1. No category

REUNIÓN NACIONAL DE
INVESTIGACIÓN PECUARIA
MEMORIA
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ISSN en trámite
Editores
Ricardo Basurto Gutiérrez
Ana María Anaya Escalera
LI RNIP.
Toluca dede
Lerdo,
Edo. de Méx.
Reunión
Nacional
Investigación
1
Sección:
Bienestar
y comporatmiento
Pecuaria Memoria.
Año
1. Núm.
1. Vol. 1.animal
Nov. 2015
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm. 1. Vol. 1. Nov.
2015. Es una publicación anual editada por el Instituto Nacional de Investigaciones
Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP). Progreso No. 5, Barrio de Santa Catarina,
Delegación Coyoacán, México, D.F., C.P. 04010. www.inifap.gob.mx. Editor
Responsable: Ricardo Basurto Gutiérrez. Reserva de derecho al uso exclusivo 04-2015120215110700-102. ISSN en trámite. En noviembre de 2015 se realizaron 1000 ejemplares.
Los artículos publicados se pueden reproducir total o parcialmente, siempre que se otorguen los
créditos correspondientes, asimismo, no representan la opinión del Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias; por lo que, son atribuibles al o autores(as) de
los mismos. La naturaleza de los trabajos presentados, puede obligar a los autores(as) a referirse
a nombre comerciales de algunos productos químicos; este hecho no implica recomendación
de los productos citados, tampoco significa respaldo publicitario.
2
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
REUNIÓN NACIONAL DE
INVESTIGACIÓN PECUARIA
MEMORIA
Editores
Ricardo Basurto Gutiérrez
Ana María Anaya Escalera
i
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Toluca de Lerdo
, Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1.
Estado de México
ii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
PRESENTACIÓN
L
a Reunión Nacional de Investigación Pecuaria (RNIP) es el evento científico
más importante de su tipo en México, el cual se ha realizado anualmente
desde 1964.
En 2015, la ciudad de Toluca de Lerdo, Estado de México fue sede de la
quincuagésima primera RNIP (LI RNIP), su receptora, la Universidad Autónoma
del Estado de México (UAEM), una institución pública de alto prestigio en
docencia, investigación y extensión, a través de su Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia.
La LI RNIP se realizó en el marco de las atribuciones de la Secretaría de
Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación, bajo el auspicio
del Gobierno del Estado de México, y organizada por el Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP), la Universidad
Autónoma de Querétaro (UAQ), la Coordinadora Nacional de las Fundaciones
Produce (COFUPRO), la Universidad Autónoma del Estado de México (UAEM), la
Universidad Veracruzana (UV), el Colegio de Postgraduados (COLPOS), la
Asociación Mexicana de Técnicos Especialistas en Ovinocultura, A.C. (AMTEO
A.C.), la Confederación Nacional de Organizaciones Ganaderas (CNG), el
Instituto de Investigación y Capacitación Agropecuaria, Acuícola y Forestal del
Estado de México (ICAMEX), los Fideicomisos Instituidos en Relación con la
Agricultura (FIRA) y la Academia Veterinaria Mexicana, A.C.
En esta edición de la RNIP, se presentaron 248 trabajos de investigación e
innovación, aprobados para su publicación por su comité científico,
relacionados con las cadenas productivas de bovinos carne, bovinos leche,
ovinos, caprinos, porcinos, aves, abejas miel y otras, en diez ejes temáticos
denominados: bienestar y comportamiento animal; biotecnología y biología
celular en salud animal; endocrinología y reproducción; inocuidad de
alimentos; mecanismos de infección y enfermedad; mejoramiento y recursos
genéticos; nutrición animal; salud animal, diagnóstico, control y epidemiología;
socioeconomía, validación y transferencia de tecnología; utilización de forrajes
y manejo de pastizales.
Bajo el lema: “Innovación sustentable para el sector pecuario”, en la LI
RNIP se presentó el Simposio sobre mitigación de las emisiones de metano en la
producción ganadera, donde especialistas analizaron la importancia de
cuantificar y disminuir las emisiones de metano de los rumiantes.
iii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Adicionalmente, se realizaron tres paneles temáticos: Producción de leche de
bovino, Producción de carne de bovino y Nanotecnología aplicada en
ganadería, donde especialistas analizaron y discutieron la situación actual y
algunas estrategias para la mejora de la ganadería.
En la LI RNIP, la AMTEO, A.C. impartió el Curso Bases de la Cría Ovina a sus
agremiados, productores, técnicos y profesores de instituciones de educación
superior, mediante conferencias impartidas por expertos nacionales e
internacionales en disciplinas de la producción ovina.
En el marco de la RNIP 2015, el INIFAP celebró el 30 Aniversario de su
fundación, por fusión del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales (INIF),
el Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas (INIA) y el Instituto Nacional de
Investigaciones Pecuarias (INIP) el 23 de agosto de 1985. En esta
conmemoración, el Instituto presentó sus antecedentes, el presente y un
resumen de contribuciones para el desarrollo del campo mexicano.
Para estimular la productividad científica de investigadores y estudiantes,
se otorgó un reconocimiento a los mejores trabajos en las modalidades oral y
cartel, considerando los criterios: relevancia, aportación científica y calidad de
presentación. Del mismo modo, en la ceremonia de inauguración de la Reunión
se entregó el “Reconocimiento al Mérito Pecuario” al Dr. Heriberto Román
Ponce, en virtud de sus aportaciones científico-tecnológicas al desarrollo del
sector ganadero de México.
En la Expo Agropecuaria, instituciones de investigación y educación,
organizaciones de productores, artesanos y empresas del sector agropecuario
del país, promocionaron y ofertaron sus productos y servicios.
El Comité Organizador
iv
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
COMITÉ DIRECTIVO
PRESIDENCIA
Eruviel Ávila Villegas
Gobernador Constitucional del Estado de México
José Eduardo Calzada Rovirosa
Secretario de Agricultura, Ganadería, Desarrollo
Rural, Pesca y Alimentación
VICEPRESIDENCIA
Luis Fernando Flores Lui
Director General del Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias
Jorge Olvera García
Rector de la Universidad Autónoma del Estado de
México
Roberto Montes de Oca Jiménez
Presidente de la Asociación Mexicana de
Técnicos Especialistas en Ovinocultura A.C.
VOCALÍAS
Enrique Luis Graue Wiechers
Rector de la Universidad Nacional Autónoma de
México
Roberto Montes de Oca Jiménez
Director de la Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia de la Universidad Autónoma del
Estado de México
Jesús María Moncada de la Fuente
Director General del Colegio de Postgraduados
Oswaldo Guillermo Cházaro Montalvo
Presidente de la Confederación Nacional de
Organizaciones Ganaderas
Gilberto Herrera Ruiz
Rector de la Universidad Autónoma de Querétaro
Francisco Velázquez Sarmiento
Director de la Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia de la Universidad Veracruzana
v
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Leopoldo Henri Paasch Martínez
Presidente de la Academia Veterinaria Mexicana
A.C.
Pedro Mijares Oviedo
Director General del Instituto de Investigación y
Capacitación Agropecuaria, Acuícola y Forestal
del Estado de México
Mauricio Lastra Escudero
Presidente de la Coordinadora Nacional de las
Fundaciones Produce A. C.
Rafael Gamboa González
Director General de Fideicomisos Instituidos en
Relación con la Agricultura
vi
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
COMITÉ ORGANIZADOR NACIONAL
PRESIDENCIA
Luis Fernando Flores Lui
Director General del Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias
VICEPRESIDENCIA
Jorge Olvera García
Rector de la Universidad Autónoma del Estado de
México
Roberto Montes de Oca Jiménez
Presidente de la Asociación Mexicana de
Técnicos Especialistas en Ovinocultura A.C.
COORDINACIÓN GENERAL
Jorge Fajardo Guel
INIFAP
COORDINACIÓN DE LA REUNIÓN
CIENTÍFICA
Francisco Suárez Güemes
FMVZ-UNAM
COORDINACIÓN DEL COMITÉ
CIENTÍFICO
Ricardo Basurto Gutiérrez
INIFAP
Ana María Anaya Escalera
INIFAP
COORDINACIÓN DE LA
CONFERENCIA MAGISTRAL
Diodoro Batalla Campero
Academia Veterinaria Mexicana A.C.
CORDINACIÓN DEL SIMPOSIO
César Augusto Mejía Guadarrama
INIFAP
COORDINACIÓN DE PANELES
TEMÁTICOS
Ricardo Flores Castro
INIFAP
Bertha Patricia Zamora Morales
INIFAP
COORDINACIÓN DEL PREMIO AL
MÉRITO PECUARIO
Miguel Caballero Deloya
COLPOS
José Antonio Rentería Flores
INIFAP
COORDINACIÓN DE 30 AÑOS DE
CIENCIA Y TECNOLOGÍA DEL INIFAP
Luis Reyes Muro
INIFAP
Saúl Vargas Mir
INIFAP
vii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
COORDINACIÓN DE LA EXPO
AGROPECUARIA
Luis Reyes Muro
INIFAP
Leonel Martínez Rojas
FMVZ-UAEM
COORDINACIÓN DE ACTIVIDADES
CULTURALES
Ricardo Flores Castro
INIFAP
Guadalupe Constanza Méndez Villalobos
FMVZ-UAEM
COORDINACIÓN DE PROMOCIÓN,
DIFUSIÓN Y PRENSA
Luis Reyes Muro
INIFAP
Leonel Martínez Rojas
FMVZ-UAEM
Claudia Giovanna Peñuelas Rivas
FMVZ-UAEM
PÁGINA WEB
José Juan Silva Vanegas
INIFAP
Oliver Rentería Silva
INIFAP
Patricia Rentería Ríos
INIFAP
Adrián Rivera Flores
INIFAP
Jazmín Viveros Arellano
INIFAP
OPERACIÓN Y LOGÍSTICA
Rubén Santos Echeverría
INIFAP
Sara Olazarán Jenkins
INIFAP
Martha Eugenia Valdovinos Terán
INIFAP
René Carlos Calderón Robles
INIFAP
viii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
COMITÉ ORGANIZADOR LOCAL
PRESIDENCIA
Roberto Montes de Oca Jiménez
Director de la Faculta de Medicina Veterinaria y
Zootecnia de la Universidad Autónoma del Estado de
México
VICEPRESIDENCIA
Francisco Javier Manjarrez Juárez
Director del Centro de Investigación Regional CentroINIFAP
Heriberto Enrique Ortega Ramírez
Secretario de Desarrollo Agropecuario del Estado de
México
Julio de la Mora Razura
Delegado Estatal de la SAGARPA en el Estado de
México
Pedro Mijares Oviedo
Director General del Instituto de Investigación y
Capacitación Agropecuaria, Acuícola y Forestal del
Estado de México
COORDINACIÓN GENERAL
Roberto Montes de Oca Jiménez
FMVZ- UAEM
COORDINACIÓN DE LA
REUNIÓN CIENTÍFICA
Ignacio Arturo Domínguez Vara
FMVZ- UAEM
COORDINACIÓN DEL CURSO
BASES DE LA CRÍA OVINA
Félix Salazar García
FMVZ-UAEM
OPERACIÓN Y LOGISTICA
Guadalupe Constanza Méndez Villalobos
FMVZ-UAEM
María Antonia Mariezcurrena Berasain
FMVZ-UAEM
Omar Salvador Flores
AMTEO A.C.
ADMINISTRACIÓN
María Reyna Hernández Cabrera
INIFAP
ix
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
COMITÉ CIENTÍFICO
PRESIDENTE:
Ricardo Basurto Gutiérrez, INIFAP
VICEPRESIDENTE:
Ana María Anaya Escalera, INIFAP
RESPONSABLES DE SECCIÓN
Francisco Aurelio Galindo Maldonado
UNAM
Bienestar y comportamiento
animal
Raquel Cossío Bayugar
INIFAP
Biotecnología y biología celular
en salud animal
Feliciano Milián Suazo
UAQ
Salud animal, diagnóstico,
control y epidemiología
Héctor Jiménez Severiano
INIFAP
Endocrinología y reproducción
Jesús Vázquez Navarrete
INIFAP
Inocuidad de alimentos
Efrén Díaz Aparicio
INIFAP
Mecanismos de infección y
enfermedad
Miguel Arechavaleta Velasco
INIFAP
Mejoramiento y recursos
genéticos
Gerardo Mariscal Landín
INIFAP
Nutrición animal
José Antonio Espinosa García
INIFAP
Socioeconomía, validación y
transferencia de tecnología
Mario Humberto Esqueda Coronado
INIFAP
Utilización de forrajes y manejo
de pastizales
x
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
REVISORES POR SECCIÓN
Bienestar y comportamiento animal
Francisco Aurelio Galindo Maldonado
UNAM
Tamara Tadich Gallo
UNIVERSIDAD DE CHILE
Biotecnología y biología celular en salud animal
Estefan Miranda Miranda
INIFAP
Alma Rossana Tamayo Sosa
UABC
Jose Hugo Aguilar Díaz
UAS
Giovanna Peñuelas Rivas
Raquel Cossío Bayugar
UAEM
INIFAP
Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Félix Salazar García
UAEM
Humberto Monroy Salazar
CIESA
Luis S. Pérez Sotelo
CIESA
Imelda Medina Torres
FMVZ-ISEM
Jesús Vázquez Navarrete
Gabriela Aguilar Tipacamú
INIFAP
UAQ
Germinal Jorge Canto Alarcón
UAQ
José Ángel Gutiérrez Pabello
UNAM
Rosa Elena Sarmiento Silva
UNAM
Yasmín Alcalá Canto
UNAM
Jorge Francisco Monroy López
Feliciano Milián Suazo
UNAM
UAQ
Endocrinología y reproducción
Ana María Rosales Torres
UAM-UNIDAD XOCHIMILCO
Teresa Sánchez Torres Esqueda
COLPOS
Yazmín Elizabeth Felipe Pérez
UAEM
Jesús Alejandro Arreguín Arévalo
CSU-USA
José Alfredo Medrano Hernández
UNAM
Nazario Pescador Salas
UAEM
César Augusto Rosales Nieto
INIFAP
Héctor Raymundo Vera Ávila
INIFAP
Alejandro Villa Godoy
UNAM
Héctor Jiménez Severiano
INIFAP
xi
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Inocuidad de alimentos
Yolanda Beatriz Moguel Ordóñez
INIFAP
Víctor Tenorio Gutiérrez
INIFAP
Ma. Genoveva Álvarez Ojeda
INIFAP
Martín Talavera Rojas
UAEM
Rebeca Flores Magallón
IPN
Jesús Vázquez Navarrete
INIFAP
Mecanismos de infección y enfermedad
Juan Joel Mosqueda Gualito
UAQ
María del Rosario Santiago Rodríguez
UAEM
Erika Gabriela Palomares Reséndiz
INIFAP
José Luis Gutiérrez Hernández
INIFAP
Beatriz Arellano Reynoso
UNAM
Roberto Montes de Oca Jiménez
UAEM
Rigoberto Hernández Castro
SECRETARIA DE SALUD
Jorge Alva Pérez
UAT
Efrén Díaz Aparicio
INIFAP
Mejoramiento y recursos genéticos
Rogelio Alonso Morales
UNAM
Miguel Arechavaleta Velasco
INIFAP
Carlos Apodaca Sarabia
UACH
Adriana García Ruiz
INIFAP
Guillermo Martínez Velázquez
INIFAP
Vicente E. Vega Murillo
INIFAP
Felipe de Jesús Ruíz López
INIFAP
Nutrición animal
Areceli Aguilera Barreyro
UAQ
Héctor Mario Andrade Montemayor
UAQ
Tercia Césaria Reis De Souza
Germán Buendía Rodríguez
UAQ
Sergio Gómez Rosales
INIFAP
José Luis Romano Muñoz
INIFAP
Ricardo Basurto Gutiérrez
INIFAP
Gerardo Mariscal Landín
INIFAP
INIFAP
xii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Socioeconomía, validación y transferencia de tecnología
Alfredo González Sotelo
INIFAP
José Vidal Rubio Ceja
INIFAP
Eduardo José Cabrera Torres
INIFAP
Venancio Cuevas Reyes
INIFAP
Georgel Moctezuma López
INIFAP
Angélica Espinoza Ortega
UAEM
Anastacio García Martínez
UAEM
Rocío Medina Torres
José Antonio Espinosa García
UAQ
INIFAP
Utilización de forrajes y manejo de pastizales
Benito Albarrán Portillo
ICAR
José Luis Borquez Gastelum
UNAM
Carlos Arriaga Jordán
UAEM
Carlos Raúl Morales Nieto
UACH
José Francisco Villanueva Ávalos
INIFAP
Javier Francisco Enríquez Quiroz
INIFAP
Mario H. Esqueda Coronado
INIFAP
Pedro Jurado Guerra
INIFAP
Ramón Gutiérrez Luna
INIFAP
Ruben Alfonso Saucedo Terán
INIFAP
xiii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ÍNDICE DE SECCIONES
Sección
Páginas
Bienestar y comportamiento animal
I
1 – 18
Biotecnología y biología celular en salud animal
II
19 – 57
Endocrinología y reproducción
III
58 – 106
Inocuidad de alimentos
IV
107 – 139
Mecanismos de infección y enfermedad
V
140 – 182
Mejoramiento y recursos genéticos
VI
183 – 227
Nutrición animal
VII
228 – 287
Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
VIII
288 – 551
Socioeconomía, validación y transferencia de
tecnología
IX
552 – 599
Utilización de forrajes y manejo de pastizales
X
600 – 679
Índice de autores
680 – 687
Nota de los compiladores:
El contenido de los resúmenes incluídos en esta memoria, aparece tal y como fue
enviado por sus autores, con excepción de algunos que fueron adptados de
formato, con la finalidad de hacerlos coincidir con las indicaciones de la
convocatoria y las necesidades de diseño del documento.
xiv
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ÍNDICE DE RESÚMENES
I.
Bienestar y comportamiento animal
PÁGINA
COMPARACIÓN ESTADÍSTICA ENTRE LAS TEMPERATURAS RECTAL Y TIMPÁNICA DE CORDEROS DE PELO
DURANTE LAS PRIMERAS 5 SEMANAS DE EDAD.
1
ESTRATEGIAS PARA MITIGAR LOS EFECTOS DE LA VARIACIÓN CLIMÁTICA
ENGORDA EN MÉXICO.
4
SOBRE EL GANADO DE
EFECTOS DE LA INTERACCIÓN DE UN INSECTICIDA NEONICOTINOIDE Y EL ÁCARO VARROA DESTRUCTOR
A. SOBRE EL COMPORTAMIENTO DEFENSIVO DE LAS ABEJAS MELÍFERAS (APIS MELLIFERA L.).
7
EFECTO DE DOS TÉCNICAS DE MANEJO Y ALIMENTACIÓN DURANTE LA LACTANCIA EN BECERRAS
HOLSTEIN.
10
FACTORES RELACIONADOS CON EL TIEMPO DE RECUPERACIÓN DE ANESTESIA UTILIZANDO ACEITE DE
SYZYGIUM AROMATICUM EN PEZ BETA (BETTA SPLENDENS).
13
VALIDACIÓN DE ACELERÓMETROS PARA ESTIMACIÓN DEL TIEMPO DE PASTOREO EN BOVINOS
LECHEROS.
16
II.
Biotecnología y biología celular en salud animal
PRODUCCIÓN Y PURIFICACIÓN DE LA PROTEÍNA RECOMBINANTE HN DEL RUBULAVIRUS PORCINO A
PARTIR DE E. COLI TRANSFORMADA, PARA SU USO COMO UN INMUNÓGENO EN CERDOS.
19
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE FAGOCITOSIS IN VITRO DE NEUTRÓFILOS BOVINOS POR
STAPHYLOCOCCUS AUREUS CAPSULAR TIPO 8.
22
DISTRIBUCIÓN GEOGRAFICA Y CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE TRYPANOSOMA CRUZI EN
TRIATOMINOS EN EL ESTADO DE MÉXICO ASOCIADOS A LA VIIVIENDA HUMANA.
25
DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DEL GEN CALPASTATINA (CAST) Y TIROGLOBULINA (TG5) EN
GANADO BOVINO (BOS TAURUS X BOS INDICUS) DE UNA ENGORDA COMERCIAL DEL MUNICIPIO DE
TAMUÍN, SLP, MÉXICO.
27
TIPIFICACIÓN DE NUEVOS AISLADOS BACTERIANOS DURANTE LA PRESUNTA INFECCIÓN DE LA
GARAPATA DEL GANADO RHIPICEPHALUS (BOOPHILUS) MICROPLUS CON POTENCIAL ÚSO COMO
BIOCONTROL
30
DISEÑO Y CARACTERIZACIÓN DE MICROCÁPSULAS DE SELENIOMETIONINA.
32
EFECTO ANTIVIRAL DE UN PROPÓLEO MEXICANO SOBRE EL VIRUS DE PSEUDORRABIA EN CELULAS MDBK.
34
DETECCION DE MUTACIONES EN LA PROTEÍNA V DEL RUBULAVIRUS PORCINO (PORPV) INDICAN UNA
POSIBLE ATENUACIÓN DEL VIRUS.
37
EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DEL RUBULAVIRUS PORCINO (PORPV).
39
EXPRESIÓN RECOMBINANTE EN E. COLI DE LA PROTEÍNA VIRB10 DE ANAPLASMA MARGINALE.
42
ANÁLISIS BIOINFORMÁTICO DEL GEN OMP7 DE AISLADOS MEXICANOS DE ANAPLASMA MARGINALE.
44
LAS ESTERASAS REGULAN LOS ESTADIOS DE DESARROLLO EN FASCIOLA HEPATICA.
47
LOS COMPUESTOS ADRENERGICOS INHIBIDORES DE LA OVIPOSICION AFECTAN LA CONTRACCION DEL
49
xv
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
OVARIO DE LA GARRAPATA.
EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL ANTIOXIDANTE ASTAXANTINA (ASTX) SOBRE CULTIVO DE PARÁSITOS DE
TRYPANOSOMA CRUZI.
51
REGENERACIÓN DE HERIDAS CUTÁNEAS CON AGUJAS DE PLASMA DE ARGÓN Y HELIO.
53
EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL G1 SOBRE LAS CITOQUINA TH1 /TH2 EMPLEANDO CBA.
56
III.
Endocrinología y reproducción
SECRECIÓN DE HORMONA LUTEINIZANTE Y DESARROLLO FOLICULAR OVÁRICO EN BECERRAS
PREPÚBERES BAJO DOS NIVELES DE ALIMENTACIÓN Y SU ASOCIACIÓN CON LAS CONCENTRACIONES
DE LEPTINA E IGF-I EN SANGRE.
58
RESPUESTA DE HORMONA LUTEINIZANTE A APLICACIONES REPETIDAS DE KISSPEPTINA-10 EN VACAS EN
ANESTRO POSPARTO.
61
DESEMPEÑO REPRODUCTIVO DE VACAS HOLSTEIN Y SUIZO PARDO AMERICANO Y SUS CRUZAS F1 EN
CLIMA SUBTROPICAL HÚMEDO.
64
CRIO-PRESERVACIÓN DE ESPERMATOZOIDES EN OVINOS POST MORTEM EXTRAÍDOS A TRAVÉS DE DOS
MÉTODOS: LAVADO CAUDAL Y EL CORTE SAGITAL DE LA COLA DEL EPIDÍDIMO.
67
LA GHRELINA MODIFICA LA CORRIENTE IÓNICA DE CALCIO EN CÉLULAS PRODUCTORAS DE INSULINA
(RIN-M5F).
69
FACTORES INVOLUCRADOS EN LA FERTILIDAD DURANTE EL EMPADRE DE LAS BORREGAS.
72
LA SUPLEMENTACIÓN AGUDA CON METIONINA DURANTE EL POSPARTO TEMPRANO EN CONEJAS
INCREMENTA LA PROLIFICIDAD Y LAS CONCENTRACIONES DEL FACTOR DE CRECIMIENTO SIMILAR A LA
INSULINA-1.
75
EL ÁCIDO CÓLICO AFECTA LA SÍNTESIS IN VITRO DE ESTROGENOS EN CÉLULAS DE LA GRANULOSA
BOVINA.
78
EL NIVEL DE ALIMENTACIÓN MEJORA LA RESPUESTA SEXUAL DE LOS MACHOS CABRÍOS MULTIRRACIALES
JÓVENES TRATADOS CON TESTOSTERONA.
80
PATRÓN DE ACTIVACIÓN ESTACIONAL REPRODUCTIVA EN MACHOS CAPRINOS: COMPARACIÓN ENTRE
UN GENOTIPO CRIOLLO Y RAZAS ESPECIALIZADAS.
82
EL EFECTO MACHO Y SU ESTIMULO SOBRE MACHOS EN REPOSO Y HEMBRAS EN ANESTRO.
85
EFECTO MACHO-MACHO Y LA CAPACIDAD DE INDUCIR ACTIVIDAD ESTRAL EN HEMBRAS DURANTE EL
ANESTRO ESTACIONAL.
88
REGULACIÓN DE LA SÍNTESIS DE S1P Y SU EFECTO SOBRE LA PROLIFERACIÓN DE CÉLULAS DE LA
GRANULOSA.
91
EFECTO DEL EMPADRE DE HEMBRAS CAPRINAS CON MACHOS TRATADOS CON TESTOSTERONA Y DOS
NIVELES DE ALIMENTACIÓN.
94
EVALUACIÓN DE LA SOBREVIVENCIA EN EL MANEJO DE MASCULINIZACION DE COLISA LALIA
(TRICHOGASTER LALIUS).
97
CAMBIOS HISTOMORFOLÓGICOS EN EL TESTÍCULO DE RATA WISTAR EN LA EDAD ADULTA,
OCASIONADOS POR LA ADMINISTRACIÓN DURANTE EL PERIODO CRÍTICO DE DIFERENCIACIÓN SEXUAL
HIPOTALÁMICA CON TAMOXIFEN (TX) Y/O ACEITE DE SOYA (AS).
99
xvi
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO PROTECTOR DE LOS EXTRACTOS VEGETALES AÑADIDOS A UN DILUYENTE DE CONGELACIÓN
SEMINAL, SOBRE LA INTEGRIDAD ESPERMÁTICA DEL OVINO.
FERTILIDAD AL PRIMER SERVICIO EN VACAS TRATADAS CON DISPOSITIVOS INTRAVAGINALES MÁS LA
ADICIÓN DE SOMATOTROPINA RECOMBINANTE BOVINA AL MOMENTO DE LA INSEMINACIÓN ARTIFICIAL
A TIEMPO FIJ.
IV.
102
104
Inocuidad de alimentos
EVALUACIÓN DE CAMPOS MAGNÉTICOS COMO MÉTODO ALTERNATIVO PARA LA PRESERVACIÓN DE
LECHE CRUDA EN SISTEMAS DE PRODUCCIÓN FAMILIAR DE LOS ALTOS DE JALISCO.
107
PRODUCCIÓN DE HONGO PLEUROTUS OSTREATUS EN RESIDUOS AGRÍCOLAS.
110
COMPARACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE POLEN EN DOS LOCALIDADES EN CAMPECHE.
112
CARACTERIZACIÓN DE GENES CASETES DE RESISTENCIA A ANTIMICROBIANOS EN INTEGRONES CLASE 1
DE SALMONELLA OBTENIDOS DE CANALES DE BOVINOS, PORCINOS Y AVES EN EL ESTADO DE MÉXICO.
115
IDENTIFICACION DE GENES CASETES DE RESISTENCIA ANTIMICROBINA EN AISLAMIENTOS DE ESCHERICHIA
COLI ENTEROHEMORRAGICA QUE PRESENTAN INTEGRONES CLASE 1 Y 2.
117
CLASIFICACIÓN DE CARNE DE CERDO POR PARÁMETROS DE CALIDAD A PARTIR DE UNA ESCALA DE
COLOR SUBJETIVO PARA CARNE MEXICANA.
119
EFECTO DE LA INMUNIZACIÓN CON ANTI-GNRH O ANTI-LH EN LA CALIDAD DE CARNE DE CERDO.
122
VITAMINA E Y UNA PREMEZCLA ANTIOXIDANTE EN DIETAS PARA LA FINALIZACION DE CERDOS: CALIDAD
DE CARNE Y VIDA DE ANAQUEL.
125
IDENTIFICACIÓN DE BIOTIPOS Y NIVEL DE CONTAMINACIÓN POR STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN
CANALES DE CONEJOS PARA ABASTO EN RASTROS COMERCIALES DEL ESTADO DE MÉXICO.
128
ESTUDIO DE LA POBLACIÓN MICROBIANA PRESENTE EN EL QUESO ARTESANAL RANCHERO DEL CENTRO
DE MÉXICO.
131
DETECCIÓN DE ESCHERICHIA COLI PRODUCTORA DE VEROTOXINA (VTEC) EN HATOS LECHEROS DE
PRODUCCIÓN FAMILIAR EN EL VALLE DE TOLUCA.
134
IDENTIFICACIÓN DE CEPAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS PRODUCTORAS DE ENTEROTOXINAS (SES) EN
AISLAMIENTOS PROVENIENTES DE HATOS LECHEROS DE PRODUCCIÓN FAMILIAR DEL VALLE DE TOLUCA.
137
V.
Mecanismos de infección y enfermedad
IDENTIFICACIÓN DE TLR4 EN MACRÓFAGOS DE OVINO Y SU ACTIVACIÓN DESPUÉS DE INTERACCIONAR
CON VESÍCULAS DE MEMBRANA EXTERNA DE MANNHEIMIA HAEMOLYTICA A2.
140
DESARROLLO Y EVALUACIÓN EN CAMPO DE UNA BACTERINA DE ESCHERICHIA COLI, EN CAPRINOS.
142
SITUACIÓN EPIDEMIOLÓGICA DE ALGUNAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS MÁS IMPORTANTES EN
EXPLOTACIONES CAPRINAS DE TAMAULIPAS.
145
TIPIFICACIÓN MOLECULAR DE CEPAS DE LISTERIA MONOCYTOGENES AISLADAS DE CAPRINOS.
148
PRESENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA DIARREA VIRAL BOVINA, RINOTRAQUEITIS INFECCIOS BOVINA,
LEPTOSPIROSIS Y BRUCELOSIS EN DOS REGIONES GANADERAS DE OAXACA.
151
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE UN VIRUS DE INFLUENZA OBTENIDO DE UN MONO ARAÑA EN
CAUTIVERIO.
154
xvii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE UN VIRUS DE INFLUENZA H5N2 DE BAJA
PATOGENICIDAD EN FALCONIFORMES CLÍNICAMENTE SANOS.
156
EFECTO DE LA VARROASIS Y UN INSECTICIDA NEONICOTINOIDE SOBRE LA CANTIDAD DE HEMOCITOS
PRESENTES EN LAS ABEJAS MELIFERAS (APIS MELLIFERA L.) BAJO CONDICIONES DE LABORATORIO.
158
CORRELACIÓN ENTRE LA CAPTURA DE FACTOR H POR LEPTOSPIRA SPP. Y SU SOBREVIVENCIA AL SUERO
HUMANO NORMAL. ESTUDIO PRELIMINAR.
161
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN ULTRAESTRUCTURAL DEL VIRUS DE LA DIARREA EPIDÉMICA PORCINA
EN CULTIVOS CELULARES.
164
DETECCIÓN DE NUEVOS CORONAVIRUS CAUSANTES DE DIARREAS AGUDAS EN CERDOS LACTANTES.
166
REPLICACIÓN DEL VIRUS DE LA DIARREA EPIDÉMICA PORCINA EN SEIS DIFERENTES LÍNEAS CELULARES.
168
AVANCES EN LA CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE AISLAMIENTOS DE CAMPO DE RUBULAVIRUS
PORCINO.
171
EXPRESIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LA PROTEÍNA P25 DE LENTIVIRUS DE PEQUEÑOS RUMIANTES (LVPR),
EN EL SISTEMA ESCHERICHIA COLI.
174
EVALUACIÓN DE LA INTERFERENCIA EN EL DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE MYCOBACTERIUM AVIUM
SUBSP. PARATUBERCULOSIS EN CABRAS CON LINFADENITIS CASEOSA “RESULTADOS PRELIMINARES”.
177
INFECCIÓN DE BRUCELLA ABORTUS EN BECERRAS NACIDAS DE HATOS POSITIVOS A BRUCELOSIS.
180
VI.
Mejoramiento y recursos genéticos
ANÁLISIS DE VARIABLES MORFOLÓGICAS DE PAVOS DE TRASPATIO MEXICANOS (MELEAGRIS
GALLOPAVO GALLOPAVO).
183
MORFOMETRÍA DEL CERDO DE TRASPATIO EN ÁREAS RURALES DE MÉXICO.
186
ESTIMACIÓN DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA MEDIANTE MARCADORES SNP EN BOVINO CRIOLLO
COREÑO (BOS TAURUS).
189
CORRELACIONES DE VALORES GENÉTICOS ENTRE CARACTERÍSTICAS
PRODUCCIÓN Y CALIDAD DE LA LECHE EN GANADO HOLSTEIN DE MÉXICO.
192
DE
CONFORMACIÓN,
OPTIMIZACIÓN ECONÓMICA DEL PROGRAMA DE MEJORAMIENTO GENÉTICO DE CABRAS LECHERAS EN
FRANCIA.
195
EFECTO DE LAS VARIANTES GENÉTICAS PROTEICAS SOBRE LA PRODUCCIÓN Y COMPOSICIÓN DE LA
LECHE DE GANADO HOLSTEIN.
198
IMPACTO DE USAR INFORMACIÓN GENÓMICA EN EL MEJORAMIENTO GENÉTICO DE GANADO
HOLSTEIN EN MÉXICO.
201
ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DE LA POBLACIÓN SIMMENTAL MEXICANA MEDIANTE ANÁLISIS DE
PEDIGRÍ.
204
MODELACIÓN DETERMINÍSTICA DE PROGRAMAS DE MEJORAMIENTO GENÉTICO QUE INCORPORAN
SELECCIÓN GENÓMICA PARA LA POBLACIÓN HOLSTEIN DE MÉXICO.
207
ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DE LA POBLACIÓN SIMBRAH MEXICANA MEDIANTE ANÁLISIS DE
PEDIGRÍ.
210
CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE LA GALLINA DE TRASPATIO (GALLUS GALLUS DOMESTICUS) EN
MÉXICO.
213
xviii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTOS GENÉTICOS DIRECTOS, MATERNOS Y DE HETEROSIS PARA CARACTERÍSTICAS PRODUCTIVAS
PARA UN DIALELO CON HOLSTEIN Y SUIZO PARDO EN CLIMA SUBTROPICAL
216
ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DEL CERDO CRIOLLO MEXICANO: CARACTERIZACIÓN
FENOTÍPICA.
219
ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DEL CERDO CRIOLLO MEXICANO: CARACTERIZACIÓN GENÉTICA.
222
EFECTO DEL MORFOTIPO Y EL HAPLOTIPO DE LAS ABEJAS SOBRE LA PREVALENCIA DE LA VARROOSIS Y
LOS NIVELES DE INFESTACIÓN DE VARROA DESTRUCTOR EN COLONIAS DE ABEJAS MELÍFERAS.
225
VII.
Nutrición animal
COMPOSICION QUÍMICA MEDIANTE ESPECTROSCOPIA DEL FORRAJE DE LEGUMINOSAS RECOLECTADAS
EN EL SUR DE MÉXICO.
228
ESTIMACION POR ESPECTROSCOPIA DEL CONTENIDO DE NUTRIENTES DIGESTIBLES TOTALES DE
CONCENTRADOS Y FORRAJES UTILIZADOS EN UNIDADES DE PRODUCCIÓN LECHERA.
231
EFECTO DE LA VITAMINA E EN LA FERMENTACIÓN RUMINAL Y DIGESTIÓN DE NUTRIENTES EN NOVILLOS
SUPLEMENTADOS CON ÁCIDO LINOLEICO CONJUGADO MICROENCAPSULADO.
234
CARACTERIZACIÓN NUTRICIONAL DE ARVENSES MEDIANTE LA TÉCNICA DE PRODUCCIÓN DE GAS IN
VITRO.
237
UTILIZACION DE DIFERENTES ENSILADOS DE CERDAZA EN RACIONES INTEGRALES PARA LA ENGORDA DE
BORREGOS.
240
EFECTO DE CLOSTRIDIUM PARAPUTRIFIUCUM EN LA PRODUCCIÓN RUMINAL DE METANO IN VITRO.
243
RESPUESTA PRODUCTIVA DE LA GALLINA DE POSTURA ALIMENTADA CON DIETAS CON DIFERENTE
GRANULOMETRÍA.
246
SUSTITUCIÓN DE DL-METIONINA POR BETAÍNA ANHIDRA EN DIETAS DE GALLINAS DE POSTURA DURANTE
EL PRIMER CICLO DE PRODUCCIÓN.
249
VALOR NUTRICIONAL DE MUÉRDAGO ENANO (ARCEUTHOBIUM GLOBOSUM WIENS) Y SU VALOR
NUTRITIVO EN OVINOS.
252
RESPUESTA PRODUCTIVA DEL CONEJO DE ENGORDA
COMERCIALES ADICIONADOS CON PROPIL TIOSULFONATO.
255
ALIMENTADO
CON
DOS
ALIMENTOS
VALIDACIÓN DE UN GLUCÓMETRO COMERCIAL DE USO HUMANO PARA DETERMINAR GLUCOSA EN
CERDOS.
258
PRODUCCION DE GAS IN VITRO DE ALIMENTOS PARA GANADO LECHERO EN LOS ALTOS DE JALISCO.
261
EFECTO DEL PORCENTAJE DE ENSILADO DE MAÍZ EN LA DIETA SOBRE LA PRODUCCIÓN Y CALIDAD DE
LECHE DE CABRAS.
264
COMPORTAMIENTO
CONCENTRADOS.
266
PRODUCTIVO
DE
CORDEROS
LACTANTES
ALIMENTADOS
CON
DOS
PARÁMETROS DE FERMENTACIÓN DE ENSILADO DE FRUTOS DE CIRIÁN (CRESCENTIA ALATA) Y DINÁMICA
DE CONSUMO EN CAPRINOS.
269
DESARROLLO DE BEBIDAS A BASE DE LACTOSUERO UTILIZANDO EDULCORANTES NATURALES Y
SINTÉTICOS.
272
xix
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DEL PROTEINATO DE COBRE EN EL CRECIMIENTO, CALIDAD DE CANAL Y CARNE Y
COMPOSICIÓN DE FIBRAS DEL LONGISSIMUS THORACIS DE CERDOS PELÓN MEXICANO.
274
RESPUESTA PRODUCTIVA Y CARACTERÍSTICAS DE LA CANAL DE OVINOS DE PELO SUPLEMENTADOS CON
DOS NIVELES DE ACEITE DE SOYA EN LA DIETA.
277
COMPARACIÓN EN LA COMPOSICIÓN NUTRICIONAL Y COLOR DE LA CARNE DE CONEJOS
ALIMENTADOS CON DIETAS A BASE DE PASTA DE SOYA Y PASTA DE CANOLA.
279
DIGESTIBILIDAD ILEAL ESTANDARIZADA DE AMINOÁCIDOS EN PASTA DE CANOLA Y PASTA DE SOYA EN
CERDOS EN FINALIZACIÓN.
282
CARACTERÍSTICAS DE LA CANAL Y COLOR EN CARNE DE CERDOS ALIMENTADOS CON DIETAS BAJAS EN
PROTEÍNA CON DIFERENTES NIVELES DE LISINA.
285
INFLUENCIA DEL CROMO QUELADO COMO ADITIVO ALIMENTICIO EN DIETAS DE CRECIMIENTO
FINALIZACIÓN PARA GANADO DE ENGORDA.
288
EFECTOS DE LA SUPLEMENTACIÓN DE CROMO METIONINA SOBRE LAS CARACTERÍSTICAS DE LA CANAL
EN BORREGOS.
291
INFLUENCIA DE LA MACERACIÓN MECÁNICA DE LA PAJA DE TRIGO SOBRE LAS CARACTERÍSTICAS DE
DIGESTIÓN EN DIETAS DE FINALIZACIÓN PARA BOVINOS.
294
RESPUESTA PRODUCTIVA Y EFICIENCIA EN LA SINTESIS DE PROTEINA MICROBIANA EN EL RUMEN EN
VACAS LECHERAS A PASTOREO ROTACIONAL Y SUPLEMENTADAS CON ENSILAJE DE MAIZ.
296
EFECTO DE LA INCLUSIÓN DEL HONGO PLEUROTUS OSTREATUS EN LA DEGRADACIÓN DE LOS RESIDUOS
AGRÍCOLAS.
299
RESPUESTA DE COLONIAS DE ABEJAS APIS MELLIFERA A LA INCORPORACIÓN DE DIFERENTES DIETAS
DURANTE LA ÉPOCA DE ESCASES.
301
EFECTO DE LOS TANINOS Y KAFIRINAS DEL SORGO EN EL PERFIL GLICÉMICO Y URÉMICO DE CERDOS EN
CRECIMIENTO.
303
PASTA DE HIGUERILLA COMO SUPLEMENTO DE BAJO COSTO PARA NOVILLOS EN CONDICIONES DE
PASTOREO.
305
USO DE PLANTAS PARÁSITAS
CAPRINOS.
308
(ARCEHUTOBIUM VAGINATUM) Y SU RESPUESTA PRODUCTIVA EN
EFECTO DE LOS TANINOS Y KAFIRINAS DEL SORGO EN LA DIGESTIBILIDAD ILEAL APARENTE DE CERDOS EN
CRECIMIENTO.
311
RENDIMIENTO Y CARACTERÍSTICAS FÍSICO-QUÍMICAS DE LA CANAL DE CORDEROS ALIMENTADOS CON
CONTENIDO RUMINAL DE BOVINO.
313
EFECTO COMPARATIVO DE CANELA (CINNAMOMUM VERUM), FITASA, PAPAVERÁCEA (MACLEAYA
CORDATA) Y TIAMULINA SOBRE PARÁMETROS PRODUCTIVOS EN LECHONES DESTETADOS.
315
EFECTO DE LA COMPLEMENTACIÓN EN LA DIETA CON UN COMPUESTO GLUCONEOGÉNICO SOBRE LA
PRODUCCIÓN, COMPOSICIÓN Y CALIDAD DE LECHE EN CABRAS.
317
INFLUENCIA DE LA ADICIÓN DE ACEITE VEGETAL EN LA DIETA DE VACAS EN PASTOREO: PERFIL DE
ÁCIDOS GRASOS DE LA LECHE.
320
CONCENTRACIÓN MINERAL Y PARÁMETROS PRODUCTIVOS DE BOVINOS LECHEROS CON DISTINTO
TIEMPO DE PASTOREO.
323
xx
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DIFERENTES FUENTES DE GRASA EN LA PRODUCCIÓN DE CERDOS: IMPACTO EN EL COMPORTAMIENTO
PRODUCTIVO DE LAS CERDAS; CRECIMIENTO Y ESTABILIDAD OXIDATIVA DE SU PROGENIE.
326
EFECTO DE LA OFERTA DE PRADERA Y EL TIPO DE ENSILADO SOBRE LA PRODUCCIÓN DE LECHE Y LA
COMPOSICIÓN DE ÁCIDOS GRASOS DE LAS VACAS LECHERAS EN PASTOREO.
329
COMPARACIÓN DE DOS MÉTODOS PARA DETERMINAR CONCENTRACIONES SANGUÍNEAS DE GLUCOSA
EN CABRAS BAJO PASTOREO EXTENSIVO.
331
FORRAJE VERDE HIDROPÓNICO COMO SUPLEMENTACIÓN EN LA ALIMENTACIÓN DE CONEJOS EN
ZONA DE SEMI DESIERTO.
334
EVALUACIÓN DEL COMPORTAMIENTO PRODUCTIVO Y CALIDAD DE LECHE DE CAPRINOS ALIMENTADOS
CON RACIONES A BASE DE VAINA DE MEZQUITE (PROSOPIS LAEVIGATA) Y /O NOPAL (OPUNTIA FICUS
INDICA).
337
EVALUACIÓN DE DIFERENTES
NIVELES DE HARINA DE LOMBRIZ SOBRE EL COMPORTAMIENTO
PRODUCTIVO DE CODORNICES DE ENGORDA.
340
APLICACIÓN DEL HERVIDO COMO TRATAMIENTO TÉRMICO DE LA VAINA DE MEZQUITE (PROSOPIS
LAEVIGATA) Y SU EFECTO SOBRE LA COMPOSICIÓN, DEGRADACIÓN Y PRODUCCIÓN DE GAS IN VITRO.
342
EVALUCIÓN DE LA DEGRADABILIDAD RUMINAL IN VITRO DE UNA GLUCOSA PROTEGIDA.
345
PROCEDIMIENTO COMPARATIVO DE JABONES CALCIO ENRIQUECIDOS CON DIFERENTES ACIDOS
GRASOS.
347
USO DE JABONES DE CALCIO DE SOYA EN EL POS-PARTO, SOBRE LOS PARÁMETROS PRODUCTIVOS DE
CABRAS ALPINAS.
349
RELACIÓN ENTRE EL CONTENIDO NUTRIMENTAL Y DIGESTIBILIDAD IN VITRO DE LA MATERIA SECA
(DIVMS) DE GLIRICIDIA SEPIUM, LEUCAENA LEUCOCEPHALA Y CRATYLIA ARGENTAE.
351
FRACCIONES DE PROTEÍNA (A, B1, B2, B3 Y C) EN HOJAS DE 13 ECOTIPOS DE LEUCAENA DE LA REGIÓN
TROPICAL DEL SUR DE MÉXICO.
354
EFECTO DEL USO DE PANAGRELLUS REDIVIUS COMO ALIMENTO SOBRE LA SUPERVIVENCIA,
CRECIMIENTO Y CALIDAD DE AGUA EN LA CRIANZA DE TRICHOGASTER LALIUS (COLISA LALIA).
357
ENGORDA DE BECERROS ALIMENTADOS CON ENSILADOS DE MARALFALFA Y DE MAÍZ MÁS UNA DIETA
COMPLEMENTARIA.
359
EFECTO DE DOS FUENTES DE COLINA EN EL DESARROLLO Y SALUD DE BORREGOS DE LA RAZA
RAMBOULLIET.
362
EMISIONES DE METANO EN GANADERIA BOVINA TROPICAL.
365
PULPA DE CAFE EN LA ALIMENTACIÓN DE GANADO LECHERO EN LOS TRÓPICOS: EVALUACIÓN DE SU
POTENCIAL.
367
EMISIONES DE METANO EN DOS SISTEMAS DE PRODUCCIÓN DE LECHE CON GANADO ESPECIALIZADO.
370
PAREDES CELULARES DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE (PCL) COMO ADITIVO EN AFLATOXICOSIS Y
ASISTENTE DE PREVENCIÓN CUANDO SALMONELLA ENTERITIDIS ESTA PRESENTE EN POLLOS DE ENGORDE
EN LA TERCERA SEMANA.
373
PARÁMETROS PRODUCTIVOS Y MICROBIOLÓGICOS DE CONEJOS NUEVA ZELANDA ALIMENTADOS CON
DOS NIVELES DE ENSILADO DE PULPA DE CAFÉ.
376
EFECTO DE LA ADICIÓN DE NOPAL (OPUNTIA FICUS-INDICA) EN LA DIETA DE CERDAS EN FASE DE
378
xxi
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
LACTACIÓN SOBRE LA CALIDAD DE LA LECHE.
DESARROLLO DE MODELOS MATEMÁTICOS PARA PREDECIR LA EXCRECIÓN DE FÓSFORO POR PARTE
DEL GANADO LECHERO.
381
EFECTO DE PASTA DETOXIFICADA DE HIGUERILLA SOBRE EL COMPORTAMIENTO PRODUCTIVO EN
OVINOS EN FINALIZACIÓN.
384
EFECTO DE LA SATURACIÓN DE LA GRASA CONTENIDA EN EL ALIMENTO DE REPRODUCTORAS
PORCINAS SOBRE LA PRODUCTIVIDAD DE SU CAMADA BAJO CONDICIONES TROPICALES.
386
VIII.
Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología pecuaria
EFECTO DEL CLIMA SOBRE LA PREVALENCIA DE LA VARROOSIS Y LOS NIVELES DE INFESTACIÓN DE
VARROA DESTRUCTOR EN COLONIAS DE ABEJAS MELIFERAS.
389
DISEÑO DE UN SISTEMA DE EXPRESIÓN PARA LAS PROTEÍNAS RECOMBINANTES RPFB Y RIPA DE M.
TUBERCULOSIS.
392
PREDICCIÓN DE LA RED DE INTERACCIÓN PROTEICA ASOCIADA A LA PORINA BMVDAC BASADA EN LA
FUNCIÓN.
395
BUSQUEDA DE BIOMARCADORES ASOCIADOS CON LA INFECCION DE MYCOBACTERIUM BOVIS EN
LINFONODOS DE BOVINO.
398
ACTIVIDAD OVICIDA IN VITRO DE EXTRACTO ACUOSO DE FRUTO Y DE SEMILLA DE PITHECELLOBIUM
DULCE CONTRA HAEMOCHUS CONTORTUS.
401
EFECTO DE LOS EXTRACTOS ACUOSOS DE PLANTAS ARBÓREAS IN VITRO SOBRE EL CICLO BIOLÓGICO
DE HAEMONCHUS CONTORTUS EN OVINOS.
404
PRESENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA LEPTOSPIROSIS
CAPRINAS DEL ESTADO DE GUANAJUATO.
406
Y BRUCELOSIS EN LAS PRINCIPALES ZONAS
IDENTIFICACIÓN DE CEPAS VARIANTES DE LA ENFERMEDAD DE LA BOLSA DE FABRICIO EN EL OCCIDENTE
Y CENTRO DE MÉXICO.
409
MONITOREO DEL VIRUS DE INFLUENZA AVIAR (H5N2) EN UNIDADES DE TRASPATIO EN EL ESTADO DE
MÉXICO.
412
ANÁLISIS DEL SISTEMA DE VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICO DE LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE
VELOGÉNICO VISCEROTRÓPICO EN EL ESTADO DE MÉXICO.
415
DETECCIÓN DE CEPAS VARIANTES DEL VIRUS DE LA DIARREA EPIDÉMICA PORCINA MEDIANTE RT-PCR EN
TIEMPO REAL.
418
SELECCIÓN DE UNA CEPA DE GARRAPATAS RHIPICEPHALUS (BOOPHILUS) MICROPLUS RESISTENTE A
IVERMECTINA.
421
COMPARACION DE LA PRUEBA DE FLUORESCENCIA POLARIZADA E INMUNO ENSAYO ENZIMATICO
(ELISA) PARA EL DIAGNOSTICO DE LA PARATUBERCULOSIS BOVINA.
424
DETECCIÓN DE LOS SEROTIPOS CAPSULARES 5 Y 8 DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS ASOCIADOS A MRSA
EN HATOS LECHEROS DE PRODUCCIÓN FAMILIAR EN EL VALLE DE TOLUCA.
427
EVALUACIÓN DE FRACCIONES PROTEICAS DEL SOBRENADANTE DE CULTIVO DE MYCOBACTERIUM
BOVIS EN ENSAYOS DE LIBERACIÓN DE INTERFERÓN GAMMA POR ELISPOT.
429
EVALUACIÓN DE LOS ISOTIPOS DE INMUNOGLOBULINAS IGG1 E IGG2 ESPECIFICOS EN VACAS CON
DIFERENTE RESPUESTA INMUNE A MYCOBACTERIUM BOVIS.
432
xxii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EVALUACIÓN DE LA SEGURIDAD Y TOLERANCIA DE CORYNEBACTERIUM CUTIS APLICADO EN EL
PERIPARTO DE LA VACA LECHERA.
435
PREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO DE PI3 EN BOVINOS DE DIFERENTES SISTEMAS DE PRODUCCIÓN.
438
PRESENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA LENTIVIRUS DE PEQUEÑOS RUMIANTES (LVPR) EN LAS PRINCIPALES
ZONAS CAPRINAS DEL ESTADO DE GUANAJUATO, MEXICO.
441
IDENTIFICACIÓN DE HERPESVIRUS EQUINO TIPO 4 EN UNA POBLACIÓN DE EQUINOS EN MÉXICO.
444
SEGUIMIENTO MOLECULAR Y SEROLÓGICO DE LA INFECCIÓN NATURAL DEL VIRUS DE LA ARTRITIS
ENCEFALITIS CAPRINA EN CABRITOS EN UN SISTEMA INTENSIVO DE PRODUCCIÓN.
447
PREVALENCIA DE BABESIOSIS BOVINA EN DOS EXPLOTACIONES DEL PAIS UTILIZANDO PRUEBA
SEROLOGICA CON ANTIGENOS RECOMBINANTES.
450
USO DE UNA PRUEBA MOLECULAR PARA LA DIFERENCIACION DE BABESIA BOVIS Y BABESIA BIGEMINA
EN BOVINOS EXPERIMENTALMENTE INFECTADOS.
453
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE DERMATOFITOS QUE AFECTAN A LOS ÉQUIDOS EN EL SURORIENTE
DE LA CIUDAD DE MÉXICO.
455
COMPORTAMIENTO GEO- EPIDEMIOLÓGICO DE LA RABIA PARALÍTICA EN EL CENTRO DE MÉXICO:
GUANAJUATO, QUERÉTARO Y SAN LUIS POTOSÍ.
457
EVALUACIÓN SEROLÓGICA DE MUESTRAS DE JALISCO MEDIANTE EL USO DE DIFERENTES AISLADOS
VIRALES, PARA LA DETECCION DE ANTICUERPOS CONTRA EL RUBULAVIRUS PORCINO.
460
EVALUACIÓN DE DOS EXTRACTOS ETANÓLICOS DE PROPÓLEOS MEXICANOS CONTRA EL PARVOVIRUS Y
RUBULAVIRUS PORCINO.
462
MASTITIS BOVINA Y FACTORES DE INCIDENCIA EN ESTABLOS LECHEROS ESPECIALIZADOS.
465
EFECTO DE UN EXTRACTO DE TANINOS EN LA CARGA PARASITARIA DE OVINOS DE PELO.
467
DETECCIÓN DE ENFERMEDADES ZOONÓTICAS PRESENTES EN ROEDORES SILVESTRES.
469
EVALUACIÓN DE LA RESPUESTA CELULAR Y HUMORAL EN BOVINOS INMUNIZADOS CON PÉPTIDOS
CONSERVADOS DE BABESIA BIGEMINA.
472
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE LAS UNIDADES DISCRETAS DE TIPIFICACIÓN DE TRYPANOSOMA
CRUZI EN TRIATOMINOS EN MUNICIPIOS DEL SUR DEL ESTADO DE MÉXICO, MÉXICO.
474
EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DE TRYPANOSOMA CRUZI EN MUNICIPIOS DEL SUR DEL ESTADO DE
MÉXICO, MÉXICO.
477
IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS EN CASOS CLÍNICOS DE
LINFADENITIS CASEOSA EN OVINOS Y CAPRINOS Y SU RELACIÓN CON LAS CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS
DE LOS ABSCESOS.
479
EVALUACIÓN DE CALCIO, HIERRO, COBRE, ZINC Y PLOMO EN AVES ACUÁTICAS MIGRATORIAS DE LA
LAGUNA DE LERMA, ESTADO DE MÉXICO.
481
DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE AISLADOS DE MYCOBACTERIUM SPP. PROVENIENTES DE PACIENTES
SOSPECHOSOS A TUBERCULOSIS.
483
EFECTO DE LA PARASITOSIS GASTROENTERICA SOBRE PESO CORPORAL, CONDICIÓN CORPORAL,
HEMATOCRITO, FAMACHA Y PROTEÍNAS TOTALES SÉRICAS EN OVINOS DE PELO TROPICALES.
486
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y FILOGENÉTICA DE PAPILOMAVIRUS BOVINO EN VERRUGAS EN
GANADO DE TAMAULIPAS, MÉXICO.
489
xxiii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DETECCIÓN DE PROTEÍNAS VP2 RECOMBINANTES DEL VIRUS DE LA NECROSIS PANCREÁTICA
INFECCIOSA MEDIANTE WESTERN BLOT.
491
EFECTO OVICIDA DE PROTEÍNAS OBTENIDAS DE LOS HONGOS PLEUROTUS OSTREATUS Y ARTHROBOTRYS
OLIGOSPORA CONTRA HUEVOS DE HAEMONCHUS CONTORTUS.
494
MYCOBACTERIUM BOVIS: ¿ES UNA
TUBERCULOSIS BOVINA?
497
ZOONOSIS DE GRAN IMPACTO EN REGIONES ENDEMICAS DE
LECHONES INOCULADOS CON AISLADOS RECIENTES DEL RUBULAVIRUS PORCINO (RVP).
500
LEPTOSPIROSIS EN CAPRINOS: DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ANTI-LEPTOSPIROSIS EN UNIDADES DE
PRODUCCIÓN LECHERA EN APASEO EL ALTO, GUANAJUATO.
502
ESTUDIOS SOBRE LA PRESENCIA DE GLIOTOXINA EN AISLADOS DE ASPERGILLUS FUMIGATUS DE CASOS DE
ASPERGILOSIS AVIAR.
505
NUEVO MÉTODO DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR PARA BABESIA BOVIS.
507
EFECTO FASCIOLICIDA IN VITRO DE EXTRACTOS DE DISTINTA POLARIDAD DE GORDOLOBO (BOCCONIA
FRUTESCENS).
510
EFECTO IXODICIDA DE EXTRACTOS DE PLANTAS CONTRA LARVAS DE RHIPICEPHALUS (BOOPHILUS)
MICROPLUS.
513
FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A LEPTOSPIROSIS BOVINA EN TRES REGIONES DEL CENTRO DE
VERACRUZ, MÉXICO.
516
EFECTO DE PROBIÓTICOS EN LA DINÁMICA DE COLIFORMES EN EL TUBO DIGESTIVO DEL CONEJO.
518
PREVALENCIAS Y FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A CHLAMYDIA ABORTUS EN OVINOS DE MÉXICO.
521
ACTIVIDAD ANTIPARASITARIA DE IVERMECTINA EN DOSIS REPETITIVAS A INTERVALOS MENSUALES
CONTRA LARVAS DE TOXOCARA CANIS EN RATONES CD1.
524
INHIBICIÓN MIGRATORIA Y ACTIVIDAD SOBRE LARVAS ENQUISTADAS DE TOXOCARA CANIS DE UN
PRODUCTO FORMULADO A BASE DE IVERMECTINA DE LIBERACIÓN CONTROLADA EN RATONES DE LA
CEPA CD-1 CON INFECCIÓN INDUCIDA.
527
EVALUACIÓN DE ARTEMISIA CINA 30CH Y ARTEMISIA CINA EXTRACTO ETANÓLICO EN UNA INFECCIÓN
CONTROLADA DE HAEMONCHUS CONTORTUS EN BORREGOS HAMPSHIRE.
530
IDENTIFICACIÓN DE LAS PRINCIPALES ENFERMEDADES INFECCIOSAS EN BOVINOS DEL ESTADO DE
MORELOS.
532
EVALUACIÓN BACTERIOLÓGICA EN ÚTEROS DE VACAS SACRIFICADAS EN EL RASTRO MUNICIPAL DE
TULANCINGO, HIDALGO.
535
INFECCIÓN DE LEONES MARINOS DE CALIFORNIA (ZALOPHUS CALIFORNIANUS)
TERRESTRES DE BRUCELLA SPP.
538
CON ESPECIES
DIAGNOSTICO DE ARTRITIS ENCEFALITIS CAPRINA (AEC) EN OAXACA.
541
ETIOLOGÍA DE LA QUERATOCONJUNTIVITIS OVINA EN AMANALCO Y VALLE DE BRAVO, ESTADO DE
MÉXICO.
544
COMPATIBILIDAD IN VITRO DE CUATRO HONGOS NEMATÓFAGOS Y SU ACTIVIDAD CONTRA
HAEMONCHUS CONTORTUS (L3) PARA ESTABLECER COCTELES DE HONGOS PARA EL CONTROL DE LA
HEMONCOSIS OVINA.
546
xxiv
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EVALUACIÓN DE EXTRACTOS HIDROALCOHÓLICOS DEL HONGO COMESTIBLE PLEUROTUS DJAMOR
CONTRA EL NEMATODO PARÁSITO DE OVINOS HAEMONCHUS CONTORTUS (L3).
IX.
549
Socioeconomía y transferencia de tecnología
EFECTO DEL TIPO DE UNIDAD DE PRODUCCIÓN SOBRE LA PREVALENCIA DE LA VARROOSIS Y LOS
NIVELES DE INFESTACIÓN DE VARROA DESTRUCTOR EN COLONIAS DE ABEJAS EN MORELOS.
552
CONOCIMIENTO DE LOS PRODUCTORES DE GANADO BOVINO EN EL CONTROL DE LA BABESIOSIS Y
ANAPLASMOSIS EN EL MUNICIPIO DE RÍO LAGARTOS, YUCATÁN.
555
GANANCIAS O PÉRDIDAS TOTALES Y UNITARIAS EN EL SISTEMA DE PRODUCCIÓN FAMILIAR LECHERO
BOVINO, EN LA LOCALIDAD DE CAMPO HERMOSO EN MARAVATÍO, MICHOACÁN.
558
IMPORTANCIA DEL MAÍZ EN LA ALIMENTACIÓN DE GANADO DOBLE PROPÓSITO EN TLATLAYA, ESTADO
DE MÉXICO.
561
EVALUACIÓN ECONÓMICA DE LA PRODUCCIÓN DE LECHE Y QUESO EN UNIDADES DOBLE PROPÓSITO
EN EL MUNICIPIO DE TLATLAYA, ESTADO DE MÉXICO.
563
TENDENCIAS DE LA GANADERÍA DOBLE PROPÓSITO EN EL SUR DEL ESTADO DE MÉXICO.
565
DINÁMICA POBLACIONAL DE LA LOMBRIZ ROJA (EISENIA FOETIDA) EN DOS SUSTRATOS ORGÁNICOS:
COMPOSTA DE HECES DE BOVINOS Y DE EQUINOS.
567
IMPACTO DE LA GLOBALIZACIÓN Y APERTURA COMERCIAL SOBRE LOS PRODUCTORES LECHEROS DE LA
CIENEGA DE JALISCO, MÉXICO.
570
EVALUACION DE LAS CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS DE LA CARNE DE CONEJO Y ESTUDIO DE
MERCADO.
573
RESPUESTA PRODUCTIVA Y ECONÓMICA A LA SUPLEMENTACIÓN CON DIFERENTES FUENTES DE ENERGÍA
EN VACAS DE DOBLE PROPÓSITO EN LA ÉPOCA DE ESTIAJE.
576
DESCRIPCIÓN DE LA PRODUCCIÓN EN LA CUNICULTURA DE TIPO FAMILIAR EN EL VALLE DE TOLUCA,
ESTADO DE MÉXICO.
578
INCLUSIÓN DE ENSILADO DE MAÍZ EN ÉPOCA DE SECA Y SU IMPACTO EN LOS COSTOS DE
ALIMENTACIÓN DE VACAS LECHERAS EN SISTEMAS DE PRODUCCIÓN DE LECHE EN PEQUEÑA ESCALA EN
EL NOROESTE DEL ESTADO DE MÉXICO.
581
USO DE INNOVACIONES RELACIONADAS CON LA ALIMENTACIÓN EN EL SISTEMA DE PRODUCCIÓN
GANADERÍA DE DOBLE PROPÓSITO EN MÉXICO.
584
IMPORTANCIA SOCIAL, AMBIENTAL Y ECONÓMICA DE LA GANADERÍA FAMILIAR EN LA MICROCUENCA
LA JOYA, QUERÉTARO, QRO.
587
EL PAPEL DE LA OVINOCULTURA EN LOS MODOS DE VIDA DE LOS HOGARES RURALES DE LAS AREAS
PROTEGIDAS.
589
INTEGRACIÓN DE ÉQUIDOS DE TRABAJO EN LAS ESTRATEGIAS DE DESARROLLO DE COMUNIDADES
CAMPESINAS DE MONTAÑA.
592
IMPACTO DE LA PRODUCCIÓN Y COMERCIALIZACIÓN DE LA BARBACOA DE OVINO EN EL
CRECIMIENTO ECONÓMICO EN CAPULHUAC DE MIRAFUENTES, ESTADO DE MÉXICO, 2014.
594
PRIORIZACION DE LAS CADENAS AGROALIMENTARIAS Y DEL TROPICO MEXICANO.
597
xxv
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
X.
Utilización de forrajes y manejo de pastizales
CONCENTRACIÓN DE PROLINA EN GENOTIPOS DE BRACHIARIA HUMIDICOLA DURANTE LA ÉPOCA SECA
Y LLUVIOSA DE TABASCO.
600
VARIABILIDAD INTRAESPECÍFICA PARA VALOR NUTRITIVO Y DIGESTIBILIDAD IN SITU EN RECURSOS
GENÉTICOS DE HYMENACHNE AMPLEXICAULIS (RUDGE) NESS.
603
CARACTERIZACIÓN ANATÓMICA DE HOJA DE RECURSOS GENÉTICOS DE HYMENACHNE AMPLEXICAULIS
(RUDGE) NESS.
606
RENDIMIENTO DE FORRAJE DE PASTOS TROPICALES CON FERTILIZACIÓN Y RIEGO VS MANEJO
TRADICIONAL, EN LA REGIÓN CENTRAL DE VERACRUZ. SEGUNDO AÑO.
609
RENDIMIENTO DE MATERIAL SECA DE ONCE CULTIVARES DE PENNISETUM PURPUREUM EN TRES ÉPOCAS
DEL AÑO.
612
RENDIMIENTO DE FORRAJE DE DIFERENTES ECOTIPOS DE BRACHIARIA BRIZANTHA INTRODUCIDOS DE
ÁFRICA, A LA REGIÓN CENTRAL DE VERACRUZ.
615
ACUMULACIÓN DE FORRAJE Y COMPOSICIÓN MORFOLÓGICA DE AVENAS.
618
ADAPTACION DE ZACATES FORRAJEROS NATIVOS EN CHIHUAHUA.
621
GRADO DE DEFOLIACIÓN, FORRAJE TOTAL OFRECIDO Y RECHAZADO DE PASTO TANZANIA EN
MONOCULTIVO Y ASOCIADO CON LEUCAENA.
624
PRODUCCIÓN DE FORRAJE Y FRUTO EN TRES POBLACIONES NATIVAS DE CAPOMO BROSIMUM
ALICASTRUM EN NAYARIT.
627
COMPORTAMIENTO AGRONOMICO Y PRODUCTIVO DE OCHO CULTIVARES DE CYNODON DACTYLON
(L.) PERS. EN CLIMA AW2.
630
ATRIBUTOS MORFOLOGICOS Y PRODUCTIVOS DE GRAMÍNEAS BAJO TEMPORAL EN LA ZONA CENTRAL
DE ZACATECAS, MÉXICO.
633
COMPORTAMIENTO MORFOLOGICO Y PRODUCTIVO DE CINCO CULTIVARES DE PENNISETUM
PURPUREUM SCHUM. BAJO DIFERENTES PERIODOS DE DEFOLIACION.
636
CARACTERIZACIÓN DE LOS PASTIZALES DEL ÁREA DE PROTECCIÓN DE FLORA Y FAUNA NEVADO DE
TOLUCA PARA LA PRODUCCIÓN OVINA.
639
RENDIMIENTO DE FORRAJE DE OCHO CULTIVARES DE PASTO BUFFEL (CENCHRUS CILIARIS L.) BAJO UN
SISTEMA DE RIEGO EN ZONA TEMPLADA.
642
PRODUCCION DE HOJA Y TALLO DE BRACHIARIA BRIZANTHA CV. INSURGENTE EN OCHO EDADES DE
CORTE EN LAS ESTACIONES DEL AÑO EN ZACAZONAPAN, ESTADO DE MÉXICO.
645
RENDIMIENTO Y COMPOSICION BOTÁNICA DE ASOCIACIONES DE ALFALFA-RYEGRAS Y ALFALFAORCHARD ENTRE ÁRBOLES DE DURAZNO.
648
PRODUCCION Y CALIDAD DE ENSILADO DE CUATRO VARIEDADES DE MAÍZ Y UNA DE SORGO EN
CHAPA DE MOTA, ESTADO DE MÉXICO.
650
PRODUCCIÓN Y CALIDAD DE FORRAJE EN RECURSOS GENÉTICOS DE HYMENACHNE SPP.
653
ATRIBUTOS FISICOS Y FISIOLÓGICOS DE SEMILLA DE AZUCHE HYMENACHNE AMPLEXICAULIS RUDGE
(NEES).
656
xxvi
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CONTENIDO DE PROTEÍNA Y SUS FRACCIONES (A, B1, B2, B3 Y C) EN PASTO MOMBASA (PANICUM
MAXIMUM CV MOMBASA) CORTADO A DIFERENTES EDADES.
659
INCLUSIÓN DE ENSILADO DE AVENA (AVENA SATIVA) - PRADERA DE BALLICOS (LOLIUM PERENNE Y L.
MULTIFLORUM) Y ENSILADO DE MAIZ EN LA ALIMENTACIÓN DE VACAS LECHERAS EN SISTEMAS DE
PRODUCCIÓN DE LECHE EN PEQUEÑA ESCALA EN ÉPOCA SECA.
662
TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE ORIGEN PORCÍCOLA MEDIANTE UN FILTRO PERCOLADOR.
665
RENDIMIENTO DE FORRAJE DE SIETE CULTIVARES DE PASTO RHODES (CHLORIS GAYANA KUNTH.) BAJO
UN SISTEMA DE RIEGO EN ZONA TEMPLADA.
668
EFICIENCIA EN EL USO DEL AGUA DE ESPECIES FORRAJERAS C4 CON RIEGO POR GOTEO SUBSUPERFICIAL EN LA REGIÓN LAGUNERA.
671
EFICIENCIA EN EL USO DEL AGUA DE ESPECIES FORRAJERAS C3 CON RIEGO POR GOTEO SUBSUPERFICIAL EN LA REGIÓN LAGUNERA.
674
DESCRIPCIÓN DE LAS CARACTERISTICAS DE ECOTIPOS DE MACROPTILIUM ATROPURPUREUM,
RECOLECTADOS EN EL SUR DE MÉXICO.
677
.
xxvii
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
COMPARACIÓN ESTADÍSTICA ENTRE LAS TEMPERATURAS RECTAL Y TIMPÁNICA DE
CORDEROS DE PELO DURANTE LAS PRIMERAS 5 SEMANAS DE EDAD.
STATISTICAL COMPARISON BETWEEN RECTAL AND TIMPANIC TEMPERATURE OF HAIR LAMBS
DURING THE FIRST 5 WEEKS OF AGE.
Nicolás-López P*1, Soto-Sánchez A2, Zempoalteca-Aguilar G1, Taneco-Fernández J1, YáñezHernández JL2, Valadez-García KM1 y González-Alvarado JM1,3.
1Centro
Demostrativo Ovino; 2Escuela de Medicina Veterinaria y Zootecnia; 3Escuela de Biología,
Facultad de Agrobiología, Universidad Autónoma de Tlaxcala (UATX), México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Existen varios métodos para detectar la temperatura corporal de los animales domésticos pero
tradicionalmente se prefiere el uso de la vía rectal (Piccione et al., 2007). La vía timpánica ofrece ciertas
ventajas cuando se tiene grupos numerosos y se desea prevenir la contaminación entre individuos
(Sousa et al., 2012); sin embargo, para que sea clínicamente aceptable, ambos métodos e instrumentos
de medición deben tener suficiente concordancia para permitirle al veterinario emitir un diagnóstico
presuntivo con el uso intercambiable de ambas vías de medición (Del Campo and Boere, 2008). Se han
realizado diversos estudios fisiológicos y termométricos en animales de compañía, cerdos y corderos de
lana (Drew, 1996; Piccione et al., 2007), pero este tipo de estudios son escasos en corderos pelo.
OBJETIVO.
El objetivo general de este trabajo fue comparar estadísticamente la evolución y fluctuaciones de la
temperatura corporal registrada por la vía rectal (TR) y timpánica (TT) en corderos de pelo durante las
primeras 5 semanas de edad.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El ensayo se realizó en la unidad experimental del Centro Demostrativo Ovino (CDO) de la Facultad de
Agrobiología de la Universidad Autónoma de Tlaxcala, ubicado en Huamantla, Tlaxcala, México, 19.18°
Latitud Norte, 97.54° Longitud Oeste, altitud de 2,426 msnm. Tlaxcala presenta clima templado
subhúmedo con lluvias en verano; la temperatura media anual es de 14 °C, la temperatura máxima
promedio es alrededor de 25 °C y se presenta en los meses de abril y mayo, la temperatura mínima
promedio es de 1.5 °C en el mes de enero. Durante el periodo de estudio se compilaron las temperaturas
ambientales de la estación meteorológica más cercana (CLICOM 29011, Huamantla, Tlax.). Las ovejas
parieron en un corral general y se dejó que la madre limpiara a la cría; posteriormente ambas fueron
instaladas en una paridera en donde ser realizó el pesaje y diagnóstico de estado de salud de la cría. Los
corderos fueron pesados cada 7 días. Se monitorearon TR y TT de 24 corderos de pelo (11 machos y 13
hembras; Katahdin × Pelibuey y Dorper × Pelibuey) clínicamente sanos, con peso promedio al nacimiento
de 3,245 g ± 649 g (media  DS). De cada cordero se registraron ambas temperaturas entre las 9 y 11
AM de cada tercer día, desde el nacimiento y hasta los 35 días de edad. La TR fue medida con el uso de
un termómetro digital de bulbo (Microlife®, Mod. MT200), introduciéndolo 3-5 cm en recto, asegurando
que el bulbo tuviera contacto con la mucosa rectal dorsal. La TT fue registrada con el uso de un
termómetro digital con detector infrarrojo (Citizen® Mod. CT810), que se introducía en el pabellón
auditivo, de tal manera que el sensor apuntase en dirección hacia la membrana timpánica. Durante todo
el estudio ningún cordero presentó síntomas de enfermedad. Inicialmente se realizaron análisis de
estadística descriptiva de cada variable, a continuación se evaluó la homogeneidad de varianzas entre
ambas temperaturas a diferentes edades y en forma global mediante pruebas de F; finalmente, las
comparaciones entre medias se realizaron mediante pruebas de t de Student para dos muestras
emparejadas.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
1
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
I
Bienestar y comportamiento animal
Bienestar y comportamiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
La temperatura media ambiental de Huamantla registrada durante el periodo experimental fue de 13.6
°C, valor que está dentro de la zona de confort para ovinos adultos (24 a 7 °C); sin embargo, de octubre
a enero la temperatura mínima ambiental disminuyó por debajo de la temperatura mínima de confort
(promedio de 4.6 °C) pero no afectó la salud de los animales.
En promedio para todo el periodo de registro, la TT fue inferior a la TR en 1.8 °C (promedios globales ±
desviación estándar: 37.7 ± 0.8 °C vs. 39.5 ± 0.4 °C, P < 0.0001; Cuadro 1); pero la diferencia entre
ambas temperaturas fue menor en el día del nacimiento (1.4 °C) y mayor en el día 29 de edad (2.4 °C).
Globalmente la TT fue más variable que la TR (F = 4.93; P < 0.0001), y se relacionó inversamente con la
magnitud de la curtosis (1.04 vs. 2.75), lo que indica que la TR presenta una distribución lepocúrtica y
sugiere que es una característica más repetible que TT. Los coeficientes de asimetría fueron negativos
en ambos casos (- 0.38 vs. - 0.41) indicando que la distribución de frecuencias fue afectada en mayor
medida por los registros de temperatura por debajo de la media, y sugiere que en corderos de pelo la
ocurrencia de registros de baja temperatura corporal son más extremos y variables que los registros de
altas temperaturas independientemente de la vía que se utilice. Ambas temperatura no mostraron
cambios evolutivos con el incremento de la edad de los corderos (P > 0.05; Figura 1).
Figura 1. Temperatura rectal (panel superior) y ótica (panel inferior) de los corderos de pelo durante las
primeras 5 semanas de vida.
Diversos estudios con ovinos (Del Campo and Boere, 2008; Drew, 1996) y mascotas también han
reportado valores de TT inferiores a la TR (Sousa et al., 2011); aquellos estudios y nuestros resultados
sugieren que el tipo y(o) manejo de termómetro pueden afectar las lecturas que se toman por vía ótica.
2
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 1. Comparación entre la temperatura rectal y ótica de los corderos a 6 edades diferentes durante
sus primeros 35 días de edad y promedios globales de todo el periodo de colecta de datos.
Peso corporal, g
Edad, d
X ± EEM
Temperatura, °C
Rectal
Timpánica
ESD1
Prob2
r
1
3,245 ± 135
39.3
37.7
0.13
<0.001
0.02
7
4,393 ± 208
39.4
37.7
0.11
<0.001
0.33
15
5,617 ± 280
39.4
37.7
0.16
<0.001
<0.01
21
6,767 ± 372
39.6
37.8
0.12
<0.001
<0.01
29
7,926 ± 494
39.7
37.3
0.17
<0.001
<0.01
35
8,928 ± 502
39.6
37.3
0.15
<0.001
0.05
Promedios globales
39.54
37.71
0.04
<0.001
0.12
Error estándar de la diferencia; n = 24 en cada edad y N = 412 para el promedio global que incluye 18
edades pero se excluyen 20 datos aberrantes.
2 Probabilidad de error tipo I en la prueba de t para datos emparejados (H : Rectal =Timpánica).
o
1
Drew (1996) reportó que la temperatura ótica en ovejas de la raza Bighorn fue relativamente más baja
que la temperatura rectal (38.5 °C vs. 40.9 °C respectivamente) presentando una diferencia de 2.4 °C.
Del Campo and Boere (2008) realizaron un estudio de la temperatura corporal con ovejas de la raza
Santa Inés y encontraron una diferencia de 2.92 ± 0.66 °C entre las temperaturas rectal y ótica
(promedios de 39.0 °C y 36.9 °C, respectivamente). En dichos estudios, las diferencias entre TR y TO
fueron mayores a las reportadas en nuestro estudio (1.85 °C) y confirman la existencia de factores que
afectan la lectura por la vía timpánica. La anatomía del canal auditivo del cordero es diferente al del
humano, así como a las propiedades térmicas de los tejidos; además, el cordero puede mover el
pabellón auditivo, lo cual pudo llevar a una posición inadecuada del lector infrarrojo dentro del canal
auditivo, de tal suerte que la lectura puede ser tomada en alguna parte del pabellón en lugar de la
membrana timpánica o incluso en alguna parte más interna del canal auditivo.
CONCLUSIÓN.
En corderos clínicamente sanos y bajo las condiciones en que se llevó a cabo este estudio, se observa
que la temperatura medida por vía timpánica es inferior (37.71 ± 0.8 °C) a la temperatura medida por vía
rectal (39.54 ± 0.36 °C) e indica falta de correlación entre ambos métodos de diagnóstico. La temperatura
corporal detectada por ambas vías no cambia durante las primeras 5 semanas de edad de los corderos.
Se aconseja realizar más estudios para determinar los factores instrumentales o procedimentales que
limitan el uso intercambiable de ambas vías para el diagnóstico veterinario en corderos.
LITERATURA CITADA.
Del Campo, C., and V. Boere. 2008. Is there equivalence between the tympanic membrane and the rectal
temperature in normothermic Santa Inés sheep? Ciencia Rural Santa María 38:1781-1783.
Drew, M. L. 1996. The use of a tympanic membrane thermometer for assessing hyperthermia in bighorn
sheep. J. Wildl. Dis. 32:512-516.
Dwyer, C. M., and C. A. Morgan. 2006. Maintenance of body temperature in the neonatal lamb: effects of
breed, birth weight and litter size. J. Anim. Sci. 84:1093-1101.
Piccione, G., M. Borrusi, F. Fazio, C. Giannetto, and G. Caola. 2007. Physiological parameters in lambs
during the first 30 days postpartum. Small Rum. Res. 72:57-60.
Sousa, M. G., R. Carareto, V. A. Perira, and M. C. C. Aquino. 2011. Comparison between auricular and
standard rectal thermometers for the measurement of body temperature in dogs. Can. Vet. J. 52:403-406.
Financiado por la Fundación Produce Tlaxcala A. C., a través el proyecto 29-2010-0005.
3
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ESTRATEGIAS PARA MITIGAR LOS EFECTOS DE LA VARIACIÓN CLIMÁTICA SOBRE EL
GANADO DE ENGORDA EN MÉXICO
“STRATEGIES TO MITIGATE THE EFFECTS OF CLIMATE VARIATION ON BEEF CATTLE IN MEXICO”
Valadez NM*1, Méndez GMC1, Miranda LG2, Sosa FCF1, Orozco EE1
¹Facultad de Ciencias Naturales - Universidad Autónoma de Querétaro; 2Departamento de Ciencias de la
Alimentación - Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Lerma.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Los animales poseen, de manera natural, mecanismos fisiológicos que les permiten regular su
temperatura corporal para mantener el funcionamiento de sus procesos metabólicos vitales. Dichos
mecanismos actúan a un costo energético bajo en ciertos rangos (zona termo-neutral). Cuando la
temperatura y/o humedad sobrepasa los límites de la especie, los mecanismos de regulación fallan en su
intento por mantener la temperatura y eventualmente puede provocar la muerte (Silanikove, 2000).
Durante la evolución de Bos taurus y Bos indicus ambos adquirieron separadamente genes que confieren
termotolerancia en los niveles fisiológicos y celulares, el ganado cebú es capaz de regular su temperatura
en respuesta al estrés por calor (Hansen, 2004), mientras que se asume que algunas razas de ganado
europeo son más resistentes a condiciones climáticas frías (Van et al., 2014). Ya ha sido ampliamente
estudiado que el bienestar, la salud y la productividad del ganado puede mejorar mediante medidas
capaces de mitigar los efectos adversos de climas extremos, no obstante, la necesidad y la eficacia de
esas medidas ha recibido menor atención. El conocimiento actual, aunque limitado, sugiere que proveer
de resguardo al ganado traerá beneficios a su bienestar y productividad (Van et al., 2014). En México, la
ganadería se desarrolla en aproximadamente 60% de la superficie del territorio nacional; existen tres
regiones ganaderas: la región norte, árida y semiárida, esta última orientada fundamentalmente al abasto
del mercado interno (FIRA, 2010). El territorio nacional cuenta con una gran variedad de regiones
climáticas y fenómenos meteorológicos que incluyen heladas, ondas de calor y de frío, vientos intensos o
variaciones de radiación y humedad (CMNCC, 2009). Existen pocas investigaciones en el país que
evalúen la importancia del confort térmico del ganado de engorda, estudios son necesario para mejorar la
eficiencia de los diferentes sistemas de producción en México.
OBJETIVOS.
El objetivo de este estudio fue evaluar la eficiencia de un sistema de techos para corral de engorda en
confinamiento, que es relativamente nuevo en la región del centro de México, así como los efectos de
este sistema sobre la termorregulación, comportamiento y productividad del ganado.
MATERIAL Y MÉTODO.
El estudio se llevo a cabo el municipio de Ezequiel Montes, en la zona semiárida del estado de
Querétaro. Las evaluaciones se realizaron en corrales de confinamiento durante un periodo de engorda
comercial que abarcó las estaciones de otoño e invierno. Fueron comparados corrales con techo tipo
invernadero (tratamiento I) y corrales control sin ningún tipo de cobertura (tratamiento II), con una réplica
de cada tratamiento. Se incluyeron un total de 261 bovinos machos enteros, con características
predominantemente de la especie Bos indicus, los cuales se dividieron en cuatro corrales diferentes.
Fueron monitoreadas condiciones ambientales como temperatura y humedad durante 24 horas al día
mediante el uso de termo-higrómetros automáticos modelo: Pro v2 (U23-00x) de la marca HOBO®;
mediante los datos registrados por este aparato se obtuvo el Índice de Temperatura y Humedad (ITH)
mediante la fórmula: [(0.8 x temperatura) + (humedad relativa/100) x temperatura -14.4) + 46.4], diseñada
por Thorn (1959) por el cual es posible saber si el animal se encuentra en su zona termoneutral o en
diferentes estados de estrés por calor. También se evaluó la temperatura de la superficie del suelo (TSS)
4
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
mediante el uso de termografía y la temperatura del agua de bebida. Para evaluar los procesos de
termorregulación de los animales se tomó la temperatura de la piel (TP) usando termografía y frecuencia
respiratoria (FR). En la evaluación de comportamiento se realizó una prueba de “Scan sampling” con
muestreos de barrido cada 15 minutos, se evaluaron conductas de mantenimiento (comer, beber, rumiar)
y el estado del animal (echado o parado); fueron 55 horas totales de observación por tratamiento.
Finalmente se evaluaron los parámetros productivos: consumo de materia seca (CMS), la ganancia diaria
de peso (GDP), conversión alimenticia (CA) y la presentación de síntomas correspondientes a
enfermedad respiratoria. Para condiciones ambientales, termorregulación, comportamiento y registros de
alimentación se utilizó un análisis de ANOVA de una vía con comparación de medias mediante el método
de Tukey del software JMP® de SAS; mientras que para síntomas de enfermedad respiratoria se realizó
un análisis de supervivencia con el estimador de Kaplan–Meier en el programa Excel ®.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Considerando las 24 horas totales de monitoreo de temperatura y humedad relativa no se encontraron
diferencias significativas entre ambos tratamientos, sin embargo al realizar una comparación por cada
hora del día se encontró que hubo diferencia entre tratamientos en el periodo de 19:00 a 08:00hrs;
encontrando temperaturas menores (P<0.0001), pero humedades mayores (p<0.0001) en el tratamiento
sin techos. Debido a lo anterior, las condiciones ambientales fueron más estables en el tratamiento con
techos, brindando a los animales mejores condiciones para su termorregulación además de protección
contra la lluvia y radiación directa del sol, mientras que en el tratamiento sin techos las temperaturas
fueron más extremas encontrando variaciones de temperatura de más de 30°C en un solo día, lo cual
resulta perjudicial tanto para Bos taurus como para Bos indicus (Van et al., 2014; Hansen, 2004). De
acuerdo con lo establecido por Davis y colaboradores (2003), en ambos tratamientos se encontraron
casos de estrés calórico, sin embargo, más del 70% de los casos de estrés calórico severo (ECS)
correspondieron a los corrales sin techo, lo cual puede asociarse a la radiación solar directa. La TSS fue
mayor para el tratamiento sin techo de las 10:00 a las 16:00hrs (p<0.006), llegando a alcanzar
temperaturas mayores a los 50°C, lo que reduce en gran medida la posibilidad de pérdida de calor por
conducción mediante el contacto con la superficie del suelo; aunado a esta dificultad, el agua provista a
los animales de esta unidad de producción se obtiene de pozo por lo que suele llegar muy caliente a
ciertas horas del día, impidiendo usar este recurso para disminuir la temperatura corporal de los animales
durante las horas más calurosas. Para el tratamiento con techos la temperatura mínima del agua fue de
21°C y la máxima de 39°C, el tratamiento sin techo presentó una temperatura mínima de 12°C y una
máxima de 37°C; la temperatura del agua fue menor en el tratamiento sin techo debido a que durante las
horas más calurosas los bebederos son alcanzados por una sombra. Se determinó que en los corrales
sin techo la TP de los animales fue mayor (P=0.018) que la de aquellos con techos que no estuvieron
directamente expuestos a la radiación solar, asimismo la TP y la FR fue mayor en los animales con pelaje
oscuro (P<0.0001) y (P<0.0007), si bien el aumento en la frecuencia cardiaca y respiratoria se presenta
como un mecanismo de termorregulación ante temperaturas elevadas (Silanikove, 2000), en este caso
los tratamientos no fueron tan diferentes en las temperaturas presentadas entre las 09:00 y las 18:00hrs,
por lo que no se encontraron diferencias entre tratamientos para la FR. En cuanto a comportamiento,
gracias al Scan Samplig se pudo determinar que durante los periodos más calurosos del día (12:0015:00hrs) la proporción de animales parados fue mayor en los corrales sin techo (p=0.0251) lo que se
atribuye a las elevadas temperaturas de la superficie del suelo; en este mismo periodo se encontró una
proporción mayor de animales alimentándose en el tratamiento sin techo, lo que explica lo que los
registros de alimentación sugirieron, en donde se encontró que los animales con un mayor consumo de
alimento (P=0.006) fueron aquellos del tratamiento sin techo; sin embargo, no se encontraron diferencias
significativas en la GDP ni en la CA entre ambos tratamientos. De igual manera el análisis de Kaplan–
Meier demostró que en las últimas semana de la engorda, los individuos sin techo tuvieron mayor
presentación de síntomas de enfermedad respiratoria que aquellos protegidos por este sistema de techos
(P<0.005). Por lo anterior, luego de revisar los registros de alimentación y sintomatología de enfermedad
respiratoria se puede decir que los animales sin techo fueron menos eficiente al encontrase expuestos
directamente a temperaturas más extremas, lluvias y radiación solar.
5
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
El sistema de techos tipo invernadero tiene un buen funcionamiento en el resguardo del ganado de la
zona semiárida del país, ya que ofrece protección contra la lluvia y la radiación solar directa, además de
que mantiene una temperatura más confortable para los animales durante los periodos más fríos del día,
lo que se ve reflejado en una menor presentación de síntomas de enfermedad respiratoria. Sin embargo,
por el material de cobertura, este sistema no es recomendable como amortiguador de estrés calórico en
el ganado, ya que la suma de temperaturas elevadas y la acumulación de humedad dentro de los corrales
disminuyen la posibilidad de termorregulación del animal. Al ser una estructura costosa, el productor
deberá considerar las características de este sistema antes de hacer una inversión de este tipo. También
es necesario realizar más investigaciones sobre nuevos sistemas y materiales que puedan utilizarse en la
región.
RECONOCIMIENTOS.
A los productores del municipio de Ezequiel Montes por su gran apoyo, interés y cooperación para la
realización de este estudio. A la UNAM y a la UAM por su apoyo y facilitación de los equipos utilizados en
este estudio.
6
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTOS DE LA INTERACCIÓN DE UN INSECTICIDA NEONICOTINOIDE Y EL ÁCARO VARROA
DESTRUCTOR A. SOBRE EL COMPORTAMIENTO DEFENSIVO DE LAS ABEJAS MELÍFERAS (APIS
MELLIFERA L.).
EFFECTS OF THE INTERACTION OF INSECTICIDE NEONICOITINOID AND THE MITE Varroa
destructor A. ON THE HONEYBEES (Apis mellifera L.) DEFENSIVE BEHAVIOR.
De la Mora PA*1, Uribe RJL1, 2, Guzmán NE3, Espinosa MLG1
1Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM),
Ciudad de México, México; 2Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento
Animal (CENID-Fisiología y MA), Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias,
Querétaro, México; 3School of Environmental Sciences, University of Guelph, Guelph, Ontario, Canada.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Las abejas melíferas y otros insectos polinizadores están perdiéndose a tasas sin precedentes alrededor
del mundo (Tilman et al 2001). En México no existen estudios formales para determinar la perdida de
colonias de abejas debido al empleo de insecticidas. En nuestro país existen cerca de 1,800,000
colmenas que están en manos de poco más de 40,000 apicultores. Las abejas son importantes en la
polinización de muchos cultivos agrícolas y en múltiples plantas silvestres. El 35% de los cultivos
agrícolas en todo el mundo dependen de la polinización, su valor es de $265,000 millones de euros
(Lautenbach et al 2012). Estos cultivos requieren de la aplicación de pesticidas para el control de plagas
dañinas, pero los insectos benéficos como las abejas melíferas están siendo dañados debido a los
efectos residuales en néctar y polen (Mullin et al 2010). En Europa las poblaciones de abejas
disminuyeron en un 25% entre 1985 y 2005, y el 46% de las 68 especies de abejorros europeos y el 24%
están en peligro de extinción, según la agencia europea del medio ambiente. Aunado a esto las abejas
melíferas son afectadas por la enfermedad de varroasis, que es la principal plaga que las afecta
mundialmente, con lo cual su salud sufre un serio deterioro. Por lo tanto los insecticidas y las
enfermedades están afectando de manera general la vida de las abejas. Adicionalmente insecticidas
neonicotinoides como el thiamethoxan y la varroasis son dos factores que se consideran están
correlacionados en lo que se conoce como el síndrome de despoblación de la colmena, que ha causado
la muerte de millones de colonias en todo el mundo, tan solo en Estados Unidos de Norteamérica se
reportaron pérdidas de más del 40% de sus colonias de abejas a partir de 1996. Las abejas melíferas
siendo insectos sociales, realizan distintas tareas para lograr su sobrevivencia, entre ellas se encuentra
el cuidado y protección del nido, para lo cual abejas especializadas en la defensa se encuentran a la
entrada de la colmena y otras en el interior, estas últimas son las responsables de los ataques en masa.
Si las abejas perdieran la capacidad de responder ante la presencia de invasores tendrían pocas
oportunidades de subsistir, por ello las abejas guardianas y aguijoneadoras salen para picar y ahuyentar
a los intrusos. En este trabajo se trata de dar claridad de como un insecticida neonicotinoide y la varroasis
afectan el comportamiento defensivo de las abejas melíferas.
OBJETIVO
Determinar los efectos de un insecticida neonicotinoide a dosis sub letal y el parasito Varroa destructor
sobre el tiempo de reacción para picar de abejas individuales.
MATERIALES Y MÉTODOS
Este trabajo se realizó en el Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento
Animal-INFAP, que se encuentra en Ajuchitlán, Colón, Querétaro, México. Que se sitúa a una altura de
1867 msnm, clima templado semiseco, temperatura anual entre los 7 y los 25ºC y precipitación pluvial
promedio anual de 574 mm (INEGI, 2006). Diseño Experimental. Panales de cría operculada próxima a
emerger tomados de 6 colonias de abejas fueron introducidos en una jaula de aislamiento para después
ser mantenidas en una incubadora eléctrica a temperatura constante de 35°C y humedad relativa de
65%. Veinticuatro horas después estas jaulas con los panales fueron abiertos y se recuperaron abejas
recién emergidas. Se formaron cuatro grupos experimentales como sigue: Grupo C= grupo control; Grupo
7
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
V= abejas parasitadas con especímenes adultos vivos del parásito Varroa destructor, Grupo IDS= abejas
expuestas al insecticida a dosis sub letales (0.4 ng/abeja; del insecticida neonicotinoide Thiamethoxan;
Grupo VDS= abejas expuestas al parásito Varroa destructor y dosis subletal del insecticida. Cada grupo
de abejas jóvenes fue aislado en pequeñas jaulas cuadradas de madera (7x6x3 cm), y se mantuvieron a
temperatura, humedad relativa, constante así como con agua y alimento ad libitum en una incubadora
eléctrica, durante 7 días. Los ácaros de V. destructor fueron colectados de colonias de abejas altamente
infestadas y se depositaron sobre las abejas con un pincel de brocha fina. El insecticida thiamethoxam
fue calculado para alimentar a 30 abejas a una dosis sub letal contenida en 50 µl de azúcar/abeja/día y
fue renovado diariamente. El comportamiento defensivo se evaluó a los siete días de edad, mediante la
metodología propuesta por Uribe-Rubio et al. (2008), donde se registró el Tiempo de Reacción para Picar
(TRP) medida en segundos. Cada abeja se colocó sobre una parrilla metálica conectada al electroestimulador. El procedimiento general consistió en tomar una abeja y colocarla sobre la superficie de la
parrilla electica que inmediatamente se cubrió con una pequeña caja de Petri. Después de 5 minutos que
la abeja se tranquilizó se aplicó un estímulo eléctrico controlado (0.5mA) y se registró el tiempo
(segundos) que la abeja tardó en picar el sustrato de cuero que se encontraba por debajo de la parrilla.
Entre cada prueba se limpió la parrilla con un detergente neutro para evitar que olores del veneno de la
abeja anterior afectaran la siguiente prueba, así mismo el cuero fue cambiado después que cada abeja
pico. Esto se hizo con todas las abejas que lograron sobrevivir en cada tratamiento. Análisis Estadístico.
Se realizaron pruebas de Shapiro-Wilk para probar la normalidad de los datos, también se realizaron
pruebas de homogeneidad de varianzas usando la prueba de Bartlet. Debido a que los datos no se
distribuían con normalidad, se realizó una transformación a logaritmo natural, para producir distribución
normal antes de analizarlos. Los datos transformados del tiempo de reacción para picar fueron analizados
por un análisis de varianza bajo un modelo aleatorio simple para determinar los efectos de los distintos
tratamientos. Cuando se encontraron diferencias significativas, las medias de los tratamientos fueron
comparadas con pruebas de Tukey. Los datos fueron analizados con el paquete estadístico “SAS”
versión 9.
El modelo estadístico fue el siguiente: Yij = µ + Gi + Eij
Dónde:
Yij=variable medida transformada (tiempo de reacción para picar) en la j-ésima observación aleatoria,
asociada al i-ésimo tratamiento (C, V, DS, VDS)
µ= media de la población
Gi = efecto del i-ésimo tratamiento
Eij= error aleatorio NID (0, σ2)
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se encontraron diferencias estadísticas significativas entre los tratamientos¸ (F 3,145=9.09; P<0.0001). Las
medias y errores estándar fueron 1.85±0.46a n=29; 2.57±0.49a-b, n=26; 3.51±0.35b-c n=50 y 3.92±0.39c
n=41; para el grupo de abejas con varroa, grupo de abejas con varroa más el insecticida dosis sub letal,
grupo de abejas control y grupo de abejas con insecticida dosis sub letal respectivamente. Letras
diferentes muestran diferencias significativas. Los resultados nos indicaron que la presencia del ácaro
Varroa destructor afectó el tiempo de reacción para picar, ya que cuando se comparó con el grupo
control este tiempo se redujo en cerca del 50%, lo cual indica un efecto importante en el comportamiento
de aguijoneo de las abejas. Probablemente esto se debe al estrés del acaro sobre el cuerpo de las
abejas, manteniéndolas irritables, y por ello las abejas picaron más rápido que aquellas del grupo control.
En cambio las abejas del grupo que fue infestado con ácaros, más el insecticida no mostraron diferencias
estadísticas significativas al compararse con el grupo tratado solo con varroas, aunque si se observó una
ligera tendencia al aumentar de 1.85 s a 2.57 s, que representó una diferencia del 28% de reducción en
el tiempo de reaccionar para picar, es decir picaron más lentamente. Esta misma tendencia se observó al
comparar el grupo control con el grupo que solo se le aplico el insecticida, aunque la tendencia fue aún
menor (10.5%). Aparentemente la aplicación del insecticida por sí solo no tuvo efecto sobre el
comportamiento de aguijoneo de las abejas, pero si se presentó un efecto cuando se asoció al parásito
varroa.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Estos resultados son un poco intrigantes, pues se hubiera esperado que el grupo control y el grupo con
insecticida fueran diferentes, lo cual no ocurrió, probablemente se requiera que el tiempo de exposición a
8
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
dosis sub letales sea mayor para poder ocasionar un cambio en el nivel de respuesta de las abejas. Esta
es la primera vez que se evalúan los efectos colaterales de la administración del thiamethoxam sobre el
comportamiento defensivo, aunque no hubo claras diferencias de esos efectos. La exposición a bajas
concentraciones sub letales del neonicotinoide tiamethoxam puede causar en la abeja africanizada
deficiencias en las funciones cerebrales e intestinales, y contribuir a acortar su ciclo de vida (Oliveira et al,
2013), y podemos especular que con mayor tiempo de exposición se podría observar un incremento en el
tiempo de reacción para picar, es decir que tarden más en picar. Por lo pronto solo se pudo constatar que
el nivel defensivo de las colonias de abejas fue menor (picaron más rápido) en aquellas que fueron
tratadas con varroa y en asociación con el insecticida. Hará falta realizar una extensión de estas pruebas
con un número mayor de abejas y tiempo. Esto probablemente ayude a dar claridad sobre los efectos del
tiamethoxan, sobre el tiempo de reacción para picar.
RECONOCIMIENTOS
Esta investigación no hubiera sido posible sin el valioso apoyo del PhD. Ernesto Guzmán Novoa y Dra.
