se representa el ensamblaje final del pack de transferencia.
En las figuras 9 y 10 se representa el paso a paso para el montaje de mini y midi transfer
pack respectivamente, y a continuación (Fig. 11) la disposición del gel en función de su
tamaño y el pack de transferencia empleado.
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4.3 Transferencia usando el protocolo Turbo
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El botón “turbo” accede directamente al programa “Mixed MW”, diseñado para
transferencia eficiente de una gran variedad de mezclas de proteínas.
Procedimiento:
1. encender el aparato.
2. Pulsar el botón turbo.
3. elegir la opción de número y tipo de gel que corresponda con los botones de la
derecha. Mini protean TGX gel pueden transferirse utilizando el protocolo para 1
mini gel o el protocolo para 1 mini protean TGX gel.
4. Pulsa el botón A:RUN para el casete en la ranura A o B:RUN para el casete en la
ranura de abajo, si se transfieren los dos casetes de forma simultanea debe ser
con el mismo protocolo.
5. El protocolo se inicia de forma automática y las condiciones y progreso aparecen
en la pantalla.
6. Cuando el protocolo termina aparece el mensaje “run complete”.
4.3.1 Desensamblaje y retirada de membrana
Para retirar la membrana tener precaución, el casete puede quemar.
1. Abrir el casete, descartar el montón de láminas superior.
2. Retirar la membrana y proceder con ella según protocolo posterior (tinción ,
bloqueo, etc.)
3. Descartar montón de láminas inferior.
4. Retirar exceso de tampón.
5. lavar base y tapa con agua desionizada y secar con papel.
4.4 Transferencia usando un protocolo preprogramado.
Todos los pasos son iguales a los descritos en el apartado 4.3 y 4.3.1 excepto el
paso 2 del apartado 4.3:
2. Pulsar el botón LIST y escoger entre los protocolos disponibles descritos en la
tabla 3.
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4.5 Transferencia usando un nuevo protocolo.
1. En la pantalla principal pulsa el botón NEW. aparece la pantalla de edición.
2. Definir los parámetros voltaje (máximo 25V), corriente (máxima 2.5A) y tiempo
(max 90minutos) usando el teclado alfanumérico.
3. Este protocolo se puede guardar bajo un nombre y aparecerá posteriormente
en LIST , USER-DEFINED protocols.
4.6 Transferencia usando sistema semi-Dry tradicional.
1. Equilibrar el gel en tampón Towbin (25mM Tris, 192mM Glycina pH 8.3, 20%
MeOH) durante 10 minutos.
2. Sumergir dos piezas de papel de filtro extra-Thick (2.4mm) o 6 de Thick
(0.8mm) en tampón de transferencia.
3. sumergir la membrana en metanol durante 30 segundos. lavar 1 o 2 minutos
con agua y equilibrar en tampón de transferencia en agitación 10 minutos.
4. montar el sandwich de transferencia. Fig. 19.
5. cerrar el casete de transferencia e introducirlo en la ranura.
6. seleccionar LIST del menú principal y protocolo STANDARD SD de la lista de
protocolos pre programados de Bio Rad.
7. pulsar RUN.
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4.7 Mantenimiento
El trans blot turbo system requiere poco mantenimiento. Después de terminar de
usarlo lavar cada casete, base y tapa, con agua desionizada hasta eliminar sales
residuales y prevenir depósitos. Secar el casete ante de guardarlo.
Esporádicamente se pueden limpiar los componentes con agua y detergente suave,
no abrasivo ni solventes orgánicos y comprobar que el ventilador de refrigeración
esta libre de residuos y suciedad.
5. NORMES DE SEGURETAT
En principio el sistema de transferencia turbo Blot no es un aparato peligroso
por lo que la única consideración a tener en cuenta es que su empleo debe
seguir lo descrito en este protocolo.
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6. ANNEXES
6.1. DADES TÈCNIQUES
Trans-Blot ® Turbo TM Instrument
Dimensiones: (L x W x H) 26 x 21.1 x 20.4 cm
Peso: 8lb con casetes 4.5 lb sin casetes
Potencia de entrada: 100-240 VAC, 276VA 50-60Hz 175 W max
Fusibles: dos 6.3 A, 250V Fusibles localizados sobre la conexión de alimentación
Puerto USB: Si, solo de entrada para actualizaciones del sistema.
Ventilador de refrigeración: si
Potencia de salida: 0-26 VAC (incremento de 1V), 0-2.6 A DC (incremento de 0.1A)
para cada casete.
Condiciones de uso: 15-31ºC de temperatura, 0-95% humedad relativa.
Trans_Blot ® Turbo TM cassettes
Dimensiones: (L x W x H) 20.2 x 16.0 x 4.5 cm
Ánodo: electrodo en placa de titanio platinizado
Cátodo: acero inoxidable
Peso: 1.5lb
N º sèrie 690BR006724
Nº etiqueta 2087
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