Laura G. Espinosa Montaño y Dr. José Luis Uribe Rubio, así como al Posgrado FMVZ-UNAM, CONACyT,
CENID-Fisiología y MA, INIFAP, y a la Universidad de Guelph.
REFERENCIAS
Lautenbach S, Seppelt R, Liebscher J & Dormann CF (2012). Spatial and Temporal Trends of Global
Pollination Benefit. PLoS ONE, 7: e35954.
Mullin CA, Frazier M, Frazier JL, Ashcraft S, Simonds R & Pettis JS (2010). High levels of miticides and
agrochemicals in NorthAmerican apiaries: implications for honey bee health. PLoS ONE, 5:e9754.
Oliveira RA, Roat TC, Carvalho SM & Malaspina O (2013). Sideeffects of thiamethoxam on the brain and
midgut of the Africanized honeybee Apis mellifera (Hymenopptera: Apidae). Environmental Toxicology in
press.
Tilman D, Fargione J, Wolff B, D’Antonio C, Dobson A, Howarth R, Schindler D, Schlesinger WH,
Simberloff D & Swackhamer D (2001). Forecasting Agriculturally Driven Global Environmental
Change. Science, 292: 281-284.
Uribe-Rubio JL, Guzmán-Novoa, Vázquez-Peláez, Hunt GJ. Genotype, Task Specialization, and Nest
Enviroment Influence the Stinging Response Thresholds of Individual Africanized an European
Honeybees to Electrical Stimulation. Behav Genet 2008; 38: 93-100.
9
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DE DOS TÉCNICAS DE MANEJO Y ALIMENTACIÓN DURANTE LA LACTANCIA EN
BECERRAS HOLSTEIN.
EFFECT OF TWO MANAGEMENT AND FEEDING TECHNIQUES DURING LACTATION IN HOLSTEIN
HEIFER CALVES.
Rodríguez AA*1, Méndez GHMC1, Torres CMG2, Chávez LMJ1.
1Maestría en Salud y Producción Animal Sustentable, Facultad de Ciencias Naturales, Universidad
Autónoma de Querétaro; 2Instituto de Ciencias Agropecuarias, Licenciatura de Medicina Veterinaria y
Zootecnia, UAEH.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Los destetes son estresantes tanto para la madre como para sus crías, ya que no solo son separados
unos de otros, sino que las crías son privadas prematura y abruptamente de la oportunidad de mamar, lo
que puede llevar a “conductas redirigidas”. Las becerras criadas de forma individual, se alimentan de
cubeta y sólo pueden chupar objetos o becerras vecinas de caseta para satisfacer su motivación mamar
(de Pasillé, 2001). Dichas conductas redirigidas pueden reducirse permitiendo que los animales mamen
de una mamila, brindándoles así la oportunidad de mamar. La privación de comportamiento también debe
abordarse en becerras criadas en casetas individuales, ya que en la mayoría de las unidades de
producción intensiva, los animales no pueden llevar a cabo muchos de los comportamientos observados
regularmente en entornos menos restrictivos (corrales grupales). Por otro lado, la capacidad de
adaptación a la presencia de gente y al manejo frecuente es un factor importante que determinará su
adaptación al medio. La mansedumbre es deseable en estos animales y al interactuar con el humano
pueden reducir su “zona de fuga”. La idea errónea de que la medición del comportamiento es poco
objetiva y de poca utilidad, es aun común, en la actualidad la observación del comportamiento y su
medición sigue un método científico. Para conocer la función biológica del comportamiento animal, y
entender la manera en que se relaciona con otras disciplinas como fisiología, endrocrinología,
inmunología, epidemiología, producción y bienestar animal, es necesario cuantificar las diferentes pautas
del comportamiento de la especie que se estudia (Galindo y Orihuela, 2004).
OBJETIVOS.
Evaluar el impacto de dos técnicas de alimentación y manejo en becerras Holstein, mediante las medidas
zoométricas y la presentación de conductas redirigidas.
Evaluar si la implementación del uso de chupón durante la lactancia disminuye las conductas redirigidas,
evaluar si el acicalado mejora la relación humano-animal y comparar el comportamiento por medio del
etograma.
MATERIAL Y MÈTODO.
El presente estudio se realizó en una unidad de producción lechera ubicada en la Estación Mariscala,
Municipio de Apaseo el Grande, Guanajuato, y tuvo una duración de 18 semanas, incluyó 28 becerras
lactantes distribuidos al azar en 4 grupos, cada uno conformado por 7 animales alojados de manera
individual. Los tratamientos asignados fueron: cubeta con chupón (CCHSAC), cubeta sin chupón
(SCHSAC), acicalado y cubeta con chupón (CCHCAC), acicalado y cubeta sin chupón (SCHCAC). Al
momento de nacer las becerras fueron separadas de su madre y durante los primeros 3 días de vida se
mantuvieron en el área de maternidad donde se les suministro calostro dos veces al día, para
posteriormente entrar al área de recría, considerándose esté como “día 0”, donde se alojaron de manera
individual y se les asignó el tratamiento correspondiente. De manera adicional fue necesario entrenar a
las becerras para tomar de cubeta o mamar de la cubeta con chupón. Inicialmente, se les ofreció 4 litros
de leche pasteurizada, divididos en dos tiempos, 2 litros a las 8:00 hrs y 2 litros a las 15:00 hrs. Esto se
realizó hasta los 60 días del estudió, dando lugar al inicio del destete paulatino, el cual tuvo una duración
de una semana. Posteriormente, se dedicaron 3 días de adaptación, donde únicamente se les dio
alimento balanceado, forraje y agua, para después ser ubicadas en un corral post-destete. Para las
medidas zoométricas se consideraron el peso, ancho de cadera, altura y condición corporal. El peso de
10
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
las becerras se tomó los días 0, 30, 60, 70, 77 y 85 días del estudió, con una cinta bovino-métrica,
colocándola alrededor de la región torácica y juntando los extremos al nivel de la cruz. La medición de la
altura y ancho de cadera se realizó en las mismas fechas que el pesaje. Para esto se colocó el metro a la
altura de las extremidades posteriores, y para el ancho de la cadera se colocó el metro entre las sínfisis
púbicas. Las mediciones resultantes se expresaron en centímetros. El grado de condición corporal se
asignó utilizando la escala para bovinos lecheros propuesta por Edmondson et al. (1989). La cual se basó
en la observación de la región de la cadera, delimitada con la tuberosidad coxal, tuberosidad isquiática y
la base de la cola. Esta medición de realizó los días 0, 30, 60 y 85 días del estudio. La evaluación del
comportamiento se realizó con un etograma donde se observaron los estados y eventos más comunes de
las becerras, una hora antes y una hora después de cada comida, donde se observó a cada becerra los
días 1, 30 y 60, 75 y 85 del estudio. Por medio de los registros diarios de la unidad de producción se
recabaron datos de enfermedades presentes en los animales que participaron en el estudio. Únicamente
para los tratamientos CCHCAC y SCHCAC, se les agrego el acicalado con una escoba durante 5 minutos
después de cada toma de leche, del día 0 al día 70 del estudio. La evaluación de “zona de fuga” se
realizó los días 0 y 30 del estudió en corraleta individual y el día 70 en corral grupal. Para realizar esta
prueba en corraletas, el evaluador se aseguró de que los animales notaran su presencia permaneciendo
fuera de la corraleta por 5 minutos a una distancia de 1 metro. Se aproximó a la becerra de manera
tranquila hasta la puerta de la corraleta, y observo su reacción, posteriormente se metió a la corraleta y
por un minuto permaneció quieto, levantando la mano al frente, acercando el dorso de la mano hacia el
animal, y continuo así hasta que el animal mostro signos de huida, movimiento hacia atrás, giro de la
cabeza o hasta tocar la nariz o boca del animal. Se registró la distancia a la que quedo el animal del
evaluador. Para la evaluación en corral, el evaluador se metió al corral y después de asegurarse de que
los animales notaron su presencia, empezó a caminar lentamente, levantando la mano al frente,
acercando el dorso de la mano hacia el animal y realizando las mismas observaciones y registros
anteriormente descritos.
Los datos de peso, altura y ancho de cadera y la evaluación de comportamiento, fueron analizados en el
programa estadístico JMP® versión 12.1.0, aplicando un análisis de varianza y prueba de Tukey con un
intervalo de confianza de 0.05. La zona de fuga fue analizada con un modelo estadístico factorial 2x2 en
el programa SAS® versión 9.4.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Medidas zoometrías: En el día 0, los animales tuvieron un peso promedio de 42 kilos y una ganancia
diaria de peso de 0.800 gramos/día, obteniendo un peso promedio final en el día 85 de 113.5 kilos. No se
obtuvieron diferencias significativas (P>0.05) entre los 4 tratamientos al destete y post-destete. Al realizar
los análisis estadísticos para la altura y ancho de cadera, no se encontraron diferencias estadísticas
significativas (P>0.05) entre los 4 tratamientos, iniciando con un promedio general de de 80cm de altura y
16cm de ancho de cadera, finalizando con 101.5 cm de altura y 20.5 cm de ancho de cadera.
Durante él estudió se observó que hubo más presencia de diarreas en el tratamiento CCHCAC con un
total de 7 casos, el timpanismo se presentó más en el tratamiento SCHSAC con un total de 3 casos. En
términos generales, a medida que se incrementó el tiempo de la evaluación, mejoro la condición corporal
de las becerras, sin embargo al momento del destete se vio afectada por dicho manejo. Durante el
estudio la condición corporal se mantuvo dentro del rango ideal (2.5 – 3.0 puntos), no se encontraron
diferencias significativas (P>0.05) entre los diferentes tratamientos.
En este estudió se encontraron que las tasas de crecimiento descritas como peso, altura y ancho de
cadera, fueron iguales o ligeramente inferiores en los tratamientos con chupón y acicalado, los resultados
son similares a los descritos por Hopkins (1997) y Szucs et al. (1983), los cuales encontraron que las
tasas de crecimiento de las becerras alimentadas con chupón fueron igual o ligeramente inferior que las
becerras alimentadas de manera tradicional (cubeta).
Evaluación de comportamiento: En relación a la toma de leche, se observó que en promedio los animales
que tomaron leche en cubeta (Tratamiento SCHSAC y SCHCAC), tardaron de 1 a 2 minutos en terminar,
y posterior a esto se dedicaban a chupar con mucha insistencia partes de la caseta (cubeta de alimento o
barrotes), o tomaban agua, en algunos casos buscaban el contacto con otra becerra. Según lo informado
por Loberg y Lidfors (2001), la ingestión de leche con chupón disminuyó el tiempo de conductas
11
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
redirigidas después de la comida en becerras alojados individualmente. Por lo tanto, si la becerra no tiene
un chupón a su disposición en ese momento, simplemente busca un estímulo alternativo. De acuerdo a
Jensen (2002), la becerra tarda de 6-12 minutos en amamantarse, mientras que en este estudio, los
animales que tomaron de la cubeta con chupón (Tratamiento CCHSAC y CCHCAC), tardaron en
promedio 8 a 10 minutos y al terminar preferían acicalarse o echarse. En los tratamientos CCHCAC y
SCHCAC, orinaban o defecaban mientras se les acicalaba, y al término se echaban y algunas hasta se
dormían. De acuerdo a Pasillé et al. (1993), este comportamiento podría ser el mecanismo fisiológico que
subyace aparentemente al mayor grado de relajación de las becerras alimentados con chupón. De
acuerdo a Paranhon da Costa y Magalhaes, el acicalado produce sensación agradable y fortalece la
relación entre el manipulador y el animal. Esta acción imita el comportamiento de la vaca, lamiendo a la
cría mientras mama. Grandin (1993), menciona que los animales que tienen mayor manipulación por el
humano a edades tempranas, serán más tranquilos para ser manejados a medida que crecen y sufrirán
menos estrés que el ganado que ha tenido menor contacto humano. En relación a las diversas
actividades que se observaron en el etograma, se pudo observar una diferencia estadística significativa
(P=0.0002) respecto a la actividad de estar lamiendo partes de la caseta, se evidencio que las becerras
que se alimentaron con chupón disminuyen significativamente dicha actividad, lo cual es un indicio de la
satisfacción de mamar, mientras que las becerras que se alimentaron de cubeta pasaron mayor tiempo
lamiendo partes de la caseta, esta actividad no es deseada ya que se relaciona con estrés. También se
pudo observar que aunque no hay una diferencia estadística significativa, hay una ligera tendencia
positiva al uso del chupón con respecto a las actividades de estar echada y de alimentarse, ya que el
hecho de pasar mayor tiempo echadas, es una actividad que demuestra niveles bajos de estrés o
incomodidad en el animal, ya que pasan a un estado más relajado, también cuando pasan mayor tiempo
echadas se estimula la rumia, lo que es un buen indicador en cuestión de alimentación y eficiencia
alimenticia, además se observó que las becerras alimentadas con chupón pasan mayor tiempo
alimentándose, lo que es bueno ya que a esta edad se requiere estimular el consumo de materia seca
para el desarrollo temprano del rumen. También se observó una ligera tendencia positiva a la aplicación
del acicalado con respecto a las actividades de estar parada y en contacto con otras becerras ya que al
igual que pasó con el chupón, el pasar menor tiempo parada y disminuir el contacto entre becerras, es un
indicador de bajo estrés, satisfacción y tranquilidad.
Zona de fuga: Desde el día 0 al día 70, que duro el acicalado, se observó que los animales fueron más
dóciles, permitiendo una relación humano-animal positiva, comportamiento que no se observó en los
otros dos tratamientos (tratamiento sin acicalar). Para la zona de fuga el acicalado tiene un efecto positivo
conforme avanza el tiempo de este manejo, ya que las becerras permiten significativamente una cercanía
mayor (menor área de fuga) con el humano, lo cual en comparación con las becerras que no fueron
acicaladas tuvieron mayor área de fuga en presencia del humano.
CONCLUSIONES.
Con base a los resultados se pudo observar que los tratamientos CCHSAC y CCHCAC fueron los
mejores, ya que el uso del chupón ayudo a disminuir las conductas redirigidas, que pueden recaer en la
menor incidencia de enfermedades. Mientras que el tratamiento SCHCAC y CCHCAC donde se
implementó el acicalado mejoró la interacción humano-animal disminuyendo la zona de fuga, permitiendo
un mejor manejo, lo cual disminuyo la frecuencia de la micción, defecación y vocalizaciones, así como
conductas indicativas de estrés agudo o miedo.
Para las medidas zoometrías (altura, ancho de cadera y peso), condición corporal, se recomienda
aumentar el número de muestra, para tener resultados estadísticamente significativos y confiables.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.
de Passillé, A.M.B., Christopherson R., y Rushen J. 1993. Non nutritive sucking by the calf and
postprandial secretion of insulin, CCK, and gastrin. Physiol. Behav. 54 (1993):1069–1073.
Grandin, T. 1993. Behavioral principles of cattle handling under extensive conditions. In Livestock:
Handling and Transport. CAB International, Wallingford, 1993: 43-58.
Loberg, J. y L. Lidfors. 2001. Effect of milkflow rate and presence of a floating nipple on abnormal sucking
between dairy calves. Appl. Anim. Behav. Sci. 72:189–199.
12
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
FACTORES RELACIONADOS CON EL TIEMPO DE RECUPERACIÓN DE ANESTESIA UTILIZANDO
ACEITE DE SYZYGIUM AROMATICUM EN PEZ BETA (BETTA SPLENDENS).
FACTORS RELATED TO ANESTHESIA RECOVERY TIME IN BETTA FISH (BETTA SPLENDENS)
USING SYZYGIUM AROMATICUM OIL.
Rivero MPV*1, Torres OCA2, García CLE1, Campos MGR1, Medrano MT1, Martínez EDA1.
1Laboratorio
de Sistemas Acuícolas, Departamento del Hombre y su Ambiente, Universidad Autónoma
Metropolitana- Xochimilco; 2Facultad de Estudios Superiores–Cuatitlan, Universidad Nacional Autónoma
de México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El Betta splendens es una de las especies de peces de ornato con mayor importancia económica en el
mercado nacional. Para la generación de información en las unidades de producción se hace uso de
diferentes técnicas de manipulación muchas de las cuales son factores que pueden provocar estrés que
influye en el bienestar y el comportamiento de los organismos, por lo cual es recomendable contar con
alternativas para disminuir el estrés en algunas acciones de manejo por ejemplo durante biometrías para
múltiples caracteres corporales. El aceite de clavo (Syzygium aromaticum) es una sustancia
comúnmente utilizada como sedante y anestésico en peces debido a su eficiencia, su bajo costo y su
seguridad. El eugenol (4-alil-2-metoxifenol) es el principio activo (Keene et al., 1998; Millán-Ocampo et
al., 2012) de este anestésico. Debido a lo anterior es importante valorar el uso del aceite de clavo para
facilitar el manejo de B. splendens en al unidades de producción.
OBJETIVO
Conocer los tiempos de anestesia y recuperación utilizando aceite de clavo, así como la relación de estos
con el peso corporal de Betta splendens.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se utilizaron 52 organismos con una edad promedio de 116 días, producidos en el Laboratorio de
Sistemas Acuícolas de la Universidad Autónoma Metropolitana – Xochimilco en México D.F., los cuales
fueron colocados en una solución de 1 ml/l de agua de una disolución de 0.36 ml de aceite de S.
aromaticum y 0.64 ml de etanol al 70%. Se consideró que el pez se encontraba en plano anestésico
cuando presentaba pérdida conspicua del equilibrio natatorio, disminución de los movimientos
branquiales y no mostraba reflejos táctiles (Noga, 2010). Como parte del manejo cada organismo, una
vez anestesiado, fue acomodado sobre una placa de vidrio con papel milimétrico para la obtención de
una imagen digital, después se colocó en una balanza para obtener su peso y finalmente se pasó a un
acuario de recuperación con 10 litros de agua a 25ºC, con aireación constante hasta que recuperó el
equilibrio natatorio.
Para determinar la relación del tiempo de recuperación con el tiempo de anestesia, manejo y peso
corporal se realizaron análisis de regresión lineal y cuadrática, se consideró que existía relación cuando
el valor de alfa era menor a 0.05. Los análisis se realizaron utilizando el programa JMP® versión 12.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Durante el estudio no se registraron casos de mortalidad dentro de las 24 horas posteriores al
procedimiento. Tampoco se presentaron casos de recuperación anticipada durante la manipulación de los
organismos, lo que permitió un manejo adecuado de ellos. Esto resultados contrastan con lo ocurrido en
otras especies de peces ornamentales como es el caso del pez ángel (Pterophyllum scalare) (García13
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Castañeda et al., 2012) y el gurami azul (Trichogaster trichopterus). Se detectó una relación lineal
positiva (β =0.62 y un Error Estándar de 0.13) entre el peso y el tiempo de anestesia y una relación lineal
negativa (β =-10.58 y EE 4.23) entre el peso y el tiempo de recuperación; sin embargo no se detectó
relación entre el tiempo de recuperación y el tiempo de anestesia (p<0.05) (Cuadro 2). En otras especies
acuícolas se ha encontrado asociación entre el tiempo de anestesia y el tiempo de recuperación como en
el pez pacu (Piractus mesopotamicus) y en Pterophyllum scalare, en los que se ha observado que al
disminuir el tiempo de anestesia incrementa el tiempo de recuperación (Millán-Ocampo et al., 2012),
mientras que en la trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) el tiempo de anestesia y el de recuperación
están asociados positivamente bajo diferentes concentraciones de eugenol (Keene et al., 1998). Los
resultados obtenidos indican que el uso de aceite de clavo en la concentración utilizada en este estudio
son seguros para el manejo de B. splendens. La estadística descriptiva de las variables utilizadas se
presenta en el Cuadro 1.
CONCLUSIONES
El proceso de anestesia usando aceite de clavo (S. aromaticum) es segura y eficaz en B. splendens lo
que permite una manipulación más segura.
Cuadro 1. Estadística descriptiva para el peso y el tiempo de anestesia, manejo y
recuperación en Betta splendens a las 116 días.
Media± D. E
Min
Max
Tiempo anestesia (min)
0.36±0.11
0.13
0.65
Tiempo manejo
(min)
1.30±0.28
0.92
1.95
Tiempo recuperación
(min)
13.72±3.02
7.78
25.2
Peso (g)
0.23±0.15
0.06
0.71
D.E = Desviación estándar, Min= mínimo, Max= máximo. min=minutos, g=gramos
Cuadro 2. Coeficiente de regresión lineal (β1) y cuadrático (β2) para el tiempo de anestesia,
manejo y recuperación y peso en Betta splendens a los 116 días.
Tiempo de recuperación y peso
Tiempo de anestesia y peso
Tiempo de manejo y peso
β1
β2
(E.E)
(E.E)
-10.58 (4.23)
24.39 (14.01)
P= 0.015
P=0.088
0.62 (0.13)
-0.99 (0.43)
P<0.0001
P=0.026
0.05 (0.42)
-0.53 (1.37)
P=0.906
P=0.700
E.E= Error estándar y P=significancia
REFERENCIAS
GARCÍA-CASTAÑEDA L, CAMPOS-MONTES G, DOMÍNGUEZ-LOZANO E, MARTÍNEZ-ESPINOSA DA.
Evaluación del aceite de clavo (Syzygium aromaticum) en Pterophyllum scalare como sedante. XIII
14
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Congreso Nacional de Ictiología y 1er Simposio Latinoamericano de Ictiologia. 243 San Cristóbal de las
Casas, Chiapas, 29 de octubre a 2 de noviembre 2012.
KEENE JL, NOAKES DLG, MOCCIA RD, SOTO CG. The efficacy of clove oil as an anaesthetic for
rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum). Aquaculture Research 1998; 29: 89-101.
MILLÁN-OCAMPO L, TORRES-CORTÉS A, MARÍN-MÉNDEZ GA, RAMÍREZ-DUART W, VÁSQUEZPIÑEROS MA, RONDÓN-BARRAGÁN IS. Concentración anestésica del eugenol en peces escalares
(Pterphyllum scalare). Rev Inv Vet Perú 2012; 23(2): 121-181.
NOGA EJ. Fish disease, diagnosis and treatment. 2nd edition. Singapore: Wiley-Blackwell a John Wiley &
Sons, Inc. Publication. 2010.
PEREZ RPA, SANTOS CL, AUGUSTO EA, VIEIRA E ROSA P, SOLIS MLD. Aceite de clavo como
anestésico para el pez pacu (Piaractus mesopotamicus). AN. VET (Murcia) 2010; 26:69-76.
15
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
VALIDACIÓN DE ACELERÓMETROS PARA REGISTRAR EL TIEMPO DE PASTOREO EN BOVINOS
LACTANTES.
VALIDATION OF ACCELEROMETERS FOR RECORDING GRAZING TIME IN LACTATING BOVINES.
Morales AE1, Licona VG1, Miranda de la LGC3, Robles JG1, Vieyra AR1, Cruz MRG3, Martínez GCG2,
Rayas AAA*3.
1Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia (FMVZ), Universidad Autónoma del Estado de México,
Toluca, Estado de México, México; 2Instituto de Ciencias Agropecuarias y Rurales (ICAR); Universidad
Autónoma del Estado de México, Toluca, Estado de México, México;3Departamento de Ciencias de la
Alimentación, Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Lerma, Lerma de Villada, Estado de México,
México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Es bien sabido que el pastoreo es la fuente de nutrientes de calidad más barata disponible para las vacas
lecheras y es un componente fundamental de la dieta de vacas lecheras para la mayoría de los sistemas
lecheros en el mundo (Peyraud y Delagarde, 2013). Existen grandes diferencias entre la cantidad y la
calidad de los pastos, esto puede influir en el comportamiento de las vacas en pastoreo. De acuerdo con
Moreau et al. (2009), los estudios del comportamiento en pastoreo pueden mejorar la comprensión de
cómo los animales aprovechan la pradera que se ofrece y podría mejorar la comprensión de como los
animales utilizan la pradera para mejorar su productividad (reproducción y lactancia). El desarrollo de
dispositivos electrónicos de gran alcance que permiten mayor sensibilidad y mayor capacidad de
almacenamiento de datos, abre nuevas perspectivas para el estudio del comportamiento animal; tales
dispositivos facilitan el estudio del comportamiento en donde el acceso a las observaciones visuales
directas sobre el animal es difícil o en ciertos lugares inaccesibles.
Para evaluar el tiempo de pastoreo Aikman et al. (2008) utilizó registradores electrónicos de
comportamiento, sin embargo, hasta ahora, no existe investigación significativa en el centro de México
que evalúe el tiempo de pastoreo en vacas lactantes mediante dispositivos electrónicos. Por lo tanto, el
objetivo de este estudio fue validar los registros de un acelerómetro triaxial con respecto a las
observaciones visuales del tiempo de pastoreo en vacas lactantes.
MATERIAL Y MÉTODOS
El estudio se realizó en el centro de México (19 ° 24 '52 "N y 99 ° 41' 20" O), a una altitud de 2,600 m. El
clima es templado subhúmedo dominado por el verano-otoño (junio a octubre) las lluvias. La precipitación
anual y la temperatura media anual es de 750-990mm y 13.5 ° C, respectivamente.
El estudio se realizó en una pradera de ryegrass perenne y trébol blanco del 01 al 30 de julio de 2014. La
composición botánica de la pradera fue: Lolium perene (53%), Trifolium repens (29%), Pennisetum
clandestinum (9%), Festuca arundinacea (7%) y hierbas (2%). Para el estudio se utilizaron siete vacas
Holstein multíparas y lactantes (602 ± 45 kg de peso vivo). Las vacas estuvieron en pastoreo continuo
durante 12 horas, comenzando a las 7:00 y terminando a las 19:00 horas; después del pastoreo, las
vacas fueron alojadas en corrales durante la noche y se alimentaron con 14,6 kg DM en forma de ración
totalmente mezclada compuesta por grano de maíz, de soya, de colza, salvado de trigo, aceite de soya,
paja de avena, ensilado de maíz y sal mineral (Vieyra Alberto, comunicación personal).
Las observaciones visuales directas de pastoreo se realizaron con tres observadores, los cuales fueron
entrenados previamente con el fin de normalizar los registros del tiempo de pastoreo. A lo largo del
período de evaluación, los observadores realizaron tres observaciones visuales en episodios de 30
minutos por vaca por día; realizándose en la mañana, al medio día y por la tarde; durante seis días de
registro continuos (DR), dando un total de 108 observaciones visuales.
16
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Los registros del tiempo de pastoreo se obtuvieron empleando acelerómetros electrónicos (HOBO
Pendant G Aceleración Data Logger, Onset Computer Corporation, Pocasset, MA) que estuvieron
sujetados a la parte media lateral de la mandíbula con una correa unido a la cabeza de cada vaca, en
una posición tal que el eje X estuvo paralelo al suelo, el eje Y estuvo perpendicular al suelo apuntando
hacia arriba, y el eje Z paralelo al suelo apuntando a la parte externa del plano sagital. Los acelerómetros
permanecieron sujetos en la misma posición durante los DR. Los acelerómetros se retiraron en el día 7
para la descarga de los datos mediante el software HOBOware (Onset Computer Corporation), que
convierte la fuerza-g en lecturas de aceleración (m/s2). Las lecturas de aceleración en el eje “X”
(4.17<X<7.6) y las lecturas de inclinación en “Y” 29 °<Y<57 ° indicaron que la vaca estaba con cabeza
hacia abajo en la posición de pastoreo indicando la actividad de pastoreo. Los datos fueron exportados a
Microsoft Excel (Microsoft Corporation, Redmond, WA). Los tratamientos evaluados para obtener la mejor
estimación del tiempo de pastoreo fueron; 1) observaciones visuales directas, 2) aceleración en el eje X,
3) aceleración en el eje X e inclinación en el eje Y (Tabla 1).
El análisis estadístico de los datos consistió en la comparación de los valores promedio del tiempo de
pastoreo. Se empleó un diseño de bloques completos al azar, ya que la variación en la temperatura y la
humedad durante los días de registro (DR) puedo afectar el comportamiento de pastoreo; por lo tanto los
DR se utilizaron como factor de bloqueo. El modelo general lineal (GLM) fue: Yijk = μ + Ti + Wj + eijk;
donde μ = la media general; Ti = el método de registro del tiempo de pastoreo (i = 1 a 3); Wj = el día de
registro (j = 1 a 6); y eijk = el término de error residual. La regresión lineal se utilizó para evaluar la
relación entre las observaciones visuales directas y el tiempo de pastoreo registrado por los
acelerómetros. El comando GLM y la regresión lineal están implementados en MINITAB® (2003).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La Tabla 1 muestra las diferencias significativas (P≤ 0.01) entre tratamientos (DR). En general las vacas
mostraron baja actividad de pastoreo durante los DR, en particular DR4. Las lecturas del acelerómetro en
el eje X fueron diferentes significativamente (P≤ 0,01) a las observaciones visuales en DR1, DR 2, DR3,
DR4, mientras que las lecturas de aceleración en el eje X) e inclinación en el eje Y fueron diferentes en
DR3, DR5 y DR6.
Tabla 1. Tiempo de pastoreo (segundos) obtenidos con observaciones visuales y los acelerómetros
Registros
RD1
observaciones visuales directas
510
aA
RD2
177
bB
RD3
382
aA
RD4
11
cC
RD5
481
RD6
aA
371 aA
Aceleración (eje X)
742 bA
366 aA
258 bA
108 bC
558 aB
402 aA
Aceleración (eje X e inclinación eje Y)
462 aA
300 bA
228 bA
84 cB
294 bA
282 bA
EEM
76
46
66
21
108
105
Método de registro
**
**
**
**
**
**
Día de registro
***
***
***
***
***
***
EEM: error estándar de la media; **: P≤ 0.01; ***: P≤ 0.001. Diferentes superíndices en minúsculas entre
hileras fueron estadísticamente diferentes. Diferentes superíndices en mayúsculas entre columnas fueron
estadísticamente diferentes.
La Figura 3 muestra la relación significativa (P≤ 0,01) entre las observaciones visuales del tiempo de
pastoreo y las lecturas del acelerómetro (eje X e inclinación en el eje Y), esta relación explico el 72% de
la variabilidad en los datos. Se observó que el tiempo de pastoreo fue subestimado después de 235
segundos, siendo significativamente (p ≤ 0,001) diferente en RD5 y RD6.
17
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Figura 3. Relación entre las observaciones visuales del tiempo de pastoreo y las lecturas de los
acelerómetros.
Línea negra sólida: X=Y; Línea punteada: ajuste de las observaciones visuales del tiempo de pastoreo
contra lecturas del acelerómetro; Círculos: observaciones visuales.
Según Tedeschi (2006), la exactitud y la precisión son dos conceptos clave para la evaluación de la
relación de un modelo (valor observado contra predicho); de esta manera, en este tenor la Figura 1
mostró que las lecturas del acelerómetro son exactos, ya que se distribuyen a lo largo de línea de
regresión consistentemente (línea punteada) pero son ligeramente imprecisos puesto que la línea de
regresión lineal está sobre o por debajo de la línea X=Y (línea negra sólida).
CONCLUSION E IMPLICACION
Los resultados mostraron que la validación del acelerómetro con respecto a las observaciones visuales
de tiempo de pastoreo fue adecuada, por lo tanto podría emplearse para monitorear el tiempo de
pastoreo, especialmente en casos en donde la observación directa se dificulte.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen a la Secretaria de Educación Publica a la Universidad Autónoma Metropolitana
Unidad Lerma (PROMEP 103.5/13/8925 UAM-PTC-417) y a la Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia (UAEMex).
REFERENCIAS
Aikman, P.C., Reynolds, C.K., and Beever, D.E. 2008. Diet digestibility, rate of passage, and eating and
rumination behaviour of Jersey and Holstein cows. Journal of Dairy Science 91(3) 1103–1114.
Moreau, M., Siebert, S., Buerkert, A., and Schlecht, E. 2014. Use of a tri-axial accelerometer for
automated recording and classification of goats’ grazing behaviour. Applied Animal Behaviour Science
119 158–170.
Peyraud, J.L., and Delagarde, R. 2013. Managing variations in dairy cow nutrient supply under grazing.
Animal 7 57–67.
Tedeschi, L.O. 2006. Assessment of the adequacy of mathematical models. Agricultural Systems 89(2–3)
225-247.
18
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Bienestar y comporatmiento animal
PRODUCCIÓN Y PURIFICACIÓN DE LA PROTEÍNA RECOMBINANTE HN DEL RUBULAVIRUS
PORCINO A PARTIR DE E. COLI TRANSFORMADA, PARA SU USO COMO UN INMUNÓGENO EN
CERDOS.
PRODUCTION AND PURIFICATION OF RECOMBINANT PROTEIN HN OF THE PORCINE
RUBULAVIRUS FROM E. COLI TRANSFORMED, AS A CANDIDATE FOR AN IMMUNOGEN IN PIGS
Lara-Romero R1*, Cuevas-Romero S2, Cerriteño-Sánchez JL3, Herrera CI3, Ramírez-Mendoza H4,
Hernández E1, Mendoza S1
1FES
Cuautitlán. UNAM. México; 2CENID-Microbiología Animal. INIFAP. México; 3Benémerita
Universidad Autónoma de Puebla. México; 4Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. UNAM.
México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En 1980 en granjas ubicadas en La Piedad Michoacán, México, se aisló un Paramixovirus, especie
Rubulavirus porcino (PorPV) agente etiológico de la Enfermedad del Ojo Azul. Actualmente hay poco más
de 16 millones de cerdos en la República Mexicana y un tercio de la población de cerdos se encuentra
afectada por el PorPV ya que es endémico en los estados centrales y es considerada una de las más
importante enfermedades que afectan la industria porcína mexicana, debido a la pérdida económica por
la baja fertilidad, aumento de hasta el 19% de lechones nacidos muertos, 30% más de momias, hasta 4.1 lechones nacidos vivos y un aumento de hasta el 50% de mortalidad en la primera semana de vida de
los lechones (2,3). El PorPV es un virus RNA que codifica para seis proteínas estructurales NP, P, M, F,
HN y L. La proteína más inmunógenica es la HN, la cual es capaz de producir anticuerpos neutralizantes
y en SDS-PAGE tiene un peso de 66 kDa (1,4). El objetivo de este trabajo fue producir y purificar la
proteína recombinante HN del PorPV para establecer las condiciones óptimas del bioprocesos de
producción para su escalamiento potencial y su uso como un inmunógeno en cerdos.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Inicialmente se evaluaron dos cepas transformadas de E. coli (KRX y BL21). Para detectar el gen HN en
el vector pDual®GC se realizó una PCR para la identificar las colonias de E. coli transformadas KRX que
contenían el inserto, posteriormente esas colonias se aislaron y se purifico su DNA para que con este se
pudiera realizar la transformación de la cepa BL21 de E. coli utilizando cloruro de calcio y de magnesio.
Se realizó la evaluación para determinar la forma de expresión de la proteína dentro de la bacteria. Se
cuantificó la proteína mediante un método modificado de Bradford para conocer cuál de las diferentes
cepas de E. coli producía la mayor cantidad de proteína. Posteriormente se realizó el proceso de
purificación por columna de afinidad utilizando la resina Chelating Sepharose FastFlow de GE Healthcare
y se realizó el western blot utilizando como anticuerpo primario anti-myc marcado con peroxidasa y suero
de cerdo positivo al Rubulavirus porcino revelando por quimioluminiscencia. Finalmente se evaluó la
actividad neuraminidasa de la proteína recombinante.
RESULTADOS.
Mediante western blot y cuantificación se detectó que la sobre expresión de la proteína recombinante HN
produce la formación de cuerpos de inclusión (Figura 1). El análisis estadístico mediante t de student se
determinó que la cepa de E. coli BL21 produjo una mayor cantidad de cuerpos de inclusión (p=<0.05) que
KRX (Cuadro 1). Se logró estandarizar el proceso de purificación donde no perdemos la proteína de
recombinante HN, esto determinado por el cromatograma de purificación y el western blot de las
fracciones recuperadas de la purificación (Figura 2). Los anticuerpos producidos por el PorPV, fueron
capaces de reconocer al peso de 66 kDa la proteína recombinante HN (Figura 3).
19
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
II
Biotecnología y biología celular en salud animal
Biotecnología
y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Figura 1. Western-blot revelado mediante quimioluminiscencia. M: marcador de peso molecular. ST:
cepa E. coli KRX sin transformar. SI: cepa de E. coli KRX-HN sin inducir. S: fracción proteica soluble
del lisado E. coli KRX-HN. L: fracción de lavados del lisado de E. coli KRX-HN. I: fracción proteica
insoluble de E. coli KRX-HN.
Cuadro 1. Cantidad (µg/µl) de cuerpos de inclusión obtenidos de dos cepas de E. coli
Repetición
KRK (µg/µl)
BL21 (µg/µl)
1
0.2528
0.7618
2
0.2489
0.5430
3
0.0657
0.4087
Media
0.1891
0.5711
Figura 3. Western-blot revelado utilizando
sustrato para fosfatasa alcalina. M: marcador
de peso molecular. CI: cuerpos de inclusión
de E. coli BL21-HN. NP: fracción de proteínas
no pegadas al níquel en el proceso de
purificación. L: fracción de lavados del
proceso de purificación. 1-6: fracciones de
elusión del proceso de purificación mediante
columna de afinidad en donde se muestran las
dos bandas correspondientes a la proteína
recombinante HN del PorPV.
Figura 2. Cromatógrama del proceso de
purificación de la proteína recombinante
HN del PorPV.
DISCUSIÓN.
La enfermedad de ojo azul (EOA) causada por el Rubulavirus porcino, es endémica solo en los estados
del centro y bajío de la República Mexicana. El gen HN que codifica para la proteína más
inmunodominante fue clonado e insertado en el vector de expresión pDual®GC, con el que se
trasformaron dos cepas de E. coli (KRX y BL21), las cuales expresaron la proteína HN, la cual se detectó
mediante western blot utilizando como anticuerpo primario anti c-myc un peso aproximado de 66 kDa, tal
y como reporta Linné y col. en el 92, donde indican que el peso en SDS-PAGE de la proteína HN es de
66 kDa. La sobre expresión de esta proteína recombinante produjo la formación de cuerpos de inclusión
en la bacteria E. coli, ya que la sobre expresión de genes codificados por plásmidos desencadena la
20
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
trascripción de genes de choque térmico y la formación de proteasas, lo que a menudo resulta en la
agregación de la proteína codificada como cuerpos de inclusión (5). La cepa BL21 de E. coli produjo una
mayor cantidad de cuerpos de inclusión (p=<0.05), incluso en otros estudios mostro su superioridad al
producir mayor cantidad de proteínas recombinantes en comparación con otras cepas como JM109 y
KRX. De los cuerpos de inclusión se realizó la purificación mediante cromatografía de afinidad, debido a
que en el extremo c-terminal de la proteína recombinante HN se encuentran seis histidinas, las cuales
son afines al níquel, las fracciones obtenidas en el proceso de purificación se graficaron a una
absorbancia de 280nm, las cuales indican que el proceso de purificación es óptimo. La proteína
recombinante fue detectada a un peso aproximado de 66 kDa mediante western-blot utilizando como
anticuerpo primario suero de cerdo infectado con el PorPV. Actualmente la EOA que representa una
barrera arancelaria para la exportación de cerdo y subproductos. El uso de vacunas es una herramienta
importante para el control y erradicación de diversas enfermedades.
CONCLUSION.
Los resultados obtenidos sobre el estudio de la proteína HN recombinante del PorPV dan pauta para que
pudiera ser una buena candidata como inmunógeno en cerdos.
REFERENCIAS.
1. Hernández J. et al. (1998). Veterinary Immunology and Immunopathology. 64: 367-381.
2. Kirkland P. D. & Stephano A. (2006). Diseases of swine. 9ª Ed. Blackwell Publishing.
3. Stephano A. et al. (1988). Vet Rec 122:6-10.
4. Linné T, (1992). Veterinary Microbiology. 33: 263-273.
5. Kane and Hartley. (1988). 6: 95-101.
21
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE FAGOCITOSIS IN VITRO DE NEUTRÓFILOS BOVINOS POR
STAPHYLOCOCCUS AUREUS CAPSULAR TIPO 8.
EVALUATION OF IN VITRO PHAGOCYTOSIS ACTIVITY IN BOVINE NEUTROPHIL BY
STAPHYLOCOCCUS AUREUS CAPSULAR TYPE 8.
Montoya GN1*, Velázquez OV1, Valladares CB1, Alonso FMU1
1Centro
de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Universidad Autónoma del Estado de
México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En la mastitis bovina el Staphylococcus aureus es el principal patógeno. La persistencia de la infección
en la glándula mamaria se asocia a los factores de virulencia que contribuyen a la inflamación y el
incremento de células somáticas. El exopolisacárido capsular de S. aureus, contribuyendo a evadir la
respuesta inmune innata al interferir en el proceso de opsonización afectando la fagocitosis por
neutrófilos (PMN) y la resistencia de la glándula mamaria a la infección. Se han identificado 11 serotipos
del exopolisacárido capsular de S. aureus en aislados de animales lecheros con mastitis; de los cuales
CP5 y CP8 son considerados los más prevalentes. La migración de los leucocitos polimorfonucleares en
la glándula mamaria constituye la primera línea de defensa celular frente a infección. Los PMN tienen la
capacidad de fagocitar y destruir a los agentes patógenos mediante procesos dependientes e
independientes de oxígeno. Después de la fagocitosis de las bacterias y la liberación de sustancias
bactericidas contenidas en los gránulos del PMN se desencadena la Apoptosis, que contribuye a limitar
el daño de la glándula mamaria. Los PMN apoptóticos al ser fago por los macrófagos promueven la
resolución de la inflamación, limitando la persistencia de la infección.
OBJETIVO.
Determinar la actividad de fagocitosis in vitro de neutrófilos de bovinos lecheros frente a S. aureus de tipo
capsular 8.
MATERIAL Y MÉTODO.
De tres vacas clínicamente sanas se obtuvieron muestras de sangre para el aislamiento de neutrófilos.
Los criterios de inclusión al grupo de estudio fueron: vacas en producción, negativas a prueba de
california, conteos celulares somáticos en leche ˂ de 200 x 10 3 células/ml, bacteriológicamente negativas
a 3 muestreos consecutivos a Staphylococcus aureus en muestras de leche y serología negativa a
anticuerpos anti S. aureus tipo capsular 5 y 8. La leche se obtuvo mediante un sistema de ordeño
mecánico y un protocolo de buenas prácticas de manejo e higiene del hato.
Para evaluar la actividad de fagocitosis de los PMN se emplearon dos grupos experimentales: neutrófilos
incubados con S. aureus tipo capsular 8 (SCP) y neutrófilos incubados con S. aureus tipo compacto (SC)
(sin cápsula). Como control negativo se incubaron neutrófilos en medio de cultivo sin bacteria. La
actividad de fagocitosis in vitro se evaluó a partir del índice de fagocitosis (IF) y capacidad de fagocitosis
(CP). Como control se emplearon neutrófilos incubados sin S. aureus. Los ensayos in vitro se realizaron
por triplicado.
Las muestras de sangre bovina se obtuvieron por venopunción de la vena yugular depositada en tubos
de recolección al vacío con anticoagulante Los neutrófilos (PMN) se aislaron mediante por el método de
lisis hipotónica de eritrocitos empleando dos soluciones de NaCl a diferente molaridad solución A (NaCl,
0.020 M) y solución B (NaCl, 0.164 M) (Velázquez et al., 2008). La concentración de neutrófilos se ajustó
a una concentración de 2.5 x 106 céls viables/mL. La viabilidad de los neutrófilos se determinó empleando
el método de exclusión de azul de tripán al 4% y estimada al 95%. La pureza de neutrófilos maduros se
observó en un frotis celular, teñido con May Grünwald-Giemsa.
22
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Para determinar la actividad de fagocitosis in vitro se empleó como sustrato una suspensión de S.
aureus ajustada a 2 x 108 CFU/ml y conjugada con isotiocianato de fluoresceína. Se colocó en una
proporción 1:10 neutrófilo: bacteria (Sutra et al., 1990). En un microtubo se adiciono 0.1ml de la
suspensión bacterial, 0.1ml de suero autólogo inactivado a 56°C y 0.8ml de suspensión de neutrófilos, se
realizaron dos frotis, uno se tiño con May Grünwald-Giemsa y se observó en el microscopio óptico y el
segundo se observó en microscopio de epifluorescencia. El IF se determinó por el número promedio de
bacterias fagocitadas por neutrófilo, después de observar y contar 200 células en diferentes campos
microscópicos. La CF se estimó a partir del porcentaje de células que fagocitaron, contando 200 PMN.
A partir del índice del IF de los tratamientos, comparados con el control, se determinó la media y
desviación estándar. Para evaluar las diferencias de la actividad de fagocitosis e inducción de apoptosis
entre los tratamientos y el grupo control se realizó una prueba de análisis de varianza y una prueba de tstudent para comparar las medias de los tratamientos utilizando el programa GraphPad Prism 5.01
(GraphPad Sofware Inc. USA).
RESULTADOS.
Los valores obtenidos en el ensayo in vitro para evaluar la actividad de fagocitosis de los PMN observada
por la técnica de microscopia de campo claro para la Capacidad de Fagocitosis (CF) fueron: SC
87.41±3.28 y SCP 77.36±5.07 (P<0.05).
El índice de fagocitosis (IF) observado mediante la técnica de microscopia de campo claro para los
diferentes tratamientos fueron, para el tipo SC 6.28±0.24, SCP 5.03±0.29 (P<0.05).
Mediante la observación con microscopia de epifluorescencia la CF fueron: SC 88.90±2.76, SCP
71.98±8.86 y los valores del índice de fagocitosis fueron SC 7.84±0.510, SCP 5.07±0.59 (p<0.05).
DISCUSIÓN.
En el estudio se evaluó la actividad de fagocitosis de Staphylococcus aureus capsular sobre los PMN
obtenidos de las vacas lecheras.
El frotis teñido con May Grünwald-Giemsa permitió la identificación de los PMN maduros y la observación
de las bacterias fagocitadas. El empleo del isotiocianato de fluresceína en los ensayos in vitro favoreció la
tinción de las bacterias para ser observadas y contabilizadas al interior de los PMN.
La actividad de fagocitosis de los PMN en condiciones in vivo, puede ser influida por las opsoninas
presentes en el medio; factor de complemento C3b e IgG2. Sin embargo ante la presencia del
exopolisacárido capsular del S. aureus, se interfieren los receptores de opsoninas presentes en la pared
bacteriana, evitando el sitio de unión y con ello la disminución sustancial de la fagocitosis bacteriana por
los PMN (Guidry et al., 1991; Luong y Lee, 2002). Lo anterior puede explicar las diferencias obtenidas en
el IFN entre los tratamientos en el presente estudio.
Los resultados obtenidos en el estudio indican que S. aureus capsular tipo 8 puede incrementar la
patogenicidad durante la infección natural si consideramos los resultados en los ensayos de fagocitos in
vitro en donde se vio reducida la actividad de fagocitosis. Lo cual coincide con los resultados de Thakker
M. et. al., (1998), quienes desarrollaron cepas mutantes capsulares (cap) deficientes en cápsula,
comparadas con cepas parentales que expresaron normalmente cap ; en un modelo de ratón con
bacteremia desarrollada por la infección experimental por S. aureus. Las cepas mutantes deficiente en
cápsula fueron opsonizadas para su fagocitosis, solo por el complemento. Mientras que las cepas
parentales capsulares fueron más resistentes a la opsonización y fagocitosis por lo PMN. Esta situación
pude explicar los resultados obtenidos con el serotipo 8 y el posible mecanismo de patogénesis durante
la infección por S. aureus serotipo capsular durante el desarrollo de la mastitis del ganado lechero. En la
infección glandular por S. aureus, los mecanismos de defensa natural frente a la enfermedad se
relacionan con la actividad de fagocitosis y el inicio del proceso posteriormente al desencadenarse la
inmunidad adaptativa, mediante la respuesta humoral y celular. En el estudio se evidenció la capacidad
del S. aureus capsular serotipo 8 en la reducción de fagocitosis in vitro de PMN en vacas leche.
23
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Se observaron diferencias en la actividad de fagocitosis in vitro entre S. aureus tipo capsular o serotipo 8
y el tipo compacto. Al observar un índice de fagocitosis mayor en el tipo compacto. Lo anterior
contribuye a explicar el mecanismo de patogénesis y la persistencia de la infección por S. aureus tipo
capsular durante la mastitis en la vacas lecheras.
BIBLIOGRAFÍA.
Guidry AJ, Oliver SP, Squiggins KE, Erbe EF, Dowlen HH, Hambleton CN y Berning LM. (1991): Effect of
anticapsular antibodies on Neutrophil Phagocytosis of Staphylococcus aureus. Journal of Dairy Science,
74:3360-3369.
Luong TT, Lee CY. (2002): Overproduction of Type 8 Capsular Polysaccharide Augments Staphylococcus
aureus Virulence. Infection and inmunity, 70(7):3389-3395.
Sutra L, Rainard P, Poutrel B. (1990): Phagocytosis of mastitis isolates of Staphylococcus aureus and
expression of type 5 capsular polysaccharide are influenced by growth in the presence of milk. Journal of
Clinical Microbiolgy, 28:2253-2258.
Thakker M, Park J, Carey V, Lee JC. (1998): Staphylococcus aureus Serotype 5 Capsular Polysaccharide
Is Antiphagocytic and Enhances Bacterial Virulence in a Murine Bacteremia Model. Infection and
Immunity, 66(11):5183–5189.
Velázquez V, Pescador N, Gorodezky C, Saltijera J. (2008): In vitro differencial neutrophil phagocytosis
activity on Staphylococcus aureus when obtained from blood and milk of dairy cows in early lactation
period. Revista latinoamericana de microbiología, 50(3,4):66-71.
24
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE TRYPANOSOMA CRUZI EN
TRIATOMINOS EN EL ESTADO DE MÉXICO ASOCIADOS A LA VIIVIENDA HUMANA.
GEOGRAPHICAL DISTRIBUTION AND MOLECULAR CHARACTERIZATION OF TRYPANOSOMA
CRUZI IN TRIATOMINE IN THE STATE OF MEXICO ASSOCIATED WITH HOUSING HUMAN.
Medina TI*, Montes de Oca JR, Vázquez CJC, Zaldívar GA, López VFI.
Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal (CIESA). Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autónoma del Estado de México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La Tripanosomosis americana o enfermedad de Chagas es una enfermedad zoonótica causada por un
protozoario; Trypanosoma cruzi (T. cruzi), transmitido por artrópodos triatominos hematófagos de la
Familia Redúvidae Hemíptera llamados chinches.
OBJETIVO.
Determinar la prevalencia de T. cruzi en los triatominos por medios moleculares, así mismo también se
propone identificar la variante de Tripanosoma cruzi que está circulando entre los vectores de la
enfermedad de Chagas que se encuentran presentes en el Estado de México, así como la identificación
del linaje al que pertenece. Así como determinar la distribución espacial de triatominos y la prevalencia
del Trypanosoma cruzi en 16 municipios del Sur del Estado de México mediante la construcción de un
modelo bioclimático utilizando datos ambientales obtenidos de sensores remotos.
METODOLOGÍA.
El estudio se realizó en 10 municipios del sur del estado: Luvianos, Malinalco, Otzoloapan, Santo Tomás
de los Plátanos, Valle de Bravo, Ixtapan del Oro, Sultepec, Tejupilco, Zacazonapan y Zumpahuacán, con
una población de 475,126 habitantes. Donde se colectaron 263 triatominos para su caracterización
entomológica e identificación de T. cruzi a través de la extracción y amplificación de ADN genómico de
las muestras de tejido con heces empleando el Kit ZR Tissue & Insect DNA Micro prep (Cat. No. D6015),
identificación Kit (Zymo Research, USA). Para la amplificación del ADN genómico la PCR se desarrolló
con los iniciadores para la región conservada del kinetoplasto: Sentido TCI 5”
GTGTCCGCCATCCTTCGGGCC3”, Sentido TCII 5” CCTGCAGGCACACGTGTGTGTG 3”, (común para
TCI y TCII). Para obtener la distribución geográfica del Trypanosoma cruzi se georeferenció la ubicación
de los triatominos positivos a T. cruzi durante los últimos 5 años, a través de las direcciones de las
viviendas con presencia del vector infectado. Como variables de entrada al modelo de distribución se
utilizaron 10 variables climáticas derivadas de las capas disponibles en WorldClim), temperatura mensual
y anual, precipitación pluvial mínima y máxima; porcentaje de árboles deciduos, de hoja ancha y altitud
de la localidad. Finalmente se estimó la distribución potencial utilizando el algoritmo de máxima entropía
(MaxEnt), interfaz de aplicación dentro del Sistema de Información Geográfica Idrisi Selva.
RESULTADOS.
Las especies de triatominos identificadas fueron Meccus pallidipenis y Triatoma dimidiata. Se procesaron
263 muestras de triatominos, de 10 municipios, encontrando positividad a T. cruzi en el 34.0% de los
ejemplares. Perteneciendo todos ellos al DTU Tc1. Las principales variables bioclimáticas de
construcción del nicho ecológico de Trypanosoma cruzi fueron: presencia de ganado, ausencia de
pendiente, temperatura media durante el trimestre más frío y precipitación pluvial del trimestre más frío
entre otros. Se generaron mapas de riesgo, observando que la presencia de los triatominos positivos a T.
25
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
cruzi, mostrando patrones espaciales en el sector suroccidental del Estado, donde se asume existe un
mayor riesgo de presentar transmisión del agente causal.
CONCLUSIONES.
El hallazgo de T. paliidipenis y Triatoma dimidiata infectadas con T.cruzi en los municipios muestreados
supone un riesgo potencial para la salud publica pudiéndose presentar la enfermedad en el hombre al ser
infectados. Ocasionado consigo patologías del corazón atribuibles al único DTU identificado en esta parte
del Estado de México, TcI. El cual se encuentra presente en 5 de los municipios de los cuales se
remitieron los ejemplares. Por tal motivo es importante realizar estudios de seroprevalencia y factores
socioeconómicos de la población en riesgo para aportar un estudio integral que nos pueda determinar la
epidemiologia de la enfermedad de Chagas en esta Jurisdicción Sanitaria. Se identificaron las especies
M. pallidipenis y T. dimidiata, en las cuales está circulando el T. cruzi . El linaje de T. cruzi que se ha
identificado es Tc1. Se obtuvo el modelo de nicho ecológico de T. cruzi. en el Sur del Estado de México.
La presencia de triatominos infectados en los municipios muestreados supone un riesgo potencial de
transmisión al ser humano.
REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA.
Corredor A, Santacruz MM, Páez S, Guatame LA. Distñbución de los triataminos domiciliarios en
Colombia. Bogotá: Instituto Nacional de Salud; 1990. pl-144.
Cruz RA, Pickering LJM, Chagas disease in Mexico: an analysis of geographical distribution during the
past 76 years a review. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2006.
101: 345–354. Available
http://www.unibio.unam.mx/chagmex/. Accessed July 070, 2014.
Medina,T.I., Vazquez, C.J.C., Rodriguez, V.R.I., Montes de Oca, J.R. (2010). Risk Factors Associated
with Triatomines and Its Infection with Trypanosoma cruzi in Rural Communities from the Southern
Region of the State of Mexico, Mexico, Am. J. Trop. Med. Hyg., 82(1), 2010, pp. 49–54.
Ramos LA, Ramírez SMC, González HJC, Rosales EJL, López MA. Prevalencia de anticuerpos contra
Trypanosoma cruzi en donadores de sangre del IMSS, Orizaba, Veracruz, México. Salud Pública de
México. 2006, 48: 13-21.
World Healt Organization, 2012. La enfermedad de Chagas (tripanosomiasis americana). Nota descriptiva
N°340.
26
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DEL GEN CALPASTAÍNA (CAST) Y TIROGLOBULINA (TG5)
EN GANADO BOVINO (BOS TAURUS X BOS INDICUS) DE UNA ENGORDA COMERCIAL DEL
MUNICIPIO DE TAMUÍN, SLP, MÉXICO.
DETERMINATION OF THE PRESENCE OF CALPASTATIN (CAST) AND THYROGLOBULIN (TG 5)
GENES IN CATTLE (BOS TAURUS X BOS INDICUS) FROM A COMMERCIAL FEEDLOT IN TAMUÍN,
SLP, MEXICO.
Huerta JM1*, Rojas MRI2, Ortega CME1, Herrera HJ1, Kawas GJR3, Hernández SD1, Ortega JE4
1Programa
de Ganadería, Colegio de Postgraduados-Campus Montecillo; 2 Programa de Fitopatología,
Colegio de Postgraduados-Campus Montecillo; 3Facultad de Agronomía. Universidad Autónoma de
Nuevo León; 4 Programa en Ciencias en Agroecosistemas Tropicales, Colegio de Postgraduados-Campus
Veracruz.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Varios parámetros son establecidos como propiedades de la carne, entre los que se destacan la
apariencia, el color, el sabor, el contenido de grasa, la textura, la terneza y la capacidad de retención de
agua. Sin embargo las prácticas de selección y disponibilidad de la compra o el abasto de ganado que
cumpla con las características fenotípicas-genotípicas que exprese los atributos de calidad que
demandan los mercados nacionales e internacionales, en la mayoría de los casos suelen ser limitadas.
Sumando a esta situación factores que aumentan la variabilidad de acuerdo a la edad, la dieta, el tipo de
producción, incluso la misma respuesta del propio individuo. En la actualidad la genómica ha sido
fundamental en el descubrimiento de la arquitectura genética de características productivas identificando
variantes alélicas que predicen la habilidad para desarrollar dichos rasgos. La calpastatina (CAST) es una
enzima inhibidora de las calpaínas, principales enzimas proteolíticas del músculo esquelético. Barendse
(2002) identificó una sustitución de Guanina por Adenina (G/A) en el extremo 3’ no traducido del ARN
mensajero de CAST (posición 2959 de la secuencia AF159246 del GenBank), estableciendo que el alelo
A se asociaba a carne más tierna. Este resultado posteriormente fue confirmado por Casas et al., (2006)
utilizando razas puras Bos taurus y Bos indicus y sus cruzas. Otra característica como el marmoleo cuyo
gen codificante es la tiroglobulina (TG5) en el cual se encuentra un SNP en la posición -537 de la región
promotora 5’ (Barendse 1999) es uno de los principales parámetros utilizados para la valoración de la
calidad de la carne ya que influye directamente en sus características organolépticas.
OBJETIVO.
Se determinó la presencia del gen Calpastatina (CAST) ligado a la terneza y del gen Tiroglobulina (TG5)
al marmoleo de la carne, en ganado bovino procedente de una engorda comercial de producción de
carne con exigencias de calidad suprema.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Las muestras de sangre para realizar esta investigación se colectaron de ganado bovino proveniente de
una engorda comercial del Rancho Hualul, Municipio de Tamuín, SLP. Se tomaron muestras de sangre
de 400 novillos de las razas cruzas (Bos taurus x Bos indicus) con un peso promedio de 450 kg. Las
muestras de sangre se colectaron de la vena yugular empleando tubos vacutainer de 5 mL con
anticoagulante EDTA y se conservaron en congelación a -40°C hasta la extracción de ADN. Para los
análisis moleculares se realizó extracción de ADN a partir de las muestras de sangre por la reacción en
cadena de la polimerasa directa (PCR Directa) usando el kit Thermo Scientific (#F-547L-500 rxns). La
amplificación por PCR se realizó utilizando los iniciadores específicos CAST No. Acceso GenBank:
AF159246 (Casas et al., 2006) y TG5 No. Acceso GenBank M35823 (Barendse, 1999). Siguiendo el
protocolo del Kit PCR directa se mezclaron los componentes en tubos PCR y se colocaron en un
27
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
termociclador: La desnaturalización inicial se dio a 98°C por 5 min, 35 ciclos a 98°C por 1 segundo;
Alineamiento a 55°C por 35 segundos y 72°C por 1 min; Extensión final 72°C por 1 min. Las
concentraciones de los productos de PCR se leyeron en un Nanodrop y se verificaron en geles de
agarosa al 1 % en buffer TAE 1X (Tris Base-EDTA) usando la técnica de electroforesis. Los geles de
agarosa fueron teñidos con bromuro de etidio a una concentración final de 1 µg mL -1. En cada pozo se
depositó un volumen final de 7 µL (2 µL de colorante azul de bromofenol y 5 µL de producto de PCR),
usando como buffer de corrida TAE 1 X. Las condiciones de electroforesis fueron 1 h 30 min a 80 voltios.
El marcador empleado fue de 100 bp (Thermo Scientific GeneRuler 100 bp DNA Ladder #SM0241). Las
bandas amplificadas fueron visualizadas con Transiluminador UV con el programa Quantity One 4.0.3. De
las 400 muestras realizadas se seleccionaron 100 productos de PCR directa y se purificaron siguiendo el
protocolo de PEPSIs-97 (Marziliano et al., 1997) para ser enviadas a secuenciar al IBT-UNAM por
secuenciación automatizada de ADN. La secuenciación de los productos de PCR de los patrones de
bandeo se ensamblaron y editaron con el programa Vector NT Suite 8.0, para obtener las secuencias
consenso, las cuales fueron comparadas con la base de datos del NCBI con las secuencias homologas
del algoritmo BLAST.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los iniciadores utilizados permitieron la amplificación del fragmento 495 pb del gen CAST y el fragmento
545 pb del gen TG5. Las secuencias consenso ensambladas y editadas de esta investigación tuvieron
una máxima identidad del 84 % con las secuencias de nucleótidos depositadas en la base de datos del
GENBANK con el gen CAST (No. de Accesión: AY834770.1 y AY008267.1) y un 85 % para la secuencia
del gen CAST (No. de Accesión JQ073718.1). Para este gen de la Calpastatina (CAST), inhibidor natural
de las calpaínas, se han presentado resultados experimentales confirmando y refutando su asociación
con la variabilidad en terneza. Esta inconsistencia en los resultados se presenta debido a que las
calpaínas son enzimas que se producen naturalmente en los músculos y tiene la función de ablandar las
fibras musculares, después del sacrificio de los animales. Sin embargo las calpaínas son inhibidas por las
calpastatina y con esto se detiene la función sobre la maduración después del sacrificio.
Para el gen TG5 se encontró una homología de un 99 % de identidad con las secuencias con No.
Accesión KF202096.1 y X05380.1, y con un 98 % de identidad con las secuencias No. Accesión
AM490264.1, AM490270.1, AM490268.1, AM490265.1 y AY615525.1. Siendo el marmoleo una
característica cuantitativa afectada por muchos genes y existiendo una gran variación entre individuos y
razas; en los resultados obtenidos en la presente investigación se encontró una homología del 99 % de
identidad con el SNP propuesto por tener un efecto sobre el marmoleo de la carne y que se ha localizado
en la posición 422 del número de accesión X05380. Este marcador se ha asociado con el marmoleo de la
carne y se ha validado en corrales de engorda con ganado en Australia.
Como se puede observar la información a partir del empleo de las herramientas de la bioinformática
permiten corroborar información existente de las secuencias reportadas en el GenBank, sin embargo
para explicar la asociación de características relacionadas con características de producción es
indispensable realizar estudios que validen la asociación de los genes candidatos seleccionados con
variables como resistencia al corte y ultrasonografía para predecir el grosor de la grasa en la canal.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Se concluye que el uso de las herramientas de la genómica permite identificar la expresión de un gen de
carácter productivo.
REFERENCIAS.
Barendse WJ. (2002). DNA markers for meat tenderness. International patent application
PCT/AU02/00122, international patent publication WO 02/064820, available at http:// ep.espacenet.com.
Barendse W. (1999). Assessing lipid metabolism. International patent application PCT/AU98/00882,
international patent publication WO 99/23248.
28
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Casas E, White SN, Wheeler TL, Shackelford SD, Koohmaraie M, Riley DG, Chase Jr CC, Johnson DD
and Smith TPL. (2006). Effects of calpastatin and µ-calpain markers in beef cattle on tenderness traits. J.
Anim. Sci. 84: 520-525.
Marziliano N, Zuccotti M, Redi CA and Garagna S. (1997). PEPSIs-97: a nested device for high recovery
of DNA from agarose gels. Technical Tips Online 2: 169-170.
RECONOCIMIENTOS.
CONACyT: 103565
29
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
TIPIFICACIÓN DE NUEVOS AISLADOS BACTERIANOS DURANTE LA PRESUNTA INFECCIÓN DE LA GARAPATA DEL
GANADO RHIPICEPHALUS (BOOPHILUS) MICROPLUS CON POTENCIAL ÚSO COMO BIOCONTROL.
TYPING OF NEW BACTERIAL ISOLATES DURING INFECTION OF THE LIVESTOCK TICK
RHIPICEPHALUS (BOOPHILUS) MICROPLUS WITH POTENTIAL USE AS BIO-ACARICIDES.
Arreguin PCA1, Cossio-Bayugar R1, Miranda-Miranda E1, Lozano L2, Pérez de la RJ3, Pérez de la RD3 y
Sachman RB1*
1Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Parasitología Veterinaria del Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales Agrícolas y Pecuarias, Colonia Progreso Jiutepec, Morelos, México; 2Centro
de Ciencias Genómicas, Universidad Nacional Autónoma de México, Cuernavaca, Morelos; 3Servicio
Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria, Colonia Progreso Jiutepec, Morelos, México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus o garrapata del ganado, es el ectoparásito hematófago
del ganado bovino de mayor importancia en México y otros países de clima tropical y subtrópical,
dedicados a la producción de ganado vacuno. La importancia de la garrapata del ganado deriva de su
papel como vectores de enfermedades infecciosas de los bovinos como la babesiosis y la anaplasmosis,
las cuales provocan pérdida económica importante. Después de décadas de control químico sistemático,
las poblaciones de R. microplus no solo no han disminuido, sino que han generado multiresistencia a los
diferentes productos acaricidas. Lo cual ha provocado usar cada vez mayor cantidad de acaricidas sobre
el ganado infestado, contaminando el ambiente y los productos cárnicos destinados al consumo humano.
En México la distribución geográfica de R. microplus corresponde al 53% del territorio nacional
(1,043,772.4 Km2) y se considera que aproximadamente el 70% de la ganadería nacional se explota en
las regiones donde está presente éste ectoparásito lo que da una idea de la dimensión económica y
social del problema (de Castro et al. 1997). Por lo que resulta atractivo encontrar algún control biológico
como alternativa que pueda ser incorporado al programa integral sustentable en el control de la garrapata
del ganado(Miranda-Miranda et al. 2009).
OBJETIVO
Identificar microorganismos que sean patógenos naturales de Rhipicephalus (Boophilus) microplus que
tengan potencial bioacaricida.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se analizarán visualmente los exudados a nivel de poro genital y/o hipostoma con el fin de identificar
presuntas enfermedades que provoquen que las garrapatas no ovopositen, para proceder al aislamiento
bacteriano con medios de cultivo. En particular se analizarán los exudados del poro genital e hipostoma
con el fin de aislar las bacterias, utilizando los procedimientos previamente reportados para determinar la
variación de población de bacterias en los exudados y buscar bacterias con mayor capacidad de
infección en garrapatas (Miranda-Miranda et al. 2010).
Las bacterias se analizarán e identificarán por sus características fenotípicas, entre estos se incluyen
tinciones de Gram, morfología de células y colonia, pigmentación de colonia
Las bacterias y hongos que crezcan nuevamente en las garrapatas tratadas se identificarán por
ribotipificación y mediante marcadores moleculares genotipificando las secuencias rpoB, recA y hsp65.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
30
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Se han aislado un total de 12 diferentes Unidades Formadoras de Colonia (UFC) bacterianas, obtenidas
de 12 garrapatas presuntamente infectadas, donde observamos que 2 de ellas no lograron ovopositar,
otras ovopositaron muy poco y otras poco, ver Figura 1.
Figura 1. Diferentes exudados del poro urogenital de las garrapatas presuntamente infectadas. 1) Donde
se observa en el apartado A que no hay ovoposición por el moco color amarillento; en el B muy poca
ovoposición; y C poca ovoposición. 2) Aislados obtenidos a partir de Unidades Formadoras de Colonia
(UFC) en medio de cultivo tripticasa de soya. 3) Tinción Gram positiva para los diferentes aislados.
Se obtuvo el DNA cromosomal de cada uno de los aislados y próximamente se les practicarán PCR de
diferentes genes, para realizar inferencias filogenéticas por medio de un Multi Locus Sequence Typing
(MLST). Con esta aproximación filogenética se podrá llegar a tipificar a los aislados a nivel especie y
subespecie.
CONCLUSIÓN
Este tipo de trabajos nos ayudan a conocer en parte a la microbiota que afecta a la garrapata del ganado
y con ello tener posibles aislados que son candidatos para ser utilizados como biocontroles. Es
importante resaltar que se busca una mezcla de agentes que causen diferentes enfermedades, ya que
con eso se evita que se generé resistencia en un corto plazo, como ha venido pasando con los diferentes
ixódicidas.
BIBLIOGRAFÍA
de Castro JJ (1997). Sustainable tick and tickborne disease control in livestock improvement in
developing countries. Vet Parasitol 71: 77-97.
Miranda-Miranda E, Cossío-Bayúgar R, Quezada-Delgado Ma. R, Sachman-Ruiz B, Reynaud Garza E
(2009). Staphylococcus saprophyticus causa infeccion letal en la garrapata del ganado Rhipicephalus
microplus. Entomologia mexicana 8:103-106.
Miranda-Miranda E, Cossio-Bayugar R, Quezada-Delgado MDR, Sachman-Ruiz B, Reynaud E. (2010).
Staphylococcus saprophyticus is a pathogen of the cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus.
Biocontrol Science and Technology 20: 1055-1067.
31
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DISEÑO Y CARACTERIZACIÓN DE MICRO-CÁPSULAS DE SELENIO-METIONINA.
DESIGN AND CHARACTERIZACION OF SELENO-METHIONINE LOADED POLYSACCHARIDE
MICROCAPSULES.
Valdiviezo ML1*, Roberts CSP2, Hidalgo MC3, Ortega CME1, Vaquera HH4, Kawas GJR5, Méndez MAR6
1Programa
de Ganadería, Colegio de Postgraduados-Campus Montecillo. 2Facultad de Ciencias
Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile, Santiago, Chile. 3Programa de Edafología, Colegio de
Postgraduados-Campus Montecillo. 4Programa de Estadística, Colegio de Postgraduados-Campus
Montecillo. 5Facultad de Agronomía, Universidad Autónoma de Nuevo León. 6Departamento de Ciencias
Químico-Biológicas, Universidad de las Américas, Puebla.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La seleniometionina es la fuente de suplementación de selenio más apropiada debido a su excelente
biodisponibilidad en vacas lecheras protegiendo así a las células secretoras de la glándula mamaria para
mantener la integridad del sistema de membranas y a su vez, reforzar el sistema inmune durante el
periodo de secado y los primeros días post-parto. Se piensa que la susceptibilidad de una vaca a nuevas
infecciones intramamarias durante el periodo del periparto son altas, por lo que la suplementación de
selenio puede influir en la reducción de la mastitis clínica en vacas lecheras. El selenio es un mineral traza
esencial, que cumple un papel importante en la alimentación y salud del ganado lechero, de acuerdo con
Hogan et al. (1993) mejora el sistema inmunológico mediante el aumento de la actividad de neutrófilos,
con lo que se reduce la incidencia y gravedad de mastitis en las vacas. Con la finalidad de maximizar la
eficiencia de absorción y utilización del selenio por el organismo del animal y dada la importancia de este
microelemento, se han estudiado diversas fuentes y formas para su administración. Para ello se han
realizado investigaciones para encontrar una vía de administración del selenio que permita que este
microelemento llegue al órgano blanco y evite la interacción con compuestos orgánicos, que puedan
afectar o modificar su forma química, afectando la disponibilidad del selenio en el organismo. Las
aplicaciones biotecnológicas de la micro y nanoencapsulación en el área de la medicina veterinaria y
producción animal, se han enfocado a la administración de medicamentos, encapsulación de nutrimentos
como probióticos, suplementos y minerales. La microencapsulación es un nuevo planteamiento enfocado
en la comprensión y el dominio de las propiedades de la materia a escala micrométrica.
OBJETIVO
En este estudio se diseñaron y caracterizaron microcápsulas mucoadhesivas como fuente de selenio
orgánico (SeMet) para aplicarlas directamente a las células secretoras de la glándula mamaria para
proteger la integridad del sistema de membranas, y a su vez reforzar el sistema inmune durante el periodo
de secado y los primeros días post-parto. Se formularon microcápsulas de selenometionina mediante
secado por atomización y se caracterizaron en relación a su eficiencia de encapsulación, morfología y
cinética de liberación.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizó L-seleniometionina (SeMet Sigma, grado de pureza 98 %, EUA, fórmula: C5H11N02Se) como
fuente de selenio orgánico; membrana de diálisis, snake skin (22 mm x 35 pies de diámetro en seco, 34
mm de ancho en seco, 3.7 mL cm-1, Prod # 68035 lot # KC132123); Carbopol 971 NF (Merck, EUA,
formula: C3H4O2), metilparabeno; trietanolamina (estabilizador de pH, para la elaboración del gel).
Agentes encapsulantes: alginato de sodio [Merck, EUA, fórmula: (C6H7NaO6)n] y carboximetilcelulosa de
sodio (Merck, EUA, NaCMC).Se utilizó el método de secado por atomización con una temperatura del
aire de entrada de 200º C, velocidad de alimentación de 5 mL min-1, flujo de aire de 600 Lh-1 y presión
de atomización de 20 psi. Las microcápsulas resultantes fueron almacenadas en envases de
polipropileno a -20ºC hasta el momento de su utilización. El análisis estadístico se realizó con la técnica
32
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
de remuestreo Bootstrap (Efron y Tibshirani, 1993) con las que se obtuvieron intervalos del 95 % de
confianza para determinar la diferencia de medias entre tratamientos y para la evaluación de la cinética
de liberación se utilizaron los modelos matemáticos propuestos por Higuchi (1963) y Korsmeyer et al.
(1983).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se evaluó la cantidad de seleniometionina total encapsulada, morfología y la cinética de liberación de la
seleniometionina desde las microcápsulas. Se utilizó como testigo la liberación de la seleniometionina sin
encapsular a través del vehículo de entrega (gel bioadhesivo; carbopol 2%). El análisis morfológico se
realizó mediante microscopia electrónica de barrido (MEB), se observaron formas esféricas, ovoides e
irregulares con textura lisa para ambos sistemas. Se determinó la seleniometionina total encapsulada
(lim. inf. 4.35, lim. super. 11.24). La cinética de liberación para el sistema SeMet/NaCMC tuvo mejor
ajuste a los modelos de Higuchi y Korsmeyer con una valor de r 2 de 0.76 y 0.82, respectivamente. Ambos
sistemas tomaron valores de n entre 0.43 a 0.85, lo que sugiere que la naturaleza del proceso de
liberación fue de difusión no fickiano o anómalo.
CONCLUSIÓN E IMPLICACIONES
Se concluye que los valores para la seleniometionina total encapsulada fueron mayores para el sistema
de SeMet/NaCMC, es decir, el agente encapsulante carboximetilcelulosa protegió la SeMet con mayor
eficiencia de la degradación térmica. Además el perfil de liberación para el sistema SeMet/NaCMC
mostró un mayor control en la entrega del activo. El método de secado por atomización resultó una
alternativa viable para elaborar microcápsulas de SeMet debido a que es un proceso económico, flexible.
REFERENCIAS
Efron, B., y R. Tibshirani. 1993. An Introduction to the Bootstrap. Marcel and Decker. 186 p.
Higuchi T. 1963. Mechanism of sustained-action Medication: Theoretical analysis of rate of release of
solid drugs dispersed in solid matrices. J. of Pharmaceutical Sci. 52: 1145-1149.
Hogan, J., Smith, K., Weiss, W., Todhunter, D. and Schockey, W. 1990. Relationships among vitamin E,
selenium, and bovine blood neutrophils. Journal of Dairy Science, 73, 2372-2378.
Korsmeyer R., Gurny, R. Doelker, E., Buri, P, and Peppas, N. 1983. Mechanisms of solute release from
porous hydrophilic polymers. Int. J. Pharm. 15: 25-35.
RECONOCIMIENTOS
CONACyT 336671
33
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO ANTIVIRAL DE UN PROPÓLEO MEXICANO SOBRE EL VIRUS DE PSEUDORRABIA EN
CELULAS MDBK.
ANTIVIRAL EFFECT OF A MEXICAN PROPOLIS ON PSEUDORABIES VIRUS IN MDBK CELLS.
Soto ZC1*, González BMJ1, Juárez MML2, Ramírez MH2, Cruz ST1, Carrillo ML1, Penieres G1.
1Facultad
de Estudios Superiores Cuautitlán, 2 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia;Universidad
Nacional Autónoma de México
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El propóleo es un producto utilizado por el hombre desde tiempos antiguos, posee propiedades
medicinales por lo que ha mantenido su popularidad a través de los años ya que se le atribuye actividad
antifúngica, antibacteriana, antiviral y antiparasitaria (4). Existen múltiples reportes que señalan que los
propóleos muestran variación en su actividad biológica dependiendo de su origen geográfico. Aunque
existe muy poca información en relación con las propiedades antivirales del propóleo, in vitro se conoce
su efecto sobre los virus de influenza aviar, Herpes, VIH, Marek, entre otros. De manera particular existen
pocos datos de la actividad antiviral de este compuesto en relación con la pseudorrabia. El estudio del
efecto antiviral del propóleo es importante considerando que las enfermedades virales son
completamente diferentes en su mecanismo de acción y, por ende, su efecto a nivel celular. La
pseudorrabia es causada por el Herpesvirus suis I y provoca una enfermedad viral contagiosa que afecta
a los mamíferos, se observa principalmente en cerdos, mismos que constituyen los hospederos y
reservorios naturales del virus. In vitro, el virus de pseudorrabia (PRV) puede ser aislado a través de su
cultivo en monocapas celulares sensibles, su ciclo replicativo es corto (6 – 9 horas) y causa una
destrucción masiva de las células, produciendo un efecto citopático caracterizado por un redondeamiento
celular, la formación de sincitios, así como la presencia de placas líticas en la monocapa celular.
OBJETIVO
Evaluar la acción antiviral de un extracto etanólico de propóleo (EEP) proveniente del Estado de México,
empleando monocapas de células MDBK infectadas con PRV, mediante la cuantificación del número de
unidades formadoras de placa (ufp) presentes en los cultivos infectados y en los cultivos infectados pero
tratados con propóleo.
MATERIALES Y MÉTODOS
El propóleo en greña fue colectado del apiario de la Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán, UNAM,
en el municipio de Cuautitlán Izcalli, Estado de México. El material colectado fue limpiado de
contaminantes físicos, después fue fraccionado en trozos pequeños y, posteriormente, a 150 gramos de
propóleo se le adicionaron 850 ml de etanol al 70% y se mantuvo 15 días en un frasco ámbar. Durante
este periodo, todos los días fue agitado ligeramente por un lapso breve, después se filtró y, finalmente, se
realizó la destilación del solvente con un rotovapor.
Células y virus. Las monocapas de células MDBK fueron mantenidas en DMEM suplementado con
suero fetal bovino y antibiótico (penicilina-estreptomicina) en una incubadora a 37° C bajo una atmosfera
humidificada de 95% de aire y 5% de CO₂ . Se utilizó la cepa Shope del virus de pseudorrabia y la dosis
infectiva se determinó mediante el ensayo de formación de placas en monocapas de células MDBK (2).
El stock viral que se utilizó para realizar las infecciones tuvo un título de 1.86 × 10 6 ufp/ml.
Ensayos de toxicidad. Las células fueron sembradas en placas de 96 pozos e incubabas por 24 horas.
Por otro lado, el EEP fue diluido en DMSO y DMEM a una proporción de 1:100. Los cultivos de células
MDBK fueron expuestos a dosis crecientes de EEP (0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 y 4 mg/ml), como control
34
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
horas y, posteriormente, fue observada al microscopio invertido para su evaluación. Todos los ensayos
se realizaron por triplicado (3).
Interacciones virus-propóleo. Se emplearon monocapas de células MDBK en placas de 96 pozos. El
ensayo fue diseñado para realizar las siguientes evaluaciones (3); 1) Tratamiento con EEP antes de la
ento con EEP simultáneamente a la infección viral, para ello se adicionaron al
mismo tiempo el EEP y el virus, a las dosis previamente señaladas y 3) Tratamiento con EEP después de
e incubó por 2 horas, después de lo
tratamientos los cultivos celulares fueron observados a las 24 horas post–infección.
Cuantificación de placas líticas. Se emplearon monocapas de células MDBK en cajas de Petri de 100
mm, estos cultivos fueron mantenidos en las condiciones ya conocidas y sometidos a las diferentes
evaluaciones señaladas en el párrafo anterior. Después de 24 horas de incubación fueron fijados con
paraformaldehído al 4% por 10 minutos y teñidos con cristal violeta. Se observaron y contabilizaron las
placas formadas en cada uno de los tratamientos (antes-, durante- y después de la infección). Se
contaron las placas líticas presentes por campo observado con el objetivo de 40× y el valor promedio
mostrado (Figura 1) se obtuvo después de contar 10 campos elegidos al azar.
Análisis estadístico. Las placas producidas por el PRV fueron observadas y contabilizadas para cada
uno de los tratamientos (cultivo infectado, cultivo tratado con propóleo dos horas antes-, durante- y dos
horas después-de la infección). Los datos fueron procesados mediante el programa Grad Pad Prism
versión 4, mediante la prueba estadística de ANOVA.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Toxicidad del EEP. En las monocapas de células MDBK expuestas a dosis menores a 0.5 mg/ml no
hubo alteración morfológica apreciable al microscopio, mientras que con dosis mayores a 0.5 mg/ml se
observaron células con vesículas en el citoplasma, pérdida de la morfología celular y lisis (datos no
mostrados). Así se determinó que la dosis de 0.5 mg/ml es la dosis máxima que no produce alteraciones
en las células por lo que se decidió emplear esta dosis en los tratamientos subsecuentes.
Capacidad anti-viral del EEP. Para determinar la capacidad antiviral del EEP se contaron las unidades
formadoras de placas (ufp) en el cultivo infectado, en el cultivo tratado antes-, durante- y después de la
infección. Mediante las interacciones realizadas se encontró diferencia entre el cultivo infectado y los
cultivos infectados en los que se aplicó el EEP a diferentes tiempos. El cultivo tratado con propóleo dos
horas antes de realizar la infección viral presentó una menor cantidad de ufp, teniendo un promedio de
8.7 ufp, en comparación con los cultivos tratados simultáneamente a la infección (16.6 ufp) y los tratados
dos horas post-infección (15.4 ufp), estos valores fueron similares al encontrado en el cultivo infectado y
que no recibió tratamiento (16.4 ufp) (Tabla 1). De acuerdo a los valores obtenidos y después de realizar
el análisis estadístico se determinó que existe una diferencia significativa (p < 0.01) entre el cultivo
infectado y el cultivo tratado con propóleo dos horas antes de realizada la infección (Figura 1).
Tabla 1. Promedio de unidades formadoras de placa observadas en los diferentes
tratamientos con EEP.
Tratamientos
Promedio de UFP (±DS)
Cultivo sin infectar
0
Cultivo infectado y sin tratamiento
16.4 (± 11.8)
Propóleo 2 horas antes de la infección
8.7 (± 5.5)
Propóleo e infección simultánea
16.6 (± 10.9)
Propóleo 2 horas después de la infección
15.4 (± 9.0)
35
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Figura 1. Número promedio de unidades formadoras de placas (ufp) en los cultivos de MDBK.
Control, cultivo infectado. Antes, cultivo tratado (0.5 mg/ml de propóleo) dos horas antes de la infección
con PRV. Durante, cultivo tratado con la misma dosis de propóleo e infectado con PRV simultáneamente.
Después, cultivo tratado con la misma dosis de propóleo dos horas después de realizada la infección.
Las barras representan la media, +/- el error estándar. (**p < 0.01). Prueba estadística ANOVA.
En este trabajo se observaron por microscopia electrónica partículas virales con alteraciones ultraestructurales (datos no mostrados), esto sugiere la presencia de daño sobre las proteínas de la envoltura
viral, lo que puede provocar una desestabilización de toda la estructura del virus y, por lo tanto, afectar su
capacidad de penetración y el desarrollo de su ciclo replicativo, como lo han propuesto otros
investigadores (1, 5). El EEP utilizado en este trabajo contiene flavonoides y otros ácidos fenólicos (datos
no presentados), por lo que posiblemente ellos sean los responsables de la alteración de las
glicoproteínas de la envoltura del virus o del daño estructural observado. Adicionalmente, otros
componentes presentes en el EEP utilizado y que posiblemente también estén actuando sobre las
proteínas del virus son el ácido cinámico y el ácido caféico.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Se puede señalar que el EEP posee un efecto antiviral significativo sobre el virus de pseudorrabia y, de
acuerdo con los resultados obtenidos, podría tener un uso potencial en la prevención de esta enfermedad
viral. Sin embargo se requieren estudios adicionales que permitan describir su mecanismo de acción.
RECONOCIMIENTOS
Los autores agradecen los apoyos recibidos por los proyectos: UNAM-DGAPA-PAPIIT IT 223811-3,
FESC-PIAPIC Cátedras de investigación 28 y 15.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Huleieh, M., Isanu, V. (2002). Anti-herpes simplex virus effect of an aqueous extract of propolis, Israel
Medical Asociation Journal. 4: 923-927.
2. Hierholzer JC, Killington RA. (1996). Quantitation of virus. In: Mahy BWJ, Kangro HO. Virology Methods
Manual. Academic Press, Boston, USA, pp. 35-45.
3. Nolkemper, S., Reichling, J., Sensch, K. H., Schnitzler, P. (2010). Mechanism of herpes simplex virus
type 2 suppression by propolis extracts. Phytomedicine 17: 132–138.
4. Sforcin, J. M. (2007). Propolis and the immune system: a review. J. of Ethnopharmacology, 113: 1–14.
5. Schnitzler, P., Neuner, A., Nolkemper, S., Zundel, C., Nowack, H. (2010). Antiviral activity and mode of
action of propolis extracts and selected compounds. Phytotherapy Research 24: S20-S28.
36
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DETECCION DE MUTACIONES EN LA PROTEÍNA V DEL RUBULAVIRUS PORCINO (PORPV)
INDICAN UNA POSIBLE ATENUACIÓN DEL VIRUS.
MUTATIONS IN THE V PROTEIN OF PORCINE RUBULAVIRUS INDICATES A POSSIBLE VIRAL
NATURAL ATTENUATION..
Cuevas RS1*, Rivera BF1, Blomström AL2, Ramliden M2, Hernández BE3, Hernández JP3, Ramírez MH4,
Berg M2.
1CENID-MA-INIFAP,
México; 2Uppsala University SLU-Sweden; 3Investigador Independiente, México;
4FMVZ-UNAM, México
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La enfermedad del ojo azul (EOA) en cerdos, es considerada una de las enfermedades más importantes
que afectan la porcicultura nacional. Esta enfermedad ha tomado gran importancia derivado de las
pérdidas económicas que ocasiona por la presencia de brotes esporádicos de la enfermedad en granjas
infectadas. Durante los últimos años se ha reportado la presencia de variantes genéticas del Rubulavirus
porcino (PorPV), basado en la secuencia del gen HN, misma que se ha asociado con la virulencia y
patogenicidad del virus. El reporte de variaciones en la expresión de la proteína V del PorPV, ha sido
asociado a estados de persistencia viral en estudios in vitro de células infectadas (1). Bajo condiciones
naturales se ha identificado en algunos virus del género Rubulavirus, el efecto antagónico de la proteína
V, para la síntesis del interferón en respuesta a la infección viral (2). La mutación en el dominio
antagonista del mecanismo de señalización del interferón, podría modificar la virulencia del PorPV en
cerdos mantenidos en zonas endémicas de la EOA.
OBJETIVO
El objetivo de este trabajo fue realizar el análisis molecular del marco de lectura abierto de la proteína V,
insertado en el gen P del PorPV, en cerdos persistentemente infectados en granjas positivas de la
enfermedad.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se seleccionaron cinco granjas de producción porcina seropositivas a PorPV. Se obtuvieron muestras de
animales enfermos y clínicamente sanos, con características de opacidad de la córnea como secuela de
la infección por el Rubulavirus porcino. Las granjas muestreadas eran procedentes de los estados de
Michoacán, Jalisco y una granja de Guanajuato. En estas granjas se presentaban casos clínicos
esporádicos, serología positiva y baja mortalidad en lechones. Una de las muestras correspondió a una
hembra que presentaba serología positiva, sin cuadros clínicos asociados, solamente se observó
opacidad corneal unilateral (Mich/2013). Se obtuvieron muestras de sangre para la separación de células
mononucleares periféricas, mediante un gradiente de ficoll. Se realizó la extracción de ARN empleando
TRIzol, de acuerdo al protocolo indicado por el fabricante. El diseño de primers específicos, se llevó a
cabo, empleando las secuencias reportadas en la base de datos del GenBank. La síntesis de ADNc y la
amplificación por PCR del gen se realizó empleando paquetes comerciales (Promega, USA). Las
muestras amplificadas fueron purificadas y enviadas a secuenciación a Macrogen Europe, Netherlands,
las secuencias fueron editadas y ensambladas con el programa SeqMan (Lasergene 9.1, DNASTAR).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se logró la amplificación del gen P en todos los aislamientos obtenidos de granjas infectadas, la
amplificación del gen completo de la proteína V del PorPV se logró obtener de todas las granjas
evaluadas. Las secuencias fueron analizadas mediante un alineamiento múltiple empleando como
secuencia consenso, la cepa LPMV/1984. Los resultados del alineamiento indican un 99% de similitud
37
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
entre cuatro de las secuencias analizadas, excepto un aislamiento procedente una hembra adulta
(Mich/2013), donde se observó que existen mutaciones, específicamente en el dominio antagonista del
interferón (Fig. 1).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las variaciones genéticas detectadas en la secuencia de aminoácidos de la proteína V del PorPV,
pueden modificar la respuesta antiviral en animales persistentemente infectados, permitiendo una mejor
respuesta inmunológica del cerdo infectado (2). La mutación se registró a nivel del residuo de arginina
(R181), del dominio carboxilo terminal de la proteína V, que corresponde a un sitio altamente conservado.
Este aislamiento también presentó la falta de expresión de la proteína C del PorPV, misma que cointeracciona con la proteína V, para regular la respuesta antiviral del cerdo. La ausencia del dominio
antagonista de interferón de la proteína V y de la expresión de la proteína C, en cerdos persistentemente
infectados de forma natural, sugiere una estrategia de poca adaptación viral, con la presencia de
mutantes defectivas del PorPV, que aparentemente no interfieren con la respuesta inmune del cerdo,
pero que se mantienen de forma silenciosa circulando en la población porcina de la granjas infectadas.
CONCLUSIÓN
Con los resultados obtenidos se concluye que existen variantes genéticas del Rubulavirus porcino, con
mutaciones en la proteína V del virus, y no expresión de la proteína C, que actualmente circulan en la
población porcina con cierto grado de atenuación. Se requieren estudios experimentales, para comprobar
la posible atenuación del PorPV.
REFERENCIAS
1. Hertner, et al., 1998; Arch Virol. 143: 425-439.
2. Hagmaier et al., 2007; J Gen Virol. 88: 956-966.
Figura 1. Secuencia de aminoácidos del extremo carboxilo terminal de la proteína V del
PorPV. Se ilustra en color gris, el dominio antagonista para la síntesis de interferón; en
color naranja se ilustran las mutaciones modifican este dominio.
38
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DEL RUBULAVIRUS PORCINO (PORPV)
MOLECULAR EPIDEMIOLOGY OF PORCINE RUBULAVIRUS
Cuevas RS1*, Rivera BF1, Blomström AL2, Ramliden M2, Hernández BE3, Hernández JP3, Ramírez MH4,
Berg M2.
1CENID-MA-INIFAP,
México; 2Uppsala University SLU-Sweden; 3Investigador Independiente, México;
4FMVZ-UNAM, México
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La enfermedad del Ojo Azul (EOA) ocasionada por el Rubulavirus porcino (PorPV), es una de las cuatro
enfermedades más importantes que afectan la industria porcina de México. No obstante, desde la
presentación de los primeros brotes de la EOA a principios de los 80´s, solamente se ha caracterizado el
genoma completo de un aislamiento del virus realizado en 1984 (PorPV-LPMV) (1). Aunque existe el
reporte de la presencia de posibles variantes antigénicas del PorPV, relacionadas al gen de la proteína
HN, lo que limita el conocimiento del comportamiento del virus en los recientes brotes (2).
OBJETIVO
El objetivo de este trabajo fue realizar el análisis filogenético del genoma de diferentes aislamientos
virales del PorPV, procedentes de brotes recientes de la EOA e identificar la circulación de las diferentes
variantes en tres de los estados ubicados en la zona endémica de la enfermedad (Guanajuato, Jalisco, y
Michoacán).
MATERIAL Y MÉTODOS
Se obtuvieron siete aislamientos de cerdos diagnosticados positivos al virus de la EOA por aislamiento
viral en cultivos celulares PK15, con sintomatología clínica de la enfermedad del ojo azul; cinco de las
muestras procedían de cerebro; una muestra de pulmón y una de sangre completa. Estas muestras
fueron colectadas de animales Las muestras fueron obtenidas en 2007-1, 2008-2, 2009-3, 2013-1,
procedentes de Guanajuato, Jalisco y Michoacán (Tabla 1). Se obtuvo el ARN de las muestras, mediante
extracción con Trizol de acuerdo a los procedimientos convencionales establecidos por el fabricante
(Invitrogen). La síntesis de ADNc, se realizó utilizando Random primers® (Promega) y la transcriptasa
reversa MLV-RT (Promega). Para la amplificación de los diferentes genes del virus (NP, P, F, M, HN y L),
se diseñaron los iniciadores específicos de acuerdo a las secuencias reportadas en el GenBank
respectivamente y se amplificaron utilizando el Master Mix PCR Assay Kit (Promega, USA) de acuerdo al
protocolo de manufactura. Los productos de PCR obtenidos, fueron purificados y enviados a secuenciar a
Macrogen Europe, Netherlands, las secuencias fueron editadas y ensambladas con el programa SeqMan
(Lasergene 9.1, DNASTAR) y comparadas con la base de datos del GenBank (NP (EF095537.1); P
(AF416650.1); M (YP 001331032.1); F (Y10803.1); HN (S77541.1) and L (BK005918.1) usando BLAST
software (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi), NCBI (National Centre for Biotechnology Information). El
análisis filogenético se realizó mediante el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de cada proteína
respectivamente utilizando MEGA 5 software package (neighbour-joining algorithm).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados indican que existe una alta conservación de las proteínas NP, P y M en todos los
aislamientos evaluados. La proteína F, presentó dos mutaciones importantes en el aislamiento colectado
en 2007, obtenido de pulmón, estas mutaciones se detectaron en el sitio de escisión de la proteína F
(H101R; K103R). La proteína HN mostró alta conservación, con una variación de aproximadamente 1.8% en
la secuencia de aminoácidos (Tabla 1). Los aislamientos de 2008, 2009 y 2013, mostraron regiones
39
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
altamente conservadas con respecto a la cepa de referencia LPMV-1984, sin afectar aparentemente la
actividad hemoaglutinante de la proteína. La proteína L, presentó secuencia de aminoácidos conservadas
y algunas mutaciones que podrían estar involucradas en modificaciones de la actividad de la polimerasa.
El análisis filogenético realizado a partir de la comparación de las secuencias de aminoácidos con
respecto a la cepa de referencia, indicó la existencia de tres grupos de variantes virales genéticamente
diferentes que se han establecido en la zona endémica de la enfermedad: 1) Variantes genéticas
altamente conservadas (99.99%) similares al virus original aislado en 1984 (PorPV-LPMV), que circulan
en el estado de Jalisco, donde este 0.01% de variación se observó en mutaciones de aminoácidos de la
proteína F en la muestra de pulmón, específicamente en el sitio de escisión (cleavage site HRKKR) de la
proteína, donde interactúa con la membrana celular del huésped; 2) Variantes antigénicas asociadas a
mutaciones en la proteína V del virus, que se mantienen circulando dentro de granjas infectadas en el
estado de Michoacán; y 3) Se presenta un tercer grupo de variantes genéticas, que circulan en
Guanajuato, Jalisco y Michoacán, con mutaciones asociadas a la falta de expresión de la proteína C,
involucrada en actividades de la respuesta antiviral del huésped hacia el virus.
Los resultados obtenidos muestra que existen diferentes variantes genéticas del PorPV, que le confieren
características diferentes al virus, de acuerdo a la actividad específica de cada proteína modificada. No
obstante existen cepas virales que se han conservado por más de 25 años desde la presentación de los
primeros brotes de la EOA, y otras variantes genéticas con mutaciones diversas que han permitido la
generación de cepas virales con cierto grado de atenuación, que actualmente circulan en la población
porcina del país. Las mutaciones encontradas en la proteína F del aislamiento obtenido de pulmón, han
sido previamente reportadas relacionadas con cambios en el tropismo y la patogenicidad del virus (3) y
consecuentemente podría dar paso a una clasificación biológica inicial del virus en cepas neumotrópicas
y neurotrópicas como se ha reportado en otros virus de la familia Paramixoviridae en particular el virus de
Newcastle (4). Las mutaciones relacionadas con la proteína V y C del PorPV, están implicadas en las
actividades de la respuesta antiviral de huésped (4) y aparentemente interfieren en la capacidad del virus
para evadir la respuesta inmune del cerdo y que sin embargo le permite mantenerse en forma de una
infección silenciosa en el cerdo infectado.
CONCLUSIÓN
Se determinó por lo menos tres variantes genéticas del PorPV agente causal de la EOA actualmente
circulan en la población porcina del país en la zona endémica de la enfermedad comprendida por
Guanajuato, Jalisco y Michoacán (zona centro y centro-oeste del país).
BIBLIOGRAFÍA
Moreno-López J, Correa-Girón P, Martínez A, Ericsson A. Characterization of a paramyxovirus isolated
from the brain of a piglet in Mexico. Archives of Virology 1986;91: 221–231.
Sánchez-Betancourt JI, Santos-López G, Alonso R, Doporto JM, Ramírez-Mendoza H, Mendoza S,
Hernández J, Reyes-Leyva J, Trujillo M.E. Molecular characterization of the hemagglutinin-neuraminidase
gene of porcine rubulavirus isolates associated with neurological disorders in fattening and adult pigs.
Research in Veterinary Science. 2008;85: 356-67.
Berg M, Bergvall AC, Svenda M, Sundqvist A, Moreno-López J, Linné T. Analysis of the fusion protein
gene of the porcine rubulavirus LPMV: comparative analysis of paramyxovirus F proteins. Virus Genes.
1997;14 (1): 55-61.
Glickman, L. R., Syddall, J. R., Iorio, M. R., Sheehan, P. J., Bratt, A. M. Quantitative basic residue
requirements in tle cleavage-activation site of the Fusion glycoprotein as a determinant of virulence for
Newcastle Disease Virus. J. Virol. 1988;62(1), 354-356.
Devaux. P., Hodge, G., McChesney, B. M., Cattaneo R. Attenuation of V or C defective Measles viruses:
Infection control by inflammatory and interferon responses of Rhesus Monkeys. J Virol. 2008;82(11),
5359-5367.
40
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Tabla 1. Identificación de los aislamientos colectados de diferentes estados de la República mexicana,
y mutaciones observadas en la proteína HN del Rubulavirus porcino en las diferentes muestras.
Identificación
PorPV/Mx/1/Jalisco/
2007
PorPV/Mx/1/Guanajua
to/2008
PorPV/Mx/1/Mich/
2008
PorPV/Mx/2/Jalisco/
2009
Localización
Año de
colección
Tejido / edad del cerdo
Mutaciones de
aminoácidos en la
proteina HN del PorPV
Jalisco
2007
Pulmón/30 días
F156L
Guanajuato
2008
Cerebro/90 días
F156L; T383A; P436L; S462N;
S484I; T500I; G543E
Michoacán
2008
Cerebro/130 días
F156L; D259E; T383A; P436L;
S462N; S484I; T500I; G543E;
R575H
Jalisco
2009
Cerebro/150 días
F156L; T383A; P436L; 462N;
S484I; T500I; G543E; R575H
Cerebro/150 días
No determinado
PorPV/Mx/3/Jalisco/
2009
PorPV/Mx/2/Mich/
2009
PorPV/Mx/3/Mich/
2013
Michoacán
2009
Cerebro/21 días
F156L
Michoacán
2013
PMBC (peripheral
mononuclear cells)/30
semanas
F156L; T383A; P436L; S462N;
S484I; T500I
41
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EXPRESIÓN RECOMBINANTE EN E. COLI DE LA PROTEÍNA VIRB10 DE ANAPLASMA
MARGINALE.RECOMBINANT EXPRESSION OF THE VIRB10 PROTEIN OF ANAPLASMA
MARGINALE IN E. COLI.
Pineda GJE2*, Medina SS3, Rodríguez CSD1, Amaro El1.
1CENID
- Parasitología Veterinaria INIFAP, 2 Ingeniería en Biotecnología UPEMOR, 3 Posgrado FMVZ,
UNAM; 1Unidad de Anaplasmosis del Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Parasitología
Veterinaria, Jiutepec, Morelos.0
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Anaplasma marginale es una bacteria gram negativa del orden Rickettsiales, patógena para el ganado
bovino. La anaplasmosis bovina se caracteriza por inducir fiebre, anemia, debilidad general, palidez de
las membranas mucosas, disminución en la producción de leche (Araújo et al., 2008) y, en algunos casos
la muerte con severas pérdidas económicas en la producción mundial ganadera. Las garrapatas son los
vectores biológicos de la bacteria, pero a también es transmitida mecánicamente a ganado susceptible
mediante el uso de instrumentos contaminados con sangre infectada y mordeduras de moscas entre
otros insectos hematófagos (Reinbold et al., 2010). Los eritrocitos infectados ingeridos por la garrapata
son la fuente de infección del artrópodo, la rickettsia se libera en el intestino donde invade las células
epiteliales y tienen un primer ciclo de replicación, posteriormente invaden otros tejidos incluyendo las
glándulas salivales, a partir de donde la rickettsia es transmitida a otros huéspedes durante la
alimentación de la garrapata (Kocan et al., 2002).
Muchas especies bacterianas han desarrollado sistemas de secreción especializados para transferir
moléculas a través de membranas. Estos sistemas de secreción están clasificados en seis grupos
principales, dentro de los cuáles se encuentra el sistema de secreción tipo 4 (SST4). Este es el sistema
de secreción más distribuido en bacterias gram-negativas, responsable de la secreción de moléculas
asociadas a virulencia como adhesinas, hemolisinas, citolisinas, lipasas y proteasas (Dubuisson et al.,
2004). Se piensa que El SST4 juega un papel importante en A. marginale en la invasión y la patogénesis
por la translocación de proteínas efectoras a través de la membrana del eritrocito y/o la de las células de
garrapata (Morse et al., 2012; Lockwood et al., 2011).
Entre los antígenos subdominantes identificados en la membrana externa están las proteínas del SST4.
La proteína VirB10 induce respuesta de linfocitos Th CD4+ así como la producción de interferón gamma
(IFN-γ). En análisis previos por nuestro grupo se ha observado que el gen putativo de virB10 es 100%
conservado en siete aislados mexicanos caracterizados. Debido a la importancia que puede tener esta
proteína, se busca obtenerla de manera recombinante y en cantidad suficiente para futuros estudios
como en la producción de vacunas.
OBJETIVOS
Amplificación del gen virB10 de una cepa mexicana de Anaplasma marginale
Clonar el gen virb10 en un vector de expresión
Expresar en E. coli la proteína VirB10 de Anaplasma marginale
MATERIALES Y MÉTODOS
Con base en el genoma de la cepa St. Maries de Anaplasma marginale publicada banco de datos
(Genbank), se diseñaron oligonucleótidos específicos para la amplificación de virB10. A partir de
eritrocitos infectados con la cepa Mex31 de Anaplasma marginale se obtuvo DNA genómico mediante el
paquete “UltraClean® BloodSpin® DNA Isolation Kit” (MO BIO Laboratories, Inc.), este DNA fue utilizado
como templado para realizar PCR utilizando los oligonucleótidos diseñados. Los productos obtenidos de
la PCR se visualizaron mediante electroforesis en geles de agarosa.
El producto de PCR correspondiente al gen virB10 fue purificado y se llevó a cabo la ligación con el
plásmido de expresión pMAL p5X (pMAL™ Protein Fusion and Purification System, New England Biolabs
42
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Inc.). Para corroborar la integridad de la construcción, se transformaron células quimiocompetentes
TOP10 de E. coli. Las clonas con el inserto de interés se identificaron por PCR. El DNA plasmídico de 2
clonas de cada aislado se purificó para su secuenciación utilizando oligonucleótidos en sentido y
antisentido.
Para la expression de VirB10 la cepa E. coli “One Shot® BL21 (DE3)pLysS” fue transformada con la
construcción verificada. Las clonas se cultivaron en volúmenes de 250 ml de medio LB hasta alcanzar
una DO600 de 0.5, momento en que cada cultivo se dividió en dos y una alícuota de cada cultivo se indujo
agregando 0.3 mM IPTG durante 6 horas para su posterior análisis por electroforesis en SDS-PAGE e
inmunodetección con anticuerpos anti-MBP.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Utilizando los oligos específicos para el gen virB10 se obtuvieron los fragmentos de DNA para ser
clonados, amplificados y expresados, a partir de muestras de eritrocitos infectados con la cepa Mex31 de
Anaplasma marginale. Los fragmentos clonados en el plásmido de expresión pMAL p5X fueron
sometidos a secuenciación de Sanger llevando a cabo el correspondiente análisis de las secuencias y los
electroferogramas. Las secuencias sentido y antisentido se compararon entre sí, y con la secuencia
nucleotídica reportada de virB10, de la cual se identificó el inicio y el final de la secuencia. Se observó
que el resto de la secuencia corresponde a lo esperado, con excepción de la posición para el aminoácido
65, en el cual hay un cambio que introduce una Prolina en lugar de una Glutamina como se reporta para
la secuencia de St. Maries. Este mismo cambio se observa en el mismo gen de las cepas mexicanas
analizados en nuestro laboratorio y, de las cepas Florida y Dawn cuyos genomas ya han sido publicados.
Con el análisis llevado a cabo se confirmó que la construcción contiene la secuencia correcta que codifica
para VirB10 de Anaplasma marginale. Se realizó una prueba de expresión de la proteína, después de 6
horas de inducción, los productos fueron analizados en SDS-PAGE, a la tinción con azul de Coomasie se
observó una banda sobreexpresada con el peso molecular que corresponde al esperado de 49 kDa de
VirB10 + 42.5 kDa de la proteína de fusión MBP.
Se corroboró la expresión de la proteína de interés se realizó mediante detección con anticuerpos antiMBP por inmunoblot.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
La construcción obtenida de la proteína VirB10 es eficiente para una futura expresión y poder producir en
mayor cantidad y así mejorar las condiciones de expresión.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Araújo FR, Costa CM, Ramos CA, Farias TA, Souza II, Melo ES, Elisei C, Rosinha GM, Soares CO,
Fragoso SP, Fonseca AH. IgG and IgG2 antibodies from cattle naturally infected with Anaplasma
marginale recognize the recombinant vaccine candidate antigens VirB9, VirB10, and elongation factor-Tu.
Mem. Inst. Oswaldo Cruz, 2008; 103:186-190.
Reinbold JB, Coetzee JF, Hollis LC, Nickell JS, Riegel CM, Christopher JA, Ganta RR. Comparison of
iatrogenic transmission of Anaplasma marginale in holstein steers via needle and needle-free injection
techniques. Am J Vet Res. 2010; 71(10):1178-1188.
Blouin EF, Kocan KM, de la Fuente J, Jeremiah TS. Effect of tetracycline on development of Anaplasma
marginale in cultured Ixodes scapularis cells. Vet Parasitol. 2002; 107:115–126.
Dubuisson FJ, Fernandez R, Coutte L. Protein secretion through autotransporter and two-partner
pathways. Biochim Biophys Acta. 2004;1694: 235–257.
Morse K, Norimine J, Palmer GH, Sutten EL, Baszler TV, Brown WC. Association and evidence for linked
recognition of type IV secretion system proteins VirB9-1, VirB9-2, and VirB10 in Anaplasma marginale.
Infect Immun. 2012; 80(1):215-227.
Este trabajo fue financiado a través del Proyecto SEP-CONACYT 168167
.
43
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ANÁLISIS BIONFORMÁTICO DEL GEN OMP7 DE AISLADOS MEXICANOS DE ANAPLASMA MARGINALE.
BIOINFORMATIC ANALYSES OF OMP7 GENE FROM MEXICAN STRAINS OF ANAPLASMA MARGINALE.
Martínez SJ2*, Medina SS3, Amaro EI1, Rodríguez CSD1
1Centro
Nacional de Investigación Disciplinaria en Parasitología Veterinaria, INIFAP, 2Ingeniería en
Biotecnología, UPEMOR, 3 Posgrado Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Los anaplasmas fueron reportados primero Theobald Smith y F.L. Kilbourne (1893) en Estados Unidos,
como corpúsculos parecidos a cocos, pero los consideraron como formas de desarrollo de Babesia
bigemina. Más tarde, en Sudáfrica, Arnold Theiler (1910) demostró que los anaplasmas por sí mismos
son organismos ajenos al desarrollo de Babesia, denominándolos como puntos marginales y luego como
Anaplasma marginale. Es una bacteria pleomórfica, gram negativa, de crecimiento intracelular obligado
del orden de las Rickettsiales, patógena para el ganado bovino, que infecta a los eritrocitos maduros con
la formación de una vacuola derivada de dichos eritrocitos. Causando así la enfermedad de
anaplasmosis, caracterizada por inducir anemia, ictericia, debilidad, inapetencia, fiebre, cese de la rumia,
pérdida de peso y disminución en la producción de leche, además de la muerte con severas pérdidas
económicas en la producción mundial ganadera. La transmisión de A. marginale puede ser mecánica, es
decir, por medio de vectores como moscas hematófagas (Tabanus bovinus, Stomoxys calcitrans,
Haematobia irritans) y mosquitos (Anopheles, Culex y Aedes), además de jeringas y/o material quirúrgico
contaminado, o transmisión biológica, por medio de garrapatas como son; Rhipicephalus microplus, R.
annulatus y Dermacentor (principales vectores biológicos en México) o transplacentaria (madre a hijo).
Las proteínas de superficie (membrana externa) de Anaplasma, no solo son esenciales para la bacteria
sino que también sirven como principales objetivos del sistema inmune innato y adaptativo y por
consecuencia sirven particularmente como blancos relevantes para desarrollo de vacunas.
Por lo tanto, en este estudio se llevó a cabo una búsqueda en el genoma de A. marginale para localizar
proteínas de membrana con alto índice inmunogénico y poca o nula variabilidad, encontrando así a la
proteína OMP7. Con este estudio se busca determinar si la secuencia de aminoácidos del gen omp7
codificante para la proteína de membrana externa OMP7 cumple con las características deseables de
una proteína vacunal así como los criterios para que los antígenos puedan ser usados como agentes
vacunales, tales criterios son: Las proteínas deben estar expuestas en la superficie, preferentemente
tener alguna función vital o de virulencia, deben de ser altamente conservadas entre cepas de distintas
regiones, contar con epítopos inmunorelevantes e inducir una respuesta inmune protectora.
OBJETIVOS
Determinar el índice de identidad del gen omp7 en aislados mexicanos de Anaplasma marginale y
determinar si la secuencia de aminoácidos del gen omp7 llena las características deseables de una
proteína vacunal.
Analizar con programas bioinformáticos la secuencia publicada del gen omp7 de Anaplasma marginale,
cepa St. Maries.
Determinar el grado conservación de la secuencia de aminoácidos del gen omp7 en cepas mexicanas de
A. marginale.
MATERIALES Y MÉTODOS
El presente trabajo se inició con un análisis bioinformático, utilizando como molde la secuencia en
nucleótidos y aminoácidos de la cepa St. Maries. La secuencia fue analizada con programas
bioinformáticos, dependiendo de lo que se requería conocer acerca de la misma, utilizando Uniprot para
44
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
obtener datos relevantes como: secuencia de la proteína, cantidad de aminoácidos, posible función o
ubicación, estructura molecular, relación con genes cercanos, árbol filogenético reportado y familia a la
que pertenece. Por otra parte, para determinar el peso molecular y el punto isoeléctrico aproximado de la
proteína se utilizaron los programas: Protein Isoelectric Point y ProtParam para determinar la presencia
de péptido señal, con los programas SignalP 4.1, PrediSi, SignalBlast. La predicción de estructuras
secundarias se realizó con el programa PSIPRED; mientras que el perfil hidrofóbico se realizó por medio
del programa ProtScale, utilizando el algoritmo Kyte & Doolittle. La predicción de dominios
transmembranales se trabajó con el programa TMPred. Mediante el programa TMHMM se logró conocer
si nuestra secuencia contenía hélices transmembranales. Por medio del programa Pfam fueron
determinados los dominios. Para la predicción de epítopos lineales y regiones antigénicas se utilizaron
los programas: ABCPred, BCEPred, Antigenic y CTLPred. Para el análisis de regiones globulares se
trabajó con el programa GlobPlot.
Una vez terminado el análisis bioinformático de la cepa molde, se continuó con la fase experimental.
Utilizando las cepas mexicanas de Anaplasma marginale previamente caracterizadas con respecto de los
marcadores moleculares Msp1a y Msp4: Pichucalco, Chis. Mex-07-068-01; Pte. De Ixtla, Mor. Mex-17017-01 (Jiménez et al., 2008); Tlapacoyan-1, Ver. Mex-30-184-01; Tlapacoyan-2, Ver. Mex-30-184-02;
Atitalaquia Hgo. Mex-14-010-01; Ticul, Yuc. Mex-31-089-01 (Jiménez et al., 2012).
A partir de muestras de sangre extraídas de bovinos infectados con las cepas mencionadas se procedió
con la extracción de ADN genómico mediante el paquete comercial Ultra Clean DNA® BloodSpin MoBio®
siguiendo las instrucciones del fabricante exceptuando el volumen final de elución, donde se ocupó
menor cantidad para concentrar en DNA. El DNA genómico de los distintos aislados, fue utilizado para
llevar a cabo la técnica de Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR). .Los iniciadores utilizados fueron
diseñados con base en la secuencia de la cepa St. Maries reportada en GenBank. Los amplicones
obtenidos se separaron por electroforesis en gel de agarosa al 1 %, utilizando una carga de 100 V
durante 30 minutos y comparados con base en el marcador de peso molecular de 1Kb, el gel fue
visualizado en el fotodocumentador, se procedió con la clonación utilizando el paquete comercial
CloneJET PCR Cloning Kit ™, siguiendo las indicaciones del fabricante y utilizando bacterias quimio
competentes TOP 10 de Escherichia coli. La selección de clonas se realizó mediante marcadores de
selección de resistencia a ampicilina y se confirmaron por PCR utilizando los iniciadores del vector.
Posteriormente se procedió a sembrar 3 clonas recombinantes de cada aislado en 5 ml de Medio LB con
ampicilina (100 mg/ml) y fueron incubados durante 16 horas a 37 °C; al final de la incubación el ADN
plasmídico se extrajo utilizando el paquete comercial de GeneJET Plasmid Miniprep®, siguiendo las
instrucciones del fabricante; el ADN plasmídico obtenido se cuantificó por espectrofotometría a 260 nm
utilizando el Nanodrop 1000. Las clonas que se seleccionaron como positivas, se enviaron a secuenciar
al Instituto de Biotecnología de la UNAM, los plásmidos obtenidos se adecuaron a una concentración de
500 g/16 l, se secuenciaron en sentido y antisentido con los iniciadores correspondientes del vector.
Las secuencias en nucleótidos y los electroferogramas se visualizaron con el programa BioEdit Sequence
Alignment y con este mismo programa se convirtieron a formato FASTA. Las secuencias crudas de las
clonas enviadas a secuenciar se analizaron por programa CLC Sequence Viewer 6.9.1 y se obtuvieron
las secuencias consenso. La obtención de la secuencia de aminoácidos se realizó a partir de la
traducción de secuencia de nucleótidos utilizando el programa Translate Tool del portal Expasy. Para
identificar diferencias en las secuencias obtenidas se realizó un alineamiento con las secuencias de
nucleótidos y aminoácidos, mediante los programas CLC Secuence Viewer 6.9.1 y ClustalOmega,
logrando determinar el porcentaje de identidad entre ellas; mismas a las que se les realizó el análisis por
medio del programa BLAST, para determinar su identidad respecto a la cepa St. Maries.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En este estudio se determinó el índice de identidad del gen omp7 en aislados mexicanos de Anaplasma
marginale, además se determinó que la secuencia de aminoácidos del gen omp7 llena las características
deseables de una proteína vacunal al igual que cumple con los criterios para que los antígenos puedan
ser usados como agentes vacunales, tales criterios son: Las proteínas deben estar expuestas en la
superficie, preferentemente tener alguna función vital o de virulencia, deben de ser altamente
conservadas entre cepas de distintas regiones, contar con epítopos inmunorelevantes e inducir una
45
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
respuesta inmune protectora. Se realizó un estudio preliminar basándonos en la cepa reportada St.
Maries, por ser la primera secuencia reportada completamente. El gen que codifica la proteína OMP7
resultó ser de adecuada para el fin, contando con una secuencia de 1191 pares de bases, codificantes
para 396 aminoácidos, con un punto isoeléctrico de 8.91, además de estar integrada a la membrana
celular externa.
En base a los análisis bioinformáticos que se llevaron a cabo con los programas anteriormente
mencionados, se predice que la proteína OMP 7 tiene una péptido señal correspondiente a los primeros
23 aminoácidos, los cuales también corresponden a la región transmembranal que tiene la proteína,
después de ello continua la proteína madura que se encuentra en la región externa de la membrana del
Anaplasma, además se encontró que tiene dos dominios globulares conservados de 184 y 93
aminoácidos respectivamente, de igual importancia tiene tres regiones de desorden, las cuales se predice
son las que le permiten movilidad a la proteína.
Por otro lado, hablando de las secuencias del gen omp7 de cepas mexicanas, encontramos que hay
deleciones y sustituciones de codones lo cual se refleja en los cambios de aminoácidos que conforman la
proteína. Por lo cual, hay cambios en algunos epítopos de importancia, sin embargo, se conservan la
gran mayoría, puesto que el porcentaje de identidad de las secuencias nucleotídicas con respecto a la
secuencia reportada de A. marginale cepa St. Maries concluye de la siguiente manera: Pichucalco, Chis.
Mex-07-068-01, 88% de identidad; Pte. De Ixtla, Mor. Mex-17-017-01, 96% de identidad; Tlapacoyan-1,
Ver. Mex-30-184-01, 97% de identidad; Tlapacoyan-2, Ver. Mex-30-184-02, 99% de identidad; Atitalaquia
Hgo. Mex-14-010-01, 88% de identidad; Ticul, Yuc. Mex-31-089-01, 96% de identidad.
Por otro lado, el porcentaje de identidad en las secuencias de aminoácidos con respecto a la molde cepa
St. Maries de A. marginale resulta de la siguiente manera: Pichucalco, Chis. Mex-07-068-01, 79% de
identidad; Pte. De Ixtla, Mor. Mex-17-017-01, 97% de identidad; Tlapacoyan-1, Ver. Mex-30-184-01, 97%
de identidad; Tlapacoyan-2, Ver. Mex-30-184-02, 99% de identidad; Atitalaquia Hgo. Mex-14-010-01,
79% de identidad; Ticul, Yuc. Mex-31-089-01, 98% de identidad.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
El gen omp7 tiene poca diversidad genética en aislados mexicanos de Anaplasma marginale y presenta
epítopos tipo B que se conservan en las secuencias de aminoácidos, manteniendo un potencial
inmunogénico. Por lo cual, la secuencia de aminoácidos del gen omp7 cumple con las características
deseables de una proteína vacunal.
BIBLIOGRAFÍA
Brayton KA, et al., Complete genome sequencing of Anaplasma marginale reveals that the surface is
skewed to two superfamilies of outer membrane proteins. Proc Natl Acad Sci. 2005; 102(3):844-849.
Jiménez Ocampo R., Vega y Murguía CA, Oviedo Ortega N, Rojas Ramírez EE, García Ortiz MA,
Preciado de la Torre JF, Rosario Cruz R, Domínguez García, D, Rodríguez SD. Diversidad genética de la
región variable de los genes msp1a y msp4 en cepas de Anaplasma marginale de México. Rev Mex
Cienc Pecu. 2012; 3(3):373-387.
Palmer GH, Rurangirwa FR, Kocan KM, Brown WC. Molecular basis for vaccine development against the
ehrlichial pathogen Anaplasma marginale. Parasitol Today. 1999; 15(7):281-6.
Rodríguez SD, García-Ortiz MA, Jiménez OR, Vega y Murguía CA. Molecular epidemiology of bovine
anaplasmosis with a particular focus in México. Infect Genet Evol. 2009; (6):1092-1101.
Este trabajo fue financiado a través del Proyecto SEP-CONACYT 168167
46
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
LAS ESTERASAS REGULAN LOS ESTADIOS DE DESARROLLO EN FASCIOLA HEPATICA.
ESTERASES MODULATE DEVELOPMENTAL STAGES IN FASCIOLA HEPATICA
Miranda ME1*, Cossío BR1, Pérez DJD2, Sachman RB1.
1Centro
Nacional de Investigación Disciplinaria en Parasitología Veterinaria, INIFAP, Jiutepec, Morelos
México; 2Centro Nacional de Servicios de Constatación en Salud Animal, SENASICA- SAGARPA.,
Morelos México.
[email protected]
INTRODUCCION
La fasciolasis es provocada por el trematodo parásito equinostómido Fasciola hepatica que afecta
gravemente el parénquima hepático y bloquea las vías biliares de equinos, bovinos, ovinos, caprinos,
cerdos, conejos y humanos (Scarcella et al 2012, 2015., Miranda et al 1994, 1995). La fasciolasis es
catalogada por la OMS como la mas descuidada de las helmintiasis zoonóticas, ya que es ignorada por
las campañas de salud de la mayoría de los países, pese a que afecta a 17 millones de personas a nivel
mundial y 91 millones de personas mas se encuentran en áreas endémicas con el riesgo de contraerla
(Scarcella et al 2015). Dado que F. hepatica parasita a la mayoría de los animales de interés pecuario,
también afecta de manera adversa a la industria ganadera causando pérdidas mundiales por alrededor
de cuatro millardos de dólares (Scarcella et al 2012). En México existen reportes de prevalencias de
hasta el 70 % en animales sacrificados en rastros ubicados en algunos estados, con el consecuente
decomiso de vísceras y carne declaradas no aptas para el consumo humano (Miranda et al 1994, 1995).
Si bien en México no existen faciolicidas autorizados para el tratamiento de las personas parasitadas, la
fasciolasis del ganado es tratada principalmente con triclabendazol (TCBZ), que es un derivado
halogenado del tiol-benzimidazol (Miranda et al 1994). Los trematodos parásitos metabolizan TCBZ
mediante su complejo de Enzimas Metabolizantes de Xenobióticos (EMX) y la exposición de F. hepatica
a productos antiparasitarios ha generado resistencia y/o tolerancia al TCBZ en varias regiones del mundo
(Scarcella et al 2012, 2015). El complejo EMX incluye enzimas tales como Citocromo P-450,
Monoxigenasas dependientes de flavina, Alcohol y aldehído deshidrogenasas, Glutatión S transferasas y
Carboxilesterasas (Scarcella et al 2015), que protegen a los helmintos de la acción tóxica de los
xenobióticos naturales y actualmente constituyen la primera defensa de los parásitos contra los
compuestos antihelmínticos (Miranda-Miranda et al 2006, 2008). Existe la necesidad de estudiar el papel
de estas enzimas con el fin de diseñar procedimientos diagnósticos que permitan identificar los niveles de
resistencia y el papel que estas enzimas juegan en otras rutas metabólicas que susceptibles de ser
atacadas por nuevos compuestos faciolicidas. Este estudio analiza el papel de la EMX carboxil esterasa
en diferentes estadios de desarrollo de la duela hepática por procedimientos de densitometría de
zimogramas digitalizados.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Cepas de helmintos. Se utilizaron diferentes estadios de desarrollo de cepas de F. Hepatica resistente y
susceptible a triclabendazol proporcionadas por el SENASICA/SAGARPA, las cuales han sido
identificadas y seleccionadas por su resistencia y/o suceptibilidad a compuestos antihelmínticos.
Extractos. Se utilizaron helmintos pesados en lotes de 100 mg y macerados en 1ml de Solución Salina
Amortiguadora de Fosfatos pH 7.2 (SSAF). El extracto se centrifugó a 14,000 g durante 5 minutos y al
sobrenadante se le determinaró el contenido protéico acorde al método de Bradford. Los extractos así
obtenidos se almacenaron en alícuotas de 50 µl a -20 ˚ C.
Electroforesis en gel de poliacrilamida SDS. Se utilizaró el método descrito previamente (Miranda et al
2008) en geles de 100 X 82 X 1.5 mm con 15 pozos de muestras con 75 µg de proteína de extracto por
cada pozo. La separación electroforética se hizo a 15 mA durante 90 min.
Zimogramas. Los geles de poliacrilamida se sumergieron en una solución de agua-tritón X-100 al 2.5%
con agitación durante 15 min. y 2 lavados posteriores en SSAF-triton X 100 al 0.2% para detectar
47
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
esterasas, los geles así preparados se sumergieron en solución de substrato, siguiendo las metodología
previamente descrita (Miranda et al 2004), hasta la aparición de bandas. Los zimogramas obtenidos se
registraron digitalmente en un procesador de imágenes Epichem (UVP Life Sciences).
Densitometría. Se procesaron las imágenes digitales de cada gel en la modalidad de densitometría del
paquete de programas de computadora LabWorks 4.0 (UVP Life Sciences. www.uvp.com) y se calibró el
densitómetro para cuantificar la densidad óptica de cada banda enzimática obtenida. Las densitometrías
se conjuntaron para complementar las zimografías junto con la Movilidad Electroforética Relativa (Rf) y
Masa Molecular (MM), para lo cual se utilizaron las proteinas marcadoras de MM preteñidas Page Ruler
(Fermentas Life Sciences www.fermentas.com) con un rango de 11 a 170 kDa que se separaron
simultáneamente con los extractos de trematodos para formar una curva de calibración de MM, a partir
de la cual el programa de computadora se calibraró para hacer de manera automática el cálculo de la Rf,
la correspondiente MM así como la Densidad óptica de cada banda presente en los zimogramas.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los extractos de F. hepatica exhibieron abundante actividad de esterasas, con una actividad enzimática
específica de entre 2500 a 6000 unidades enzimáticas (UE)/mg de proteína sin embargo muy poca
información hay al respecto en la literatura científica. Los zimogramas detectaron una sola banda de 90
kDa. Que una vez separada por isoelectroenfoque, origina un patrón zimográfico distintivo para los
estadios de desarrollo analizados mostrando cuatro y ocho isozimas para el estadio de adulto y juvenil
respectivamente, lo que sugiere que las esterasas cumplen una función en la maduración de los
trematodos de una manera análoga a otros helmintos, en los que la hormona juvenil es hidrolizada por
las esterasas para que estos puedan mudar de juveniles a adultos. Los análisis densitométricos también
mostraron que las diferentes isozimas tienen una actividad enzimática específica distintiva para los
diferentes estadios de desarrollo lo que refuerza la hipótesis de que la actividad de esta enzima modula la
maduración de la duela hepática.
REFERENCIAS
Scarcella S., Miranda-Miranda E., Solana M. V. and Solana H. Approach to molecular characterization of
different strains of Fasciola hepatica using random amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction.
Parasitol Res. 2015 Apr;114(4):1341-5. doi: 10.1007/s00436-015-4310-9.
Scarcella S, Miranda-Miranda E, Cossío-Bayúgar R, Ceballos L, Fernandez V, Solana H. Increase of
carboxylesterase activity in Fasciola hepatica recovered from triclabendazole treated sheep. Mol Biochem
Parasitol. 2012. 185:151-153.
Miranda-Miranda. E y García-Vazquez Z. 1994. Aislamiento e identificación in situ de antígenos de
Fasciola hepatica . Vet, Mex. 25(3): 267-281. Miranda-Miranda. E. y García-Vazquez Z. 1995.
Identificación de antígenos de diferentes fases de desarrollo de Fasiola hepatica. Tec. Pecu. Mex. 33(1):
8-15.
Miranda-Miranda E, Zamora-Ruiz A, Cossio-Bayugar R. 2009. molecular cloning and expression of a
Caenorhabditis elegans cathepsin b-like protease. Biotechnology 8(2): 242-247.33.
Miranda-Miranda E, Murillo-Sánchez MH, Cossío-Bayúgar R. 2008. expression of a Haemonchus
contortus cysteine protease in the baculovirus system”. Electronic Journal of Biotechnology. 10(4):49-55.
Miranda-Miranda E Liébano-Hernandez E. López-Arellano M.E.; Mendoza-de-Gives P; Cossío- Bayúgar
R. 2006. Marcadores enzimáticos como indicadores de resistencia a los antihelmínticos en el nematodo
parásito gastroentérico de rumiantes Haemonchus contortus. Bioquimia 31(1). p. 6-12.
48
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
LOS COMPUESTOS ADRENERGICOS INHIBIDORES DE LA OVIPOSICION AFECTAN LA
CONTRACCION DEL OVARIO DE LA GARRAPATA.
ADRENERGIC COMPOUNDS INHIBITITORS OF OVIPOSITION AFECT OVARY CONTRACTION IN
TICKS.
Cossío BR1*, Miranda ME1, Ruvalcaba FM1, Narvaez PV2, Reynaud GE3.
1Centro
Nacional de Investigación Disciplinaria en Parasitología Veterinaria INIFAP, 3Facultad de
Ciencias. Universidad Autónoma de Morelos, 3Instituto de Biotecnología de la UNAM.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
la garrapata del ganado Rhipicephalus (Boophilus) microplus se encuentra distribuida en las regiones
tropicales y subtropicales del pais siendo su control uno de los principales retos de la ganadería ya que
provoca grandes perdidas economicas a esta industria ya sea por sus características de ectoparásito o
por ser vector de dos graves enfermedades de los bovinos: la anaplasmosis y la babesiosis. Para
controlarlas generalmente se usa acaricidas quimicos, pero el abuso en estos compuestos ha
seleccionado garrapatas que son multiresistentes a la mayoría de las familias de acaricidas (Abbas et al.,
2014). Uno de los acaricidas usados para el control de la garrapata es el amitraz, que se ha reportado
que tiene propiedades de inhibir la puesta de huevos en la garrapata. Se habia propuesto que el amitraz
es el blanco de receptores de aminas biogénicas (Booth et al. 1989) que generalmente estaba
relacionadas en las vias de tiramina y octopamina, hasta el momento no se conocen los mecanismos de
acción del amitraz y no se sabe si actúa directa o indirectamente sobre los receptores de octopamina. La
tiramina y la octopamina son dos aminas biogenicas que modulan varios aspectos de la fisiologia de los
artropodos incluyendo el control de la oviposición (Roeder 2005). La octopamina es el equivalente
invertebrado de la adrenalina y por esta razón es un agonista de receptores adrenérgicos. En un trabajo
previo se identicaron compuestos adrenergicos que son capaces de inhibír la ovoposición en R.
microplus (Cossío-Bayugar et al., 2012) por lo que el objetivo de este trabajo fue demostrar que las
moléculas identificadas con capacidad para inhibir la ovoposición tenían algun efecto en la contraccion
del ovario de la garrapata además de probar si el el amitraz actúa directamente sobre los ovarios de R.
microplus.
MATERIALES Y MÉTODO
Se utilizó una cepa de garrapatas R. microplus de referencia susceptible a acaricidas comerciales; las
garrapatas fueron mantenidas y cultivadas sobre bovinos en el Centro Nacional de Parasitología Animal
(CENID-PÄVET) INIFAP) en Jiutepec, Morelos, México. Se infestaron bovinos con 10,000 larvas de
garrapatas de 15 días de edad y 19 a 21 días después de la infestación, se recolectaron las hembras
preingurgitadas e ingurgitadas. Las garrapatas se disectaron para la obtención ovarios en medio Jan y
Jan (NaCl 128mM, KCl 2mM, 4mM MgCl2, Sucrose 36 mM, HEPES 5mM pH = 7.3) sin Ca2. Estos
ovarios se inmovilizaron con alfileres de fibra óptica en cámaras en una cámaras en una cámara de
perfusión tratadas con Sylgard para hacer el registro electrofisiológico. Los ovarios se expusieron a las
distintos compuestos adrenérgicos a una concentración de 5 μM en medio completo Jan y Jan con Ca2+
0.05% DMSO, El efecto de la sustancia se midió por 80 s, después se depolarizaron los ovarios con
15mM KCl lo cual se midió por otros 80s. la contracción (o relajación) de los oviductos en respuesta a
estas substancias se registró utilizando una cámara de video digital y los cambios en el diámetro del
oviducto sé cuantificaron usando el programa para análisis de imágenes “image J” (Rodríguez-Valentín
et. al. 2006). Cada condición se repitió 6 veces.
Análisis estadístico. Por cada cuadro de filmación se normalizó el índice de contracción y se promediaron
las repeticiones (n = 6), también se calculo su desviación estándar. Cada experimento de serie de tiempo
fue comparada con el control (0.05% DMSO en solución completa de Jan y Jan) usando la prueba de
Chi-cuadrada para determinar si había diferencia significativa a lo largo del análisis de las series de
tiempo. Las series de tiempo experimentales también fueron analizada por ANOVA con una comparación
49
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
múltiple de Dunnett. Se evaluaron los siguientes compuestos adrenérgicos para probar su habilidad de
contraer o relajar el ovario: Isoproterenol, salbutamol, prazosin, clonidina Epinastina, tyramina, amitraz, y
octopamina.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se probaron ocho compuestos adrenérgicos que se habían reportado que la ovoposición en la garrapata
(Cossío-Bayugar et al., 2012) entre estos compuestos se probaron la octopamina y la tiramina. Estas
dos moléculas presentaron efectos antagonistas: la octopamina relajo la preparación de ovario mientras
que la tiramina produjo una gran contracción. Las otras moléculas adrenérgicas que se probaron se
pueden clasificar de acuerdo a su habilidad de relajar o contraer el ovario. Isoprotenerol presentó un
mayor efecto relajante que octopamina. La tiramina indujo la mayor contracción de todos los compuestos
seguida en orden descendente de contracción por salbutamol, porazosin, espinatina, clonidina y el
acaricida amitraz. El efecto de estos compuestos adrenérgicos en la preparación de ovario realizada en
este trabajo explica porque estas moléculas son capaces de inhibir la ovoposición en la garrapata y
sugieren un mecanismo de regulación de contracción y relajación del oviducto durante la ovoposición.
Estos resultados presentan una explicación fisiología del efecto de inhibición de la ovoposición del
amitraz usados para control de la garrapata del ganado.
AGRADECIMIENTOS.
Este trabajo fue parcialmente financiado por SEP-CONACT (proyecto No. 103026)
LITERATURA CITADA
Abbas RZ, Zaman MA, Colwell DD, Gilleard , Iqbal Z. 2014. Acaricide resistance in cattle ticks and
approaches to its management: The state of play. Vet. Parasitol. 203, 6–20.Booth, TF. 1989.
Effects of
biogenic amines and adrenergic drugs on oviposition in the cattle tick Boophilus: evidence for
octopaminergic innervation of the oviduct. Exp. App. Acarol. 7:259-266.
Cossío-Bayúgar R, Miranda-Miranda E., Narváez Padilla V, Olvera-Valencia F, Reynaud E. 2012.
Perturbation of tyraminergic/octopaminergic function inhibits oviposition in the cattle tick Rhipicephalus
(Boophilus) microplus. J. Insect Physiol. 58, 628–633 (2012). Roeder T. 2005. Tyramine and octopamine: ruling behavior and metabolism. Annu. Rev. Entomol. 50,
447–477.
Rodríguez-Valentín, López-González I, Jorquera R, Labarca P, Zurita M, Reynaud E. 2006. Oviduct
contraction in Drosophila is modulated by a neural network that is both, octopaminergic and glutamatergic.
J. Cell. Physiol. 209, 183–198. 50
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL ANTIOXIDANTE ASTAXANTINA (ASTX) SOBRE CULTIVO DE
PARÁSITOS DE TRYPANOSOMA CRUZI.
EVALUATION OF THE EFFECT OF ANTIOXIDANT ASTAXANTHIN (ASTX) ON CULTURE OF
TRYPANOSOMA CRUZI.
Contreras-Ortíz JME*1, Vázquez-Chagoyán JC1, Barbabosa-Pliego A1, Oros-Pantoja R2
1Centro
de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Toluca, Estado de México; 2Facultad de
Medicina, UAEM, Toluca de Lerdo, Estado de México.
[email protected]
INTRODUCCION
La Tripanosomiasis Americana, es una enfermedad zoonótica causada por el agente etiológico
Trypanosoma cruzi y transmitida por especies del género (Triatoma spp). Pese a los logros alcanzados
en materia de prevención, control y tratamiento de la enfermedad, este sigue siendo un serio problema de
salud, pues sesga muchas vidas en plena edad productiva. Se estiman aproximadamente 10 millones de
personas afectadas y 25 más en riesgo de infección a nivel mundial (WHO, 2013).
Los tratamientos actuales a base de Nifurtimox y Benznidazol no son completamente eficientes, ya que
solo funcionan en etapas tempranas de la enfermedad y produce daños colaterales severos, además de
que se ha reportado resistencia del parasito a la quimioterapia empleada, por tanto es necesario la
búsqueda de tratamientos alternativos nuevos, que puedan coadyuvar en el tratamiento de la enfermedad
o en su caso emplearse como nueva terapia.
Se sabe que durante la enfermedad de Chagas, el miocardio está expuesto a constante estrés oxidativo
(EO) por producción excesiva de radicales libres (RL) generados por la invasión y replicación del
parasito y por las reacciones citotóxicas del sistema inmune propio del hospedero, procesos que
contribuyen a la cardiomiopatía dilatada Chagásica (Gupta et al., 2009).
Se propone el uso de antioxidantes exógenos como la ASTX (3,3’-dihidroxi-β,β’-caroteno-4,4’-diona)
perteneciente a la familia de las xantofilas, es uno de los antioxidantes más potentes conocidos por el
hombre (10 veces mayor al betacaroteno y 100 veces mayor a la vitamina E), se encuentra de manera
natural en algunos animales marinos, (Olaiza y Huntley, 2003), es una molécula capaz de estabilizar a los
radicales libres, proteger moléculas de importancia biológicas y mantener sanas a las células afectadas.
Se ha reportado que su ingesta previene y combate varias enfermedades en el humano además de
mantener la salud cardiovascular, sin embargo no ha sido evaluado en la cardiomiopatía Chagásica. Se
tiene reporte de algunos compuestos presentes en plantas nativas de africa, en donde se ha demostrado
que antioxidantes presentes en dichos compuestos son capaces de afectar la viabilidad de parasitos de
Tripanosoma brucei, responsable de la tripanosomiasis africana, pero no ha sido evaluado la ASTX sobre
cultivos de T. cruzi.
OBJETIVOS
Evaluar el efecto del antioxidante astaxantina sobre cultivo de Trypanosoma cruzi y determinar si el
tratamiento detiene el ciclo natural del parásito in vitro
MATERIAL Y METODOS
Se cultivaron a confluencia células Vero a 37 ° C, 5 % CO2, 10% SFB (Suero Fetal Bovino) una vez
alcanzados 50 % de confluencia se infectaron con cultivos preservados de Trypanosoma cruzi cepa Silvio
X10/4, se esperó de 1-2 semana realizando realiza cambio de medio cada tercer día con DMEM 2% SFB.
Una vez producido gran cantidad de parásitos se procedió a su cosecha y conteo con hematocitometro
para su siembra en placa de 96 pozos a una cantidad de 0.5x105 parasitos/pozo. Previamente se realizó
51
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
extracción de ASTX con sistema de solventes éter de petróleo:Acetona:Agua y se resuspendió en
DMEM-DMSO (dimetilsulfoxido) para su cuantificación y determinación de su concentración a partir de
una curva patrón de β-caroteno, posteriormente se prepararon las siguientes dosis para experimentación:
1, 5, 10, 20, 30 µg/100 µl de medio de cultivo, y controles respectivos: Nifurtimox (400µg/100µl)), Dimetil
sulfoxido y parásitos sin tratamiento y se agregaron a los cultivos de parásitos por 24 horas,
posteriormente se cuantificó el número de parásitos viables post- tratamiento a partir de un ensayo
colorimétrico por reacción del MTS a 490 nm.
Además, se determinaron los cambios morfológicos pos-tratamiento y se corrobora la viabilidad con
ensayo de azul tripan, para determinar la integridad de la membrana celular y la no diferenciación.
Para determinar el tipo de muerte celular en los parásitos pos-tratamiento se realiza la extracción de ADN
pos-tratamiento, para visualizar la integridad del mismo o si hay fragmentación por efecto del antioxidante
mediante electroforesis
RESULTADOS PRELIMINARES
En el presente trabajo se evaluó primeramente el efecto del antioxidante ASTX en cultivos de T. cruzi
(Silvio X10/4) por un tiempo de 24 horas, donde se observan porcentajes de mortalidad de manera dosisdependiente (1, 5, 10, 20, 30 µg/100µl) afectando la viabilidad con porcentajes de mortalidad del 25, 60,
70 y 80% de mortalidad respectivamente y como era de esperarse los controles negativos no son
afectados, no así el grupo Nifurtimox donde se observa muerte celular como era de esperarse, sin
embargo cuando se evalúan las mismas dosis de tratamiento en células Vero, estos muestran
porcentajes de muerte menores del 15% en las 2 primeras dosis un 18 % en la dosis 3 y alta mortalidad
en la dosis 4 y 5. Morfológicamente los parásitos muestran cambios estructurales y membrana celular
comprometida determinado por azul tripan, lo que es indicativo de muerte celular y de diferenciación a
otras formas morfológicas.
La extracción de ADN indica fragmentación en las 3 primeras dosis, el cual es visualizado por
electroforesis, no así para los controles negativos donde se puede apreciar ADN intacto.
CONCLUSIONES PRELIMINARES
Los hallazgos sugieren que la ASTX podría tener potencial como agente antiparasitario al afectar la
viabilidad de los mismos y podría usarse como auxiliar terapéutico o coadyuvante con otros fármacos, sin
embargo dado que son resultados preliminares son necesarios más estudios al respecto para reforzar lo
encontrado.
REFERENCIAS
WorldHealthOrganization(WHO),
UNDP/WorldBank/WHO.
2013.
Chagas
Disease:
Control
and
Elimination.
Shivali Gupta, Jian-Jun Wen, Nisha Jain Garg, 2009, Oxidative Stress in Chagas Disease,
InterdisciplinaryPerspectives on InfectiousDiseases.
52
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
REGENERACIÓN DE HERIDAS CUTÁNEAS CON AGUJAS DE PLASMA DE ARGÓN Y HELIO.
SKIN WOUND REGENERATION TREATED WITH ARGON AND HELIO COLD PLASMA NEEDLES.
Fajardo MRC1*, García AE2, López CR2, Morales RPR2, Peña ER2, Mercado CA2, Valencia AR2, Barocio
SR2, Rodríguez MB2, Muñoz CA2, de la Piedad BA3, Rojas OA2,3, Alpízar PA1, Ortega SC1, Martínez CJS1.
1Centro
de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México; 2Plasma Physics Laboratory and Cell
Radiobiology Laboratory, Instituto Nacional de Investigaciones Nucleares, México DF, México; 3Instituto
Tecnológico de Toluca, Toluca, México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El plasma es el cuarto estado de la materia, formado de un gas ionizado que produce incandescencia.
Actualmente, se han producido diferentes dispositivos para producir varios tipos de plasmas y algunos de
ellos se utilizan en la industria y en la medicina. La medicina del plasma es un campo independiente que
está emergiendo en todo el mundo de forma comparable con la aplicación de la tecnología del Laser
desde hace algunos años. El uso terapéutico del plasma se le conoce como medicina del plasma. Las
bases científicas de la medicina del plasma y sus mecanismos de interacción con tejidos vivos aún son
muy elementales. El dispositivo utilizado en este trabajo originalmente fue diseñado para aplicaciones
odontológicas (2), por lo que, este estudio es el primer trabajo en México con aplicación en regeneración
de heridas cutáneas y bajo un tratamiento combinado de dos plasmas fríos de Argón (Ar) y Helio (He).
OBJETIVOS
El objetivo de este trabajo fue estudiar los efectos de la aplicación combinada de agujas de plasma frío
con argón y helio sobre la coagulación sanguínea y regeneración de heridas cutáneas a través de la
evaluación clínica e histopatológica de la evolución de las heridas en un modelo murino.
MATERIAL Y MÉTODOS
En el Instituto Nacional de Investigaciones Nucleares (ININ) se desarrolló un sistema para generar
plasma a presión atmosférica de tipo antorcha conocido como aguja de plasma (1). Está constituido por
un ensamble de elementos en una configuración coaxial (un filamento de cobre que funciona como
elemento de potencia axial que pasa dentro de un tubo de cerámica que brinda rigidez mecánica y
aislamiento eléctrico). Los elementos están ensamblados en un bastidor de Nylamid SL® que incluye una
boquilla de gas, el electrodo está unido a un conector hembra de BNC, para producir un punto de ~1 mm
de diámetro de plasma en niveles de baja potencia. Los flujos de gas de Ar y He se regulan con un
controlador comercial MKS de flujo másico. Se utilizaron 12 ratones Balb/c entre 28 y 32 g de peso,
mantenidos de acuerdo a la guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio (3), anestesiados con
pentobarbital sódico y se les realizó una herida de 10 mm de largo por 5 mm de profundidad en la parte
interna de ambas piernas. Una de las heridas de cada ratón se utilizó como control.
El tratamiento de las heridas con plasma se llevó a cabo a temperatura y presión ambiente en 2 fases; 1)
con gas Argón y 2) con gas Helio. En la primera fase, se dieron tres tratamientos con el plasma de argón
por 1 min cada uno sobre la superficie de la herida con un intervalo de tiempo de 20 min cada uno. En la
segunda fase se aplicaron tres tratamientos con aguja de plasma de helio de 5 min cada uno con un
intervalo de tiempo de 1 h. Para conocer si los mecanismos de acción de los tratamientos sobre la
regeneración de tejidos estaban asociados a la cauterización, se midió la temperatura de las heridas
durante la aplicación de las agujas de plasmas en movimiento y para saber si en los tratamientos había
producción de especies reactivas de oxígeno, se analizaron las agujas de plasma por espectrometría de
emisión óptica.
53
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Después de los tratamientos con helio, los animales se sacrificaron con un sobredosis de pentobarbital
sódico, y los tejidos se fijaron durante 24 h en formalina buferada al 10%, incluidos en parafina y teñidos
con HE y Tricrómica de Masson.
RESULTADOS
Los hallazgos macroscópicos después del primer minuto del tratamiento con Ar fueron: la sangre
coaguló, adquirió una coloración oscura y se formó una costra delgada seca que sellaba la herida. Al
segundo tratamiento con Ar, la costra engrosó y se retractó exudando gotas de líquido transparente
serohemorrágico. Al tercer tratamiento, la costra se retrajo más y se cubrió de algunos puntos discretos
de trasudado que sugieren el inicio del proceso de reparación de la herida. En las heridas tratadas con
He a los 60 min posterior a la incisión no mostraron gran evolución de regeneración en comparacíon con
el tercer tratamiento con Ar. En el segundo tratamiento con He, se observó una reducción del tamaño de
la herida con oscurecimiento de la costra. En el tercer tratamiento con He, hubo una marcada reducción
del tamaño de la herida a los 210 minutos, donde los bordes de la herida ya están juntos y con escaso
trasudado. A los 270 y 290 minutos, los tejidos se observaron totalmente regenerados y solo se aprecia
una linea delgada en el sitio de la lesión. Es evidente que el tratamiento con aguja de plasma de He
aceleró la regeneración de las heridas en todos los ratones.
Los resultados de la medición de la temperatura de las heridas durante los tratamientos demostraron una
temperatura de 41°C con Ar y de 33°C con He. Los análisis de las agujas de plasma por espectrometría
de emisión óptica demostró la producción de radical hidroxilo (OH) en ambos plasmas y óxido nítrico
(NO) solamente en la emisión del espectro con He.
A la histopatología se observó que los tratamientos con aguja de plasma de Ar detuvieron el sangrado
rápidamente y produjeron una destrucción de los eritrocitos que inicialmente llenaban la herida. Al
destruir estas células se produjo un colapso de los bordes de las heridas haciendo que los bordes se
junten en el fondo de la herida facilitando el acercamiento de los labios de las heridas. Las heridas de los
animales controles presentaron un coágulo de sangre sobre las heridas entre 1 y 40 minutos después de
la incisión. El tratamiento con aguja de plasma de He regeneró rápidamente las heridas. En los primeros
tratamientos, se redujo la inflamación y se observó escaso trasudado cubriendo la lesión. A los 270
minutos (4.5h) los labios de las heridas ya estaban unidos, mientras que las heridas controles a este
tiempo todavía no mostraban ninguna mejora evidente, aún presentaban coágulos, hemorragias,
inflamación ligera y bordes de herida separados.
DISCUSIÓN
La regeneración de heridas en ratones sin tratamiento varió entre 24-36 h, mientras que en los ratones
tratados con ambos plasmas ocurrió en 290 min (< 5 h). En todos los tratamientos con Ar se produjo la
coagulación sanguínea completa sin daños del tejido circundante, lo que, concuerda con otros trabajos
(5).
El proceso de aceleración de regeneración de las heridas puede atribuirse a las cantidades de NO
producidas durante el tratamiento con plasma de He. Los beneficios del NO en la regeneración de las
heridas de piel han sido demostrados por varios autores (4). Los mecanismos de acción de los
tratamientos combinados con agujas de plasma de argón y helio no se conocen a fondo todavía. Las
mediciones de temperatura de las heridas durante los tratamientos demostraron que no es a través de la
cauterización. Las especies reactivas de oxígeno y de nitrógeno (ROS y RNS) pueden tener un efecto de
detrimento o benéfico en las células y tejidos. Mientras que el NO posee características fisiológicas
importantes; como la curación de heridas cutáneas al inhibir la producción de aniones superóxido. Otro
mecanismo que puede contribuir a la rápida regeneración es la eliminación acelerada de los detritos
celulares y bacterias oportunistas, y así facilitarle al tejido su regeneración (10).
CONCLUSIONES
54
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
En este trabajo se desarrolló una nueva metodología para la coagulación sanguínea y para la
regeneración de heridas in vivo a través de agujas de plasma de Ar y He, que detuvieron el sangrado y
regeneraron las heridas en muy corto tiempo, sin complicaciones bacterianas ni efectos colaterales no
deseados. La regeneración de heridas es un proceso complejo que implica muchos procesos biológicos y
que requieren ser investigados. Estos tratamientos combinados con esta nueva tecnología fueron muy
eficaces y parecen ser muy prometedores en el campo de la medicina. Esta tecnología probablemente en
un futuro corto será utilizada en el tratamiento de heridas quirúrgicas y en procesos lacerados infectados
así como en heridas asociadas a la diabetes.
AGRADECIMIENTOS
A CONACYT por el financiamiento, a C. Alejandrí Cortés, A. Reyes Pozos, P. Aguilar Vargas, M. T.
Torres Martínez, P. Ángeles Espinoza y a I. Contreras Villa por su colaboración técnica.
REFERENCIAS
1) Stoffels E, Flikweert A J, Stoffels W W, Kroesen G M W Plasma needle: a non-destructive atmospheric
plasma source for fine surface treatment of (bio)materials, Plasma Sources Sci. Technol. 11 (2002) 38388.
2) Sladek R E J, Stoffels E, Walraven R, Tielbeek P J A, Koolhoven R A Plasma treatment of dental
cavities: a feasibility study, IEEE Trans. Plasma Sci. 32 (2004) 1540-43.
3) Commission on Life Sciences, Institute of Laboratory Animal Research, National Research Council,
Guide for the care and use of Laboratory Animals 1996 Washington D.C. National Academy Press 140.
4) C. K. Bucalen Ferrari, E. Luzia França, A. C. Honorio- França, Nitric oxide, health and disease, Journal
of Applied Biomedicine 7 (2009) 163-173.
5) G. Lloyd, G. Friedman, S. Jafri, G. Schultz, A. Fridman, K. Harding, Gas plasma: medical uses and
developments in wound care, Plasma Processes and Polymers 7 (2010) 194-211.
55
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL G1 SOBRE LAS CITOQUINA TH1 /TH2 EMPLEANDO CBA.
EVALUATION OF THE EFFECT ON TH1 CYTOKINE G1 / TH2 USING CBA.
Tenorio BE1*, Vázquez ChJ1, Peñuelas RCG1, Estrada FJG1, Barbabosa PA1
CIESA. Facultad de Medicina veterinaria y Zootecnia UAEMEX.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La producción global de productos químicos ha aumentado de 1 millón de toneladas en 1930 hasta 400
millones en el siglo XXI Cerca de 100 000 sustancias se registran en el mercado de la Unión Europea de
las cuales 10 000 se comercializan en volúmenes de más de 10 toneladas y unas 20 000 en volúmenes
de 1 a 10 toneladas por año (Spielmann, 2001).Es por ello que nuestro trabajo de investigación pretende
evaluar el efecto inmunotoxico del G1 en citoquinas Th1 y Th2. A partir de enfoques estratégicos para el
reemplazo, reducción y refinamiento del uso de animales en la inmunotoxicología. Como parte de la ruta
crítica del desarrollo.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El estudio se realizó en el Centro de Investigaciones y Estudios Avanzados de la Facultad de medicina
veterinaria y Zootecnia de la UAEMEX. Se evaluó la respuesta inmune humoral y celular para ello las
células fueron cultivas (linfocitos) en medio RPMI 1640 con suero fetal bovino al 10% y activadas con
lipopolisacáridos (LPS) a 1μg/mL. Las células fueron expuestas al fármaco objeto de estudio G1
(10μg/mL) durante 24 y 48 horas. En el ensayo se emplearon 3 controles Roxitromicina (2.5mg/mL),
nitrofurantoína (25mg/mL) y ciclosporina A (10 mg/mL) el ensayo se realizó por triplicado. Luego del
período de exposición (24 y 48 Horas) las células fueron sometidas a criopreservación a -80 °C durante
tres días hasta que se realizó la determinación de citoquinas en el citómetro FACS calibur. Se aplico 1 Kit
de ensayos con perlas (CBA). Estos incluyen reactivos para 80 test y permiten medir los niveles de varias
citoquinas en una sola muestra. El Kit CBA Th1-Th2 para evaluar respuesta humoral y celular incluye:
Interleuquina-2 (IL-2), Interleuquina-4 (IL-4), Interleuquina-5 (IL-5), Interferón-γ (IFN-γ), Factor Necrosis
Tumoral (TNF), Catálogo No. 551287 (Becton, Dickinson México).
RESULTADOS.
Los resultados de la evaluación de las citoquinas (IL-2, IL-4, IL-5, TNFα y INFγ) se obtuvieron en el
Software FACParray las curvas para evaluar cada citoquina; deben tener un coeficiente de determinación
por encima de R2 =99 y el ajuste se realizó mediante la ecuación de 5 parámetros logísticos. Se
realizaron el ANOVA y el Tukey para demostrar las diferencias significativas entre las muestras y el
control estándar. En las tablas se observan que la expresión de citoquinas mostró una mayor variación a
las 24 horas de exposición a los fármacos. Todos los valores se compararon con la MFI de la curva
estándar y no existen diferencias significativas con p˃=0.05 en las muestras expuestas a las 24 y 48
horas. El G1 no afecto la expresión de citoquinas Th1-Th2, pues no hubo diferencias significativas entre
el grupo tratado (G1) y el control negativo (P˃=0.99) a las 24 y 48 horas de exposición.
DISCUSIÓN.
Las evaluaciones toxicológicas han demostrado que el sistema inmune es un blanco sensible tras la
exposición de compuestos xenobióticos y que la leve o moderada supresión de la respuesta inmune está
relacionada con una menor resistencia a las infecciones comunes adquiridas en la comunidad, mientras
que las infecciones oportunistas, que son muy poco frecuentes en la población general, son comunes en
individuos con supresión severa. La exposición a xenobióticos puede también resultar en la estimulación
no deseada de la función inmune. Aunque una relación de causa y efecto entre la estimulación no
deseada de la respuesta inmune y las consecuencias adversas todavía no se ha establecido, la evidencia
56
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
sugiere que la hipersensibilidad, la autoinmunidad y la inflamación patológica pueden ser exacerbadas en
poblaciones susceptibles expuestas a ciertos xenobióticos.(Martin, 2012). Se realizó la evaluación in vitro
de algunas citoquinas (Th1-Th2) que intervienen en la respuesta humoral y celular. Se observó
diferencias significativas entre el G1 y el control estándar en las concentraciones de las 5 citoquinas
evaluadas (TNF, INF, IL-5, IL-4 e IL2) expresadas en linfocitos expuestos al producto por 24 horas, al
igual que a las 48 horas. Sin embargo no existen diferencias significativas entre las concentración de las
5 citoquinas y el control negativo esto significa que in vitro el producto no afecta la expresión de
citoquinas a las 24 y 48 horas coincidiendo con la predicción del modelo. Por lo tanto no afecta a los
mecanísmos que influyen sobre la expresión de citoquinas y que intervienen en la respuesta humoral y
celular de los linfocitos.
CONCLUSIONES
En el ensayo in vitro para evaluar el efecto del antimicrobiano G1 sobre la expresión de algunas
citoquinas Th1 y Th2 (IL2, IL4, IL5, INFγ y TNFα) en linfocitos resultó que no inhibe a estas proteínas por
lo tanto no influye en la respuesta celular y humoral
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Guido, R.V., Oliva, G., and Andricopulo, A.D. (2011). Modern drug discovery technologies: opportunities
and challenges in lead discovery. Comb Chem High Throughput Screen 14, 830-839.
Hernández, O., Martinez, Y., Pimentel, H., Llanes, Y., Pérez, G., Vazquez, N., Fernández, S., Quesada,
L., and Debesa, A. (2012). Effect of bromine atoms number on the cytotoxicity of two 2-furylethylene
derivative substances in normal and tumoral cell lines. Electron J Biomed 1, 26-36.
Maruyama, T., Nara, K., Yoshikawa, H., and Suzuki, N. (2007). Txk, a member of the non-receptor
tyrosine kinase of the Tec family, forms a complex with poly (ADP-ribose) polymerase 1 and elongation
factor 1alpha and regulates interferon-gamma gene transcription in Th1 cells. Clin Exp Immunol 147, 164175.
Martin, S.F. (2012). Contact dermatitis: from pathomechanisms to immunotoxicology. Exp Dermatol 21,
382-389
Rooney, A.A., Luebke, R.W., Selgrade, M.K., and Germolec, D.R. (2012). Immunotoxicology and its
application in risk assessment. EXS 101, 251-287.
57
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Biotecnología y biología celular en salud animal
SECRECIÓN DE HORMONA LUTEINIZANTE Y DESARROLLO FOLICULAR OVÁRICO EN
BECERRAS PREPÚBERES BAJO DOS NIVELES DE ALIMENTACIÓN Y SU ASOCIACIÓN CON LAS
CONCENTRACIONES DE LEPTINA E IGF-I EN SANGRE.
LUTEINIZING HORMONE SECRETION AND OVARIAN DEVELOPMENT FOLLICULAR IN
PREPUBERTAL HEIFERS UNDER TWO FEEDING LEVELS AND THEIR ASSOCIATION WITH LEPTIN
AND IGF-I IN BLOOD.
HernándezVE1*, Santos ER2, CuicasHR1, Rojas HS1, Ponce CJL3; Rosete FJV4, Calderón RRC4,
PereraMG5, Gómez-Chavarín M6
1Unidad
3Unidad
Académica de Medicina Veterinaria y Zootecnia No. 1-UAGRo; 2CIR Pacífico Sur-INIFAP;
Académica de Medicina Veterinaria y Zootecnia No. 2-UAGRo; 4CIR Golfo Centro-INIFAP;
5FMVZ-UNAM; 6IIB-UNAM
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En vaquillas, la pubertad está vinculada estrechamente con el peso y la composición corporal de las
hembras, mismos que a su vez están determinados en gran medida por la alimentación de las becerras.
En bien conocido que las vaquillas de carne requieren de un mínimo de 45 % de peso corporal adulto y
de 13 a 15 meses de edad para que inicien la pubertad. De esta manera, el régimen de alimentación
ofrecido a las hembras durante las fases de crianza y desarrollo, determina fundamentalmente la edad de
inicio de la pubertad. Por ejemplo, en becerras prepúberes, una dieta alta en energía induce pubertad
precoz, lo cual es precedida por un aumento en la frecuencia pulsátil de la hormona luteinizante (LH;
Gasser et al., 2006); sin embargo, las concentraciones sanguíneas de metabolitos y hormonas, que están
asociadas con el desarrollo corporal y que determinan el inicio reproductivo de la hembra parecer
depender de la edad y la raza de los animales. Además, la relación de algunos factores metabólico con el
patrón de liberación de LH, que determina el inicio de la pubertad, no está del todo claro. En bovinos, el
factor de crecimiento similar a la insulina I (IGF-I) y la leptina (Garcia et al., 2003) se incrementan en
sangre periférica antes de la pubertad, pero lo hacen de manera distinta con relación al inicio de la
misma. Por tanto, entender los mecanismos involucrados en el desarrollo reproductivo mejorará nuestra
capacidad para manejar de manera más efectiva a las vaquillas de reemplazo para obtener un
comportamiento reproductivo óptimo.
OBJETIVO.
Evaluar en becerras prepúberes el efecto de la suplementación energética proteínica sobre el patrón de
secreción de la LH y el desarrollo folicular ovárico, así como la asociación de estos con la concentración
de IGF-I y leptina en sangre periférica.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El presente estudio se realizó en el Campo Experimental Las Margaritas-INIFAP, localizado en
Hueytamalco, Puebla, con clima subtropical húmedo semicálido Af(c) con temperatura promedio anual de
20.8 °C. Se utilizaron 24 becerras prepúberes, clínicamente sanas, productos de la cruza entre las razas
Holstein y Suizo Pardo con Cebú, de 20±0.57 meses de edad, 263.4±7.4 kg de peso corporal y 3.27±0.08
puntos de condición corporal (escala de 1 a 9 puntos, la cuales se alojaron individualmente en corrales de
2.5 x 4.5 metros, con piso de cemento, área techada (2.5 x 2.7 metros), comederos y bebederos. Durante
62 días, las becerras recibieron una de dos dietas alimenticias, mismas que fueron asignadas de manera
aleatoria: 1) Consumo de forraje sin suplementación (P+NS; n= 12) y, 2) Consumo de forraje más
suplementación (P+S; n= 12). Para ambos grupos, el forraje fue heno de Avena picado (94.82 % MS,
8.13% PC y 2.3 Mcal de EM/kg) y éste se ofreció en el comedero a libre acceso. Para el grupo P+S el
suplemento fue un concentrado comercial (94.49 % MS, 17.97 % PC y 2.5 Mcal de EM/kg) y se ofreció en
el comedero a razón de 3 a 4 kg/becerra por día según su peso corporal, en dos porciones (AM y PM).
Ambos grupos, recibieron además, sales minerales y agua a libertad.
58
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
III
Endocrinología y reproducción
Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Al día 60 del tratamiento alimenticio, a cada becerra se le tomaron muestras sanguíneas cada 15
minutos, durante ocho horas, y posteriormente cada dos horas hasta cumplir las 24 horas; de igual
manera, el día 61 del tratamiento alimenticio a cada becerra se le tomó una muestra sanguínea cada 15
minutos, durante seis horas, y posteriormente cada dos horas hasta cumplir las 24 horas. El día 62, el
muestreo sanguíneo para cada becerra fue a intervalo de dos horas durante 24 horas. De estas muestras
se cuantificó mediante radioinmunoanálisis (RIA) la LH en suero. El RIA para LH fue un sistema en fase
líquida, del cual la cantidad mínima detectable fue 0.03 ng/ml y los coeficientes de variación (CV) intra- e
inter-ensayo fueron 6.73% y 6.57%, respectivamente. Por otra parte, de la primera muestra sanguínea
colectada el día 60 y 61 se determinó la concentración de leptina y de IGF-I, siendo el promedio de éstas
la concentración individual de cada becerra. El muestreo sanguíneo se realizó a través de una cánula de
polietileno (2.08 mm de diámetro y 15 cm de longitud) instalada en una de las venas yugulares de cada
hembra. En cada acto de muestreo se obtuvieron 8.5 ml de sangre y se depositaron en tubos Vacutainer.
Luego de permitir la coagulación, las muestras fueron centrifugadas para obtener el suero y éste fue
colocado en viales para ser congelados a -20 ºC hasta su análisis en el laboratorio. Las concentraciones
séricas de Leptina e IGF-I se determinaron mediante RIA. El RIA para IGF-I fue un sistema en fase sólida
(IGF-I-RIACT®, Cisbio Internacional, Francia) y para leptina fue un sistema multiespecies en fase líquida
(XL-85K, Linco Research Inc, St. Charles, MO, USA).
Los días 56 a 62 del tratamiento alimenticio, a cada becerra se le realizó un monitoreo ultrasonográfico
diario de ambos ovarios. En este monitoreo se registró el diámetro máximo del folículo dominante. El
equipo de ultrasonografía fue un Kaixin 500 (Xuzhou Kaixin Electronic Instrument Co. Xuzhou, Jiangsu,
China) con transductor transrectal de 7.5 MHz.
El estado prepúber de las becerras se determinó mediante la progesterona sérica (RIA) de muestras
sanguíneas tomadas de la vena coccígea, cada tercer día, desde el día 1 y hasta el día 62 del estudio
(concentraciones menores a 1 ng/ml, durante el periodo de estudio). El RIA para P4 fue un sistema en
fase sólida (PROG-CTRIA®, Cisbio Bioassay, Sorgues, France).
El patrón de LH se determinó mediante la concentración basal de LH (promedio de la concentración de
LH registradas en las primeras dos horas de muestreo sanguíneo intensivo o de las registradas ante de la
presentación del primer pulso de LH) y el número de pulsos de LH registrados en seis horas. Un pulso de
LH fue definido como un aumento en la concentración de LH en dos o más muestras consecutivas,
mayores a la concentración basal mas dos desviaciones estándar. El Desarrollo folicular ovárico fue
definido como el diámetro máximo del folículo dominante registrado durante el monitoreo
ultrasonográfico.
Para conocer diferencias entre grupos experimentales en cuanto al peso corporal, ganancia diaria de
peso, concentraciones de leptina e IGF-I, concentración basal de LH y diámetro máximo del folículo
dimanante se usó una prueba T de student para muestras no apareadas. Para número de pulsos de LH
se utilizó la prueba no paramétrica Kolmogorov-Smirnov.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Comparado con las becerras que fueron alimentadas con forraje como dieta única, las becerras que
adicionalmente recibieron concentrado energético proteínico presentaron un aumento en el peso corporal
y una mayor concentración sanguínea de IGF-I y leptina (Cuadro 1). Respecto del IGF-I, los resultados
del presente estudio coinciden con los de Radcliff et al. (2004) quienes proporcionaron una dieta alta en
energía a becerras prepúberes de carne e incrementaron con ella el IGF-I en sangre. En cuanto a leptina,
estos resultados indican que en becerras de edad madura, la suplementación energética favorece la
producción de dicha hormona, lo cual parece no ocurrir en becerras prepúberes de edad prematura
(García et al., 2003).
No se detectó diferencia estadística significativa (p>0.05) entre grupos experimentales en cuanto a la
concentración basal y el número de pulsos de LH, lo cual puede en parte ser atribuido a la
retroalimentación negativa que ejercen los esteroides ováricos sobre la secreción de GnRH/LH durante la
fase prepuberal; otra posible causa es que el periodo de suplementación no fue el suficiente para inducir
un cambio en el patrón de secreción de LH, como es evidenciado por Gasser et al. (2006) en su estudio
con becerras de carne, las cuales necesitaron 90 días de una dieta alta en energía para incrementar
59
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
significativamente la pulsatilidad de dicha gonadotropina. Durante el estudio tampoco se detectó la
presencia de oleada preovulatoria de LH.
Contrario a lo observado en la secreción de LH, en el presente estudio se observó que el tamaño del
folículo dominante fue mayor en las becerras suplementadas que en las becerras no suplementadas. Las
evidencias indican que el IGF-I en el ovario incrementa la proliferación de las células de la granulosa y
promueve la síntesis de estradiol (Zulu et al., 2002), por lo que un efecto directo de este factor de
crecimiento en el desarrollo folicular ovárico puedes ser una señal de iniciación de la fase peripuberal y
los cambios endocrinos asociados a la misma.
Cuadro 1. Media (± error estándar de la media) de la ganancia diaria de peso, concentración sérica de
leptina e IGF-I, patrón de LH y desarrollo folicular ovárico en becerras prepúberes con o sin
suplementación.
Tratamientos
Variable
P+NS (n=12)
P+S (n=12)
p=
Ganancia diaria de peso, kg
- 0.10 ± 0.22
0.30 ± 0.15
0.0211
Leptina, ng/ml
3.47±0.40
7.41±1.16
0.0396
IGF-I, ng/ml
76.71±6.05
103.3±9.41
0.0264
Concentración basal de LH, ng/ml
0.14±0.003
0.24±0.07
0.2173
Número de pulsos de LH, pulsos/6 horas
0.50±0.13
0.66±0.11
0.2891
Diámetro máximo del folículo dominante, cm
7.56±0.36
9.69±0.34
0.0004
P+NS= Pasto sin suplementación; P+S= Pasto más suplementación.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
La suplementación energética y proteínica por 62 días a becerras prepúberes no mejoró el patrón de
secreción de LH y en cambio incrementó la concentración sanguínea de las hormonas metabólicas, las
cuales a su vez podrías mejorar en parte el desarrollo folicular ovárico para la subsecuente activación del
sistema neuroendocrino de la reproducción. La suplementación energética de largo plazo podrá reducir la
edad a la pubertad al aumentar primeramente el desarrollo folicular ovárico y subsecuentemente la
secreción de gonadotropinas hipofisarias.
LITERATURA CITADA.
Evans ACO, Adams GP, Rawlings NC. 1994. Follicular and hormonal development in prepubertal heifers
from 2 to 36 weeks of age. J. Reprod. Fertil. 102:463–470.
Garcia MR, Amstalden M, Morrison CD, Keisler DH, Williams GL, 2003. Age at puberty, total fat and
conjugated linoleic acid content of carcass, and circulating metabolic hormones in beef heifers fed a diet
high in linoleic acid beginning at four months of age. J. Anim. Sci. 81:261-268.
Gasser CL, Grum DE, Mussard ML, Fluharty FL, Kinder JE, Day ML, 2006. Induction of precocious
puberty in heifers I: Enhanced secretion of luteinizing hormone. J. Anim. Sci. 84:2035–2041.
Radcliff RP, Bandera MJ, Kobayashi Y, Sharma BK, Tucker HA, Lucy MC, 2004. Effect of dietary energy
and somatotropin on components of the somatotropic axis in Holstein heifers. J. Dairy Sci. 87:1229-1235.
Zulu VCh, Nakao T, Sawamuka Y, 2002. Insulin-growth like factor I as a possible hormonal mediator
nutritional regulation of reproduction in cattle. J. Vet. Med. Sci. 64(8): 657-665.
60
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESPUESTA DE HORMONA LUTEINIZANTE A APLICACIONES REPETIDAS DE KISSPEPTINA-10 EN VACAS EN
ANESTRO POSPARTO.
LUTEINIZING HORMONE RESPONSE TO REPEATED APPLICATIONS OF KISSPEPTIN-10 IN
POSTPARTUM ANESTRUS COWS.
Rosete FJV1, Hernández LB2, Santos ER3*, Gómez-Chavarín BM4, Perera MG2, Calderón RRC1, Vera
AHR5, Villagómez AME6, Villa-Godoy A2
1CIR
Golfo Centro-INIFAP; 2FMVZ-UNAM; 3CIR Pacífico Sur-INIFAP; 4IIB-UNAM; 5CENIDFyMA-INIFAP;
6CENID Micro-INIFAP
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La kisspeptina es un sistema hipotalámico que comprende cuatro péptidos (kisspeptina-53, -14, -13 y -10)
que actúan a través del receptor GPR54; este a su vez ha sido identificado en las neuronas productoras
de la hormona liberadora de las gonadotropinas (GnRH) por lo que el sistema en mención es un
importante regulador de la función reproductiva. En becerras prepúberes, la administración intravenosa
(IV) de 5 µg de kisspeptina-10/kg de peso, cada dos horas durante tres días, induce incrementos
consistentes de la hormona luteinizante (LH) y la ovulación/cuerpo lúteo en becerras con altas
concentraciones sanguíneas del factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF-I) y con bajas
concentraciones de leptina (Santos et al., 2014). Por otra parte, en becerras prepúberes la kisspeptina-10
en dosis de 1 µg/kg de peso administrada de manera repetida estimuló la liberación de la LH de una
manera similar a dosis mayores (Santos et al., 2012), y en vacas lecheras ciclando (Whitlock et al., 2011;
Whitlock et al., 2010) o en anestro posparto (Whitlock et al., 2011) la kisspeptina-10 en dosis menores a 1
µg/kg de peso administrada como un bolo intravenoso también estimuló la liberación de la LH. Por tanto,
la hipótesis del presente estudio fue que en vacas de carne, en anestro posparto y con becerro al pie, la
kisspeptina-10 en dosis de 1 µg/kg de peso, administrada de manera repetida, es capaz de estimular
consistentemente la liberación de LH.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El presente estudio se realizó en el Campo Experimental Las Margaritas-INIFAP, localizado en
Hueytamalco, Puebla, con clima subtropical húmedo semicálido Af(c) con temperatura promedio anual de
20.8 °C.Se usaron catorce vacas cruzadas Europeo x Cebú productoras de carne (7.8±3.4 años de edad;
446 ± 40.53 kg de peso, 4.0 ± 1.0 unidades de condición corporal en escala de 1 a 9 puntos), en anestro
posparto (78.14 ± 9.23 días posparto) con becerro al pie. Las vacas fueron estratificadas por genotipo,
edad y peso, y con base en esos criterios fueron asignadas aleatoriamente para recibir un bolo IV de 1
(n= 7) ó 5 (n=7) µg de kisspeptina-10/kg de peso, cada dos horas durante dos días. En el presente
estudio se usó kisspeptina-10 bovina (YNWNSFGLRY-NH2; Proimmune, Oxford, UK) diluida en solución
salina fisiológica (1:125) y administrada a través de un catéter insertado en una de las venas
yugulares.La kisspeptina-10 fue administrada inmediatamente después de colectar la muestra de sangre
correspondiente.
Se colectaron muestras sanguíneas cada 15 minutos, iniciando 2 horas antes y finalizando 6 horas
después de la primera aplicación de kisspeptina-10; adicionalmente, se colectaron muestras sanguíneas
cada dos horas (inmediatamente antes de cada aplicación de kisspeptina-10) hasta finalizado el
tratamiento. De estas muestras se cuantificó la LH mediante radioinmunoanálisis (RIA) en fase líquida. La
cantidad mínima detectable de LH fue 0.03 ng/ml y los coeficientes de variación (CV) intra- e inter-ensayo
fueron 6.73% y 6.57%, respectivamente. El muestreo sanguíneo realizado cada dos horas fue para
identificar una eventual oleada preovulatoria de LH (concentración mayor a la media + 2 DE del
incremento inducido por kisspeptina-10, en dos o más muestras consecutivas) y estimar la duración del
incremento de LH inducido por cada aplicación de kisspeptina-10 (>2 horas= concentración
prekisspeptina-10 mayor a la basal; <2 horas= concentración prekispeptina-10 menor a la basal).
El anestro se determinó mediante la progesterona (P4) sérica de muestras sanguíneas colectadas cada
tercer día desde dos semanas previas al inicio del estudio. El RIA para P4 fue un sistema en fase sólida
61
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
(PROG-CTRIA®, Cisbio Bioassay, Sorgues, France). El anestro fue cuando los valores de P4 fueron < 1
ng/ml. Por otra parte, se determinó mediante RIA la concentración sérica deI IGF-I y de la leptina de una
muestra sanguínea colectada en los días 1, 2 y 3 del tratamiento, siendo el promedio de éstas la
concentración individual de cada vaca. El RIA para IGF-I fue un sistema en fase sólida (IGF-I-RIACT®,
Cisbio Internacional, Francia) y para leptina fue un sistema multiespecies en fase líquida (XL-85K, Linco
ResearchInc, St. Charles, MO, USA).
Se consideró que ocurrió un incremento de LH inducido por kisspeptina-10 cuando la concentración
hormonal después de la administración de kisspeptina-10 superó en dos o más muestras consecutivas al
promedio más dos desviaciones estándar de la concentración hormonal registrada en cada animal de las
-2 a las 0 h de la primera aplicación de kisspeptina-10 (concentración basal). El análisis estadístico fue un
ANDEVA con mediciones repetidas, en cuyo modelo se incluyó la dosis de kisspeptina-10, el periodo de
muestreo y la interacción dosis x periodo. Para conocer diferencias entre grupos experimentales en
cuanto a la concentración sanguínea de IGF-I y leptina se usó una prueba T de Student para muestras no
apareadas.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Ambas dosis de kisspeptina-10 indujeron un aumento consistente en la concentración de la LH (Figura 1A), y la magnitud del incremento de LH en respuesta a cada aplicación de kisspeptina-10 fue similar entre
dosis de tratamiento (p>0.05) y entre aplicaciones (p>0.05), por lo que es posible usar en vacas de carne
en anestro posparto la dosis de 1 en lugar de 5 µg de kisspeptina-10 sin afectar la respuesta hipofisiaria.
Durante el periodo de tratamiento, ninguna vaca presentó oleada preovulatoria de LH y el incremento de
LH inducido por cada aplicación de kisspeptina-10 disminuyó a través del tiempo (Figura 2-B). Durante
las primeras 24 horas de tratamiento (2ª a 12ª aplicación), la concentración de LH fue mayor a la basal;
por el contrario, durante las 24 horas siguientes (13ª a 24ª aplicación), la concentración de LH fue menor
a la basal, lo cual indica que la respuesta de LH al tratamiento de kispeptina-10 fue mayor a dos horas en
el primer día de tratamiento y menor a dos horas en el segundo día. Un patrón similar de respuesta de LH
fue reportado en becerras prepúberes tratadas con kisspeptina-10 (Santos et al., 2014) y en vacas de
carne en anestro posparto tratadas con GnRH (Riley et al., 1981).
1 .5
1 .5
A
B
K is s - 1 0 ( 1 µ g / k g )
L H (n g /m l)
1 .0
0 .5
0 .0
1 .0
0 .5
0 .0
-1
0
1
2
3
4
5
6
-2
-2
T ie m p o (h )
0
2
4
6
8
1
0
1
2
1
4
1
6
1
8
2
0
2
2
2
4
2
6
2
8
3
0
3
2
3
4
3
6
3
8
4
0
4
2
4
4
4
6
4
8
L H (n g /m l)
K is s - 1 0 ( 1 µ g / k g )
K is s - 1 0 ( 5 µ g / k g )
K is s - 1 0 ( 5 µ g / k g )
T ie m p o (h )
Figura 1. Respuesta de la LH a 1 ó 5 µg de kisspeptina-10 (Kiss-10)/kg de peso en vacas de carne en
anestro posparto con becerro al pie. En A, el muestreo sanguíneo fue cada 15 minutos; en B, el muestreo
sanguíneo fue cada 2 horas (inmediatamente antes de cada aplicación de kisspeptina-10). Flechas=
aplicación de kisspeptina-10; Línea punteada= concentración basal (promedio -2 a 0 horas).
Por otra parte, durante el estudios, la concentración sanguínea de IGF-I y de leptina fueron similares
(p>0.05) entre grupos experimentales (Figura 2); sin embargo, comparado con los niveles hormonales
medios de IGF-I (167±23ng/ml) de becerras prepúberes que ganaron 0.79±0.12 kg/día en un estudio
previo de Santos et al. (2014), los relativamente bajos niveles de esta hormona en las vacas del presente
estudio corresponden a animales con un estado nutricional deficiente y por tanto en un estado de
62
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
anestro. Lo anterior se evidencia además por una condición corporal de las vacas menor a las valores
recomendados para esta etapa fisiológica.
60
K is s - 1 0 ( 1 µ g / k g )
8
K is s - 1 0 ( 5 µ g / k g )
6
Figura 2. Concentración sanguínea de IGF-I y
leptina de vacas de carne en anestro posparto
con becerro al pie que fueron tratadas con 1 ó 5
µg de kisspeptina-10(Kiss-10)/kg de peso (n=
7/dosis).
4
n g /m l
n g /m l
40
20
2
0
0
IG F -I
L e p t in a
En el presente estudio no se dio seguimiento a la actividad ovárica postratamiento, sin embargo con base
en estudios desarrollados con becerras prepúberes en las que 2 de 7 mostraron actividad lútea en
respuesta a un tratamiento similar de kisspeptina-10 (Santos et al., 2014) y con vacas de carne en
anestro posparto en las que 4 de 5 mostraron actividad lútea en respuesta a un tratamiento similar pero
con GnRH (Riley et al., 1981), se pone en evidencia una estrecha asociación entre el grado de desarrollo
corporal y la proporción de hembras que manifiestan función lútea en respuesta a un tratamiento
intermitente de kisspeptina-10 o GnRH.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Al igual que en las becerras prepúberes y en las vacas lecheras, las vacas de carne en anestro posparto
sujetas a amamantamiento continuo son sensibles a 1 µg de kisspeptina-10/kg de peso, al menos en lo
que a la LH se refiere. Por tanto, con esta dosis de kisspeptina-10, simulando pulsos endógenos cada
dos horas durante dos días, es posible inducir la ovulación y la formación de cuerpo lúteo en vacas de
carne en anestro posparto, aún con un estado metabólico deficiente.
LITERATURA CITADA.
Santos ER, Calderón RRC, Vera, AVR, Perera-Marín G, Arreguín AJA, et al, 2014. Hormona luteinizante
y actividad ovárica en respuesta a kisspeptina-10 y su asociación con IGF-1 y leptina en becerras prepúberes. Rev. Mex. Ciencias Pecu. 5(2):181-200.
Santos ER, Calderón RRC, Rosete FVJ, Perera MG, Murcia MC, et al, 2012 Evaluación de la sensibilidad
del eje gonadotrópico a dosis bajas de kisspeptina (kiss-10) en becerras prepúberes. XLVIII RNIP
Querétaro 2012. Pp 125.
Ryley GM, Peters AR, Lamming GE, 1981. Induction of pulsatile LH release and ovulation in post-partum
acyclic beef cows by repeated small doses of Gn-RH. J. Reprod. Fert. 63:559-565.
Whitlock BK, Daniel JA, Wilborn RR, Maxwell HS, Steel BP, Sartin JL, 2011. Effect of kisspeptin on
regulation of growth hormone and luteinizing hormone in lactating dairy cows. J. Anim. Sci. Biotech.
2(3):131-140.
Whitlock BK, Daniel, JA, Wilborn RR, Maxwell HS, Steele BP, Sartin JL, 2010. Interaction of kisspeptin
and the somatotropic axis. Neuroendocrinology 92:178-88.
63
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DESEMPEÑO REPRODUCTIVO DE VACAS HOLSTEIN Y SUIZO PARDO AMERICANO Y SUS
CRUZAS F1 EN CLIMA SUBTROPICAL HÚMEDO.
REPRODUCTIVE PERFORMANCE OF HOLSTEIN AND BROWN SWISS COWS AND THEIR F1
CROSSES IN HUMID SUBTROPICAL CLIMATE.
Hernández LC1, Calderón RRC2*, Ríos UA2, Durán ME1
1UABJO-EMVZ; 2INIFAP-CIRGOC.
calderó[email protected],
INTRODUCCIÓN.
La producción láctea en el trópico mexicano se lleva a cabo generalmente con vacas cruzadas con genes
Cebú, pero es insuficiente para satisfacer su propia demanda interna. Ante esta necesidad, una de las
opciones ha sido la importación de razas mejoradas para su utilización en cruzamiento con animales
nativos (Cebú o Criollo), o bien, para ser usadas como razas puras en sistemas especializados. Sin
embargo, esta última alternativa no siempre ha resultado exitosa (Teyer et al., 2003), ya que un animal de
raza pura necesita mayores cuidados. La mayor parte de los sistemas tropicales de producción de leche
se caracterizan por la baja eficiencia productiva y reproductiva de los animales, lo cual no solo es
resultado de los efectos directos del clima sobre los mismos, sino también por la pobre calidad del forraje,
consumo limitado de concentrado y la elevada incidencia de enfermedades y parasitosis (Rodríguez et
al., 2007).
Las estrategias de mejoramiento genético más utilizadas son la selección y el cruzamiento, siendo esta
última la que permite lograr resultados más rápidos cuando se quiere mejorar características de baja
heredabilidad, como las reproductivas. El cruzamiento involucra dos o más grupos genéticos buscando
una alternativa de mejora para las características de importancia económica, mediante la heterosis
(Echeverri et al., 2011); también es una alternativa para mejorar la salud, la fertilidad y la supervivencia
(Vallone et al., 2014), logrando con esto mejorar la rentabilidad y sustentabilidad (Buckley et al., 2014).
Entre las razas lecheras, la Suizo Pardo Americano (SP) puede ofrecer ventajas comparativas en
producción láctea, sobre todo en ecosistemas adversos para la Holstein (HO), debido a su mayor
adaptación a temperaturas extremas, su mejor adaptación al pastoreo, mayor sanidad de la ubre y
longevidad (Vallone et al., 2014). Por ello, el cruzamiento es una alternativa para aumentar la producción
de leche y mejorar los parámetros reproductivos en zonas tropicales, aprovechando el potencial genético
tanto de razas puras como de sus cruzas.
OBJETIVO.
Evaluar el desempeño reproductivo de vacas de las razas HO, SP y sus cruzas F1 ½ HO x ½ SP (F1HO)
y ½ SP x ½ HO (F1SP) mantenidas en un sistema de pastoreo rotacional intensivo, en clima subtropical
húmedo.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El trabajo se realizó con información generada en la unidad de producción de lechería tropical
especializada Santa Elena del Sitio Experimental “Las Margaritas”, localizado en la Sierra Nororiente de
Puebla, en el municipio de Hueytamalco, a los 19° 20’ de latitud Norte y 97° 20’ de longitud Oeste y a 500
msnm. El clima es Af(c) con una temperatura media anual de 21°C, con una mínima de 6°C en invierno y
una máxima de 31°C en verano; la humedad relativa es del 90% y la precipitación pluvial de 3000 mm al
año.
El manejo general del sistema de producción ha sido descrito por Hernández (2015). Reproductivamente,
las becerras iniciaron el manejo reproductivo a los 350 kg de peso vivo. Las vacas se separaron de sus
crías al tercer día posparto, posteriormente se manejaron en tres lotes: 1) del parto al quinto mes de
64
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
lactancia, 2) del quinto mes de lactancia al secado y 3) secas. En el primer lote se detectaron estros dos
veces al día y se dio oportunidad a tres servicios de inseminación artificial y dos de monta natural; en
caso de requerir más servicios, las vacas fueron desechadas.
Las características reproductivas se analizaron con el procedimiento MIXED del paquete estadístico SAS.
El modelo estadístico para analizar la edad a primer parto (EPP) y peso a primer parto (PPP) incluyó los
efectos fijos de grupo racial (GRZ: HO, SP, F1HO y F1SP), año de parto (AP; 2000 a 2013) y época de
parto (EP; fría, seca, lluviosa). La época fría comprendió los meses de noviembre a febrero, la época
seca de marzo a junio y la época lluviosa de julio a octubre. Para días a primer estro (DPE), días a primer
servicio (DPS), servicios por concepción (SPC), días abiertos (DA) e intervalo entre partos (IEP) el
modelo estadístico incluyó GRZ, AP, EP y número de parto (NP; 1, 2 y 3 ó más). Además, todos los
modelos utilizados incluyeron el efecto aleatorio de semental anidado dentro de GRZ.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
El genotipo de la vaca afectó la EPP (P<0.05) y los SPC (P<0.01. AP afectó (P<0.01) a todas las
variables estudiadas. La EP afectó (P<0.05) los SPC, el IEP y los DA (P<0.01). NP afectó las variables
DPE, DPS (P<0.01) y DA (P<0.05).
En el Cuadro 1 se muestran las medias de cuadrados mínimos y sus errores estándar, por GRZ, para las
variables estudiadas: EPP, PPP, DPE, DPS, SPC, DA e IEP. Esto es similar a lo reportado en otros
estudios, donde encontraron diferencia significativa (P<0.05) del grupo genético sobre EPP y SPC, con
vacas HO, SP y sus cruzas en clima templado. Por el contrario, Rodríguez et al. (2007), con ganado
cruzado (½ HO x ½ Cebú, ¾ HO x ¼ Cebú y 5/8 HO x 3/8 Cebú), no encontraron influencia (P>0.05) del
GRZ sobre algunas características reproductivas. Sin embargo, otros estudios con ganado Criollo
Lechero, Jersey, F1 recíprocos y ¾ Criollo x ¼ Jersey, ¾ Jersey x ¼ Criollo, en clima tropical húmedo, el
grupo genético también influyó en la expresión de la EPP (P<0.01).
Cuadro 1. Medias de
grupo racial.
GRZc EPPd
(meses)
HO
32.7± 0.8a
SP
36.3 ± 0.9b
F1HO 32.3 ± 1.7a
F1SP
32.8± 1.5ab
a,bLiterales
cuadrados mínimos y sus errores estándar para características reproductivas por
PPP (kg)
DPE
DPS
SPC
DA
IEP (días)
457 ± 5.4a
437 ± 6.1a
458 ± 12.9a
444 ± 10.5a
155 ± 8.8a
155 ± 8.9a
166 ± 14.8a
137 ± 14.8a
156 ± 8.7a
157 ± 8.8a
166 ± 14.7a
138 ± 14.7a
2.2 ± 0.1b
1.7 ± 0.1a
1.9 ± 0.1ab
1.8 ± 0.1a
203 ± 9.1a
195 ± 8.8a
194 ± 4.6a
168 ± 14.0a
478 ± 8.3a
460 ± 8.0a
471 ± 12.7a
455 ± 11.6a
distintas dentro de columna indican diferencia estadística (P<0.05).
cGRZ=Grupo
racial, HO=Holstein, SP= Suizo Pardo, F1HO= ½ HO x ½ SP, F1SP= ½ SP x ½ HO.
dEPP=Edad
a primer parto, PPP= Peso a primer parto, DPE= Días a primer estro postparto, DPS= Días a
primer servicio postparto, SPC=servicios por concepción, DA=Días abiertos, IEP=Intervalo entre partos.
Los resultados obtenidos en este trabajo señalan que todos los grupos raciales estuvieron lejos del valor
óptimo al primer parto para ganado lechero, que es de 23 a 25 meses. Sin embargo, hay que tomar en
cuenta que el presente estudio se llevó a cabo en un ambiente tropical, donde los valores promedio son
más elevados.
En cuanto a SPC, las vacas con mejor comportamiento fueron las SP, siendo diferentes (P<0.01) a las
HO, quienes tuvieron el comportamiento más pobre y que también fueron diferentes (P<0.01) a las F 1SP,
pero similares a F1HO; entre estas últimas y las SP no hubo diferencia (P>0.05). Los SPC en ganado
lechero, menores a 1.7 son adecuados, pero mayores a 2.5 indican problemas en el hato. Para los DPE y
DPS los valores fueron muy altos comparados con lo reportado por otros autores. Las diferencias tan
marcadas del presente trabajo pueden ser atribuidas por diferencia en el manejo del ganado,
alimentación y la variación ambiental con el paso de los años.
65
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
El AP influyó (P<0.01) en todas las variables reproductivas evaluadas en el presente estudio. Como es
sabido, el efecto del año es un factor difícil de explicar debido a que incluye la variación de componentes
ambientales que varían de un año a otro.
La EP solo afectó SPC y el IEP (P<0.05) y los DA (P<0.01). El valor más alto de SPC se observó en la
época seca (2.1 ± 0.1), siendo diferente (P<0.01) en comparación con el de la época fría (1.8 ± 0.1) y el
de la época lluviosa (1.7 ± 0.1; P<0.05), sin mostrar diferencia (P>0.05) entre los valores de la época fría
y la lluviosa.
Los DA e IEP fueron mayores en la época seca con 205 ± 8.9 y 483±8.6 días, respectivamente, en
comparación con los de la época lluviosa (174 ± 8.5 y 450 ± 8.1 días), mientras que las épocas fría (191 ±
8.9 y 465 ± 8.4 días) y lluviosa no mostraron diferencia estadística.
El NP afectó (P<0.01) DPE, DPS y (P<0.05) DA. En las variables DPE y DPS el valor más elevado fue en
el primer parto con 171 ± 8.7 y 173 ± 8.6 días, respectivamente, siendo mayores (P<0.01) a los de los
siguientes partos, sin haber diferencia (P>0.05) entre el segundo y el tercero. El mejor valor fue obtenido
en vacas de tres partos o más (142 ± 7.0 días). El valor de las características reproductivas disminuyó
conforme aumentaba el NP, excepto en SPC e IEP. Para DA se presentó la misma tendencia, donde el
menor número de DA fue en vacas de tercer parto (178 ± 7.5 días), siendo diferente (P<0.01) a las de
primer parto. Los valores más altos de DA fueron en vacas de primer parto con 206 ± 9.4 días. Similar a
lo encontrado en otros estudios, en que observaron diferencias significativas (P<0.01) en DPS, DA e IEP;
y generalmente favorables para vacas de más de un parto. Lo anterior puede ser atribuido al hecho de
que las vacas primíparas aún están en crecimiento, cuyas necesidades nutricionales son mayores que en
animales adultos.
CONCLUSIONES.
Las vacas F1SP y F1HO tuvieron un desempeño reproductivo similar al de las vacas puras HO y SP bajo
condiciones de subtrópico húmedo. Las vacas SP y las F 1SP necesitan menos SPC que las HO y F1HO.
Los GRZ HO y F1HO tuvieron una EPP menor que las SP. La mejor EP fue la lluviosa, mientras que la
época desfavorable fue la seca. El AP afectó a todas las variables estudiadas. Con respecto al NP, el
desempeño reproductivo mejoró después del primer parto.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Buckley, F., N. López-Villalobos, y B.J. Heins. 2014. Crossbreeding: implications for dairy cow fertility and
survival. The Animal Consortium. Animal, 8:s1, 122-133.
Echeverri, Z.J., R.V. Salazar, y S.J. Parra. 2011. Análisis comparativo de los grupos genéticos Holstein,
Jersey y algunos de sus cruces en un hato lechero del Norte de Antioquia en Colombia. Zootecnia
Tropical 29(1): 49-59.
Hernández L.C. 2015. Desempeño reproductivo de vacas lecheras Holstein, Suizo Pardo Americano y
sus cruzas F1 en clima subtropical húmedo. Tesis de Licenciatura. Universidad Autónoma Benito Juárez
de Oaxaca, Escuela de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Oaxaca, Oax. 93 p.
Rodríguez, A.R., M.B. Mejía, B.H. Camberos, R. Ochoa, F. Ruvuna, y A.A. Schunemann. 2007.
Producción de leche de los diferentes cruzamientos con Holstein en el CEIEGT FMVZ UNAM de Martínez
de la Torre, Veracruz. 1-6.
Teyer, B.R., J.G. Magaña, J. Santos, y C. Aguilar. 2003. Comportamiento productivo y reproductivo de
vacas de tres grupos genéticos en un hato de doble propósito en el sureste de México. Revista Cubana
de Ciencia Agrícola. 4 (37): 363-370.
Vallone, R., E. Camiletti, M. Exner, W. Mancuso, P. Marini. 2014. Análisis productivo y reproductivo de
vacas lecheras Holstein, Pardo Suizo y sus cruzas en un sistema a pastoreo. Producción lechera. Rev.
vet. 25 (1): 40-44.
66
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CRIO-PRESERVACIÓN DE ESPERMATOZOIDES EN OVINOS POST MORTEM EXTRAÍDOS A
TRAVÉS DE DOS MÉTODOS: LAVADO CAUDAL Y EL CORTE SAGITAL DE LA COLA DEL
EPIDÍDIMO.
CRYO-PRESERVATION OF SPERMS OBTAINED BY TWO EXTRACTION METHODS: CAUDAL
WASHING AND SAGITTAL CUTTING OF THE TAIL OF EPIDIDYMIS IN SHEEP SACRIFICED IN
SLAUGHTERHOUSE.
Rosas SJI.* Osorio-Avalos AJ.
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autónoma del Estado de México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La congelación de espermatozoides ovinos para su uso en inseminación artificial (I.A) es una tecnología
que ha logrado grandes progresos en el campo de la reproducción y en el mejoramiento genético
poblacional (Salamon y Maxwell, 2000). La recolección de semen en carneros se ha realizado por
métodos convencionales, como el uso de la vagina artificial y electro-eyaculación, permitiendo establecer
bancos de germoplasma provenientes de machos reproductores seleccionados de alto valor genético
(Barrios, 2002). El epidídimo tiene fundamentalmente dos funciones: almacenamiento y maduración
espermática. La maduración o desarrollo progresivo de la capacidad fertilizante ocurren en la cabeza y
cuerpo del epidídimo, y así como del almacén de los espermatozoides maduros en la cola del epidídimo
(Dyce et al., 2007). Con esta consideración, es importante señalar que se podrían obtener
espermatozoides viables provenientes de la cola del epidídimo que tengan motilidad y con la misma
capacidad fecundante que las que proceden del eyaculado (Robaire y Hermo, 1998; Soler et et al., 2003),
dando posibilidad poco tiempo después de la muerte del animal a ser congelados para su posterior uso
en la I.A (Barrios, 2002), suponiendo una gran ventaja desde un punto de vista conservacionista del
material genético y productivo. En la actualidad, no se ha reportado el nacimiento de corderos originados
de espermatozoides frescos o congelados recolectados de la cola del epidídimo de machos ovinos. El
objetivo de este estudio es establecer protocolos viables para la obtención, procesado y preservación de
espermatozoides a través de su crio-preservación en ovinos post mortem, comparando dos
procedimientos: lavado caudal y el corte sagital de la cola del epidídimo, abriendo la posibilidad a los
criadores de ovinos a una alternativa de crio-preservación de germoplasma en escenarios con eventos de
muerte súbita de reproductores de alto valor genético.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Se utilizaron 28 muestras de testículos de machos ovinos de 1 a 3 años de edad y una condición corporal
promedio de 3.5 (de acuerdo a Manazza, 2006), divididos en dos grupos de 14 c/u de forma aleatoria (un
par de epidídimos para los dos métodos), obtenidos del rastro Municipal de Capulhuac, Estado de
México, entre los meses de agosto de 2014 a febrero de 2015. Las muestras en bolsas estériles e
introducidos a una hielera (refrigeración a 5ºC), fueron transportadas con destino a un laboratorio de la
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, de la UAEM. Para el método del lavado caudal de la cola
del epidídimo se descubrió el conducto deferente del paquete espermático, insertando en la luz una aguja
de calibre 23, la cual fue fijada con pinzas de hemostasis. Con una jeringa de 50 ml previamente cargada
con aire fue insertada a la aguja. Se realizó una incisión con bisturí (1 cm) en la cola del epidídimo en la
parte más proximal al testículo colocándolo dentro de la caja de Petri con 1 ml de diluyente base a una
temperatura de 4ºC (Triladyl-agua tridestilada-yema de huevo). Se ejerció presión de la jeringa
provocando el flujo retrógrado del material espermático, favoreciendo su depósito en la caja de Petri. Por
corte sagital, los epidídimos fueron separados de los testículos con ayuda de pinzas de hemostasis y
unas tijeras curvas. Se realizaron cortes de manera sagital en la cola del epidídimo (2.0 cm), seguidos de
cortes transversos (2.0 cm), y usando una pipeta Pasteur fueron lavados con el diluyente recuperando los
espermatozoides dentro de la caja de Petri. En ambos métodos, se obtuvieron dos muestras de material
espermático sin diluir para evaluar la motilidad en masa (Aisen y Venturino, 2004), la motilidad individual,
concentración espermática (usando la cámara de Neubauer) y % de espermatozoides vivos (tinción
eosina-nigrosina). Evaluada la muestra, en un tubo colector el diluyente fue mezclado con la suspensión
espermática en un solo paso e introducido a un frasco hermético (con algodón comprimido para evitar el
choque térmico), fue puesto a refrigeración (5°C). Pasadas dos horas, se envasaron y sellaron en pajillas
67
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
de 0.25ml., siendo introducidas en un vaso de precipitado para su estabilización (20 minutos). Una vez
secadas, fueron colocadas en un recipiente con nitrógeno líquido, exponiéndose a baños de nitrógeno
por 20 minutos, alcanzando -96ºC. Posterior a ello, fueron sumergidas las pajillas al nitrógeno líquido,
alcanzando la temperatura de congelación (-196°C). Para la descongelación, se utilizó un baño María a
una temperatura de 50°C. La pajilla fue sumergida durante 50 segundos, que una vez secada y cortando
el extremo del sellado, se colocó una muestra en el portaobjetos a una temperatura de 30 a 32ºC,
realizando la evaluación de rutina mencionada anteriormente previa congelación. Se realizó un análisis
estadístico descriptivo del total de las muestras. Se realizó el comparativo de ambos los protocolos (corte
sagital vs lavado caudal del epidídimo), utilizando un análisis de comparación de medias bajo un modelo
de efectos fijos (edad, condición corporal y método de procesamiento) para las variables macro y
microscópicas (volumen, motilidad en masa y progresiva, % de espermatozoides vivos y muertos,
concentración espermática, y a la descongelación las variables motilidad en masa y % de
espermatozoides vivos y muertos, que fueron estimados con el uso del programa estadístico JMP from
SAS (versión 8.0, 2008).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
De todas las muestras obtenidas, los valores promedio de las variables medidas fueron para la
concentración espermática de 2,836.15 x106± 2,799.26 x106. El volumen obtenido fue de 0.59 ± 0.3 ml
(máximo 1.5 ml y mínimo de 0.2 ml). Un estudio realizado en España (Peña, 2013) con ciervos ibéricos,
indicó que el volumen fue 1.30 ml ±0.3. En la alpaca (Banda et al., 2010), encontraron un promedio de
1ml por muestra; mientras que Muñoz (2008) en la especie “Pudu pudu” obtuvieron valores muy similares
0.77±0.32 ml promedio, resultados semejantes al encontrado en ovinos en este estudio. La motilidad en
masa fue de 3.05 ± 0.62 ml, en tanto que Muñoz (2008) en espermatozoides obtenidos de la especie
Pudu pudu, registraron una motilidad en masa de 3.2. En el ciervo ibérico (Garde et al., 1998) se
encontró valores entre 2.4 a 3.8. También Soler (2003) en esta especie observó 2.8 en movimiento en
masa. Respecto a la motilidad progresiva se encontraron espermatozoides activos con el diluyente con
valores promedio de 70.9% ± 17.4, como también fue observado en el ciervo ibérico (69%) por Peña
(2013). Los espermatozoides vivos encontrados fue de 73.2% ± 18.4, resultado semejante al encontrado
por Ribeiro-Peres (2014) en machos bovinos (69.4%). Asimismo, nuestros resultados se encuentra por
debajo de lo encontrado por De León (2008) en la especie venado cola blanca, que fue obtenido
mediante corte y lavado del epidídimo (85.9%). Asimismo, se encontró que al descongelamiento
disminuyó la motilidad en masa un 4%, y 8.8% de espermatozoides vivos. Parece indicar que la
metodología seguida en el proceso de congelación – descongelación podría ser adecuada en el uso del
diluyente con crio-protector y el tiempo de refrigeración, congelación y descongelación adaptadas a las
muestras en epidídimos de ovinos, como ha sido ajustado en diferentes especies (Mazur 1994; Parks y
Graham, 1992; Salamon y Maxwell, 1995; Waltson, 1995; Waltson, 2000). La comparación de los
métodos de recolección de espermatozoides en epidídimos (corte sagital vs lavado caudal del epidídimo)
no se encontraron diferencias estadísticas significativas para todas las variables analizadas (volumen,
motilidad en masa y progresiva, espermatozoides vivos), tanto para la evaluación previa y posterior a la
descongelación (P>0.05). Existe cierta ventaja en el manejo de las muestras recuperadas con la técnica
del lavado caudal de la cola del epidídimo vs la técnica de corte sagital, debido a que ésta última llega a
contaminarse la muestra de eritrocitos y partículas pequeñas de tejido del epidídimo (parénquima).
CONCLUSIONES.
La recolección de espermatozoides en epidídimos por lavado caudal y corte sagital del epidídimo son
métodos viables y efectivos para ser considerados dentro de las técnicas de biotecnología reproductiva
asistida. Los espermatozoides procedentes del epidídimo de ovinos presentan una buena resistencia a la
crio-preservación, observándose una pérdida de calidad en la motilidad de los espermatozoides en la
evaluación posterior al proceso de descongelación.
AGRADECIMIENTOS.
A las autoridades del rastro Municipal de Capulhuac, Estado de México por las facilidades para el manejo
de las muestras y al personal técnico de laboratorio de la FMVZ-UAEM.
68
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
LA GHRELINA MODIFICA LA CORRIENTE IÓNICA DE CALCIO EN CÉLULAS PRODUCTORAS DE
INSULINA (RIN-M5F).
GHRELIN MODIFY THE CALCIUM IONIC CURRENT IN INSULIN-PRODUCING CELLS (RIN-M5F).
Zamora-Pardo AD*, Barrientos-Morales M, Cervantes AP, Hernández BA, Domínguez MB.
Laboratorio de Biología Celular de la Unidad de Diagnóstico, Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia; Universidad Veracruzana.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La glucosa, fuente primordial de energía en las células animales es regulada por un estricto control
endocrino que ejerce la insulina; la cual es sintetizada por las células beta-pancreáticas localizadas en los
islotes de Langerhans del páncreas, cumple con la función de regular los niveles de glucosa en sangre;
actúa sobre hepatocitos, adipocitos y células del músculo estriado para favorecer su captación. Las
células productoras de insulina al igual que otras células endócrinas son eléctricamente excitables
similares a las nerviosas y musculares; es decir, son capaces de generar potenciales de acción (PA)
incluso de manera espontánea o como respuesta a un estímulo; Un PA, es la variación regenerativa del
voltaje de membrana, esta actividad eléctrica es orquestada por la apertura secuencial de diferentes
poblaciones de proteínas embebidas en la membrana plasmática denominadas como canales iónicos
(CI).El PA en las células endócrinas se correlaciona de forma positiva con la actividad secretora; es decir,
cada vez que se genera un PA se promueve la entrada de iones de calcio (Ca 2+) lo que induce un
incremento en la concentración de calcio libre intracelular ([Ca 2+]i), señal necesaria para promover la
síntesis y secreción de proteínas (hormonas). Señales metabólicas (péptidos-hormonas) que modifiquen
la expresión funcional de los CI en las células endocrinas modificaran el patrón de secreción (Hamill,
1981).
En los últimos años, las alteraciones del metabolismo han aumentado, desencadenando diversos
trastornos metabólicos. Una de las señales endocrinas del organismo involucradas en el control de la
ingesta de alimento (consumo voluntario) y en el peso corporal es la Ghrelina, la cual Induce un aumento
en la actividad secretora de las neuronas hipotalámicas productoras del neuropéptido Y (NPY) y de la
proteína relacionada con el gen agoutí (AgrP) ,los cuales estimulan la ingesta de alimento y la ganancia
de peso corporal en distintas especies de mamíferos (Nakazato et al., 2002; Dezaki et al., 2007) además
de estimular la secreción de la hormona del crecimiento en la hipófisis por los somatotropos; su secreción
se ve estimulada en condiciones de un balance energético negativo, como el ayuno, la caquexia y la
anorexia nerviosa, mientras que su liberación y síntesis disminuye en condiciones de balance energético
positivo, como la adecuada alimentación, la hiperglicemia y la obesidad. La relación entre la Ghrelina y
las células beta-pancreáticas presenta muchas controversias, ciertos estudios revelan la existencia de
células del páncreas llamadas épsilon que constituyen menos de 1% de las células en los Islotes y son
productoras de Ghrelina, en la actualidad se debate si la Ghrelina estimula o inhibe la secreción de
insulina en las células beta-pancreáticas (Nakazato et al., 2002; Dezaki et al., 2007). Sin embargo,
algunos estudios reportan que esta hormona es capaz de promover la secreción de insulina en células
beta-pancreáticas como las de la línea HIT-T15 (células beta-pancreáticas provenientes de hámster
dorado sirio); por otro lado, se ha demostrado que la Ghrelina suprime la liberación de insulina inducida
por glucosa; esta acción es mediada por una proteína del tipo G (Gα i2) de unión a GTP y el bloqueo de
canales de potasio (KV).
La Ghrelina que se produce en los islotes pancreáticos restringe la liberación de insulina aumentando el
nivel de glucosa en sangre. Por otra parte, el bloqueo o la eliminación de Ghrelina aumenta la liberación
de insulina lo que proporciona una nueva estrategia para el tratamiento de la hiperglicemia (Yada et al.,
2014; Dezaki et al., 2007). La Ghrelina suprime la secreción de insulina inducida por glucosa de los
islotes pancreáticos en una manera dependiente de AMPc. Por otra parte, disminuye los niveles de cAMP
en islotes y células beta-pancreáticas y la disminución de cAMP medía la [Ca 2+]i y los cambios eléctricos
en el voltaje de membrana en respuesta a Ghrelina. En células beta-pancreáticas, los canales de KV
repolarizan y atenúan los potenciales de acción estimulados por la glucosa, limitando la entrada de Ca 2+ a
69
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
través de los canales de Ca2+ dependientes de voltaje y por ende suprime la secreción de insulina. (Yada
et al., 2014; Dezaki et al., 2007),es por lo que es posible suponer que la Ghrelina este activando vías de
señalización encaminadas a la expresión de genes específicos que codifican para canales iónicos, como
por ejemplo los de calcio involucrados en la secreción hormonal.
OBJETIVO.
Analizar el efecto del tratamiento crónico (72hrs) con Ghrelina (10nM) sobre las corrientes iónicas de
calcio que fluyen por la membrana celular de células beta-pancreáticas productoras de insulina (RINM5f).
MATERIALES Y MÉTODOS.
Para determinar el efecto que ejerce la Ghrelina sobre la actividad eléctrica de las células betapancreáticas se utilizan las células RIN-M5f (insulinoma de páncreas) como modelo biológico,
provenientes de rata (Rattus norvegicus) las cuales son mantenidas en cultivo estándar con medio RPMI1640, suero fetal bovino (10%), L-glutamina (2%) y 1% de antibiótico (penicilina-estreptomicina). Las
células son sometidas a registro electrofisiológico (pCLAMP v10.1 de Axon Instruments) mediante la
técnica Patch-Clamp en su configuración de célula completa bajo la modalidad de fijación de voltaje; para
registrar la corriente de Calcio, usando Bario como acarreador de carga la soluciones de registro fueron
las siguientes: Sol. Externa (mM): 133 NaCl, 10 TEA, 10 BaCl2, 0.001 TTX, 10 Hepes, 5 glucosa, (pH
7.30 ajustado con NaOH). Sol. Interna (mM): 100 CsCl, 30 NaCl, 10 EGTA, 1 CaCl2, 2 MgCl2, 2 ATP,
0.05 GTP, 10 Hepes y 5 glucosa (pH 7.30 ajustado con CsOH) (Kwiecien et al., 1998). Se utiliza el
programa STATISTICA v 10.0 para Windows (StatSoft, Inc. 2010), usando ANDEVA de una vía. Las
comparaciones múltiples son usadas para evaluar la diferencia entre grupos dentro del mismo
experimento por la prueba de Tukey con un nivel de significancia P< 0.05.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
La mayoría de los canales dependientes de voltaje contienen sensores, que son hélices o segmentos
cargados transmembrana, que detectan el campo eléctrico en la membrana y conducen los cambios de
conformación que accionan la apertura y cierre de las puertas cerca de la boca del poro (Stojilkovic et al.,
2010). Existen tres poblaciones principales que condicen iones, los de Na +, los de Ca2+ y los de K+; las 2
principales funciones de los canales de Ca2+ en las células son la electrogénica y la regulatoria. La
principal función de los canales de Ca2+ de bajo umbral de activación es electrogénica, ya que durante el
potencial de reposo, estos canales despolarizan las células hasta un nivel de umbral para activar los
canales de Na+ y Ca²+ de alto umbral de activación; estos canales no se inactivan completamente
ayudando a mantener la célula despolarizada por un periodo prolongado, ya que durante el PA, se
incrementa la [Ca²+]i, suficiente para desencadenar los procesos dependientes de Ca²+.
Las células RINM5F presentan dos tipos de corrientes iónicas de calcio, una de bajo umbral de activación
la cual se observa en voltajes más negativos que -40mv, e inactiva en los primeros 50 ms, la segunda
corriente de calcio empieza a ser observada a partir de -20 mv y alcanza su amplitud en la vecindad de 0
mv, bajo condiciones control.
El tratamiento crónico (72 hrs) con Ghrelina (10 nM) mostro un aumento en la corriente de total de Ca 2+
(212.92 ± 19.7 vs 361 ± 51.7 pico Amperios, pA) control vs Ghrelina respectivamente. Para determinar si
este efecto fue a través de la activación del receptor a Ghrelina (GHS-R) se usó un antagonista del
mismo receptor, el Dlys-3 GHRP-6 a una concentración de 10 M, dicho tratamiento no mostro
incremento significativo con respecto al valor control. Con la finalidad de determinar si este efecto
estimulatorio es a través de la activación de mecanismos genéticos, los cuales ocupan tiempo para que
se lleve a cabo la expresión de algún gen específico que codifica para el canal de calcio, dichas células
fueron expuestas al péptido Ghrelina por 0, 24, 48 y 72 hrs, los resultados muestran que se necesita por
lo menos 48 hrs para que se aprecie un incremento significativo en la totalidad de la corriente [212.92 ±
19.7 (0), 246.22 ± 42.9 (24), 304.79 ± 37.16 (48) y 326 ± 35.80 (72) en pico Amperios]. A medida que
70
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
aumenta el tiempo de exposición se incrementa el flujo de la corriente iónica (pA), una de las maneras
para conocer si el incremento en la corriente iónica obedecía a un aumento en el número de canales
iónicos presentes en la membrana o si las vesículas listas para ser liberadas incrementaban el tamaño
celular, se propuso determinó el tamaño eléctrico de la célula al evocar el componente capacitivo; se
integra el área bajo la curva y se divide entre el voltaje y así se obtiene el tamaño de la célula en pico
faradios (17  1.1 pF) y dividir este tamaño eléctrico entre la corriente total, da como resultado la
densidad de la corriente, que es una medida del flujo de iones por unidad de membrana. Los resultados
sugieren que Ghrelina incrementa la densidad de corriente iónica de calcio en la célula RIN-M5f (13.18 ±
1.35 vs 19.38 ± 2.78) (p<0.05).
CONCLUSIONES.
Ghrelina incrementa la corriente iónica de Ca2+ en células Beta-pancreáticas RIN-M5f.
Ghrelina aumenta la densidad de corriente iónica de calcio en las células RIN-M5f, como respuesta a un
incremento en el número de canales iónicos presentes en la membrana plasmática
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Hamill OP, Marty A, Neher E, Sakmann B, and Sigworth FJ. 1981, Improved patch-clamp techniques for
high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches. Pflugers Archives. 391(2):
85-100.
Kwiecien R, Robert C, Cannon R, Vigues S, Arnoux A, Kordon C, and Hammond C. 1998. Endogenous
pacemaker activity of rat tumour somatotrophs J. Physiol; 508: 883 - 905.
Stojilkovic S., Krsmanovic L., Spergel D., Catt K. 1994. Gonadotropin- releasing hormone neurons:
intrinsic pulsatility and receptor-mediated regulation. Endocrinology Metab. 5:201-209.
Nakazato, Hashiguchi S, Dezaki K, Mondal MS, Hosoda H, et al. 2002. La Ghrelina está presente en
células alpha pancreáticas de seres humanos y ratas y estimula la secreción de insulina. Diabetes. 51:
124 - 129.
Dezaki K, Kakei M, Yada T. 2007. Ghrelina activa canales de K+ dependientes de voltaje para atenuar la
glucosa inducida por Ca2+ y la liberación de insulina en los islotes de células beta: novela de transducción
de señales de la Ghrelina. Diabetes; 56: 2319 – 2327.
71
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
FACTORES INVOLUCRADOS EN LA FERTILIDAD DURANTE EL EMPADRE DE LAS BORREGAS.
FACTORS INVOLVED IN FERTILITY DURING THE MATING OF SHEEP.
Rojas. RO*, Murguía OM, Castillo HJ y Nah CH E.
Campo Experimental Mocochá, Yucatán. CIRS - INIFAP – SAGARPA
[email protected]
INTRODUCCION.
En las regiones tropicales de México los sistemas de producción ovina utilizan principalmente razas
ovinas de pelo, entre las que se encuentran la Pelibuey y Blackbelly, debido a su fácil adaptación a las
condiciones de temperatura y humedad. Los sistemas de producción ovina dependen de la eficiencia
reproductiva de su rebaño para mejorar su rentabilidad. El objetivo del trabajo fue conocer los factores
involucrados en la fertilidad durante un empadre en borregas de las razas Pelibuey y Blackbelly.
MATERIAL Y METODOS.
El estudio se realizó en las instalaciones del Campo Experimental Mocochá dependiente del Instituto
Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP) en el municipio de Mocochá,
Yucatán ubicado en la región centro norte del estado de Yucatán. El clima predominante en la región es
cálido sub-húmedo (Aw0) con lluvias en verano, con una precipitación pluvial de 997 a 1132 mm y
temperatura media anual de 26.5ºC. Se utilizaron 121 borregas de las razas Pelibuey (n=52) y Blackbelly
(n=69). Las borregas fueron alimentados en pastoreo en praderas de pasto Tanzania, Mombasa y fueron
suplementados con 250 g de un alimento comercial con 16% de PC, se les proporcionó agua ad libitum.
Previo al empadre, las borregas fueron pesadas, marcados con cinta de colores en el cuello para
poderlos separar al regreso del pastoreo, también se obtuvo la condición corporal (CC) por palpación de
vertebras lumbares, edad y raza en sus registros de nacencia. Los sementales fueron evaluados en
forma fisca y se realizó la evaluación espermática valorando el volumen seminal, la concentración
espermática, motilidad masal e individual y morfología de los espermatozoides (Aké-López, 2003).
Durante el empadre, se lotificaron a las borregas con su semental con identificación de collares de
colores para su rápida separación después del pastoreo. El empadre se realizó entre animales puros de
las dos razas antes mencionadas y tuvo una duración de 45 días consecutivos entre los meses de mayojunio. Para obtener la información de la fertilidad se obtuvo a través del diagnóstico de gestación con
sonda Doppler a los 35 días y con palpación abdominal a partir de los 60 días de gestación. Para realizar
el análisis estadístico se utilizaron los procedimientos GLM y CORR del programa SAS. Las variables
independientes fueron la raza, condición corporal y la edad de los animales. Las variables dependientes
fueron el peso corporal al inicio y al término del empadre y la fertilidad. Asimismo, se calcularon las
correlaciones simples entre todas las variables.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Se empadraron 52 borregas Pelibuey y 70 borregas Blackbelly, haciendo un total de 122 borregas. Los
resultados de la fertilidad del rebaño fue del 77.8% con una condición corporal en promedio de 2.7. La
fertilidad por raza Pelibuey fue superior a la raza Blackbelly numéricamente en un 5%, pero
estadísticamente no se encontró diferencia significativa (P>0.5), como se observa en el cuadro 1, en
donde la diferencia númerica fue del 6.2% de la raza Pelibuey en comparación con la raza Blackbelly.
Una fertilidad del 75% o más es considerara adecuada, Rojas y Rodríguez, 2006.
Cuadro 1. Fertilidad obtenida en el empadre de 2 razas ovinas tropicales.
Raza
N
Fertilidad (%) D.S.
Pelibuey
52
80.76 ± 29.79a
Blackbelly
70
75.71 ± 23.10a
*Diferencias estadísticas significativas entre renglones (P>0.05).
72
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Como se puede ver en el cuadro 2 si existen diferencias significativas (P<0.01) en la fertilidad de acuerdo
al nivel de la condición corporal (CC) de las 2 razas ovinas. Las borregas con la CC -1.5 ninguna quedo
gestante, las de CC-2.0 tuvieron el 53.8% de fertilidad y fueron diferentes estadísticamente (P<0.01) al
nivel de CC-1.5 e iguales estadísticamente (P<0.01) al nivel CC-2.5, con una diferencia del 26.7%. El
nivel de CC-3.0 fue diferente estadísticamente (P<0.01) a los niveles de CC-2.0 y CC-1.5 y fue igual
estadísticamente al nivel CC 2.5, con una diferencia porcentual a favor del primero de 24.5%. Claramente
se observa la relación importante entre la nutrición reflejada a través de la CC y la fertilidad obtenida. La
CC adecuada para obtener buenos resultados de fertilidad es de 2.5 a 3.5, Rojas y Rodríguez 2006;
Rojas y otros 2006.
Cuadro 2. Porcentaje de Fertilidad de acuerdo a la condición corporal de las 2 razas ovinas
tropicales.
Condición corporal
N
Fertilidad (%) D.S.
1.5
2
00.00± 0.00c
2.0
13
53.84± 21.88b
2.5
68
73.52±24.44ab
3.0
39
97.43±16.01a
*Diferencias estadísticas significativas entre renglones (P<0.01).
En el cuadro 3 se observa, que las borregas de 1 año de edad fueron estadísticamente diferentes
(P<0.01) a las borregas de 2 hasta 4 o más años de edad, teniendo diferencias inferiores de la fertilidad
del 31.0 hasta 43.5 %, respectivamente, siendo la edad de las borregas con menor fertilidad del resto del
rebaño. Las borregas de 2, 3 y 4 o más años de edad fueron iguales estadísticamente (P>0.05). Se
observa el incremento de la fertilidad de 2 años a 3 años de edad, del 18% y un decremento de fertilidad
de 3 años a 4 o más del 17.6%. La fertilidad de acuerdo a la edad se comporto como citan diversos
autores con una curva en crecimiento al principio y declina al final, edad en la que deben entrar las
borregas de reemplazo, Rojas, R.O.; Rodríguez, R. 2006; Quintal y otros 2009.
Cuadro 3. Porcentaje de fertilidad en relación a la edad de los ovinos en el post
empadre.
Edad (años)
N
Fertilidad (%) D.S.
1
21
52.38± 21.17b
2
25
76.00± 33.50a
3
42
92.85± 26.06a
4 o más
34
76.47±33.05a
*Diferencias estadísticas significativas entre renglones (P<0.01).
Con respecto al peso inicial y final del empadre, no se encontró diferencias significativas (P>0.05) para la
raza. El promedio de las dos razas fue para el primero de 31.2±6.68 Kg y para el segundo de 32.07± 6.54
kg, respectivamente, resultando el peso final del empadre fue superior por 2.6% al peso inicial, ayudando
a la fertilidad. En lo que se refiere a peso inicial del empadre de acuerdo a la CC no se encontraron
diferencias estadísticas (P>0.05) entre las CC-1.5, CC-2.0 y CC-2.5 y si se encontraron diferencias
estadísticas significativas de las CC-1.5 y CC-2.0 contra CC- 3.0 (P<0.01). Entre las CC-2.5 y CC 3.0
fueron iguales estadísticamente (P>0.05). Con respecto al peso final del empadre en el mismo cuadro 4
podemos observar, que se encontró diferencia estadísticamente significativa (P<0.01) de la CC-3.0 contra
las CC-1.5, CC-2.0, CC-2.5. Entre estas tres CC fueron iguales estadísticamente (P>0.05). El peso
positivo entre el final e inicial proporciona un beneficio directo a la fertilidad, a diferencia si es contrario
donde la afecta como es el caso de la CC 2.0 donde eso sucedió y la fertilidad fue disminuida como se
observa en el cuadro 2, Rojas y Rodríguez 2006; Rojas y otros 2006.
73
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 4.- Peso inicial y final del empadre de acuerdo a la condición corporal de los ovinos.
Peso inicial
Peso final
Condición corporal
N
Promedio ± DS
Promedio ± DS
1.5
2
28.50±2.12b
30.00±2.82b
2.0
13
28.01±4.76b
27.76±4.50b
2.5
68
29.79±5.73ab
30.56±5.97b
3.0
39
34.90±5.77a
36.24±6.18a
*Diferencias estadísticas significativas entre renglones (p<0.01).
En el cuadro 5, podemos observar el peso inicial y final del empadre de acuerdo a la edad de las
borregas, se encontraron diferencias estadísticas significativas (P<0.01) entre las borregas de 1 año, 2
años y tres años, siendo iguales estadísticamente (P>0.05) las borregas de 3 años y 4 o más años,
respectivamente. Se observa que el peso se incrementa a mayor edad de las borregas, aunque como
podemos observar en el cuadro 3, la mejor fertilidad se observa en los animales de 3 años
Cuadro 5. Peso inicial y final del empadre de acuerdo a la edad de los ovinos.
Peso inicial
Peso final
Edad (años)
N
Promedio ± DS
Promedio ± DS
1
21
24.18±2.77c
24.28±3.39c
2
25
27.91±7.16b
29.16±4.42b
3
42
33.90±4.75a
34.84±5.10a
4 o más
34
34.67±5.68a
35.60±5.98ª
*Diferencias estadísticas significativas entre renglones (P<0.01).
Los coeficientes de correlación con nivel de significancia (P<0.01) relacionados con la fertilidad fueron el
peso inicial del empadre con 0.34, peso final del empadre con 0.35 y condición corporal con 0.40.
CONCLUSIONES
La fertilidad fue influenciada por la condición corporal, a mejor condición corporal mayor fertilidad.
La fertilidad fue influenciada por la edad de las borregas. Las borregas de 1 año de edad fueron las
menor fertilidad presentaron, Las borregas de mayor fertilidad fueron las borregas de 3 años de edad.
El incremento de peso inicial y final del empadre entre la condición corporal y la edad se presento en
general con un balance positivo mejorando la fertilidad.
La fertilidad se correlaciona con los pesos inicial y final del empadre y la condición corporal.
REFERENCIAS
Aké-López, J.R. 2003. Evaluación reproductiva del semental. En Notas de curso: manejo reproductivo de
ovinos y caprinos en el trópico. Del 16 al 19 de junio de 2003. Mérida, Yucatán. Universidad Autónoma de
Yucatán. pp. 30-39.
Rojas, R.O.; Bores, Q.R.; Urrutia, M.J.; Murguía, O.M.; Beltrán, L.S. 2006. Prácticas de manejo de Ovinos
de pelo en LA Huasteca. INIFAP-CIRNE- campo experimental San Luis. Folleto Técnico n. 27. San Luis
Potosí, México. pp 34-35.
Rojas, R.O.; Rodríguez, R. 2006. Manejo Reproductivo. En Tecnología para la producción de ovinos de
pelo. 2ª edición. Ed. Universidad Autónoma de Yucatán. Mérida, México. pp 149-161.
Quintal, F.J.; Hernández, C.R.; Castillo, H.J.; Segura, C.V. 1990 Manejo del rebaño de pie de cría. En
Aportaciones del C.E Mocochá a la producción pecuaria. Centro de investigaciones forestales y
agropecuarias de Yucatán. Mérida, Yucatán. pp. 1-11.
74
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
LA SUPLEMENTACIÓN AGUDA CON METIONINA DURANTE EL POSPARTO TEMPRANO EN
CONEJAS INCREMENTA LA PROLIFICIDAD Y LAS CONCENTRACIONES DEL FACTOR DE
CRECIMIENTO SIMILAR A LA INSULINA-1.
THE ACUTE SUPLEMENTATION WITH METIONINE DURING EARLY POSTPARTUM IN RABBIT
INCREASES THE PROLIFICACY AND INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR I CONCENTRATION
López CZB1*, Rosales TAM1, Mendoza GD1, Heuze IIM1, Guzmán A1
1
Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En los mamíferos, el estatus nutricional ejerce una influencia significativa sobre la función reproductiva a
través de cambios metabólicos y endocrinos. Un ejemplo claro de esto es el balance energético negativo
(BEN) durante el postparto temprano, donde se incrementan las demandas energéticas del animal y
existe una disminución del consumo voluntario de alimento lo cual ocasiona una reducción en la fertilidad,
prolificidad y reinicio de la actividad ovárica posparto entre otros trastornos reproductivos. Durante el BEN
se inicia la movilización de las reservas corporales lo cual ocasiona una reducción en las concentraciones
de hormonas metabólicas que colaboran con el funcionamiento del eje hipotálamo-hipófisis-ovario tales
como la Insulina y el IGF-1. Debido a la problemática anterior se han evaluado diferentes estrategias
nutricionales que puedan disminuir los efectos negativos del BEN sobre la reproducción.
La suplementación con metionina incrementa el metabolismo de los lípidos (Kawasaki et al., 2010), así
como parámetros productivos como ganancia diaria de peso, tasa de eficiencia proteica, conversión
alimenticia, producción de leche, porcentaje de grasa y proteína en leche entre otros. Además puede
incrementar la expresión hepática de IGF-1 en conejos en crecimiento (Zhang y Li, 2010). Por lo anterior
el objetivo del presente experimento fue probar si la suplementación con metionina en conejas durante el
posparto temprano, favorece la eficiencia reproductiva a través de cambios en el metabolismo energético.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Animales y manejo. Se usaron 40 conejas (Oryctolagus cuniculus) de la raza Nueva Zelanda de cinco
meses de edad, con una condición corporal entre 5-6 (escala del 1 al 9), nulíparas y gestantes. Se
alojaron en jaulas de 90cmX60cmX40cm. Con un periodo de 16h luz y 8h oscuridad, y una temperatura
de 20-22 °C. Se les ofreció agua y alimento ad libitum con una dieta comercial.
Tratamientos y mediciones. Al momento del parto los individuos se dividieron aleatoriamente en dos
grupos (figura 1). Los animales del grupo control (n=20) se alimentaron con la dieta base, en tanto los
animales del grupo MET (n=20) fueron suplementados con Metionina (1g/día;Met-Animo;Evonik-Degussa
de México) durante los primeros 4 días posparto (Día parto = día 0). En el día 4 posparto los individuos
recibieron servicio y se midió la receptividad. Al momento del parto se determinó la fertilidad, conforme al
número de animales que quedaron gestantes sobre el total de que recibieron servicio y la prolificidad. Se
colectaron muestras de sangre los días cero, dos y cuatro postparto y se determinaron las
concentraciones de glucosa, triglicéridos, ácidos grasos no esterificados, IGF-1 e insulina.
Figura 1. Diseño experimental
75
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Análisis estadístico. Se realizó una prueba de Shapiro-Wilk para determinar la normalidad de los datos.
Al cumplir con los supuestos de normalidad las variables prolificidad, número de folículos preovulatorios,
cuerpos lúteos y vesículas embrionarias, se analizaron con una prueba t de student para muestras
independientes. El porcentaje de receptividad y fertilidad fue analizado por medio de la prueba de chicuadrada. Las concentraciones de metabolitos y hormonas metabólicas se analizaron por ANOVA para
medidas repetidas incluyendo tratamiento y día como variable fija, así como la interacción.
RESULTADOS.
Los resultados del presente trabajo muestran que la suplementación con metionina durante cuatro días
postparto en conejas de primer parto, incrementó (P=0.036) el número total de gazapos nacidos
(9.1±0.56 vs 7.7±0.42 grupo MET y control respectivamente) sin embargo no se observaron efectos
(P>0.05) en cuanto a fertilidad, receptividad nacidos vivos y nacidos muertos.
En las concentraciones de hormonas y metabolitos, observamos que la suplementación con metionina
incrementa (P=0.032) las concentraciones de IGF-1 (382.1±14.58 ng/ml) en el cuarto día de lactancia
respecto a las conejas del grupo control (281.01±28.61ng/ml). No se observaron diferencias en las
concentraciones de insulina, glucosa, triglicéridos y NEFAs.
DISCUSIÓN.
La suplementación con 1g de Metionina al día, incrementó las concentraciones séricas de IGF-1 en
conejas de primer parto en el último día de suplementación. De manera similar se ha observado que la
adición de 4g de Metionina por kilogramo de alimento, durante 30 días en conejos en crecimiento
incrementa la expresión hepática de IGF-1 (Zhang y Li, 2010) y por lo tanto de las concentraciones
séricas. Por otra parte la restricción de Metionina a 0.15% en ratones hembra, disminuyen las
concentraciones séricas de IGF-1, asociado a su degradación o bien a una reducción en su síntesis a
nivel hepático (Miller et al., 2005). La metionina promueve la síntesis de proteína y favorece el uso de
energía durante estados de estrés nutricional (Kawasaki et al., 2010) por lo cual el incremento de IGF-I
puede estar asociado a una mejora en el estatus nutricional del animal.
En el presente experimento hubo un incremento en el total de gazapos nacidos así como un aumento en
las concentraciones de IGF-1 en conejas suplementadas con metionina En conejas el estímulo durante el
coito aumenta las concentraciones de catecolaminas para promover el pico preovulatorio de LH. El IGF-1
incrementa la síntesis y secreción de estradiol en cultivos de folículos de rata (Xia et al., 2001),
promoviendo un aumento de hasta el 70% en la secreción de LH, además de que favorece el desarrollo
folicular (Wu et al., 2000). Un incremento en el diámetro folicular y la producción de estradiol puede
mejorar la calidad del ovocito (Guler et al., 2000), por lo tanto podemos sugerir que un incremento en las
concentraciones de IGF-1 durante la etapa periovulatoria puede mejorar la calidad de los ovocitos, la
sobrevivencia embrionaria y por ende incrementar la prolificidad.
En conclusión, nuestros resultados muestran que la suplementación con metionina durante los primeros
4 días posparto en conejas, incrementa la prolificidad debido al incremento de IGF-I el cual pudo
favorecer la calidad del ovocito y con ello la sobrevivencia embrionaria.
AGRADECIMIENTOS.
El soporte financiero del presente proyecto fue otorgado por el Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología
con número de proyecto CB34410952
REFERENCIAS
Guler A., Poulin N., Mermillod P., Terqui M., Cognie Y. 2000. Effect of growth factors, EGF and IGF-I, and
estradiol on in vitro maturation of sheep oocytes. Theriogenology. 54(2): 209-218.
76
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Kawasaki M, Miura Y, Funabiki R, Yagasaki K. 2010. Comparison of the effects on lipid metabolism of
dietary methionine and cystine between hepatoma-bearing and normal rats. Bioscience, biotechnology,
and biochemistry. 74(1): 158-167.
Miller RA., Buehner G., Chang Y., Harper JM., Sigler R., Smith WM. 2005. Methionine‐ deficient diet
extends mouse lifespan, slows immune and lens aging, alters glucose, T4, IGF‐ I and insulin levels, and
increases hepatocyte MIF levels and stress resistance. Aging cell. 4(3): 119-125.
Wu J., Nayudu PL., Kiesel PS., Michelmann HW. 2000. Luteinizing hormone has a stage-limited effect on
preantral follicle development in vitro. Biology Reproduction. 63(1): 320-327.
Xia YX., Weiss JM., Polack S., Diedrich K., Ortmann O. 2001. Interactions of Insulin-like growth factor-1,
Insulin and Estradiol with GnRH-stimulated luteinizing Hormone release from female rat gonadotrophs.
Europena Journal Endocrinology. 144(1):73-9.
Zhang YC., Li FC. 2010. Effects of dietary methionine on growth performance and insulin-like growth
factor-1 mRNA expression of growing meat rabbit. Journal Animal Physiology and Animal Nutrition.
94(6):803-809.
77
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EL ÁCIDO CÓLICO AFECTA LA SÍNTESIS IN VITRO DE ESTRÓGENOS EN CÉLULAS DE LA
GRANULOSA BOVINA.
CHOLIC ACID AFFECTS ESTROGEN SYNTHESIS IN BOVINE GRANULOSA CELLS IN VITRO.
Pescador N1*, Gagnon-Duval L2, Guerrero H2, Duggavathi R3, Gévry N4 y Murphy BD2
1Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma del Estado de México;
de Investigación en Reproducción Animal de la Universidad de Montreal, Canadá;3Departamento
de Ciencia Animal de la Universidad McGuill, Canadá; 4Departamento de Biología de la Universidad de
Sherbrooke, Canadá
2Centro
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La vida productiva de las vacas lecheras depende de su eficiencia reproductiva, por ejemplo, la fertilidad
influencia el número de becerros nacidos por año, el intervalo entre generaciones, el promedio de los
días en producción de leche y finalmente, la sustentabilidad de la empresa lechera. En la actualidad, se
observa a nivel mundial una alarmante disminución en le eficiencia reproductiva del ganado lechero de
alta producción. De acuerdo a la Asociación Holstein de México, en México y los EEUUAA, la tasa de
concepción al primer servicio pasó de 47.7 % a 39.7 %, decreciendo 8 puntos porcentuales en 10 años
entre 1994 y 2003. Con una contribución en 2010 del 7.5% del sector lechero al PIB agroalimentario
mexicano que es del 8.6 % del PIB nacional (INEGI, 2011), lo que representa más de 47 mil millones de
pesos, es evidente que la infertilidad del ganado lechero tiene grandes implicaciones económicas.
La importancia de las señales metabólicas en la regulación de la función ovárica ha sido ampliamente
reconocida, en ese sentido el stress metabólico contribuye a la infertilidad del ganado lechero. Estudios
recientes revelan que hay una mayor secreción de ácidos biliares por el hígado durante el inicio de la
lactación de vacas lecheras (Sartori R et al., 2010) y que éstos actúan como señales endócrinas a través
de receptores membranarios específicos (Chiang JY, 2014). Nosotros mostramos previamente que los
ácidos biliares son dos veces más abundantes en el suero sanguíneo y en el líquido folicular de los
folículos dominantes de vacas lactantes en comparación con los correspondientes de vaquillas con ciclos
estrales regulares (Sanchez R et al., 2014)
OBJETIVOS.
El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de uno de los ácidos biliares, el ácido cólico, sobre la
regulación de la transcripción de genes de la esteroidogénesis y consecuentemente el impacto en la
acumulación de estradiol en un cultivo primario de células de la granulosa bovina.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Las células fueron cultivadas en placas de 24 pozos con Medio Escencial Mínimo adicionado con
bicarbonato de sodio (10 mMol) y suplementado con 20 mM de HEPES, selenito de sodio (4 ng/ml),
albumina sérica bovina (0.1 %), penicilina (100 UI/ml), estresptomicina (100 mg/ml), transferrina (2.5
mg/ml),solución de aminoácidos no esenciales (1.1 mM), insulina bovina (10 ng/ml), androstenediona (10 7 M) y FSH bovina (1 ng/ml), con completa ausencia de suero. La densidad celular fue 2.5 x 106 / ml,
establecida para optimizar, tanto la proliferación celular, como la producción de estradiol por el cultivo de
células de la ganulosa. Las células fueron incubadas en una atmosfera húmeda con concentración de 5.0
% de CO2 a 37o C, el 70 % del medio de cultivo se reemplazó con medio fresco cada 48 h. El ácido cólico
y los otros tratamientos se agregaron a las 48 h después del inicio del cultivo y las células fueron
incubadas por las siguientes 2 a 72 h. Dos diseños de tratamiento fueron empleados, dosis respuesta,
para establecer la dosis del ácido cólico, así como una corrida de tiempo, en que los tratamientos fueron
testigo, ácido cólico (5 nM), forskolin (50 nM), H89 (100 nM; inhibidor de la ruta metabólica proteína
cinasa A), ácido cólico más forskolin y ácido cólico más H89. Se asignaron tres pozos por placa para
cada tratamiento y se realizaron tres réplicas de cada ensayo. La concentración de estradiol en el medio
78
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
fue determinada por radioinmunoanálisis. La abundancia del ARNm para los factores esteroidogénicos
StAR, CYP11A1, CYP17A1, CYP19A1 y HSD3B fueron determinados por medio de qPCR. Los
resultados fueron analizados mediante ANOVA y en caso de diferencias estadísticamente significativas
(p<0.05) las medias entre tratamientos se contrastaron con la prueba de Tukey.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Las dosis de 5 a 100 nM de ácido cólico producen variación en la acumulación de estradiol en los medios
de cultivo. Los ensayos de corrida de tiempo indicaron que la disminución en la acumulación de estradiol
puede ser identificada a las 48 (>50 %) y a las 72 h (>75 %) como consecuencia de la adición de 5 nM de
ácido cólico. La abundancia del ARNm de CYP19A1 fue significativamente reducida a 12, 24 y 48 h,
mientras que el ARNm de CYP11A1 tuvo una tendencia a la reducción a las 12 h y reducción significativa
a las 24 y 48 h. Los mensajes de StAR, CYP17A1 y HSD3B no fueron afectados por el tratamiento de
ácido cólico. La investigación preliminar de los efectos del ácido cólico sobre la señalización intracelular,
indica que forskolin produce un incremento de cuatro veces en la acumulación de CYP19A1 a las 2 o 6 h
de incubación. El ácido cólico en presencia de forskolin disminuye la respuesta estimuladora más del 75
%. El inhibidor de la ruta metabólica proteína cinasa A, H89, no impide la variación en la acumulación del
ARNm de CYP19A1 inducida por el ácido cólico.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Los resultados obtenidos nos permiten concluir que el ácido cólico inhibe la síntesis de estradiol a
concentraciones equivalentes con las establecidas en el líquido folicular de vacas lecheras, sugiriendo
que la prevalencia de ácidos biliares en el líquido folicular de las vacas lecheras en lactación podría estar
implicada en la disminución de la fertilidad.
RECONOCIMIENTOS.
Los autores agradecen el financiamiento del Fondo de Investigación de Quebec Nuevas Tecnologías,
asignado a N. Gevry y el financiamiento de la Fundación Nacional de Investigación Científica de Canadá
a B.D. Murphy.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Chamg JY (2013). Bile acid metabolism and signaling. Compr. Physiol. 3: 1191-1212
Sartori R, Bastos MR, y Wiltbank MC (2010). Factors affecting fertilisation and early embryo quality in
single and superovulated dairy cattle. Reprod. Fertil. Dev. 22, 151–158
Sanchez R, Schuermann Y, Gagnon-Duval L, Baldassarre H, Murphy BD, Gevry N, Agellon LB,
Bordignon V, Duggavathi R (2014). Differential abundance of IGF1, bile acids, and the genes involved in
their signaling in the dominant follicle microenvironment of lactating cows and nulliparous heifers.
Theriogenology. 81: 771-779.
79
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EL NIVEL DE ALIMENTACIÓN MEJORA LA RESPUESTA SEXUAL DE LOS MACHOS CABRÍOS
MULTIRRACIALES JÓVENES TRATADOS CON TESTOSTERONA.
NUTRITION LEVEL IMPROVES THE SEXUAL RESPONSE IN MIXED-BREED YOUNG BUCKS
TREATED WITH TESTOSTERONE.
López-Jara AG1, Machado-Ramos MG1, Benítez-Rivas JJ1, Angel García O1, Vélez-Monroy LI2, ChávezSolis AU2, Véliz-Deras FG1 Mellado M1, De Santiago-Miramontes MA1*
1Postgrado de Producción Agropecuaria UAAAN, 2Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas y
Pecuarias, Centro Norte C.E.La Laguna
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En la Comarca Lagunera los caprinos predominantes son el resultado de una mezcla de razas lecheras a
los que comúnmente se les denomina “criollos” cuyo patrón de reproducción es estacional de días cortos.
La mayor actividad sexual de los machos ocurre de mayo a diciembre (verano–otoño) seguida de un
periodo de reposo sexual que ocurre de enero a abril (invierno primavera; Delgadillo et al., 2004). En la
raza Alpina, durante el reposo sexual disminuyen los niveles plasmáticos de LH y testosterona, además,
el peso testicular, el olor sexual y la producción de espermatozoides se encuentran reducidos (Carrillo et
al. ,2010). En el efecto macho es condición indispensable que los machos desplieguen una intensa
actividad sexual para inducir al estro y la ovulación a las hembras en la época de anestro.
Adicionalmente,, la nutrición es un potente modulador de la reproducción ya que influye entre otros
factores en la cantidad y calidad del eyaculado, volumen testicular, libido y producción de testosterona
(Walkden-Brown et al.,1994). En la actualidad existen estrategias para manipular la actividad sexual a
contra-estación de los machos, una de ellas son los tratamientos fotoperiódicos (Delgadillo et al., 2004).
Sin embargo esta práctica no ha sido adoptada por la mayoría de los caprinocultores debido a obstáculos
económicos y de falta de infraestructura eléctrica. Existe otra estrategia de manejo más sencilla, efectiva
y económica reportada recientemente (Luna-Orozco et al., 2012, Angel et al., 2014) consistente en la
administración intramuscular de testosterona durante un periodo corto de tiempo.
OBJETIVO.
El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del nivel de alimentación en machos cabríos de
primer empadre tratados con testosterona exógena sobre las conductas sexuales de búsqueda y de
consumación en la época de reposo sexual.
MATERIAL Y MÉTODO.
El experimento se llevó a cabo en las instalaciones del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales,
Agrícolas y Pecuarias (INIFAP) región Norte-Centro C.E. La Laguna, Matamoros, Coahuila, México (25°
31' 41" latitud Norte y 103° 13' 42" longitud Oeste. A partir del 31 de Diciembre 16 machos cabríos
multirraciales de 1 año de edad (n=4/grupo) similares en peso (33.3 kg ± 1.4 kg) y condición corporal
(1.67 ± 0.07) fueron asignados a los siguientes grupos experimentales: DCT = Dieta Completa +
Testosterona, DCC = Dieta Completa Control (no testosterona), DBT = Dieta Baja + Testosterona y DBC
= Dieta Baja Control (no testosterona). El grupo DCT recibió una dieta suficiente para sus necesidades:
0.3 kg de alfalfa de tercera, 0.2 kg de rastrojo de maíz ,0.3 kg de zacate Rye grass, 0.08 kg de melaza y
0.3 kg de concentrado comercial al 18% de P.C por animal por día, más la aplicación IM de 25 mg de
testosterona (Testosterone 50, Brovel, DF, México), el grupo DCC recibió una alimentación similar +1 ml
IM de solución salina (NaCl; placebo); el grupo DBT recibió una dieta insuficiente para sus necesidades
metabólicas: 0.15 kg de alfalfa de tercera, 0.2 kg de rastrojo de maíz, 0.15 kg de zacate Rye grass y 0.12
kg de melaza por animal,+ la aplicación IM de 25 mg testosterona, el grupo DBC recibió una alimentación
similar + 1 ml IM de NaCl. Semanalmente se registraron el peso corporal con ayuda de una báscula
digital, la condición corporal (siempre el mismo técnico) por palpación del grosor de tejido muscular y
graso en la región lumbar (rango: 1-4; 1=emaciado, 4=obeso). El tratamiento hormonal se administró
cada tercer día durante 3 semanas a partir del dia 23 de Febrero concluyendo el día 15 de Marzo. Los
días 17 y 18 de marzo, en una corraleta individual y aislada se registraron las conductas sexuales de
búsqueda y de consumación durante 20 minutos utilizando una hembra inducida al estro (ECP, Lab.
Pharmacia & Upjohn, México). Las conductas se compararon con prueba de X2 (MYSTAT 12).
80
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los machos tratados con testosterona exógena y con dieta completa (DCT) manifestaron un mayor
porcentaje (P<0.05) de comportamientos de búsqueda (fig 1.) en comparación con los demás grupos
seguidos por el grupo de machos tratados con testosterona y con dieta baja, (DCT=58.6%, DBT=15.7%,
DCC=14.6%, DBC=14.6%). Asimismo, el grupo DCT registró un mayor porcentaje (Fig 1; P<0.05), de
conductas sexuales de consumación seguido por el grupo DCC (DCT=58.24%, DBT= 4.40%,
DCC=20.88%, DBC=11.2%).
Nuestros resultados concuerdan con los de Luna Orozco et al., 2012 y Ángel et al., 2014 donde la
aplicación de testosterona exógena indujo a machos caprinos sexualmente inactivos a un
comportamiento sexual intenso. Asimismo, coinciden con los referidos por Walkden- Brown y
colaboradores (1994) pues el nivel de alimentación en esta latitud y en la casta racial estudiada funge
como modulador de la intensidad de la libido de los machos cabríos. El análisis de varianza no mostró
diferencia significativa en el peso corporal entre grupos, y tampoco existió interacción grupo por tiempo
(P>0.05). Sin embargo en el caso de la condición corporal existió un efecto del grupo (P< 0.05) y también
un efecto de tiempo (P<0.05) en los grupos con alimentación completa con respecto a los alimentados
con una dieta baja (DCT y DCC vs DBT y DBC).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Se concluye que una alimentación completa en conjunto con la administración IM de testosterona mejora
las conductas sexuales de búsqueda y consumación en machos cabríos multirraciales de la Comarca
Lagunera, lo cual puede ser una herramienta de inducción de la actividad estral y ovulatoria de las
hembras anéstricas en esta latitud
Figura 1. Comportamiento sexual de machos cabríos jóvenes tratados y no tratados con Testosterona y
con diferentes niveles de alimentación.
ab Valores con diferente literal difieren entre sí (P<0.05).
LITERATURA CITADA
Ángel GO, Meza-Herrera CA, Guillen-Muñoz JM, Carrillo-Castellanos E, Luna-Orozco JR, Mellado M,
Véliz-Deras FG 2014. Seminal characteristics, libido and serum testosterone concentrations in mixedbreed goat bucks receiving testosterone during the non-breeding period. Journal of Applied Animal
Research, DOI: 10.1080/09712119.2014.980420.
Carrillo E, Meza-Herrera CA, Véliz FG 2010. Estacionalidad reproductiva de los machos cabríos
de la raza Alpino-Francés adaptados al subtrópico Mexicano. Rev. Mex. Cienc. Pec. 2,169 178.
Delgadillo JA, Fitz-Rodríguez G, Duarte G, Veliz FG, Carrillo E, Flores JA, Vielma J, Hernández H,
Malpaux B 2004. Management of photoperiod to control caprine reproduction in the subtropics. Reprod.
Fertil. Dev, 471-478.
Luna-Orozco JR, Guillen-Muñoz JM, De Santiago-Miramontes MA, García JE, Rodríguez-Martínez R,
Meza-Herrera CA, Mellado M, Véliz FG 2012. Influence of sexually inactive bucks subjected to long
photoperiod or testosterone on the induction of estrus in anovulatory goats. Trop Anim Health Prod 44,
71–75.
Walkden-Brown SW, Restall BJ, Norton BW, Scaramuzzi RJ 1994. The "female effect" in Australian
cashmere goats: effect of season and quality of diet on the LH and testosterone response of bucks to
estrous does. J. Reprod. Fertil. 100, 521–531.
81
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
PATRÓN DE ACTIVACIÓN ESTACIONAL REPRODUCTIVA EN MACHOS CAPRINOS:
COMPARACIÓN ENTRE UN GENOTIPO CRIOLLO Y RAZAS ESPECIALIZADAS.
SEASONAL REPRODUCTIVE ACTIVATION PATTERN IN BUCKS: COMPARISSON BETWEEN A
CRIOLLO GENOTIPE AND SPECIALIZED BREEDS.
Escalante HI*, Rodríguez AA, Rodríguez MA, Andrade MHM, Vera AHR
Facultad de Ciencias Naturales, Universidad Autónoma de Querétaro.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La estacionalidad reproductiva en los rebaños caprinos depende por una parte de la estacionalidad en la
actividad ovulatoria/estral de las hembras y por la otra de la estacionalidad en la actividad
espermatogénica y en el comportamiento sexual de los machos. El patrón de estacionalidad reproductiva
anual en los machos caprinos se expresa como una disminución temporal, generalmente entre marzo y
junio en latitudes tropicales, de la circunferencia escrotal, capacidad espermatogénica y producción de
testosterona, esto último reflejado en disminución de la libido y olor. La fase anterior es seguida de un
crecimiento, primero de la circunferencia escrotal y luego de la actividad endocrina y espermatogénica
testicular, para llegar a un valor máximo entre los meses de julio a septiembre y luego mantenerse
estable para de nuevo disminuir al siguiente año (Ariciaga-Gonzalez et al., 2008). El patrón anterior
puede ser influido por la condición nutricional de los machos (Ariciaga-Gonzalez et al., 2008) y aunque
entre razas especializadas se expresa de manera similar (Castilla, 2006) podría ser diferente en
genotipos criollos en los cuales las hembras presentan una estacionalidad menos marcada. En la zona
centro del país existe un genotipo criollo negro aparentemente derivado de la raza Granadina, que
presenta una buena adaptabilidad a condiciones no intensivas de producción en zonas semiáridas, pero
que no ha sido caracterizado en cuanto a su desempeño productivo y grado de estacionalidad.
OBJETIVO:
Comparar el patrón de la fase de activación reproductiva estacional entre razas especializadas
comúnmente utilizadas en el centro del país y el genotipo criollo mencionado.
MATERIALES Y MÉTODOS
El trabajo se realizó en el Campus Amazcala de la Universidad Autónoma de Querétaro a 21° LN, 99°
LO, 1900 msm y temperatura y precipitación media de 15°C y 570 mm. El periodo experimental fue entre
los meses de enero a agosto de 2015, que comprende la fase de activación estacional reproductiva en
machos caprinos (Ariciaga-Gonzalez et al., 2008). Se utilizaron 11 machos de las razas Alpino Francés
(n=4), Nubia (n=4) y Criollo Negro (n=3), sexualmente maduros, entre 1.5 y 4 años de edad y en buena
condición nutricional. Los animales se mantuvieron semi estabulados y alimentados con una dieta
formulada para cubrir sus requerimientos nutricionales. El agua y una mezcla mineral se proporcionó a
libre acceso. Durante el periodo experimental cada 21 días se midió la circunferencia escrotal (CE), se
calificó el olor (Walkden-Brown et al., 1994) y se obtuvo el índice de masa corporal (IMC), este último
como un indicador de la condición nutricional. Se calcularon los cambios de CE con respecto al valor
inicial (CCE) y estos fueron utilizados como variable de respuesta. Los datos se analizaron por ANDEVA
para un diseño de observaciones repetidas donde la raza fue el efecto entre unidades experimentales y
tiempo e interacciones con tiempo los efectos dentro de unidades experimentales. Se incluyó la edad
como covariable.
RESULTADOS, DISCUSIÓN
El IMC se mantuvo relativamente estable en todas las razas durante el periodo de estudio (Fig. 1), sin
haber sido influido por alguno de los factores evaluados (P>0.05). Lo anterior es importante pues se ha
82
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
observado que la condición nutricional influye en el patrón reproductivo estacional de machos caprinos
(Ariciaga-Gonzalez et al., 2008) y permite concluir, que como factor, la condición nutricional no afectó la
comparación entre razas en cuanto al patrón de estacionalidad reproductiva de los machos
experimentales. El CCE fue diferente entre razas (+2.0a, +0.3b y +1.1a cm en las razas Alpina, Criollo y
Nubia, P=0.05) y varió a través del tiempo de manera significativa (P<0.001). Se ha descrito que las
variaciones en el tamaño testicular a través del año siguen un comportamiento sigmoideo con una
depresión durante la primavera y un valor máximo al final del verano/principios del otoño. Las variaciones
observadas en el CCE a través del tiempo, confirman la existencia de un efecto estacional sobre el
tamaño testicular, sin embargo, el patrón de estas variaciones no fue diferente entre las razas evaluadas.
(interacción raza x tiempo, P>0.05; Fig. 2). El CCE mostró un aumento en el tamaño testicular entre abril
y mayo, aunque posteriormente mostró a su vez una nueva disminución del tamaño testicular entre junio
y julio para incrementarse otra vez en agosto. El patrón anterior no se ajusta a lo descrito por otros
autores (Walkden-Brown et al., 1994), lo cual podría deberse a la influencia de factores socio-sexuales
(temporalidad en el inicio de actividad estral en las hembras del rebaño; Carrillo y Veliz, 2011) y/o
climáticos como el patrón de precipitación pluvial (Silva et al., 1998), aunque esto no se pudo determinar.
El olor de los machos mostró un comportamiento similar al del CCE, con una tendencia de diferencia
entre razas (1.6a, 1.3b y 1.4b puntos en las razas Alpina, Criollo y Nubia, P=0.07) aunque sin diferencias
estadísticas por tiempo y por la interacción raza x tiempo (P>0.05; Fig. 3).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Se concluye que el patrón estacional de activación reproductiva fue similar entre las razas evaluadas,
pero los cambios relativos fueron de menor magnitud en el genotipo criollo negro. La información anterior,
será de utilidad en el diseño de programas de manejo reproductivo para el genotipo criollo negro.
Figura 2: Medias mínimo cuadráticas del cambio en
la circunferencia escrotal con respecto al valor inicial
en machos caprinos de diferentes razas; Raza,
P=0.05; Tiempo, P<0.001; Raza x Tiempo, P>0.05
Figura 1: Medias mínimo cuadráticas del índice de
masa corporal en machos caprinos de diferentes
razas; Raza, Tiempo, Raza x Tiempo, P>0.05.
Figura 3: Medias mínimo cuadráticas de la calificación de
olor en machos caprinos de diferentes razas. Raza,
P=0.07; Tiempo y Raza x Tiempo, P>0.05
83
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
LITERATURA CITADA
Ariciaga-Gonzalez C, Vera-Avila HR, Jimenez-Severiano H, Mejia-Guadarrama CA, Gonzalez-Padilla E,
Villagomez-Amezcua E. 2009. Expression of reproductive seasonality in Creole bucks under different
nutritional conditions. 9th International conference on goats. Querétaro, Qro., MEXICO.
Carrillo CE, Véliz DFG. 2011. Las cabras alpinas adultas y jóvenes responden sexualmente al exponerlas
a machos estimulados con hembras en celo. XLVII Reunión Nacional de Investigación Pecuaria, León,
Guanajuato, MEXICO.
Castilla León, G.A.E. 2006. Comparación del comportamiento reproductivo en machos caprinos de
diferentes razas durante la transición hacia la estación reproductiva. Tesis de Maestría. FES CuautitlánUNAM, México.
Silva, E., Galina, M.A., Palma, J.M., Valencia, J. 1998. Reproductive performance of Alpine dairy goats in
a semi-arid environment of Mexico under continuous breeding system. Small Ruminant Research 27:7984.
Walkden-Brown SW, Restall BJ, Norton BW, Scaramuzzi RJ, Martin GB. 1994. Effect of nutrition on
seasonal patterns of LH, FSH, and testosterone concentration, testicular mass, sebaceous gland volume
and odour in Australian cashmere goats. J Reprod Fertil ; 102:351–360.
84
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EL EFECTO MACHO Y SU ESTIMULO SOBRE MACHOS EN REPOSO Y HEMBRAS EN
ANESTRO.
THE MALE EFFECT AND THEIR STIMULUS BY REST MALES AND ANESTROUS FEMALES.
Vélez MLI*1, Rosales NCA2, Flores NMJ3, Chávez SAU1 y Martin GB4
1Instituto
Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Campo Experimental la Laguna,
Matamoros, Coahuila, México; 2Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias.
Campo Experimental San Luis, San Luis Potosí, San Luis Potosí, México; 3Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Campo Experimental Zacatecas, Calera de Víctor
Rosales, Zacatecas, México; 4UWA Institute of Agriculture and School of Animal Biology, University of
Western Australia, Crawley, WA, Australia.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La estacionalidad reproductiva es controlada, principalmente, por el fotoperiodo (Rosales Nieto et al.,
2011). Esta estacionalidad reproductiva puede ser interrumpida por el efecto macho. El efecto macho se
caracteriza por la exposición de hembras a machos enteros después de un periodo de completo
aislamiento de los machos (Delgadillo et al., 2009). La respuesta al efecto macho está sujeta a diferentes
factores y es muy variable. En hembras, depende de la profundidad del anestro, raza, nutrición y
condición corporal (Urrutia et al., 2003). En los machos cabríos, depende de la condición reproductiva del
macho (Flores et al., 2000). El comportamiento sexual juega un papel importante para determinar si un
macho puede o no inducir actividad sexual; por lo tanto, la respuesta de las hembras al efecto macho
está sujeta, en parte, al comportamiento sexual mostrado por los machos (Flores et al., 2000). Se ha
determinado que tratamientos con luz artificial en invierno a machos cabríos inhiben la actividad sexual,
posteriormente estimulan la secreción de testosterona y mejoran la actividad sexual durante el reposo
sexual (Delgadillo et al., 2004). Adicionalmente se sabe que cabras sexualmente inactivas pueden ser
activadas por hembras sexualmente activas (Walkden-Brown et al., 1993). Sin embargo, no se sabe si
este efecto pudiera ser aplicado en machos.
OBJETIVO
El objetivo es determinar si los machos sexualmente activos pueden estimular a machos sexualmente
inactivos y a hembras en anestro estacional.
MATERIALES Y MÉTODOS
El experimento se llevó a cabo en el Campo Experimental La Laguna y el ejido El Sacrificio en Coahuila,
México. En la estación experimental 6 machos cabríos se dividieron en dos grupos. Grupo fotoperiodo
artificial (FA;n=3). En 1 de Nov-2013 los machos recibieron tratamiento de fotoperiodo artificial de días
largos (16 horas luz/8 horas noche) en un corral (5 x 5 m) y alimentados con alfalfa, triticale y avena ad
libitum y 300 gr de concentrado (PC 14% y 1,7 Mcal kg-1), con acceso libre a agua y minerales por un
periodo de 2.5 meses. Para el fotoperiodo artificial se utilizaron 6 lámparas de luz blanca (75 watts cada
una) y producían aproximadamente 300 lux. El fotoperiodo artificial fue regulado por un sincronizador de
6 a 9 am y de 5 a 10 pm. El otro grupo fue fotoperiodo natural (FN;n=3) y fue mantenido bajo fotoperiodo
natural y recibió la misma dieta que el otro grupo. El 15 de Abril se formaron 3 grupos de machos; FA
(n=2), FN (n=2) y COM (n=2; 1 macho de FA + 1 macho de FN). Cada grupo fue mantenido en corrales
independientes con un grupo de 20 cabras criollas adultas. Estas cabras se encontraban en anestro
estacional (Rosales Nieto et al., 2011). El empadre tuvo una duración de 15 días y durante este periodo
los machos y hembras de cada grupo interactuaron de las 6 pm hasta las 10 am del día siguiente y el
resto del tiempo las hembras pastoreaban en el agostadero mientras que los machos permanecían en el
corral. Posterior a la introducción de los machos se determinó por la misma persona el comportamiento
sexual de los machos por 4 días consecutivos (olfateos, flehmen, auto-marcaje y aproximaciones) y la
85
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
respuesta sexual de las hembras durante el empadre (estro [comportamiento, latencia y duración], ciclos
cortos, tasa de fertilidad, fecundidad y reproductiva). La información sobre el comportamiento sexual de
los machos (olfateos, flehmen, auto-marcaje y aproximaciones) y el comportamiento estral (latencia y
duración) fue analizada con modelos mixtos (PROC MIXED). La información sobre estro, fertilidad y
fecundidad fue analizada con modelos mixtos con distribución binomial (PROC GLIMMIX) y la tasa de
fecundidad fue analizada con modelos mixtos con distribución multinomial (PROC GLIMMIX).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El número de olfateos (P < 0.05) y aproximaciones (P < 0.001) fue mayor para el grupo COM que FA o
FN. Flehmen y auto-marcaje no difirió entre grupos (P>0.05; cuadro 1). Nuestros resultados indican que
los machos sexualmente inactivos responden a la presencia de machos sexualmente activos al aumentar
gradualmente su comportamiento sexual. Estos resultados son extendidos por reportes anteriores en
hembras sexualmente activas tienen la capacidad de activar a los machos sexualmente inactivos (Carrillo
et al., 2011). Esto puede ser posible dado que los machos pueden responder inmediatamente a las
feromonas de otro compañero sexualmente activo (Katongole et al., 1971). Adicionalmente, es posible
que, el comportamiento sexual mostrado por el macho sexualmente activo ayudara a incrementar la
motivación sexual del macho sexualmente inactivo (Price et al., 1984).
Cuadro 1. Comportamiento sexual de los machos (olfateos, flehmen, auto-marcaje y aproximaciones) que
recibieron fotoperiodo artificial (FA) o fotoperiodo natural (FN) o grupo de machos combinados (COM) en
respuesta a hembras en anestro.
Grupo
Olfateos
Flehmen
Aproximaciones
Auto-marcaje
Valor P
Macho
n
*
n
NS
n
***
n
NS
COMB
1-AL
363
45±14a
25
3±1a
705
88±23a
14
2±1a
2-NP
253
63±26
20
5±3
414
103±32
7
2±1
346
43±12a
31
4±2a
242
30±9b
8
1±1a
1
248
62±20
1
1±1
193
48±14
4
1±0
2
98
24±8
30
7±2
49
12±4
4
1±0
96
12±5b
15
2±1a
28
3±1b
5
1±1a
1
24
6±2
8
2±1
13
3±1
4
1±1
2
72
18±10
7
2±1
15
4±3
1
1±0
FA
FN
Valores P: * P ≤ 0.05; ** P ≤ 0.01; *** P ≤ 0.001; NS P > 0.05; Valores con la misma letra no difieren
estadísticamente. Los días de observación fueron combinados.
La duración del estro (P < 0.01), latencia (P < 0.001), fertilidad y tasa reproductiva (P < 0.01) fueron
mayores en hembras estimuladas por machos del grupo de FA en hembras estimuladas por machos de
FN o COM (cuadro 2); el resto de las variables no difirieron entre grupos (P > 0.05; cuadro 2). La
diferencia mostrada en la respuesta sexual de las hembras a los machos es debido, probablemente, al
comportamiento sexual mostrado por los machos (Vielma et al., 2009).
Cuadro 2. Respuesta sexual (estro [comportamiento (%), latencia (hrs) y duración (hrs)], presencia de
ciclos cortos [%], fertilidad [%], fecundidad [%] y tasa reproductiva [%]) de hembras en anestro estacional
en respuesta a machos tratados con fotoperiodo artificial por 2.5 meses (FA) o fotoperiodo natural (FN) o
combinados (COMB).
86
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Grupo
Estro
Ciclos
cortos
Fertilidad
Fecundidad
Tasa
Reproductiva
Comportamiento
Latencia
Duración
NS
***
**
NS
**
NS
**
100
115±15b
24±3.6ab
65
75
80
180
FA
100
107±10b
32.4±3.6a
80
55
64
154
FN
50
236±4a
13.2±1.2b
0
20
50
125
COMB
Valores P: * P ≤ 0.05; ** P ≤ 0.01; *** P ≤ 0.001; NS P > 0.05; Valores con la misma letra no difieren
estadísticamente. Los días de observación fueron combinados.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Concluimos que los machos sexualmente activos son capaces de estimular a machos inactivos al mismo
tiempo que estimulan la actividad sexual en cabras en anestro estacional mediante el efecto macho. Se
requiere de más investigación en este tema.
LITERATURA CITADA
Carrillo, E., Tejada, L.M., Meza-Herrera, C.A., Arellano-Rodríguez, G., Garcia, J.E., De SantiagoMiramontes, M.A., Mellado, M., Véliz, F.G., 2011. Response of sexually inactive French Alpine bucks to
the stimulus of goats in oestrus. Livest. Sci. 141, 202-206.
Delgadillo, J.A., Cortez, M.E., Duarte, G., Chemineau, P., Malpaux, B., 2004. Evidence that the
photoperiod controls the annual changes in testosterone secretion, testicular and body weight in
subtropical male goats. Reprod. Nutr. Dev. 44, 183-193.
Delgadillo, J.A., Gelez, H., Ungerfeld, R., Hawken, P.A.R., Martin, G.B., 2009. The ‘male effect’ in sheep
and goats—Revisiting the dogmas. Behav. Brain Res. 200, 304-314.
Flores, J.A., Véliz, F.G., Pérez-Villanueva, J.A., Martínez de la Escalera, G., Chemineau, P., Poindron, P.,
Malpaux, B., Delgadillo, J.A., 2000. Male Reproductive Condition Is the Limiting Factor of Efficiency in the
Male Effect During Seasonal Anestrus in Female Goats. Biol. Reprod. 62, 1409-1414.
Rosales Nieto, C.A., Gamez Vazquez, H.G., Gudino Reyes, J., Reyes Ramirez, E.A., Eaton, M., Stanko,
R.L., Meza Herrera, C.A., Gonzalez Bulnes, A., 2011. Nutritional and metabolic modulation of the male
effect on the resumption of ovulatory activity in goats. Anim. Prod. Sci. 51, 115-122.
Urrutia Morales J, Gamez Vazquez HG, Ramirez Andrade BM. 2003. Effect of grazing restriction on male
effect response in goats showing low body condition in the anoestrus season. Tec. Pecu. Mex. 41(3), 251260.
Walkden-Brown, S.W., Restall, B.J., Henniawati, The male effect in the Australian cashmere goat. 3.
Enhancement with buck nutrition and use of oestrous females. Anim. Reprod. Sci. 32, 69-84.
87
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO MACHO-MACHO Y LA CAPACIDAD DE INDUCIR ACTIVIDAD ESTRAL EN
HEMBRAS DURANTE EL ANESTRO ESTACIONAL.
MALE-MALE EFFECT AND THE ABILITY TO INDUCE ESTRAL BEHABIOUR IN FEMALE
DURING SEASONAL ANESTROUS.
Vélez MLI1*, Flores NMJ2, Rosales NCA3, Chávez SAU1 y Martin GB4.
1Instituto
Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Campo Experimental la Laguna,
Matamoros, Coahuila, México; 2Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias.
Campo Experimental Zacatecas, Calera de Víctor Rosales, Zacatecas, México; 3Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Campo Experimental San Luis, San Luis Potosí, San
Luis Potosí, México; 4UWA Institute of Agriculture and School of Animal Biology, University of Western
Australia, Crawley, WA, Australia.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El efecto macho se caracteriza por la exposición de hembras en anestro estacional a machos enteros
después de un periodo de completo aislamiento de los machos (Delgadillo et al., 2009). La respuesta al
efecto macho está sujeta a diferentes factores y es muy variable. El comportamiento sexual juega un
papel muy importante para determinar si un macho puede o no inducir actividad sexual; por lo que, se
han desarrollado técnicas de inducción y sicronización de estro o de actividad sexual. Una de ellas es
conocida como el efecto macho (Flores et al., 2000), donde interactúan machos y hembras con sus
conductas sexuales. Otra técnica ya conocida, es el efecto hembra, donde por lo general interactúan
sexualmente entre puras hembras (Alvares y Zarco 2001). Sin embrago no se ha reportado ninguna
técnica en la que hayan interactuado solo machos cabríos. Por lo que los autores proponemos una nueva
técnica en los caprinos llamada efecto macho-macho.
OBJETIVO
El objetivo de nuestro trabajo es determinar si los machos cabríos después de recibir un tratamiento
fotoperiodico y al ir aumentando paulatinamente su conducta sexual, son capaces de estimular la
conducta sexual de otros machos que no recibieron tratamiento fotoperiodico y que a su vez estos
machos sean capaces de estimular la actividad sexual de las hembras durante el periodo de anestro.
MATERIALES Y MÉTODOS
El experimento se llevó a cabo en el Campo Experimental La Laguna y el ejido Ignacio Zaragoza en
Coahuila, México. Se formaron tres grupos de machos. Grupo fotoperiodo artificial (FA;n=3). En 1 de
Nov-2013 los machos fueron mantenidos en un corral (5 x 5 m) y alimentados con alfalfa, triticale y avena
ad libitum y 300 gr de concentrado (PC 14% y 1,7 Mcal kg-1), con acceso libre a agua y minerales. Por un
periodo de 2.5 meses (1 Nov-2013 – 15 Ene-2014), estos machos recibieron tratamiento de fotoperiodo
artificial de días largos (16 horas luz/8 horas noche). Para el fotoperiodo artificial se utilizaron 6 lámparas
de luz blanca (75 watts cada una) y producían aproximadamente 300 lux. El fotoperiodo artificial fue
regulado por un sincronizador de 6 a 9 am y de 5 a 10 pm. El resto de los machos fueron divididos en dos
grupos (FN1;n=3; FN2;n=2) y fueron mantenido en corrales independientes bajo fotoperiodo natural y
recibieron la misma dieta que el grupo FA. Al termino del tratamiento de luz artificial (15 Ene 14), se
formaron 4 grupos de machos que fueron mantenidos en corrales independientes bajo fotoperiodo natural
del 15 de Enero al 15 de Abril 2014 y recibiendo la misma dieta. Los grupos fueron: FA (n=2), FN (n=2
ambos del grupo FN2), AN (n=2; 1 macho preveniente del grupo FA + 1 macho preveniente del grupo
FN1) y NN (n=2; 1 macho preveniente del grupo FN1 + 1 macho preveniente del grupo FN2). El 15 de
Abril cada grupo de machos fue reunido con 20 hembras adultas en anestro estacional (Rosales Nieto et
al., 2011) por un periodo de 15 días. Durante este periodo los machos y hembras de cada grupo
interactuaron de las 6 pm hasta las 10 am del día siguiente y el resto del tiempo las hembras pastoreaban
88
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
en el agostadero mientras que los machos permanecían en el corral. Posterior a la introducción de los
machos se determinó por la misma persona el comportamiento sexual de los machos por 4 días
consecutivos (olfateos, flehmen, auto-marcaje y aproximaciones) y la respuesta sexual de las hembras
durante el empadre (estro [comportamiento, latencia y duración], ciclos cortos, tasa de fertilidad,
fecundidad y reproductiva). La información sobre el comportamiento sexual de los machos (olfateos,
flehmen, auto-marcaje y aproximaciones) y el comportamiento estral (latencia y duración) fue analizada
con modelos mixtos (PROC MIXED). La información sobre estro, fertilidad y fecundidad fue analizada con
modelos mixtos con distribución binomial (PROC GLIMMIX) y la tasa de fecundidad fue analizada con
modelos mixtos con distribución multinomial (PROC GLIMMIX).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El número de olfateos fue mayor para los machos del grupo de FA (P < 0.01); sin embargo el resto de las
variables fueron similares entre grupos (P > 0.05). Nuestros resultados indican que los machos
sexualmente inactivos responden a la presencia de machos sexualmente activos al aumentar
gradualmente su comportamiento sexual. Esto indica que el tiempo de interacción entre machos
sexualmente activos e inactivos pudiera influir en el comportamiento sexual (Price et al., 1984; Vélez et
al., 2015). Se requieren más estudios para elucidar esta nueva hipótesis.
Cuadro 1. Comportamiento sexual de los machos (olfateos, flehmen, auto-marcaje y aproximaciones) que
recibieron fotoperiodo artificial (FA) o fotoperiodo natural (FN; NN) o grupo de machos combinados (AN)
en respuesta a hembras en anestro.
Grupo
Valor P
Olfateos
Macho
n
**
Flehmen
n
NS
Aproximaciones
n
NS
Auto-marcaje
n
NS
218
27±5a
30
4±1a
191
24±11a
4
1±1a
1
110
27±9
12
3±1
41
10±5
2
1±0.5
2
108
27±4
18
4±1
150
37±20
2
1±0.5
157
19±4ab
24
3±1a
119
15±4a
2
1±1a
1
112
28±6
24
6±1
94
23±6
2
1±1
2
45
11±3
0
0±0
25
6±2
0
1±0
91
11±4b
23
3±1a
53
6±3a
6
1±1a
FN1
56
14±6
15
4±2
48
12±6
1
1±0
FN2
35
9±5
8
2±1
5
1±1
5
1±1
73
9±2b
14
2±1a
89
11±7a
0
0±0a
FA
32
8±3
8
2±1
71
18±14
0
0±0
FN2
41
10±1
6
2±1
18
4±1
0
0±0
FA
FN
NN
AN
Valores P: * P ≤ 0.05; ** P ≤ 0.01; *** P ≤ 0.001; NS P > 0.05; Valores con la misma letra no difieren
estadísticamente. Los días de observación fueron combinados.
La latencia al primer estro fue mayor en las hembras del grupo AN (P < 0.001). Fertilidad y fecundidad fue
mayor en hembras del grupo NN (P < 0.05). Tasa reproductiva fue mayor en hembras del grupo AN (P <
0.01). Estos resultados confirman lo previamente observado por este grupo (Vélez et al., 2015) en donde
la respuesta sexual de la hembras en anestro dependerá en gran medida del comportamiento sexual
mostrado por el macho (Vielma et al., 2009)
89
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 2. Respuesta sexual (estro [comportamiento (%), latencia (hrs) y duración (hrs)], presencia de
ciclos cortos [%], fertilidad [%], fecundidad [%] y tasa reproductiva [%]) de hembras en anestro estacional
en respuesta a machos tratados con fotoperiodo artificial por 2.5 meses (FA) o fotoperiodo natural (FN1;
NN) o combinados (AN).
Grupo
Estro
Fertilidad
Fecundidad
Tasa
Reproductiva
Comportamiento
Duración
Ciclos
cortos
Latencia
NS
NS
NS
**
**
*
*
FA
100
25.2±4a
53
108±12b
68
54
50
FN
60
19±5ab
45
113±22ab
40
38
29
NN
95
14±2b
42
150±15ab
89
65
75
AN
100
16.2±2.5ab
30
169±15a
85
18
82
Valores P: * P ≤ 0.05; ** P ≤ 0.01; *** P ≤ 0.001; NS P > 0.05; Valores con la misma letra no difieren
estadísticamente. Los días de observación fueron combinados.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Concluimos que los machos cabríos puestos en contacto con otros machos cabríos, quienes habían
recibido un tratamiento fotoperiodico en invierno, y permaneciendo juntos dos meses a partir de enero
son estimulados sexualmente y tienen la capacidad de inducir actividad estral en las hembras durante el
anestro. Se recomienda seguir investigando sobre las conductas, hormonas y acciones que están
involucradas en la intercción de machos cabríos.
LITERATURA CITADA
Delgadillo, J.A., Cortez, M.E., Duarte, G., Chemineau, P., Malpaux, B., 2004. Evidence that the
photoperiod controls the annual changes in testosterone secretion, testicular and body weight in
subtropical male goats. Reprod. Nutr. Dev. 44, 183-193.
Delgadillo, J.A., Gelez, H., Ungerfeld, R., Hawken, P.A.R., Martin, G.B., 2009. The ‘male effect’ in sheep
and goats—Revisiting the dogmas. Behav. Brain Res. 200, 304-314.
Flores, J.A., Véliz, F.G., Pérez-Villanueva, J.A., Martínez de la Escalera, G., Chemineau, P., Poindron, P.,
Malpaux, B., Delgadillo, J.A., 2000. Male Reproductive Condition Is the Limiting Factor of Efficiency in the
Male Effect During Seasonal Anestrus in Female Goats. Biol. Reprod. 62, 1409-1414.
Rosales Nieto, C.A., Gamez Vazquez, H.G., Gudino Reyes, J., Reyes Ramirez, E.A., Eaton, M., Stanko,
R.L., Meza Herrera, C.A., Gonzalez Bulnes, A., 2011. Nutritional and metabolic modulation of the male
effect on the resumption of ovulatory activity in goats. Anim. Prod. Sci. 51, 115-122.
Velez Monroy L.I., Rosales Nieto C.A. Flores Nájera M.J., Chávez Solís A.U., Martin G.B. 2015. Nueva
percepción en el efecto macho: Estimulacion entre machos y la respuesta de hembras en anestro. XXVIII
Reunion Nacional de Caprinocultura.
90
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
REGULACIÓN DE LA SÍNTESIS DE S1P Y SU EFECTO SOBRE LA PROLIFERACIÓN DE CÉLULAS
DE LA GRANULOSA.
REGULATION OF S1P SYNTHESIS AND ITS EFFECT ON GRANULOSA CELL PROLIFERATION.
Hernández CCG*1, Guzmán A1, Ortega-Serrano PV1, Romano PMC2, Gutiérrez CG3, Rodríguez A3,
Mondragón JA4, Rosales TAM1.
1Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco, Departamento de Producción Agrícola y Animal;
2Departamento de Fisiología CINVESTAV; 3Universidad Nacional Autónoma de México, Facultad de
Medicina Veterinaria y Zootecnia; 4Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología IPN.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La esfingosina 1-fosfato (S1P) es un metabolito de esfingolípidos de membrana que promueve la
proliferación y sobrevivencia de varios tipos celulares. Estudios previos de nuestro laboratorio han
mostrado que en células de la granulosa de folículos dominantes sanos hay una mayor concentración de
S1P en comparación con células de folículos atrésicos, lo cual sugiere que S1P puede estar involucrada
en el crecimiento folicular (Hernández et al., 2014). Sin embargo los mecanismos que regulan la
producción de S1P en células foliculares así como los efectos de ésta sobre células de la granulosa no
han sido determinados. La síntesis de S1P depende principalmente de la activación por fosforilación de
esfingosina cinasa 1 (SK1). La fosforilación de esta enzima es motivada, además de la propia S1P, por
vitamina D, endotelina, acetilcolina y de algunos factores de crecimiento, entre ellos: PDGF, TNF-α,
VEGF, GDF y EGF, los cuales promueve el crecimiento de tejidos tanto en situaciones fisiológica como
patológicas (Spiegel and Milstein, 2003). Como sabemos, el crecimiento y desarrollo de los folículos
antrales para alcanzar la ovulación, depende de gonadotropinas y factores de crecimiento.
OBJETIVO.
Por lo anterior en este trabajo nos propusimos evaluar el papel que desempeña FSH y VEGF en la
producción de S1P en células de la granulosa en cultivo, así como la participación de este esfingolípido
en la proliferación y sobrevivencia de estas células
MATERIAL Y MÉTODOS
Se colectaron ovarios de vacas sacrificadas en un rastro local y se transportaron al laboratorio en SSF
0.9%. Las células de la granulosa fueron colectadas de folículos de 4-7mm de diámetro y se sembraron
75 X 103 células viables en platos de 96 pozos contenidas en medio McCOy´s 5 A modificado con 10
ng/mL de insulina y 1 ng/mL de LR-IGF-I. Las células se incubaron por 48 y 96h en una atmósfera de 5%
CO2 a 37°C y 95% de humedad (Gutiérrez et al., 1997). Con el propósito de encontrar el tratamiento
adecuado para la mayor producción de S1P, las células fueron tratadas con 0, 0.1, 1 o 10 ng/mL de FSH
y 0, 0.01, 0.1, 1, 10 o 100 ng/mL de VEGF (), así como sus diferentes combinaciones en un diseño
factorial 4 X 6. Después de los periodos de incubación, se determinaron las concentraciones de S1P por
HPLC. Una vez identificadas las dosis más efectivas de las hormonas, mediante Western Blot SDSPAGE se evaluó la expresión de SK1 a las 48h. El efecto proliferativo de S1P sobre células de la
granulosa fue determinado por el ensayo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)- 2,5-difenilltetrazolio
(MTT) incubando las células con S1P (0, 0.1, 1 o 10 ng/mL) por 48 y 96h. Los resultados fueron
analizados mediante contrastes comparando cada tratamiento respecto al control.
RESULTADOS
Los resultados muestran que la adición de 1ng/ml de FSH incrementa (P<0.05) las concentraciones de
S1P en cultivos de células de la granulosa a las 48 y 96h. De manera similar a las 48h pero no a las 96h,
91
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
el uso de 0.01 ng/mL de VEGF aumenta (P<0.05) la producción de S1P. Sin embargo con dosis más
elevadas de FSH o VEGF, se redujo la producción de este esfingolípido, alcanzando niveles similares a
los de las células del grupo control (sin tratamiento). Basados en estos resultado se evaluó el efecto de 1
ng/mL de FSH, 0.01 ng/mL de VEGF y su combinación a 48 h de su cultivos sobre la fosforilación de
SK1. Los resultados muestran que tanto FSH como VEGF, promueven la presencia de SK1 fosforilada en
los cultivos celulares, en tanto que la combinación de estas hormonas, provoca una menor presencia de
esta forma de la enzima. En cuanto al efecto de S1P sobre la proliferación de las células de la granulosa,
encontramos que en cultivos de 48 h pero no de 96 h, la adición de 0.1 ng/mL de S1P incrementa,
(P<0.05) el número de células respecto al control. Sin embargo con 10 ng/mL de S1P, la proliferación
de las células de la granulosa se redujo (P<0.05) en ambos tiempos de cultivo. El uso de 1 ng/mL de
FSH, tuvo un mayor efecto (P<0.05) sobre la proliferación que en los cultivos con S1P. Finalmente, con el
propósito de indagar si existe suma de efectos entre FSH y S1P, se realizaron cultivos con 1 ng/mL de
FSH y 0.1ng/mL de S1P, encontrándose que la proliferación con esta combinación, no fue mayor que
cuando se usaron por separado a las 48 como a las 96 h.
DISCUSIÓN
La adición al medio de cultivo de 1 ng/mL de FSH y 0.01 ng/mL de VEGF incrementa la síntesis de S1P.
En diferentes tipos celulares (endoteliales, neuronas, embrionarias, cancerígenas, ovocitos y
neumocitos), VEGF al unirse con su receptor de tipo tirosina cinasa estimula a la proteína cinasa c
(PKC), la cual activa a SK1 e incrementa la síntesis de S1P intracelular (Spiegel y Milstein, 2003). Por su
parte en células de la granulosa FSH se une a su receptor para estimular al AMPc y este activar a la
proteína cinasa A (PKA) (Bernard et al., 2010) la cual seguramente es la encargada de fosforilar a SK1,
ya que tanto FSH como VEGF promueven la fosforilación de SK1. Muy probablemente estas dos vías,
PKA y PKC son las rutas a través de las cuales VEGF y FSH incrementan la activación de SK1 y así por
lo tanto la producción de S1P.
El uso de 0.1 ng/mL de S1P, así como con 1 ng/mL de FSH incrementan la proliferación de las células de
la granulosa. La S1P actúa vía parácrina y autócrina para estimular la proliferación y sobrevivencia de
células cancerígenas principalmente reduciendo la activación de caspasa-3 e incrementando BcL-2
(Spiegel and Milstein, 2003), probablemente ocurre de esta misma vía en células de la granulosa.
CONCLUSION.
En conclusión nuestros resultados muestran que FSH y VEGF incrementan la producción de S1P en
células de la granulosa en cultivo. Además la adición de S1P al medio de cultivo promueve la
proliferación de estas células a niveles similares a los ejercidos por FSH. Juntos estos resultados
sugieren que FSH y VEGF promueven la síntesis de S1P la cual puede actuar de manera autócrina o
parácrina para promover el desarrollo folicular.
AGRADECIMIENTO
El soporte financiero del presente proyecto fue otorgado por Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología
con número de proyecto CB 34410952
REFERENCIAS.
Bernard DJ, Forton J, Wang Y, Lamba PMD. (2010). Mechanisms of FSH synthesis: what we know, what
we don’t, and why you should care. FertilSteril. Canadá. 93:2465–85.
Gutiérrez CG, Campbell BK, Webb R. (1997). Development of a long-term bovine granulosa cell culture
system: induction and maintenance of estradiol production, response to follicle-stimulating hormone, and
morphological characteristics. BiolReprod. 56(3):608-616
92
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Hernández-Coronado CG., Guzmán A., Espinosa-Cervantes R., Romano MC., Verde-Calvo JR., RosalesTorres AM. (2014). Sphingosine-1-phosphate and ceramide are associated with health and atresia of
bovine ovarian antral follicles. Animal 9(2):308-12.
Rosales TAM., Guzmán SA., Gutiérrez AC. (2012). Desarrollo folicular en rumiantes domésticos. Tropical
and Subtropical Agroecosystems. México. 1:147-160.
Spiegel S., Milstien S. (2003). Sphingosine-1-phosphate: an enigmatic signalling lipid. Nat Rev Mol Cell
Biol. USA. 4:397–407.
93
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DEL EMPADRE DE HEMBRAS CAPRINAS CON MACHOS TRATADOS CON
TESTOSTERONA Y DOS NIVELES DE ALIMENTACIÓN.
EFFECT OF BREEDING OF FEMALE GOATS WITH MALES TREATED WITH TESTOSTERONE &
TWO FEEDING LEVELS.
Machado-Ramos MG1, López-Jara AG1, Benítez-Rivas JJ1, Ángel-García O1, Vélez-Monroy LI 2, ChávezSolis AU2, Véliz-Deras, FG1, Mellado M, De Santiago-Miramontes, MA1*
1Postgrado de producción Agropecuaria, Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro, Torreón,
Coahuila, México; 2Instituto Nacional de Investigaciones Forestales Agrícolas y Pecuarias, Matamoros,
Coahuila, México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La actividad reproductiva de los caprinos puede ser influenciada por varios factores como la raza, el
fotoperiodo, la condición corporal relaciones socio-sexuales, entre otros (Blache, et al., 2008). La
estacionalidad reproductiva de los caprinos repercute en su productividad afectando la economía de los
productores pues para la mayoría, es su única actividad económica. Es por ello que se han desarrollado
diversos métodos que permitan su reproducción a contra-estación mediante la aplicación de algunos
protocolos para inducir y/o sincronizar la actividad reproductiva en las cabras. El efecto macho es una
práctica eficaz para inducir el estro y la ovulación en cabras estacionalmente anovulatorias, ésta técnica
requiere una mínima mano de obra e inversión, permitiendo también la programación de partos, lo cual la
convierte en una alternativa viable para los caprinocultores. Para que este método sea eficaz se ha
recomendado realizarlo durante la época de transición o de anestro “superficial” y es necesario que los
machos desplieguen conductas sexuales (Luna-Orozco, et al., 2012). La actividad sexual se puede
conseguir en la época de “reposo sexual” mediante un tratamiento con fotoperiodo artificial de días
largos, (16 h luz/8 h obscuridad) durante 2.5 meses, sin embargo, esta técnica demanda instalaciones
especiales (electricidad), confinamiento y manutención para los machos, lo cual puede resultar
inaccesible para productores en condiciones marginales. Reportes recientes acerca de la aplicación de
50 mg o 25 mg de testosterona (Luna-Orozco, et al., 2012, Ángel García, et al 2015) cada tercer día
durante las 3 semanas previas al empadre demuestran que no existe diferencia significativa con el
tratamiento fotoperiódico, y resulta más sencillo y económico. Referente a los machos se ha señalado
que su subalimentación provoca un retraso en el inicio de la actividad sexual, un tardío incremento del
peso testicular, bajos niveles de testosterona y de olor sexual en comparación con los machos bien
alimentados (Walkden-Brown, et al., 1994).
OBJETIVO
El objetivo del presente estudio fue registrar la respuesta estral y ovulatoria de las hembras multirraciales
locales empadradas con machos jóvenes sometidos a testosterona exógena y con 2 diferentes niveles de
alimentación.
MATERIAL Y MÉTODOS
El experimento se llevó a cabo en la Comarca Lagunera de Coahuila, en el norte árido de México (26 °
23' N y longitud 104 ° 47 'O, 1200 msnm), con precipitación de 230 mm. La temperatura máxima es de
41 °C durante mayo y junio, y la más baja (-3 °C) en diciembre y enero. La humedad relativa varía entre
26,1 y 60,6 %, con un rango en el fotoperiodo de 13 h 41 min durante el solsticio de verano (21 de junio)
a 10 h 19 min durante el solsticio de invierno (21 de diciembre).Se utilizaron 116 cabras locales
multíparas anovulatorias de la raza local, homogéneas en condición corporal (CC; 2.0; rango: 1-4;
1=emaciado, 4=obeso). Se formaron 4 grupos con nomenclatura referente al tratamiento de los machos
(DCT: dieta completa + testosterona; n=31, DBT: dieta baja + testosterona; n=27, DCC: dieta completa
sin testosterona; n=30 y DBC: dieta baja sin testosterona: n=28). Los machos de dieta completa tenían
94
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
una condición corporal de 2.5, y el de machos de dieta baja 1.7. Las hembras fueron aisladas de los
machos dos meses antes del inicio del experimento. Los grupos se mantuvieron separados por una
distancia mayor a 100 metros. Las hembras se mantuvieron en sistema extensivo con pastoreo en la flora
nativa de 10:00-19:00 h con confinamiento nocturno, agua limpia y sales minerales a libre acceso. Los
días -30, -20 y -10 todas las cabras fueron sometidas a revisión de actividad ovárica mediante ecografía
transrectal (Aloka SSD-500) para diagnosticarlas anovulatorias. El 17 de marzo 2015 (un día antes de la
introducción de los machos) a cada hembra se le administraron 20 mg de progesterona intravulvar (Véliz
et al., 2014; Progestelas E, Lab. Aranda, DF, México) con el fin de reducir la cantidad de ciclos cortos.
Variables evaluadas: actividad estral: Diariamente, de 07:00 a 09:00 y de 18:00 a 20:00 h se
intercambiaron los machos entre los 2 corrales de hembras sometidas a machos tratados con
testosterona, de igual manera entre los grupos de hembras sometidas a machos sin tratamiento hormonal
con la finalidad de que detectaran a las hembras en celo, considerándolas en estro si éstas permanecían
inmóviles a la monta. Latencia al estro: se contabilizó el intervalo de horas desde la introducción de los
machos y la aceptación de la monta. Para detectar actividad ovárica se realizó ultrasonografía transrectal
(aloka SSD-500) 10 días después de la introducción de los machos. Tratamiento hormonal de los
machos: Fueron tratados mediante la administración IM de 25 mg de testosterona (Testosterone 50, Lab.
Brovel, DF, México) cada tercer día durante las 3 semanas previas al empadre. Análisis estadísticos: La
comparación de proporciones diaria y acumulada de cabras que presentaron estro, y ovulación, se realizó
con prueba de X2 y la latencia al estro mediante la prueba t de student (SYSTAT).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El tiempo entre la inducción de los machos y el inicio de la actividad estral fue semejante (P > 0.05) entre
los grupos DCT y DBT (95.64 h vs 112.11h), y diferente respecto a los grupos expuestos a machos no
tratados con testosterona (P < 0.001) dado que en éstos grupos no se registraron estros ni ovulaciones.
Las proporciones de estro y ovulación a los === días no difirieron (P > 0.05) entre los grupos expuestos a
machos tratados con testosterona (DCT, DBT), sin embargo si hubo diferencia (P < 0.001) con respecto a
los 2 grupos expuestos a machos no tratados con testosterona (DCC, DBC). La proporción de hembras
que presentaron celo las primeras 72 horas de contacto con machos con alimentación completa y
tratados con testosterona (DCT) mostró diferencia (P < 0.05; 22/31; 71%) con respecto a las expuestas a
machos con alimentación insuficiente y tratados con testosterona (DBT; 12/27; 44%; Tabla 1.).
CONCLUSIÓN.
Estos resultados nos permiten concluir que el tratamiento con testosterona exógena estimula el estro y la
ovulación y además que una buena alimentación en los machos puede adelantar el estro en las hembras
anovulatorias.
Tabla 1- Comportamiento sexual y ovulatorio de cabras multíparas anovulatorias expuestas a
machos tratados o no tratados con testosterona y con 2 diferentes niveles de alimentación.
DCT
DBT
DCC
DBC
Hembras que presentaron estro
0-3 días
22/31 (71%) a
12/27 (44%)b
0b
0b
Hembras que presentaron estro
0-7 días
30/31 (97%) a
23/27 (85%) a
0b
0b
Hembras que ovularon
29/31 (94%) a
22/27 (81%)
a
0b
0b
Latencia al estro (h)
84.03± 5.3a
102.7±5.7 a
-
-
Duración promedio del estro (h)
24 a
24 a
-
-
95
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
LITERATURA CITADA
Ángel GO, Meza-Herrera CA, Guillen-Muñoz JM, Carrillo-Castellanos E, Luna-Orozco JR, Mellado M,
Véliz-Deras FG. 2014. Seminal characteristics, libido and serum testosterone concentrations in mixedbreed goat bucks receiving testosterone during the non-breeding period. Journal of Applied Animal
Research, DOI: 10.1080/09712119.2014.980420.
Blache D, Maloney S K, Rovell DK. 2008. Use and limitations of alternative feed resources to sustain and
improve reproductive performance in sheep and goats. Animal Feed Science and Technology, 147 (1),
140-157.
Luna-Orozco JR, De Santiago-Miramontes MA, García JE, Rodríguez-Martínez R, Meza-Herrera CA,
Mellado M Véliz-Deras FG. 2012. Influence of sexually inactive bucks subjected to long photoperiod or
testosterone on the induction of estrus in anovulatory goats. Trop Anim Health Prod 44: 71-75.
Veliz Deras F, Contreras V, Rodriguez-Martinez R, Arellano G, De Santiago-Miramontes MA, Mellado M,
Meza-Herrera C. 2014. The use of 10 mg intravulvar progesterone and eCG induces sexual activity of
anestreous goats. In: Reproduction in domestics animals (ESDAR) Helsinki, Finland,11-13th september
2014; Vol 9 Supl 13.
Walkden-Brown SW, Restall BJ, Norton BW, Scaramuzzi RJ, Martin GB.1994. Effect of nutrition on
seasonal patterns of LH, FSH and testosterone concentration, testicular mass, sebaceous gland, volume
and odour in Australian Cashmere goats. J Reprod Fertil 102: 351-360.
96
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EVALUACIÓN DE LA SOBREVIVENCIA EN EL MANEJO DE MASCULINIZACION DE COLISA LALIA
(TRICHOGASTER LALIUS).
EVALUATION OF THE SURVIVAL IN THE HANDLING OF MASCULINIZATION OF COLISA LALIA
(TRICHOGASTER LALIUS).
Negrete SMH1*, García CLE1, Campos MGR1 y Martínez EDA1.
1
Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Xochimilco.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Las exigencias actuales del mercado de peces ornamentales y el aumento de la competitividad de este
sector hacen que se busquen mecanismos para mejorar la productividad y rentabilidad de las unidades
de producción. En el caso de colisa lalia (Trichogaster lalius) los machos desarrollan coloraciones en
rojo y azul, en tanto que las hembras son grises, lo que les da un valor superior en el mercado. Una
estrategia para incrementtar el valor del cardumen es el uso de la masculinización, mediante el empleo
de andrógenos naturales y/o sintéticos que son aplicados durante las primeras semanas de vida del
alevinaje, con la finalidad de que las hembras presenten caracteres sexuales secundarios masculinos,
como es el caso de la coloracion. En estudios en los que se ha utilizado esteroides sintéticos, estos se
hacen llegar a la gónada del organismo a través de mezclas con el alimento, por la inmersión constante o
discreta de las crías en baños con la hormona disuelta en el agua, implantes, inyección y por medio de
bioencapsulado o enriquecimiento hormonal de alimentos vivos, por ejemplo los nauplios de artemia
(Artemia spp) (Vidal et al., 2009).
OBJETIVO
Evaluar la tasa supervivencia debido al manejo asociado al tratamiento de masculinización por inmersión
discreta con 17 α Metiltestosterona en crías de colisa lalia (Trichogaster lalius).
MATERIALES Y MÉTODOS
El estudio se realizó en el laboratorio de Sistemas Acuícolas, del departamento El Hombre y su Ambiente
de la Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Xochimilco. Se utilizaron 2325 organismos
provenientes de dos lotes de desoves de T. lalius los cuales se sembraron en recipientes con 1.5 litros
de agua a una densidad de 66 organismos/l. las tinas se distribuyeron en tres tratamientos; el primero
constó de 10 réplicas (IN17) y recibió una inmersión discreta de tres horas con 250µ/l de 17 α
metiltestosterona, a los 2, 5 y 8 días posteriores a la eclosión; en el segundo grupo (IN) se utilizaron 6
réplicas donde se realizó el mismo manejo que en el tratamiento anterior, pero sin utilizar hormona; y el
tercer grupo (SM) constó de 8 réplicas y no fueron expuestas a ningún manejo de inmersión. Las crías se
alimentaron las primeras 72 horas post-eclosión con su propio saco vitelino, posteriormente se les
alimento con alimento vivo (Panagrellus redivivus), se analizó el porcentaje de supervivencia de cada
tina al final de las inmersiones, considerando el tratamiento y el bloque como variables explicativas y
usando un modelo lineal generalizado.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
La tasa de supervivencia media (desviacion estandar) para IN17 fue de 83.8% (9.49%), para IN fue de
83.5% (11.70%) y en el caso de SM de 85.8% (10.15%). No se detectaron diferencias significativas entre
los tratamientos (P=0.5667). Los resultado de supervivencia fueron menores que los mencionados
Kirankumar y Pandian (2002) en otros laberintidos (Betta splendes) para un rango 100 a 700 µ/l pero
superiores a las de 900 y 1000 µ/l usadas en este mismo estudio. En el estudio similar realizado por
Mejía y Román, en 2009, en la trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss) se obtuvo una tasa de
97
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
supervivencia de 36.67% pero a un mayor tiempo de exposicion. López et al. (2007) reportan una tasa de
supervivencia, en la masculinización de la tilapia roja (Oreochromis spp) de 83%, cuando fueron
tratadas con 1800 μg/l de 17 α metiltestosterona.
CONCLUSIÓNES
De acuerdo con los resultados obtenidos, ni el uso de 17 α metiltestosterona ni el manejo requerido para
hacerlo tienen un efecto negativo sobre la supervivencia de los alevines de Trichogaster lalius.
BIBLIOGRAFÍA
Kirankumar Santhakumar y Pandian thavamani Jegajothivel 2002. Effect on Growth and Reproduction of
Hormone Immersed and Masculinized Fighting Fish Betta splendens. Journal of experimental zoology
(293):606–616.
Vidal Juan Manuel, Álvarez González Wilfrido, López Carlos Alfonso, Contreras Sánchez Miguel,
Hernández Franyutti Arlette Amalia y Hernández Vidal Ulises 2008. Técnicas de reversión sexual
Aplicadas en acuicultura. Laboratorio de acuacultura, división académica de ciencias biológicas de la
universidad Juárez autónoma de tabasco, villa hermosa tabasco, México.
Mejía Aristizabal Pablo y Román Londono Ana Maria 2009. Porcentajes de reversion sexual en trucha
arcoiris (Oncorhynchus mykiss) para la obtencion de neomachos mediante la aplicacion de la hormona
masculinizante 17 α-metil testosterona por el metodo de ingestion (larvas) e inmersion (ovas y larvas).
Biotecnologia y Desarrollo Integral de Sistemas Pecuarios. Universidad CES. Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia Medellín.
López Carlos A, Carvajal Dewin L, Botero Aguirre M. 2007. Masculinización de tilapia roja (Oreochromis
spp) por inmersión utilizando 17 alfa–metiltestosterona. Rev Col Cienc Pec 20:318-326.
98
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CAMBIOS HISTOMORFOLÓGICOS EN EL TESTÍCULO DE RATA WISTAR EN LA EDAD ADULTA,
OCASIONADOS POR LA ADMINISTRACIÓN DURANTE EL PERIODO CRÍTICO DE
DIFERENCIACIÓN SEXUAL HIPOTALÁMICA CON TAMOXIFEN (TX) Y/O ACEITE DE SOYA (AS).
HISTOMORPHOLOGICAL CHANGES IN THE WISTAR RAT TESTIS IN ADULTS, CAUSED BY THE
ADMINISTRATION DURING THE CRITICAL PERIOD OF HYPOTHALAMIC SEXUAL
DIFFERENTIATION WITH TAMOXIFEN (TX) AND / OR SOYBEAN OIL (SO).
González GA1*, González PE1, Fierro FF2, Juárez MMDL1, Pérez-Rivero JJ4, Ortega CC3, Marquez CB4,
Vergara OM4.
1FMVZ-UNAM. 2UAM-I. 3UIMB,
HE,CMNSXXI-IMSS. 4UAM-X.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Durante el desarrollo, el cerebro de la rata macho está expuesto a altos niveles de testosterona testicular
aumentando a finales de la gestación, particularmente dos horas después del nacimiento. En las
neuronas, la enzima aromatasa es la encargada de transformar a la testosterona en estradiol, el cual
ejerce un efecto organizativo (fase organizacional) que masculiniza el hipotálamo durante el período
prenatal y posnatal temprano, conocido como “periodo crítico”, altamente sensible a las hormonas
esteroides. Sin embargo, en la edad adulta (fase activacional) el estradiol regula los circuitos neuronales
encargados de la secreción hormonal tónica y del comportamiento reproductivo característicos de los
machos (Herrera y col., 2013), participa en la espermatogénesis y en la maduración de los
espermatozoides en el epidídimo. Su papel en la reproducción sexual se ha confirmado mediante el uso
de antiestrógenos como el Tx, el cual puede tener un efecto agonista o antagonista, dependiendo de la
dosis utilizada, el órgano blanco, el sexo y la especie. El efecto del Tx es aun controversial, pero se sabe
que durante el período crítico, en el hipotálamo, impide la interacción de estradiol con su receptor y por lo
tanto, inhibe a la enzima aromatasa y con ello el efecto del estradiol para producir la masculinización
cerebral. Los compuestos que alteran el efecto hormonal responsable de funciones vitales como el
crecimiento, el desarrollo sexual y el comportamiento son llamados disrruptores endocrinos, los cuales,
pueden enviar mensajes contradictorios al cuerpo, causando problemas de salud con efectos
irreversibles.
El efecto del Tx sobre la reproducción animal no es claro, y menos aún a largo plazo. Por ello, el objetivo
de este estudio fue determinar el efecto de una sola administración de Tx y AS (utilizado como vehículo),
durante el período crítico de la diferenciación sexual hipotalámica en ratas macho recién nacidas, sobre
la histomorfología testicular en la edad adulta.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron 15 ratas macho recién nacidas de la cepa Wistar, divididas al azar en 3 grupos (n = 5 por
grupo). Una hora después del nacimiento, a un grupo se administró por vía subcutánea 20 μL de AS
como vehículo, otro grupo fue tratado con 200 μg de Tx en 20 μL de AS, y un último grupo se manipulo
únicamente para determinar la influencia del estres.Todas las ratas fueron pesadas y sacrificadas por
dislocación cervical a los 90 días post-tratamiento. Se extrajeron los testículos, los cuales fueron,
pesados y fijados, para ser procesados para evaluación histológica, para lo cual se realizó tinción con
Hematoxilina-Eosina. Para las evaluaciones morfométricas se observaron al microscopio cortes
transversales de los testículos y se digitalizaron con el software LSM5 para su análisis en campos de
amplificación de 20X y 40X. Se analizaron por tres morfólogos veterinarios expertos, 10 túbulos por cada
sección de la laminilla y los resultados individuales se promediaron. Para el análisis de los datos se
realizó una prueba de Shapiro Wilks y ANOVA de una vía, con Software Paleontological Statistics.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
99
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Este trabajo se demuestra que una sola administración de Tx y/o AS durante el período crítico de la
diferenciación sexual del hipotálamo, afectan permanentemente la histomorfología testicular, la
espermatogénesis y el peso corporal en la edad adulta. Las alteraciones incluyen: vacuolización,
disminución del número de espermatogonias y de células de Sertoli (CS); con Tx se reduce el peso
testicular, el diámetro y área de los túbulos seminíferos y la altura del epitelio germinal (EG), se ve un
incremento en el espacio intertubular (EIT). El AS solo, redujo más que Tx el número de espermatocitos y
espermátides, sin embargo, no se afectó el número de células de Leydig (CL). En estudios realizados por
el grupo de Pérez-Rivero y col., (2009), han reportado entre las alteraciones más frecuentes;
vacuolización, así como disminución de la altura del EG y aumento del EIT, en testículos de Desmodus
rotundus y canideos criollos, adultos, alimentados con dietas adicionadas con fitoestrógenos
(coumestrol). A pesar de que no se determinó la composición completa del aceite utilizado, la soya y sus
derivados son fuente reconocida de Fito estrógenos. Probablemente el contenido de Fito estrógenos en
el aceite, interrumpió el proceso normal de diferenciación sexual cerebral en el grupo tratado con vehículo
y con ello se modificó la secreción gonadotropina necesaria para el desarrollo de la estructura funcional
del testículo. El desarrollo normal y el mantenimiento de la espermatogénesis en el testículo, son
controlados principalmente por gonadotropinas y testosterona, pero sus efectos son modulados por
factores locales, uno de ellos son los estrógenos [Carrea et al., 2003]. La administración de Tx en etapa
perinatal bloquea la masculinización de los circuitos neuronales que modulan el comportamiento y la
secreción tónica de gonadotropinas. El mantenimiento del número de células de Leydig, no es garantía
de que no se haya modificado su actividad esteroidogénica, toda vez que el ambiente del EIT se
modificó, con edematización y dispersión de las CL. La reducción de la ganancia de peso de los animales
tratados pudiera deberse a insuficiente estímulo de testosterona en los tejidos periféricos, sea por bajas
concentraciones efectivas del esteroide libre o por resistencia a esa hormona.
Las CS se encuentran estrechamente unidas con CS adyacentes, formando la estructura básica de la
barrera hematotestícular, proveen de hormonas y nutrientes a las células espermatogénicas. En los
animales tratados, el número de CS se reduce alrededor de un tercio, seguramente se afectó el
funcionamiento de esa barrera afectando el proceso de espermatogénesis e incluso el número de
espermatogonias.
Son pocos los estudios que reportan los efectos del AS. Rengin Kosif y col., 2010, encontraron cambios
relacionados con reacciones inflamatorias en ratas macho adultas a las que se les administraron dosis de
500 mg/día por vía oral. El análisis químico del AS utilizado en este experimento, revelo solo el contenido
de ácido linoleico (Ω6), que tiene acción pro inflamatoria. Éste ácido y el α-linolénico (Ω3) están presentes
en las CS y el las células germinales, por lo que la administración de estos, podría afectar estos tipos
celulares.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Durante el período crítico de diferenciación sexual del hipotálamo de la rata, la administración de una sola
dosis suficiente de Tx y/o AS, pueden altera la histomorfología testicular y la espermatogénesis en la
edad adulta. Algunos ácidos grasos o aceites podrían operar como disrruptores endocrinos, lo cual,
requiere más atención del sistema de investigación, por tratarse de alimentos de consumo generalizado y
que administrados en una sola dosis en la etapa organizacional pueda tener efectos reproductivos en la
etapa de activación del sistema nervioso, y su inferencia a nivel gonadal.
RECONOCIMIENTOS
A la M.V.Z. Cesilia Sánchez Martínez, por su apoyo en el desarrollo de este trabajo.
Al CONACYT por la beca otorgada durante el Doctorado en Ciencias de la Producción y de la Salud
Animal, de la FMVZ-UNAM.
REFERENCIAS.
100
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Herrera GH, Rosado GA, Vergara OM, Salcedo VM, Miliar GA, Heuze DIY y Rosales TAM. Expresión
génica relacionada con el ciclo celular, apoptosis, sinaptogénesis y diferenciación celular en la
diferenciación sexual de la rata. Rev. Mex. Cienc. Pecu., 2013;4(3):289-304.
Perez RJJ, Martinez MJJ, Perez MM, Aguilar SA, Garcia SMD and Serrano H. Phytoestrogen treatment
induces testis alterations in dogs. Potential use in population control. Vet. Res. Commun., 2009; 33:87–
95.
Rengin K, Fahri Y, Gülsün AE and Murat, Diramali. Histopathological Effects of Aloe barbadensis and
Soybean Oil on Rat Liver. Int. J. Morphol., 2010; 28(4):1101-1106.
Carreau S, Lambard S, Delalande C, Galearaud DI, Bilinska B and Bourguiva S. Aromatase expression
and role of estrogens in male gonad: a review. Reprod. Biol. Endocrinol., 2003; 35, 1–6.
101
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO PROTECTOR DE LOS EXTRACTOS VEGETALES AÑADIDOS A UN DILUYENTE DE
CONGELACIÓN SEMINAL, SOBRE LA INTEGRIDAD ESPERMÁTICA DEL OVINO.
PROTECTIVE EFFECT OF THE ADDITION OF VEGETABLE EXTRACTS TO A CRYOPRESERVATION
SEMEN DILUENT, ON THE OVINE SPERM INTEGRITY.
Guadarrama VII*, Pescador-Salas N, Cano-Torres R, García-Dalmán C, y Felipe-Pérez YE
Departamento de Reproducción Animal. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UAEMéx, Campus
“El Cerrillo”, El Cerrillo Piedras Blancas, Toluca, Estado de México C.P. 50090
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Los cambios a los que son sometidas las células espermáticas durante los pasos involucrados en la
criopreservación (congelación y descongelación) causan daños bioquímicos y funcionales a las células
espermáticas, los cambios de temperatura provocan un aumento en la liberación de especies reactivas
de oxígeno (ROS) que conlleva a un estrés oxidante y daño en la membrana celular, que a su vez es
regulada por el citoesqueleto de actina. La polimerización y despolimerización de esta proteína está a
cargo de la profilina (proteína de ensamble). Los cambios estructurales que acontecen en el citoesqueleto
espermático se ven reflejados en la motilidad y viabilidad, y por consiguiente en la capacidad fecundante.
Los espermatozoides ovinos son muy sensibles a las alteraciones del citoesqueleto espermático por
efecto de la criopreservación y sufren un daño severo ante estos cambios. A partir de ello, se propone
como una alternativa el uso de antioxidantes naturales, obtenidos de extractos vegetales.
OBJETIVO
El objetivo del presente estudio fue evaluar y comparar el efecto de la adición de extractos vegetales con
propiedades antioxidantes sobre la viabilidad espermática, la respuesta membranal y la integridad del
citoesqueleto de actina en los espermatozoides ovinos frescos y criopreservados, mediante técnicas
experimentales y computacionales, para preservar la calidad espermática del semen ovino postcongelación.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se obtuvieron muestras de 6 sementales ovinos, las cuales fueron evaluadas con tres repeticiones antes
y después de la congelación en un diluyente comercial como grupo testigo, el cual fue enriquecido con
extractos acuosos de Chenopodium ambrosioides (Epazote: Ep), Allium cepa (Cebolla: Ce) y Rosmarius
officinalis (Romero: Ro), en tres diferentes niveles de inclusión (2.5 g, 5 g y 10 g), bajo tres diferentes
tiempos de incubación a 37°C, siendo 0, 1, 2 y 3 horas. Los extractos fueron realizados obteniendo los
vegetales en estado fresco y todos fueron provenientes de la región central del Estado de México
(Tenango del Valle y Malinalco). Se realizó la evaluación espermática de rutina, incluyendo los
parámetros de viabilidad espermática (Eosina-Nigrosina), la respuesta membranal (prueba HOST) y la
integridad del citoesqueleto de actina (mediante inmunofluorescencia indirecta con faloidina rodaminada).
Los datos fueron analizados mediante ANOVA de rangos con Kruskal-Wallis, el método de Dunett y la
prueba de Tuckey con el programa Sigma Plot, versión 12.5.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Viabilidad espermática. En semen fresco se observó que en todas las muestras, la viabilidad fue
decreciendo en un 15% en promedio, conforme se prolongó el tiempo de incubación, sin embargo, con la
adición de los diferentes extractos al diluyente comercial para congelación se encontraron diferencias
estadísticas en los espermatozoides de ovino entre los diluyentes al tiempo 0, 1 y 3 horas (T0, T1 y T3),
siendo los valores más bajos los observados en los extractos de Ce al T0 (73 al 80%); comparados con
102
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
los extractos de Ep que fueron los más elevados (85 al 90%), cuyos valores fueron distintos a la muestra
control (80%); (P <0.05).
Mientras que para los espermatozoides descongelados se observaron
diferencias estadísticas entre los diluyentes al tiempo T0 y T3, (P <0.05). Al T1 se encontró diferencia
estadística altamente significativa entre el diluyente control y el diluyente enriquecido con Chenopodium
ambrosioides al 5% (Ep 5g), (P=0.021). En contraste, en los espermatozoides descongelados se observó
una drástica disminución de la viabilidad, perdiéndose aproximadamente el 40%, mientras que la muestra
enriquecida con Ep 5 g fue la que mejor mantuvo la viabilidad incluso en T3 de incubación, no obstante,
no se observaron diferencias estadísticas entre los tratamientos y el diluyente control (P=0.05).
Respuesta membranal. En el semen fresco, la mejor respuesta positiva a la prueba HOST se observó
en las muestras diluidas con Ce 2.5g y Ep 10g en el T0 (90.6%), mientras que al T3, la mejor respuesta
se observó con Ep 5g (50%), sin embargo, en este tiempo de incubación las diferencias no fueron
significativas. Mientras que en el semen descongelado, se observó una drástica pérdida de la respuesta
membranal en promedio del 60%, siendo las células menos afectadas las que fueron diluidas con el
extracto de Ep 5g, las cuales mantuvieron una respuesta HOST positiva al T0 del 30% y del 16% al T3 (P
<0.05).
Citoesqueleto espermático.En todas las células espermáticas observadas fue notoria la pérdida de la
fluorescencia emitida después de haberlas sometido al proceso de criopreservación, lo cual indica que la
congelación y descongelación afecta gravemente al citoesqueleto de actina, y dado que el citoesqueleto
de actina es el encargado de regular el volumen celular, esto explica que al verse alterado el
citoesqueleto en consecuencia se observará una pérdida de la respuesta membranal con la prueba
HOST. Lo anterior es una correlación entre la integridad del citoesqueleto y la respuesta membranal, lo
cual explica por qué se alteraron los resultados del apartado anterior.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
En conclusión el diluyente enriquecido con Chenopodium ambrosioides (Ep 5g) incrementó la viabilidad y
respuesta membranal en los espermatozoides criopreservados del ovino. Sin embargo, se observó que
pese al uso de los antioxidantes vegetales, la criopreservación altera al citoesqueleto de actina en los
espermatozoides de ovino; sin embargo, muchas células poseen la capacidad de reacomodar sus
proteínas del citoesqueleto para recuperar su funcionalidad.
La adición de antioxidantes naturales ofrece una buena alternativa para mejorar los protocolos de
congelación, los cuales están despertando un alto interés debido a su economía, fácil accesibilidad y
elevada seguridad para su empleo en los espermatozoides de ovino, para contrarrestar y disminuir los
problemas de toxicidad que conlleva el uso de antioxidantes sintéticos.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Barros, L., Pereira, E., Calhelha, C., Dueñas, M., Carvalho, A. M., Santos-Buelga, C., & Ferreira, C. R.
(2013). Bioactivity and chemical characterization in hydrophilic and lipophilic compounds of Chenopodium
ambrosioides L. Journal of functional food, 1732-1740
Felipe-Pérez, Y. E., Valencia, J. L., Juárez-Mosqueda, M. L., Pescador, N., Roa-Espitia, A. L., &
Hernández-González, E. O. (2011). Cytoskeletal proteins Factin and b-dystrobrevin are altered by the
cryopreservation process in bull sperm. Cryobiology, 64: 103-109
Figueredo, C. T., Fernandez, S. E., & Corsini, D. C. (2013). Cryopreservation of boar semen: progress
and prespectives. Revista CES Medicina Veterinaria y Zootecnia, 8 (2): 132-140.
Landa-Pineda, M. C., Guidos-Fogelbach, G., Marchat-Marchau, L., López-Hidalgo, M., Arroyo-Becerra,
A., & Reyes-López, C. S. (2013). Profilinas: alergenos con relevancia clínica. Revista Alergia México,
129-143
Malo, C., Gil, L., Cano, R., Martínez, F., & Galé, I. (2011). Antioxidant effect of rosemary (Rosmarinus
officinalis) on boar epididymal spermatoza during cryopreservation. theriogenology, 1735-17.
103
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
FERTILIDAD AL PRIMER SERVICIO EN VACAS TRATADAS CON DISPOSITIVOS INTRAVAGINALES
MÁS LA ADICIÓN DE SOMATOTROPINA RECOMBINANTE BOVINA AL MOMENTO DE LA
INSEMINACIÓN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO.
FIRST SERVICE FERTILITY IN COWS TREATED WITH INTRAVAGINAL SLIDES MORE THE
RECOMBINANT BOVINE SOMATOTROPIN ADDICTION AT THE MOMENT OF ARTIFICIAL
INSEMINATION AT FIXED TIME.
Cuicas HR1*, Segura CJC2, Santos ER3, Gutiérrez SI1, Cosme SR1, Terrón MMA1, Guadarrama TV1,
Gómez VJC1, Alonso GJ1, Jauregui PI1, Racanco DJJ1.
1Unidad Académica de Medicina Veterinaria y Zootecnia No. 1-UAGRo; 2Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia-UADY; 3CIR Pacífico Sur-INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Uno de los principales factores que contribuyen a mejorar el retorno económico de una explotación
ganadera es la optimización de la eficiencia reproductiva. La tasa de preñez tiene un impacto muy
importante sobre la ecuación económica de un establecimiento de cría (Baruselli et al., 2003). Una
hembra en condiciones favorables, tiene la capacidad de producir un becerro por año, con un intervalo
entre partos de 12 meses. Para lograr este índice, las vacas deben quedar preñadas entre los 75 y 85
días después del parto (Gallegos- Sánchez et al., 2005). La tasa de gestación en los hatos de doble
propósito en el trópico, es baja 40% (Román, 1981), debido a diversos factores, como el estrés calórico,
la mala nutrición de las hembras reproductoras, falta de detección de celos o presencia de celos
silenciosos. La muerte embrionaria temprana es una de las principales causas de pérdidas de
gestaciones en el bovino. Al respecto, se han evaluado diversas estrategias para disminuir las perdidas
embrionarias tempranas, encontrándose un aumento en la fertilidad mediante la administración de la
somatotropina recombinante bovina (bST) (Bridges et al., 2005). Morales et al. (2001) propusieron que el
tratamiento con bST en vacas repetidoras el día del estro, podría favorecer el desarrollo embrionario, lo
cual se reflejaría en un incremento de la tasa de concepción y que 500 mg bST al inicio del estro y una
segunda inyección 10 días después, incrementa la tasa de concepción en un 35%. Esta situación motiva
a encontrar alguna estrategia que incremente la fertilidad en vacas de primer servicio. Cabe destacar
además que el ganado utilizado en los trabajos antes mencionados era Bos taurus. El ganado que más
predomina en la región de Tierra Caliente del Estado de Guerrero es Bos taurus / Bos indicus, existiendo
escasos reportes en ganado de doble propósito sobre la utilización de somatotropina bovina en
protocolos a base de dispositivos intravaginales bovinos.
OBJETIVO.
Determinar el efecto de la administración de 500mg de bST al momento de la inseminación artificial a
tiempo fijo en vacas de doble propósito y el uso de dispositivos intravaginales bovino nuevos y de
segundo uso sobre la tasa de gestación de vacas Suizo x Cebú.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El presente trabajo se realizó en dos municipios de la Tierra Caliente de Guerrero como son Tlapehuala y
Zirandaro de los Chavez, Gro., que se encuentran a 300 y 199 msnm respectivamente, entre los
paralelos 18°16’17” latitud norte y los 100°23´14” longitud oeste del meridiano de Greenwich. La
precipitación pluvial es de 450 mm anual. El clima es cálido-subhúmedo con temperaturas entre los 26°C
y 35°C (INEGI, 2000).
Se utilizaron 43 vacas Bos indicus x Bos taurus multíparas de primer servicio, con una condición corporal
en promedio de 3 escala del 1 al 5., clínicamente sanos, sin alteración del aparato reproductor. Los
animales de estudio pertenecían a un sistema de producción extensivo, en donde pastoreaban en
parcelas con pasto insurgente (Brachiaria brizantha), llanero (Andropogon gayanus), sorgo forrajero
(Sorghum bicolor) y en praderas con grama nativa (Paspalum spp). Los animales llevaban un control
sanitario, con calendarios de desparasitación cada 6 meses, vacunación anual y bacterinización cada 6
meses. Las vacas, se identificaron mediante aretes metálicos en la oreja. Se utilizó un diseño
completamente al azar con cuatro tratamientos y diferente número de repeticiones. Los animales
utilizados se asignaron aleatoriamente a uno de los cuatro tratamientos de la siguiente manera:
104
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Tratamiento 1: Aplicación de dispositivos intravaginales bovinos (DIB) nuevos más una dosis de 500 mg
de bST al momento de la inseminación artificial a tiempo fijo (n=11 vacas). Tratamiento 2: DIB de
segundo uso más 500 mg de bST. (n=12 vacas). Tratamiento 3: DIB nuevos sin bST (n=9 vacas).
Tratamiento 4: Aplicación de DIB de segundo uso sin inyección de bST (n=11 vacas). Todas las
hembras se sometieron a un protocolo de sincronización con DIB nuevos y de segundo uso para la
regulación del ciclo estral que contenía 1 g de progesterona natural, más una inyección intramuscular de
benzoato de estradiol (2 mg). El día de la aplicación de los DIB se consideró como día cero del
tratamiento. El día 8 se extrajeron los DIB, al día 9 se aplicó 1 mg de benzoato de estradiol.
Posteriormente en el día 10 las hembras fueron inseminadas artificialmente a tiempo fijo (IATF) de 52 a
56 horas posretiro de los DIB. El diagnóstico de gestación lo realizó una misma persona en todos los
animales de estudio mediante palpación rectal en un rango de 40 a 45 días después de la IATF.
Análisis Estadístico. Se obtuvieron las tasas de gestación por tratamiento y se determinó el efecto del uso
de DIB nuevos o de segundo uso con y sin la aplicación de bST sobre la tasa de gestación mediante
procedimientos de regresión logística exacta (SAS, 1999). Asimismo se calculó el costo-beneficio de la
aplicación de la bST.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
El 100% de retención de DIB para los cuatro tratamientos (cuadro 1); concuerda con los resultados de
otros trabajos donde el porcentaje de retención de CIDR nuevo fue del 100% (Broadbent et al., 1991;
Chenault et al., 2003); con respecto a la tasa de retención de DIB de segundo uso se menciona 90.9%
(Colazo, 2004).
Cuadro 1: Tasa de gestación por tratamiento en vacas de doble propósito.
TRATAMIENTOS
T1 bST (DIB Nuevo)
N°
Vacas
11
Tasa de
retención (%)
100
No de vacas
gestantes
7
Tasa de
gestación (%)
64.0a
T2 bST (DIB 2° Uso)
12
100
7
58.0a
T3 DIB Nuevo
9
100
2
22.0b
T4 DIB 2° Uso
11
100
2
18.0b
43
100
18
41.8
TOTAL
DIB= Dispositivos Intravaginal Bovino, bST= Somatotropina Recombinante Bovina.
a,b Literales diferentes presentan diferencias estadísticas
Las tasas de gestación obtenidas mediante inseminación artificial a tiempo fijo 52-56 hrs pos retiro del
DIB fueron 64.0 (7/11), 58.0 (7/12), 22.0 (2/9) y 18.0 (2/11) para los T1, T2, T3 y T4 respectivamente
(cuadro 1), siendo la tasa de gestación mayor para los grupos 1 y 2 (con bST) con respecto a los grupos
3 y 4 (sin bST). Se encontraron diferencias (P˂0.05) entre las vacas tratadas con y sin bST, pero no
(P˃0.05) para el uso de DIB nuevos y de segundo uso (cuadro 2). La tasa de gestación general entre los
grupos tratados fue de 41.8%. Por su parte Cutai et al., (2001) compararon en vacas Bos taurus x Bos
indicus dispositivos intravaginales bovino DIB nuevos y reutilizados obteniendo resultados con DIB nuevo
55% y con el DIB reutilizado por segunda vez 61.9% similares a los obtenidos en este estudio con los T1
y T2. Espinal et al., (2009) compararon el efecto de la aplicación de Gonadotropina Coriónica Equina
(eCG) en vacas con aptitud lechera, la tasa de preñez al primer servicio utilizando eCG fue mayor
(50.0%) vs sin eCG (23.8%), valores similares a los obtenidos para los tratamiento 1 y 2 en el presente
trabajo.
Cuadro 2: Tasa de gestación en vacas de doble propósito tratadas con DIB nuevos y de segundo uso.
n
20
23
Grupo con DIB Nuevo
Grupo con DIB Segundo Uso
Total
43
a,b Literales diferentes presentan diferencias estadísticas
Vacas gestantes
9
9
Tasa de gestación (%)
45a
39.1a
18
41.8
105
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Al comparar la Tasa de preñez entre el total de animales tratados con bST (60.9%) y animales sin bST
(20%), se encontró que fue mayor (P˂0.05) en vacas que recibieron bST vs sin bST (P=0.0134). En
términos de razón de momios esto indica que los momios son 5.66 veces mayores de que una vaca
tratada con bST se preñe en comparación con una vaca sin aplicación de bST. Lo cual indica que con
una sola inyección al momento de la inseminación mejoró la tasa de preñez (40%) en vacas de primer
servicio. Morales (1993) obtuvo un mayor índice de concepción en vacas al administrar la bST
obteniendo 36.6% de concepción con bST vs 26.0% sin bST, incrementando 10.6% (P˂0.05).
Cuadro 2. Razón de momios (OR) y intervalos de confianza al 95% para los distintos tratamientos
de vacas Suizo x Cebú bajo condiciones tropicales de Guerrero, México.
Tratamiento
OR
IC 95%
bST
Con
5.66
1.30-30.4
Sin
1
-----DIB
Nuevo
1.25
0.28-5.80
Segundo uso
1
-----Costo por vaca preñada. Para la selección de cualquier tipo de tratamiento es fundamental tomar en
cuenta si es económicamente factible. Cabe señalar que en los tratamientos 2 y 4 se utilizaron DIB de
segundo uso a mitad de precio original de DIB nuevos. El costo del semen se consideró en ($150 en
promedio); para obtener el costo del semen por vaca preñada se multiplicó el número de servicios por
concepción de todas las Vacas (SCTV) de cada tratamiento por el costo de cada dosis.
Cuadro 3: Costo en pesos mexicanos por vaca preñada.
n
CT
VP
Tratamientos
DIB nuevo + bST
11
255.5
7
DIB 2 uso + bST
12
195.5
7
DIB nuevo
9
139.5
2
DIB 2 uso
11
79.5
2
SCTV
1
1
1
1
CSVP
235.7
257.1
675
825
CTVP
637.2
592.2
1302.7
1262.2
CT=Costo por Tratamiento; VP=Vacas Preñadas en el tratamiento; SCTV=Servicios por Concepción de Todas las
Vacas; CSVP=Costo de Semen por Vaca Preñada; CTVP=Costo Total por Vaca Preñada.
Con el uso de bST, se obtuvo un menor costo por vaca preñada (cuadro 4) con diferencias de $665.5
entre el tratamiento 1 (con DIB nuevo y bST) con respecto al tratamiento 3 (DIB nuevo sin bST). La
comparación de los tratamientos 2 (DIB segundo uso con bST) y 4 (DIB segundo uso sin bST), mostró un
menor costo para el tratamiento 2, con una diferencia de $670 con respecto al tratamiento 4. Espinal et
al., (2009) obtuvieron un costo menor con el uso de eCG por vaca preñada (67.33), con diferencia de
15.73 US$ (223.36) y 77.72 US$ (1103 para el tratamiento sin eCG (83.06) y control (145.05)
respectivamente.
CONCLUSIÓN.
Se concluye que con una sola aplicación de 500 mg de bST al momento de la inseminación artificial con
DIB nuevos o usados se incrementa 40% la tasa de gestación en ganado Bos Indicus x Bos Taurus. El
menor costo por vaca preñada se obtiene con dispositivos de segundo uso más la bST.
LITERATURA CITADA.
Baruselli, PS., Marque, MO., Reis, EE., Bó, GA., 2003. Tratamiento hormonal para mejorar la
performance reproductiva de vacas de cría en anestro en condiciones tropicales. Resúmenes V simposio
internacional de Reproducción Animal Huerta Grande. Cordoba. Argentina.103-116.
Bridges, PJ., Brusie, MA., Fortune, JE., 2005. Elevated temperature (heta stress) in vitro reduces
androstenedione and estradiol and increases progesterone secretion by follicular cells bovine dominant
follicles. Domestic Animal Endocrinology; 29:508-522.
Cutaia L., Moreno D., Villata M. L., Bó G. A. 2001. Synchrony of ovulation in beef cows treated with
progesterone vaginal devices and estradiol benzoate administered at device removal or 24 hours later.
Theriogenology; 55:408 abstr.
106
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Endocrinología y reproducción
EVALUACIÓN DE CAMPOS MAGNÉTICOS COMO MÉTODO ALTERNATIVO PARA LA
PRESERVACIÓN DE LECHE CRUDA EN SISTEMAS DE PRODUCCIÓN FAMILIAR DE LOS ALTOS
DE JALISCO.
EVALUATION OF MAGNETIC FIELDS AS AN ALTERNATIVE METHOD FOR THE PRESERVATION OF
RAW MILK IN FAMILY PRODUCTION SYSTEMS OF LOS ALTOS DE JALISCO.
González RS1*, Herrera RSE2, Milián SF1, Cantó AGJ1, Méndez GHMC1 y Aguilar TG1
1UAQ,
Facultad de Ciencias Naturales y 2Centro de Investigación y Asistencia en Tecnología y Diseño del
Estado de Jalisco (CIATEJ)1
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La industria láctea se ha interesado en encontrar alternativas innovadoras para su conservación, la
mejora de la higiene e inocuidad del producto, aumentar la vida útil y mantener su sabor natural (Aguiar
et al., 2007). En la región de los Altos de Jalisco, por razones económicas y/o geográficas, no es posible
el uso de la refrigeración en la conservación de la leche, por lo que a este tipo de leche se le denomina
“de cadena caliente”. Los establos de lechería familiar se caracterizan por usar mano de obra familiar,
manejo semi-estabulado de animales y un bajo número de vacas (10 a 90). Posterior al ordeño la leche
es depositada en cántaras o botes lecheros (40 litros) que se colocan a pie de carretera para su
transporte a los centros de acopio (3 horas aproximadamente). Durante este tiempo la leche se expone a
temperaturas altas que favorecen el crecimiento de bacterias y, por consecuencia, al cambio
fisicoquímico y organoléptico de la leche. Por lo tanto, en estos sistemas existe un esfuerzo continuo por
encontrar métodos alternos de bajo costo para la preservación de la leche. Una opción es el uso de
campos magnéticos, los cuales se supone mejora la homogeneidad de la leche y logra prevenir pérdidas
de proteínas por control de la acidez y de los microorganismos, logrando una mejor preservación (Insua
et al., 2010). Así, en el presente estudio se evaluó la efectividad de los campos magnéticos en la
preservación de la leche cruda de cadena caliente a nivel de campo en sistemas de producción familiar.
OBJETIVOS.
Evaluar los campos magnéticos como un método alterno a la refrigeración para la conservación de leche
cruda de “cadena caliente” en lecherías familiares del estado de Jalisco.
Determinar el efecto de los campos magnéticos en la preservación de la leche cruda de “cadena
caliente.”
Evaluar propiedades fisicoquímicas: pH, acidez °D y conteo total bacteriano en leche cruda “cadena
caliente” antes y después a los campos magnéticos.
Determinar el impacto de los campos magnéticos en la proliferación de bacterias en leche cruda de
“cadena caliente”.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El diseño del experimento fue un simple aleatorio por conveniencia. Se seleccionaron 3 establos
productores de leche asociados a la empresa CECOPAL, por sus características de “cadena caliente”, de
cada uno de los establos se tomaron tres muestras de leche de seis litros cada una, mismas que fueron
divididas en tres alícuotas de 2 litros cada una. Estas alícuotas fueron colocadas en cántaras individuales
de la misma capacidad y se les aplicó el tratamiento por el tiempo de recorrido, tres horas
aproximadamente. Los tratamientos fueron: alta intensidad de campo magnético 11,700 Gauss, baja
intensidad 3,800 Gauss y sin campos magnéticos como grupo control.
Las variables analizadas fueron: acidez titulable, que corresponde a la cantidad de hidróxido de sodio
expresado en “grados Dornic (°D); pH, que determina la concentración de iones de hidrógeno [H+] en una
107
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
IV
Inocuidad de alimentos
Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
disolución con ayuda de un potenciómetro; dichos análisis se realizaron durante los dos tiempos de
evaluación (T0, hora de la ordeña y T1, llegada a la acopiadora). Para determinar el crecimiento
bacteriano y el efecto de los campos magnéticos sobre el mismo, se realizaron cultivos en caja de Petri
con medio de cultivo (Agar triptona extracto de levadura) para el conteo de Unidades Formadoras de
Colonias (UFC). De cada tratamiento se tomaron 250 mL y se mantuvieron en refrigeración (4°C) hasta
su llegada al laboratorio. Para el recuento de bacterias mesófilas aerobias se utilizó el protocolo citado
por Camacho et al., (2009), que es considerado la “prueba de oro” para evaluar la calidad higiénica de la
leche utilizada usualmente como base para las bonificaciones o sanciones en los centros de acopio. Para
determinar diferencia de medias de los tres tratamientos se utilizó el método de análisis de varianza de
una vía, con una significancia de 0.05 con ayuda del paquete para análisis estadístico SPSS versión 21.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Un total de 36 muestras de leche cruda fueron sometidas a uno de tres tratamientos: testigo, 3800 Gauss
y 11,700 Gauss por un periodo de 3 horas, tiempo de transporte de la leche del rancho al centro de
acopio. Para evaluar el efecto de los tratamientos sobre las variables de respuesta pH y acidez se calculó
la diferencia entre la medición al tiempo cero (t0) y el tiempo 1 (t1) entre ranchos. Se observó que al
menos la media de uno de los ranchos es significativamente diferente al resto (cuadro 1); sin embargo,
las dosis de campos magnéticos (cuadro 2) no modifican pH y acidez (°D) durante el tiempo de
evaluación (3 horas).
Cuadro 1.- Promedio de la diferencia (t1-t0) de las variables pH y acidez, por rancho, en
muestras de leche caliente sometidas a tratamiento con campos magnéticos.
Variables de
respuesta
pH
Acidez °D
Error
estándar
Intervalo de confianza 95%
Rancho
Media
Desviación
estándar
1
.038ª
.201
.033
-.029
.107
2
.183b
.214
.035
.110
.255
3
.175b
.120
.020
.134
.215
1
.111ª
.784
.130
-.154
.376
2
-.166ª
.696
.116
-.402
.069
3
-.222ª
1.806
.301
-.833
.389
Límite
inferior
Límite
superior
Cuadro 2.- Promedio de la diferencia de las variables pH y acidez, durante los tiempos de
evaluación (t1-t0), en los diferentes tratamientos con campos magnéticos.
Variables de
respuesta
pH
Acidez °D
Tratamiento
Media
Desviación
estándar
Error
estándar
Intervalo de confianza 95%
Límite
inferior
Límite
superior
Testigo
.175ª
.255
.042
.088
.261
11,700 G
3,800 G
Testigo
11,700 G
3,800 G
.111ª
.111ª
-.250ª
.222ª
-.250ª
.180
.118
1.841
.637
.691
.030
.019
.306
.106
.115
.050
.070
-.873
.006
-.484
.172
.151
.373
.437
-.015
108
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Con el fin de determinar el efecto bactericida de los campos magnéticos se calculó el número de
unidades formadoras de colonias (UFC’s) en una muestra tomada de leche en cada uno de los
tratamientos. En el cuadro 3 se muestra el promedio de las UFC´s de cada grupo y los demás resultados
del análisis descriptivo; no se observó diferencia significativa (p>0.05) entre los tratamientos, aunque el
tratamiento 2 (3,800 Gauss) si mostró una disminución considerable en relación al tratamiento 1 (11,700
Gauss) y el grupo testigo.
Cuadro 3. Promedio de la diferencia de las unidades formadoras de colonias (UFCs/ml), durante
los tiempos de evaluación (t1-t0), en muestras de leche sometidas a tratamiento con campos
magnéticos.
Tratamiento
Testigo
11,700 G
3,800 G
Desviación
estándar
Media
106ª
2.3 x
2.0 x 106ª
1.8 x 106ª
Error
estándar
106
105
3.1 x
1.9 x 106
2.0 x 106
9.1 x
5.5 x 105
5.9 x 105
Intervalo de confianza 95%
Límite inferior
105
3.6 x
8.4 x 105
4.9 x 105
Límite superior
4.4 x 106
3.2 x 106
3.1 x 106
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Un aspecto muy importante del presente estudio fue que se trabajó a nivel de campo, mimetizando las
condiciones con las que lidia tanto el ganadero durante el proceso de ordeño, como el transportista de la
leche al centro de acopio. La temperatura ambiental observada durante los 4 muestreos no fue superior a
los 23°C, lo que concluye que a estas temperaturas y durante 3 horas la leche no sufre cambios
desfavorables que puedan repercutir su calidad. Así mismo, ninguno de los tratamientos muestra
diferencia significativa en las variables pH y acidez (°D). Aunque no en todos los casos hubo diferencia
significativa entre los tratamientos para la variable Unidades Formadoras de colonias, los campos
magnéticos muestran potencial como método alternativo para la conservación de la leche, ya que se
observó que en cada muestreo de forma individual para cada uno de los ranchos la cuenta total de
bacterias disminuye considerablemente con el tratamiento de baja intensidad (3,800 Gauss), en relación
al grupo testigo y al tratamiento con alta intensidad (11,700 Gauss). Esto puede ser benéfico para lograr
los valores permitidos por la NMX-F-700-COFOCALEC-2012, la cual señala que la leche debe contener ≤
100,000 UFC/mL. Los resultados obtenidos en este estudio posterior a la ordeña arrojan 7.0 x 10 4 UFCs;
sin embargo, este valor aumenta significativamente al llegar al centro de acopio donde se observaron
conteos de hasta 1.1 x 107 UFC/mL, lo cual sobrepasa lo aceptado por dicha norma.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Aguiar, J., Pérez, I., Cepero, O. 2007. Efecto de los campos magnéticos en la conservación de la leche
cruda sin refrigerar. REDVET. 7(4): 1-9 España.
Norma oficial Mexicana. Productos y servicios. Leche, fórmula láctea y producto lácteo combinado.
Especificaciones sanitarias. NOM-184-SSA1-2002. Publicado en el Diario Oficial de la Federación el día
11 de marzo de 1999.
Insua, D.A., Cepero, O., Silveira, E.A. Pérez, I. 2010. Magnetización: una alternativa en la leche cruda sin
refrigerar. REDVET. 11(3): 1-6 Cuba.
Camacho, A., Giles, M., Ortegón, A., Serrano, B., Velázquez, O. 2009.
microbiológico de alimentos. 2ª ed. Facultad de Química, UNAM. México.
Técnicas para el análisis
Norma oficial mexicana. Sistema producto leche – alimento lácteo – leche cruda de vaca –
Especificaciones físico-químicas, sanitarias y métodos de prueba. NMX-F-700-COFOCALEC-2012.
Publicado en el Diario Oficial de la Federación el 20 de marzo de 2014.
109
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
PRODUCCIÓN DE HONGO PLEUROTUS OSTREATUS EN RESIDUOS AGRÍCOLAS
PRODUCTION OF PLEUROTUS OSTREATUS FUNGUS ON AGRICULTURAL WASTES
Olivera DAR1*, Ortega JE1, Díaz RP1, Aranda IEM 2, Mendoza MG3 y Utrera D4
de Postgraduados, Campus Veracruz, Carretera Xalapa – Veracruz. 2Colegio de Postgraduados,
Campus Tabasco, H. Cárdenas, Tabasco, México; 3Universidad Autónoma Metropolitana–Xochimilco,
Xochimilco, DF. México; 4KM 4.5 Carretera Cardel Chachalacas, Úrsulo Galván, Veracruz
1Colegio
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El hongo Pleurotus ostreatus es conocido con el nombre comercial de “setas” saprofito que pertenece a
la clase basidiomicetes, es uno de los descomponedores primarios más efectivos que presenta gran
versatilidad, adaptación a diferentes rangos de temperatura y sustratos lignocelulósicos (Furci, 2007). Se
considera como una alternativa viable para la producción de alimento de consumo humano ya que
contiene un valor proteínico alto, fibra, vitaminas del complejo B, vitamina C, calcio y fosforo.
Actualmente la producción de estos hongos comestibles en México ofrece notables ventajas económicas
y ecológicas. Se estima que la producción comercial en fresco es de aproximadamente 1,973.95 t-1. La
importancia ecológica radica en la utilización de más de 474,000 t -1 de subproductos agrícolas,
agroindustriales y forestales. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar la producción del hongo
Pleurotus ostreatus en los residuos de maíz, frijol y caña de azúcar.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Se utilizó un diseño experimental completamente al azar con tres tratamientos (maíz, frijol y caña de
azúcar) y cuatros repeticiones, con un arreglo de medidas repetidas, se midieron las variables producción
en fresco (PF), eficiencia biológica (EB), rendimiento (R), tasa de producción (TP) y los datos se
analizaron mediante análisis de varianza (ANOVA) con el paquete estadístico SAS.
RESULTADOS.
Con respecto a las variables de PF, EB, R y TP solo presentaron significancia estadistica (p=0.0223) en
la primera cosecha, obteniendose los mejores datos en los residuos de frijol. En las cosechas dos y tres
no presentaron significancia estadisticas las variables estudiadas en los residuos agricolas
DISCUSIÓN.
La producción del hongo en los residuos agrícolas solo tuvo significancia estadísticas en la primera
cosecha, tiende a incrementar la producción en la segunda y la tercer cosecha en los residuos de maíz y
caña de azúcar pero no presentando significancia entre los residuos. Vargas et al. (2012) reportaron
disminución en la producción de Pleurotus ostreatus a partir de la primera cosecha estos valores
difieren a los que se encontraron en esta investigación. La disminución de la producción en los residuos
de Frijol puede deberse al empobrecimiento del sustrato ya que este pierde materia orgánica; por lo tanto
se pierden los nutrientes necesarios para que el hongo siga creciendo de esta manera se ve reflejada la
producción.
La EB presenta una misma similitud a la producción en las tres cosechas con tendencia a incrementar en
los residuos de Maíz, Caña de Azúcar pero no se encontró significancia estadística en las cosechas 2 y
3, Salmones et al. (1997) reportaron datos inferiores en la EB en paja de cebada. Esto podría deberse a
la diferencias en el contenido de nutrientes y composición química que presentan los diferentes residuos
utilizados para producción del Pleurotus ostreatus. Los índices de EB son atribuidos al contenido y
110
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
agotamiento de nutrientes en el sustrato, como fue asimilado por cada semilla y el origen de ella estos
factores pueden influir directamente en la producción del hongo.
El residuo de frijol presentó mayor rendimiento en la primera cosecha encontrándose significancia entre
los tratamientos, aunado a estos resultados el rendimiento presenta la misma tendencia que la
producción y la EB que tienden a incrementar en las cosechas 2 y 3 pero no presenta diferencia
estadísticas, Gómez y Andrade (2008) reportaron rendimientos superiores 47.1 g en bagazo de caña a
los encontrados en el residuo de caña de azúcar 1.7 g, en tallo de maíz el rendimiento fue de 1.5 g pero
la producción en la investigación realizada tendió a disminuir en los dos sustratos después de la primera
cosecha estos resultados difieren a los encontrados en nuestro estudios ya que el rendimiento tiene una
tendencia a incrementar en las siguientes cosechas, esto sugiere que los sustratos aportan nutrientes
necesarios para el desarrollo micelial y estado fructífero del Pleurotus ostreatus, se han reportaron
datos inferiores de rendimiento en la producción con paja de caña de azúcar.
Forero et al. (2008) reportaron tasa de producción similares del 0.55-0.57 % en sustratos de mezclas de
residuos de ají, cascarilla de arroz, pasto de King grass y salvado de trigo a las encontradas en esta
investigación. La variación de la TP en esta investigación podría deberse al grado de madurez de la
planta, el manejo y la fertilidad del suelo.
CONCLUSIÓN.
Los residuos demostraron ser una alternativa viable para la producción del Pleurotus ostreatus, de esta
manera darles un aprovechamiento integral a dichos residuos para la generación de un alimento con un
alto valor nutricional que puede producirse de una manera eficiente en términos de costo, espacio y
tiempo.
LITERATURA CITADA.
Forero, C.L., Hoyos, O.L., Bazante, W.E., 2008. Evaluación de residuos de ají (capsicum spp.) como
sustrato en la producción de setas comestibles (Pleurotus ostreatus). Facultad de Ciencias
Agropecuarias, 6(1), pp. 42-53.
Furci G. 2007. Fungí Austral: Guía de campo de los hongos más vistosos de Chile. Ed. Corporación
Chilena de la Madera. Concepción, Chile, 1-200.
Gómez, J.P.G. & Andrade, J.L.C., 2008. Producción de Pleurotus ostreatus sobre residuos sólidos
lignocelulósicos de diferente procedencia. Nova Publicación científica en ciencias biomédicas, 6(10), pp.
126-140.
Salmones, D. et al., 1997. Estudios sobre el género Pleurotus. VIII. Interacción entre crecimiento micelial
y productividad. Revista Iberoamericana de Micología, 14, pp. 173 - 176.
Vargas, P.S., Hoyos, J.L. & Mosquera, S.A., 2012. Uso de hojarasca de roble y bagazo de caña en la
producción de Pleurotus ostreatus. Biotecnología en el Sector Agropecuario y Agroindustrial, 10(1),
pp.136–145.
111
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
PRODUCCIÓN DE POLEN EN DOS LOCALIDADES DE CAMPECHE.
PRODUCTION OF POLLEN IN TWO LOCALITIES IN CAMPECHE.
Vargas VA*
Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, Campo Experimental Edzná, Km.
15.5 Carretera Campeche-Pocyaxun, Campeche, México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
En la actualidad, la diversificación de la producción apícola se presenta como una excelente alternativa
para los apicultores que pueden orientar su producción de acuerdo a las características de cada región.
Durante muchos años, la miel se ha considerado como el único producto de la colmena. Sin embargo, es
posible obtener otros productos como el polen, propóleos y jalea real, los cuales pueden incrementar los
ingresos anuales de los apicultores. El polen tiene diversos usos, principalmente como un suplemento
alimenticio, en medicina y cosmetología. Otro uso importante del polen y de interés para la actividad
apícola, es el considerarse la fuente principal de proteínas para las abejas en forma natural, por lo
anterior se utiliza para preparar un suplemento o sustituto alimenticio aplicándolo durante la época de
escasa o nula fuente natural de polen, esto ayuda a estimular la postura de la reina. El porcentaje de
proteína varía del 10 al 36% de acuerdo al tipo de floración, suelo, etc. La proteína y los aminoácidos son
los responsables del correcto desarrollo de la colonia. Por tanto, el objetivo del trabajo fue determinar la
producción de polen, el porcentaje de Proteína Cruda (PC) e identificar las principales especies néctar
poliníferas durante la época de lluvias en el centro del estado de Campeche.
MATERIALES Y MÉTODOS
El presente trabajo se realizó en dos localidades pertenecientes al centro del estado de Campeche:
Chiná y Hool. Con una duración de cuatro meses (agosto a noviembre). Se utilizaron 12 colonias de
abejas Apis mellifera L., distribuidas en las tres localidades (seis colmenas por comunidad) alojadas en
colmenas modelo Langstroth con dos cuerpos cada una. Las colmenas utilizadas para la colecta de
polen, contaban con buena población de abejas adultas, al menos seis panales con cría en sus diferentes
etapas de desarrollo, suficientes reservas de alimento (miel y polen), ausencia de parásitos y
enfermedades y se sustituyó a la reina por una reina joven fecunda. El equipo que alojó a las colonias de
abejas estuvo en buenas condiciones, de manera que el único acceso de las abejas a la colmena fue a
través de la trampa. En cada colmena se instaló una trampa de plástico tipo piquera con protector de
lluvia para la colecta de polen, se dejó abierta durante una semana como fase de adaptación y
posteriormente, fue cerrada para la colecta de polen y cada dos días fue recogido y pesado. Cuando
existió abundante lluvia, el polen se recogía diariamente. La colecta de polen se realizó en forma alterna
(7 días de colecta y 7 días de descanso), esto para permitir el ingreso de polen en la colonia y su
consumo por las abejas. El polen cosechado se depositó en bolsas de papel debidamente identificadas
evitando su exposición directa a los rayos del sol. Para identificar las plantas visitadas por las abejas, en
cada apiario se trazaron tres transectos de 100 m de largo por 1.5 m de ancho, cada planta se identificó
por su nombre común, se tomaron fotografías y muestras de las flores para su posterior identificación del
nombre científico. En cuanto a la determinación de los porcentajes de Humedad (H), Materia Seca (MS),
Cenizas (Cen) y Proteína Cruda (PC) fueron de acuerdo a la AOAC, (1990). El análisis de los datos se
realizó con el paquete estadístico SAS (procedimiento ANOVA) y la comparación de medias con Tukey
(P<0.05).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
De acuerdo a los resultados obtenidos, la mayor producción de polen, se registró en los meses de agosto
y septiembre, con una tendencia a disminuir en octubre y noviembre. En cuanto a la vegetación néctar
polinífera se observaron 25 especies de plantas en floración durante el periodo observado, distribuidas en
nueve familias, de las cuales las leguminosas (Fabaceae) fueron las más abundantes con 7 especies,
seguidas por las compuestas (Asteraceae) y con menor presencia las gramíneas (Poaceae) con 5 y 4
especies respectivamente, entre otras.
112
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
La producción obtenida coincide con Cruz y Zaragos (2012), donde el promedio de la cantidad de polen
cosechado por día por colmena durante la primavera es de 34 gramos; sin embargo ellos únicamente
recomiendan que la colecta de polen se debe de realizar en la primavera cuando existe mayor producción
de polen y un fácil manejo, caso contrario a los resultados obtenidos en el presente trabajo, donde el
polen fue cosechado en la época de lluvia y se obtuvo hasta un promedio de 138.4 g de polen por
colmena (Figura 1).
Los resultados de PC mostraron diferencias (P<0.05) entre meses muestreados, los rangos fueron de
12.42% a 39.28%, siendo el polen del mes de noviembre con el más alto porcentaje de proteína (39.28%)
seguido del mes de octubre 19.79%. Así como también, mostraron diferencias los porcentajes de MS, H y
Cen (Cuadro 1). Estos parámetros se encontraron en el rango establecido de acuerdo a la Norma
Mexicana NMX-FF-094-SCFI-2008.
En cuanto a las especies de néctar-poliníferas encontradas durante el presente estudio, los resultados
obtenidos coinciden con Villalobos y Mendoza (2010), donde reporta a la familia Fabaceae la más
sobresaliente con el mayor número de géneros y especies. Para Castellanos y Godínez (2008), en un
estudio realizado en el poblado de San Antonio Ebulá, Campeche el tipo de polen identificado que
recolectaban las abejas en los meses de agosto y septiembre fue principalmente de la especie Mimosa
bahamesis, Bursera simaruba y especies secundarias pertenecientes a la familia Asteraceae.
Figura 1.- Producción promedio de polen (g/colmena/día) en el centro del estado de Campeche
Cuadro 1.- Calidad fisicoquímica del polen recolectado.
Agosto
Septiembre
Octubre
Noviembre
Ms
14.51a
12.42c
1.77b
8.98b
Pc
16.00a
13.70c
1.99b
39.28a
Cen
13.42ab
19.79b
2.20b
4.40a
113
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
En general, estos resultados nos muestran la gran diversidad y calidad de vegetación circundante a los
apiarios. Por tanto, se concluye que las especies de la familia Fabaceae fueron las más visitadas por las
abejas Apis melífera durante el periodo de estudio, estas especies son consideradas poliníferas y se
caracterizan por presentar floración en los meses de agosto a noviembre. Así como también, se puede
observar que durante los meses de agosto y septiembre, es cuando se cosecha mayor cantidad de polen
por parte de las abejas Apis melífera. Sin embargo, el polen con mayor porcentaje de PC se obtuvo en el
mes de noviembre, esto debido a la presencia de especies poliníferas que florecen en la región. Por lo
tanto, es factible la cosecha de polen por productores apícolas cuando se implementan actividades de
este tipo para diversificar la producción en el estado de Campeche.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
A. O. A. C. 1990. “Official methods of analysis”. Ed. Kenneth Heldrich, USA: Association of Official
Analytical Chemists, 320- 330pp.
Cruz
G.M
y
Zaragos
P.A.
2012.
Manual
de
Apicultura.
Disponible:
http://www.chapingo.mx/zootecnia/assets/ftapicultura.pdf; Consultado mayo 2015.
Villalobos-Zapata G.J y Mendoza V.J. 2010. La Biodiversidad en Campeche: Estudio de Estado.
Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad (CONABIO), Gobierno del Estado de
Campeche, Universidad Autónoma de Campeche, El Colegio de la Frontera Sur. México; Pp.730.
Castellanos B.; Godínez, L.M. 2008. Melisopalinoflora de importancia Apícola en San Antonio Ebula,
Campeche, México II: La época Húmeda. En: Memoria del XXII Seminario Americano de Apicultura.
Mérida, Yucatán. ONA. Gobierno del estado de Yucatán.
NMX-FF-094-SCFI-2008. Productos alimenticios no industrializados para consumo humano - Polen (Pollinis).
114
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CARACTERIZACIÓN DE GENES CASETES DE RESISTENCIA A ANTIMICROBIANOS EN
INTEGRONES CLASE 1 DE SALMONELLA OBTENIDOS DE CANALES DE BOVINOS, PORCINOS Y
AVES EN EL ESTADO DE MÉXICO.
CHARACTERIZATION OF GENES ANTIMICROBIAL RESISTANCE CASSETTES IN CLASS 1
INTEGRONS IN SALMONELLA ISOLATES OBTAINED OF CARCASSES OF CATTLE, SWINE AND
POULTRY IN THE STATE OF MEXICO.
Varela GJA *1, Talavera RM1, Soriano VE1, Vázquez NJ2, Balladares CB1.
1CIESA,
FMVZ-UAEM, 2CENID-Microbiología, INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Salmonella es una bacteria causante de gastroenteritis de importancia en salud pública y animal, en años
recientes se ha reportado el surgimiento de cepas con multirresistencia a antimicrobianos, lo cual dificulta
su control y tratamiento. Esta resistencia se ha relacionado principalmente a estructuras genéticas como
los transposones, plásmidos y recientemente a integrones de resistencia, estos últimos han tomado
mayor importancia debido a que facilita la expresión de genes de resistencia.
Un integron consta de tres regiones, dos regiones conservadas y una región variable. En el extremo
5´conservado se encuentra el gen intI que codifica para la integrasa, en el extremo 3´conservado se
localizan los genes qacE∆1, Sul1, responsables de la resistencia a compuestos amino cuaternarios y
sulfonamidas respectivamente, además de un marco de lectura abierto (orf5). Entre las dos partes
conservadas se localiza la región variable la cual varía en tamaño y composición, en el cual se insertan
los casetes genéticos (Krauland et al., 2009). Se han reportado en la región variable de dicho integron los
genes aadA1, aadA2 y aadA5 los cuales confieren resistencia a estreptomicina, los genes dfrA1 y dfrA17
queconfieren resistencia a trimetoprim, el gen blapse-1 que confiere resistencia a ampicilina, el gen catB3 a
cloranfenicol, el gen sat1 a estreptomicina el gen blaoxa-53 a oxacilina, el gen aaca aminoglucidos y el gen
tet(B) a tetraciclina (Firoozeh et al., 2011) entre otros genes de resistencia a antimicrobianos.
OBJETIVO
El objetivo de este trabajo fue caracterizar los genes casete presentes en la región variable del integron
clase 1 en aislamientos del género Salmonella obtenidos de canales de bovinos, porcinos y aves en el
Estado de México.
MATERIALES Y MÉTODOS
En este trabajo se estudiaron 31 aislamientos del género Salmonella positivos al integron 1 obtenidos de
canales de bovino (2), aves (4) y porcino (25) en rastros del Estado de México.
La evaluación de la resistencia bacteriana fenotípica a los antimicrobianos se realizó mediante el método
Kirby-Bauer según lo establecen en la normativa del Clinical Laboratory Standars Institute (CLSI). Los
patrones de resistencia de las cepas fueron determinadas para 7 antibióticos, clasificándose en
susceptibles, intermedias y resistentes, los antibióticos que se evaluaron fueron: Ampicilina (10 mcg),
Estreptomicina (10 mcg), Gentamicina (10 mcg), Tetraciclina (30 mcg) y Trimetropim (5mcg),
sulfametoxazol (25 mcg) y cloranfenicol (30mcg) (BIO-RAD). Se compararon con las tablas de
interpretación de acuerdo al National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2009).
El DNA, fue extraído con un kit comercial (Instagene Matrix, Biorad) a partir de cultivos frescos incubados
durante 24 horas. Posteriormente, el DNA fue cuantificado (100ng/μl). La región variable del integron 1,
fue identificada por medio de una Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) utilizando
oligonucleótidos específicos (5´CS GGC ATC CAA GCA GCA AGC Y 3´CS AAG CAG ACT TGA CCT
GAT (Krauland et al., 2009) el cual produjo amplicones de 1000 y 2000 pb dichos amplicones se
115
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
purificaron y se mandaron secuenciar a Macrogene Korea, dichas secuencias fueron alineadas y
analizadas empleando el programa Mega5 para posteriormente ser comparadas en la base de datos
Genebank para determinar que genes casetes de resistencia se encuentran presentes en esta región.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los 31 aislamientos de Salmonella estudiados presentaron multiresistencia a más de 2 antimicrobianos,
el 100% (31/31) fueron resistentes a estreptomicina, 67.7% (21/31) a ampicilina, 96.7% (30%31) a
tetraciclina, 38.7% (12/31) a gentamicina, 61.3%(19/31) a cloranfenicol, 61.3% (19/31) a trimetoprim y
77.4% (26/31) a sulfametoxazol.
Para el caso de la resistencia genotípica los genes casete que se encontraron en la región variable del
integron clase 1 fueron: dfrA17 en 16.1% (5/31) y dfrA12 en 22.6% (7/31) estos genes codifican
resistencia a trimetoprim produciendo una enzima llamada dihidrofolato reductasa, todos los aislamientos
que presentaron estos genes expresaron resistencia fenotípica a trimetoprim, otros genes que se
presentaron fueron el aaA1 en 12.9%(4/31), aaA2 en 32.3% (10/31) y aaA5 en 16.1% (5/31) estos genes
codifican para resistencia a estreptomicina produciendo una enzima llamada aminoglucosido adeniltransferasa, el 100% de los aislamientos que presentaron estos genes expresaron resistencia a
estreptomicina. Se encontró la combinación dfrA17-aaA5 en 16.1% (5/31) y la combinación dfrA12-aaA2
en 22.6%(7/31) lo que demuestra que esta pieza genética puede contener más de un gene casete en su
región variable como lo mencionan Shen et al. (2015) y Sinwat et al. (2015) en donde reportaron
combinaciones similares a las encontradas en el presente estudio. Sin embargo, el 38.7% (12/31) no
presentaron ningún gen en la región variable del integron clase 1 por lo que podemos mencionar que la
multiresistencia que presentan estos aislamientos podría estar relacionado a otros factores genéticos
como los transposones mencionados en el trabajo de Firoozeh et al. (2011).
CONCLUSIONES
La presencia de genes casetes en integron clase 1 de aislamientos de Salmonella obtenidos del Estado
de México está relacionada con la resistencia fenotípica, aunque existen aislamientos que presentan el
integron pero no contienen genes casetes de resistencia o aislamientos que presentaron resistencia sin la
presencia de genes casetes.
REFERENCIAS.
Firoozeh F, Shahcheraghi F, Zahraei S, Karim V, Aslani MM. Antimicrobial resistance profile and
presence of class I Integrons among Salmonella enteric serovars isolated from human clinical specimens
in Tehran, Iran. Iranian Journal of Microbiology. 2011; 3:112-117.
Krauland MG, Marsh JW, Paterson DL, Harrison LH. Integron-mediated Multidrug Resistance in a Global
Collection of Nontyphoidal Salmonella enteric Isolates.Emerging Infecticous Diseases. 2009; 15: 388-396.
NCCLS. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial
susceptibility testing; Ninetheenth Informational Suplement. 10 ed. vol. 29, no. 3. Approved standard
M100-S19. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, P.A. 2009.
Shen D, Xu Y, Pan S, Li Y, Lu Y, Xu T, Xia W, Liu G, Gu B. Prevalence and characterization of class 1
integrons in multi-drug resistant Salmonella sp. from China in 2010. Journal of Chemotherapy. 2015; 27:
57- 60
Sinwat N, Angkittitrakul S, Chuanchuen R. Characterization of Antimicrobial Resistance in Salmonella
enterica Isolated from Pork, Chicken Meat, and Humans in Northeastern Thailand. Foodborne Pathogens
and Disease. 2015; 1-7.
UAEM 3182/2012U
116
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
IDENTIFICACION DE GENES CASETES DE RESISTENCIA ANTIMICROBINA EN AISLAMIENTOS DE
ESCHERICHIA COLI ENTEROHEMORRAGICA QUE PRESENTAN INTEGRONES CLASE 1 Y 2.
IDENTIFICATION OF ANTIMICROBIAL RESISTANCE GENES CASSETTES IN
ENTEROHAEMORRHAGIC ESCHERICHIA COLI ISOLATES POSING CLASS 1 AND 2 INTEGRONS.
Arriaga FR1*Talavera RM1, Vázquez NJ2, Soriano VE1.
1CIESA,
FMVZ-UAEM, 2CENID- Microbiología.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Los integrones son una estructura importante en el mecanismo de resistencia antimicrobiana en las
bacterias, los cuales son considerados elementos capaces de capturar material genético exógeno
(casetes genéticos), integrarlo mediante recombinación sitio-específica y expresarlo de forma eficiente.
Frecuentemente son asociados a transposones y plásmidos para su movilización. Escherichia coli es una
de las principales enterobacterias transmitidas por alimentos en donde se ha reportado la presencia de
integrones clase 1 y 2. El número de casetes genéticos de resistencia presentes en la región central o
variable de los integrones, suele variar desde 1 a 179, aunque también se reconocen integrones
descargados que no contienen ningún gen en la región central. Los casetes genéticos identificados con
mayor frecuencia en los integrones son: aadA, dfrA y sat, que confieren resistencia a trimetoprim,
estreptotricina y espectinomicina. Estudios realizados a partir de productos cárnicos reportan la presencia
de integrones 1 y 2 en bacterias Gram negativas (25% y 3.6% respectivamente) y una elevada
resistencia a diferentes familias de antibióticos (Porto et al., 2010). Sin embargo, en salud animal y
humana poco se sabe acerca de la presencia de los integrones y de su relación con la resistencia
antibiótica en las bacterias de importancia clínica.
OBJETIVO.
El objetivo del presente trabajo fue identificar los casetes genéticos de resistencia antibiótica insertados
en la región variable de los integrones clase 1 y 2 en aislamientos de E. coli enterohemorrágica.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Se analizaron 38 aislamientos de E. coli enterohemorrágica, portadora de integrones clase 1 (32), clase 2
(17) y 11 ambas clases de integrones, obtenidas de canales de bovinos en rastros municipales y
productos cárnicos procesados en plantas Tipo Inspección Federal del Estado de México. Estos
aislamientos se identificaron y conservaron en caldo infusión cerebro corazón (BHI) con glicerol a -35°C
hasta su análisis en el Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal (CIESA-FMVZUAEMEX). La extracción de ADN se realizó a partir de dos a tres colonias bacterianas cultivadas en agar
nutritivo de acuerdo al protocolo del kit comercial de extracción (Insta Gene TM Matrix). Para la
identificación de los genes casetes de resistencia aadA1, aadA2, dfrA1 sat1 y qnrA, se utilizaron
oligonucleótidos previamente reportados, se realizó una PCR en tiempo real con un volumen final de 25
μl de la reacción: 5 μl (60 ng/1μl) de ADN genómico, 1 μl (1mM) de cada oligonucleótido, 12.5 μl de
SYBR®Green II X y 5.5 μl de H2O; el programa se corrió a las siguientes temperaturas: amplificación
inicial de 5 minutos a 94 °C y 30 ciclos de 94 °C 1 minuto, 57 °C 1 minuto y 72 °C 1 minuto y un ciclo final
de 72 °C durante 10 minutos (Dessie et al., 2012).
RESULTADOS.
En la región variable del integron intI1 se identificaron los genes casetes que confieren resistencia a
estreptomicina aadA1 fue de 28% (9/32), y para espectinomicina aadA2 53% (17/32) los genes casetes
dfrA1/sat1 que confiere resistencia a trimetoprim y estreptotricinan se encontraron en 100% (32/32) de los
117
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
aislamientos y el gen casete qnrA1 16% (5/32) responsable de la resistencia a quinolonas. Para el
integron intI2 los genes casetes de resistencia identificados fueron: 35% (6/17) aadA1, 41% (7/17) aadA2,
100% (17/17) dfrA1/sat1, y 6% (1/17) para el gen qnrA.
DISCUSIÓN.
Los genes de resistencia identificados en los integrones clase 1 y 2 aadA1, aadA2, dfrA1/sat1, y qnrA; se
han reportado con mayor frecuencia y se identifican como los mas conservados entre los integrones de
clase 1 y 2, en trabajos anteriores, se ha demostrado que los genes casetes aadA1 y aadA2, son muy
conservados en E. coli productora de la toxina Shiga en aislamientos clínicos de aves. La combinación de
los genes casetes aadA1, aadA2, sat1 y qnrA, en ambas clases de integrones indica un posible
mecanismo selectivo entre las bacterias entéricas, Moura y colaboradores reportan una frecuencia para
estos genes casetes de entre 35% y 46.5% en todos los aislamientos positivos a los integrones y siempre
en esta misma combinación (Moura et al., 2014), en otro estudio, se mencionan el gen casete sat1 y una
proteína con función desconocida (orfF); comunes en Aeromonas sp., y Enterobacterias con integrones
clase 1 y 2 (Boyle et al., 20011).
CONCLUSIONES.
Los resultados obtenidos en este estudio demuestran que E. coli enterohemorrágica portadora de
integrones 1 y 2 presentes en los productos cárnicos analizados, conservan una amplia variedad de
casetes genéticos responsables de la resistencia a diferentes familias de antibióticos, con una frecuencia
mayor a lo reportado en otros estudios. Los aislamientos mexicanos posiblemente se encuentren bajo
una constante presión de selección en su medio ambiente y bajo las condiciones en que se encuentran
favorecen la transmisión de genes casetes de resistencia.
REFERENCIAS.
1. Boyle, Healy, Hale, Kariuki, Comican y Morris, 2011. Characterization of a novel extended-spectrim Blactamase phenotype from OXA-1 expression in Salmonella Typhimurium strains from African and Ireand.
Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 70(4), pp. 549-553.
2. Dessie, H. K., Bae, D. H. y Lee, Y. J., 2013. Characterizacionof integrons and their cassettes in
Escherichia coli and Salmonella isolates from poultryin Korea. Poultry Science, 92(11), pp. 3036-3043.
3. Moura, Araújo, Alvez, Henriques, Pereira, y Correira, 2014. The contribution of Escherichia coli from
human and animal sources to the integron gene pool in coastal waters.. Frontiers in Microbiology, 5(5),
pp. 1-15.
4. Porto, A., Ayala, J., Gutkind, G. y Di Conza, J., 2010. A novel OXA-10like-B-lactsamase is present in
different Enterobacteriaceae. Diagnostic Microbiology and Infecction, 66(2), p. 228'229.
118
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CLASIFICACIÓN DE CARNE DE CERDO POR PARÁMETROS DE CALIDAD A PARTIR DE UNA
ESCALA DE COLOR SUBJETIVO PARA CARNE MEXICANA.
PORK MEAT CLASSIFICATION BY QUALITY PARAMETERS USING A SUBJETIVE COLOR SCALE
FOR MEXICAN MEAT.
López HLH1*, González MME1, Esparza CAL1 y Cruz EMG1.
1Instituto
Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, CENID Fisiología y
Mejoramiento Animal.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Actualmente, no existe una clasificación nacional que permita calificar la carne de cerdo en función de su
calidad. La venta de carne de cerdo está en función de la producción y obtención de la misma; en
encuestas realizadas a carniceros se determinó que el 40% de la venta proviene de establecimientos TIF
y que los criterios de calidad que consideraban en la adquisición era el color (64%), procedencia (65%) y
contenido de grasa (55%). En el mismo estudio se determinó que las amas de casa tomaban en cuenta la
suavidad (21.2%), frescura (14.7%) y color (11.3%) 1. Los criterios de clasificación son subjetivos para
carniceros y amas de casa, pero necesariamente tienen que ser objetivos para la industria procesadora o
exportadora de carne. A través de la objetividad se puede medir y controlar la variación en la calidad.
OBJETIVO.
Generar información sobre la calidad de carne de cerdo en función de la frecuencia de aparición de
atributos de calidad a partir de una escala subjetiva de color (INIFAP) para lomo de cerdo.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Se realizó el muestreo de diversos grupos de producción porcina que fueron sacrificados en un rastro TIF
del estado de Querétaro. El tamaño de la muestra fue de 491 canales. Los animales tuvieron un ayuno
previo de 20h al sacrificio, donde después de 45’ se registró el peso de la canal caliente, temperatura (T)
y pH entre la 10ª y última costillas en la región dorsal del lado derecho de la canal. Las canales fueron
procesadas después de 20h de frío, momento en el cual se obtuvieron muestras de lomo entre la 10ª y
última costillas para su evaluación. En el laboratorio, las muestras fueron seccionadas chuletas de
aproximadamente 2.5 cm de espesor, y se determinó el color objetivo (escala Hunter, con colorímetro
portátil, MiniScan HunterLab con iluminante D65/10º) y subjetivo (escala NPPC, 1996 e INIFAP, 2013)
después de 30’ de exposición al oxígeno. El pH y T se determinó nuevamente por punción cercano al
punto de lectura realizado en rastro. Se determinó la capacidad de retención de agua por centrifugación
(CRA), perdida de agua por compresión (PAC) en papel filtro 2 y pérdida de agua por goteo a las 24 horas
(chuletas en suspensión en bolsa hermética a 4°C) 3. Los resultados se analizaron mediante un análisis
GLM con la opción PDIFF para el contraste de las medias, considerando el efecto del grupo de
producción y el valor unitario de cada escala de color, el análisis de la frecuencia fue por el procedimiento
FREQ, ambos del software estadístico SAS v.9.2 (SAS Inst. Inc., Cary, NC, 2008).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Respecto al color subjetivo, la escala utilizada en industrias con estricto control de procesos y reportada
en diversos artículos es la del National Pork Producers Council (NPPC), está escala se produjo a partir de
valores de L* de 31 hasta 61, con carne de cerdo Americana. La preferencia en el color de la carne de
cerdo es rojizo y en algunos casos llega a existir un color rojo púrpura (valor 3 a 5 de la escala NPPC,
1999); normalmente en México se comercializa un color 2 (pálido) del NPPC. En el Cuadro 1 se observan
las medias de mínimos cuadrados para los atributos de calidad de las muestras. Las características de
CRA y color subjetivo (escala INIFAP) fueron iguales entre los grupos de producción; contrario a las otras
características que fueron diferentes (P<0.05). Estas diferencias se deben en primera instancia a la forma
de manejo y alimentación de cada grupo. Esta inminente variación entre grupos permite que la
comparación entre escalas de color pueda considerar la variación en respuesta a la forma de producir
119
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
carne. En estudios previos a la elaboración de las regletas INIFAP reportaron que a nivel nacional, la
variación en los atributos de calidad se hace mayor debido a las diferentes genéticas, alimentación y
manejo de los animales. Adicionalmente, indican que los cambios en color son propios del contenido de
mioglobina y de la susceptibilidad al estrés, ellos estimaron una baja incidencia de carne PSE (pálida,
suave y exudativa), que a pesar del inminente cuidado de los factores pro-PSE se sigue produciendo este
defecto y en algunos grupos de producción con gran porcentaje de incidencia. A pesar de la información
generada, actualmente la presencia de carne PSE se considera aun mayor.
Para efecto de lo sucesivo en la discusión, se muestran las medias de CoNPPC y CoINIFAP, las cuales
corresponden a lo calificado en planta de despiece y que además se muestran las medias de NPPC e
INIFAP (producto del calculo individual de cada muestra en función del valor de L* que fue utilizado para
elaborar dichas regletas de color). Para la escala NPPC, se consideró para cada calificación los valores
de L* (1=61, 2=55, 3=49, 4=43, 5=37 y 6=31) y para INIFAP (1=62.4, 2=58.6, 3=55.0, 4=51.7, 5=48.4 y
6=43.0). Al reportar los valores promedio de L* para cada calificación se decidió dar los intervalos entre
una calificación y la siguiente a igual distancia entre medias; de esta manera se asignaron los valores
calculados para NPPC e INIFAP. Por ello, en el Cuadro 1, se observa que los valores percibidos in situ
para CoNPPC son superiores a lo calculado para NPPC en al menos una unidad (2.84 vs 1.65,
respectivamente), mientras que entre CoINIFAP e INIFAP la diferencia es menor (2.85 vs 2.23,
respectivamente) lo que sugiere que la escala INIFAP permite acercarse más al color real y poder
relacionarla con otros parámetros de calidad de carne fresca.
Cuadro 1. Características de calidad de carne en diversos grupos de producción porcinaa
Grupos de producción
1
2
3
4
5
6
n=
75
82
83
95
63
93
pH45’
6.2wx
6.0v
6.3x
6.2wx
----pH24h
5.5vw
5.6w
5.5v
5.5v
5.5v
5.5v
Pérdida de agua por goteo, %
2.0v
3.1wx
3.8y
2.7w
4.3z
3.3x
x
y
v
wx
vw
Capacidad de retención de agua, %
19.3
24.8
14.3
18.7
15.4
22.1xy
w
v
w
v
v
Marmoleo NPPC
2.4
1.7
2.5
1.9
1.8
1.9v
L*
58.2vw 57.0v
58.8x
58.2wx 58.5wx 57.6vw
w
x
v
a*
6.3
6.9
5.7
5.8v
6.4w
8.1y
wx
y
v
w
xy
b*
14.2
14.6
13.6
14.0
14.5
15.9z
Color NPPC
3.0x
2.9wx
2.7vw
3.0x
2.7v
2.8vwx
c
vw
x
v
vwx
vwx
NPPC
1.6
1.8
1.5
1.7
1.6
1.8wx
CoIor INIFAPd
3.09
3.01
2.63
2.95
2.58
2.84
INIFAPc
2.21vw 2.50x
2.01v
2.11vw 2.16vw 2.39wx
EEMb
0.04
0.17
0.16
1.76
0.13
0.41
0.13
0.13
0.11
0.06
0.186
0.108
a
Medias de mínimos cuadrados. b EEM = error estándar de la media. c Valores calculados para cada
muestra en función de L* en cada escala de color. d No se encontraron diferencias entre grupos de
producción (P > 0.083). vwx… superíndices diferentes dentro de renglones indican diferencias (P < 0.05).
En el Cuadro 2, se observa las frecuencias de aparición de las calificaciones de color, tanto la realizada
en la muestra como la calculada. Se puede observar que el 25.5% de las muestras calificaron para 1-2,
74.1% para 3-4 y 0.42% para 5-6 de la escala NPPC; mientras que con la escala INIFAP para 1-2 fue de
34.6%, para 3-4 del 53.1% y 12.3% para 5-6. Considerando los valores calculados, la escala NPPC tiene
el 98.8% entre 1-2 y solo el 1.2 % para 3; INIFAP arrojó el 66.2% para 1-2, 32.6% para 3-4 y 1.2% para
5-6. Con estas frecuencias prácticamente la producción de carne obedece en mayor medida a valores de
1-2 para NPPC y muy poco el valor de 3; mientras que en la escala INIFAP la clasificación en color puede
llegar a tener mayor dispersión. En el Cuadro 3, considerando la corrección para el valor sugerido en
cada escala, se establecen las medias de mínimos cuadrados que explican la variación en la calidad de
la carne en cada calificación. Dentro de cada variable analizada en cada escala de color se encontraron
diferencias (P<0.036) para cada calificación asignada. El primer punto a resaltar, es que en la actualidad
se sigue consumiendo carne caliente (directa del sacrificio) y mal enfriada (>6ºC). Como se sabe, la
temperatura de la canal afecta el pH en la canal y este afecta todas las demás propiedades de calidad en
120
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
la carne; la temperatura a las 24h post-sacrificio fue alta (12.3ºC en promedio), por lo tanto, los valores
presentados podrían modificarse en función de disminuir más la temperatura a las 24h. Observando el
Cuadro 3, en algunas calificaciones se observa traslape entre medias, esto posiblemente se deba a que
al ser una escala con menor rango de L* comparado con la escala NPPC, la variación disminuye las
diferencias entre algunas calificaciones.
Cuadro 2. Frecuencias de clasificación y valor promedio de las escalas usadas en la evaluación de carne
de cerdo.
Escala NPPC
Escala INIFAP
Determinado
Determinado
Calculado (NPPC)
Calculado (INIFAP)
(CoNPPC)
(CoINIFAP)
No. de
Frecuencia,
No. Frecuencia, % No.
No.
Frecuencia, %
No.
Frecuencia, %
Escala
%
1
23
4.88
182
37.07
80
16.99
93
18.94
2
97
20.59
306
61.71
83
17.62
232
47.25
3
281
59.66
6
1.22
187
39.70
132
26.88
4
68
14.44
----63
13.38
28
5.70
5
1
0.21
----55
11.68
5
1.02
6
1
0.21
----3
0.64
1
0.20
Total
471
100
494
100
471
100
491
100
a
Color
2.9±0.74
1.6±0.50
2.9±1.22
2.2±0.86
a
valor medio del color ± desviación estándar.
Cuadro 3. Calidad de carne de cerdo en función de la clasificación INIFAP de color calculada*.
Calificación pH24h L*
a*
b*
PAG, %
PAC, %
CRA, %
CoNPPC
1
5.3a
62.8e 6.5a
15.3c
4.5d
30.8bc
7.9a
1.9a
b
d
a
b
c
ab
b
2
5.5
58.6 6.3
14.5
3.3
26.7
16.8
2.9b
3
5.6c
55.3c 6.8ab 14.1b 2.4b
23.1a
24.5c
3.3c
d
b
bc
ab
a
ab
d
4
5.7
52.2 7.5
13.8
1.6
26.6
31.9
3.5c
5
5.9e
49.5a 7.9c
13.2a
1.0a
33.5c
28.7cd
4.2d
EEM
0.04
0.56 0.58 0.53
0.54
3.82
3.55
0.23
CoINIFAP
1.3a
2.7b
3.8c
4.7d
4.4d
0.34
* Medias de mínimos cuadrados, diferencias para cada calificación de la escala (P<0.04). EEM = error
estándar de la media. abc… superíndices diferentes dentro de columnas indican diferencias.
CONCLUSIÓN.
La calidad de la carne de cerdo está siendo afectada gravemente por los procedimientos de operación
(Temperatura). La escala de color INIFAP, permite predecir calidad de carne con mayor certeza que otra
escala de color para la producción de carne de cerdo Mexicana. Existe una gran proporción de carne
PSE nacional.
IMPLICACIONES.
El establecer un comportamiento de la calidad de carne de cerdo en función de color, permitirá crear
nuevas alternativas de mejora en la cadena de producción de carne; y dar pauta a investigaciones que
expliquen las causas de seguir produciendo carne PSE cuando todo es cuidado.
REFERENCIAS.
1. Braña et al. 2012. Calidad en puntos de venta de carne. INIFAP-SAGARPA, México.
2. Hamm, R. 1975. en Meat. D. J. Cole y R. A. Lawrie (compiladores), The Avi Publishing Co., Westport.
3. Honikel, K. O. 1998. Meat sci. 49:447-457.
121
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DE LA INMUNIZACIÓN CON ANTI-GNRH O ANTI-LH EN LA CALIDAD DE CARNE DE
CERDO.
EFFECT OF THE INMUNIZATION ANTI-GNRH OR ANTI-LH IN THE QUALITY OF PORK.
Aguilar AA1*, López HLH2, González MME2, Pérez AMA2, Rubio LMS1, Cuarón IJA1, 2.
1Programa
de Maestría y Doctorado en Ciencias de la Producción y de la Salud Animal, FMVZ-UNAM,
Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, CENID Fisiología y
Mejoramiento Animal.
2Instituto
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La industria porcina busca una mayor eficiencia en la producción de carne magra, los machos enteros
son más eficientes produciendo canales magras en comparación con los castrados, pero la presencia del
llamado olor sexual (Boar tain, en Inglés) ocasiona problemas en la comercialización de la carne. La
castración quirúrgica es un método convencional para prevenir la presencia de olor sexual con ciertas
desventajas (estrés y hasta mortalidad); como alternativa existe la inmunización hormonal.
Fisiológicamente, el inicio de la pubertad esta dada por el aumento de la hormona liberadora de
gonadotropinas (GnRH) en el hipotálamo, la cual regula la secreción en la pituitaria de la hormona
luteinizante (LH) y la hormona folículo estimulante (FSH); la interrupción de GnRH o LH por la producción
activa de anticuerpos contra estas hormonas inhibe la función de los testículos, produciendo así efectos
de castración similares1. Posiblemente, el bloqueo de alguna de las hormonas induzcan cambios en la
calidad de la carne obtenida, además de la prevención del “Boar tain”.
OBJETIVO.
Determinar el efecto en las características de calidad de la carne de cerdos enteros inmunizados con dos
tipos de antigenos Anti-GnRH y Anti-LH para prevenir el olor sexual.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Se usaron 218 cerdos de la misma progenie (GP8 x Fertilis 25) con un peso al nacimiento de 1.4±0.33 kg,
repartidos en 4 bloques de producción, aleatorizados al nacimiento a uno de tres Tratamientos: 1)
castrados quirúrgicamente después de 24h del nacimiento; 2) Machos enteros vacunados con Anti-LH y
3) Machos enteros vacunados con Anti-GnRH. Las vacunaciones fueron realizadas a los 56d y 112d. Los
animales se alimentaron con 6 fases de alimentación, conforme a la edad y los requerimientos
nutricionales. Las dietas fueron formuladas en base a sorgo y pasta de soya cubriendo a partir del días
123, valores de EM=3.2 Mcal/kg y 0.64% Lys digestible. En este resumen solo se presentarán los
resultados sobre la calidad de la carne obtenida. Los cerdos al cumplir 168d de edad y con ayuno previo
de 20h, los cerdos fueron pesados y se midió la profundidad de grasa dorsal y del músculo largo dorsal a
la altura de la última y 10° costillas con un equipo de ultrasonido en tiempo real (Aloka SSD-500). Los
animales fueron sacrificados y despiezados en un establecimiento TIF. Se registró el peso de la canal
caliente y se continuó con la cadena de frío durante 24h a 4°C. Previo al despiece de las canales, se
obtuvo el peso de la canal fría. Una vez despiezadas las canales en los cortes principales y registrado los
pesos de los cortes primarios, se obtuvieron los lomos de donde se colectaron muestras a la altura de la
10ª y última costilla. En las muestras se determinó el pH, color objetivo (L*, a*, b*), marmoleo y color
subjetivo2. En el laboratorio se midió la pérdida de agua por goteo (PAG), la capacidad de retención de
agua por centrifugación (CRA), la capacidad de retención de agua por compresión en papel filtro (PAC) y
textura a partir de la fuerza de corte con la navaja Warner-Bratzler. Para determinar la presencia de olor
sexual se realizó una evaluación olfativa con un panel sensorial de 6 jueces; la calificación se asignó a
partir de una escala de 5 puntos (1 a 5), cada punto indicó el nivel de agrado o desagrado del olor; la
evaluación olfativa se realizó en la canal fría (en la superficie e interior de la canal) y en glándulas
parótidas (cocidas a 72±0.35 ºC al interior, cubiertas de papel aluminio), Los datos fueron analizados
conforme a un Diseño de Bloques Completos al Azar (donde los bloques fueron considerados como el
grupo de parición), se usaron los procedimientos GLM del paquete estadístico SAS (v.9.1.3) y los
resultados se presentan como las medias de mínimos cuadrados y el error estándar de la media.
122
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
En el cuadro 1, se muestran las variables de rendimiento y cortes primarios, donde es claro el efecto de
usar machos enteros en la producción de carne, ya que el peso vivo a la misma edad comparado con
machos castrados es diferente (P<0.001); por lo tanto el peso de canal caliente también fue diferente. A
pesar de no encontrar diferencias en el rendimiento de la canal (P>0.10), la producción de cortes
primarios fue mayor para los machos inmunizados, notándose mayores diferencias en la producción de
espaldilla (Castrados= 8.46 vs Inmunizados= 9.08 kg) y cabeza de lomo (Castrados= 4.21 vs
Inmunizados = 4.62 kg). Cabe señalar que para el filete (Castrados= 8.00 vs Inmunizados = 8.36 kg) y el
corte de pecho también se observaron diferencias a favor de inmunizados (Castrados= 8.00 vs
Inmunizados = 8.36 kg).
Cuadro 1. Rendimiento y producción de cortes primariosa
Variable
Castrados
n=
77
Peso vivo final,kg
108.22
Peso canal caliente,kg
88.31
Rendimiento,%b
81.38
Cortes primarios
Pierna, kg
15.25
Espaldilla, kg
8.46
Cabeza de lomo, kg
4.21
b
Lomo, kg
6.35
Otro corte
Filete, kg
0.82
Pecho, kg
8.00
Anti-LH
73
114.02
91.65
80.77
Anti-GnRH
68
115.39
92.67
80.78
EEM
0.686
0.590
0.146
15.92
8.95
4.58
6.49
16.01
9.22
4.66
6.45
0.117
0.068
0.047
0.058
0.90
8.32
0.90
8.39
0.015
0.073
a Efecto
de Tratamiento (P<0.001). b Sin diferencias entre Tratamientos (P>0.10). EEM = Error estándar
de la media.
Respecto a la calidad de la carne fresca (Cuadro 2), en la variable de pH se observa diferencia entre
Tratamientos (P<0.01), donde se podría considerar que los machos vacunados con Anti-LH fueron menos
susceptibles al estrés; mientras que los cerdos castrados y los vacunados con Anti-GnRH estuvieron en
el limite de producir carne PSE. Los valores del color objetivo (L*, a* y b*) también se modificaron en
función de los Tratamientos (P<0.01), los machos vacunados con Anti-LH produjeron la carne con menor
luminosidad (L*; 57.5 vs 58.8) y mayor intensidad de pigmentos rojos (a*; 7.7 vs 7.0), mientras que los
pigmentos amarillos fueron menores (b*; 11.6 vs 15.1). Sin embargo estas diferencias no fueron
percibidas mediante una escala subjetiva de color y marmoleo (P>0.9). La American Meat Science
Association considera que los valores de L* entre 49 y 60, están dentro de los estándares normales de
calidad de la carne.
Cuadro 2. Variables de calidad en carne fresca de machos enteros a.
Variable
Castrados
Anti-LH
pH
5.5
5.6
L*
58.9
57.5
a*
7.1
7.7
b*
15.2
11.6
Color subjetivob
2.7
2.8
Marmoleo Subjetivob
1.6
1.5
Anti-GnRH
5.5
58.6
7.0
15.1
2.8
1.7
EEM
0.01
0.25
0.10
0.08
0.04
0.05
a Efecto
de Tratamiento (P<0.01). b Sin diferencias entre Tratamientos (P>0.9). EEM = Error estándar de
la media.
123
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Las propiedades tecnológicas de la carne de cerdo (Cuadro 3) fueron modificadas entre Tratamientos. La
pérdida de agua es uno de los principales factores de pérdida económica y de calidad para los productos
cárnicos. La perdida de agua por goteo a las 24h fue menor en la carne de machos vacunados con AntiLH respecto a castrados y vacunados con Anti-GnRH (4.7 vs 5.3 %), sin embargo la capacidad de retener
agua al aplicarse una fuerza de centrifugación fue mayor para los machos vacunados (GnRH o LH)
respecto a los castrados (19.4 vs 14.7 %), posiblemente estos resultados estén relacionados con la
deposición de proteína en el corte evaluado; resultado que podría relacionarse con la perdida de agua
por compresión (27.3 vs 29.9 %). La variable de textura como fuerza de corte, fue igual entre la carne de
los animales de cada Tratamiento (3.57±0.099).
Cuadro 3. Capacidad de retención de agua y fuerza de corte en chuletas de lomo a.
Variable
Castrados
Anti-LH
Anti-GnRH
Retención por centrifugación, %
14.7
19.4
19.5
Pérdida por compresión, %
29.9
26.5
28.0
Pérdida por goteo 24 h, %
5.4
4.7
5.3
b
3.5
3.5
3.6
Fuerza de corte, kg Fza
EEM
0.76
0.36
0.12
0.05
a Efecto
de Tratamiento (P<0.001). b Sin diferencias entre Tratamientos (P>0.05). EEM = Error estándar
de la media. (P<0.01).
En el Cuadro 4, se observa la frecuencia (expresada como porcentaje) de animales que presentaron olor
desagradable, considerado como olor sexual. La incidencia es notoria para el Tratamiento Anti-LH en
canal fría (5.6%); ya que, aunque existan valores positivos, estos podrían estar enmascarados por fallas
en alojamiento o un mal proceso de eviscerado; esto se refuerza con el 1.3% de presencia de olor a
verraco aún en machos castrados.
A pesar de existir niveles de compuestos volátiles que no son detectados en una simple inspección
olfatoria (inspección en canal fría), esta segregación podría completarse con la evaluación de las
glándulas parótidas como reservorio de feromonas (androstenona). Sin embargo, el uso de jueces no
entrenados podrían confundir los olores, al no tener una exposición previa; posiblemente, el 11.1% de
olor a verraco en Anti-GnRH sea sobreestimado.
Cuadro 4. Presencia de olor desagradable en canal y glándulas parótidas
Variable
Castrados
No observaciones
77
% presencia de olor a verraco en canal fría
1.3%
% presencia de olor a verraco en glándula parótida
7.1%
Anti-LH
73
5.6%
3.9%
Anti-GnRH
68
0.0%
11.1%
CONCLUSIONES.
El uso de dos diferentes tipos de inmunización mejoró la producción de cortes primarios. El uso de la
vacunación Anti-LH podría favorecer algunas propiedades de calidad en la carne; aunque la efectividad
de inhibición de olor sexual sea igual para ambas inmunizaciones.
IMPLICACIONES.
La inmunización hormonal puede sustituir a la castración quirúrgica, sin embargo, los beneficios hacia la
producción de magro deben ser evaluados por su viabilidad económica en los sistemas de producción.
Es necesario disminuir el sesgo y la arbitrariedad de la evaluación del olor a verraco, mediante técnicas
que no sean subjetivas y que permitan de manera rápida emitir un dictamen.
REFERENCIAS.
1. Falvo et al. 1986. J. Anim Sci. 63:986-994.
2. National Pork Producer Council, NPPC. 1999.
124
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
VITAMINA E Y UNA PREMEZCLA ANTIOXIDANTE EN DIETAS PARA LA FINALIZACION DE
CERDOS: CALIDAD DE CARNE Y VIDA DE ANAQUEL.
VITAMIN E AN ANTIOXIDANT PREMIX IN DIETS FOR FINISHING PIGS: MEAT QUALITY AND SHELF
LIFE.
Jiménez JAS*1, López HLH2, González MME2, Pérez AMA2, Cuarón IJA2.
1Universidad
Autónoma de Querétaro, 2Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y
Pecuarias, CENID Fisiología y Mejoramiento Animal.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Los antioxidantes en dietas para cerdos son un recurso para proteger la calidad de la carne y prolongar la
vida de anaquel. La vitamina E es el antioxidante natural de elección y el selenio complementa la función
protectora en las células por la actividad de la enzima glutatión peroxidasa 1. Actualmente, existe en el
mercado un producto con actividad antioxidante (Alltech®, México), a partir de levadura enriquecida en
selenio, residuos de algas, ácido ascórbico y extracto de la fermentación de Aspergillus niger del cual no
hay información formal en cerdos, pero se ha evaluado su efecto con pollos de engorda 2.
OBJETIVO.
Mediante el desarrollo de dos experimentos se evaluó la respuesta de la premezcla antioxidante (PMA)
sola o en combinación con vitamina E en el comportamiento productivo de cerdos en etapa de
finalización, así como en la calidad y estabilidad oxidativa de la carne durante el almacenamiento.
MATERIAL Y MÉTODOS.
En los dos experimentos, los cerdos se aleatorizaron a los Tratamientos (Trt) considerando la camada de
origen y el sexo. Experimento 1: Se usaron 91 cerdos (32 ♀ y 59 ♂ castrados) todos de una misma edad
(140±0.6d) y genética [GP8 × (LW×Fertilis-25)], con un peso inicial de 92±10.1 kg. El Diseño fue
Completamente al Azar, en donde el sexo se incluyó en el modelo como factor. Los Tratamientos fueron:
1) dieta control (CON) en la que se incluyó Se a partir de una fuente orgánica (Alltech ®, México) a 0.3
ppm, 2) dieta control adicionada de vitamina E (VITE) a 300 g/ton (DSM ® Nutritional Products México) y
3) dieta control sin vitamina E y con la adición de la PMA (Alltech®, México) a 200g/ton (a 0.3 ppm Se).
Experimento 2: Se usaron 110 cerdos (51 ♀ y 59 ♂ castrados) de 148±0.6d de edad y peso inicial de
99±9.9 kg. El Diseño fue Completamente al Azar con arreglo factorial de 2 niveles de Vitamina E (30 ó
110 mg/kg) y 4 niveles de la PMA (0, 80, 160 y 240 g/ton). Para la elaboración de las dietas se partió de
una premezcla vitamínica sin vitamina E y una de minerales traza libre de Se, incluidas en una dieta
basal formulada con base en sorgo y pastas de oleaginosas (soya y canola), a una densidad de Lys
digestible ileal estandarizada de 0.88% y EN=2.59 Mcal/kg, además del uso de clorhidrato de
ractopamina a 10 ppm (Elanco® Animal Health). Los animales fueron alojados, alimentados y pesados
individualmente para calcular el consumo diario de alimento (CDA), la ganancia diaria de peso (GDP), y
la eficiencia alimenticia (GDP/CDA). Los cerdos permanecieron en el experimento hasta 31±4.4 días en
función de su crecimiento. Previo al sacrificio en un rastro TIF, tuvieron un ayuno de 20h. A los 45’ y 24h
posteriores se registró el peso de la canal, pH y temperatura (T); a partir de las 24h se tomaron muestras
del músculo largo dorsal entre la 10a y última costillas para determinar el marmoleo (MAR) y color
subjetivo3, pérdida de agua por goteo (PAG) a las 24h, capacidad de retención de agua por centrifugación
(CRA), color objetivo (L*, a* y b*), oxidación lipídica (TBARS) y poder antioxidante-reductor férrico
(FRAP). Para el Experimento 1, las variables pH, TBARS, L*, a*, b* y FRAP se midieron de las chuletas
empacadas en charolas de unicel con plástico auto-adherente (PVC) a 4±0.3ºC a los 8 días de
almacenamiento. En el Experimento 2 las muestras fueron molidas, divididas y almacenadas en dos
diferentes empaques: charola de unicel con plástico auto-adherente (PVC) y al vacio en bolsas
impermeables al oxígeno (VAC), durante 3, 5, 7 y 9 días en refrigeración (3±0.2 ºC); en cada tiempo de
almacenamiento se determinó el pH, L*, a*, b* y TBARS. Los datos se analizaron con los procedimientos
GLM y MIXED de SAS (v.9.3) con la opción PDIFF para el contraste de las medias, en el que el sexo fue
el criterio de bloqueo y se presentan los resultados de los efectos mayores de Tratamientos como las
medias de mínimos cuadros y los errores estándar de la media.
125
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Experimento 1; en el comportamiento productivo (Cuadro 1) no se encontraron efectos por Trt (P>0.54);
las hembras comieron menos (P<0.001; 2.9 vs. 3.2 kg/día, EEM=0.06) y ganaron menos peso (P<0.001,
0.9 vs. 1.1 kg/día, EEM=0.02) que los machos castrados, aunque el rendimiento en canal de las hembras
fue numéricamente (P>0.29, EEM=0.30) menor (81.8%) que el de los machos castrados (82.2%). En
canal, el pH y la T a los 45’ fueron 6.3±0.26 y 39.6±1.31 °C (P>0.28), y a las 24h de 5.5±0.13 y 8.5±1.10
°C (P>0.37), respectivamente. Los indicadores de calidad de la carne se presentan en el Cuadro 2, todas
las variables estuvieron dentro de los parámetros normales de una carne fresca de calidad.
Cuadro 1. Comportamiento productivo de cerdos finalizados por efecto del Tratamiento a.
Variable
CON
VITE
PMA
EEMb
No. Observaciones
31
30
30
Peso final, kg
122.85
121.87
122.12
1.277
Consumo de alimento, kg/d
3.06
3.10
3.01
0.061
Ganancia de peso, kg/d
0.98
0.94
0.96
0.026
Eficiencia alimenticia
0.32
0.32
0.32
0.007
Rendimiento en canal, %
81.89
81.12
81.95
0.319
a Medias de mínimos cuadrados. b Error estándar de la media.
P<
0.67
0.54
0.59
0.98
0.87
Los únicos efectos de calidad de carne que se encontraron fueron los de Vitamina E, donde se mejoró el
color apreciado subjetivamente (P<0.01), se redujo (P<0.04) PAG y se incrementó FRAP con igual efecto
que por el uso de la PMA (P<0.01). El efecto positivo por vitamina E y las diferencias con PMA, sugieren
que la capacidad antioxidante de PMA no aporta la misma protección de membranas y del contenido
celular que se obtiene con Vitamina E, pero es claro, por la actividad reductora en músculo (FRAP), que
PMA tiene alguna capacidad antioxidante diferente de Vitamina E. Por otro lado, la identidad de
respuesta en TBARS se explica porque los tejidos prácticamente no sufrieron daño. Después de 8 días
de almacenamiento de la carne, se notaron diferencias en las variables L* (P<0.05; VITE=59.3 y CON o
PMA=60.9, EEM=0.58), TBARS (P<0.001; VITE=0.96, CON=1.56 y PMA=1.03 mg de MDA∙kg-1 de carne,
EEM=0.050) y FRAP (P<0.001; CON=3.39, VITE=4.51 y PMA=4.41 mg de EqTrolox∙g-1 de carne,
EEM=0.121). La diferencia en L* confirma el valor de VITE en protección de membranas, pero la similitud
de respuestas entre VITE y PMA en TBARS y FRAP sugieren cierta semejanza en la capacidad de
protección antioxidante, referida a la vida de anaquel de los productos.
Cuadro 2. Parámetros significativos de calidad en chuletas frescas de cerdo por efecto del
Tratamientoa.
Variable
CON
VITE
PMA
EEMb
Color subjetivo
2.7x
3.3y
2.8x
0.13
Pérdida de agua por goteo, %
4.0x
3.4y
4.6x
0.32
FRAP, mg de EqTrolox∙g-1 de carne
3.8y
5.5x
5.3x
0.15
a
Medias de mínimos cuadrados. b Error estándar de la media.
renglón indican diferencias (P<0.04) entre Tratamientos.
x,y
P<
0.01
0.04
0.01
Superíndices diferentes en el mismo
Experimento 2: Como se esperaba, las combinaciones de Vitamina E y PMA no alteraron el
comportamiento productivo (P>0.42) en finalización: CDA=3.1±0.58 kg/d; GDP=1.1±0.27 kg/d;
G/C=0.35±0.043 kg; y peso final=134.5±12.68 kg. Los parámetros a las 24h de T (P>0.35, 10.0±1.13 °C)
y pH, (P>0.97, 5.5±0.14) fueron similares. El color subjetivo (3.1±0.73) y el marmoleo (1.9±0.87) no se
afectaron por efecto de Tratamiento (P>0.28), contrario a lo que sucedió con los parámetros objetivos de
color (P>0.51): L*=58.2±2.42, a*=5.8±1.15 y b*=14.0±0.96. En cambio, en la pérdida de agua (Cuadro 3)
se encontraron claros efectos de Vitamina E; el nivel más alto de Vitamina E disminuyó la PAG (P<0.01,
2.9 vs 2.5%, EEM=0.11) e incrementó la CRA (P<0.004, 17.3 vs 22%, EEM=0.92), mientras disminuyó
(P<0.001) la oxidación lipídica (0.12 vs 0.14 mg MDA/kg). Independientemente de los niveles de Vitamina
E, concentraciones crecientes de PMA mejoraron linealmente (P<0.01) PAG y CRA, pero no previnieron
la oxidación lipídica (TBARS). Ahora bien, en la estabilidad de la carne durante el almacenamiento, para
las variables L*, b* y TBARS las respuestas se describen por una interacción (P<0.01) entre los
Tratamientos con el tiempo de almacenamiento y el tipo de empaque. Por ejemplo, en TBARS (Figura 1),
después de 9d de almacenamiento con el empaque impermeable al oxígeno (VAC), se alcanzó un
máximo de 0.52 mg de MDA/kg, que con PVC llegó a ser de 1.64 mg de MDA/kg; la mayor concentración
126
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
de Vitamina E en la dieta resultó en menor oxidación, tanto en la concentración relativa al tipo de
empaque, como en la dinámica de cambio de la oxidación en el tiempo, mientras que PMA no alteró los
valores de TBARS, por lo que se sobreponen los valores a los de Vitamina E.
Cuadro 3. Parámetros significativos de calidad en carne molida de cerdo por efecto del Tratamientoa.
Vitamina E, mg/kg
30
110
EEMb
PMA, g/ton
0
80
160
240
0
80
160
240
PAG (%)c,d
3.38
2.92
2.71
2.60
2.86
2.62
2.43
2.13 0.240
CRA (%)c,d
15.63 16.52 17.78 19.12
20.92 19.06 22.43 25.48 1.915
TBARS (mg MDA/kg-1)c
0.14
0.14
0.14
0.14
0.12
0.12
0.12
0.12 0.004
a
Medias de mínimos cuadrados. b Error estándar de la media.
lineal (P<0.001) de PMA.
c
Efecto de Vitamina E (P<0.01);
dRespuesta
Color objetivo, b*
TBARS mg MDA/kg de carne 30Eco0
18.0
1.6
30Eco240
1.4
110Eco0
1.2
PVC
1.0
0.8
30Eco240
110Eco0
PVC
110Eco240
16.0
110Eco240
30Eco0
15.0
30Eco0
30Eco240
VAC
0.6
30Eco0
17.0
b*
TBARS (mg MDA/kg de carne)
1.8
30Eco240
14.0
110Eco0
110Eco0
0.4
110Eco240
0.2
0.0
1
3
5
7
9
Tiempo (Días)
13.0
110Eco240
VAC
Vit E 30
mg/kg
Vit E 110
mg/kg
12.0
1
3
5
7
Tiempo (Días)
9
Vit E 30
mg/kg
Vit E 110
mg/kg
Figura 1. Comportamiento de los parámetros TBARS y b* en función del tiempo de almacenamiento y del
tipo de empaque.
Aún en condiciones de refrigeración, el almacenamiento en presencia de oxígeno (PVC) no pudo impedir
que los niveles de TBARS fueran mayores de 1 mg de MDA/kg de carne después de 5d. En cambio, la
reducción del oxígeno (VAC), limitó el daño a un nivel confiable para la conservación de la carne, límites
que fueron 3× en un ambiente permeable al oxígeno (PVC), pero incluso en bajo riesgo de oxidación, los
efectos de Vitamina E fueron una mejora >20% en conservación de la carne. Los cambios en color (L* y
b*) fueron secuela de la oxidación, como el alcance en b* (Figura 1, Der.). Los valores de pH (5.56) y a*
no se alteraron por efecto de Tratamiento, no así para tipo de empaque*tiempo de almacenamiento
(P<0.01). El nivel de oxidación en la carne durante el tiempo en el empaque PVC (Figura 1, Izq.) alcanzó
un máximo de 1.6 mg MDA/kg en los Trt con menor contenido de Vitamina E, mientras que a alta
concentración de vitamina E más la inclusión de PMA, redujeron los TBARS hasta 1.2 mg MDA/kg de
carne. Por otro lado, la carne en empaque VAC redujo la oxidación lipídica (0.5 mg MDA/kg de carne),
denotado por el valor de TBARS, menor a 0.3 mg MDA/kg de carne para las muestras con alta
concentración de vitamina E y PMA.
CONCLUSIÓN.
Los antioxidantes no alteraron la respuesta productiva, pero fue evidente su efecto en la protección de la
calidad de los productos, aún durante el almacenamiento en función del tipo de empaque; mientras que la
PMA confirió una protección similar solo cuando el estrés oxidativo fue mayor. La posible interacción de
Vitamina E y la PMA podría estar confundida con el efecto de selenio, sin demérito de sus funciones.
IMPLICACIONES.
Con este trabajo se corroboró el posible uso de la PMA como función complementaria para vitamina E;
cabe señalar que la PMA no sustituye el efecto de vitamina E, pero hay efectos antioxidantes que
ameritan investigación sobre su modo de acción.
REFERENCIAS.
1. Traber MG y Atkinson J. 2007. Free Radical Biology and Medicine. 43(1):4-15.
2. Xiao et al., 2011. Poultry Sci. 90:136-146.
3. National Pork Producer Council, NPPC, 1999.
127
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
IDENTIFICACIÓN DE BIOTIPOS Y NIVEL DE CONTAMINACIÓN POR STAPHYLOCOCCUS AUREUS
EN CANALES DE CONEJOS PARA ABASTO EN RASTROS COMERCIALES DEL ESTADO DE
MÉXICO.
STAPHYLOCOCCUS AUREUS BIOTYPE IDENTIFICATION AND CONTAMINATION LEVEL RABBIT
CARCASSES SAMPLED IN COMMERCIAL ABBATOIRES OF THE STATE OF MEXICO.
Garduño GVM1*, Varela GJA1, Velázquez OV2, Alonso FMU2, Talavera RM2, Valladares CB2, Lagunas
BS2 y Vázquez NJ3.
1Programa
de Maestría y Doctorado en Ciencias Agropecuarias y Recursos Naturales. Universidad
Autónoma del Estado de México, Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología; 2Centro de Investigación y
Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad
Autónoma del Estado de México, Cuerpo Académico en Salud Animal; 3Centro Nacional de Investigación
Disciplinaria en Microbiología Animal, Instituto Nacional de Investigaciones Forestales Agrícolas y
Pecuarias.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
México es un importante productor de carne de conejo (Oryctolagus cuniculus) a nivel mundial. En el año
2009 se produjeron 4.2 millones de toneladas métricas. La inocuidad juega un papel indispensable en la
obtención de los productos cárnicos, en la salud de los consumidores. El Staphylococcus aureus, pude
producir una amplia gama de enfermedades superficiales, profundas y sistémicas razón por la que se
considerada una de las Enfermedades Transmisibles por Alimentos (ETA’s) más importantes debido al
alto índice de brotes en comparación con otros agentes patógenos (4). El S. aureus es un agente
resistente a las condiciones ambientales, extremadamente difícil de erradicar, hospedero natural en los
animales y en el hombre representando un riesgo a la salud pública por infecciones animal-humano y por
la posible presencia de cepas resistentes y multi-resistentes a los antibióticos MRSA provenientes de
granjas cunícolas y cepas productoras de enterotoxinas. En los animales de abasto durante el proceso de
sacrificio y faenado se puede producir contaminación microbiana en la canal, la cual puede afectar la
calidad e inocuidad de la carne (6). La contaminación de la canal por S. aureus puede provenir de la línea
de sacrificio, de la manipulación del personal durante el procesamiento, del equipo, materiales y su mal
conservación. La reducción del riesgo sanitario de la contaminación por S. aureus y otros patógenos
presentes en las canales se establece en la normatividad para garantizar la inocuidad de la carne (5). La
caracterización del biotipo puede establecer el origen presuntivo de las cepas de S. aureus en la
contaminación de la canal del conejo (1). La estimación de la carga microbiana se realiza por métodos de
muestreo específicos para identificar la presencia de S. aureus, en las canales se realiza por el muestreo
de la superficie para su análisis microbiológico en placa (3). El objetivo del estudio fue identificar el biotipo
y determinar el nivel de contaminación por Staphylococcus aureus en la superficie de canales de conejo
para abasto en rastros comerciales del Estado de México.
MATERIALES Y MÉTODOS
Este estudio se realizó por un muestreo estratificado en tres rastros comerciales especializados en el
abasto de carne de conejo en el Estado de México; localizados en los municipios de Huixquilucan (Rastro
A), San Felipe del Progreso (Rastro B) y Tecámac (Rastro C), con un volumen anual de sacrificio de
92400 animales; de donde se obtuvieron 217 muestras de la superficie de las canales en la línea de
proceso. Para la toma de muestra en superficie, se implementó el método no destructivo que es utilizado
en canales de grandes especies para identificar la presencia bacteriana (5), adaptado para el muestreo de
conejos (2), abarcando cuatro pequeñas regiones considerando 25 cm 2 totales, comprendidas para el
lomo, muslo, costillar y paletilla muestreadas mediante hisopado y transportadas en agua peptona al 2%,
conservadas a 4°C, conforme lo establece la normatividad. Los biotipos se identificaron de acuerdo a la
caracterización descrita por Devriese (1). Considerando biotipo A del humano, el cual couagula el plasma
humano y muestra una coloración violeta crema con un ligero halo amarillento; el biotipo C de
bovino/ovino, coagulando plasma humano y de bovino, las UFC se observaron de color crema, la
reacción al cristal violeta fue negativa y biotipo E de canino/equino, que produjo UFC de color blanco. La
128
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
identificación de las UFC de S. aureus se realizó a partir de las placas de agar BD Baird Parker. Los
estafilococos produjeron colonias de color oscuro debido a la reducción del telurito; y crearon zonas
transparentes alrededor de las colonias correspondientes a la reacción de la lecitinasa. Posteriormente
las UFC de cocos Gram+, catalasa + y cuagulasa + se inocularon en BD Sal y Manitol y en agar selectivo
cromogénico para S. aureus (CRHOMagar® STAPH AUREUS). Las cepas de control de calidad utilizadas
fueron S. aureus ATCC 25923 como control positivo y S. epidermidis ATCC 12228 como testigo negativo
del análisis bacteriológico. Los aislamientos se conservaron en glicerol con Caldo Cerebro Corazón al
20% vol/vol a -70°C. Los resultados se evaluaron a partir de un diseño experimental de bloques al azar
establecidos por las zonas de muestreo y el efecto de bloque por la superficie expresada en cm 2
mediante el programa estadístico IBM-SPSS Versión 2.0 en donde se determinó la prueba de ANOVA de
un factor y prueba de Tukey con una significancia de P<0.05. La estimación de los resultados fue a partir
de las UFC/P de la dilución 10-3.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
De las muestras analizadas el 57.76% resulto positivas a S. aureus como se muestra en la Tabla 1,
predominando el biotipo A (humano) con un 77.68% denotado en la Tabla 2
. Tabla 1. Tamaño y proporción de la muestra.
Rastro
A
B
C
Total
No. de muestras
45
74
98
217
Aislamientos de S aureus
No.
%
28
13.36
42
20.04
51
24.34
121
57.76
% de la muestra
21%
34%
45%
100%
Tabla 2. Distribución de biotipos de Staphylococcus aureus aislados de canales de conejo.
S. aureus
Biotipos
Origen
% de Aislamiento
A
Humano
94
77.68a
C
Bovino/Ovino
11
9.09b
E
Canino/Equino
2
1.65bc
NE
---14
11.57c
Total
121
100
NE= No especifico
abc. valores con diferentes superíndices son diferentes (P <0.05)
En la Tabla 3 se muestran los valores estadísticos encontrados referentes a la contaminación de
Staphylococcus aureus presente en la superficie de las canales de conejo.
Tabla 3. Nivel de contaminación por Staphylococcus aures, en canales de conejo en rastros comerciales.
Cuenta total en placa / N. de UFC
Cuenta total en superficie / No. UFC cm 2
Rastro
N
Media
Desviación típica
Media
Desviación típica
A
45
369.16ª
102.377
148168.89ac
B
74
414.15b
62.867
165678.38b
C
98
332.62c
93.979
133783.67ac
Total
217
368.00
93.460
147643.32
Los literales diferentes por filas indican que existen diferencias significativas (P<0.05).
43188.171
25129.382
39301.790
38544.344
129
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Es probable que el nivel de contaminación sea atribuido a factores de manipulación inadecuada de
canales y la posible contaminación ambiental de los establecimientos. Esta situación puede representar
un riesgo sanitario por la presencia de S. aureus, los cuales pueden ser portadores de genes de
virulencia asociados a la producción de enterotoxinas, biofilms y plásmidos de resistencia a los
antibióticos. La contaminación de alimentos por S. aureus representa un riesgo a la salud pública por la
ocurrencia de las enfermedades transmitidas por alimentos (2). La caracterización fenotípica de los
biotipos del S. aureus permitió identificar el origen presuntivo de las cepas. El biotipo A se consideró
predominante en los aislamientos identificados. Sin embargo, los biotipos de S. aureus sugieren una
variación importante entre las cepas relacionadas con ecovares presentes en la zona estudiada (1),
asociados a los factores de virulencia de las cepas.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Se observó una elevada contaminación por Staphylococcus aureus presente en las canales de conejo en
los diferentes rastros estudiados y el biotipo predominante identificado fue el biotipo A (humano) seguido
del biotipo C (bovino/ovino) lo que representa una alerta sanitaria para el sector salud por el potencial de
diseminación de este agente patógeno en la población, considerando aún más, la posible presencia de
toxinas termoestables o una resistencia antimicrobiana.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1.Devriese L.A. 1990. Staphylococci in healthy and diseased animals. J. Appl Bacteriol; 71S-80S.
2. Garduño Guadarrama V.M, Velázquez Ordoñez V., Alonso Fresan M.U., Zamora Espinosa J.L.,
Talavera Rojas M., Domínguez Vara I.A. y Mendoza Becerril J. 2015. Non destructive standarised method
to determine bacterial contamination by Staphylococcus aureus in rabbit carcasses. Journal of the World
Wabbit Science Asociation. 23: 76.
3. MAP-SOIC. 2004. Manual de Procedimientos para Muestreo Microbiológico en Establecimientos
Certificados. Departamento de Productos Cárnicos y Mataderos. Sistema Oficial de Inspección de
Carnes. Dirección de Inocuidad de los Alimentos. Gobierno de Guatemala.
4. OMS y FAO. 2009. Organización Mundial de la Salud. Organización de las Naciones Unidas para la
Agricultura y la Alimentación. Codex Alimentarius. Producción de alimentos de origen animal. Segunda
edición, Roma.
5. SENASICA, 2010. Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria (SENASICA).
Programa de Reducción de Patógenos. Secretaria de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rular, Pesca y
Alimentación. (SAGARPA). Diario Oficial de la Federación.
6. Unión European Directive. 2001. 2001/471/EC. Reglamentos del Consejo y Parlamento de la Unión
Europea 178/2002, 882/2004, 852/2004, 853/2004, 854/2004, 2073/2005 y Directivas 2002/99 y 2004/41;
por los que se establecen la nueva normativa relativa en materia de higiene de los alimentos de origen
animal denominada “Paquete de Higiene”.
130
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ESTUDIO DE LA POBLACIÓN MICROBIANA PRESENTE EN EL QUESO ARTESANAL RANCHERO
DEL CENTRO DE MÉXICO.
STUDY OF MICROBIAL POPULATION PRESENTS IN THE ARTISAN RANCHERO CHEESE FROM
CENTRAL MEXICO.
Solís MAD* , Gutiérrez CAC, Beltrán LT y Castelán OOA
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma del Estado de México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El Queso Artesanal Ranchero (QAR) es uno de los quesos más populares en el centro de México con
gran importancia gastronómica y cultural. Es un queso genuino de excelente calidad nutrimental
elaborado con ingredientes naturales, libre de conservadores, grasas vegetal o almidón (2). Sin embargo,
se ha reportado recurrentemente la deficiente calidad sanitaria de los quesos artesanales frescos debido
a que se elaboran con leche sin pasteurizar lo que podría representar un peligro para la salud pública,
especialmente para grupos de alto riesgo (5).
OBJETIVO.
Estudiar los microorganismos presentes en el Queso Artesanal Ranchero (QAR) del Centro del México,
a través de su determinación, cuantificación e interacción entre ellos y medio ambiente,
MATERIALES Y MÉTODO
Ubicación y planteamiento del estudio. El QAR del estudio se produce en el Valle de Toluca del Estado
de México en el altiplano central del país a 19o 27' latitud Norte y 99o 38' Oeste, con altitud de 2600
msnm.
En la primera etapa estudio se hizo un recuento microbiológico bimestral, a lo largo de un año de
producción del QAR, de los grupos microbianos indicadoras de calidad sanitaria: coliformes totales (CT),
coliformes fecales (CF), levaduras y mohos (LyM). En la segunda etapa con medios selectivos se
determinó la presencia de bacterias patógenas: Staphylococcus aureus, Listeria spp, Escherichia coli y
Salmonella spp (SSA, 1994). Además de hacer un recuento, aislamiento e identificación de Bacterias
Acido Lácticas (BAL) (3).
Preparación de las muestras. Se colocó en bolsas plásticas estériles 10 g queso en 90 mL de solución
peptonada al 2%, permanecieron por 2 min en un homogenizador (Brinkmann Instruments, Inc). Se tomó
1ml del liquido sobrenadante para hacer diluciones decimales consecutivas, en solución de fosfato de
sodio monobásico según la NOM-110-SSA1-1994.
Condiciones de siembra e incubación. La siembra para la determinación de bacterias coliformes totales
se realizó por vertido en placa en agar rojo bilis violeta incubados a 35 ºC por 24 h. Coliformes fecales en
caldo EC en tubo con campana Durham a 44°C por 24 h. LyM por vertido en placa en agar papa
dextrosa a 28°C por 72 h. Staphylococcus spp. por extensión en placa en agar sal y manitol a 35°C por
48 h. BAL por extensión en placa en agar MRS a 35°C por 72h. Se realizaron los conteos microbianos y
los cálculos para obtener las unidades formadoras de colonia por gramo (UFC/g). La presencia de
Listeria spp se determinó sembrando por extensión en placa en agar oxford a 35°C por 48 h. Escherichia
coli y Salmonella spp por extensión placa en agar verde brillante a 35°C por 48h. Las BAL se incubaron
en condiciones de anaerobiosis y las demás bacterias en atmósfera aerobia por duplicado.
Prueba confirmativa para Staphylococcus aureus: Se tomaron con asa microbiológica colonias amarillas
de tamaño mediano y se inocularon en caldo nutritivo a 37 °C por 24h en aerobiosis. A estas colonias se
les realizó tinción de Gram y se seleccionaron las colonias que presentaron morfología de cocos en
racimos o cadenas gram positivos, también se realizó la prueba de catalasa considerando sólo las
bacterias que dieron positivo a esta prueba. Posteriormente se realizó la prueba de coagulasa con
plasma esteril reconstituido de conejo con EDTA incubando a 37°C por 24h.
131
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Pruebas confirmativas para Escherichia coli: Las colonias amarillas - verdes se sembraron por
agotamiento en superficie, en tubos con agar inclinado de eosina azul de metileno, se incubaron a 37 °C
por 24 h. A las colonias verdes con brillo metálico y de centro negro azul se les realizaron las siguientes
pruebas bioquímicas: citrato (C) (-), indol (I) (+), rojo de metilo (RM) (+), Voges-Proskauer (VP) (-) y
Lisina-Hierro(LH) (+). Las pruebas se realizaron por duplicado y se incluyeron tubos testigo.
Descripción de LyM: Se realizó tinción de Gram a las levaduras y tinción húmeda para mohos con
colorante de lactofenol azul de algodón en ambos casos para un examen microscópico.
Aislamiento y purificación de BAL. Se seleccionaron colonias con diferentes características
macroscópicas: (tamaño, color, forma, hemolisis). Se sembraron en tubos con agar inclinado de MRS por
agotamiento en superficie y se incubaron a 35 °C por 24h. Se verificó la pureza de las cepas por medio
de la observación en microscopio óptico de la morfología de las colonias teñidas previamente con la
técnica de Gram. Se realizaron aislamientos sucesivos con la finalidad de obtener cultivos puros.
Pruebas fenotípicas para BAL: Se realizaron las pruebas de catalasa y oxidasa. Se determinó su
crecimiento en caldo MRS a 10°C y 45°C, con 6.5 y 18% de NaCl, y a pH 4.4 y 9.6. También se observó
la producción de CO2 a partir de glucosa en campana de Durham.
Análisis Estadístico. Los datos se transformaron a log10 UFC/g. Los resultados de la primera etapa del
estudio se analizaron mediante un análisis de varianza completamente al azar empleando el comando de
modelo general lineal, en las variables donde se encontraron diferencias significativas se utilizó la prueba
de Tukey con probabilidad de P<0.05 del paquete estadístico Minitab v.14. Para la segunda etapa se
utilizó estadística descriptiva y correlación lineal entre variables.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Recuentos microbianos. En la Tabla 1 se muestran las UFC/g de las poblaciones microbianas
indicadoras de la calidad sanitaria de un alimento. Se encontraron diferencias significativas (p<0.05) en
los recuentos entre los diferentes periodos de muestreo en CF y LyM. En el M2 el recuento de CF fue
significativamente menor a los de los demás muestreos.
Tabla 1. Recuentos microbianos de las poblaciones indicadoras de calidad sanitaria del QAR.
Muestreo
Coliformes totales UFC/g
Coliformes fecales NMP/g
Levadura y MohoUFC/g
M1
4.3
2.2 a
5.2 c
M2
4.1
2.0 b
4.1 b
M3
3.9
2.1 a
3.6 a
M4
3.6
2.1 a
4.4 b
M5
3.7
2.1 a
4.0 b
M6
4.1
2.2 a
4.0 b
NOM*
≤2
Max 2
Max 2.7
n = 18. abc= Literal diferente entre líneas indica diferencia significativa (P<0.05). UFC/g= Unidad Formadora de
Colonia por gramo, NMP= Número más probable, Unidades trasformadas en log 10. * = referencia modificación a la
NOM SSA 243 (2012).
En la determinación de bacterias patógenas, no hubo presencia de Listeria sp. tampoco de Salmonella
sp. y se observó una considerable contaminación por S. aureus en el 77.8 %, seguida por una menor
cantidad de E. coli en 27.8% de los casos. Con respecto a la observación de LyM, se identificó la
presencia del genero Aspergillus en el 55.6% de los quesos. En la Tabla 2 se pueden observar los
recuentos de las bacterias antagónicas S. aureus y BAL.
Tabla 2. Recuento de bacterias antagónicas en el QAR.
Bacteria log10 UFC/g
Media
Max
Min
DE
S. aureus
6.0
6.7
<1
6.2
Bacterias acido lácticas
6.7
7.7
4.0
7.0
n = 18. UFC/g= Unidad formadora de colonia por gramo. Unidades trasformadas a log10
132
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Estas poblaciones son las que tuvieron mayor presencia dentro de la comunidad microbiana del QAR.
De estas dos, las BAL prevalecieron debido a que en el 100% de los quesos se encontraron mínimo 4.0
log10 UFC/g lo que es equiparable a la media de CT y LyM. Algunas cepas de BAL muestran
antagonismo con algunas bacterias patógenas es probable que por esta razón no se encontró
Salmonella ni Listeria en QAR (4).
Se observó una relación positiva significativa de 0.81 entre la abundancia de S. aureus y BAL. En los
quesos que hubo presencia de S. aureus los conteos de BAL fueron bajos, de la misma manera en los
quesos donde se encontró de manera abundante a S. aureus se tuvieron altos conteos de BAL.
La población de BAL estuvo integrada por 130 cepas de las cuales el principal genero identificado fue
Lactococcus 43.8%, seguido por Streptococcus 38.5%, Enterococcus 9.2% y Lactobacillus 8.5%. Para
su identificación se observó que fuesen gram positivas, catalasa y oxidasas negativas. Así como sus
características morfológicas. Además de las pruebas de fermentación y crecimiento en diferentes
condiciones como criterios para clasificar BAL (1).
Figura 2. Relación entre los conteos de BAL y S. aureus presentes en el QAR.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
La grupo microbiano predominante en el QAR fueron las bacterias acido lácticas (BAL). Probablemente
sea la razón por la que no hubo presencia de Salmonella ni Listeria. Las BAL mostraron correlación
positiva con los conteos de S. aureus. Los recuentos de microorganismos indicadores de calidad sanitaria
superaron los límites permitidos por la legislación en la mayoría de los casos durante el año de
producción. El recuento de coliformes fecales es cercano al límite máximo permitido en la legislación por
lo que es factible que mejorando las prácticas de ordeño y manufactura se pueda disminuir su presencia
y cumplir con la NOM. S. aureus fue el principal peligro microbiológico encontrado, seguido por
Aspergillus y E. coli. Esto sugiere que al elaborar un programa de aseguramiento de calidad se tendrá
que poner especial atención en mejorar la salud de la ubre de las vacas, en las operaciones de limpieza
de utensilios, equipos y superficies de producción, y la higiene en las prácticas de manufactura y
distribución.
REFERENCIAS
1. Salminen, S. y Von Wright, A. (eds.). 2012. Lactic acid bacteria: microbiological and functional aspects.
4° ed. CRC Press. Florida, EUA. pp 759.
2. Solís-Méndez A.D; J. Estrada-Flores, y O.A. Castelán-Ortega. 2013. A Study on the Texture Diversity
of the Artisan Ranchero Cheese from Central Mexico. International Journal of Dairy Technology 66 (1):
37-44.
3. SSA. Secretaria de Salud. 1994. Normas Oficiales Mexicanas. Bienes y servicios. Ciudad de México,
México.
4. Thapa, N., P. Joydeb y J.P. Tamang. 2006. Phenotypic identification and technological properties of
lactic acid bacteria isolated from traditionally processed fish products of the Eastern Himalayas.
International Journal of food microbiology 107 (1): 33-38.
5. Villegas de Gante, A., and F. Cervantes-Escoto. 2011. La genuinidad y tipicidad en la revalorización de
los quesos artesanales mexicanos. Estudios Sociales 19 (38): 145-164.
133
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DETECCIÓN DE ESCHERICHIA COLI PRODUCTORA DE VEROTOXINA (VTEC) EN HATOS
LECHEROS DE PRODUCCIÓN FAMILIAR EN EL VALLE DE TOLUCA.
VTEC ESCHERICHIA COLI STRAINS ISOLATED FROM SMALLHOLDER FARMS IN THE TOLUCA
VALLEY.
Alonso FMU*, Velázquez OV, Díaz ZS, Valladares CB, Zamora EJL
Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Km. 15.5 Carretera Toluca-Atlacomulco, Toluca,
México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
En el Valle de Toluca la producción lechera es una actividad agropecuaria en la que prevalece el sistema
de producción de tipo familiar a pequeña escala; generalmente de traspatio con ordeño manual,
mecánico y la leche producida en los hatos familiares es destinada para autoconsumo y abasto regional
del producto y sus derivados. Las condiciones de manejo e higiene del hato lechero en el sistema de
producción familiar regularmente son deficientes, aunados a la falta de programas de prevención y
control de enfermedades de importancia sanitaria y económica para la producción lechera.
La contaminación de la leche en los hatos, se puede producir a partir de vacas con infección en la
glándula mamaria por patógenos infecciosos causantes de mastitis, así como también derivada del
ambiente de producción, la mala higiene en el hato y un manejo inadecuado del ordeño. E. coli no
solamente se considera como un indicador de contaminación fecal, que refleja prácticas sanitarias de
higiene deficientes durante el ordeño. Así, la leche puede ser contaminarse fácilmente por mal manejo de
los ordeñadores que practican una higiene personal inadecuada, pudiendo provocar infecciones
alimentarias. Las cepas de E. coli productoras de verotoxina (VTEC), se consideran un problema
emergente de salud humana, al ocasionar diferentes condiciones clínicas; diarrea aguda, deshidratación
severa, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico de curso fatal. Dentro de estas destaca el
serotipo O157:H7, agente epidémico para la población humana. La infección por cepas VTEC en el
hombre suele producirse por consumo de alimentos contaminados, dentro de estos la leche fresca sin
pasteurizar (Prats et al., 1996), por lo que el objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de cepas
VTEC en la leche obtenida de vacas en los hatos lecheros de producción familiar en el Valle de Toluca.
MATERIALES Y MÉTODO
Se realizó un estudio de corte seccional en donde se obtuvieron de manera aleatoria simple 387
muestras de leche de vacas de hatos lecheros de producción de diferentes edades, razas y tipos
lecheros en 31 hatos lecheros de producción familiar del Valle de Toluca, de los municipios de: Temoaya
(Zona A), Tenango del Valle (Zona B), Almoloya de Juárez (Zona C) y Zinacantepec (Zona D). La
muestra de leche se obtuvo de líneas de ordeño de vacas de hatos lecheros de producción de diferentes
edades, razas y tipos lecheros de acuerdo con los procedimientos del National Mastitis Council (1999).
Las muestras se obtuvieron antes del ordeño, realizando el lavado y desinfección de la ubre con agua y
con solución yodada (500 ppm), se desinfectó el meato del pezón con torunda empapada de alcohol al
70%, dejándose evaporar el alcohol antes de recolectar la muestra, se desechó la leche del preordeño y
se tomaron los siguientes chorros en tubos de ensaye con tapón de rosca estériles. Las muestras se
identificaron, y se mantuvieron a 4°C hasta el procesamiento bacteriológico. El aislamiento de E. coli se
realizó inoculando 0.010 mL de leche sobre placas de gelosa sangre y agar MacConkey incubadas
durante 24 horas a 37°C. A partir de las unidades formadoras de colonia (UFC) se realizó tinción Gram y
la prueba de KOH. Para la identificación bacteriológica de E. coli se inocularon en los medios: agar de
hierro y triple azúcar (TSI), agar citrato, agar urea, agar Lisina descarboxilasa (LIA) y agar SIM a la que
se le realizo la prueba de Indol. La identificación final se realizó mediante el procedimiento estandarizado
del sistema API 20E, siguiendo las instrucciones del fabricante BioMerieux. La identificación in vitro de
verotoxinas se realizó mediante un kit comercial de enzimoinmunoensayo (Ridascreen Verotoxin R134
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Biopharm, Alemania), siguiendo las instrucciones del fabricante, leyendo las placas de ELISA a 490 nm
en un espectofotómetro (R-Biopharm, Alemania). Los resultados se interpretaron a partir de la tabla de
valores positivos y negativos al considerar su punto de corte establecido de acuerdo con el inserto
técnico de 0 a 100 bacterias agregadas presentes en la prueba. El tamaño de muestra se calculó
considerando una tasa de positividad de E. coli en hatos lecheros de producción familiar de 18%
(Alcántara y Sánchez, 2006) de acuerdo con un muestreo aleatorio simple utilizando la fórmula para
poblaciones finitas. Los resultados se evaluaron mediante estadística descriptiva a partir de las
frecuencias observadas de positividad al aislamiento bacteriológico de cepas de E. coli y de E. coli
productora de verotoxinas, empleando la prueba de Χ 2 mediante el programa EPI INFO versión 3.4.1
(P˂0.05).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Del total de muestras de leche recolectadas, 282 fueron positivas al aislamiento bacteriológico y 105
fueron negativas. Se obtuvieron 9.8% aislamientos positivos de Escherichia coli, la cual predominó sobre
otras bacterias coliformes. En los 31 hatos estudiados 19 correspondieron al tipo de ordeño mecánico y
12 al sistema de ordeño manual, de los que se obtuvieron 18 aislamientos de E. coli y 18 aislamientos de
otras bacterias coliformes. En las unidades con ordeño mecánico, los principales agentes aisados fueron
E. coli y Kl. oxytoca y en menor proporción Prov. Alcalifaciens con una menor frecuencia de aislamiento
de E. coli en el ordeño manual predominando Kl. Oxytoca (P<0.05). La mayor tasa de positividad para E.
coli se presentó en hatos lecheros con un tamaño de hato mayor a 30 vacas con un 22.2% seguida por
hatos menores a 10 vacas con un 5.5%. Kl. oxytoca se encontró con una mayor tasa de positividad en
hatos lecheros que cuentan con tamaño de hato mayor a 40 vacas (25%). La distribución municipal de
aislamientos de E. coli de acuerdo con el total de aislamientos bacteriológicos fue mayor en la zona
municipal A (Temoaya) con 50% y la zona C (Almoloya de Juarez) con 44.4% (P<0.05). Una distribución
menor se apreció en la zona B (Tenango del Valle) con 5.5% (P<0.05). De las 18 cepas de E. coli
obtenidas 3/18 fueron identificadas como productoras de verotoxinas 16.6% asociadas con el sistema de
ordeño mecánico. En México es de gran importancia el sistema campesino de produción familiar ya que
contribuye con el 30% de la producción nacional de leche, donde predomina el sistema de ordeño
manual, aunque en los hatos de producción familiar evaluados predominó el sistema de ordeño
mecánico. En este estudio se encontró una baja frecuencia de E. coli aun cuando las muestras se
recolectaron en verano, época en donde su prevalencia es mayor (Hussein, 2007), por lo que puede
suponerse que este hallazgo se deba a la presentación de infecciones de corta duración, ya que el 50%
tienen una duración de 10 dias, el 70% menos de 30 días y solamente el 2% prevalecen por más de 100
días. En los hatos evaluados, predominó el sistema de ordeño mecánico con unidades portátiles, con lo
que es posible que se incremente el riesgo de infección de la glándula mamaria y el desarrollo de mastitis
por agentes patógenos infecciosos y ambientales. En este tipo de hatos existe una mayor prevalencia de
mastitis subclínica, en comparación con los ordeñados manualmente (Faría et al., 2005), aunque se ha
demostrado que el ordeño manual aunado con una higiene deficiente, contribuyen al desarrollo de la
infección glandular. Asimismo, se encontró un mayor porcentaje de E. coli en hatos con un número mayor
de 30 vacas, debido probablemente a que las infecciones con estos organismos son más altas en hatos
confinados, cuando existen condiciones sucias (Unnerstad, 2009) y durante los meses de verano. En
este estudio, se identificó una baja proporción de cepas de E. coli productoras de verotoxinas, 3 de 18
aislamientos en hatos lecheros de producción (16.6%). Se han realizado pocos trabajos acerca de la
frecuencia de VTEC en leche en México. Miranda y col., (2008) realizaron el primer estudio en tanques
de leche de las cooperativas de México, donde establecieron la presencia de patógenos que causan
mastitis.
CONCLUSIONES
Se obtuvo una frecuencia de aislamiento de Escherichia coli del 9.8% en leche distribuida en hatos
lecheros de producción familiar donde se practica el sistema de ordeño mecánico, con una baja
frecuencia de cepas productoras de verotoxinas (3 de 18 aislamientos) en tres de las zonas municipales
estudiadas.
135
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
BIBLIOGRAFÍA
Faría R.J.F., García U.A., D’Pool G., Valero L.K., Allara CM, Angelosante G. (2005). Rev. Cient.
XV(2):109-118.
Hussein H.S. (2007). J. Anim. Sci., 85 (E.Suppl.):E63-E72.
Miranda M.R.E., Rojas T.V., Segura C.R., Carrillo C.E.M., Sánchez G.M.G., Castor S.R. y Trigo T.F.J.
(2008). Ann. N.Y. Acad. Sci. 1149:300-302.
Prats G., Frías C., Margall N., Llovet T., Gaztelurrutia L., Elcuaz R., Canut A., Bartolomé R.M., Torroba L.,
Dorronsoro I., Blanco J., Blanco M., Rabella N., Coll P., Mirellis B. (1996). Enf. Infecc. Microbiol. Clin.,
14(1):7-15.
Unnerstad HE, Lindberg A, Waller KP, Ekman T, Artursson K, Nilsson-Öst M, Bengtsson B. 2009. Vet.
Microbiol. 137: 90-97.
136
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
IDENTIFICACIÓN DE CEPAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS PRODUCTORAS DE
ENTEROTOXINAS (SES) EN AISLAMIENTOS PROVENIENTES DE HATOS LECHEROS DE
PRODUCCIÓN FAMILIAR DEL VALLE DE TOLUCA.
STAPHYLOCOCCUS AUREUS ENTEROTOXIN PRODUCTION STRAINS ISOLATED FROM
SMALLHOLDER MILK FARMS IN THE TOLUCA VALLEY.
Alonso FMU, Velázquez OV, Palma ZM, Díaz ZS
Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Toluca, México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) continúan siendo un riesgo a la salud pública en todo
el mundo y son una causa importante de morbilidad. Aunque la mayoría son leves y se asocian a
síntomas gastrointestinales agudos como diarrea y vómito, en algunas ocasiones son mucho más
severas y peligrosas para la vida, especialmente en niños. Estas enfermedades pueden ser clasificadas
en dos categorías: intoxicación alimentaria e infección alimentaria. La intoxicación alimentaria es
producida por la ingestión de toxinas formadas en tejidos de plantas o animales, o productos metabólicos
de microorganismos en los alimentos, aparece después del consumo de alimentos contaminados con
microorganismos o con metabolítos elaborados por ellos, por ejemplo Staphyloccocus aureus y
Clostridium botulinum.
La presencia de Staphylococcus aureus es una de las causas más frecuentes de intoxicación alimentaria
en la mayoría de los países del mundo, sobre todo en aquellos lugares en los que el clima es húmedo o
mojado, produciendo gastroenteritis, como resultado de la descomposición de los alimentos, y de las
enterotoxinas estafilocócicas que ellos producen. La aparición de los síntomas por ETA depende de la
cantidad, tipo y toxicidad de la toxina. Las enterotoxinas más comunes son 7 toxinas que se designan A,
B, C1, C2, C3, D, E, y TSST-1 (toxina productora del síndrome de shock tóxico, originalmente descrito
como enterotoxina F). Son termoestables y los alimentos en los cuales se encuentran principalmente son:
carne, leche, quesos, leche en polvo, chocolates y embutidos.La pasteurización de la leche es un
tratamiento típico efectivo para la destrucción de los microorganismos patógenos. Sin embargo el hábito
de consumir leche cruda en esta zona, sigue siendo la causa principal de contaminación por la que este
agente puede contaminar los alimentos durante su preparación o procesamiento.
Debido a los problemas que causa dentro de la salud pública, es importante detectar su presencia en la
leche cruda, ya que la principal población afectada en México con problemas diarreicos y de vómito son
los niños, aunque no se ha demostrado una asociación directa de estos problemas con el consumo de
estos alimentos con base en reportes epidemiológicos que sirvan como referencia en nuestro Estado. En
el Valle de Toluca no existen estudios tendientes a la determinación de la producción de enterotoxinas
por parte de Staphylococcus aureus en leche cruda proveniente de hatos lecheros de producción familiar,
por lo que el objetivo del presente trabajo fue conocer si las cepas de Staphylococcus aureus presentes
en la zona son capaces de producir enterotoxinas y convertirse en un riesgo potencial para los
consumidores de este tipo de alimento de origen animal.
MATERIAL Y MÉTODO
Las muestras de leche se obtuvieron de hatos lecheros de producción familiar en los municipios de:
Toluca, Zinacantepec, Almoloya de Juárez, Temoaya y Tenango del Valle, los cuales contaban con un
máximo de 30 vacas, donde el ganado es producto de cruzas de razas: suizo, Holstein y
predominantemente Criollo. Predominó el sistema de ordeño manual. No existían prácticas de medicina
preventiva ni de manejo reproductivo. Se desinfectaron los pezones de la glándula mamaria de la vaca
con torundas de algodón sumergidas en una solución de alcohol al 70%, se secaron con toallas de papel
y se procedió a tomar la muestra de leche, tirando la primera fracción de leche que saliera del pezón, se
137
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
colectó en tubos de plástico estériles con tapa de rosca de 10 mL. Posteriormente estas muestras de
leche se transportaron manteniendo una temperatura de refrigeración entre 4 y 8˚C al laboratorio, para su
posterior procesamiento bacteriológico. Se calculó el tamaño de muestra a través de la fórmula para
poblaciones finitas (288) y la evaluación de los resultados se realizó mediante estadística descriptiva y la
prueba de Χ2 (ji cuadrada) (p < 0.05). El aislamiento del Staphylococcus aureus se realizó por el método
directo en placa, al inocular las muestras de leche en Agar Sal y manitol con una emulsión al 3% de yema
de huevo. Posteriormente se incubaron a 37ºC por 48 horas. Se procedió a la identificación macroscópica
en la forma típica de las colonias y se observó la reacción a la fermentación del medio sal y manitol
además de la reacción de yema de huevo. De las muestras positivas, se tomaron de 1-5 colonias típicas
y se transfirieron a tubos con 5 mL de caldo infusión cerebro corazón, con 7% NaCl y se incubaron 24 h
37ºC. Subsecuentemente 10 µL de caldo de los cultivos se virtieron en las cajas de Agar Sal y Manitol, y
se incubaron a 37ºC, durante 24 h. A partir de estas colonias, se identificó Staphylococcus aureus
mediante las pruebas de catalasa, bioquímicas y coagulasa en tubo. Asimismo se realizó la tinción de
gram. Para la prueba de lecitinasa los aislamientos positivos de S. aureus se sembraron en agar sal y
manitol suplementado con 3% de emulsión de yema de huevo fresco, se incubaron a 37ºC por 48 h y se
identificaron las colonias típicas. Para la producción de DNasa, las cepas confirmadas como S. aureus se
inocularon en agar DNasa formando una banda al cultivar con el asa. Las placas se incubaron durante 24
h a 37ºC, y se le agregó una solución de HCl 1N, dejando que penetre en toda la superficie del medio
durante 2 min. Los microorganismos positivos, se mostraron rodeados de zonas transparentes de ADN
despolimerizado. De acuerdo con los resultados de las pruebas de coagulasa, lecitinasa y DNasa, se
establecieron los patotipos I, II, III y IV para determinar la producción de enterotoxinas. Para la
identificación de las cepas productoras de enterotoxinas se utilizó el Kit de 3M TECRA Staph Enterotoxin
Visual Immunoassay (VIA), siguiendo las instrucciones del fabricante.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
De un total de 304 muestras de leche de 23 hatos lecheros de producción familiar, se identificaron dos
cepas productoras de enterotoxinas de 38 aisladas en el estudio (5.2%), de vacas lecheras en hatos de
producción familiar en cuatro municipios del Valle de Toluca, estableciendo los patotipos que se asocian
con la producción de enterotoxinas. El municipio con mayor número de haos muestreados fue Tenango
del Valle (12), seguido de Temoaya (7) y Toluca y Temoaya (2 en cada uno). En Zinacantepec se
muestrearon 109 vacas (38.56% del número total de vacas a muestrear), en Tenango 107 vacas
(35.02%), en Temoaya 57 (18.75%) y en Tolua 31 (10.2%). La frecuencia general de aislamientos de S.
aureus en los hatos fue del 27.3% (83/304), con mayor frecuencia de infección en Temoaya 34.94% (29
aislamientos) y Toluca 24.1% (29 aislamientos), seguidos de Zinacantepec 21.69% (18 aislamientos) y
Tenango 19.28% (16 aislamientos). Los factores de virulencia encontrados en las cepas, asociados con
la producción de enterotoxinas fueron: lecitinasa con un 25.3% (21/83) y DNasa 37.34% (31/83). De las
38/83 cepas seleccionadas para determinar la producción de enterotoxinas, el 5.2% (2/38), fueron
identifiadas como cepas enterotoxicogénicas, las cuales presentaron el patotipo IV y provenían del
municipio de Zinacantepec. Se identificó una baja proporción de cepas productoras de enterotoxinas
(2/38) en aislamientos provenientes de hatos lecheros de producción familiar, equivalente a un 5.2%. Los
aislamientos presentaron el patotipo IV (coagulasa positivo-lecitinasa-DNasa), demostrando que la
expresión de estos factores de virulencia por parte de estas cepas se relaciona con la producción de
enterotoxinas. Estos resultados concuerdan con el resultado de Loncarevic y col. (2005) en Noruega, en
donde obtuvieron un 5.2% de muestras de leche cruda de vaca, cabra y quesos elaborados con esta
leche. De acuerdo con Rosas (2007), la leche y sus derivados se consideran como alimentos de alto
riesgo asociados con enfermedades transmitidas por alimentos debido a su alto contenido proteico, que
pueden dar lugar al desarrollo y proliferación de bacterias.
CONCLUSIONES
La frecuencia de aislamiento de S. aureus obtenida proveniente de muestras de leche cruda de vaca
(27.32%) se mantiene similar con respecto a estudios previos realizados en el Valle de Toluca. Se
confirma la presencia de cepas de S. aureus productoras de enterotoxinas (5.2%) aunado a la relación
que existe entre la producción de éstas con la capacidad de producir lecitinasa y DNAasa.
138
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
BIBLIOGRAFÍA
Loncarevic S., Jørgensen H.J., Løvseth A., Mathisen T. y Rørvik L.M. 2005. Enterotoxigenic
Staphylococcus aureus in bulk milk in Norway. J. Appl. Microbiol., 99: 158–166.
Rosas Morales M.R. 2007. Contaminaciones alimentarias. Cuadros principales, tratamiento y prevención.
OFFARM. 26(6): 95-100.
139
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Inocuidad de alimentos
IDENTIFICACIÓN DE TLR4 EN MACRÓFAGOS DE OVINO Y SU ACTIVACIÓN DESPUÉS DE
INTERACCIONAR CON VESÍCULAS DE MEMBRANA EXTERNA DE MANNHEIMIA HAEMOLYTICA
A2.
IDENTIFICATION OF TLR4 IN SHEEP MACROPHAGES AND ITS ACTIVATION AFTER INTERACTING
WITH OUTER MEMBRANE VESICLES OF MANNHEIMIA HAEMOLYTICA A2.
Avalos GC*1, González RC 1, Riquelme ZE1, Valencia RMA 1, De la Garza AM 2
1Facultad
de Estudios Superiores Cuautitlán, Universidad Nacional Autónoma de México; 2Departamento
de Biología Celular, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
A nivel mundial, las neumonías son consideradas la principal causa de muerte en los ovinos. Las
pérdidas económicas que éstas originan, incluyen la muerte de los animales, disminución de la ganancia
de peso, deficiente conversión alimenticia y elevados costos en tratamientos de neumonías crónicas,
alcanzando altos costos de producción. El porcentaje de morbilidad por neumonías en rumiantes es de
aproximadamente el 75% y en cuanto al nivel de mortalidad ocasionado por la enfermedad los
porcentajes van desde el 5% hasta el 40%.1 La etiología de la Mannheimiosis Neumónica en ovinos, es
considerada multifactorial e incluye una combinación de estrés e infección viral, que resulta en una
enfermedad aguda donde Mannheimia haemolytica es el principal patógeno bacteriano involucrado.
Mannheimia haemolytica tiene la capacidad de producir microvesículas, estructuras esféricas formadas a
partir de su membrana en cualquier fase de crecimiento. Dichas estructuras, al momento de su
formación, engloban constitutivamente y en su interior, importantes factores de virulencia entre los cuales
destaca la presencia de lipopolisacárido (LPS), que forma parte de la membrana bacteriana. El LPS es la
endotoxina de las bacterias Gram negativas, responsable de la respuesta inflamatoria que produce la
célula hospedadora ante la bacteria.2 Así mismo, se sabe que dicho antígeno, es reconocido por
receptores tipo Toll-4, expresados en las células presentadoras de antígenos como los macrófagos,
desencadenando diferentes vías de señalización involucradas en la respuesta inmune innata.3
OBJETIVO.
El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del LPS de microvesículas de M. haemolytica A2 cuando
interacciona con el TLR4 expresado en macrófagos de ovinos en condiciones in vitro.
MATERIALES Y METÓDOS.
La estrategia experimental utilizada fue cuantificar mediante qRT-PCR el mRNA de tres citocinas de
importancia en la respuesta inmune innata, IL-1 β, TNF-α e IL-10. La cuantificación de estas citocinas se
realizó posterior al tratamiento de macrófagos ovinos mantenidos en cultivo celular, con una de dos
diferentes concentraciones de microvesículas (MVs) de M. haemolytica, correspondientes a 5 y 10 µg de
proteína total, después de 1 y 3 h de tratamiento. Dichos resultados fueron normalizados mediante el
método ΔΔCT con el gen de referencia GAPDH y finalmente analizados mediante una técnica de ANOVA
de una vía y una prueba de Tukey con un intervalo de confidencialidad del 95%.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los resultados de este estudio, identifican al LPS constitutivo de las MVs de M. haemolytica A2 como un
potente estimulador de las citocinas proinflamatorias IL-1β y TNF-α en macrófagos ovinos. Además, se
demostró, que esta respuesta es dependiente del tiempo y de la dosis utilizada en el tratamiento,
observándose mayor efecto para IL-1β después de 1 h y para TNF-α a las 3 h post-tratamiento, debido
probablemente a la vida media de los mRNA. No se observó cambio en la respuesta para la citocina antiinflamatoria IL-10. Además, se confirmó que el aumento en la transcripción de estos genes es mediado
140
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
V
Mecanismos de infección y enfermedad
Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
específicamente por la vía de señalización LPS-MVS/TLR4 utilizando a la polimixina B como un inhibidor
de esta ruta.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Las MVs del género bacteriano M. haemolytica A2 son potentes estimuladoras de producción de las
citocinas proinflamatorias IL-1β y TNF-α en macrófagos ovinos. Parte de esta respuesta es mediada
específicamente por la vía de señalización LPS-MVS/TLR4. Establecer parte del efecto del sistema
inmune innato, que las células de respuesta primaria establecen en presencia de MVs de M. haemolytica
A2, nos permitirá profundizar en el conocimiento del papel de éstas en la patogenia de la enfermedad, así
como su uso como un futuro agente vacunal (No. de registro de trámite de patente: MX/a/2011/011868)
específico de serotipo para ganado ovino que prevenga y controle efectivamente la enfermedad en el
país, ya que hasta el momento en el mercado nacional se utilizan inmunógenos enriquecidos con el
serotipo A1, dirigidos específicamente a bovinos, los cuales los veterinarios y productores utilizan y
adecúan para la profilaxis en sus unidades de producción ovina con poco éxito.
BIBLIOGRAFÍA.
Pijoan A. P, C. D. Cost of pneumonia in dairy calves lodged under two housing systems. Vet. Méx 34,
333–342 (2003).
González R. C., Tenorio G. V., Trigo T. F., Reyes L.M., León S. N., Godínez V. D., de la G. A. M.
Characterization of Microvesicles of Mannheimia haemolytica Serotype A1 (Reference Strain) and
Serotype A2 (Field Isolate). J. Anim. Vet. Adv. 6, 1172–1178 (2007).
Kawai, T., Akira, S. Toll-like receptors and their crosstalk with other innate receptors in infection and
immunity. Immunity 34, 637–50 (2011).
141
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DESARROLLO Y EVALUACIÓN EN CAMPO DE UNA BACTERINA DE ESCHERICHIA COLI, EN
CAPRINOS.
DEVELOPMENT AND FIELD EVALUATION TO ESCHERICHIA COLI BACTERINE IN GOATS.
Limón GMM1*, Hernández CR3, Herrera LE2, Navarro OA4, Palomares REG2, Díaz AE2.
1Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia. UNAM; 2CENID-Microbiología Animal, INIFAP; 3Hospital
Manuel Gea González SS; 4Facultad de Medicina UNAM.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En nuestro país la población de ganado caprino en el año del 2014 según los censos ganaderos de
SAGARPA es de 8,664,613 caprinos, y se puede decir que es el rebaño más grande del continente
americano.
Se estima que en México existen 494,000 unidades de producción caprina y
aproximadamente 1.5 millones de mexicanos se relaciona con esta actividad productiva ya sea en forma
primaria o secundaria. Con una producción de 39,656 mil toneladas de carne. (SIAP, 2014).
Las diarreas en neonatos suponen la mayor amenaza para la economía de las Unidades de Producción
(UP), son una de las principales causas de morbilidad y de letalidad. (Cuellar et al, 2012).
Los rumiantes son inmunocompetentes cuando nacen. No obstante, las respuestas de inmunidad activa
que generan frente a los estímulos antigénicos suelen ser tardías, demorándose por lo menos seis
semanas y a menudo ineficaces para combatir las infecciones. Por lo tanto, la inmunidad de los recién
nacidos depende casi exclusivamente de la transferencia de inmunidad pasiva mediante
inmunoglobulinas maternas a través del calostro.
La etiología de las diarreas neonatales es multifactorial y pluricausal. La colibacilosis tiene un gran
impacto sobre la economía ganadera debido a la alta morbilidad (10-50%) y letalidad (60%), por lo que
incrementa los costos de producción, disminuyendo la productividad ganadera (Cuellar et al, 2012);
además el tratamiento a infecciones por E. coli se ve amenazado por la aparición de resistencia a los
quimioterapéuticos; aunado a que no existe inmunógeno alguno en México para los caprinos. La
bacterina de E. coli, al ser aplicada a cabras gestantes proporcionará una sólida inmunidad pasiva a los
cabritos y los protegerá contra la colibacilosis.
OBJETIVO.
Desarrollar y evaluar una bacterina elaborada a partir de cepas patógenas de E. coli aisladas de casos de
diarrea en cabritos, con la que se pretende lograr una inmunización pasiva en los cabritos al ser aplicada
en cabras próximas a parir, en rebaños con problemas de colibacilosis.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Producción de la bacterina. Para preparar la bacterina se seleccionaron tres aislados que fueron
caracterizados en trabajos previos a partir de cabritos con diarrea (Martinez, 2013; Yañez, 2015) estas
cepas pertenecen al grupo B1, H8:O25 y tienen los genes de virulencia st y stx2, las cuales presentaron
escasa resistencia a los quimioterapéuticos, mostrando una combinación de los factores de virulencia de
los patotipos EHEC y ETEC. Se preparó a una dosis de 4 X 109 ufc/ml. Posteriormente el cultivo
bacteriano se inactivó por calentamiento a 100 °C durante 1 hora, Se rompieron las células mediante 20
ciclos de congelación-descongelación. Se utilizó como adyuvante el Hidróxido de Aluminio a una
proporción de 1:10. Se mantuvo la bacterina a 4 °C hasta su uso.
Primer experimento. Inmunización y toma de muestras. Se seleccionaron 12 unidades de producción
caprina en los municipios de Abasolo (5) y Juventino Rosas (7) en Guanajuato las cuales tienen un
sistema de producción intensivo o semiestabulado, estas UP en su mayoría no tienen un apropiado
manejo sanitario y reproductivo de los animales. Además presentaban problemas comprobados de
142
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
colibacilosis, por lo cual se aplicó la bacterina en una dosis de 2 ml por vía intramuscular, tres semanas
antes del parto, a 173 de las cabras y 154 cabras quedaron como grupo control sin vacunar; se
colectaron hisopos rectales de ambos grupos de hembras. Durante tres semanas posteriores al
nacimiento se registró la presencia o ausencia de signos clínicos de la colibacilosis, en los casos de
diarrea se colectaron hisopos rectales de los cabritos. Se obtuvo la siguiente cantidad de muestras: 56
muestras de cabritos que provenían de madres sin vacunar de los cuales 12 mostraron diarrea; y 60 de
cabritos de madres vacunadas, de los cuales 9 presentaban diarrea.
Análisis de muestras. A partir de las muestras colectadas se realizó el aislamiento de la bacteria. Los
cuales fueron identificados como E. coli mediante un PCR que detecta el gen gadA y por las pruebas
bioquímicas IMVIC para enterobacterias. La caracterización de estos aislamientos se realizó mediante la
realización de PCR para determinar grupos filogenéticos identificando los genes chuA, yjaA y TSPE4.C2.
La serotipificación se realizó de acuerdo a la metodología descrita por Orskov F y Orskov (1997) en la
Facultad de Medicina de la UNAM. Se utilizaron antisueros de conejo contra los 186 antígenos somáticos
(O) y antisueros monovalentes contra los 56 antígenos flagelares (H) del esquema de tipificación. Se
incluyeron sueros específicos para definir el serogrupo de E. coli. En la tipificación serológica se usaron
45 sueros anti-O de Shigella spp., (S. dysenteriae O1-O15; S. boydii O1-O20; S. flexneri O1-O6, con sus
subtipos a y b de O1, O2, O3, O4 y O5 además las variedades X e Y; S. sonnei I y II) para diferenciar una
posible reacción cruzada.
Se realizó el MIC (Concentración Mínima Inhibitoria) para determinar su resistencia a antimicrobianos.
Se efectuaron PCR’s para establecer la presencia los genes bfp, stx1, stx2, eae, rfbEO157, fliCH7, lt, st,
que están asociados a factores de virulencia.
Segundo experimento. Inmunización y toma de muestras. Se realizó la aplicación de la bacterina en
cabras del municipio de Juventino Rosas, Guanajuato; se seleccionaron dos UP, las cuales tienen un
sistema de producción semiintensivo.
De los dos rebaños se formaron de manera aleatoria dos grupos, el primero constó de 25 cabras se le
aplicó por vía intramuscular Solución Salina Fisiológica (grupo control) y al segundo grupo de 17 hembras
gestantes (experimental) se le inyectaron por la misma vía 2 ml de la bacterina que fue elaborada bajo las
mismas condiciones que en el primer experimento.
De las cabras de ambos grupos se obtuvo una muestra sanguínea para obtención de suero para realizar
una ELISA indirecta, en la cual se utiliza como antígeno el Lipopolisacárido 025 presente en las cepas
que se utilizaron para la elaboración de la bacterina, obtenido mediante el método de extracción
propuesto por Siddons (1993). Esta actividad se llevó a cabo en el Laboratorio de Bacteriología de la
Facultad de Medicina de la UNAM.
Del mismo modo que en el primer experimento se continuó con el monitoreo de las cabras gestantes
hasta el parto, y de sus crías. En el caso de diarreas se colectaron hisopos, los cuales se trabajaron de la
misma manera que en primer experimento para el aislamiento y caracterización de E. coli.
RESULTADOS PRELIMINARES Y DISCUSIÓN
Primer experimento. Con base en el seguimiento que se les dio a las crías durante tres semanas
posteriores a su nacimiento, se encontró que en 11 de las 12 UP trabajadas hubo disminución de las
diarreas, y solo tuvieron diarrea las crías de 4/173 hembras gestantes a diferencia de los casos
presentados en años anteriores.
Se obtuvo un total de 480 aislamientos de E. coli, de los cuales se seleccionaron 56 aislados, que
incluyeron hembras de ambos grupos y sus respectivas crías.
De las 173 hembras vacunadas solo 9 crías de cuatro madres diferentes presentaron diarrea aunque los
serotipos encontrados en estas no coincidían con las cepas O25:H8, ni tampoco contenían los genes de
virulencia de estas cepas; lo cual nos indica que la bacterina no causo diarrea en los animales.
En los aislamientos estudiados, hubo una amplia variedad de serotipos los cuales mostraban
combinación de genes de virulencia, pertenecientes a los patotipos EHEC, ETEC y EPEC, aunque en
143
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
otros casos los aislados no presentaron ningún gen de virulencia que fuera detectado mediante PCR. Los
serogrupos O153, O11, O8, O91, O103 fueron reportados por Cid, et al (1996) y por Jacob, et al (2013),
aislados exclusivamente a partir de diarrea en cabras, mientras que en este estudio algunos de los
aislamientos se clasificaron en esos serogrupos, pero procedentes de cabritos sin diarrea, además
mediante la PCR para grupos filogenéticos se ubicaron dentro de las cepas no patógenas. Los
serogrupos O117, O5, O11, O8 y O91 fueron reportados por Cid, et al (1996) en ovinos que no
presentaban diarrea al igual que en este estudio.
En cuanto a la PCR para grupos filogenéticos predominaron las cepas no patógenas; encontrándose solo
siete aislamientos que se ubican dentro del grupo de cepas patógenas, pero de estos solo tres
aislamientos (procedentes de la misma madre además presentaron ser resistentes a tres antimicrobianos
(Ciprofloxacina, Trimetoprima/Sulfametoxasol y Ampicilina). El resto de los aislamientos eran sensibles a
todos los antimicrobianos.
Segundo experimento. Después del parto se encontró que ninguna cría perteneciente al grupo control
tuvo diarrea y tres crías provenientes de una madre del grupo experimental si presentaron diarrea, por lo
cual se obtuvo una muestra rectal, y solo uno de los aislamientos fue identificado como E. coli mediante
la tinción de Gram, pruebas bioquímicas y PCR para detectar el gen gadA. Al realizar PCR para genes
de virulencia este no mostró ninguno de los genes analizados. En cuanto al PCR de grupos filogenéticos
fue negativa a los tres genes analizados. Siendo su serotipo O8:H28.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Los resultados que ha mostrado la bacterina en campo han sido satisfactorios, la presentación de
diarreas en cabritos en las UP inmunizadas ha disminuido notablemente, en el primer experimento solo
4/173 de las hembras inmunizadas tuvieron crías con diarrea y en el segundo solo 1/17. En cuanto al
análisis de laboratorio se ha encontrado que la bacterina no ha causado la enfermedad y que si ha
protegido a los animales; aunque aún se está trabajando en la ELISA para comprobar si después de la
inmunización de las cabras gestantes se han desarrollado anticuerpos que fuesen transferidos a las crías
mediante el calostro.
FINANCIAMIENTO.
Parcialmente por el Proyecto de Recursos INIFAP: “Caracterización de aislados de Escherichia coli de
origen caprino, como base para el desarrollo de un inmunógeno”.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Cid D, Blanco M, Blanco J, Ruiz J, De la Fuente R, Blanco J: Serogroups, toxins and antibiotic resistance
of Escherichia coli strains isolated from diarrhoeic goat kids in Spain. Vet Microb. 1996, 53: 349–354.
Cuéllar OJA, Tórtora PJ, Trejo GA, Román RP. La producción caprina mexicana, particularidades y
complejidades. 2012. UNAM, SAGARPA.
Jacob M, Foster D, Rogers A, Balcomb C, Shi X, Nagaraja T: Evidence of Non-0157 Shiga ToxinProducing Escherichia coli in the Feces of Meat Goats at a U.S. Slaughter Plant. Journal o f Food
Protection, Vol. 76, No. 9, 2013. 1626-1629.
Martínez FRI. Identificación de genes de virulencia en aislados de E. coli de origen caprino. 2014. Tesis
de maestría FMVZ UNAM.
Yáñez VA. Determinación de factores de virulencia y clonalidad de cepas de E. coli procedentes de
diarrea de cabritos. 2015. Tesis de maestría FMVZ UNAM
144
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
SITUACIÓN EPIDEMIOLÓGICA DE ALGUNAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS MÁS
IMPORTANTES EN EXPLOTACIONES CAPRINAS DE TAMAULIPAS.
EPIDEMIOLOGICAL SITUATION OF SOME MAJOR INFECTIOUS DISEASES GOAT FARMS IN
TAMAULIPAS.
Cantú CA1*, Ojeda AG1
1Instituto
Nacional de Investigaciones Forestales Agrícolas y Pecuarias-CIRNE-Campo Experimental Las
Huastecas.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La población caprina en México es de poco más de 9 millones de cabezas, siendo la segunda de américa
y la doceava a nivel mundial. a pesar que las cabras contribuyen poco a la producción nacional, son el
principal sostén de más de 320,000 familias localizadas principalmente en las zonas áridas y semiáridas
del norte del país (San Luis potosí, Coahuila) y Guanajuato (Arbiza, 1986). En Tamaulipas también existe
este tipo de explotaciones en los municipios Jaumave, Miquihuana, Tula, Bustamante, y de Méndez,
Burgos y San Fernando, donde un gran porcentaje de las familias del área rural viven de esta actividad.
En la actualidad se desconoce por completo la situación epidemiologica de las enfermedades que están
presentes afectando la actividad caprina en el estado de Tamaulipas a pesar de que existe presencia de
alta mortalidad en cabritos y enfermedades en adultos que afectan seriamente su producción.
OBJETIVO.
El objetivo del estudio fue determinar la prevalencia de Neospora caninum, Paratuberculosis
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map), Artritis encefalitis caprina (AEC), Brucelosis y
parásitos internos en explotaciones caprinas de dos regiones del estado de Tamaulipas.
MATERIALES Y MÉTODOS
El estudio de tipo transversal polietápico y estratificado en unidades de producción (UP) se llevó
a cabo en los municipios de Jaumave, Miquihuana, Tula, Bustamante y la región norte en los
municipios de Burgos y Méndez. Se determinó un tamaño de muestra mínimo de 384 con una
prevalencia estimada de 25% con nivel de confianza del 95% (OpenEpi, versión 3). Se
muestrearon hembras mayores de tres meses sin importar estado fisiológico o productivo y todos los
sementales. A las muestras se le realizó la prueba de rosa de bengala para diagnóstico de brucelosis, y
para Neospora, AEC y Paratuberculosis fue mediante ELISA con un kit comercial (sensibilidad 100% y
especificidad 98.9%) de INDEXX-Laboratories Inc. Westbrook, Maine EUA. También se realizaron
análisis coproparasitoscopicos para determinar la carga parasitaria e identificar qué tipo de parasito
interno está afectando a los caprinos. En cada UP se aplicó una encuesta relacionada al manejo del
rebaño. Los datos fueron analizados mediante la prueba chi cuadrada para evaluar la asociación entre
los factores y la enfermedad Se obtuvieron un total de 1549 muestras sanguíneas pertenecientes a 52
productores de 9 comunidades rurales localizadas en 6 municipios.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los resultados mostraron una seroprevalencia de 4.18% (55/1317) para Brucelosis, 4.08% (21/515) para
Neospora, 6.01% (32/532) para AEC y 0.0% (0/370) en Paratuberculosis. Para el caso de brucelosis la
mayor prevalencia fue para el municipio de Tula con 13.1% seguido de Bustamante 5.19%, Burgos
3.98%, Miquihuana 1.71% y Méndez 0.0%. En Neospora la prevalencia se encontró solo en los
municipios del norte del estado Méndez 7.62% y Burgos 6.16% y en el sur Miquihuana 2.64% y Tula con
145
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
2.18%. No existió ningún positivo en Paratuberculosis ratificando así algunos donde reportan bajas
prevalencias en caprinos de México (cnsp, 2011). Para Artritis encefalitis caprina se encontró
prevalencias en la zona norte Burgos 19.69%, Méndez 2.50% y Bustamante 2.65%. Los diagnósticos de
parásitos internos muestran una frecuencia a nematos gastroentéricos de 7.6% y una frecuencia de
positivos a coccidias de 61%. No se detectó ningún factor de riesgo asociado a la presencia de
seropositivos. Existen factores de riesgo en la presencia de neospora y AEC como es explotaciones de
caprinos en la en la zona norte del estado de Tamaulipas con un OR= 4.02 (IC 95%:1.4 - 11.1, p<0.05%) y
OR=8.9 (IC 95%:3.1 - 25.9, p<0.05) respectivamente, comparado con caprinos de los municipios del sur
del estado, para brucelosis la región sur del estado presenta un OR=2.56 (IC 95%:1.1 - 6.0, p<0.05). Fue
realizada necropsias y muestreo para diagnóstico de enterotoxemia de un brote de alta mortalidad
resultando ser positivo a clostridium.
CONCLUSIONES.
Se logró establecer el diagnóstico (prevalencia) de algunas de las principales enfermedades que afectan
a los caprinos de Tamaulipas. Existen enfermedades como Artritis encefalitis caprina y Neospora que no
habían sido reportadas en Tamaulipas y es posible que esta enfermedad este asociada a muchos de los
trastornos que afectan la producción en los hatos caprinos. Los resultados muestran que la prevalencia
de brucelosis en 6 municipios de Tamaulipas es alta (4%) lo que indica que esta enfermedad está
presente, además que existen factores de riesgo como es la región sur del estado y es importante
realizar programas de barrido e implementar la vacunación para reducir su incidencia en los hatos
caprinos. La presencia de coccidias puede ser la principal causa de diarreas en caprinos y que es
importante implementar tratamientos estratégicos para su control. Se demuestra la presencia de
Clostridium Perfringes, tipo D causante de enterotoxemia en caprinos el cual está causando brotes de
alta mortalidad en hatos caprinos de Tamaulipas. Se logró elaborar un calendario sanitario básico para el
control y prevención de las principales enfermedades en caprinos de Tamaulipas.
Cuadro 1.- Numero de positivos por enfermedad y municipio en caprinos de Tamaulipas.
NEOSPORA
BRUCELOSIS
MUNICIPIO
ARTRITIS
ENCEFALITIS
CAPRINA
PARATUBERCULOSIS
POS (+) NEG (-) POS (+) NEG (-) POS (+) NEG (-) POS (+) NEG (-)
MIQUIHUANA
3
114
4
234
0
124
0
161
TULA
1
46
8
61
0
10
0
60
MENDEZ
8
105
0
157
3
120
0
76
BURGOS
8
130
6
151
25
127
0
73
BUSTAMANTE
1
120
37
714
4
151
0
0
TOTAL
21
515
55
1317
32
532
0
370
146
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Figura 1. Prevalencia de principales parásitos en cabras
REFERENCIAS.
Matthews, J. Diseases of the goat. Second edition. Blackwell Science; Oxford, England, 1999.
Comité nacional sistema producto caprinos, CONASA, SAGARPA. Encuentro sobre el diagnóstico de las
principales
enfermedades
en
caprinos.
2011.
Folleto
cns-pcaprino
2011.1.
http://www.cnsp.caprinos.org.mx/boletines/folleto_cnsp.caprinos_2011.1Enfermedades.pdf
Arbiza, S.I. 1986. Producción caprina. ed. AGT. México.
Nazara SJ, Trigo FI, Suberbie E. y Madrigal V., 1985. Estudio serológico de la artritis encefalitis caprina
en México. Tec. Pec. Mex. 48:98-101.
147
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
TIPIFICACIÓN MOLECULAR DE CEPAS DE LISTERIA MONOCYTOGENES AISLADAS DE
CAPRINOS.
MOLECULAR CHARACTERIZATION OF LISTERIA MONOCYTOGENES STRAIN ISOLATED FROM
GOATS.
Ramírez BG1, García TCG1, Alcantar CMD2, Jarillo QMA2, Díaz AE3 y Tenorio GVR3*.
1FES-Cuautitlán, UNAM; 2FM UNAM; 3CENID-Microbiología Animal, INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La finalidad del empleo de técnicas moleculares para el subtipado es conseguir mayor discriminación de
cepas que la alcanzada por serotipado. La información obtenida puede ser aplicada en la detección y
trazabilidad de brotes, seguridad alimentaria, salud pública, estudios de población genética y
epidemiología. La necesidad de diferenciar aislamientos de L. monocytogenes es particularmente
importante para la trazabilidad de la transmisión de cepas patógenas a través de la cadena alimentaria y
el desarrollo de estrategias de intervención efectivas para prevenir enfermedades en humanos y
animales. Entre los diferentes métodos de genotipado utilizados en la epidemiología molecular, la
combinación de macrorestricción y electroforesis en gel de campo pulsado (REA-PFGE) es un método
reproducible y discriminatorio para el subtipado de Listeria monocytogenes, en particular para los
serotipos de difícil genotipificación, como los serotipos 1/2 y 4 (Ryser and Marth, 2007; Liu, 2008; Smith
and Sherman, 2009).
OBJETIVO.
Tipificar molecularmente 12 aislamientos de Listeria monocytogenes serotipo 4b aisladas de
explotaciones caprinas y subproductos lácteos (leche, queso, alfalfa y materia fecal) y un aislado de un
caso clínico de humano.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Fueron analizados 12 aislamientos de L. monocytogenes obtenidos de leche [LC1 (Guanajuato)], queso
[QC1, QC2, QC3, QC4, QC5 (Edo. de México)], alfalfa [AC1, AC2, AC3 (Edo. de México)], materia fecal
de cabra [MFC1, MFC2 (Guanajuato) MFC3 (Querétaro)] y una cepa virulenta aislada de un caso de
listeriosis en humano [LMC2 (Distrito Federal)] todas identificadas como serotipo 4b. Además fue utilizada
la cepa ATCC 43249 (LMC1) identificada como serotipo 1/2. Se empleó la técnica de macrorestricción y
electroforesis en gel de campo pulsado (REA-PFGE) en base al protocolo descrito por la red nacional de
laboratorios en USA denominada Pulse Net (Graves and Swaminathan, 2006). Las células bacterianas
fueron lavadas, resuspendidas e incubadas en amortiguador PIV (Tris 1 M, NaCl 1 M, pH 7.6),
adicionando lisozima (20 mg/ml) y a continuación agarosa para formar bloques en los cuales se realizó la
extracción del ADN. Posteriormente, este fue digerido por separado con las endonucleasas ApaI y AscI
de acuerdo a las especificaciones del fabricante. Los fragmentos de restricción del ADN en los bloques
fueron separados y visualizados en un gel de agarosa 1% mediante electroforesis en campos pulsados.
La relación genética fue determinada mediante la comparación del número y tamaño de los fragmentos.
Las imágenes de los geles fueron obtenidas utilizando un equipo de foto documentación y a partir de
estas se realizó el análisis de los patrones de restricción generados haciendo una matriz de datos
binarios (presencia y ausencia respecto a cada uno de los marcadores obtenidos de cada cepa en los
perfiles electroforéticos) con la cual se realizó el análisis numérico mediante el programa NTSYSpc 2.0,
en el que se construyó una matriz de similitud utilizando el índice de DICE (D) (Dice, 1945),
considerando:
D= 2a/ (2a+b+c)
Donde:
a: es la banda presente en ambas cepas
b: es la banda presente en la primera pero ausente en la segunda
148
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
c: es la banda presente en la segunda pero ausente en la primera
Una vez obtenida la matriz de similitud se construyó un dendograma por medio del método de
agrupamiento por promedios aritméticos no ponderados (UPGMA), el cual permite observar gráficamente
la relación existente entre cada una de las cepas evaluadas.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Entre los diferentes métodos de genotipado, la electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) es
actualmente considerada el criterio estándar para el subtipado de la epidemiología molecular de Listeria
en América y Europa, ya que se ha visto que es un método reproducible y discriminatorio.
Particularmente, útil para la tipificación de los aislados del serotipo 4b, los cuales no se tipifican de forma
satisfactoria mediante la mayoría de los métodos disponibles (Liu, 2006; Ryser and Marth, 2007; Smith
and Sherman, 2009). En ambos dendrogramas derivados de las endonucleasas utilizadas se obtuvieron
9 grupos (Figura 1). Ambas endonucleasas agruparon principalmente las cepas de acuerdo a su fuente.
Las cepas procedentes de alimento de cabra y de queso fueron divididas en dos o tres grupos
estrechamente relacionados. En ambos dendogramas se agrupan a dos cepas de alimento de cabra
(AC1 y AC2) y la cepa aislada del caso clínico, con la tercera cepa de alimento de cabra (AC3) con un
índice de similitud de 1 en las cepas presentes en cada grupo y de 0.90-0.95 entre los grupos. Asimismo,
la endonucleasa Ascl asocia en un mismo grupo a la cepa obtenida de leche con una de materia fecal
(MFC1) y a la cepa QC4 procedente de queso con una de materia fecal (MFC2), estos resultados
coinciden con reportes en los cuales ya se ha observado similitud entre aislados de materia fecal y de
alimentos. La cepa de leche (LC1) produjo un perfil único con la enzima Apal y la cepa de materia fecal
MFC3 con ambas endonucleasas, considerando que esta fue aislada de Querétaro y las otras cepas de
materia fecal del Guanajuato. La cepa ATCC 43249 por ser una cepa 1/2 no presentó relación con las
demás cepas. Es sumamente importante hacer notar la relación encontrada entre las cepas de alimento
de cabra y el aislado de humano, ya que demuestra el potencial patógeno de estas cepas y su posible
implicación en brote de listeriosis.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
La macrorestricción y la REA-PFGE es útil para la subtipificación de L. monocytogenes. Los perfiles
electroforéticos producidos de las cepas evaluadas permitieron agrupar a las cepas por su fuente y su
origen, datos de suma importancia en estudios de trazabilidad de brotes de listeriosis. Por ello, contar con
una base de datos de aislados clínicos, de alimentos y ambiente subtipificados con este método, apoya
en gran medida a cualquier investigación epidemiológica actual o futura y ayuda a entender la
transmisión a largo plazo de este agente infeccioso (Liu, 2006; Ryser and Marth, 2007).
REFERENCIAS.
Liu D. Handbook of Listeria monocytogenes. Boca Ratón, FL, USA: CRC Press, 2008.
Dice LR. Measures of the amount of ecologic association between species. Ecology 1945; 26:297-302.
Graves LM, Swaminathan B. PulseNet´s step-by-step laboratory protocol for molecular subtyping of
Listeria monocytogenes by macrorestriction and Pulse-Field Gel Electrophoresis. In: Adley CC, editor.
Food borne pathogens, Methods in biotechnology, method and protocols. New Jersey, USA: Humana
Press, 2006:57-72.
Ryser ET, Marth EH, editors. Listeria, Listeriosis and Food safety. 3th ed. Boca Ratón FL, USA: CRC
Press, 2007.
Smith MC, Sherman DM. Goat Medicine. 2nd ed. Iowa, USA: Wiley-Blackwell; 2009:202-207.
RECONOCIMIENTOS.
Este proyecto fue financiado por: Proyecto SAGARPA 46599; Proyecto CONACyT SIN-2008/90945; Beca
CONACyT no. 173630.
149
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
A)
LMC1
LC1
MFC1
LMC2
AC1
AC2
AC3
MFC2
QC4
QC1
QC2
QC3
QC5
MFC3
0.49
0.62
0.75
0.87
1.00
Coefficient
B)
LMC1
MFC1
MFC2
QC1
QC2
QC3
QC5
QC4
LMC2
AC1
AC2
AC3
MFC3
LC1
0.37
0.53
0.68
0.84
1.00
Coefficient
Figura 1. Dendogramas que representa la similitud entre las cepas de Listeria monocytogenes,
construido con la matriz elaborada a partir de los patrones de restricción generados con las
endonucleasas AscI (A) y ApaI (B) y PFGE, usando el método de agrupamiento UPGMA. Los
coeficientes de similitud son mostrados abajo del dendograma.
150
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
PRESENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA DIARREA VIRAL BOVINA, RINOTRAQUEITIS INFECCIOS
BOVINA, LEPTOSPIROSIS Y BRUCELOSIS, EN DOS REGIONES GANADERAS DE OAXACA.
PRESENCE OF ANTIBODIES AGAINST BOVINE VIRAL DIARRHEA, INFECTIOUS BOVINE
RINOTRACHEITIS, LEPTOSPIROSIS AND BRUCELLOSIS IN TWO IMPORTANT CATTLE REGIONS
OF OAXACA.
Hernández BEG1*, Palomares REG2, Gutiérrez HJL2, Herrera LE2, Díaz AE2.
1Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia-UNAM, 2CENID- Microbiología Animal-INIFAP
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La producción de carne de bovino en un sistema de doble propósito se desarrolla principalmente en la
zona sur de México y se caracteriza por la venta estacional de novillos, la venta de leche diaria o para
autoconsumo, y la venta de vacas de desecho. Los animales se alimentan de los forrajes que se
producen en las praderas de manera casi exclusiva, hay poca inversión en infraestructura y mano de
obra, el empadre tiene estacionalidad marcada y se realiza principalmente con monta directa, las
hembras y los machos se crían por igual y la ordeña de las vacas se realiza con el becerro “a pie” (Rojo
et al., 2008).
Oaxaca ocupa el 6° lugar a nivel nacional, en el inventario de cabezas de bovinos , a pesar de ello no
figura entre los principales productores de carne de esta especie, esto se debe en gran medida a la venta
de terneros hacia mercados fuera del estado, y a los niveles productivos considerablemente bajos (Rojo
et al., 2008). Una de las limitantes por las que los niveles de producción de los bovinos pueden verse
afectados, es por la presencia de enfermedades y dentro de las cuales destacan las que afectan la
reproducción, como la brucelosis, leptospirosis, Diarrea Viral Bovina (DVB) y Rinotraqueitis Infecciosa
Bovina (IBR).
OBJETIVOS
Determinar la frecuencia de brucelosis, leptospirosis, DVB e IBR en las unidades de producción de
ganado bovino de doble propósito de la zona del Istmo y la Costa del estado de Oaxaca.
MATERIAL Y MÉTODOS
Este estudio fue realizado en dos de las ocho regiones geográficas del estado de Oaxaca; la región de
La Costa y la región del Istmo. Ambas regiones cuentan con un clima cálido subhúmedo con una
temperatura media anual de 22°C, las lluvias se presentan en verano con precipitaciones medias de 1550
mm anuales (INEGI 2015).
En la región de la Costa se trabajó en 22 localidades de tres municipios (Santiago Jamiltapec, Santiago
Pinotepa Nacional y Villa de Tututepec de Melchor Ocampo), mientras que en la región del Istmo se
trabajó en 35 localidades de nueve municipios (San Miguel Chimalapa, Juchitán de Zaragoza, Unión
Hidalgo, Asunción Ixtaltepec, San Pedro Comitancillo, Santo Domingo Tehuantepec, San Pedro
Tapanatepec, Santo Domingo Zanatepec y Santiago Niltepec).
Se realizó un estudio observacional descriptivo de tipo transversal no probabilístico. Se obtuvieron 1660
muestras de suero de bovino, de 97 unidades de producción. En la región de la costa se trabajó con 40
productores y se obtuvieron 696 muestras, en la región del Istmo se trabajo en 57 unidades de
producción y se obtuvieron 964 muestras.
El ganado de estas regiones es principalmente ganado cebú o cruzas de este con ganado europeo. Los
criterios de inclusión para este estudio fueron: bovinos hembras o machos en edad reproductiva, bajo un
sistema de producción extensivo y que no tuvieran antecedentes de vacunación. Las muestras de sangre
se obtuvieron mediante punción de la vena coccígea, en tubos tipo vacutainer sin anticoagulante,
151
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
posteriormente los tubos se identificaron con el número o nombre del animal, el sexo, el nombre del
rancho o unidad de producción, la localidad y el municipio de donde pertenece la muestra, así como el
nombre del productor.
Las muestras de sangre se centrifugaron a 4500 rpm, para la obtención de los sueros, los cuales se
mantuvieron en hieleras con refrigerantes hasta que llegaran al Centro Nacional de Investigación
Disciplinaria en Microbiología animal (CENID-Microbiología Animal) del Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP). Los sueros se mantuvieron en congelación a
-20° C hasta su uso en la detección de anticuerpos. Las pruebas que se usaron pare el diagnóstico de las
enfermedades fueron: tarjeta al 8% y Rivanol para detectar anticuerpos contra Brucella, la prueba de
aglutinación microscópica (MAT) se usó para detectar anticuerpos contra 6 serovariedades: tres
serovariedades de referencia: Wolffi, Hardjo y Tarassovi y tres serovariedades de aislamiento nacional:
Hardjo, Icterohaemorrhagiae y Canicola y para la detección de anticuerpos contra DVB e IBR se usaron
kits comerciales de ELISA.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El 4.12% (4/97) de los hatos muestreados resultaron seropositivos a brucelosis, mientras que para
leptospirosis, en el 100% hubo al menos una animal seropositivo para cualquiera de las 6 serovariedades
con las que se trabajó, el 77.32% (75/97) de los hatos fueron positivos a DVB y 94.85% (92/97) resultó
positivo a IBR.
El 0.24% (4/1660) de los animales resultaron seropositivos a brucelosis, el 31.92% (530/1660) fueron
seropositivos a DVB y el 30.18% (501/1660) de los bovinos fueron seropositivos a IBR. Finalmente para
leptospirosis el 57.29% (951/1660) de los animales fueron seropositivos al menos a una serovariedad de
Leptospira spp., siendo las más frecuentes Hardjo (aislamiento nacional), Hardjo e Icterohaemorrhagiae
con, 46.44% (771/1660), 28.67% (476/1660) y 21.08% (350/1660) de animales seropositivos
respectivamente.
Se han realizado numerosos estudios sobre cualquiera de las cuatro enfermedades a lo largo del país, la
frecuencia de cada una de ellas varía de acuerdo a múltiples factores como el clima, la región, el tipo de
producción, la presencia de otros animales tanto domésticos como silvestres entre otros. En el sur de
México la brucelosis tiene una frecuencia muy baja en hatos de bovinos de doble propósito, estos datos
concuerdan con los que se encontraron en este trabajo, esto puede ser debido a las condiciones en las
que se crían los animales donde las grandes extensiones de terreno dificultan la transmisión de la
enfermedad. Cabe destacar también que la brucelosis es una enfermedad muy conocida por parte de los
productores, lo que les ayuda a establecer ciertas medidas de control y prevención de la enfermedad
(Aguilar 2010). Por otro lado la frecuencia de leptospirosis suele ser alta en regiones donde las
condiciones climáticas de alta humedad favorecen la sobrevivencia de Leptospira spp. (Segura et al.,
2003), pudiendo explicar el por qué al menos un animal fue seropositivo en los hatos incluidos en este
trabajo. La frecuencia de DVB e IBR en el ganado de doble propósito varía mucho y es necesario
estimar los factores de riesgo que favorecen la presentación de cada una de estas enfermedades (Solis
et al., 2010, Ramos 2014). Estas tres últimas enfermedades son poco conocidas por parte de los
productores, por lo que la mayoría desconoce el modo en el que se transmite y al mismo tiempo ignora la
forma de prevenir el contagio entre los animales.
CONCLUSIONES
Tres enfermedades (leptospirosis, DVB e IBR) de las cuatro que se trabajaron tienen una frecuencia
elevada en los bovinos de doble propósito de las regiones de la Costa y el Istmo del estado de Oaxaca,
por el contrario, la brucelosis tiene una frecuencia menor al 1% en bovinos de estas mismas regiones.
Se logró determinar, que las serovariedades de Leptospira con mayor frecuencia fueron Hardjo (cepa de
aislamiento nacional), Hardjo, Icterohaemorrhagiae y Canicola, en las regiones de la Costa y el Istmo,
con la finalidad de iniciar programas de vacunación contra esta enfermedad.
152
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
LITERATURA CITADA
Aguilar BG. Seroprevalencia y factores de riesgo asociados a brucelosis (Brucella abortus) En ganadería
bovina en la zona sur de Veracruz, México (tesis de maestria). México: Institución de Enseñanza e
Investigación en Ciencias Agrícolas, 2010.
Ramos GAB. Frecuencia de Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR), Diarrea Viral Bovina (DVB) y
Leptospirosis en bovinos de doble propósito, en el municipio de San Juan Cotzocón, Oaxaca, México
(tesis de licenciatura). México: UNAM, 2014.
Rojo RR, Vázquez A JF, Pérez HP, Mendoza MGD, Salem MAZ, Albarrán PB, González RA, Hernández
MJ, Rebollar RS, Cardoso JD, Dorantes CEJ, Gutiérrez CJG. Dual Purpose cattle production in Mexico.
Trop Anim Health Prod 2009; 41: 715-721.
INEGI., 2015. Información por entidad. Oaxaca, clima. Instituto Nacional de Estadística, Geografía e
Informática.
Solis CJJ, Segura CVM, Segura CJC. Bovine viral diarrhea virus in beef cattle herds of Yucatan, Mexico:
Seroprevalence and risk factor. Preventive Veterinary Medicine 2005; 72; 253-262
Segura CVM, Solis CJJ, Segura CJC. Seroprevalence of and risk factor for leptospiral antibodies among
cattle in the state of Yucatan, Mexico. Tropical Animal Health and Production 2003; 35: 293-299.
153
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE UN VIRUS DE INFLUENZA OBTENIDO DE UN MONO
ARAÑA EN CAUTIVERIO.
ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF AN INFLUENZA VIRUS OBTAINED FROM A SPIDER
MONKEY IN CAPTIVITY.
Rojas-Anaya E1*, Loza-Rubio E1, Tufiño LC1, López RRC1,2.
1Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal – Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales Agrícolas y Pecuarias (INIFAP, México). 2 FES-Cuautitlán-UNAM, México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El virus de influenza pertenece a la familia Orhtomyxoviridae y se divide en 3 tipos: A, B y C. Es un virus
envuelto de forma esferoidal, de cuya membrana sobresalen espículas conformadas por dos
glicoproteínas: una hemaglutinina (HA) y una neuraminidasa (NA). El genoma viral es una cadena de
ácido ribonucleico (ARN) de polaridad negativa, formada por 12,000 a 15,000 nucleótidos y dividido en 8
segmentos que codifican para 11 proteínas estructurales como no estructurales. Los principales
antígenos del virus son la HA y NA; la combinación de estas da origen a la clasificación de los subtipos
virales. La HA es un trímero de cerca de 22.5 kDa, constituido de tres subunidades con dos cadenas
polipeptídicas y es la proteína responsable de la unión del virus a la célula utilizando como receptor al
ácido siálico (ácido N-acetilneuramínico) en la célula hospedera. El virus influenza A tiene como
hospederos naturales a las aves acuáticas e infecta otras aves incluidas las de corral, humanos y otros
mamíferos. La infección se disemina vía aérea en aerosoles, por contacto directo con superficies
contaminadas (fómites), secreciones nasales (vía de salida), además de las heces, lo cual es muy
importante en la epidemiología de la enfermedad en donde existe alto hacinamiento de los animales. Las
características genéticas y antigénicas de estos virus difieren según el país o región en el que se aíslen,
debido a la recombinación y deriva genética. En México existen centros de acopio de animales de vida
silvestre en diferentes partes de la República Mexicana, para la recepción, acopio, albergue y
rehabilitación física, clínica y etológica de fauna silvestre, que es confiscada o bien abandonada. Los
animales se encuentran en estrecha convivencia con una gran cantidad de especies de diferentes
familias taxonómicas, por lo que la presencia y diseminación de agentes infecciosos como el virus de la
influenza es factible.
OBJETIVO.
Detectar y caracterizar al virus de influenza en un mono araña (Ateles geoffrey) alojado en un centro de
acopio de vida silvestre
MATERIALES Y MÉTODOS.
Se tomaron hisopos orales y rectales de un mono araña adulto aparentemente sano y mantenido en
cautiverio en un centro de acopio de vida silvestre; los hisopados se conservaron en medio de transporte
(medio L-15 con antibiótico). El medio fue centrifugado y filtrado, haciendo dos alícuotas, una para
inocular embriones de pollo (EP) libres de patógenos específicos tipo II e intentar aislamiento viral, y otra
para detección del genoma de influenza por RT-PCR en tiempo real. Cinco EP libres de patógenos de 7
días de edad fueron inoculados por vía alantoidea con el filtrado de los hisopados y se hicieron tres pases
a las 72 horas post-inoculación. Con el líquido alantoideo obtenido en cada pase se realizó la prueba de
hemaglutinación en placa para detectar la presencia del virus de influenza. Por otro lado se extrajo el
ARN para la detección de un fragmento del gen M del virus de influenza A por RT-PCR en tiempo real.
Adicionalmente, se amplificaron los genes completos M, NA y HA para su secuenciación. Las secuencias
obtenidas fueron analizadas mediante Blast para determinar similitudes con otros virus y posteriormente
ser alineadas y analizadas por filogenia con secuencias del banco de genes utilizando el software Mega
6.0. Finalmente, se realizó la detección de anticuerpos contra influenza aviar (IA) H5N2, mediante la
prueba de inhibición de la hemaglutinación (IH).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
La replicación en embriones de pollo de un virus hemaglutinante, fue evidenciado por la hemaglutinación
de eritrocitos de pollo en la prueba de hemaglutinación en placa del líquido alantoideo obtenido de los
154
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
embriones de pollo, esto se observó a partir del segundo pase en EP y para el tercer pase se observó
mortalidad en los embriones a partir de las 48 h post inoculación evidenciando un aumento en el titulo
viral. La presencia del virus de influenza A fue confirmada por la detección en tiempo real del gen M
tanto en los hisopados originales como en los diferentes pases en EP. Un aumento en el titulo viral fue
observado ya que el Ct se mostró en ciclos más tempranos conforme aumentaba el número de pase. Por
otra parte, la secuenciación del gen HA revelo que este aislamiento es un virus de influenza aviar subtipo
H5N2, confirmándolo con la secuencia de aminoácidos deducida de este gen en el sitio de rompimiento,
el cual presenta la secuencia característica de una cepa de baja patogenicidad. Al comparar la secuencia
de este gen así como la de los genes M y NA, demostraron que tiene homología del 96% con secuencias
de influenza aviar subtipo H5N2 de baja patogenicidad aisladas en México desde hace 10 años en aves
de corral. Interesantemente, se observó en el Blast un 95% de homología con una secuencia de un virus
aislado a partir de un loro en Estados Unidos, observado el mismo comportamiento tanto con los genes
HA como NA. Finalmente, la IH realizada con suero del mono resulto positivo (1:64) al subtipo H5N2 de
IA, la prueba se realizó también para otros subtipos virales (H1N1 y H3N2) resultando negativa. La
detección del virus fue notificada oficialmente a SENASICA.
CONCLUSIONES.
Este informe representa el primer informe en literatura científica de la detección de un VIA subtipo H5N2
de baja patogenicidad en un mono araña, lo cual significa un hallazgo relevante que demuestra la
capacidad de adaptación del virus a otros hospederos mamíferos.
FINANCIAMIENTO.
Proyecto fiscal INIFAP-16584819770
155
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE UN VIRUS DE INFLUENZA H5N2 DE BAJA
PATOGENICIDAD EN FALCONIFORMES CLÍNICAMENTE SANOS.
ISOLATION AND MOLECULAR CHARACTERISATION OF AN LOW PATHOGENICITY INFLUENZA
VIRUS (H5N2) IN CLINICALLY HEALTHY RAPTORS.
Loza-Rubio E1*, Rojas-Anaya E1, Tufiño LC1. López RRC2
1CENID-Microbiología,
INIFAP; 2FES- Cuautitlán.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Los virus Influenza pertenecen a la familia Orthomyxoviridae. Son de cadena simple, polaridad negativa,
dividido en ocho segmentos que codifican para once proteínas, de las cuales la hemaglutinina (H) y la
neuraminidasa (NA) constituyen los antígenos mayores. Se clasifican en subtipos basados en la
antigenicidad de éstas moléculas de superficie. Los virus de influenza son patógenos flexibles y
altamente versátiles. A la fecha, la patogenicidad de los virus de influenza varía considerablemente
dependiendo del hospedero y de la cepa viral. Actualmente, todos los virus virulentos de pollo pertenecen
a los subtipos H5 y H7. Desde hace tiempo, se ha mencionado que la influenza afecta a diversas
especies como los humanos, los equinos, perros, gatos y que produce infecciones en otros mamíferos.
Sin embargo, son las aves silvestres las que han sido identificadas como reservorios, principalmente
especies acuáticas de los órdenes de los Anseriformes y Charadiformes que habitan en humedales y
hábitats acuáticos (Suarez, 2010). Por lo que concierne a la familia Falconiforme, los reportes son
escasos. Existe una publicación realizada por Kocan y colaboradores que data de 1977, en donde
realizaron una encuesta serológica y sólo un halcón cola roja resultó positivo; sin embargo el virus no se
aisló. En el año 2000, Manvell y colaboradores aislaron un virus H7N3 de un halcón peregrino; sin
embargo la información sobre influenza es escasa.
OBJETIVO
El objetivo de este estudio fue conocer el estatus sanitario de las aves silvestres albergadas en un Centro
para la conservación e Investigación de Vida Silvestre (CIVS) hacia el virus de influenza, perteneciente a
la Secretaria del Medio Ambiente y Recursos Naturales (SEMARNAT).
MATERIALES Y MÉTODOS
El estudio se llevó a cabo en el periodo de Abril a Octubre del 2013. Se tomaron muestras de sangre e
hisopados oro-faríngeos y cloacales de 79 individuos pertenecientes a las familias de los Falconiformes,
Strigiformes y Psittacidos. Para determinar la frecuencia de anticuerpos se utilizó la técnica de inhibición
de la hemaglutinación (IH), usando una variante H5N2 de influenza aviar; mientras que para la detección
del gen M de influenza A, se empleó la RT-PCR en tiempo real en un solo paso. El ARN se extrajo y
purificó para esta prueba de los hisopados obtenidos. Las muestras que resultaron positivas a esta
prueba, se les realizó el aislamiento viral en embriones de pollo (EP) libres de patógenos específicos. Por
otro lado, con los aislamientos positivos en EP se amplificaron los genes completos de la HA y NA para
su posterior secuenciación. El análisis de las mismas se realizó mediante Blast, para determinar similitud
con otros virus de influenza y se alinearon usando el programa Mega 6.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los resultados de IH mostraron que el 63.29% (50/79) de los sueros resultaron seropositivos a H5N2 a
un título ≥16, dilución a la cual se considera positivo. Los títulos serológicos variaron, siendo la dilución
más alta la de 1:512. La mayor proporción de seropositividad se presentó a la dilución 1:64 (13 sueros).
Por lo que respecta a los resultados de las aves se obtuvo que 100% de los sueros obtenidos de los
156
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Psittacidos fueron positivos (10/10), de los Strigiformes 78.57% (11/14); mientras que los Falconiformes
presentaron un 52.72% de seropositividad (29/55). En cuanto al PCR en tiempo real se obtuvo que para
los Psittacidos100% (2/2) resultaron positivas, para los Strigiformes 83.33% (5/6) y para Falconiformes
84.21% (32/38). De las muestras que resultaron positivas se realizaron tres pases sucesivos en embrión
de pollo, con lo que se obtuvieron dos aislamientos de Falconiformes a partir de Buteo jamaicensis y de
Parabuteo unicinctus. El análisis del Blast con las secuencias de nucleótidos de los genes analizados
reveló que los virus aislados tuvieron una homología del 97% con secuencias de virus de influenza H5N2
de baja patogenicidad aislados de aves de corral de diferentes partes de México. Adicionalmente se
observó una homología del 95% con secuencias reportadas en el banco de genes de loros provenientes
de Estados Unidos. Por otra parte, a partir de la secuencia deducida de aminoácidos de la HA, los dos
aislamientos de las aves fueron clasificados como influenza aviar H5N2 de baja patogenicidad, ya que los
aminoácidos no mostraron inserciones de aminoácidos básicos característicos de los virus de alta
patogenicidad. Debido a que se confirmó que se trataba de un virus subtipo H5, se dio aviso oficial al
SENASICA.
CONCLUSIÓN
Se concluye que algunas aves rapaces podrían ser portadoras del virus H5N2, así como que la mayor
parte de las aves silvestres presentes en ese momento en el CIVS estuvieron en contacto con el virus.
Este estudio representa la primera notificación del virus en estas aves en México.
FINANCIAMIENTO.
Recursos fiscales INIFAP-16584819770.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Kocan AA, Snelling J, Greiner EC. Some infectious and parasitic diseases in Oklahoma raptors. J Wld Dis
1977; 13:304-306.
Manvell RJ, McKinney P, Wernery U, Frost K. Isolation of a highly pathogenic influenza A virus of a highly
pathogenic influenza A virus subtype H7N3 from a peregrine falcon (Falco peregrinus). Avian Pathol
2000; 29:635-637.
Suarez DL. Avian Influenza: our current understanding. Aninmal Health Research Reviews 2010; 11:1933.
157
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DE LA VARROASIS Y UN INSECTICIDA NEONICOTINOIDE SOBRE LA CANTIDAD DE
HEMOCITOS PRESENTES EN LAS ABEJAS MELÍFERAS (APIS MELLIFERA L.) BAJO
CONDICIONES DE LABORATORIO.
EFFECTS OF VARROA MITE AND NEONICOTINOID PESTICIDE ON THE NUMBER OF
HAEMOCYTES OF HONEYBEES (APIS MELLIFERA L.) UNDER LABORATORY CONDITIONS.
Uribe RJL*1, 2, De la Mora PA1, Guzmán NE3, Espinosa MLG1
1 Centro
Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento Animal, Instituto Nacional de
Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, Ajuchitlán, Colón, Querétaro, México; 2 Facultad de
Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad de México, México;
3School of Environmental Sciences, University of Guelph, Guelph, Ontario, Canada.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Las abejas y otros insectos polinizadores están expuestas a los efectos dañinos de los insecticidas en
todo el mundo (Mullin et al 2010). Los grandes laboratorios producen cantidades exorbitantes de
productos químicos para el control de plagas que afectan a múltiples cultivos agrícolas. El uso de los
neonicotinoides se comenzó en la época de los 90´s, y hasta la fecha muchos de ellos son empleados de
forma cotidiana. Los efectos sub letales de estos pesticidas se pueden clasificar a nivel fisiológico,
causando retraso de crecimiento, malformaciones y longevidad (Oliveira et al 2013). Estos pesticidas son
sistémicos, por tal motivo están presentes en pequeñas cantidades en el néctar y polen floral de muchos
cultivos agrícolas, que son visitados por las abejas, causando envenenamiento crónico (Ellis 2010). Las
abejas por otra parte tienen problemas sanitarios importantes como son las virosis, las microbianas y las
parasitarias. La enfermedad de la varroasis es reconocida como un agente patógeno letal en colonias de
abejas de todo el mundo. Sus efectos se hacen notar después de periodos prolongados de padecer la
enfermedad y no recibir tratamiento alguno para su control. Esta enfermedad afecta tanto a la cría como
a las abejas adultas, causando debilidad, pérdida de peso y malformaciones en las abejas. Los insectos
están expuestos continuamente a potenciales microorganismos infecciosos y a parásitos eucariotas, pero
solo unos pocos encuentros resultan en infección. Los insectos poseen un complejo y eficiente sistema
de defensas biológicas en contra de los patógenos y parásitos. Estos sistemas se pueden resumir en
barreras físicas a la infección como el tegumento y el sistema digestivo, respuestas coordinadas de
varias subpoblaciones de hemocitos cuando estas barreras son brincadas y la inducción a la síntesis de
péptidos antimicrobianos y proteínas, producidas primeramente en el tejido graso corporal. Los hemocitos
se encuentran en la hemolinfa, el incremento o descenso en sus niveles puede causar alteraciones
fisiológicas en contra de las enfermedades. Las abejas están expuestas a gran cantidad de sinérgicas
que están interactuando con diversos estresores, los cuales pueden causar la perdida de colonias, a
menudo asociadas con altos niveles de patógenos. Los insecticidas neonicotinoides han sido reportados
por favorecer el crecimiento de los patógenos, pero el entendimiento de esas alteraciones en el sistema
inmune todavía no es muy claro (Di Prisco et al 2013).
OBJETIVO.
Determinar los efectos de la varroasis y un insecticida sobre la cantidad de hemocitos presentes en
abejas obreras adultas de tres edades.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Este trabajo se realizó en el Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento
Animal-INIFAP, que se encuentra en Ajuchitlán, Colon, Qro. Se sitúa a una altura de 1867 msnm, y tiene
un clima templado semi seco, temperatura anual entre los 7 los 25°C y precipitación pluvial promedio
anual de 574mm. Diseño experimental. Para medir la variación en la cantidad de hemocitos circulantes
en abejas individuales, se tomaron abejas de 1,3 y 7 días de edad en 4 grupos experimentales: Grupo
158
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Control, Grupo con parásitos de Varroa destructor, Grupo con solo insecticida y Grupo con Varroa +
Insecticida. Se usaron 5 abejas por grupo experimental con tres repeticiones para cada día de edad.
Extracción de hemolinfa. Con la ayuda de una aguja entomológica se puncionó entre el segundo y tercer
tergito abdominal de cada grupo y edad, y con la ayuda de una micro-pipeta se obtuvieron 4 µl de
hemolinfa. Posteriormente se hizo un frotis seco de cada muestra empleando un portaobjetos de 25x75
mm previamente rotulado e identificado. En la cara posterior de cada porta objetos, se dibujaron con un
marcador permanente, dos cuadrados “principales” de 1 cm 2, separados entre sí; cada uno de los
cuadrados, se dividió en cuatro cuadrantes “secundarios” de 0.5 cm 2, para facilitar el conteo de
hemocitos. La muestra de hemolinfa se depositó en la cara anterior del porta-objetos, dentro de ambos
cuadrados “primarios” y se distribuyó homogéneamente en todos los cuadrantes “secundarios”. El frotis
se dejó secar al aire y posteriormente se fijó con metanol al 95%. La hemolinfa se tiñó con el kit de tinción
PROTOCOL Hema 3® (Fisher Scientific®, cat. 23-122-937 y 23-122-952, equivalentes a la tinción de
Giemsa). El conteo de hemocitos se realizó con un microscopio óptico compuesto, con ocular 10x y
objetivo 40x, al que se le colocó un lente para ocular con gradilla de 10x10 mm. Se realizaron 16 conteos
por laminilla. Para calcular el número de hemocitos/µl de hemolinfa, la cantidad de hemocitos contados
se multiplicó por 200 (Reyes-Quintana, 2012). Análisis Estadístico. Se realizaron pruebas de Shapiro-Wilk
para probar la normalidad de los datos, también se realizaron pruebas de homogeneidad de varianzas
usando la prueba de Bartlet. Debido a que los datos no se distribuían con normalidad, se realizó una
transformación a logaritmo natural, para producir distribución normal antes de analizarlos. Los datos
transformados del número de hemocitos fueron analizados por un análisis de varianza bajo un modelo
aleatorio simple para determinar los efectos de los distintos tratamientos. Cuando se encontraron
diferencias significativas, las medias de los tratamientos fueron comparadas con pruebas de Tukey. Los
datos fueron analizados con el paquete estadístico “SAS” versión 9.
Modelo estadístico. Yijk = u + Gi + Ej + (GE)ij + Eijk
Donde:
Yijk = variable media transformada (número de hemocitos) en la i-ésima observación aleatoria, asociada al
j-ésimo grupo experimental (G1, G2, G3, G4) y la k-ésima edad (1, 3, 7 días)
u = media de la población
Gi = efecto del i-ésimo grupo experimental (G1, G2, G3, G3, G4)
Ej = efecto de la j-ésima edad
(Gij)K = efecto de la interacción del i-ésimo grupo experimental y la j-ésima edad
Ԑijk = error aleatorio NID (0, σ2)
RESULTADOS Y DISCUSION.
Se encontraron diferencias estadísticas significativas entre los grupos experimentales¸ (F 11,158=4.52;
P<0.0001). Las medias y errores estándar fueron 155048±13088a n=43; 125316±12916a-b, n=44;
111037±13928ab n=39 y 102030±12916b n=44; (F 3,158=3.34, P<0.05) para el grupo de abejas con varroa,
grupo de abejas con insecticida, grupo con varroa y grupo con varroa+insecticida respectivamente. Estos
datos nos sugieren que la acción simple de varroa o del insecticida no causan disminución de la cantidad
de hemocitos, lo cual no es concluyente, pero se observó que cuando se unieron estas variables los
valores se alejaron más de los encontrados en el grupo control. Por lo que podríamos especular que al
aumentar el tamaño de la muestra podríamos ampliar esas diferencias. Las medias y errores estándar
para la edad fueron 174910±11055a, n=60; 114759±11153b n=59; 80580±12106c n=51; (F 2,158= 14.71 P<
0.0001) para las edades de 1,3 y 7 días respectivamente. La edad de las abejas afectó el número de
hemocitos significativamente, abejas de mayor edad mostraron disminución en la cantidad de hemocitos,
lo cual nos sugiere que a medida que las abejas envejecen se tornan más susceptibles a las
enfermedades. No se presentaron efectos de interacción (F6,158=1.42; F>0.0001).
159
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Los resultados no mostraron claras diferencias entre los grupos experimentales excepto cuando se
compararon el grupo con varroa + insecticida y el grupo control, es posible que esta diferencia se deba al
efecto combinado de la varroa y el insecticida. Se sabe que el Thiamethoxan bloquea los receptores para
acetil colina, por lo que no se produce el factor nuclear NF-KB siendo la acetil colina un precursor de este
factor (Di Prisco et al 2013), el cual se fosforíla y estimula la transcripción de factores del sistema inmune.
Por ello quizás la disminución de la cantidad de hemocitos afecte la respuesta inmune. Sin embargo se
observó una disminución a partir del grupo control, y hasta el grupo tratado con varroa+insecticida y no
se apreciaron diferencias significativas entre los demás grupos. Los datos de la edad revelaron
disminución significativa entre el número de hemocitos a medida que aumento la edad. Colonias de
abejas con reinas malas, pierden muchas abejas desde su concepción (huevo), otras más cuando están
en desarrollo (larva y pupas), debido a los efectos de las enfermedades como la varroasis y la
nosemiasis, otro tanto más se pierde en la vida adulta. Por ello las poblaciones con pocas abejas trabajan
más para compensar la falta de abejas, y por lo tanto envejecen más rápido y tienden a morir. Se vuelven
más susceptibles a las enfermedades y a los efectos de los insecticidas.
RECONOCIMIENTOS
Esta investigación no hubiera sido posible sin el valioso apoyo del PhD. Ernesto Guzmán Novoa y Dra.
Laura G. Espinosa Montaño y Dr. José Luis Uribe Rubio, así como al Posgrado FMVZ-UNAM, CONACyT,
CENID-Fisiología y MA, INIFAP, y a la Universidad de Guelph.
REFERENCIAS
Mullin AC., Frazier M, Frazier JL., Ashcraft S., Simonds R., vanEngelsdorp D., Pettis JS. 2010. High levels
of Miticides and Agrochemicals in North American Apiaries: Implication for Honey Bee Health. PLosOne 5
(3):e9754. Doi:10.1371/journal.pone0009754.
Oliveira RA, Roat TC, Carvallo SM and Malaspina O. 2013. Side-effects of thiamethoxam on the brain and
midgut of the africanized honey bee Apis mellifera (Hymenoptera:Apidae). Environmental Toxicology, in
press.
Ellis MD.2010. Manager pollinator CAP coordinated agricultural proyect: Pesticides applied to crops and
honey bee toxicity. American Bee Jorunal, 150;485-486.
Di Prisco G, Cavaliere V, Annoscia D, Varricchio P, Caprio E, Nazzi F, Gargiulo G and Pennacchio F.
2013. Neoniconioid Clothianidin adversely affects insect immunity and promotes replication of a viral
pathogen in honey bees. PNAS: 10.1073/pnas.1314923110.
Reyes-Quintana RQ. Respuesta Celular Inmune de Abejas (Apis mellifera L.) a la infestación del ácaro
Varroa destructor A. (Tesis de Licenciatura). México: FMVZ-UNAM, 2012.
160
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CORRELACIÓN ENTRE LA CAPTURA DE FACTOR H POR LEPTOSPIRA SPP. Y SU
SOBREVIVENCIA AL SUERO HUMANO NORMAL. ESTUDIO PRELIMINAR.
CORRELATION BETWEEN THE FACTOR H CAPTURE BY LEPTOSPIRA SPP. AND IT’S SURVIVAL
TO HUMAN NORMAL SERUM. A PRELIMINAR STUDY
Moreno TA1*, Sahagún RA1, De la Peña MA2, Becker FID3
1Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Departamento de Microbiología e Inmunología,
Laboratorio de Inmunología Molecular. 2 FMVZ-UNAM, Centro de Enseñanza, Investigación y Extensión
en Producción Animal en el Altiplano, Unidad de Servicios de Diagnóstico y Constatación, Laboratorio de
Bacteriología. 3Facultad de Medicina, Unidad de Medicina Experimental, Hospital General de México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Leptospira es un género de espiroquetas que incluye especies saprófitas y patógenas. Se conocen 250
serovariedades patógenas que causan leptospirosis a diversas especies animales y al hombre. La
enfermedad puede llegar a ser leve o grave causando daño tisular en hígado, riñones, hemorragia
pulmonar y muerte; así como abortos y mortinatos en perros, bovinos y cerdos. En equinos causa uveítis
recurrente. Los animales infectados con Leptospira que sobrevivieron, persisten como portadores;
mientras que las ratas y ratones son resistentes a la enfermedad pero actúan como portadores sanos y
reservorios. La leptospirosis es considerada una zoonosis de importancia mundial. El humano se
contagia cuando tiene contacto con orina de portadores de Leptospira o con agua contaminada de
consumo, de uso recreativo, deportivo o laboral, así como en inundaciones por desastres naturales.
Leptospira presenta varios factores de virulencia, incluyendo adhesinas con estructura similar a las
inmunoglobulinas LigA, LigB y LigC, que interactúan con fibronectina, laminina, colágeno y elastina. La
LigB participa en la adhesión a la matriz extracelular del epitelio renal, a través de heparina, favoreciendo
el desarrollo de nefritis túbulointersticial y falla renal. La inmunidad innata constituye la primera línea de
defensa del hospedero, desempeñando un papel crucial en el reconocimiento y eliminación de
leptospiras. La activación de la vía alterna del sistema del complemento es uno de los mecanismos
efectores más importantes durante las primeras horas de infección. Las leptospiras saprófitas como L.
biflexa son eliminadas en pocos minutos en presencia de suero humano normal in vitro. Las especies
patógenas de Leptospira pueden resistir la acción del sistema del complemento. Se ha reportado la
captura de los reguladores del complemento, Factor H y C4BP, por bacterias Gram negativas como
Escherichia coli K1, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Leptospira interrogans, Borrelia
recurrentis y B. duttoni , así como Pasteurella pneumotropica. La adquisición de Factor H y C4BP por
parte de Leptospira le permite regular negativamente el sistema del complemento. El Factor H (FH); tiene
afinidad por C3b desplazando Bb de la convertasa de C3 y actúa como cofactor para el Factor I, en la
escisión de C3b a su forma inactiva, denominada iC3b. El factor H y su homólogo FHR-1 son capturados
por Leptospira por la proteína LfhA, que es idéntica a Lsa24. LfhA y sus parálogos son lipoproteínas,
denominadas LenA, LenB, LenC, LenD, LenE y LenF. LenA y LenB pueden capturar a factor H, los
demás parálogos funcionan como adhesinas afines a laminina y fibronectina y están presentes en la
membrana externa de leptospiras patógenas. LenA también interactúa con plasminógeno, generando
plasmina, misma que inactiva a C3b y a IgG. Las adhesinas LigA y LigB, también capturan Factor H, el
regulador de la vía clásica de complemento C4BP y plasminógeno. La captura de Factor H ha sido
documentada en Leptospira, sin embargo no se ha esclarecido si existe una correlación entre la
capacidad de captura y su resistencia al suero.
OBJETIVO
Determinar si existe una correlación entre la capacidad de captura y sobrevivencia al suero humano
normal por parte de Leptospira spp.
MATERIAL Y METODOLOGÍA
Cepas bacterianas. Se utilizaron las cepas de Leptospira spp., activadas en hámster o bajo pasaje (LP)
y adaptadas a cultivo o alto pasaje (HP) proporcionadas por el grupo de investigación en Leptospira y
161
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Leptospirosis (GriLLep): L. interrogans sv. Canicola cepa LOCaS 46 (virulencia alta), L. interrogans sv.
Icterohaemorrhagiae cepa LOVe 30 (virulencia media), L. santarosai sv. Tarassovi cepa MOCA45
(virulencia baja) y como control L. biflexa sv. Patoc cepa Patoc I. Las leptospiras fueron cultivadas a 30°C
bajo condiciones aeróbicas en medio líquido EMJH-modificado (Barbosa et al., 2009).
ELISA para determinar la capacidad de captura de reguladores de complemento. Cultivos frescos
de Leptospira de aproximadamente a la mitad de la fase log (del pase 1 al 6) fueron cuantificados por
conteo en la cámara de Petroff-Hausser (Hausser Scientific) en microscopia de campo obscuro.
Suspensiones de 2 X 108 bacterias, previamente lavadas con PBS pH 7.4 (a 21°C, a 11,600 x g’ por 15
min), fueron incubadas con 40% de SHN en PBS a 37°C, durante 1 h. Al término de este periodo, la
mezcla fue incubada en hielo por 1 minuto para detener la acción del complemento. Enseguida, las
suspensiones se lavaron 3 veces con 500 μl de PBS, pH 7.4, centrifugando tres veces (a 11, 600 x g’ por
10 min a 10°C). Las bacterias fueron fijadas en placas de ELISA de alta afinidad (Greiner Bio-One,
Alemania) en 100mM de Na2CO3, pH 9.6 (4°C por 16 h). Se lavó tres veces con PBS-T (PBS + 0.05%
Tween 20) y para evitar interacciones inespecíficas, se bloqueó la placa con 3% de albúmina sérica
bovina (BSA) en PBS-T, incubando a 37°C durante 1 h. La placa fue lavada una vez con PBS-T, se
agregó el anticuerpo policlonal de oveja anti-Factor H (ABcam, Cambridge, Reino Unido) a 1:5,000 y se
incubó a 37°C por 1 h. Después de la incubación, las placas se lavaron tres veces con 200 μl de PBS pH
7.4, y fueron incubadas con anti-IgG de oveja conjugado con peroxidasa (diluido 1:10,000) a 37°C por 1
h. Después de la incubación, las placas fueron nuevamente lavadas tres veces, finalmente se reveló
usando 1.5 μl de H2O2 y 0.004g de OPD (1,2-ortho-phenylenediamine dihydrochloride, Sigma-Aldrich,
San Luis, MO, Estados Unidos) en amortiguador citrato fosfato pH 5. La reacción fue detenida con 50 μl
de H2SO4 4N. Como controles negativos se utilizaron suspensiones bacterianas no tratadas con suero,
incubadas con los anticuerpos primarios y secundarios respectivos. Las placas fueron leídas en un lector
de ELISA (Thermo Scientific Multiskan GO, Waltham, MA, Estados Unidos).
Ensayo de susceptibilidad de Leptospira al suero humano normal. Cultivos en fase log-media
previamente lavados con PBS (500 μl, pH 7.4 a 20°C, centrifugando a 11,600 x g’ por 10 min),
cuantificados y conteniendo 5X 106 Leptospira spp., fueron incubados a 37°C durante 1 hora con 40%
SHN en 200 μl PBS; enseguida, la mezcla fue incubada en hielo por 1 minuto para detener la acción del
complemento, posteriormente, se tomaron 20 µl de la suspensión y fueron colocadas en una placa de 96
pozos estéril con tapa, conteniendo 180 µl de medio EMJH por pozo. La placa fue incubada durante 4
días a 30°C. Se observó el desarrollo bacteriano en campo obscuro y se realizó el conteo en cámara de
Petroff-Hauser. Como control fue utilizado SHN-Inactivado por calor. Los experimentos fueron realizados
por triplicado.
Análisis Estadístico. Para el análisis de los resultados se utilizó el software Graphpad Prism 6 ®
(Graphpad Software, Inc.). En los resultados de captura de reguladores por Leptospira por ELISA fue
utilizado análisis de varianza (ANOVA) y prueba de Tukey para determinar diferencias entre los grupos.
Mientras que para el ensayo de susceptibilidad de Leptospira a la acción del complemento (SHN) fue
utilizada t de Student y ANOVA/Tukey, para verificar diferencias entre 2 grupos y entre grupos
respectivamente.
RESULTADOS
La captura del Factor H por diferentes serotipos de Leptospira por ELISA fue significativa con respecto al
control en todas las leptospiras incluyendo el control L. biflexa sv. Patoc cepa Patoc I. La captura de
Factor H entre serovariedades mostró diferencias estadísticas significativas, capturando mayor cantidad
de Factor H L. interrogans sv. Icterohaemorrhagiae cepa LOVe 30 de bajo pasaje comparada con L.
interrogans sv. Canicola cepa LOCaS 46 de bajo pasaje, similarmente L. interrogans sv.
Icterohaemorrhagiae cepa LOVe 30 de alto pasaje capturó mayor cantidad de Factor H que L. interrogans
sv. Canicola cepa LOCaS 46 y L. santarosai sv. Tarassovi cepa MOCA 45, ambas de alto pasaje. No se
observó diferencia significativa en la captura de Factor H entre alto y bajo pasaje de las tres
serovariedades patógenas. Los ensayos de susceptibilidad al suero demostraron resistencia a la acción
del complemento en todas las especies patógenas, en contraste, el control negativo L. biflexa sv. Patoc
cepa Patoc I no mostró resistencia. No se observó correlación entre la captura de Factor H y la
sobrevivencia al SHN.
162
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Meri et. al., en 2005 no encontraron diferencias en la resistencia al suero entre alto y bajo pasaje de
serovariedades de Leptospira spp. probadas; sin embargo, indican que las cepas que capturan más
eficientemente Factor H son menos susceptibles al suero, y de acuerdo con esto, reportan que la
serovariedad Patoc I no capturó FH y fue muy susceptible al suero. En nuestro estudio, tampoco
encontramos diferencia significativa entre la capacidad de captura de FH entre cepas de alto y bajo
pasaje, por otro lado, la captura de reguladores de complemento fue mayor en las serovariedades de
virulencia media. En contraste, encontramos que L. biflexa sv. Patoc I es eficiente en la captura de FH a
pesar de ser altamente susceptible al suero. Meri et. al., en 2005 realizaron las detecciones de
sobrevivencia de Leptospira una hora después de incubarlas con SHN. En el presente estudio aunque se
incubó una hora con SHN y SHN-IC se evaluó 4 días después, no encontrando diferencia en la viabilidad
de Leptospira spp. Nuestros resultados coinciden con las observaciones realizadas por Meri et. al., 2005
y Barbosa et. al., 2009 respecto a la sobrevivencia de Leptospira a la acción de la vía alterna de
complemento. La capacidad de ligado de Factor H y la alta susceptibilidad al SHN de L. biflexa sv Patoc
cepa Patoc I sugieren que existen otros mecanismos involucrados en la sobrevivencia al suero además
de la captura de Factor H por parte de Leptospira spp.
CONCLUSIONES
Las diferentes serovariedades patógenas de Leptospira spp., son capaces de sobrevivir a la acción de
complemento
Leptospira spp., es capaz de ligar Factor H independientemente de su pasaje en cultivo (entre 1 y 6
pasajes).
L. biflexa sv. Patoc I es eficiente en la captura de FH a pesar de ser altamente susceptible al suero.
La captura de Factor H no se correlaciona con la sobrevivencia al suero humano normal.
IMPLICACIONES
Leptospira evade el sistema del complemento a través de la captura de Factor H, considerando que todas
las leptospiras capturaron Factor H en relación a su control sin suero, y todas sobrevivieron a la acción de
SHN en relación a SHN-IC, excepto L. biflexa sv. Patoc cepa Patoc I.
Leptospira virulenta y atenuada ligan Factor H de manera similar, dado que no existe diferencia en la
captura entre leptospiras de la misma cepa de alto y bajo pasaje.
Existen otros mecanismos involucrados en la sobrevivencia al suero por Leptospira. No basta con
capturar Factor H, dado que L. biflexa captura Factor H y no sobrevive al SHN.
INVESTIGACIÓN FINANCIADA POR: PAPIIT IN-222214
REFERENCIAS CITADAS
Adler, B. & De la Peña Moctezuma, A. 2010. Leptospira and leptospirosis. Vet Microbiol, 140, 287-96.
Bharti, A., Nally, J., Ricaldi, J., Matthias, M., Díaz, M., Lovett, M., Levett, Gilman, R., Willig, M., Gotuzzo,
E. & Vinetz, J. 2003. Leptospirosis: a zoonotic disease of global importance. Lancet Infect Dis, 3, 757–71.
Barbosa, A. S., Abreu, P. A., Vasconcellos, S. A., Morais, Z. M., Goncales, A. P.,Silva, A. S., Daha, M. R.
& ISAAC, L. 2009. Immune evasion of Leptospira species by acquisition of human complement regulator
C4BP. Infect Immun, 77, 1137-43.
Meri, T., Murgia, R., Stefanel, P., Meri, S. & Cinco, M. 2005. Regulation of complement activation at the
C3-level by serum resistant leptospires. Microb Pathog, 39, 139-47.
163
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN ULTRAESTRUCTURAL DEL VIRUS DE LA DIARREA
EPIDÉMICA PORCINA EN CULTIVOS CELULARES.
ISOLATION AND ULTRASTRUCTURAL CHARACTERIZATION IN CELL CULTURES OF PORCINE
EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS.
Rivera-Benítez JF1*, Gómez-Núñez L1, Diosdado VF1, Socci EG1, Ramírez-Mendoza H2, De la Luz AJ2,
Pérez-Torres A3, Quintero V4, Martínez LAC1.
1Centro
Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal, INIFAP, KM 15.5 Carretera
México-Toluca, Colonia Palo Alto, Cuajimalpa, CP. 05110, México, (+52 5538718700 Ext 80335);
2Departamento de Microbiología e Inmunología, FMVZ-UNAM; 3Facultad de Medicina, UNAM; 4Facultad
de Estudios Superiores-Cuautitlán, UNAM.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El virus de la diarrea epidémica porcina (vDEP) pertenece al género Alphacoronavirus, familia
Coronaviridae y orden Nidovirales. Es un virus envuelto de cadena sencilla de ARN en sentido positivo.
La diarrea epidémica porcina (DEP) es una enfermedad altamente contagiosa, que clínicamente se
confunde con la gastroenteritis transmisible porcina (GET) y la diarrea ocasionada por el rotavirus porcino
tipo A (RVA). Morfológicamente es un virus similar a los miembros de la familia Coronaviridae. En cultivos
celulares se ha reportado el aislamiento viral preferentemente en células Vero, sin embargo, otras
alternativas de cultivos deben ser estudiadas.
OBJETIVO
El objetivo del presente estudio fue aislar el vDEP en dos diferentes líneas celulares y observar las
características ultraestructurales en la infección in vitro
MATERIAL Y MÉTODOS
Con la finalidad de aislar el agente causal, se analizaron muestras de intestino (delgado y grueso) y
heces de cerdos que presentaban el cuadro clínico agudo. Se evaluaron muestras de tres granjas de
ciclo completo de Guanajuato y Michoacán. Las muestras colectadas (n=5: Guanajuato; n= 8: Michoacán)
fueron evaluadas por medio de una RT-PCR diferencial para la detección del virus de la diarrea
epidémica porcina (vDEP), gastroenteritis transmisible (vGET) y el Rotavirus porcino tipo A (Dae et al.,
2006; Ogawa et al., 2013).
Para el aislamiento viral se emplearon las líneas celulares de riñón de mono Cercopithecus aethiops
(Vero; CCL-81™, ATCC) y Macaca mulatta (MARC-145). Las células fueron crecidas en medio de
crecimiento (medio mínimo esencial modificado por Dulbecco; 10% suero fetal bovino; 10% de caldo
triptosa fosfato). Los intestinos fueron macerados en medio sin suero (1:10 P/V) y centrifugados a 600 ×
g/ 10 min a 4 °C. El sobrenadante fue filtrado empleando un filtro de nitrocelulosa de 0.22 µm. Se retiró el
GM a los cultivos celulares que presentaban un 80% de confluencia a las 24 h, se lavaron dos veces con
medio de mantenimiento (MM) y se inocularon con la suspensión de intestinos diluido 1:5 V/V. Se dejó
adsorber por 60 min a 37 °C y posteriormente se desechó el inoculo, se agregó MM fresco y se dejó
incubar en una atmosfera con el 5% de CO 2 a 37 °C. Los cultivos fueron observados diariamente hasta
por cinco días en busca de efecto citipático (CPE). Al observar el efecto citopático característico
(formación de sincitios), los cultivos fueron congelados a -80 °C. Una réplica de los cultivos fue fijada con
glutaraldehído y procesada para la visualización en microscopio electrónico con métodos estandarizados.
164
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se detectaron 11 muestras positivas para vDEP (84.6%) y ninguna para vGET y RVA. Posterior a la
detección molecular, se realizó el aislamiento viral en tres muestras. Se logró identificar efecto citopático
(ECP) en dos cultivos celulares inoculados a partir de las 48 h posinfección. Las muestras con ECP
fueron inoculadas en un segundo pase y se observó daño en los monoestratos (formación de sincitios,
lisis celular) al mismo tiempo posinfección.
Los cultivos celulares inoculados en un tercer pase fueron confirmados por RT-PCR y se procesaron para
visualización por microscopia electrónica de transmisión. Por medio del microscopio electrónico fue
posible observar partículas virales en citoplasma y libres con morfología similar a la de los miembros de
la familia Coronaviridae. En la envoltura viral se observaron proyecciones largas (peplomeros) que
asemejaban una corona solar. En términos generales, las partículas virales median en promedio 150 nm
de diámetro.
Cabe señalar que en Estados Unidos de Norteamérica se presentaron brotes desde abril de 2013, la
investigación epidemiológica indica que el vDEP fue introducido a México, posiblemente, por la
importación de cerdos en pie o subproductos de origen porcino no regulados. La fuente exacta de esta
transmisión aún no ha sido descrita. Desde la aparición del vDEP en el continente Americano, se han
realizado diversos estudios que permitan obtener aislamientos virales en diferentes sustratos celulares
(Lawrence et al., 2014), mismos que permitan una replicación y adaptación eficiente del virus y poder
tener una masa antigénica adecuada para la preparación de biológicos (Collin et al., 2015).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Con el aislamiento del vDEP se establece una línea de investigación en torno a esta enfermedad, misma
que conducirá al desarrollo de técnicas diagnósticas, que sean empleadas para tomar medidas de
prevención y para el estudio de un posible biológico para evitar los cuadros clínicos, en las áreas en
donde el vDEP podría establecerse como un padecimiento endémico.
RECONOCIMIENTOS
Financiado por Proyecto Recursos Fiscales, INIFAP, No. 13592932977
BIBLIOGRAFÍA
Collin et al. BMC Veterinary Research (2015) 11:62.
Dae et al. J Vet Diagn Invest (2016) 18:278-281.
Lawrence et al. Genome Announc (2014) 2:e00503-14.
Ogawa et al. J Virol Methods (2009) 160:210-214.
165
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DETECCIÓN DE NUEVOS CORONAVIRUS CAUSANTES DE DIARREAS AGUDAS EN CERDOS
LACTANTES.
DETECTION OF NEWLY CORONAVIRUSES CAUSING ACUTE DIARRHEA IN PIGLETS.
Rivera-Benítez JF1*, Gómez-Núñez L1, Diosdado VF1, Socci EG1, De la Luz AJ2, Quintero V3, Valera GE4,
Martínez LAC1.
1Centro
Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal, INIFAP, KM 15.5 Carretera
México-Toluca, Colonia Palo Alto, Cuajimalpa, CP. 05110, México, (+52 5538718700 Ext 80335);
2Departamento de Microbiología e Inmunología, FMVZ-UNAM; 3Facultad de Estudios SuperioresCuautitlán, UNAM. 4Práctica privada.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La nueva enfermedad entérica en cerdos causada por coronavirus, es una enfermedad emergente, los
agentes etiológicos involucrados son el Alfacoronavirus (virus de la diarrea epidémica porcina; vDEP) y
el Deltacoronavirus porcino (DCoV). Esta nueva enfermedad afecta a cerdos de todas las edades,
causando diarrea, vómito y anorexia. En lechones recién nacidos (1-15 días de edad), el vómito y diarrea
provoca una deshidratación que produce la muerte en pocas horas, la mortalidad en cerdos lactantes
varía del 50-80% (DCoV) y del 80-100% (vDEP). La diarrea viral por coronavirus en lechones es
actualmente, la causa de pérdidas económicas más importante en la producción porcina. En México, a
principios de julio del 2013, varios veterinarios dedicados a la clínica porcina identificaron brotes muy
sugerentes de la infección entérica causada por coronavirus. La Dirección General de Salud AnimalSENASICA reconoció la presencia del vDEP en la porcicultura nacional, en al menos 17 estados
(Reporte OIE, 22 de mayo 2014). La situación con respecto a DCoV aún no ha sido descrita. Sin
embargo, en Estados Unidos de Norteamérica se ha reportado la presencia de estos dos coronavirus
desde 2013.
OBJETIVO
Detectar el genoma viral de nuevos coronavirus en lechones lactantes con cuadros diarreicos
MATERIAL Y MÉTODOS
Se realizó un muestreo por oportunidad en doce granjas de cerdos con cuadros diarreicos en lechones.
Se colectaron un total de 49 muestras de lechones lactantes con diarrea, de siete diferentes Estados de
la República. Se analizaron secciones de intestino delgado e intestino grueso y diarreas, en el cuadro 1
se presenta la relación de las muestras.
Para la detección del genoma viral se emplearon pruebas de RT-PCR punto final, previamente descritas,
en ambos casos (vDEP y DCoV) se amplificaron fragmentos del gen S que codifica a la proteína
estructural spike (Ogawa et al., 2009; Marthaler et al., 2014).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se detectaron muestras positivas para vDEP y DCoV, en el 91% de las muestras analizadas. Se
registraron un total de 26 y 16 muestras positivas para vDEP y DCoV, respectivamente. Los resultados
se presentan a detalle en el cuadro 1.
166
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 1. Resultados obtenidos de las pruebas de detección molecular para vDEP y DCoV en
muestras de intestino y diarreas de lechones lactantes.
Año de
colecta
Origen
Tipo de
muestra
Muestras positivas
DEP/número de muestras
analizadas
Muestras positivas
DCoV/número de muestras
analizadas
2013
Michoacán
ID
6/6
2/6
Estado de México
ID
1/1
1/1
Puebla
ID
1/3
2/3
Sonora
ID
4/4
4/4
Diarrea
4/5
1/5
ID
3/5
1/5
Diarrea
1/6
0/6
Guanajuato
ID
0/1
1/1
Michoacán
ID
0/4
0/4
Veracruz
ID
3/4
0/4
IG
3/4
0/4
ID
0/6
6/6
26/49
16/49
2014
Jalisco
Michoacán
Total
La presencia de enfermedades diarreicas en lechones es muy común en las granjas de producción
intensiva. Por lo general se realiza el diagnóstico clínico y se dan tratamientos genéricos con antibióticos
o con anticcocidianos. Al presentarse cuadros diarreicos en estas granjas, con características distintas a
las observadas anteriormente se decidió realizar el diagnóstico de laboratorio. Se registró una alta
prevalencia para vDEP (53%) y moderada para DCoV (32%). Cabe señalar que se registró un 50% de
muestras positivas con la presencia de los dos agentes virales (coinfección), en estudios similares se
reporta un 33% (Marthaler et al., 2014).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Se logró evidenciar la presencia de nuevos coronavirus en cerdos lactantes. La coinfección con estos
agentes es un evento común. En la actualidad la prevalencia de nuevos coronavirus es una realidad, se
deberán continuar realizando estudios de monitoreo para identificar las causas endémicas o emergentes
de cuadros diarreicos en lechones. Con el empleo de métodos diagnósticos que permitan diferenciar la
etiología viral, se podrán implementar mejores planes de control en las granjas afectadas con estos
nuevos coronavirus.
RECONOCIMIENTOS
Financiado por Proyecto Recursos Fiscales, INIFAP, No. 13592932977
BIBLIOGRAFÍA
Marthaler et al. Emerg Infect Dis (2014) 20: 1347-50.
Ogawa et al. J Virol Methods (2009) 160:210-214.
167
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
REPLICACIÓN DEL VIRUS DE LA DIARREA EPIDÉMICA PORCINA EN SEIS DIFERENTES LÍNEAS
CELULARES.
REPLICATION OF PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS IN SIX DIFFERENT CELL LINES.
Vargas EL1*, Zapata MM1, Lara-Romero R2, Valera E3, Gómez-Núñez L4, De la Luz, AJ1, Rivera-Benítez
JF4.
1Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM; 2FESC, UNAM; 3Práctica privada; 4Centro
Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal, INIFAP, Cuajimalpa, México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El virus de la diarrea epidémica porcina (vDEP) se reportó por primera vez en Estados Unidos en mayo
de 2013. Desde entonces, el virus se ha extendido rápidamente en la mayoría de los estados de EE.UU
y, en ese mismo año, en toda América del Norte incluyendo países como Canadá y México. Actualmente,
se encuentran circulando cepas variantes en la población de cerdos, relacionado con una alta tasa de
mutación del vDEP (Oka et al., 2014). Hasta el momento, no hay una vacuna disponible para la diarrea
epidémica porcina en México, principalmente por la dificultad del virus para adaptarse y replicarse en
cultivos celulares. Se ha reportado la propagación exitosa en líneas celulares como Vero y MARC-145
(ambas de riñón de mono), mismas que se han utilizado para el aislamiento de virus a partir de muestras
clínicas, para la propagación de virus y para estudios de titulación y neutralización viral (Collin et al.,
2015). A su vez, se ha buscado desarrollar herramientas de diagnóstico oficial en México mediante
aislamiento viral, sin embargo, esto no se ha concluido.
OBJETIVO
Replicar el vDEP en líneas celulares homólogas y heterólogas del cerdo, para identificar un sustrato
celular óptimo para su multiplicación.
MATERIAL Y MÉTODOS
Muestras clínicas. Se obtuvieron muestras de intestino de dos lechones de dos días de edad, mismos
que fueron infectados experimentalmente con la cepa PEDV/MX/MICH/01/2013 (Número de acceso
GenBank: KJ906603). Los órganos fueron macerados empleando DMEM en una proporción 1:10 P/V.
Posteriormente, las muestras se centrifugaron a 1500 × g durante 15 minutos a 4 °C y el sobrenadante
fue filtrado con membranas estériles de nitrocelulosa de 0.45µm y 0.22µm. El material filtrado fue
empleado como inóculo para el aislamiento del virus.
Aislamiento viral. El aislamiento del virus de diarrea epidémica porcina se realizó en diferentes líneas
celulares: Vero (células de riñón de mono Chlorocebus aethiops), Marc-145 (subclona células MA-104),
PK15 (células de riñón de cerdo), SCP (plexo coroideo ovino), LLC-MK2 (células de riñón de mono
Macaca mulatta) y BHK-21 (células de riñón de hámster neonato). Las células fueron mantenidas con
DMEM (Dulbecco Modified Eagle Medium) suplementado con 5% de suero fetal bovino y 10% de caldo
triptosa fosfato. Para la infección del monoestrato, se retiró el medio de mantenimiento de los cultivos
celulares y se procedió a realizar un lavado con tripsina (0.05%). Se empleó medio de infección (DMEM,
10% TPB y tripsina a una dosis de 10µg/ml), se agregó 100µl del inóculo y 900µl de medio a cada botella
de 25 cm2, se incubaron por una hora a 37 °C en una atmosfera de 5% de CO 2, para permitir la
adsorción. Finalmente, se agregaron 4ml de medio. Una botella de cada línea celular fue asignada como
testigo sin inocular. Diariamente se examinaron los cultivos en busca de efecto citopático (ECP), al tercer
día se procedió a congelarlas a -70 °C, posteriormente, fueron sometidas a un choque térmico
(congelamiento-descongelamiento) y se colectaron los sobrenadantes, se realizaron replicas y se
mantuvieron en congelación para el siguiente pase. Para el segundo y tercer pase se emplearon 100µl
168
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
del sobrenadante y 900µl de medio de infección. En todos los procedimientos se mantuvo el inóculo en
los cultivos durante todo el tiempo de incubación.
RT-PCR en tiempo real. Se realizó una prueba de RT-PCR en tiempo real a los sobrenadantes
obtenidos a partir del cultivo celular. Se incluyeron en las pruebas ARN de los cultivos testigos de cada
línea celular, macerados de intestinos, testigos de la reacción (control sin templado), ARN de virus de
gastroenteritis transmisible y del Deltacoronavirus porcino, además de ARN testigo positivo.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se presentó efecto citopático en las líneas celulares Vero, Marc-145, LLC-MK2 y BHK-21 en el primer
pase en cultivo celular, evidenciándose a las 24 y 48 horas posinfección, respectivamente. Los valores de
Ct más bajos se registraron en las líneas Vero, Marc-145, LLC-MK2 y BHK-21, durante la cinética de la
RT-PCR. En el segundo pase se presentó efecto citopático y valores de Ct en las líneas Vero (22), LLCMK2 (31), BHK-21 (29) y PK15 (34). En las demás líneas celulares no se observó efecto y los valores de
Ct se registraron muy cercanos al límite de detección (Ct 35). El patrón de replicación no se presentó de
forma homogénea con los dos inóculos empleados.
Cuadro 1. Resultados registrados durante la multiplicación del DEPV en
seis diferentes líneas celulares.
Línea
Primer pase
Segundo pase
celular/horas
24 h
48 h
72 h
24 h
48 h
72 h
posinfección
(ECP)
(ECP) (ECP/Ct) (ECP) (ECP) (ECP/Ct)
Vero (L1)
++
++
++
+
+
28
NEG
Vero (L2)
32
32
Marc-145 (L1)
++
+
+
+
25
Neg*
Marc-145 (L2
26
Neg
LLC-MK2 (L1)
++
++
+
+
+
32
Neg
LLC-MK2 (L2)
+
++
++
++
25
31
BHK-21 (L1)
++
++
+
+
+
32
Neg
BHK-21 (L2)
+
++
+
++
++
29
29
SCP (L1)
Neg
Neg
SCP (L2)
34
Neg
PK15 (L1)
30
34
PK15 (L2)
34
Neg
*Se consideraron valores positivos si la curva de amplificación cruzaba a
una Ct menor a 35.
L1: lechón 1
L2: lechón 2
169
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Después de que el virus de la diarrea epidémica porcina fue identificado en los Estados Unidos en 2013,
inició el trabajo para aislarlo, mantenerlo y replicarlo en cultivo celular. En este estudio se realizó el
aislamiento y adaptación del vDEP, utilizando las líneas celulares reportadas en la literatura como Vero y
Marc-145, así como diferentes líneas celulares, entre ellas PK15, SCP, LLC-MK2 y BHK-21. En las
líneas BHK-21 y LLC-MK2, se observó ECP, pero al segundo pase disminuyó su replicación (evidenciado
por su ECP). Diferentes factores pueden estar implicados en la baja replicación del virus y la difícil
adaptación a las líneas celulares utilizadas en este trabajo, tales como el tipo de muestra y su manejo, el
título del virus, las condiciones del cultivo celular y el tipo de línea celular (Collien et al., 2015). Por ello,
es necesario modificar los procedimientos de aislamiento y adaptación viral, para aumentar la tasa de
éxito de replicación del vDEP.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
El vDEP es un virus ARN, por lo cual su sitio de replicación se encuentra en el citoplasma de la célula,
para que la producción del virus in vitro se vea incrementada, se requieren técnicas para facilitar el
ingreso del virus al sistema hospedador utilizado, lo cual se intentó hacer con la tripsina. Los resultados
obtenidos mediante RT-PCR en tiempo real indican que no existe replicación abundante en ciertas líneas
celulares, y en aquellas en las que si se observó, para el subsecuente pase se vio disminuida. Se sugiere
emplear otro método que optimice la entrada del virus a la célula, repetir la metodología antes descrita y
posteriormente mediante técnicas moleculares evidenciar la multiplicación.
Es posible replicar el virus en células heterólogas al cerdo, lo cual nos permite utilizar diversas líneas
celulares para los múltiples pasajes. Se busca mantener la multiplicación viral a través de un determinado
número de pases y observar el comportamiento del virus, esperando que se adapte a la multiplicación en
sustratos celulares y así poder obtener masa antigénica necesaria para el desarrollo de un biológico
inactivado.
RECONOCIMIENTOS
El presente trabajo fue financiado por Proyecto Recursos Fiscales INIFAP: No. 13592932977
REFERENCIAS
Collin et al. BMC Veterinary Research (2015) 11:62.
Oka et al., Vet Mic (2014) 173: 258-269
170
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
AVANCES EN LA CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE AISLAMIENTOS DE CAMPO DE
RUBULAVIRUS PORCINO.
ADVANCES IN GENETIC CHARACTERIZATION OF FIELD ISOLATES OF PORCINE RUBULAVIRUS.
Loeza CJG1,2*, Gómez NL1, Rivera BJF1, Varela GEO1, Diosdado VF1, Martínez LAC1.
1CENID-Microbiología
Animal, INIFAP; 2Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad
Veracruzana.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El Rubulavirus Porcino (RVP), fue detectado por primera vez en 1980 en granjas de La Piedad,
Michoacán, México. El RVP es el agente causal de la Enfermedad del Ojo Azul (EOA) se caracteriza por
producir cuadros respiratorios, neurológicos, reproductivos y opacidad corneal en las distintas etapas
productivas del cerdo. El RVP pertenece a la familia Paramixoviridae, subfamilia Paramixovirinae, género
Rubulavirus, especie porcino, su genoma se encuentra integrado por una cadena sencilla de ARN de
polaridad negativa, contiene seis genes que codifican para diez proteínas virales. La proteína
Hemaglutinina–Neuraminidasa (HN) del RVP contiene un marco de lectura abierto de 1,728 nucleótidos
que codifican para 576 aminoácidos y es la responsable de reconocer al receptor celular ácido
neuramínico α2, 3 galactosa.
Antigénicamente la proteína HN juega un papel preponderante debido a que es considerada la proteína
más inmunogénica, responsable parcialmente de la inducción de la respuesta inmune humoral, celular y
el tropismo viral. A más de una década, pocos son los reportes que evidencian cambios genéticos de la
proteína HN de RVP, y que pueden estar asociados a cambios antigénicos que limitan el espectro de
protección que confieren las vacunas actualmente utilizadas para su control. Por lo que, es necesario
actualizar la información de las cepas presentes en las diferentes regiones donde la enfermedad es
endémica, para identificar los posibles cambios genéticos y antigénicos que ha sufrido esta proteína
durante los últimos años. A razón que la presencia de la EOA, representa una limitante para la
comercialización inter-estatal y mundial.
OBJETIVOS
Caracterizar genéticamente los aislamientos de campo de rubulavirus porcino realizados en el 2013, en el
CENID-MA, INIFAP.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se realizó un muestreo por conveniencia en granjas porcícolas de los estados de Querétaro, Michoacán y
Guanajuato. Las muestras colectadas fueron pulmón, tonsila y ganglio inguinal de cerdos con cuadro
clínico sugerente a la infección por RVP y animales aparentemente sanos. Los órganos fueron
transportados al laboratorio de virología del CENID-Microbiología Animal, donde se procesaron 165
muestras en total para realizar el aislamiento viral de RVP. Se realizaron macerados de cada uno de los
órganos en medio mínimo esencial (MEM), hasta observar una suspensión homogénea, la cual fue
centrifugada a 1,500 rpm durante 10 minutos. El sobrenadante fue colectado y filtrado con una membrana
de 0.22µm. Se realizaron alícuotas de 500 l para llevar a cabo el proceso de infección in vitro.
Se utilizó la línea celular PK-15 de riñón de cerdo con un porcentaje de confluencia del 70% para realizar
el aislamiento viral, las células fueron inoculadas con 500 l del sobrenadante de cada macerado e
incubadas a 37°C durante una hora, posteriormente se retiro el inóculo y se agregaron 5 ml de medio
MEM, suplementado con 2% de suero fetal bovino. Las células fueron revisadas diariamente durante
cinco días para observar la aparición de efecto citopático (sincitios). Todos los sobrenadantes, se
sometieron a tres pases ciegos, para corroborar el aislamiento viral, se llevó a cabo una RT-PCR
cuantitativa (qRT-PCR), que detecta un fragmento del gen N de RVP.
171
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Para la caracterización genética del gen HN de rubulavirus porcino, se utilizarón seis pares de iniciadores
que amplificaron tres fragmentos de 1709pb, 1030pb y 465pb, y que corresponden a un 99% de la
secuencia completa del gen HN de RVP. El programa para la RT-PCR se describe a continuación: 55 C
30 minutos (transcripción), 95 C 15 minutos (desnaturalización inicial), 35 ciclos de 95 C 30 segundos
(desnaturalización), 60 C 30 segundos (alineamiento), 72 C 45 segundos (extensión), y una extensión
final a 72 C durante 5 minutos. Los productos amplificados para 9 de los 17 aislamientos de RVP, fueron
visualizados en un gel de agarosa teñido con 4l del agente intercalante de ADN Midori Green,
posteriormente se purificaron para su secuenciación en el Instituto de Biotecnología de la UNAM,
Morelos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Se logró el aislamiento de RVP, en 17/165 muestras de campo en la línea celular PK-15 de riñon de
cerdo. La detección de ARN viral fue identificada mediante una prueba cuantitativa (qRT-PCR) que
amplifica un fragmento conservado del gen N de RVP. Los Ct de la prueba se mantuvieron en el rango
del 18 al 25 ciclos de amplificación. Los resultados de la secuenciación de los 9 aislamientos de campo,
presentaron una homología del 97 al 99%, en comparación con secuencias previamente reportadas en la
base de datos del GenBank para RVP. El análisis realizado incluyó un 92% (1,595 nucleótidos) de la
secuencia codificante para la proteína Hemaglutinina-Neuraminidasa (HN). Los aislamientos realizados
en este estudio, presentaron modificaciones genéticas comparado con el virus de referencia de La
Piedad Michoacán LPM-84 (Ver, Cuadro 1). Por lo que es importante, continuar con el estudio de las
secuencias, para determinar su repercusión a nivel antigénico. Así mismo, se estandarizó una prueba de
RT-PCR, utilizando iniciadores específicos previamente diseñados capaces de detectar las secuencias
reportadas para esta especie viral, lo que incrementó el espectro de detección de cepas clásicas y las
variantes genéticas de RVP reportadas en la base de datos del GenBank. Con la estandarización de esta
prueba se podría disminuir los tiempos de la caracterización genética de aislamientos de campo de
rubulavirus porcino, debido a que se utiliza un solo protocolo experimental de RT-PCR para la
amplificación de la secuencia codificante para la proteína Hemaglutinina-Neuraminidasa, considerándola
una herramienta útil, práctica y específica que puede ser transferida y adaptada por los laboratorios de
diagnóstico regionales, interesados en la epidemiología de la enfermedad del ojo azul (EOA).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Los resultados de la secuenciación de los nueve aislamientos de campo, mostraron una alta homología
con los rubulavirus porcinos previamente reportados. Sin embargo, en este estudio se encontraron
modificaciones genéticas en los aislamientos de campo. Los porcentajes de identidad se encontraron
dentro de un rango del 97 al 99%, comparados con la cepa de referencia de La Piedad Michoacán LPMV.
Se continuará con los estudios de caracterización de los aislamientos restantes, para ampliar el
panorama de los resultados de la secuenciación y la caracterización antigénica de las cepas que
presenten mayor variabilidad.
Cuadro 1.- Distancias genéticas de los aislamientos de campo de RVP.
172
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
*Aislamientos RVP/INIFAP/2013
Proyecto financiado con Recursos INIFAP, No. 19144832016
Referencias
Moreno LJ, Correa GP, Martinez A, Ericsson A. Chraracterization of a paramixovirus isolated from the
brain of a piglet in México. Arch Virol 1986; 91: 221-231.
Sánchez BJI, Santos LG, Alonso R, Doporto JM, Ramírez MH, Mendoza S, Hernández JJ, Reyes LJ,
Trujillo ME. Molecular characterization of the hemaglutinin-neuraminidase gene of porcine rubulavirus
isolates associated with neurological disorders in fattening and adult pigs. Research in Veterinary Science
2008. 85:359–367
Hernández J, Reyes LJ, Ramírez MH, Valenzuela O, Zenteno E. Characteristics of the immune response
in pigs infected with porcine rubulavirus. Vet. Méx 2004. 35: 65-74.
173
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EXPRESIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LA PROTEÍNA P25 DE LENTIVIRUS DE PEQUEÑOS
RUMIANTES (LVPR), EN EL SISTEMA ESCHERICHIA COLI.
EXPRESSION AND CHARACTERISATION OF P25 SMALL RUMINANT LENTIVIRUS (SRLV) PROTEIN,
IN ESCHERICHIA COLI SYSTEM.
Valladares RB 1,2, Gómez NL1*, Rivera BJF1, Herrera LE1, Ducoing WAE2, Ramírez AH3, Álvarez OMG4,
Díaz AE1.
1CENID-Microbiología
Animal, INIFAP; 2FMVZ, UNAM; 3FES-Cuautitlán, UNAM; 4Campo Experimental
Rio Bravo, INIFAP.
[email protected]
INTRODUCIÓN
La artritis encefalitis caprina (AEC), es una enfermedad crónica, caracterizada por una artritis progresiva
en animales adultos y una encefalitis desmielizante en animales jóvenes. Análisis filogenéticos por
comparación de las secuencias de nucleótidos entre el virus de AEC y el virus de Maedi-Visna (VMV),
han demostrado que son lentivirus muy relacionados, por lo que actualmente, son referidos como
Lentivirus de pequeños rumiantes (LvPR) (Larruskain et al., 2013). En México, el primer trabajo
documentado sobre el aislamiento viral de AEC, fue observando la formación de células gigantes
multinucleadas (sincitios) a partir de co-cultivos de células de membrana sinovial y mononucleares
periféricas, y se comprobó la presencia del virus en los cultivos celulares, mediante PCR (Daltabuit et al.,
1999). Así mismo, a partir de un rebaño mixto de caprinos-ovinos, se obtuvo la secuenciación del
genoma completo de un aislamiento nacional del virus AEC, el cual fue clasificado en el grupo genético
B1 (Ramírez et al., 2011).
El diagnóstico serológico es el método más común y usado para la detección de anticuerpos contra el
VMV y VAEC, aunque también el uso de técnicas para identificar el virus, tales como aislamiento viral y la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) son utilizadas para detectar la infección en etapas
tempranas; sin embargo, la poca carga viral y la variabilidad genética reducen de manera importante su
eficiencia. En el diagnóstico serológico, la detección de anticuerpos se ha llevado a cabo mediante
técnicas como inmunodifusión en gel de agar (AGID), inmunoensayo enzimático (ELISA),
radioinmunoprecipitación (RIPA) y Western Blot; no obstante, la diversidad antigénica entre las cepas de
cada región geográfica limita su detección. En diversos estudios se ha reportado que las proteínas
codificadas por el gen gag juegan un papel importante como antígenos inmunodominantes en las
infecciones con AEC, siendo la más importante, la proteína de la cápside, la cual se ha considerado y
empleado en diversos trabajos como antígeno recombinante para el desarrollo de pruebas serológicas ya
que representa una región altamente conservada del genoma y mantiene sus propiedades
inmunogénicas, siendo uno de los primeros antígenos reconocidos por el sistema inmune del hospedero,
lo cual permite un eficiente diagnóstico de la enfermedad. El uso de estas proteínas recombinantes para
la detección de LvPRs en pruebas serológicas representa un reactivo de bajo costo, específico,
altamente efectivo mejorando así, la sensibilidad en el diagnóstico.
OBJETIVO
Expresar y caracterizar la proteína p25 de Lentivirus de pequeños rumiantes (LvPR), en el sistema
Escherichia coli.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se diseñaron un par de iniciadores que amplifican un fragmento de 667 pb, correspondiente a la
secuencia codificante de la proteína p25 del gen gag. La homología de estos iniciadores fue analizada
por medio de la base de datos BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) del National Center of
Biotechnology Information (NCBI).
174
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Posteriormente, a partir del líquido sinovial de una cabra con signos clínicos de artritis, se realizó la
extracción de ARN para amplificar por PCR la secuencia de la p25. Dicho producto fue purificado y
enviado a secuenciar a la Unidad de Secuenciación del Instituto de Biotecnología de la UNAM, campus
Morelos. El análisis mostró un porcentaje de identidad del 93-94% con el gen gag, que codifica para la
proteína de la cápside-p25. Este producto de PCR de 667 pb, se insertó en el sitio múltiple de clonación
de un vector comercial con el cual se transformaron células competentes de Escherichia coli Mach1TMT1R (One Shot® Mach1TM-T1R Chemically Competent E.coli).
Para comprobar la presencia de la secuencia p25 en el plásmido y que su marco de lectura era adecuado
para traducir la proteína completa; se llevó a cabo su purificación y posterior envío al IBT-UNAM,
Morelos. Posteriormente, se realizaron alineamientos con la secuencia obtenida mostrando una
homología del 97-100% con la poliproteína gag.
De un cultivo reciente, se tomó una alícuota e inoculó en caldo LB (1:10), adicionado con kanamicina (50
µg/mL) y 1% de glucosa, éste último cultivo se incubó a 37 °C con agitación durante 2 h para alcanzar
una densidad óptica (OD600) de 0.4-0.6. Una vez que se alcanzó dicha densidad, se tomó una alícuota, la
cual determinó la ‘fase cero’ de la curva de expresión; posteriormente, el cultivo se dividió en dos cultivos
de 5 mL; a uno de éstos, se le adicionó isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) a una concentración
final de 1mM para finalmente obtener un cultivo inducido (con IPTG) y otro sin inducir. Finalmente, los
dos cultivos se incubaron a 37 °C con agitación durante 5 h, tomando una alícuota de 500 µL en fases de
tiempo de 30 min para cada uno de los dos cultivos. El pellet de cada fase de tiempo, se sometió a una
lisis para obtener el extracto crudo de las colonias bacterianas.
El contenido de proteína de los pellets se cuantificó mediante el método de Bradford, de igual modo se
determinó y evaluó la expresión de la proteína de interés por electroforesis en geles de poliacrilamida al
12%, donde se observó la expresión de dos proteínas de aproximadamente 30 y 40 kDa, a diferencia del
control de células de E. coli sin transformar.
Para corroborar la identidad de la proteína p25, se llevó a cabo un Western blot (WB) utilizando el suero
de una cabra infectada naturalmente con AEC como anticuerpo primario. Primeramente se realizó la
separación de las proteínas por electroforesis y se llevó a cabo su transferencia a una membrana de
PVDF (Fluoruro de Polivinilideno), ésta se bloqueó durante 2 h a temperatura ambiente. Pasado este
tiempo, la membrana se incubó con un suero de cabra positivo a LVPR (1:200) a 4°C durante toda la
noche y posteriormente con una IgG anticabra marcada con HRP durante 2 h a 37°C. Finalmente, las
bandas detectadas en el WB fueron purificadas para su evaluación mediante cromatografía líquida
acoplada a espectrómetros de masas (LC-MS/MS) en el IBT-UNAM, Morelos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El análisis de LC-MS/MS, determinó los pesos moleculares de las proteínas expresadas en E. coli de 32
y 38 kDa. Los datos espectrómetricos fueron sometidos a una búsqueda contra la base de datos Uniprot
de E. Coli y Caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) a través del motor de búsqueda Sequest,
utilizando el programa Proteome Discoverer 1.4. Los resultaron mostraron que ambas proteínas
presentaban determinantes antigénicos para la proteína p25 del virus de AEC, así como la identificación
de la proteína de fusión SUMO (small ubiquitin-like modifier) y la presencia de Histidinas en la región Nterminal de la proteínas recombinantes, lo que probablemente este relacionado directamente con el
incremento del peso molecular (hasta 13 kDa). Por otra parte, la detección de las proteínas
recombinantes en el Western Blot, corroboró que las proteínas expresadas en E. coli conservan sus
propiedades biológicas y antigénicas.
CONCLUSIÓN E IMPLICACIONES
El presente forma parte de los primeros estudios para la obtención y producción de antígenos
recombinantes a partir de cepas de E. coli en México; en este, se logró la expresión y obtención de dos
proteínas que contienen determinantes antigénicos para la proteína p25 mediante el sistema de E. coli,
constituyendo uno de los primeros pasos para el desarrollo de pruebas diagnósticas inmunológicas
locales basadas en antígenos recombinantes.
175
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Actualmente en México, el uso de programas de mejoramiento genético con animales importados, así
como el tránsito interestatal de animales, favorecen la diseminación de LvPR (Torres-Acosta et al., 2003).
Bajo este panorama, los programas de prevención y control deben basarse en técnicas diagnósticas que
detecten animales portadores en etapas tempranas de la infección (Peterhans et al., 2004).
Debido a la poca disponibilidad de pruebas serológicas en el país que permitan un monitoreo constante
del LvPR; es necesario evaluar alternativas de diagnóstico locales, por lo que la obtención de una
proteína candidata a ser utilizada como antígeno, favorecerá el desarrollo de técnicas diagnósticas más
sensibles que permitan la identificación y control de LvPR que infectan rebaños nacionales. No obstante,
el diagnóstico serológico de LvPR puede complicarse debido a las variaciones genéticas del virus, el
tiempo de exposición de los animales al agente, la evolución lenta de la enfermedad, la seroconversión
tardía, entre otros factores; es por ello que se recomienda complementar el diagnóstico con técnicas
moleculares (como PCR) o aislamiento. Así mismo, las dificultades en el diagnóstico pueden disminuirse
con la utilización de mezclas de antígenos inmunodominates (SU-gp138 y CA-p25).
FINANCIAMIENTO.
Proyecto de Recursos INIFAP: “Expresión y caracterización de antígenos recombinantes, para el
diagnóstico serológico del Virus de artritis Encefalitis Caprina, Listeria monocytogenes y Chlamydia
abortus mediante ELISA”. No. 2133032054
LITERATURA CITADA
Daltabuit M, de la Concha-Bermejillo A, Espinosa LEL, Loza E and Setién A. Isolation of caprine arthritis
encephalitis virus from goats in Mexico. Can J Vet Res 1999; 63: 212-215.
Larruskain A and Jugo BM. Retroviral Infections in Sheep and Goats: Small Ruminant Lentiviruses and
Host Interaction. Viruses 2013; 5: 2043-2061.
Peterhans E, Greenland T, Badiola J, Harkiss G, Bertoni G, Amorena B et al. Routes of transmission and
consequences of small ruminant lentiviruses (SRLVs) infection and eradication schemes. Vet Res 2004;
35: 257-274.
Ramírez H, Glaria I, de Andrés D, Martínez HA, Hernández MM, Reina R et al. Recombinant small
ruminant lentivirus subtype B1 in goats and sheep of imported breeds in Mexico. Vet J 2011; 190: 169172.
Torres-Acosta JFJ, Gutiérrez-Ruiz EJ, Butler V, Schmidt A, Evans J, Babington J et al. Serological Survey
of Caprine Arthritis-Encephalitis Virus in 83 Goat Herds of Yucatan, Mexico. Small Ruminant Res 2003;
49: 207-211.
176
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EVALUACIÓN DE LA INTERFERENCIA EN EL DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE MYCOBACTERIUM
AVIUM SUBSP. PARATUBERCULOSIS EN CABRAS CON LINFADENITIS CASEOSA. RESULTADOS
PRELIMINARES.
EVALUATION OF INTERFERENCE SERODIAGNOSIS OF MYCOBACTERIUM AVIUM SUBSP.
PARATUBERCULOSIS IN GOATS WITH CASEOUS LYMPHADENITIS PRELIMINARY RESULTS.
Cortés PYA1*, Arellano RB1, Ducoing WAE1, Díaz AE 2
1Departamento de Microbiología e Inmunología, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia,
Universidad Nacional Autónoma de México D.F., México.; 2Instituto Nacional de Investigaciones
Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología
Animal, México, DF, México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La paratuberculosis también conocida como enfermedad de Johne (JD) es una enfermedad de curso
crónico y etiología infecciosa causada por Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis (Map) que
afecta a rumiantes domésticos y silvestres incluyendo bovinos, ovejas, cabras, búfalos y venados, así
como también animales monogástricos. La principal vía de transmisión es la oral-fecal, excretándose
principalmente en heces.
Map es un bacilo ácido alcohol resistente que provoca enteritis granulomatosa en rumiantes y en los
últimos años ha sido implicado como potencial agente etiológico en la enfermedad de Crohn en humanos.
En México pocos son los estudios que muestran la prevalencia de la paratuberculosis en hatos caprinos,
a pesar de ser una enfermedad que impacta negativamente la producción debido principalmente a la
reducción de la producción de leche, aumento de la incidencia de la mastitis y el sacrificio temprano de
animales.
Pruebas serológicas para la detección de la paratuberculosis como el Inmunoensayo ligado a enzimas
(ELISA) e Inmunodifusión en gel de agar (IDGA) ven comprometidos su especificidad debido a la
presencia de géneros taxónomicamente relacionados como Corynebacterium, Actinomyces, Nocardia,
Rhodococcus y otras micobacterias.
La alta prevalencia en los hatos caprinos de Corynebacterium pseudotuberculosis, agente etiológico
de la linfadenitis caseosa (LC), complica el diagnóstico debido a la inespecificidad causada por la
estrecha relación taxonómica con el género Mycobacterium spp. derivando en reacciones cruzadas que
arrojan falsos positivos en el diagnóstico de Map.
OBJETIVO.
El objetivo de este estudio es evaluar la interferencia en el diagnóstico serológico de Mycobacterium
avium subsp. paratuberculosis en cabras con abscesos cutáneos producidos por C. pseudotuberculosis.
MATERIAL Y MÉTODOS
El estudio se llevó a cabo con 100 caprinos adultos (>2 años) localizados en 7 entidades federativas:
Puebla, Tlaxcala, Estado de México, Jalisco, Zacatecas, Guanajuato y el Distrito Federal.
Los hatos caprinos de interés en este trabajo fueron aquellos en donde se presentaba linfadenitis
caseosa y paratuberculosis, así como hatos libres de ambas enfermedades. Se realizó un único muestreo
por cada animal y se recolectó de cada cabra sangre por punción de la vena yugular con tubos vacutainer
sin anticoagulante, exudado purulento de abscesos y heces tomadas directamente del recto.
Del total de cabras muestreadas (n=100), el 74% tenían antecedentes de linfadenitis caseosa.
177
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
De este grupo afectado con LC (n=74), se muestrearon 61 cabras con abscesos, de los que se obtuvo
exudado purulento de los linfonodos afectados; 13/74 animales presentaron abscesos fistulizados, por lo
que el diagnóstico de C. pseudotuberculosis se basó en la historia clínica y el ELISA indirecto. Las cabras
sin antecendentes de LC (26/100), se sometieron a pruebas serológicas y moleculares para descartar la
presencia de ambas enfermedades.
Para realizar el diagnóstico de M. paratuberculosis se utilizaron dos pruebas serológicas, un ELISA
indirecto con el kit comercial de IDEXX Paratuberculosis Screening Ab ®, que se utilizó de acuerdo a las
instrucciones del mismo, y la inmunodifusión en gel de agar (IDGA), utilizando el antígeno protoplásmico
de Map PPA3 (Allied Monitor, Inc®) y como control un suero positivo (Allied Monitor, Inc®), las lecturas
se realizaron a las 24 y 48 horas.
Asimismo, se realizó el diagnóstico molecular mediante una PCR anidada (nPCR) para la identificación
del sitio de Inserción 900 (IS900) utilizando ADN obtenido a partir de muestras de excremento.
Primeramente se realizó la concentración celular a partir de materia fecal, se utilizó la técnica descrita por
Garrido et al. (2000), donde se tomaron 2 g de heces y se disolvieron en 45 ml. de un detergente de
amonio cuaternario, el cloruro de N-cetilpiridinio (HCP) a l 7.6%. La lisis celular se realizó con el método
de enfriamiento-calentamiento con nitrógeno a -80º C y calor seco a 100°C, posteriormente se realizó la
extracción de ADN agregando 450 μL de isotiocianato de guanidina (5M) y 250 μL de acetato de amonio
(7.5 M), se colocó en hielo durante 15 min. Las muestras se transfirieron a microtubos y se les adicionó
500 μL de cloroformo-alcohol isoamílico (24:1), se centrifugó durante 5 min a 14 000 rpm, el
sobrenadante fue transferido a otro tubo Eppendorf y se repitió una vez más, a la fase acuosa obtenida
se le agregaron 450 μL de isopropanol y se colocaron a –20°C durante toda la noche. Al día siguiente, se
centrifugaron durante 15 min a 14 000 rpm, se realizaran dos lavados con 1 mL de etanol a 70% y el ADN
se dejó secando a temperatura ambiente para ser reconstituido al día siguiente con 50 μL de agua miliQ.
Para la identificación del IS900 de Map, se utilizaron los iniciadores descritos por Erume et al. (2001) ;
ptb1 (5’ -tgatctggacaatgacggttacgga- 3’) y ptb4 (5’-cgcggcacggctcttgtt- 3’) con los que se obtuvo un
producto de amplificación de 563 pb; para la segunda reacción de PCR se usaron los iniciadores ptb2 (5’
-gccgcgctgctggagttaa- 3’) y ptb3 (5’ -agcgtctttggcgtcggtcttg- 3’), con los que se obtuvo un producto de
amplificación de 210 pb. Los productos de amplificación se visualizaron en geles de agarosa al 2%
teñidos con bromuro de etidio.
Para el diagnóstico de C. pseudotuberculosis, se realizó aislamiento bacteriológico a partir del exudado
purulento obtenido de los abscesos. Este exudado se recolectó previa asepsia de la piel y en el caso de
los abscesos inmaduros o profundos se hizo una aspiración con aguja. Las muestras se mandaron en
medio de transporte BBL Culture Swab® cuidando la cadena fría. Los hisopos fueron sembrados en agar
sangre e incubados en aerobiosis a 37 °C durante 48 a 72 h. La caracterización de las colonias se realizó
de acuerdo al tamaño, pigmento, presencia de hemolisis y con la técnica de Gram.
De cada aislamiento identificado como bacilos Gram positivos con una organización en las colonias en
forma de “letras chinas”, se realizaron pruebas bioquímicas como glucosa, sucrosa, reducción de
nitratos, urea, catalasa y la prueba de hemólisis sinérgica frente a Rhodococcus equi (prueba de CAMP).
En cuanto a la identificación molecular, se llevó a cabo la PCR convencional a partir de colonias puras de
C. pseudotuberculosis para identificar el gen pld (gen de la fosfolipasa D) con los siguientes iniciadores:
PLD-F (5´-ataagcgtaagcagggagca-3´) y PLD-R2 (5´-tcagcggtgattgtcttcca-3´) descritos por Pacheco, et
al. (2007), obteniendo un producto de amplificación de 203 pb. El producto de la PCR se visualizó en
geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio. Se decidió implementar un ELISA indirecto con
base en Nassar et al. (2013) para la detección de anticuerpos contra C. pseudotuberculosis y de esta
manera descartar la presentación visceral de la enfermedad y confirmar la presencia de LC en cabras
con abscesos fistulizados. Para la estandarización del ELISA, se utilizaron 60 sueros de cabras positivas
al aislamiento bacteriológico de C. pseudotuberculosis y confirmados por PCR.
178
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS
Se aisló C. pseudotuberculosis del 100% de las cabras muestreadas a partir de abscesos cutáneos
(n=61). A la microscopía, se observaron bacilos Gram positivos que presentaban hemólisis sinérgica con
R. equi. La totalidad de éstos aislados fue positivo a la PCR para la identificación del gen pld.
El grupo conformado por 13 animales con abscesos fistulizados fue positivo al ELISA indirecto para
detectar anticuerpos contra C. pseudotuberculosis. La sensibilidad de este ensayo fue del 80% y la
especificidad del 82.86%, los valores se calcularon con el software Stata 7.0®.
Diagnosticado C. pseudotuberculosis por aislamiento, ELISA y PCR en 74/100 cabras, solamente dos
animales resultaron positivos a paratuberculosis en el ELISA indirecto con el kit de IDEXX
Paratuberculosis Screening Ab ® y uno en la IDGA.
Por lo que se concluye que los resultados del ELISA y la IDGA no fueron afectados por la presencia de
los anticuerpos circulantes en respuesta a la infección por C. pseudotuberculosis.
En cambio, la PCR anidada IS900 detectó 20 animales positivos a M. paratuberculosis previamente
diagnosticados con linfadenitis caseosa (n=74); esta técnica molecular permitió detectar en menor tiempo
a mayor cantidad de animales que estaban eliminando al bacilo de Map, aun cuando habían resultado
negativos a las pruebas serológicas.
El hato considerado negativo de acuerdo a la historia clínica, resultaron serológicamente negativas a Map
y C. pseudotuberculosis, lo cual fue confirmado por PCR donde también se tuvieron resultados negativos.
El ELISA e IDGA tienen la ventaja de poder procesar un gran número de muestras simultáneamente y
conocer el estado sanitario de un rebaño en un lapso menor de tiempo, sin embargo una vez detectada la
presencia de paratuberculosis en un hato, es importante realizar el diagnóstico confirmatorio con una
prueba más sensible, como la PCR-anidada y de esta manera, identificar con mayor eficacia a las cabras
que no presenten anticuerpos detectables a las pruebas serológicas.
REFERENCIAS
J. M. Garrido, N. Cortabarria, J. A. Oguiza, G. Aduriz, R. A. Juste. Use of a PCR method on fecal samples
for diagnosis of sheep paratuberculosis. Vet Microbiol. 2000 December 20; 77(3-4): 379–386.
Erume J, Spergser J, Rosengarten R. Rapid detection of Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis
from cattle and zoo animals by Nested PCR . African Health Sciences. Vol 1 No 2 December 2001.
Nassar, A.F.C., Miyashiro, S., Gregori, F., Piatti, R.M., Daniel, G.T., Gregory, Ln.,Standardization of an
enzyme -linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of antibodies anti-Corynebacterium
pseudotuberculosis in sheep., Small Ruminant Research (2013),
Pacheco G. Luis, Roberta R. Pena, Thiago L. P. Castro, Fernanda A. Dorella, Robson C. Bahia, Renato
Carminati, Marcílio N. L. Frota, Sérgio C. Oliveira, Roberto Meyer, Francisco S. F. Alves, Anderson
Miyoshi, Vasco Azevedo, “Multiplex PCR assay for identification of Corynebacterium pseudotuberculos is
from pure cultures and for rapid detection of this pathogen in clinical samples”. Journal of Medical
Microbiology (2007), 56, 480–486.
179
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
INFECCIÓN DE BRUCELLA ABORTUS EN BECERRAS NACIDAS DE HATOS POSITIVOS CON
BRUCELOSIS.
INFECCION OF BRUCELLA ABORTUS CALVES BORN FROM HERD POSITIVES WITH BRUCELOSIS.
*Fernández TAI 1, Herrera LE 2, Díaz AE 2, Suárez GF 1, Palomares REG 2.
1
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. UNAM 2 .CENID-Microbiología Animal, INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La brucelosis bovina es una enfermedad infectocontagiosa del género Brucella abortus, la cual es de
gran importancia a nivel mundial, en México es considerada endémica, ésta enfermedad produce
grandes pérdidas económicas, principalmente por los abortos ocasionados en el último tercio de la
gestación, la repercusión en la producción láctea, con una disminución considerable del hato. En México
se encuentra difundida en todos los estados y únicamente la parte norte del estado de Sonora se
encuentra libre de la enfermedad. El riesgo de transmisión de la brucelosis en bovinos, está determinado
por el número de abortos y partos de animales infectados, que ocurren dentro del hato. Generalmente, en
los bovinos se transmite de forma horizontal, principalmente por vía oral, debido a que lamen las
secreciones vaginales y desechos de abortos de animales infectados (OIE, 2008). En la actualidad, existe
poca información de becerras nacidas de vacas infectadas con brucelosis, además se desconoce, si
animales nacidos de hatos infectados provenientes de vacas negativas, seroconviertan a la enfermedad
en alguna etapa de su crecimiento, mostrándose como latentes antes de su primera gestación, momento
en el cual se desencadenará la infección y por lo tanto su diseminación en el hato será ineludible,
aumentando la probabilidad de infectar animales que se encuentren sanos a su alrededor. Durante la
infección producida por B. abortus se desencadena principalmente una inmunidad innata y adaptativa,
donde las principales células inmunes que participan son los linfocitos T CD4+ de la respuesta inmune
Th1; esta respuesta, promueve la expansión clonal de células T y así contribuye con el control de la
multiplicación de la bacteria dentro de los macrófagos. Al mismo tiempo y en menor magnitud, la bacteria
también ocasiona una respuesta inmune humoral (Golding et al., 2001), esta última respuesta es de gran
importancia porque permite que el diagnóstico se realice por medio de pruebas serológicas (OIE, 2008).
Por lo tanto es importante conocer y evaluar la transmisión de Brucella abortus en becerras, desde el
nacimiento, hasta su parto y/o aborto, con la finalidad de que no representen un riesgo de infección en el
hato y sólo se conserven animales libres a brucelosis, para que sean consideradas como futuros
reemplazos.
OBJETIVO
Determinar la infección de Brucella abortus, en becerras nacidas de vacas positivas y vacas negativas,
provenientes de hatos infectados con brucelosis.
MATERIAL Y METODOS
El estudio se realizó en 3 tipos de unidades de producción UP (grupo 1,2 y 3), con antecedentes de un
20% de prevalencia a brucelosis bovina. Se trabajó con un total de 192 becerras nacidas de 188 vacas
con 4 partos gemelares, de las cuales 46 becerras son hijas de 44 vacas positivas y 146 corresponden a
hijas de 144 vacas negativas. El grupo 1, se trabajaron hatos de lechería familiar, donde están
localizados en el municipio de Juventino Rosas, en el estado de Guanajuato, las becerras son vacunadas
con la S19 una sola vez en su vida, a los 4 meses de edad, el total de becerras correspondientes a este
grupo es de 94; de las cuales, 37 son hijas de 36 vacas positivas (1 parto gemelar) y 57 becerras son
hijas de 55 vacas negativas (2 partos gemelares). En el grupo 2, se trabajó con un hato semi-intensivo en
Puerta de San German, municipio de León, en el estado de Guanajuato, en éste hato se vacuna a todas
las becerras de 4 meses de edad con la cepa RB51, como única vacunación. El total de becerras en el
grupo 2 es de 28; en donde 2 becerras son hijas de 1 vaca positiva y 26 becerras son hijas de 26 vacas
180
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
negativas. Y por último, se trabajó con el grupo 3, un hato intensivo de la comunidad del Colorado, en el
estado de Querétaro, esta unidad de producción utiliza la combinación de las 2 vacunas; a los 4 meses
de edad, se vacuna con la S19 y al siguiente mes, una revacunación con RB51.En éste hato se
trabajaron 7 becerras hijas de 7 vacas positivas y 63 becerras hijas de 63 vacas negativas, con un total
de 70 becerras en el estudio. Del total 192 becerras nacidas de las 3 UP, se separaron 2 categorías, la
primera constituida de 45 becerras hijas de 44 madres positivas y la segunda, de 147 becerras hijas de
144 madres negativas a brucelosis. A las 2 categorías de las becerras se les dio un seguimiento a partir
del 1° mes de nacida hasta el 9°mes consecutivamente y posteriormente a los 12°, 15°, 18°, 21°, 24°
meses de edad, al parto y/o aborto, obteniendo un total de 14 muestreos, donde se les realizó la prueba
de tarjeta al 8% (PT), prueba de Rivanol (PR) e Inmunodifusión Radial (IDR), tomando como becerras
infectadas con anticuerpos a IDR en los grupos 1, 3 y antes de la vacunación en el grupo 2, en becerras
infectadas después de la vacunación con anticuerpos a PT y PR del grupo 2. Todos los resultados
positivos son considerados antes y después de la vacunación. Los resultados se analizarán
estadísticamente con Ji 2.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
De las 192 becerras durante estudio, se obtuvo un total del 30% (57/192) de animales serológicamente
positivos a brucelosis, de las cuales las hijas de madres positivas solo el 52% (24/46) se manifestó como
positivas, mientras que de las 146 becerras hijas de madres negativas, el 23% (33/146) de las becerras,
se presentaron como infectadas. Grafica1. Al total de becerras dentro de los 14 muestreos se les realizó
PT al 8%, PR e IDR y se consideraron animales infectados de acuerdo a las características de cada
grupo. Dentro de las becerras hijas de madres positivas y las becerras hijas de madres negativas, los
meses más destacados de infección por brucelosis fue al nacimiento, al parto y/o aborto, sin embargo,
durante el seguimiento de éste estudio, el resultado de infección se mostró variable en todas las edades.
De las192 becerras, el 10.4% (20/192) abortaron, donde el 1% (2/192) son becerras infectadas hijas de
vacas infectadas correspondientes al grupo 1.
Los datos que se obtuvieron en este estudio, demostraron la infección de brucelosis, tanto en becerras
hijas de vacas positivas, como en becerras hijas de vacas negativas, dentro de un periodo de 2 años, con
14 muestreos para cada becerra, por medio de PT y PR de acuerdo a lo establecido en la norma (NOM041-ZOO-1995), donde la PT, detectó anticuerpos IgM e IgG específicos, pero por ser una prueba
sensible origina resultados falsos positivos cuando se trata de una vacunación con S19, ya que interfiere
con el diagnóstico, por lo que se confirmó con la PR, la cual precipita principalmente las IgM, quedando
en solución solo las IgG específicas a una infección por brucelosis bovina , lo que permite la
diferenciación entre los animales vacunados, de los infectados; como es en el caso del grupo 1 y 3; en
181
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
estos grupos de este estudio se confirmaron animales verdaderamente infectados, después de la
vacunación, con la prueba de IDR con Hapteno nativo (González et al., 2006), el cual es un antígeno que
produce anticuerpos contra la cepa de campo de B. abortus, por lo que diferencia animales infectados, de
animales vacunados con S19, en este estudio de acuerdo a las características de cada grupo, el 5%
(9/192) de las becerras se confirmaron con esta prueba, en donde el 11% (5/46) corresponde al hijas de
madres positivas y el 3% (4/146) a hijas de madres negativas, sin embargo, también se evaluó a las
becerras del 0 – 120 días de edad, donde se consideraron positivas, presentando anticuerpos a PT y PR,
arrojando que el 25% (48/192) del total de las becerras antes de la vacunación de cada uno de los
grupos, presentaban anticuerpos de infección; de las cuales, el 41% (19/46) de las becerras, provienen
de madres positivas y el 20% (29/146) de madres negativas. Un estudio por Carrizosa et al (2010)
reportó un 9.1% (2/22) de becerras positivas hijas de vacas positivas a IDR, en la primer semana de vida
y a los 3 meses, antes de la vacunación con S19 y un 18.2% (4/22) becerras positivas, hijas de vacas
negativas a IDR hasta los 3 meses de edad, lo que demuestra que encontramos animales infectados,
antes de la vacunación. En comparación con este estudio, nosotros obtuvimos becerras con anticuerpos
de infección a diferentes edades, con un 30% (57/192) cómo animales infectados en general, de las
cuales el porcentaje fue mayor en las becerras infectadas, hijas de madres positivas, que de las hijas de
madres negativas, no obstante, no es de menor importancia, ya que por ser una bacteria intracelular
(Golding et al., 2006), es necesario evaluar el estatus a nivel hato, ya que no siempre en animales
provenientes de madres positivas, van a seroconvertir en su edad reproductiva, como lo es en este
estudio, donde sólo el 52% (24/46) se manifestó como infectadas, siendo hijas de madres positivas,
mientras que, en becerras hijas provenientes de madres negativas el 23% (33/146), se consideraron
animales infectados, que aunque es en menor grado, el riesgo de infección es el mismo y seroconvierten
como animales infectados durante su crecimiento o etapa reproductiva.
CONCLUSIÓN
Se concluye en el estudio que existe un porcentaje representativo de seroconversión de las becerras,
incluso antes de la vacunación, así como también, el momento de infección, ya sean hijas de madres
positivas y de madres negativas. Estableciendo que también el calostro, es un riesgo de transmisión por
brucelosis bovina siendo más alto en hijas de madres positivas, que en las hijas de madres negativas.
FINANCIAMIENTO
Proyecto parcialmente financiado por Fundación Guanajuato Produce A.C: FGP564-11
“TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA EN ASPECTOS SANITARIOS EN LECHERÍA FAMILIAR EN EL
ESTADO DE GUANAJUATO”
REFERENCIAS
Manual de la OIE sobre animales terrestres. Capítulo 2.4.3. Brucelosis bovina (2008).
Golding B., Scott DE., Scharf O., Huang L.-Y., Zaitseva M., Laphamb, Ch., Eller N Goldingb H.
Immunity and protection against Brucella abortus. Review. Microbes and Infection, 3:43−48 (2001).
Carrisoza UI., Medina CM., Palomares REG., Díaz AE. Transmisión de Brucella abortus en becerras
menores de tres meses diagnosticadas por medio de las pruebas de tarjeta e inmunodifusión radial en
dos hatos lecheros del estado de Querétaro. Vet. Méx.11-18: (2014).
Norma Oficial Mexicana NOM-041-ZOO-1995, Campaña Nacional contra la Brucelosis en los Animales.
González ME., Hernández AL., Díaz AE. Prueba de inmunodifusión radial con hapteno nativo para
diferenciar bovinos con revacunaciones repetidas con la cepa S19 de Brucella abortus. Téc Pecu Méx.
44(2):269-276 (2006).
182
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mecanismos de infección y enfermedad
ANÁLISIS DE VARIABLES MORFOLÓGICAS DE PAVOS DE TRASPATIO MEXICANOS (MELEAGRIS
GALLOPAVO GALLOPAVO).
ANALYSIS OF MORPHOLOGICAL VARIABLES OF MEXICAN BACKYARD TURKEYS (MELEAGRIS
GALLOPAVO GALLOPAVO).
Ríos UA*1, Román PSI1, Vélez IA1, Cabrera TE1, Cantú CA1, De la Cruz CL1, Durán AM2, Maldonado
JJA1, Martínez SFE1, Martínez VG1, Ruiz LFJ1, Bagnato A3 y Vega MVE1
1Instituto
Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP); 2Facultad de Estudios
Superiores Cuautitlán, UNAM; 3Università degli Studi di Milano.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La conservación y mejoramiento de especies autóctonas de animales requiere su caracterización
morfológica. Sin lugar a dudas, el pavo doméstico mexicano (Meleagris gallopavo gallopavo) es un
importante reservorio de genes útiles y posee características adaptativas importantes que le permiten
habitar y desarrollarse prácticamente en todas las zonas agroecológicas de nuestro país. En la última
década, diversos estudios han tenido como objetivo la determinación de la diversidad morfológica de
pavos de traspatio mexicanos provenientes de algunas regiones específicas de nuestro país, como la
Costa de Oaxaca, el municipio de Maní en Yucatán, centro-norte de Chiapas, el estado de Michoacán, y
el municipio de Kopala en Puebla. Sin embargo, es necesaria la evaluación de pavos provenientes de un
mayor número de regiones agroecológicas y sistemas de producción.
OBJETIVO.
El objetivo del presente estudio fue evaluar características morfológicas, cuantitativas y cualitativas, de
pavos de traspatio provenientes de 24 estados de la República Mexicana, así como estimar las
correlaciones fenotípicas entre las variables morfológicas cuantitativas.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Se analizó la información morfológica de 248 pavos de traspatio resultante de un muestreo por
oportunidad que involucró 126 unidades rurales de producción ubicadas en 75 municipios de 24 estados
de la República Mexicana: Baja California Sur, Campeche, Chiapas, Colima, Chihuahua, Coahuila,
Distrito Federal, Durango, Estado de México, Guanajuato, Hidalgo, Jalisco, Morelos, Nayarit, Nuevo
León, Oaxaca, Puebla, Querétaro, Quintana Roo, Tabasco, Tamaulipas, Tlaxcala, Veracruz y Zacatecas.
La información se recolectó de 2013 a 2014 a partir de pavos de ambos sexos (138 machos y 110
hembras), tanto jóvenes como adultos. Las variables cuantitativas evaluadas fueron: longitud del cuerpo,
envergadura, circunferencia de la pechuga, longitud del tarso, peso vivo corporal, robustez y solidez,
mientras que las cualitativas fueron: color del plumaje, color de la piel y color del tarso. Las mediciones
de las variables cuantitativas se realizaron siguiendo los Lineamientos para la Producción Animal y la
Salud de la Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura (FAO, 2012). Se
realizó un análisis de varianza para cada característica cuantitativa con el procedimiento GLM de SAS.
En todos los casos, el modelo estadístico incluyó sexo, estado y municipio anidado dentro de estado. Las
diferencias entre las medias de machos y hembras se estimaron con la opción PDIFF del procedimiento
GLM. Adicionalmente, con el procedimiento CORR de SAS se estimaron los coeficientes de correlación
de Pearson para las variables longitud del cuerpo, envergadura, circunferencia de la pechuga, longitud
del tarso y peso corporal. Las correlaciones se estimaron para machos y hembras de manera
independiente, y para datos conjuntos de machos y hembras. Adicionalmente, se estimó el coeficiente de
regresión lineal del peso corporal sobre la circunferencia de la pechuga del ave, utilizando el
procedimiento REG de SAS. Este análisis también se hizo para machos y hembras de manera
independiente, y para datos conjuntos de machos y hembras. Las frecuencias de las categorías
correspondientes a cada característica cualitativa se calcularon con el procedimiento FREQ de SAS.
183
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
VI
Mejoramiento y recursos genéticos
Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los machos tuvieron mayor (P<0.001) longitud corporal (10.4 cm más), envergadura (11.4 cm más),
circunferencia de la pechuga (13.8 cm más), longitud de tarso (2.5 cm más), peso corporal (2.5 kg más)
robustez (9.0 puntos porcentuales más) y solidez (2.8 puntos porcentuales más) que las hembras. Peso
corporal y circunferencia de la pechuga estuvieron altamente correlacionados fenotípicamente (P<0.01)
en machos (r=0.74) y en hembras (r=0.71). En contraste, la longitud corporal no estuvo correlacionada
con envergadura y longitud del tarso en hembras, pero sí estuvo correlacionada con dichas variables en
machos, aunque el estimador de la correlación fue bajo. Los estimadores de las correlaciones fenotípicas
de peso corporal con longitud corporal (r=0.38), envergadura (r=0.30) y longitud del tarso (r=0.34) fueron
moderados en machos; en contraste, en hembras, los estimadores de las correlaciones fenotípicas de
peso corporal con longitud corporal (r=0.35) y longitud del tarso (r=0.34) fueron moderados, pero el
estimador de la correlación entre peso corporal y envergadura fue bajo (0.25). Cuando se analizó la
información de machos y hembras conjuntamente, todos los coeficientes de correlación fueron diferentes
de cero (P<0.0001) y positivos, lo que indica que si incrementa una variable, incrementan las otras. El
peso corporal mostró estar altamente correlacionado fenotípicamente con la circunferencia de la pechuga
(r=0.87), pero medianamente correlacionado con la longitud corporal, la longitud del tarso y la
envergadura. Los estimadores de las correlaciones fenotípicas de la longitud del cuerpo con la
envergadura y la longitud del tarso fueron bajas (r=0.42 y 0.49, respectivamente). En machos, el peso
corporal aumentó 143 g por cada centímetro que aumentó la circunferencia de la pechuga, mientras que
en hembras aumentó 113 g por cada centímetro que aumentó la circunferencia de la pechuga. El análisis
de regresión de los datos agrupados mostró que el peso corporal aumentó 159 g por cada centímetro que
aumentó la circunferencia de la pechuga. Las ecuaciones de regresión del peso corporal (PESO) sobre la
circunferencia de la pechuga (CIRPE) para machos, hembras y datos agrupados de machos y hembras
fueron:
PESO♂= -2.1108 + (0.1427 x CIRPE)
PESO♀= -1.3874 + (0.1130 x CIRPE)
PESO♂ y ♀= -3.1485 + (0.1593 x CIRPE)
En relación con el color del plumaje, el presente estudio reveló la existencia de 13 fenotipos, indicando
una amplia variación fenotípica en dicha característica. Se encontraron cuatro colores básicos: blanco,
café, gris y negro, de los cuales el más frecuente fue el color negro (30.88%), seguido del color blanco
(14.71%), mientras que los colores café y gris ocuparon el tercer y cuarto lugar, respectivamente.
Adicionalmente, se encontraron nueve combinaciones diferentes de estos cuatro colores básicos; la
combinación de colores más frecuente fue “negro con blanco” (18.14%), seguida de las combinaciones
“negro con blanco y café” (10.29%), “blanco con café” (5.88%) y “negro con blanco y gris” (4.9%). En el
caso de las combinaciones de colores encontradas en el plumaje, el orden de los colores proporcionado
en el presente estudio es irrelevante y no representa la predominancia de algún color en particular. Se
observaron cinco colores diferentes en la piel de los pavos de traspatio. Los pavos con piel de color
blanco fueron los más predominantes (81%), seguidos por los pavos con piel de color amarillo (11%) y
rosa (3.9%). Los colores más predominantes observados en los tarsos de los pavos fueron: café
(31.37%), blanco (26.47%) y negro (20.57%), aunque también se observaron colores como rosa, rojo,
morado, verde, amarillo y gris, identificando nueve colores en total.
CONCLUSIONES.
Las variables estudiadas mostraron que: 1) el pavo de traspatio mexicano presenta una diferenciación
morfológica importante entre machos y hembras (dimorfismo sexual), 2) la circunferencia de la pechuga y
el peso corporal estuvieron altamente correlacionados tanto en machos como en hembras; sin embargo,
para otras características la magnitud del estimador de la correlación fenotípica dependió del sexo, 3)
pavos con plumaje de color negro y “negro con blanco” fueron los más predominantes, 4) la mayoría de
los pavos tuvieron piel blanca, y 5) el color café fue el más común en sus patas.
184
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
AGRADECIMIENTOS.
Los autores del presente trabajo expresan su agradecimiento al INIFAP por el financiamiento del proyecto
“Identificación de los recursos genéticos pecuarios para su evaluación, conservación y utilización
sustentable en México. Aves y Cerdos”, y al “Programa de Cooperación Científica y Tecnológica MéxicoItalia 2014” por el apoyo al proyecto “La variabilidad genética en las razas avícolas autóctonas italianas y
mexicanas: genética, el análisis filogenético y la interacción genotipo-ambiente”, así como a los M.C.
Lorenzo Granados Zurita, Sara Olazarán Jenkins y Alfredo Arroyo Lara, al IAZ. Héctor Velázquez Ocaña
y a Maribel Torres Niño por su colaboración en la localización de las unidades de producción de pavos de
traspatio, la medición morfológica de los animales y la captura de datos en campo.
185
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
MORFOMETRÍA DEL CERDO DE TRASPATIO EN ÁREAS RURALES DE MÉXICO.
MORPHOMETRY OF NATIVE PIGS IN RURAL AREAS OF MEXICO.
Martínez VG1*, Román PSI3, Vélez IA3, Cabrera TE4, Cantú CA5, De la Cruz CL6, Durán AM7, Maldonado
JJA8, Martínez SFE2, Ríos UA9, Vega MVE9 y Ruiz LFJ3.
1CIRPAC-
INIFAP; 2CIRPAS – INIFAP; 3CENID-Fisiología; 4CIRSE – INIFAP; 5CIRNE – INIFAP; 6CIRCE
– INIFAP; 7FESC – UNAM; 8CIRNOC – INIFAP; 9CIRGOC - INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En la porcicultura rural de México o porcicultura de traspatio se utilizan cerdos que se mantienen en
sistemas de manejo de bajos insumos en los que se aprovecha la rusticidad y los bajos requerimientos
nutricionales que caracterizan a estas poblaciones. En las comunidades rurales en las que estos
animales se desarrollan su alimentación consiste, primordialmente, de raíces, tubérculos, frutas,
subproductos agrícolas y desperdicios de cocina. Cabe señalar que la porcicultura de traspatio en México
es una actividad importante que contribuye a la economía familiar y al consumo de proteína animal de los
habitantes de comunidades rurales marginadas. Adicionalmente, la importancia de las poblaciones
locales de cerdos reside en que algunas de éstas pueden ser reservorios de variación genética útil como
fuente de nuevos alelos para las poblaciones comerciales de cerdos (Lémus-Flores et al., 2005). De lo
anterior se reconoce la importancia de caracterizar fenotípica y genéticamente a las poblaciones locales
de cerdos considerándose que entre las distintas alternativas que existen para la caracterización, y que
son complementarias, la caracterización morfométrica es un paso básico para el uso eficiente de estos
recursos genéticos.
OBJETIVO.
El presente estudio se planteó como una contribución a la caracterización morfométrica, cualitativa y
cuantitativa de tres poblaciones de cerdos de traspatio ubicados en comunidades rurales en México.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El estudio se realizó durante el año 2013 en 18 estados de la república mexicana. La información se
obtuvo mediante 241 encuestas aplicadas en comunidades rurales a propietarios de cerdos de traspatio.
El mismo día de la entrevista los cerdos se pesaron, se midieron y se fotografiaron generándose así un
respaldo documental mediante el cual cada animal se asignó a una de tres poblaciones consideradas en
el estudio y definidas como Puerco Pelón Mexicano (PPM), Puerco Cuino (PCU) y Puerco Cruza
Indefinida (PCI). El tamaño de muestra se determinó con la fórmula n=(z/m)2 p(1-p); z es el valor de z
(1.64 para 90% de nivel de confianza), m es el margen de error (0.05 = ± 5%, y p es el valor estimado de
la proporción de la muestra que responderán a la encuesta en el mismo sentido, que para este caso se
considero de 0.45. Las variables analizadas fueron: peso corporal en kg (Peco); longitud de la cabeza en
cm (Loca); longitud del cuerpo en cm (Locu); circunferencia del pecho en cm (Circu); altura a la cruz en
cm (Acruz); ancho de la pelvis en cm (Anpe); número de pezones funcionales (Nupe); pelo denso o
escaso (Cape); presencia o ausencia de colmillos (Colm); hocico corto o largo (Hoc); orejas erguidas o no
erguidas (Posio) y temperamento tranquilo o inquieto (Tem). Adicionalmente se calcularon los índices
zoométricos siguientes: índice de proporcionalidad (IP) = (Acruz *100)/Locu; índice corporal (IC) = (Locu
*100)/Acruz e índice de peso relativo (IPR) = (Peco *100)/Acruz.
La información se analizó con el método de Cuadrados Mínimos Generales utilizando los procedimientos
GLM y GENMOD del paquete estadístico SAS. El procedimiento GLM se utilizó para el análisis de las
variables bajo el supuesto de distribución probabilística normal (Peco, Loca, Locu, Circu, Acruz, Anpe,
Nupe, IP, IC e IPR) y el procedimiento GENMOD para el análisis de las variables bajo el supuesto de
distribución probabilística binomial (Cape, Colm, Hoc, Posio y Tem). Para interpretar las medias de
186
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
cuadrados mínimos (MCM) estimadas con el procedimiento GENMOD se realizó la transformación
siguiente: e(MCM) / ((1+e)MCM)(7). Para todas las variables los modelos finales incluyeron los efectos fijos
de estado (18 niveles) y población (3 niveles).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
El efecto de estado fue importante (P < 0.01) para todas las variables analizadas, mientras que población
influyó significativamente (P < 0.05) sobre Peco, Locu, Circu, Acruz, Cape, Colm, Tem IP, IC e IPR.
Variabilidad morfométrica. Los Coeficientes de Variación (CVs) estimados en el presente estudio señalan
a Peco y Anpe como las características con menor y mayor variación (CVs de 18.8 y 27.8 %,
respectivamente). Coeficientes de variación con valores intermedios fueron estimados para Loca (24.9
%), Circu (23.5 %), Locu (23.3 %), Nupe (22.8 %) y Acruz (21.2 %). En contraste con estos resultados,
diversos autores han publicado CVs más bajos que los estimados en el presente trabajo. Así, un estudio
en que se evaluó la morfometría de una población de cerdos criollos cuinos en Nayarit, México,
estableció CVs de 7.56, 8.46 y 11.79 % para número de pezones, perímetro torácico y longitud corporal
(Lémus-Flores et al., 2005). En otra investigación sobre la morfología del cerdo criollo realizada en
Venezuela se encontraron CVs de 7.62, 9.26, 9.78 y 10.9 % para las variables alzada a la cruz, ancho de
grupa, perímetro torácico y longitud de la cabeza (Hurtado et al., 2005). De manera similar, un estudio
realizado en Colombia sobre caracterización zoométrica de cerdos criollos estimó CVs de 10.64, 11.84 y
12.76 % para alzada a la cruz, perímetro torácico y ancho de la grupa, respectivamente (Arredondo et al.,
2011). Coincidiendo con lo anterior, a partir de caracterizaciones zoométricas realizadas en poblaciones
de cerdos de la raza local Pampa Rocha en Uruguay, se estimaron CVs de 5, 6, 10, 11 y 19 % para
alzada a la cruz, longitud corporal, longitud de la cabeza, anchura de la grupa y peso vivo (Llambi et al.,
2011), y CVs de 5.90 y 6.92 % en machos y hembras para alzada a la cruz; de 11.90 y 11.06 % en
machos y hembras para ancho de grupa, y de 8.88 y 25.36 % en machos y hembras para peso vivo
(Castro et al., 2012). Los coeficientes de variación del presente trabajo señalan que, en general, la
población evaluada presentó una mayor variabilidad morfológica en relación a otras poblaciones de
cerdos criollos de América latina (Lémus-Flores et al., 2005; Arredondo et al., 2011; Llambi et al., 2011;
Castro et al., 2012). Esta variabilidad morfológica puede atribuirse a diferencias en los sistemas de
manejo y ambientes en los que se desarrollaron las subpoblaciones, así como a la diversidad genética
existente entre las mismas.
En relación a los índices zoométricos estimados en el presente estudio, la menor dispersión de los datos
se observó en el índice de proporcionalidad (CV = 13.0 %), lo cual sugiere que las poblaciones evaluadas
presentaron un patrón racial homogéneo. Por otro lado, los CVs para índice de peso relativo (45.8 %) e
índice corporal (14.6 %) sugieren poblaciones heterogéneas en cuanto la orientación productiva de los
animales. Valores menores de CVs fueron estimados en una evaluación de cerdos criollos realizada en
Venezuela con valores de 7.04 y 7.74 % para Índice de Proporcionalidad e Índice Corporal,
respectivamente (Hurtado, González y Vecchionacce, 2005).
Variables cuantitativas.- Las MMC estimadas para las variables Peco, Locu, Circu y Acruz mostraron que,
en general, las poblaciones PPM y PCI son similares en morfometría, siendo diferentes ambas de la
población PCU. Los resultados también indican que la población PCU es de menor peso y talla
comparada con las poblaciones PPM y PCI (Peco de 48.06±6.17 a, 35.93±3.04b y 61.11±7.42a kg, Acruz
de 56.88±2.45ab, 51.26±1.36a y 60.32±3.31b cm y Circu de 80.55±3.98ab, 71.72±2.20a y 93.23±5.37b cm
para PPM, PCU y PCI, respectivamente). Promedios similares a los de PPM y PCU del presente estudio
se estimaron para cerdos autóctonos en comunidades indígenas de Chiapas, México, con medias de
52.63±4.81 cm, 46.57±13.35 kg y 86.74±10.61 cm para alzada a la cruz, peso vivo y perímetro torácico,
respectivamente (Galdámez y Perezgrovas, 2007). Asimismo, estudios realizados en dos poblaciones de
cerdos criollos determinaron promedios de 59.51±4.71 y 56.41±6.0 cm para alzada a la cruz, 17.07±1.57
y 17.29±2.21 cm para ancho de la grupa y 84.85±8.30 y 85.66±10.14 cm para perímetro torácico de
cerdos criollos mantenidos en sistemas de producción de bajos insumos en Venezuela y Colombia
(Hurtado, González y Vecchionacce, 2005; Arredondo et al., 2011). En contraste a los promedios para
PPM y PCU del presente estudio, valores más altos han sido publicados para diferentes poblaciones de
cerdos criollos. Así, estudios sobre caracterizaciones zoométricas con poblaciones locales de cerdos de
la raza Pampa Rocha en Uruguay reportaron promedios de 72.7±3.55, 74.97±5.18 y 82.33±4.85 cm para
187
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
alzada a la cruz, de 27.2±2.89, 26.97±2.98 y 25.66±3.05 cm para ancho de la grupa, de 103.68±6.69,
102.02±6.95 y 99±9.16 cm para longitud corporal y de 137±26.2, 148.6±37.69 y 173.66±15.41 para peso
vivo (Llambi et al., 2011; Castro et al., 2012). Por otro lado, un estudio realizado en Nayarit, México sobre
Cerdos Criollos Cuinos reportó valores menores que los de PCU para altura a la cruz (47.60±4.14 cm) y
largo del cuerpo (62.25±7.69 cm), pero mayores para perímetro torácico (87.28±7.39 cm) y peso vivo
(43.84±10.55 kg) (Lémus-Flores et al., 2005).
Variables cualitativas.- Las MMC estimadas para las variables Cape, Colm y Tem señalaron a PCU como
la población con mayor densidad de pelo, mayor presencia de colmillos y menor porcentaje de animales
con temperamento tranquilo, mostrando promedios de 71±19, 70±14 y 56±12 % para Cape, Colm y Tem,
respectivamente. Cabe mencionar que la presencia o ausencia de pelo y el tipo de temperamento son
características cualitativas que se han evaluado en diferentes poblaciones de cerdos criollos. Así, en un
estudio sobre el cerdo criollo del Chocó en Colombia se encontró que el 85.29 % de la población
muestreada tenía pelaje (Arredondo et al., 2011). Por otro lado, un estudio realizado con cerdos
autóctonos de comunidades indígenas en Chiapas, México, encontró que estos animales mostraron el
cuerpo cubierto de grandes cerdas gruesas más abundantes en la parte superior del cuello y en la región
de la cruz (Galdamés y Perezgrovas, 2007).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
En general, la información revisada sobre variabilidad morfométrica señala mayor variabilidad de las tres
poblaciones evaluadas en relación a otras poblaciones de cerdos criollos de América latina. La
variabilidad morfométrica detectada puede atribuirse a diferencias en los sistemas de manejo y
ambientes en los que se desarrollaron las tres poblaciones y a la diversidad genética entre las mismas.
Las poblaciones PPM y PCI son similares en morfometría siendo diferentes ambas a la población PCU.
Comparada con las poblaciones PPM y PCI, la población PCU es de menor peso, menor talla, y
temperamento más inquieto.
FINANCIAMIENTO
Proyecto FISCAL 2013: 10551832012.
188
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ESTIMACIÓN DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA MEDIANTE MARCADORES SNP EN BOVINO
CRIOLLO COREÑO (BOS TAURUS).
ESTIMATION OF GENETIC DIVERSITY THROUGH SNP MARKERS IN COREÑO CREOLE CATTLE
(BOS TAURUS).
Martínez RCP1*, MartínezVG2, Román PSI3, Cortes CM4, Guzmán RLF4, De la Torre SJF4, Palacios FJA2,
Bustamante GJJ2, Vega MVE5, Montaño BM3, Ríos UA5.
1CUCBA-
U d G; 2CIRPAC – INIFAP; 3CENID-Fisiología; 4CNRG – INIFAP; 5CIRGOC - INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El bovino Criollo mexicano es un recurso genético valioso por su rusticidad y capacidad de adaptación a
ecosistemas con escasa disponibilidad de alimento y condiciones ambientales difíciles. Este tipo de
ganado generalmente se asocia a poblaciones rurales de difícil acceso y bajos recursos económicos en
las cuales tiene un papel socioeconómico, ecológico y cultural importante. La rusticidad del bovino Criollo,
al igual que en otros animales, está dada por la selección natural y se define como el conjunto de
características heredables que le permiten superar las variaciones aleatorias y adversas del medio
ambiente, sin disminuir de forma significativa su capacidad productiva. La rusticidad es una adaptación
que se da a través de regulaciones biológicas y de comportamiento y que se refleja en la capacidad de
amortiguar una situación de déficit nutricional con las reservas corporales, la capacidad de recuperar
rápidamente el estado o condición corporal, la termorregulación para ajustarse a las variaciones
aleatorias del clima, la aptitud para la marcha en superficies con topografía accidentada, la capacidad de
obtener provecho de un territorio heterogéneo, demostrando un comportamiento adaptado a la
vegetación (selectividad, capacidad de ingestión y digestiva) y la resistencia a las enfermedades
infecciosas y parasitarias comunes en el medio (Villa, 2010).
Por otro lado, la diversidad genética se define como la variedad de alelos y genotipos presentes en una
población que se expresan en el fenotipo, fisiología y comportamiento diferenciado entre individuos y
poblaciones (Frankham et al., 2002). Los estudios moleculares de diversidad genética y estructura de
poblaciones de bóvidos se han basado principalmente en marcadores microsatélites. Éstos se
caracterizan por ser muy polimórficos y estar distribuidos por todo el genoma por lo que se han utilizado
ampliamente como marcadores genéticos en estudios de genética animal. Cabe señalar, sin embargo,
que actualmente hay otras tecnologías disponibles para la caracterización molecular de las poblaciones y
ésta ya no recae exclusivamente en la genotipación por microsatélites. Se pronostica que estas nuevas
herramientas sustituirán a los microsatélites en muchas aplicaciones. Entre las tecnologías recientes
más utilizadas están las plataformas de alta densidad que son secuencias ordenadas de SNP sobre un
soporte sólido y que hacen posible estimaciones más detalladas de la diversidad genética entre y dentro
de razas.
OBJETIVO.
Estimar la diversidad genética de tres poblaciones de bovino Criollo Coreño de Nayarit mediante
microarreglos de SNP de muy alta densidad.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Muestreo sanguíneo, extracción de ADN y genotipado. Los hatos criollos se ubicaron a través de
entrevistas con ganaderos originarios de municipios ubicados en la sierra de Nayarit. Con base en la
información obtenida se realizaron visitas a comunidades indígenas para tomar fotografías del ganado y
así verificar las características fenotípicas del mismo, de acuerdo al patrón racial de la Asociación de
Criadores de Ganado Criollo Mexicano A. C. Los municipios muestreados fueron El Nayar (EN), La Yesca
(LY) y Santiago Ixcuintla (SI) y en total se muestrearon 87 hembras y 6 machos (entre 15 y 20 ml de
189
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
sangre por animal). El proceso para la extracción del ADN se realizó en el Laboratorio de ADN y
Genómica del Centro Nacional de Recursos Genéticos (INIFAP-SAGARPA) ubicado en Tepatitlán de
Morelos, Jalisco.
De las 93 muestras procesadas se seleccionaron 47 alícuotas y se preparó una placa de dilución de ADN
a una concentración de 50 ng/μl. La placa contenía 15, 15 y 17 muestras tomadas en los municipios de
SI, EN y LY, respectivamente. Para la caracterización genotípica de los SNP se envió la placa a la
compañía GeneSeek Inc. (Lincon, NE, USA), para su análisis con el chip Illumina Bovine HD-777K.
Análisis Estadístico. Se utilizó el software Plink 1.07 (Purcell et al., 2007) para el manejo de las bases
de datos generadas las cuales se editaron con el software Microsoft Access®, quedando así disponibles
para el análisis estadístico con el software SAS. Como resultado del control de calidad realizado en Plink
1.07 quedaron disponibles 735,177 SNP (98.93% de los SNP disponibles en el chip) ubicados en los
cromosomas autosómicos, excluyéndose los marcadores ubicados en ADN mitocondrial y en los
cromosomas sexuales; adicionalmente, se eliminaron 1,248 SNP clasificados como no fundadores. A
partir de esta base de datos se realizaron análisis estadísticos con el procedimiento de Modelos Lineales
Generales del SAS estimándose heterocigosidad esperada (He), heterocigosidad observada (Ho) y
Frecuencia del Alelo Menor (MAF) para cada uno de los 29 cromosomas autosómicos en la población
total y la Coancestría Molecular para animales dentro de cada municipio y entre municipios.
Para calcular si los valores de He y Ho estimados en la población total muestreada se encontraban en
equilibrio Hardy-Weinberg, se utilizó la prueba estadística Chi Cuadrada de acuerdo a lo siguiente: χ 2gl =
Ʃ (o-e)2/e donde: χ2 = Chi cuadrada gl = grados de libertad, Ʃ = sumatoria, o = valor observado, e = valor
esperado.
Los valores para las coancestrías moleculares por pares (fMij) del presente estudio se estimaron mediante
un análisis de genoma completo basado en agrupamientos en los que se compararon pares de
individuos, lo que significó comparar pares de SNP entre cada una de las parejas. Con base en lo
anterior, se estimaron los valores de He poblacionales considerando que la heterocigosidad esperada en
una población de tamaño N es igual a 1-fM, en donde fM es el promedio de fMij (Toro et al., 2014).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Para el total de cromosomas los promedios fueron de 0.326, 0.322 y 0.246 para H e, Ho y MAF,
respectivamente. Los rangos estuvieron entre 0.2982 ± 0.0010 y 0.3477 ± 0.0011 para He, entre 0.2914 ±
0.0011 y 0.3402 ± 0.0012 para Ho y entre 0.2206 y 0.2653 para MAF. Los resultados muestran, en
general, que entre los 29 pares de cromosomas la mayor diversidad genética ocurrió en los cromosomas
18 y 25 y la menor en el cromosoma 13, con diferencias estadísticas significativas (P < 0.001) entre los
cromosomas mencionados para He, Ho y MAF.
Los resultados obtenidos mediante la prueba Chi cuadrada para verificar diferencias entre los promedios
de He y Ho indicaron que la población muestreada se encontraba en equilibrio Hardy-Weinberg (P<0.01).
Lo anterior de acuerdo a Falconer y MacKay (1996), quienes mencionan que la heterocigosidad es un
estimador que permite cuantificar la variación genética mediante la estimación de frecuencias de
heterocigotos en una población y que esta heterocigosidad puede ser expresada como heterocigosidad
observada o esperada, reconociéndose que estos valores (H e y Ho) no son significativamente diferentes
cuando la población se encuentra en equilibrio Hardy-Weinberg.
Las medias de cuadrados mínimos para las coancestrías poblacionales (Cuadro 1) fueron de 0.172,
0.146 y 0.063 para los municipios de LY, EN y SI, respectivamente, con diferencias estadísticas
(P<0.0001) entre la población EN y las poblaciones SI y LY; no se encontraron diferencias (P>0.05) entre
las poblaciones SI y LY. Las coancestrías se utilizaron para estimar la H e en las poblaciónes SI (0.854),
EN (0.937) y LY (0.828) de acuerdo a la metodología de Toro et al. (2014).
Es importante mencionar que la información publicada sobre diversidad genética de las poblaciones
bovinas criollas de México se ha basado en el uso de marcadores microsatélites. Así, un estudio en el
que se comparó la estructura genética de cuatro poblaciones de ganado criollo (Bos taurus) localizadas
en Chihuahua, Puebla, Durango, Guerrero y Nayarit y que también incluyó la comparación con
poblaciones de ganado de lidia (Bos taurus), Criollo Lechero Centroamericano (Bos taurus) y Guzerat
190
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
(Bos indicus) reportó rangos de 0.71 ± 0.07 a 0.85 ± 0.04 y de 0.35 ± 0.07 a 0.53 ± 0.05 para
heterocigosidad promedio y Ho, respectivamente (con valores específicos de 0.76 ± 0.05 y 0.52 ± 0.05
para la población criolla de Nayarit). Los resultados indicaron menor diversidad genética en la población
Guzerat (Bos indicus) y en el ganado de lidia (Bos taurus) en relación a las otras razas evaluadas. En
este estudio los autores concluyeron que existen niveles altos de diversidad genética en las poblaciones
criollas de México y que éstas pueden ser un reservorio invaluable de diversidad genética (Ulloa-Arvizu et
al., 2008). Por otro lado, diferentes heterocigosidades fueron estimadas a partir de un estudio que abarcó
26 razas de bovinos criollos latinoamericanos entre las cuales se incluyeron 5 poblaciones ubicadas en
México. En este trabajo los autores evaluaron la diversidad genética de poblaciones criollas ubicadas en
10 países, reportando valores de He que fluctuaron entre 0.660 ± 0.045 (para Criollo Guabalá) y 0.788 ±
0.018 (para Criollo de Nayarit) y valores de Ho que fluctuaron entre 0.629 ± 0.019 (para Criollo
Patagónico) y 0.793 ± 0.013 (para Criollo Cubano). En cuanto a las poblaciones mexicanas los rangos
para He estuvieron entre 0.760 ± 0.019 (para Criollo de Baja California) y 0.788 ± 0.018 (para Criollo de
Nayarit), mientras que los rangos para Ho estuvieron entre 0.693 ± 0.016 (para Criollo Poblano) y 0.749 ±
0.021 (para Criollo de Nayarit). Los promedios globales entre las 26 poblaciones evaluadas fueron de
0.738 ± 0.045 para He y de 0.718 ± 0.045 para Ho, concluyendo los autores que estas razas nativas
representan un importante reservorio de diversidad genética que debe ser conservado (Delgado et al.,
2011).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
La estimación de los parámetros mediante el uso de SNP con plataformas de alta densidad se basó en la
utilización del 98.93% de los SNP disponibles en el chip, lo anterior demuestra la utilidad de la plataforma
para identificar diversidad genética en la raza Criollo Coreño.
Los valores obtenidos de Ho y He indican que las poblaciones Criollo Coreño mantienen altos niveles de
diversidad genética.
La coancestría molecular estimada indica que existen diferencias significativas entre las poblaciones
Criollo Coreño. Las diferencias mencionadas señalan que, en términos de diversidad genética, las tres
poblaciones muestreadas se pueden considerar en la práctica como dos poblaciones.
Cuadro 1. Medias de cuadrados mínimos para Coancestría Molecular (fM) en tres poblaciones de
bovinos Criollo Coreño de Nayarit, México (SI = Santiago Ixcuintla, EN = El Nayar y LY = La Yesca).
SI
EN
LY
SI
0.146±0.011
**
ns
EN
**
0.063±0.011
**
LY
ns
**
0.172±0.010
Promedio global
0.131
**Diferencias estadísticas significativas con P < 0.0001.
ns
Diferencias estadísticas no significativas con P > 0.05.
FINANCIAMIENTO
Proyecto Fiscal 2014: No SIGI 14163032552-INIFAP.
191
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CORRELACIONES DE VALORES GENÉTICOS ENTRE CARACTERÍSTICAS DE CONFORMACIÓN,
PRODUCCIÓN Y CALIDAD DE LA LECHE EN GANADO HOLSTEIN DE MÉXICO.
BREEDING VALUE CORRELATIONS BETWEEN CONFORMATION TRAITS, MILK YIELD AND MILK
QUALITY TRAITS IN MEXICAN HOLSTEIN CATTLE.
Cortes HJG1*, García RA2, Méndez MM1, Ruiz LFJ2, Vázquez FF1
1Benemérita
Universidad Autónoma de Puebla, BUAP; 2Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en
Fisiología y Mejoramiento Animal, INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Durante varias décadas la selección de reemplazos de ganado Holstein se ha enfocado en incrementar la
producción de leche, pero se han descuidado otras características de interés económico como son la
salud de la ubre, calidad de la leche, características de conformación (CT) y la fertilidad. Estudios previos
demuestran la importancia de seleccionar en función de las características de conformación, esto debido
a su relación genética y fenotípica con la longevidad y la capacidad para la producción de leche (Samoré
et al., 2010). Por ejemplo cuando se realiza una selección a favor de las características de conformación,
existe la posibilidad de mantener la producción de leche por vaca por más tiempo y se puede disminuir la
cantidad de vacas desechadas por afecciones morfológicas, resultando en un menor costo por
reemplazos y mejorando la producción de leche por vaca en cantidad y en tiempo, lo que se traduce en
una mejor rentabilidad de por vida de los animales (Valencia et al., 2008). Para estimar el grado de
relación genética entre los caracteres de conformación con producción de leche y sus componentes, se
realizaron correlaciones de valores genéticos para producción de leche, grasa y proteína con cuatro
sistemas de conformación.
OBJETIVO
Estudiar las correlaciones de valores genéticos entre sistemas de conformación con la producción de
leche y la calidad de la misma en ganado Holstein de México.
MATERIAL Y MÉTODOS.
La información utilizada en el presente trabajo, se obtuvo del control de producción y de las calificaciones
de conformación proporcionadas por la Asociación Holstein de México, información que fue recolectada
de 94 hatos distribuidos en 14 estados de la República.
Los resultados de las evaluaciones genéticas de producción de leche, calidad de la misma y caracteres
de conformación, fueron facilitados por el INIFAP, organismo encargado de realizar las evaluaciones
correspondientes de la raza. En los análisis se incluyeron animales que contaran con información
genética de producción láctea, componentes de la leche y características de conformación. Incluyendo un
total de 85,053 animales. El análisis estadístico utilizado fue Coeficiente de Correlación de Pearson, los
datos se procesaron con el software SAS 9.3 (2015).
Se incluyó información de 22 CT; estatura (STA), altura a la cruz (ALCR), angulosidad (AG), tamaño
(TAMÑ), profundidad corporal (PROFD), lomo (LOM) anchura de pecho (ANPE), punta del anca (PUNA),
ancho del anca (ANCA) calidad de hueso (CLHU), vista lateral de las patas traseras (VLPT), vista
posterior de las patas traseras (VPPT), ángulo de la pezuña (ANPEZ), profundidad del talón (PROTL
posición de pezones posteriores (POSUP), posición de pezones anteriores (POSPA), longitud de los
pezones (LONPE) profundidad de la ubre (PU), inserción anterior de la ubre (IAU), altura de inserción
posterior de la ubre (AIUP), ligamento medio (LM), textura de la ubre (TEX) y ancho de la ubre posterior
(ANIUP). La evaluación lineal de las CT se agrupó en cuatro sistemas generales de conformación, para
posteriormente analizarlas de manera conjunta con la producción de leche y sus componentes, con las
siguientes fórmulas tomadas del sistema de calificación de la Asociación Holstein de México:
192
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Componentes del sistema de la ubre; SCU= (PU * 0.16) + (TEX * 0.14) + (LM * 0.14) + (IAU * 0.18) +
(POSPA * 0.07) + (LONPE * 0.02) + (AIUP * 0.12) + (ANIUP * 0.10) + (POSUP*0.07)
Componentes del sistema de patas; SCP= (ANPEZ * 0.18) + (PROTL * 0.22) + (CALHU * 0.12) + (VLPT *
0.17) + (VPPT*0.31)
Componentes del sistema del cuerpo; SCC= (STA * 0.12) + (ACRZ * 0.03) + (TAMÑ * 0.17) + (ANPE *
0.23) + (PROFD * 0.17) + (LOM * 0.28)
Componentes del sistema de anca; SCA= (PUNA*0.62) + (ANCA*0.38)
Para los componentes de la leche se evaluó porcentaje de proteína (PP), porcentaje de grasa (PG) y
recuento de células somáticas (CS).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Correlaciones de valores genéticos entre los sistema de conformación, producción de leche,
porcentaje de grasa y proteína, y conteo celular somático. La asociación encontrada entre los
sistemas de conformación (SCU, SCP y SCA) con PP y PG en vacas, sementales y en toda la población
de estudio fue negativa, pero positiva con PL. Las correlaciones para PL con SCU fueron positivas (0.43)
para sementales, y disminuyó en 0.05 puntos para vacas (0.38).
La correlación negativa encontrada entre PL con PP y PG, indica que vacas con mayor producción láctea
tienen menor cantidad de solidos totales en leche, valores que coinciden con los reportados por Madrid et
al. (2014) (-0.13 y -0.19 respectivamente.) El SCC, muestra muy baja correlación con PP, PG, CS y PL
en toda la población. En vacas, SCU tiene una correlación positiva con PL así como con CS (0.38 y 0.30
respectivamente), a diferencia de lo reportado por Madrid et al. (2014) quienes encontraron correlaciones
negativas entre SCU con PL y CS (-0.15 y -0.19 respectivamente.) Los resultados en este estudio indican
que las vacas con ubres fuertes, grandes y bien implantadas tienen mayor producción de leche y menor
presencia de células somáticas, pero debido al volumen de leche, se disminuye el porcentaje de grasa y
proteína. La PL en vacas se encuentra relacionada moderada y positivamente con SCU, SCP y SCA no
mostrando significancia para SCC, por lo que una buena conformación en ubre, patas y anca, indica una
mayor producción de leche, destacando la correlación encontrada con el SCU (0.43 en sementales, 0.38
en vacas y 0.38 para tota la población).
Tabla 1. Asociación de valores genéticos para los sistemas de conformación de componentes de la
ubre (CSU), de patas (SCP), del cuerpo (SCC) y del anca (SCA) con producción láctea (PL),
porcentaje de proteína (PP), de grasa (PG) y células somáticas (CS) para vacas, sementales y
todos los animales de la población que fueron estadísticamente significativas (P<0.05).
Sistema
de Valores para sementales
Conformación
PP
PG
CS PL
Valores para vacas
PP
PG
CS
Toda la población
PL
PP
PG
CS
PL
SCU
-0.18
-0.27
0.38 0.43 -0.13 -0.19 0.30 0.38
-0.13
-0.19
0.31 0.38
SCP
-0.06
-0.18
0.27 0.34 -0.05 -0.11 0.22 0.27
-0.05
-0.11
0.23 0.28
0.08
0.10 0.07 0.02
0.02
0.07
0.05 0.007
SCC
0.07
0.05
SCA
-0.10
-0.07
0.08 0.20 -0.07 -0.10 0.04 0.17
-0.08
-0.09
0.05 0.18
PL
-0.5
-0.66
0.54
-0.15
-0.66
0.54
-0.14 -0.65 0.53
Correlaciones entre características de conformación con la producción y componentes de la
leche. Las correlaciones encontradas entre STA y PL fueron moderadamente positivas (0.21). La PU
tubo una baja correlación negativa con PL (-0.05), Corrales et al. (2011) reportaron una correlación de 0.72 para la misma característica, en ganado holstein de Colombia, Berry et al. (2004) encontraron una
193
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
correlación de -0.06 en USA y Samoré et al. (2010) reportaron -0.37 para la misma característica en
vacas Holstein en Italia. Esto indica que vacas con alta producción láctea tienen una ubre más débil
debido a que presenta mayor profundidad y por consiguiente tienen más problemas de mastitis
haciéndolas susceptibles al descarte.
Tabla 2.- Correlaciones de valores genéticos para vacas, entre características de conformación, con
producción y componentes de la leche que fueron estadísticamente significativas (P<0.05).
LM
PU
ANIUP
IAU
STA
VPPT
VLPT
POSUP POSPA AG
CS
0.22
0.28
0.24
0.24
0.14
0.18
0.007
0.18
0.16
0.15
PP
-0.14
-0.005
-0.14
-0.09
-0.06
-0.05
0.009
-0.05
-0.12
-0.13
PG
-0.2
-0.03
-0.21
-0.09
-0.08
-0.08
-0.02
-0.08
-0.17
-0.15
PL
0.4
-0.05
0.42
0.33
0.21
0.16
0.12
0.16
0.35
0.34
La correlación entre angulosidad y PL encontrada en este estudio fue positiva (0.34) en vacas y en
sementales (0.36). Corrales et al. (2011) reportaron valores de 0.14, Berry et al. (2004) reportaron una
correlación de 0.27, Samoré et al. (2010) reportaron 0.36 para la misma característica, considerando que
es debido a que vacas más angulosas, tiende a consumir más alimento y esto se refleja en una mayor
producción de leche.
CONCLUSIÓN.
Se puede mejorar la PL y CS, a través del mejoramiento de la conformación, debido a la correlación
positiva que se observa entre ellas. Pero se debe tener en cuenta la correlación negativa que se presenta
entre producción de leche con el PG y PP, para que al seleccionar algunas características no se afecte
en gran medida la calidad de la leche.
AGRADECIMIENTOS.
Agradecemos a la Asociación Holstein de México y al Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en
Fisiología y Mejoramiento Animal, INIFAP, por la información proporcionada.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Madrid et al., 2014. Vet. y Zoo. Vol. 8. Pp.35-47.
Berry et al., 2004. J of Agric and Food Res. Vol.43. Pp.161–176.
Corrales et al., 2011. Rev MVZ Cord. Vol.17. Pp. 2870-2877.
Samoré et al., 2010. Ital J Anim Sci. Vol. 9. Pp. 145-152.
Valencia et al., 2008. Rev Téc Pec en Mex. Vol.8. Pp.235-248.
194
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
OPTIMIZACIÓN ECONÓMICA DEL PROGRAMA DE MEJORAMIENTO GENÉTICO DE CABRAS
LECHERAS EN FRANCIA.
ECONOMIC OPTIMIZATION OF THE DAIRY GOAT BREEDING PROGRAM IN FRANCE.
Tadeo PE*1, Montaldo HH1, Palhiere I2, Elsen JM2
1 Facultad
2
de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma de México;
Instituto Nacional de Investigación Agronómica de Francia (INRA), Genética, Fisiología y Sistemas
Pecuarios (GenPhySE), Francia.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Francia actualmente ocupa el primer lugar en producción de leche en la Unión Europea (UE), generando
el 30% de la producción. Cuenta con 867,000 cabras, que representan el 10% de la población de la UE.
De ellas, 300,000 cabras se encuentran en control de producción y 190,000 pertenecen al núcleo
genético.
Francia opera uno de los principales programas de mejora genética de cabras lecheras en el mundo, que
aplica en las razas Alpina y Saanen de forma separada. El objetivo es mejorar el contenido de grasa y
proteína, el volumen de leche, y la salud de la ubre, para aumentar la eficiencia en la producción de
quesos.
Los organismos participantes son: Capgènes, que es la compañía que coordina el programa y posee los
machos mejorados; la cooperativa de productores, que posee y maneja las unidades de producción del
núcleo; y el Instituto Pecuario Francés, que junto con INRA, definen los protocolos para la obtención de
los valores genéticos.
Aunque el programa de mejora genética es exitoso, y conduce a tasas importantes de progreso genético
anual (0.12 desviaciones estándar genéticas (σg) para volumen de leche, 0.02σg para porcentaje de grasa
y 0.05σg para porcentaje de proteína), no está optimizado. Shumbusho et al. (2013) modelaron y
optimizaron el programa actual de mejora genética, para obtener la máxima ganancia genética anual en
el objetivo de selección. Sin embargo no se han investigado los beneficios económicos adicionales que
se podrían obtener con un programa de selección al utilizar valores óptimos para distintas variables de
decisión relacionadas con el beneficio económico del programa.
OBJETIVO.
Modelar el programa de mejora genética de cabras lecheras que actualmente se aplica a nivel nacional
en Francia, y determinar las combinaciones de valores en las variables de decisión que generen
beneficios económicos superiores a los actuales.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El programa de mejora genética está organizado en forma similar a un programa de vacas lecheras,
donde se usa la prueba de progenie para obtener los machos elite. Cada año se realizan 1000
apareamientos entre hembras y machos elite, con los mejores valores genéticos predichos para el índice
económico. Los machos jóvenes, se someten a varias etapas de selección con base en su salud, y en la
calidad y cantidad de semen recolectado. Al término de estas selecciones, 70 machos entran a prueba de
progenie, y cada uno es evaluado a partir de la información de 80 hijas. Finalmente los machos con los
mayores valores genéticos predichos son seleccionados para formar parte de los machos elite, de los
cuales se distribuye su semen congelado.
Para modelar el programa de mejora genética se utilizó una característica con heredabilidad de 0.3,
repetibilidad de 0.5 y desviación estándar genética de 1, que representa un objetivo económico de
selección para varias características en esta población. Se usaron los métodos determinísticos descritos
en Hill (1974), Elsen y Mocquot (1976), y Ducroq y Quass (1988), para modelar la selección y predecir la
respuesta a la selección a corto plazo con generaciones superpuestas.
Cada año, durante 50 años, se calcularon los valores genéticos esperados de 32 categorías de animales,
determinadas por el sexo, el nivel genético y la edad. Estas categorías incluyen los animales del núcleo,
que es donde se genera la superioridad genética, y de los rebaños comerciales, que usan la superioridad
195
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
genética generada en el núcleo. Para ello se usó un método matricial:
Donde xt es el
vector de valores genéticos esperados de cada categoría en el año t, Dt es la matriz de transición que
permite el paso del año t-1 al año t, y vt es el vector de diferenciales de selección correspondiente a cada
categoría en el año t.
El diferencial de selección, generado cada año por la selección en una determinada categoría, se calculó
de la siguiente forma:
Donde SDj es el diferencial de selección para la categoría j, i es
la intensidad de selección para la categoría j, r es la precisión de la evaluación en la categoría j y σg es la
desviación estándar genética. En las categorías, sometidas a la selección, que son parte de una
subpoblación con generaciones traslapadas, se usó el método de punto único de truncación, para
calcular la intensidad de selección utilizando métodos de integración numérica. (Ducroq y Quass, 1988)
Para calcular los ingresos generados en el programa, se tomaron en cuenta los valores genéticos
esperados de las hembras en el núcleo y en los rebaños comerciales, que expresan la mejora genética
cada año:
Donde Xit es el valor genético esperado de la
categoría i en el año t, expresado en desviaciones estándar genéticas, eur es el valor en euros de una
desviación estándar genética, NNi es el número de animales que expresa el valor genético de la
categoría i y d es la tasa de interés real (0.05).
Para calcular los costos, solo se usaron los asociados con las variables de decisión. Cada costo fue
multiplicado por el número de animales que generan este costo y el factor de descuento correspondiente
a cada año en que se aplicó el programa.
El beneficio económico se calculó de la siguiente manera:
Una vez que se obtuvo el modelo del programa actual, se probaron valores diferentes en las nueve
variables de decisión para calcular la ganancia genética anual estabilizada (del año 49 al 50), los
ingresos, los costos y los beneficios. Las variables de decisión estudiadas y sus respectivos valores de
prueba fueron:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Número de machos en prueba de progenie (pp):35, 70, 105 y 140
Número de hijas por macho en prueba de progenie (hpp):40, 80,120 y 160
Número de años en producción de los machos elite (y):1, 2, 3 y 4
Fracción de machos en prueba de progenie seleccionados para ser machos elite (pp_e):0.2, 0.4,
0.6 y 0.8
Fracción de hembras inseminadas en el núcleo (AI):0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8 y 0.9
Número de dosis usadas durante el primer año de producción de un macho elite (dss1): 500,
1000, 1500 y 2000
Los valores de prueba para el segundo (dss2), tercero (dss3) y cuarto (dss4) año de producción son
iguales que en el primero (dss1).
En total existen 458,752 combinaciones, pero al considerar límites demográficos y biológicos, se
obtuvieron resultados de las 39,862 combinaciones realmente posibles. Los cálculos se realizaron en un
programa implementado en Fortran V incluyendo algunas rutinas de la biblioteca NAG.
RESULTADOS.
En el Cuadro 1 se presentan los resultados para el programa actual y aquellos con mayores beneficios
económicos. En la fila 1 está el programa actual, en la fila 2 la alternativa con mayor beneficio económico,
y en la fila 3 la alternativa con mayor beneficio económico, pero con la AI limitada, ya que se considera
difícil incrementarla significativamente por arriba de 0.4, por razones prácticas.
196
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 1. Resultados económicos para el programa actual y los dos programas con mayores beneficios
Alt pp
hpp y pp_e AI
dss1 dss2 dss3 dss4 gge
1 70
80
4 0.4
0.34 1,400 1,000 500 500
0.16
2 140 120 4 0.2
0.8
2,000 1,500 500 500
0.23
3 140 80
4 0.2
0.4
2,000 500
500 500
0.19
Alt = Alternativa, gge = Ganancia genética estabilizada (desviaciones
millones de euros
ingresos* costos*
1,800
38
2,616
64
2,236
54
estándar genéticas)
beneficio*
1,762
2,552
2,182
, *Valor en
DISCUSIÓN.
De acuerdo a los resultados, la alternativa 2 tiene 44.8% más beneficio que el programa actual, y la
alternativa 3 tiene 23.8% más beneficio que el programa actual, pero con la AI limitada.
Dos Santos et al. (2015) aumentaron el beneficio económico en un programa para cabras lecheras,
aumentando la AI y disminuyendo la proporción de machos seleccionados. Esto coincide con los
resultados. La alternativa 2, aumentó significativamente la AI y disminuyó la proporción de machos
seleccionados (pp_e), esto se logró al aumentar los machos en prueba de progenie (pp). La alternativa 3,
igualmente disminuyó la proporción de machos seleccionados (pp_e).
Dos Santos et al. (2015) argumentan que un alto porcentaje de reemplazos provenientes de machos en
prueba de progenie (pp), disminuye los reemplazos provenientes de machos probados (elite), provocando
una disminución en la ganancia genética y del beneficio económico. Por ello, vemos que los mayores
beneficios económicos (alternativas 2 y 3), no se logran al usar el mayor número de hijas por macho
(hhp).
CONCLUSIÓN E IMPLICACIONES.
El programa de mejora genética actual puede mejorar el beneficio económico considerablemente usando
alguna de las alternativas presentadas. La alternativa a seguir depende de los organismos involucrados
en el programa. Para obtener una optimización más precisa se necesita implementar una rutina de
maximización numérica.
RECONOCIMIENTOS.
Se agradece el apoyo del proyecto PAPIIT-UNAM IN222314.
BIBLIOGRAFÍA.
Dos Santos L. H., Bezerra O. L., Facó O., Gonçalves H. C., Braga L. R. 2015. Breeding programs for
dairy goats generate profits in Brazil. Livestock Science 178:27, 34.
Ducrocq, V., and R. L. Quass. 1988. Prediction of genetic response on truncation selection across
generations. J. Dairy Sci. 71:243-2553.
Elsen, J.M. and J.C. Mocquot. 1976. Optimization du renouvellemet des femelles dans les troupeaux
laitiers soumis au croisement terminal. Ann. Génét. Sél. Anim. 8:343.
Hill, W.G. 1971. Prediction and evaluation of response to selection with overlapping generations. Anim.
Prod. 18:117.
Shumbusho F., Raoul J., Astruc J. M., Palhiere I. and Elsen J.M. 2013. Potential benefits of genomic
selection on genetic gain of small ruminant breeding programs. J Anim Sci. 91:3644-3657.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos. Modalidad: Oral
197
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DE LAS VARIANTES GENÉTICAS PROTEICAS SOBRE LA PRODUCCIÓN Y
COMPOSICIÓN DE LA LECHE DE GANADO HOLSTEIN.
EFECT OF PROTEIN GENETIC VARIANTS ON MILK YIELD AND COMPOSITION IN HOLSTEIN
CATTLE.
García RA*1, Ruiz LFJ1, Moreno RE2 y Román PSI1.
Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento Animal, INIFAP.
2Escuela de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma de Querétaro
1Centro
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El descubrimiento de los polimorfismos genéticos de las proteínas de la leche, ha generado nuevas
prospectivas en el estudio de la calidad de la leche, debido a que las variantes polimórficas se han
asociado con la composición de la leche y sus propiedades biológicas.
Las proteínas de la leche se pueden clasificar en dos fracciones principales: a) Las caseínas que
representan el 80% del total de proteínas y comprende a las variedades αs1-, αs2-, β- y κ-Caseína; y b)
Las proteínas séricas con aproximadamente 10% de β- lactoglobulina y 2% de α-lactoalbúmina, estando
el resto de las proteínas conformado por pequeñas cantidades de enzimas, inmunoglobulinas y las
proteínas de la membrana del glóbulo graso. En bovinos, los genes que codifican a las proteínas de
caseína se localizan en el cromosoma 6 q31-33 en un locus de 250Kb (Threadgill et al, 1990) y el gen de
la β- lactoglobulina está ubicado en el cromosoma 11 y consta de 897 pares de bases (Eggen et al,
1995).
Se ha reportado que algunas de las variantes genéticas, particularmente de la β-lactoglobulina y la kcaseína, están asociadas con el desarrollo de la lactación y tienen una influencia fundamental en la
composición de la leche y sobre sus propiedades de procesamiento, incluyendo el rendimiento quesero.
La disponibilidad de las variantes alélicas de estas proteínas podría representar una herramienta indirecta
de selección genética en ganado lechero para producción de leche, sus componentes y rendimiento en
queso.
OBJETIVO.
Estimar las frecuencias alélicas de las proteínas de la leche y medir el grado de relación de cada variante
con los valores genéticos de producción de leche, grasa y proteína en la población Holstein de México.
MATERIALES Y MÉTODOS.
En al estudio se incluyó información de 1,637 vacas de raza Holstein que se encuentran distribuidas en
26 hatos en los estados de Aguascalientes, México, Guanajuato, Michoacán, Querétaro y Zacatecas.
Todos los animales contaron con evaluación genética para producción de leche (HTPL), grasa en
kilogramos (HTPGK) y porcentaje (HTPGP), proteína en kilogramos (HTPPK) y porcentaje (HTPPP), y
Conteo celular somático (HTECCS). A cada uno de los animales, se le extrajo una muestra biológica
(folículo piloso) para la extracción de ADN, se genotiparon con el GeneSeek Genomic Profiler HD
BeadChip (GeneSeek, Lincoln, NE), y se determinó la variante alélica para tres proteínas de la leche (β
y K-Caseína, y β-lactoglobulina). Se estimaron las frecuencias para cada proteína y para medir el efecto
de las variantes de las proteínas de la leche sobre el potencial genético de la producción de la misma y
su calidad, se realizó un análisis de varianza, utilizando un diseño completamente al azar considerando el
siguiente modelo: Yi=µ + αi +εi, donde Yi es el HTPL, HTPGK, HTPPK, HTPGP, HTPPP o HTECCS, µ es
la media general de la población estudiada para cada una de las características antes mencionadas αi es
el efecto de la i-ésima variante de las proteínas de la leche (β y Kappa- Caseína, y β- lactoglobulina)
evaluadas individualmente y εi es el error experimental. Las variantes de las proteínas que no contaban
con al menos 50 animales no fueron incluidas en los análisis. Las medias se compararon empleando el
método de Tukey, a través del procedimiento PROC GLM en SAS 9.3.
198
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la población Holstein de México se observaron 6 de las 11 variantes existentes para K-Caseína,
predominando la variante AA. En el caso de la β-lactoglobulina, se observaron las variantes (A y B) que
se encuentran en vacas Holstein, Ayshire y Pardo Suizo (Kwai–Hang, 1998), ya que la otra variante (C)
está en vacas Jersey; para β-Caseína, también se presentaron las A y B en forma homocigótica y
heterocigótica, pero la frecuencia de la variante BB fue muy baja (0.24%). En la Figura 1 se muestra la
frecuencia de las variantes alélicas para cada una de las proteínas determinadas en la población de
estudio.
Figura 1. Frecuencias alélicas de las proteínas de la leche (β y K-Caseína,
y β-lactoglobulina) de los animales muestreados en la población Holstein
de México.
Cuando se realizaron las comparaciones de medias entre cada una de las variantes de β –Caseína con
HTPL, HTPGK, HTPPK, HTPGP, HTPPP y HTECCS, los modelos estadísticos para cada una de las
características resultaron ser no significativos (p<0.05). Para K-Caseína, solo se encontraron diferencias
estadísticas para HTPL (Figura 2), siendo las variantes BB y AB superiores en la producción láctea,
resultados que coinciden con los reportados por Azevedo et al (2008), que relacionan el alelo BB con una
mayor producción.
Figura 2. Comparación de medias de las variantes alélicas de la KCaseína con los valores genéticos de producción de leche (HTPL).
Superíndices desiguales indican medias estadísticamente diferentes (p ≤ 0.05).
199
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
En el caso de β-lactoglobulina, los modelos que incluyeron HTPPK, HTPGP y HTECCS resultaron
estadísticamente significativos (Tabla 1). Estudios realizados por Caroli et al (2004) encontraron que el
genotipo BB de β–Lactoglobulina se ha asociado con un mayor contenido de grasa, resultados que
coinciden con lo encontrado en el presente estudio, ya que los animales que tienen el alelo B, presentan
en promedio un valor genético superior (-0.02), comparado con los animales que son homocigóticos para
el alelo A (-0.04). En la industria láctea, esto se traduce a un buen rendimiento en queso, contrario a lo
sugerido para los animales con genotipo AA, que se encuentra relacionados con una alta producción de
leche (no observado éste efecto en la población estudiada) y de producción total de proteína. En el
presente estudio se observó que los animales con genotipo AA tienen mayor potencial genético para
producir proteína (8.49 Kg) que los animales con genotipo BB (5.87Kg). El efecto de las variantes
genéticas de la β–Lactoglobulina sobre el nivel de CCS fue significativo en la población Holstein de
México, teniendo mayor valor genético los animales con genotipo AA (2.34) que los de genotipos BB y
AB. No se ha reportado en otros estudios el efecto de las variantes genéticas de la β–Lactoglobulina
sobre el conteo celular somático.
Tabla1. Comparación de medias de las variantes alélicas de la β-lactoglobulina con los
valores genéticos de porcentaje de grasa (HTPGP), kilogramos de proteína (HTPPK) y
conteo celular somático (HTECCS).
Variante Alélica
HTPGP
HTPPK
HTECCS
BB
-0.02b
5.87a
2.08a
AB
-0.02b
6.96ab
2.20a
AA
-0.04a
8.49b
2.34b
Superíndices desiguales indican medias estadísticamente diferentes (p ≤ 0.05).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Las variantes genéticas de las proteínas de la leche (β-lactoglobulina y K-Caseína) pueden ser utilizadas
como herramientas de selección para mejor el porcentaje de grasa, la producción de proteína en
kilogramos y la producción de leche en ganado Holstein de México.
Se considera importante realizar estudios que determinen el mecanismo de acción de las variantes
genéticas de la β–Lactoglobulina sobre el conteo celular somático.
Es necesario realizar estudios sobre el impacto del contenido de éstas proteínas sobre la producción y
rendimiento de queso; herramienta que podría ser usada en la industria de transformación láctea.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Azevedo ALS, et al., 2008. Genetics and Molecular Research 7(3): 623-630
Caroli A, et al., 2004. J Anim Breed Genet 121(2):119 - 127.
Kwai–Hang KF. 1998. Can J Anim Sci; 78 (1): 131–147
Eggen, A., et al., 1995. Anim. Genet. 26: 216-236.
Threadgill, DW, et al., 1990. Nucleic Acids Research, 18(23), 6935–6942.
200
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
IMPACTO DE USAR INFORMACIÓN GENÓMICA EN EL MEJORAMIENTO GENÉTICO DE GANADO
HOLSTEIN EN MÉXICO.
IMPACT OF USING GENOMIC INFORMATION ON THE GENETIC IMPROVEMENT OF MEXICAN
HOLSTEIN CATTLE.
Ruiz LFJ1*, García RA1 y Román PSI1.
1Centro
Nacional de Investigación Disciplinaria en Fisiología y Mejoramiento Animal, INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La genómica es una tecnología nueva que ha producido grandes avances en la selección genética de
ganado lechero. El desarrollo de paneles densos de marcadores de un solo polimorfismo (SNP), la
disponibilidad de los paneles en el mercado y la disminución de costos de los mismos, ha potenciado la
incorporación de esta fuente de información en los procesos de mejoramiento genético.
Existen numerosas ventajas de incorporar información genómica en los programas de mejoramiento en
ganado lechero: a) Determinar la relación de parentesco entre los animales de una manera más precisa,
b) Localizar genes con grandes efectos sobre características de interés económico y realizar la selección
de animales portadores de los genes deseables, c) Incrementar la confiabilidad de la predicción de
valores genéticos de animales jóvenes que no cuentan con información fenotípica y/o de pedigrí, d)
Hacer posible la identificación de animales superiores con confiabilidades aceptables a edades más
tempranas y así disminuir el intervalo generacional y por consiguiente e) Incrementar las tasas de
mejoramiento genético en las poblaciones.
Los beneficios que puede ofrecer la genómica, dependen de varios factores como son el tamaño de la
población con genotipo, la densidad de los marcadores, la heredabilidad de las características a evaluar y
la metodología utilizada en la estimación de valores genómicos (VGO). Por lo anterior, es importante
evaluar los beneficios de usar la información genómica en la predicción de valores genéticos de
población Holstein en México.
OBJETIVO.
Incorporar información genómica en los procesos de evaluación genética y cuantificar el impacto de
incluir esta nueva fuente de información sobre la predicción de los valores genéticos para producción de
leche y sus componentes y su precisión en ganado Holstein en México.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Información fenotípica. Para la evaluación de producción de leche se incluyó información de producción
ajustada a 305 días y equivalente de madurez de 581,817 lactaciones, correspondientes a 346,126
animales y para las características de componentes de la leche (grasa y proteína en kg y porcentaje) se
incluyó información de 163,802 lactaciones correspondientes a 92,233 animales.
Información genealógica. El archivo de pedigrí para la evaluación de leche constó de 422,449 animales y
para componentes de 138,564.
Información Genómica. Se utilizaron 3,103 genotipos de vacas y 40 de sementales con registro en
México independientemente de que contaran o no con información fenotípica. Del total de las vacas, 183
fueron genotipadas con el BovineLD BeadChip v1.1 de Illumina (6K), 277 con el GeneSeek Genomic
Profiler LD BeadChip (9K), 686 con el Illumina BovineSNP50 BeadChip (50K) y 1,917 con el GeneSeek
Genomic Profiler HD BeadChip (77K). Todos los sementales fueron genotipados con el chip de 50K. Para
poder realizar las evaluaciones genómicas, previamente se imputaron los genotipos de todos los
animales a 44,224 SNP, para lo cual se utilizó el programa Findhap con la metodología descrita por
VanRaden et al. (2011)
201
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Modelo estadístico. Los valores genéticos (VGE) para producción de leche y componentes se estimaron
mediante un modelo animal de repetibilidad como la suma de los efectos fijos (Media general para
producción de leche y componentes, y Hato-año-Estación) y aleatorios (Ambiente permanente,
Interacción semental – hato, Efecto del animal y efecto residual). Las evaluaciones genómicas se
realizaron a través de la metodología de un sólo paso (ssGBLUP) en la cual se usó la información de
pedigrí y la genómica para construir la matriz de relaciones aditivas y se calcularon los VGO (Aguilar et
al, 2010). Al mismo tiempo, se calcularon los efectos de los SNP para cada una de las características de
interés para calcular los valores genómicos directos (VGD) de animales sin fenotipo. El índice de pedigrí
(IP) de los animales sin fenotipo se calculó como el promedio de los VGE de los padres y la confiabilidad
del mismo se calculó como ¼ de la suma de la confiabilidad de los padres (Lindström et al, 1972).
Para evaluar el efecto de la incorporación de la información genómica, se compararon los VGE y los VGO
y sus confiabilidades en toda la población y en los animales genotipados por separado. Para los animales
sin fenotipo (jóvenes) se compararon los VGD y los IP.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
En la población de ganado lechero estudiada, se observó que la inclusión de la información genómica
permitió detectar mayor variación en los valores predichos en toda población. Los promedios±
desviaciones estándar y los rangos intercuartiles de los VGE y VGO para producción de leche fueron de 279±721 (1197) y -203±726 (1,239), mientras que para producción de grasa y proteína en kg, los VGE
fueron de -0.87±9.84 (7) y 3.43±13.42 (17) y los VGO fueron de 0.62±10.20 (8) y 5.03±13.73 (18),
respectivamente. Sin embargo, no se observó un efecto positivo en la estimación de las confiabilidades,
ya que éstas fueron similares para los VGE y VGO (53% para producción de leche y 52% para
componentes). Esto, debido posiblemente a la cantidad de animales genotipados (<1% de la población)
en toda la población.
Para medir el efecto directo de la inclusión de la información genómica, se realizó la comparación entre
los VGE y VGO de los animales con genotipo. Se observaron, al igual que en la población completa
mayores promedios, desviaciones estándar y rangos intercuartiles para los VGO comparados con los
VGE. Además se observó una ganancia de 4 y 2 puntos porcentuales en la confiabilidad para producción
de leche y de componentes respectivamente (Tabla 1).
Tabla 1. Promedios desviaciones estándar y rangos intercuartiles de las evaluaciones genéticas y
genómicas de los animales con genotipo en la población Holstein de México.
Evaluaciones Genómicas
Característica
Evaluaciones Genéticas
Media
Desviación Rango
Estándar
Intercuartil
Media
Desviación Rango
Estándar
Intercuartil
HTP Leche Kg
312
485.87
665
221
471.8
642
Confiabilidad Leche
60
6.86
7
56
6.25
6
HTP Grasa Kg
3.86
14.04
18
3.04
12.98
16
HTP Proteína Kg
4.09
12.58
17
2.56
11.63
16
HTP Grasa %
-0.01
0.12
0.17
-0.01
0.12
0.16
HTP Proteína %
0
0.06
0.08
0
0.06
0.08
Confiabilidad
Componentes
66
9.53
8
64
7.48
8
Para los animales sin información fenotípica, los promedios y desviaciones estándar de leche grasa y
proteína en kg fueron (505±367, 8.48±10, 10.74±9.57 y 448±278, 6.87±7.31, 9.32±6.62) para VGD e IP,
202
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
respectivamente. En este grupo, la ganancia de incluir información genómica fue mayor ya que los VGD
tuvieron una ganancia en confiabilidad de 13 y 15 puntos porcentuales, para producción de leche y
componentes respectivamente, comparados con el IP. En la Gráfica 1, se muestra la comparación de las
distribuciones de los VGD y el índice de pedigrí, así como sus confiabilidades para producción de grasa
en kg. Las ganancias en las confiabilidades observadas se encuentran dentro de los rangos encontrados
en otras poblaciones (Su et al, 2012) que usaron la misma metodología, aunque son inferiores a las
reportadas por VanRaden et al (2011), quien obtuvo confiabilidades de VGD cercanas a 55% usando una
población de referencia de 2,500 sementales genotipados con paneles de 50,000 SNP. Un aspecto
importante a mencionar en éste último estudio, fue la composición de la población de referencia, ya que
esta constaba de sementales con confiabilidades altas (85%) de VGE, mientras que en la población de
referencia de este estudio menos del 2% de los animales fueron sementales y el resto fueron hembras
con confiabilidades moderadas (56 y 64% para producción de leche y sus componentes
respectivamente). La estructura de la población de referencia podría ser un factor que explique los
incrementos en las confiabilidades reportadas en el presente estudio.
Gráfica 1. Distribución de los valores genómicos directos (VGO) e índices de pedigrí (IP) de animales
jóvenes y sus confiabilidades de los mismos
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
La inclusión de información genómica en la población Holstein de México presenta un efecto marginal en
animales con fenotipo (registros productivos por ejemplo) pero un incremento importante en la precisión
de las evaluaciones genéticas en los animales que no cuentan con fenotipo, lo que puede llevar a realizar
una selección de los animales a edades más tempranas, reducir el intervalo generacional y por
consiguiente, incrementar las tasas de mejoramiento genético. Es importante mejorar la población de
referencia incluyendo a más animales y a más animales con altas confiabilidades para que el beneficio de
la información genómica sea aún más evidente.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Aguilar, I., et al., 2010. J. Dairy Sci. 93:743–752.
Lindström, U. et al., 1972. Zeitschrift für Tierzüchtung und Züchtungsbiologie, 89: 1–10.
Su, G et al., 2012. J Dairy Sci. 95(2):909-17.
VanRaden, P. M., et al., 2011. Gen Sel Evol, 43, 10.
203
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DE LA POBLACIÓN SIMMENTAL MEXICANA MEDIANTE
ANÁLISIS DE PEDIGRÍ.
GENETIC DIVERSITY ASSESMENT OF THE MEXICAN SIMMENTAL POPULATION THROUGH
PEDIGREE ANALYSIS.
Ríos UA*1, Vega MVE1, Montaño BM1, Martínez VG1 y Román PSI1
1
Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP)
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Los parámetros derivados de las probabilidades de origen de los genes, usando información genealógica,
han sido aplicados exitosamente para describir la variabilidad genética de poblaciones bovinas (Boichard
et al., 1997). El objetivo fue determinar 1) la consanguinidad, el número efectivo de fundadores, el
número efectivo de ancestros y el número efectivo de genomas fundadores, y 2) la relación que existe
entre estos últimos tres parámetros en la raza Simmental mexicana.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron los datos genealógicos de 141,600 animales Simmental de registro nacidos de 1963 a 2014.
El coeficiente de consanguinidad se calculó para todos los animales nacidos de 1985 a 2014, mientras
que el intervalo generacional, el tamaño efectivo de población, el número efectivo de fundadores, el
número efectivo de ancestros, el número efectivo de genomas fundadores y el número efectivo de no
fundadores se estimaron para animales nacidos en seis periodos diferentes (1985-1989, 1990-1994,
1995-1999, 2000-2004, 2005-2009, 2010-2014), los cuales constituyeron las diferentes subpoblaciones
analizadas. Adicionalmente, para los animales nacidos de 2010 a 2014 (sexta población de referencia),
se estimaron las contribuciones genéticas total, marginal y acumulada de los ancestros con la mayor
influencia genética. La información genealógica se subdividió en periodos de cinco años con el fin de
estudiar la tendencia de los estimadores de los parámetros de variabilidad genética a través del tiempo.
La longitud de los periodos se determinó con base en la longitud del intervalo generacional (alrededor de
5 años). El año 1985 se seleccionó como año inicial para formar las subpoblaciones estudiadas debido a
que en dicho año se empezaron a registrar en la Asociación Mexicana Simmental Simbrah (AMSS) los
primeros bovinos Simmental nacidos en México. Con excepción del coeficiente de consanguinidad y el
tamaño efectivo de población, los parámetros de diversidad genética fueron estimados con base en la
teoría de probabilidad de origen de los genes. El coeficiente de consanguinidad se define como la
probabilidad de que un individuo tenga dos alelos idénticos por descendencia en cualquier locus, y ocurre
cuando se aparean individuos emparentados. El tamaño efectivo de población se define como el número
de animales sexualmente maduros que conducirían al incremento de consanguinidad actual si ellos
contribuyeran en la misma medida a la siguiente generación. El número efectivo de fundadores se define
como el número de fundadores igualmente contribuyentes que se espera que produzcan la misma
diversidad genética que en la población de referencia en estudio. El número efectivo de ancestros es el
número mínimo de ancestros (no necesariamente fundadores) que se requieren para explicar toda la
diversidad genética de la población en estudio. El número efectivo de genomas fundadores es la
probabilidad de que un gen presente en los fundadores se encuentre todavía en la población estudiada.
El coeficiente de consanguinidad, el número efectivo de fundadores, el número efectivo de no fundadores
y el número efectivo de genomas fundadores se estimaron con el programa CFC; el índice de integridad
del pedigrí, el intervalo generacional, el tamaño efectivo de la población y el número efectivo de ancestros
se estimaron con el programa ENDOG; las contribuciones genéticas total, marginal y acumulada se
estimaron con el programa PEDIG.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El Cuadro 1 muestra la descripción del pedigrí de cada una de las subpoblaciones estudiadas. El número
de individuos en las poblaciones de referencia varió de 10,941 (1985-1989) a 21,795 (2005-2009). El
porcentaje de individuos con ambos padres conocidos fue del 99% en todos los casos, por lo que el
número de individuos con un padre desconocido fue muy bajo. El tamaño del pedigrí varió de 32,357 para
204
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
el periodo 1985-1989 a 54,276 individuos para 2005-2009. En la Figura 1 se muestra la evolución de la
consanguinidad de la población Simmental mexicana en el periodo 1985-2014. Los niveles de
consanguinidad fueron bajos, variando de 0.85% (1988) a 1.65% (1997). Aunque los coeficientes de
consanguinidad fluctuaron considerablemente a través de los años, estos sugieren que existió una ligera
tendencia de incremento global de la consanguinidad. Los coeficientes de consanguinidad obtenidos
pueden estar sesgados (subestimados), debido a que el método de cálculo implementado en el programa
CFC no ajusta por pérdidas en la información del pedigrí (VanRaden, 1992). Sin embargo, se asume que
el sesgo fue menor conforme pasaron los años, ya que la calidad del pedigrí ha mejorado a través de los
años (Cuadro 2). La calidad del pedigrí en la generación paternal ha sido bastante alta, yendo de 99.6% a
prácticamente 100%. Como se esperaba, los índices de integridad del pedigrí fueron considerablemente
menores en las últimas dos generaciones, yendo de 53.9 a 84.2% en la cuarta generación, y de 34.2 a
71.1% en la quinta; sin embargo, estos intervalos también indican que la calidad de la información en las
últimas dos generaciones ha mejorado considerablemente.
Cuadro 1. Descripción del pedigría para cada población de referencia.
1985-1989
1990-1994
1995-1999
2000-2004
2005-2009
2010-2014
Nr
10941
17391
19377
20712
21795
14939
Np
32357
45472
51661
53394
54276
45638
Nf
8563
9469
9711
9422
8543
6989
Nd
23453
35599
41479
43462
45320
38361
Nu
341
404
471
510
413
288
aNr= número de individuos en la población de referencia; Np= número de individuos en el
pedigrí; Nf= número de fundadores; Nd= número de individuos con dos padres conocidos;
Nu= número de individuos con un padre conocido.
Cuadro 2. Índices de integridad del pedigrí (%) por
generación y población de referencia.
Generación
Subpoblación
1
2
3
4
5
1985-1989
99.58
86.21
72.68
53.91
34.15
1990-1994
99.74
90.77
79.66
64.92
46.23
1995-1999
99.65
91.59
82.42
70.81
54.71
2000-2004
99.69
91.33
83.54
72.54
58.80
2005-2009
99.94
92.77
87.91
77.21
63.64
2010-2014
99.99
95.70
91.88
84.15
71.14
Los números efectivos de fundadores, ancestros, genomas y no fundadores aumentaron de 1985 a 2004,
pero disminuyeron de 2005 a 2014, indicando pérdida de diversidad genética en este último periodo
(Cuadro 3). La relación entre el número efectivo de ancestros y el de fundadores (fa/fe) indicó que la
pérdida se debió parcialmente a la presencia de cuellos de botella en el pedigrí. Los valores de fa/fe
fueron: 0.31 y 0.27 para animales nacidos en los periodos 2005-2009 y 2010-2014. Por su parte, la
relación entre el número efectivo de genomas fundadores y el número efectivo de fundadores (Ng/fe) es
un indicador de la magnitud de la deriva genética; valores menores indican mayor pérdida de la
205
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
diversidad genética. Los valores de Ng/fe fueron: 0.66 y 0.63 para animales nacidos en los periodos
2005-2009 y 2010-2014. Los estimadores de la contribución genética total y marginal fueron iguales en
los primeros 15 ancestros y mostraron que un ancestro explicó el 3.4% de la variación genética total de
los animales nacidos en el periodo 2010-2014, mientras que los primeros 15 ancestros explicaron el
19.9% (Cuadro 4). En general, la contribución genética marginal de estos 15 ancestros es relativamente
uniforme, comparada con la observada en otras poblaciones bovinas productoras de carne. Para una
población Nelore brasileña, Brito et al. (2013) reportaron que el 20.1% de la contribución genética
marginal fue explicada por solo ocho ancestros (la mitad de ancestros que el del presente trabajo), de los
cuales el más influyente aportó el 10.6% de los genes. Similarmente, Solkner et al. (1998) reportaron que
en las poblaciones Braunvieh, Pinzgauer y Grauvieh austriacas el ancestro más importante contribuyó
casi el 10% de los genes a la población de referencia, mientras que en la Simmental austriaca dicha
contribución fue de 4.3%. Además, informaron que los primeros 10 ancestros explicaron 24, 32, 38 y 41%
de la variación genética total de cada raza, respectivamente, sugiriendo que la Simmental mexicana es
genéticamente más diversa que estas razas.
Cuadro 3. Estimadores de variabilidad genéticaa para cada población de referencia.
1985-1989
1990-1994
1995-1999
2000-2004
2005-2009
2010-2014
Ig
5.2 ± 0.048 5.2 ± 0.044 5.5 ± 0.046 6.0 ± 0.044 6.3 ± 0.043 6.0 ± 0.104
Ne
102.2
145.4
165.8
165.2
228.4
154.7
fe
333.0
355.9
502.5
734.2
824.7
774.0
fa
127.0
142.0
195.0
261.0
255.0
209.0
Ng
107.8
113.0
145.0
179.3
167.9
131.3
fn
159.4
165.7
203.7
237.2
210.8
158.2
aIg= intervalo generacional; Ne= tamaño efectivo de población; fe= número efectivo de
fundadores; fa= número efectivo de ancestros; Ng=número efectivo de genomas
fundadores; fn= número efectivo de no fundadores.
Cuadro 4. Los 15 ancestros con la mayor contribución genética al genoma de los animales
Simmental nacidos de 2010 a 2014.
Año de
No. de Contribución genética (%)
Ancestro
Sexo
nacimiento
crías
Marginal
Acumulada
Great Guns Ferdinand 13Z
Macho
1990
469
3.4
3.4
Balist
Macho
1984
66
1.6
5.1
Bar 5 Western 856K
Macho
2000
257
1.6
6.7
Signal
Macho
1969
709
1.4
8.0
Siegfried
Macho
1971
25
1.3
9.3
Bel CB Western 2nd
Macho
1982
68
1.3
10.6
Lilli
Hembra
1982
13
1.3
11.9
Mr Miraflores 69A
Macho
1991
183
1.2
13.2
BHR Doorn G629E
Macho
1997
153
1.1
14.3
Mr Miraflores 50C
Macho
1993
215
1.1
15.4
R&R Papillon 411W
Macho
1987
128
1.0
16.5
Bar 5 Regency 864K
Macho
2000
294
0.9
17.4
Balu 1383115
Macho
1990
40
0.8
18.2
Miss Knight 155S
Hembra
1984
15
0.8
19.1
Toverberg Erika
Hembra
2006
9
0.8
19.9
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
La población Simmental mexicana presentó bajos niveles de consanguinidad, pero ha experimentado
reducción en su diversidad genética en los últimos 10 años debido a cuellos de botella y deriva genética.
Sin embargo, la literatura científica sugiere que la población Simmental mexicana es genéticamente más
diversa que otras poblaciones, entre las que se encuentra la Simmental austriaca, ya que se reportó que
en 1995 la cantidad de diversidad genética en esta última población fue generada por solamente 94
fundadores no emparentados (Solkner et al., 1998).
206
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
MODELACIÓN DETERMINÍSTICA DE PROGRAMAS DE MEJORAMIENTO GENÉTICO QUE
INCORPORAN SELECCIÓN GENÓMICA PARA LA POBLACIÓN HOLSTEIN DE MÉXICO.
DETERMINISTIC MODELING OF BREEDING PROGRAMS THAT INCORPORATE GENOMIC
SELECTION FOR THE MEXICAN HOLSTEIN POPULATION.
Cala MN*1, Montaldo HH1, Castillo-Juárez H2, Ruiz-López FJ3
1 Departamento de Genética y Bioestadística, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad
Nacional Autónoma de México, Ciudad Universitaria, 04510, Distrito Federal, México; 2 Departamento de
Producción Agrícola y Animal, Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco, Calzada del Hueso
1100, 04960, Distrito Federal, México; 3 Centro Nacional de Investigación en Fisiología y Mejoramiento
Animal, Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias; Secretaría de Agricultura,
Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación, 76280, Ajuchitlán, Querétaro, México
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Considerando el potencial de la selección genómica (GS) para incrementar la eficiencia de programas de
mejoramiento genético de ganado lechero, una pregunta importante es qué tan eficiente puede ser esta
tecnología en poblaciones cuyo mejoramiento genético depende principalmente de semen de toros
evaluados en el extranjero. Un ejemplo son las poblaciones Holstein latinoamericanas. La organización
de programas de progenie eficaces ha sido difícil en estas poblaciones (Montaldo et al., 2010).
Mc Hugh et al. (2011) hicieron hincapié en el uso de la información de las vacas en las poblaciones de
referencia, para incrementar la respuesta a la selección en este tipo de poblaciones, en comparación con
poblaciones con gran número de vacas en control de producción y con pruebas de progenie eficientes,
que cuentan además con información de un gran número de sementales con evaluaciones genéticas con
altas confiabilidades. Se han realizado pocos estudios sobre la eficiencia de la GS en este tipo de
poblaciones.
En este estudio se comparó un programa de mejoramiento genético que usa GS de toros jóvenes, con un
programa de prueba de progenie para la población Holstein de México. Se usó modelación determinística
para calcular las tasas de ganancia genética y consanguinidad por año.
MATERIAL Y MÉTODOS
El progreso genético anual (ΔG/año) se obtuvo en forma similar a Pryce et al. (2010), usando un modelo
básico de cuatro vías de selección: toros padres de toros (SB), toros padres de vacas (SC), vacas
madres de toros (DB), y vacas madres de vacas (DC). Las tasas de consanguinidad por año (ΔF/año)
para poblaciones cerradas, fueron calculadas usando los métodos propuestos por Goddard y Smith
(1990) basados en el número efectivo de toros padres de toros (SB) por generación. Los parámetros
genéticos y características de la población a mejorar son similares a los de la población registrada de
ganado Holstein en México. La población total de vacas en control de producción fue de 30,000 en todos
los programas analizados. Se utilizó un objetivo económico de selección que involucra características de
producción de leche y funcionales como objetivo y criterio de selección, con una heredabilidad (h 2) de
0.16 y una repetibilidad de 0.40 (Montaldo et al., 2010).
Se compararon dos programas de mejoramiento genético: 1) un programa basado en pruebas de
progenie (PT), 2) un programa basado en selección genómica usando toros jóvenes (GS) e incluyendo
genotipos de 5000 vacas en la población de referencia. Se supuso que se usó un chip de 50K SNP. Los
supuestos que se tuvieron en cuenta en cada esquema se pueden observar en la Tabla 1. La precisión
de las pruebas de progenie se calculó suponiendo una progenie de 100 hijas por toro, equivalentes a 50
hijas efectivas. La edad de un toro probado por progenie al nacer sus hijos fue 6.5 años y la edad de un
toros evaluados genómicamente al nacer sus hijos fue 2.2 años.
El número de toros genotipificados fue de 1000 en el esquema que utilizó GS, con una precisión de la
evaluación genómica de 0.72. La precisión de las evaluaciones genómicas fue obtenida mediante la
207
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
aplicación de las formulas desarrolladas por Daetwyler et al. (2010), suponiendo un tamaño efectivo de
población de 100 y un tamaño del genoma de 30 Morgans. Se supuso que los marcadores explican el
80% de la varianza genética aditiva. Los porcentajes de hembras en cada una de las 6 clases de edades
consideradas (de 2 a 7 años) fueron 25, 21, 18, 15, 13, y 8%. El número de vacas genotipificadas en el
esquemas GS fue de 5000, equivalentes a 1580 nuevos genotipos de toros en la población de referencia.
El progreso genético anual (ΔG/año) expresado en desviaciones estándar genéticas aditivas, la tasa de
consanguinidad por año (ΔF/año), y el incremento de la consanguinidad por unidad de progreso genético
(ΔF/ΔG) fueron los criterios usados para evaluar los programas genéticos.
Tabla 1. Características de los esquemas tradicional (PT), genómico (GS) y con selección genómica y
pruebas de progenie (GS+PT).
VÍAS DE SELECCIÓN
Programa
Suposiciones
SB
SC
DB
DC
PT
Seleccionados/Candidatos
2/60
5/60
200/30,000
Precisión de la selección
0.82
0.82
0.42
Li
6.50
6.50
3.22
4.94
GS
Seleccionados/Candidatos
20/1,000
20/1,000
200/30,000
Precisión de la selección
0.86
0.86
0.42
Li
2.20
2.20
3.22
4.94
Vacas Genotipadas
5,000
Vía de padres de toros: SB, vía de padres de vacas: SC, vía de madres de toros: DB, vía de madres de
vacas: DC, Intervalo generacional para la i-ésima vía de selección: Li.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La respuesta anual a la selección fue mayor para el programa GS (0.43%), que para PT (0.21%) (Tabla
2). Los incrementos de consanguinidad por unidad de progreso genético fueron 1.05% para PT y 0.15%
para GS.
Tabla 2. Tasa de Progreso genético por año, tasa de consanguinidad por año e incremento de la
consanguinidad por unidad de progreso genético para distintos programas de selección.
ΔG/año
ΔF/año
ΔF/ΔG
Programa
0.21
0.22
1.05
PT
0.43
0.06
0.15
GS
PT esquema basado en prueba de progenie, GS esquema basado en selección genómica de toros
jóvenes incorporando genotipos de vacas a la población. ΔG/año unidades de desviación estándar
genética aditiva de progreso genético anual, ΔF/año tasa de consanguinidad anual, ΔF/ΔG razón entre
la tasa de consanguinidad anual y el progreso genético por año.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Estos resultados preliminares permiten pensar que la incorporación de la GS incorporando vacas en la
población de referencia es una opción viable para el mejoramiento genético de esta población y de otras
poblaciones similares de bovinos productores de leche en otras partes del mundo. En términos generales
confirman la idea de que se puede duplicar la respuesta a la selección por año usando GS.
Aunque se ha pensado que los incrementos de consanguinidad podrían ser relativamente altos en
poblaciones pequeñas cerradas de bovinos de leche que tienen cortos intervalos generacionales al usar
GS, en este estudio que usa 20 toros para la vía SB, el incremento de consanguinidad por año en el
programa GS es mucho menor a uno que usa PT. Esto se debe a que se pueden usar muchos más toros
208
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
por la vía SB en un programa que usa GS que en uno de PT, sin afectar en gran medida la intensidad de
selección de toros. La ΔF/año en el programa de PT se puede reducir incrementando el número de toros
en la vía SB, pero eso reduciría aún más la ΔG/año. Los valores de incremento de la consanguinidad por
unidad de progreso genético, que permiten evaluar el incremento de la consanguinidad de modo más
adecuado en poblaciones seleccionadas, indican una gran ventaja para GS sobre PT.
Para cualquiera de los dos programas, la existencia de semen congelado de toros superiores, poco
relacionados genéticamente con la población local, evaluados en otros países, puede permitir mantener
bajas las tasas de consanguinidad y mantener la variabilidad genética.
Los programas que usan GS se deben optimizar, considerando buscar un equilibrio entre la tasa de
progreso anual y el incremento de la consanguinidad y explorando otras posibilidades de selección de
toros y vacas usando GS, PT y otras opciones de evaluación genómica, nacionales e internacionales.
RECONOCIMIENTOS
Se agradece el apoyo del proyecto PAPIIT-UNAM IN222314.
BIBLIOGRAFÍA
Daetwyler HD, Pong-Wong R, Villanueva B, Woolliams JA (2010). The Impact of Genetic Architecture on
Genome-Wide Evaluation Methods. Genetics 185: 1021-1031.
Goddard MG and Smith C (1990). Optimum Number of Bull Sires In Dairy Cattle Breeding. Journal of
Dairy Science 73: 1113-1122.
Mc Hugh N, Meuwissen THE, Cromie R, Sonesson K (2011). Use of female information in dairy cattle
genomic breeding programs. Journal of Dairy Science 94: 4109–4118.
Montaldo HH, Castillo-Juárez H, Valencia-Posadas M, Cienfuegos-Rivas EG, and Ruiz-López FJ (2010).
Genetic and environmental parameters for milk production, udder health, and fertility traits in Mexican
Holstein cows. Journal of Dairy Science 93: 2168–2175.
Pryce JE, Goddard ME, Raadsma HW, Hayes BJ (2010). Deterministic models of breeding scheme
designs that incorporate genomic selection. Journal of Dairy Science 93: 5455-5466.
209
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DE LA POBLACIÓN SIMBRAH MEXICANA MEDIANTE
ANÁLISIS DE PEDIGRÍ.
GENETIC DIVERSITY ASSESMENT OF THE MEXICAN SIMBRAH POPULATION THROUGH
PEDIGREE ANALYSIS.
Vega MVE*1, Ríos UA1, Montaño BM1, Román PSI1 y Martínez VG1
1
Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP)
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Una forma de analizar la diversidad genética de una población se basa en el análisis de la información
contenida en los registros de pedigrí. Esta información genealógica junto con estadísticos basados en las
probabilidades de origen de los genes, proveen información valiosa para el estudio de poblaciones que
han estado bajo selección por varios años (Boichard et al., 1997). El objetivo de este trabajo fue
determinar la consanguinidad, el número efectivo de fundadores, el número efectivo de ancestros y el
número efectivo de genomas fundadores y la relación que existe entre estos últimos tres parámetros en
la raza Simbrah mexicana.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron los datos genealógicos de 75,149 animales Simbrah de registro nacidos de 1977 a 2014. El
coeficiente de consanguinidad se calculó para todos los animales nacidos de 1990 a 2014, mientras que
el intervalo generacional, el tamaño efectivo de población, el número efectivo de fundadores, el número
efectivo de ancestros, el número efectivo de genomas fundadores y el número efectivo de no fundadores
se estimaron para animales nacidos en cinco periodos diferentes (1990-1994, 1995-1999, 2000-2004,
2005-2009, 2010-2014), los cuales constituyeron las diferentes subpoblaciones analizadas.
Adicionalmente, para los animales nacidos de 2010 a 2014 (quinta población de referencia), se estimaron
las contribuciones genéticas total, marginal y acumulada de los ancestros con la mayor influencia
genética. La información genealógica se subdividió en periodos de cinco años con el fin de estudiar la
tendencia de los estimadores de los parámetros de variabilidad genética a través del tiempo. La longitud
de los periodos se determinó con base en la longitud del intervalo generacional (alrededor de 5 años).
Con excepción del coeficiente de consanguinidad y el tamaño efectivo de población, los parámetros de
diversidad genética fueron estimados con base en la teoría de probabilidad de origen de los genes. El
coeficiente de consanguinidad se define como la probabilidad de que un individuo tenga dos alelos
idénticos por descendencia en cualquier locus, y ocurre cuando se aparean individuos emparentados. El
tamaño efectivo de población se define como el número de animales sexualmente maduros que
conducirían al incremento de consanguinidad actual si ellos contribuyeran en la misma medida a la
siguiente generación. El número efectivo de fundadores se define como el número de fundadores
igualmente contribuyentes que se espera que produzcan la misma diversidad genética que en la
población de referencia en estudio. El número efectivo de ancestros es el número mínimo de ancestros
(no necesariamente fundadores) que se requieren para explicar toda la diversidad genética de la
población en estudio. El número efectivo de genomas fundadores es la probabilidad de que un gen
presente en los fundadores se encuentre todavía en la población estudiada. El coeficiente de
consanguinidad, el número efectivo de fundadores, el número efectivo de no fundadores y el número
efectivo de genomas fundadores se estimaron con el programa CFC (V1.0); el índice de integridad del
pedigrí, el intervalo generacional, el tamaño efectivo de la población y el número efectivo de ancestros se
estimaron con el programa ENDOG (V4.8); las contribuciones genéticas total, marginal y acumulada se
estimaron con el programa PEDIG (Boichard D. 2007).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
210
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
El Cuadro 1 muestra la descripción del pedigrí de cada una de las subpoblaciones estudiadas. El número
de individuos en las poblaciones de referencia varió de 5,341 (1990-1994) a 13,827 (2010-2014). El
porcentaje de individuos con ambos padres conocidos fue del 99.9% en todos los casos. El tamaño del
pedigrí varió de 7,054 para el periodo 1990-199 a 37,581 individuos para el periodo 2005-2009. En la
Figura 1 se muestra la evolución de la consanguinidad de la población Simbrah mexicana en el periodo
1990-2014. Los niveles de consanguinidad fueron bajos, variando de 0.14% (1990) a 0.03% (2014).
Aunque los coeficientes de consanguinidad fluctuaron a través de los años, existe una tendencia de
decremento global de la consanguinidad. Los coeficientes de consanguinidad obtenidos pueden estar
sesgados (subestimados), debido a que el método de cálculo implementado en el programa CFC no
ajusta por pérdidas en la información del pedigrí (VanRaden, 1992). Sin embargo, se asume que el sesgo
fue menor conforme pasaron los años, ya que la calidad del pedigrí mejoró a través de los años; la
calidad del pedigrí en la generación paternal fue de 99.9%.
Cuadro 1. Descripción del pedigría para cada población de referencia.
1990-1994
1995-1999
2000-2004
2005-2009
2010-2014
Nr
5,341
14,282
19,141
19,279
13,827
Np
10,976
26,009
35,347
37,581
30,771
Nf
3,920
8,403
10,071
9,645
7,031
Nd
7,054
17,597
25,265
27,923
23,731
Nu
2
9
11
13
9
aNr=
número de individuos en la población de referencia; Np= número de individuos en el pedigrí; Nf=
número de fundadores; Nd= número de individuos con dos padres conocidos; Nu= número de individuos
con un padre conocido.
Los números efectivos de fundadores, ancestros, genomas y no fundadores aumentaron de 1990 a 2009,
pero disminuyeron de 2010 a 2014, indicando pérdida de diversidad genética en este último periodo
(Cuadro 2). El intervalo generacional promedio de los 5 subpoblaciones fue de 6.28 años, menor a la
encontrada por Carvalho et al., para el promedio de diferentes razas Cebuína en Brasil. La relación entre
el número efectivo de ancestros y el de fundadores (fa/fe) indica que la pérdida se puede deber
parcialmente a la presencia de cuellos de botella en el pedigrí. El valor de fa/fe más bajo fue de 0.31 para
animales nacidos en el periodo 1990-1994. La relación entre el número efectivo de genomas fundadores
y el número efectivo de fundadores (Ng/fe) es un indicador de la magnitud de la deriva genética; valores
menores indican mayor pérdida de la diversidad genética, que resulta de un menor número de
reproductores en estos periodos. Los valores de Ng/fe fueron: 0.27 y 0.45 para animales nacidos en los
periodos 1990-1994 y 2005-2009.
211
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Los estimadores de la contribución genética marginal mostraron que el ancestro que explicó la mayor
variación genética total de los animales nacidos en el periodo 2010-2014 fue de solo 0.21%, mientras que
los primeros 10 ancestros explicaron en total únicamente el 1.4% (Cuadro 3). En general, la contribución
genética marginal de estos 10 ancestros es baja pero uniforme, comparada con la observada en otras
poblaciones bovinas productoras de carne. Para una población Indobrasil Brasileña, Filho et al. (2002)
reportaron que el 50.6% de la contribución genética marginal fue explicada por 50 ancestros (un tercio de
ancestros que el del presente trabajo). Similarmente, Solkner et al. (1998) reportaron que en la población
Simmental Austriaca el ancestro más importante contribuyó con el 4.3% de los genes a la población de
referencia.
Cuadro 2. Estimadores de variabilidad genéticaa para cada población de referencia.
1990-1994
1995-1999
2000-2004
2005-2009
2010-2014
Ig
4.55 ± 2.75
6.77 ± 3.62
6.58 ± 4.42
7.86 ± 5.32
5.66 ± 0.93
Ne
79.34
56.70
63.45
62.15
36.39
fe
759.00
365.00
493.00
661.00
346.00
Fa
235.00
318.00
389.00
551.00
326.00
Ng
203.72
265.23
285.84
295.16
195.11
fn
949.83
813.926
687.778
596.283
339.937
aIg=
intervalo generacional; Ne= tamaño efectivo de población; fe= número efectivo de fundadores; fa=
número efectivo de ancestros; Ng=número efectivo de genomas fundadores; fn= número efectivo de no
fundadores.
Cuadro 3. Los 10 ancestros con la mayor contribución genética al genoma de los animales Simbrah
nacidos de 2010 a 2014.
Sexo
Ancestro
Año No.
de
De
nac. crías
Contribución genética (%)
Total
Marginal Acum.
PRR PACESETTER 205C
Macho 1993 150
0.021
0.021
0.021
HR POWER HOUSE 1
Macho 1998
39
0.018
0.018
0.039
LMC WARRIOR 5S/3
Macho 2006 453
0.016
0.012
0.052
K BAR SOUTHERN COMFORT
Macho 1988 444
0.015
0.015
0.066
CCR TORNADO 103-9
Macho 1999 739
0.014
0.014
0.081
RX BECHEROVKA D422
Macho 1994
15
0.013
0.003
0.083
RAE MALUS P31/4
Macho 2004 377
0.012
0.012
0.095
" EL PADRINO "
Macho 1989 235
0.012
0.004
0.099
MR DON ENRIQUE K290
Macho 2000 321
0.012
0.012
0.111
UANL H-060
Macho 1998 300
0.011
0.011
0.122
CONCLUSIONES
La población Simbrah mexicana presentó niveles de consanguinidad con tendencia a disminuir a través
del tiempo, pero ha experimentado reducción en su diversidad genética en los últimos 20 años debido a
cuellos de botella y deriva genética.
212
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE LA GALLINA DE TRASPATIO (GALLUS GALLUS
DOMESTICUS) EN MÉXICO.
MORPHOLOGICAL CHARACTERIZATION OF THE MEXICAN BACKYARD CHICKEN (GALLUS
GALLUS DOMESTICUS).
Vega MVE*1, Román PSI1, Durán AM2, Vélez IA1, Cabrera TE1, Cantú CA1, De La Cruz CL1, Maldonado
JJA1, Martínez SFE1, Martínez VG1, Ríos UA1, Bagnato A3, Ruíz LFJ1.
1
Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP), 2 Facultad de Estudios
Superiores Cuautitlán; UNAM, 3 Universidad de Milán.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La avicultura de traspatio es el aprovechamiento de animales, como gallinas, guajolotes, patos y otras
aves en el patio de la casa o alrededor de la misma; en ello, se tiene como característica ser a pequeña
escala, realizada en la mayoría de los casos en áreas rurales, suburbanas y zonas marginadas. La
productividad de las gallinas de traspatio es menor que las de las razas mejoradas o las cruzas utilizadas
por la avicultura industrial, pero sus costos de producción son mínimos. La finalidad principal de la
producción es el autoconsumo familiar y venta de excedentes. Proporciona proteína de origen animal y
mejora la economía con la venta de huevo o carne. Complementa a la avicultura comercial, para un
mercado que demanda productos diferenciados; por esto, se convierte en una escala económica difícil de
medir (Gutiérrez et al., 2007). Con base en lo anterior, el objetivo de este trabajo fue caracterizar algunas
variables morfológicas cuantitativas de las gallinas de traspatio provenientes de 18 estados de la
República Mexicana, así como estimar las correlaciones fenotípicas entre las variables morfológicas
cuantitativas.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se analizó la información morfológica de 255 gallinas de traspatio resultante de un muestreo por
oportunidad que involucró unidades rurales de producción ubicadas en 52 municipios de 18 estados de la
República Mexicana: Aguascalientes, Baja California Norte, Baja California Sur, Chihuahua, Coahuila,
Colima, Distrito Federal, Durango, Estado de México, Guanajuato, Guerrero, Jalisco, Morelos, Nayarit,
Nuevo León, Oaxaca, Tamaulipas y Veracruz. La información se recolectó de 2013 a 2014 a partir de
gallinas adultas de ambos sexos (78 machos y 179 hembras). Las variables cuantitativas evaluadas
fueron: longitud del cuerpo, envergadura, circunferencia de la pechuga, longitud del tarso, peso vivo
corporal, robustez y solidez. Las mediciones de las variables cuantitativas se realizaron siguiendo los
Lineamientos para la Producción Animal y la Salud de la Organización de las Naciones Unidas para la
Alimentación y la Agricultura (FAO, 2012). El peso de las gallinas se obtuvo con una báscula de reloj con
capacidad para 10 kg, mientras que longitud del cuerpo, envergadura, circunferencia de la pechuga y
longitud del tarso se midieron con una cinta métrica flexible de plástico. Las siete variables cuantitativas
se definieron de la siguiente manera: longitud del cuerpo, medida como la distancia en centímetros que
existe entre la base del pico y el extremo caudal, a la altura de la glándula uropígea, sin considerar las
plumas de la cola, teniendo el pescuezo del animal extendido; envergadura, medida como la distancia en
centímetros, de la falange terminal de un ala a la falange terminal de la otra ala (sin incluir las plumas),
manteniendo las alas del ave completamente extendidas; circunferencia de la pechuga, medida en
centímetros, a nivel de la punta de la quilla, pasando la cinta métrica por la parte posterior de la inserción
de las alas; longitud del tarso, correspondió al largo del tarso-metatarso y se definió como la distancia de
la articulación intertarsiana a la articulación metatarso falángica, en centímetros; peso corporal,
correspondió al peso del animal vivo en kilogramos, medido con una báscula en el momento en que se
realizó la visita a la unidad de producción; robustez, definida como: la circunferencia de la pechuga
dividida entre la longitud corporal, multiplicada por 100; y solidez, definida como el peso corporal dividido
entre la longitud corporal y multiplicada por 100 (Oblakova, 2006; Yakubu, 2013).
213
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Se utilizó un modelo lineal general para cada una de las características cuantitativas analizadas a través
del procedimiento GLM de SAS (2012). En todos los casos, el modelo estadístico incluyó los efectos de
sexo (machos y hembras), estado (Aguascalientes, Baja California Norte, Baja California Sur, Chihuahua,
Coahuila, Colima, Distrito Federal, Durango, Estado de México, Guanajuato, Guerrero, Jalisco, Morelos,
Nayarit, Nuevo León, Oaxaca, Tamaulipas y Veracruz) y municipio anidado dentro de estado. Las
diferencias entre las medias de machos y hembras se estimaron con la opción PDIFF del procedimiento
GLM. Adicionalmente, con el procedimiento CORR de SAS (2012) se estimaron los coeficientes de
correlación de Pearson para las variables longitud del cuerpo, envergadura, circunferencia de la pechuga,
longitud del tarso y peso corporal, con el fin de saber qué variables son las que tenían una asociación
más fuerte con el peso corporal. El coeficiente de regresión lineal del peso corporal sobre la
circunferencia de la pechuga del animal se estimó utilizando el procedimiento REG de SAS (2012).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El efecto de sexo fue importante para todas las variables analizadas (P < .0001), excepto para robustez
(P = .3369). El efecto de estado fue importante (P < 0.0001) para todas las variables analizadas, mientras
que municipio solo influyó significativamente a envergadura (P < 0.0001), peso corporal (P = .0271) y
solidez (P = .0267). Las medias de cuadrados mínimos y errores estándar de las variables cuantitativas
estudiadas para gallinas machos y hembras se presentan en el Cuadro 1. Los machos tuvieron mayor (P
< 0.0001), longitud corporal (4.85 cm; 12.01%), envergadura (5.66 cm; 12.62%), circunferencia de la
pechuga (2.94 cm; 9.29%), longitud del tarso (1.73 cm; 17.91%) peso corporal (0.65 kg; 30.81%) y
solidez (9.9 puntos porcentuales; 19.19%) que las hembras. No se encontraron diferencias (P > 0.05)
entre machos y hembras para robustez (81.91±1.42 vs 80.22±1.75, respectivamente).
Cuadro 1. Medias de cuadrados mínimos y errores estándar de variables morfológicas cuantitativas de
gallinas de traspatio, por sexo.
Sexo
Longitud
Circunferencia Longitud
Envergadura,
del cuerpo,
de la
del Tarso,
cm
cm
pechuga, cm
cm
Hembras
35.53±0.61a
39.19±0.69a
28.70±0.48a
7.93±0.15a 1.46±0.06a 81.91±1.42 4.17±0.15a
Machos
40.38±0.74b
44.85±0.83b
31.64±0.59b
9.66±0.18b 2.11±0.08b 80.22±1.75 5.16±0.18b
a,b Medias
Peso
corporal,
kg
Índice de
robustez
Índice de
solidez
con diferente literal son diferentes (P<0.001).
El análisis de regresión mostró que el coeficiente de regresión del peso corporal sobre la circunferencia
de la pechuga fue diferente de cero (P < 0.0001) tanto en machos como en hembras, así como en
conjunto. En machos, el peso corporal aumentó 126 g por cada centímetro que aumentó la circunferencia
de la pechuga, mientras que en hembras el peso corporal aumentó 61 g por cada centímetro que
aumentó la circunferencia de la pechuga. La ecuación de regresión estimada para los datos agrupados
fue: peso corporal =-1.274 + (0.098 x circunferencia de la pechuga). Los errores estándar del intercepto y
del coeficiente de regresión fueron 0.222 y 0.007 kg, respectivamente. En el Cuadro 2 se muestran los
coeficientes de correlación de Pearson estimados a partir de los datos individuales de machos y
hembras, mientras que en el Cuadro 3 se presentan los coeficientes de correlación estimados a partir de
los datos de machos y hembras agrupados. En todos los casos las correlaciones fueron de menor
magnitud para hembras que para machos. En hembras la correlación más alta, aunque de magnitud
moderada, se observó para peso corporal con circunferencia de la pechuga (r=0.52). Las correlaciones
de envergadura con longitud del tarso y peso corporal fueron las más bajas (r=0.08 y r=0.13,
respectivamente); en contraste, estas correlaciones fueron moderadas en machos (r=0.55 y r=0.49,
respectivamente). En machos el peso corporal tuvo correlaciones moderadas a altas con longitud
corporal (r=0.65), longitud del tarso (r=0.67) y circunferencia de la pechuga (r=0.76). Con la información
agrupada de machos y hembras todos los coeficientes de correlación fueron diferentes de cero (P <
0.0001), positivos y de magnitud moderada a alta, indicando el incremento de una variable al
incrementarse las otras.
214
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 2. Coeficientes de correlación de Pearson para variables morfológicas cuantitativas de gallinas
machos (debajo de la diagonal) y hembras (arriba de la diagonal).
Circunferencia
Peso
Longitud del
Envergadura,
Longitud del
Variable
de la pechuga,
corporal,
cuerpo, cm
cm
tarso, cm
cm
kg
b
b
Longitud del cuerpo,
0.35
0.20
0.17b
0.20b
cm
0.46b
0.34b
0.08
0.13
Envergadura, cm
Circunferencia de la
0.56b
0.63b
0.13
0.52b
pechuga, cm
0.43b
0.55b
0.56b
0.41b
Longitud del tarso, cm
0.65b
0.49b
0.76b
0.67b
Peso corporal, kg
b Coeficiente
de correlación diferente de cero (P<0.05).
Las correlaciones más altas se observaron para circunferencia de la pechuga con envergadura (r=0.67),
peso corporal (r= 0.69) y longitud del cuerpo (r=0.60) y las más bajas para longitud del tarso con
envergadura (r=0.47), longitud del tarso (r=0.44) y circunferencia de la pechuga (r=0.43). Las
correlaciones fenotípicas de peso corporal con longitud del cuerpo, envergadura y longitud del tarso
fueron moderadas (r=0.58, r=0.54 y r= 0.57, respectivamente).
Cuadro 3. Coeficientes de correlación de Pearson para variables morfológicas cuantitativas de gallinas de
traspatio (datos de machos y hembras agrupados).
Variable
Longitud del
cuerpo, cm
Envergadura, cm
Circunferencia de la
pechuga, cm
Longitud del tarso, cm
0.58b
Peso corporal, kg
b Coeficiente
Envergadura, cm
Circunferencia
de la pechuga,
cm
0.60b
0.67b
0.44b
0.47b
0.43b
0.58b
0.54b
0.69b
Longitud del tarso,
cm
0.57b
de correlación diferente de cero (P<0.05).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Las variables estudiadas mostraron que las gallinas de traspatio en México presentan una diferenciación
morfológica importante entre machos y hembras para las características estudiadas, excepto para
robustez en la cual no se detectaron diferencias. Las correlaciones entre características, en todos los
casos, fueron de menor magnitud para hembras que para machos, siendo de magnitud moderada a baja
en hembras y moderada en machos.
215
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTOS GENÉTICOS DIRECTOS, MATERNOS Y DE HETEROSIS PARA CARACTERÍSTICAS
PRODUCTIVAS PARA UN DIALELO CON HOLSTEIN Y SUIZO PARDO EN CLIMA SUBTROPICAL
HÚMEDO.
DIRECT, MATERNAL AND HETEROTIC EFFECTS FOR PRODUCTION TRAITS OF A TWO BREED
DIALLEL BETWEEN HOLSTEIN AND BROWN SWISS UNDER SUBTROPICAL CONDITIONS.
Vega MVE*1, Calderón RRC1, Ríos UA1, Montaño BM1, Román PSI1, Martínez VG1,
1
Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP).
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El cruzamiento puede mejorar los beneficios para la mayoría de los productores de leche si se utilizan
razas similares. Sin embargo, es importante subrayar que el cruzamiento no puede sustituir a la cría de
razas puras. La heterosis obtenida de los cruzamientos es una ventaja adicional a la generada por los
efectos genéticos aditivos que se obtienen en la selección de las razas puras. La magnitud de la
ganancia adicional dependerá del número y tipo de razas. La mayoría de los estudios reportan al menos
un aumento del 10% en la ganancia económica total por vaca entre cruzas F1 entre razas "no
relacionadas" (Kargo S.M. 1997). El objetivo de este trabajo fue el estimar los efectos genéticos directos,
maternos y de heterosis en un dialelo entre Holstein y Suizo Pardo en clima Subtropical Húmedo.
MATERIALES Y MÉTODOS
El estudio se realizó en el sitio experimental Las Margaritas, ubicado en el municipio de Hueytamalco, en
la sierra nororiente del estado de Puebla, México, a 500 m.s.n.m. Presenta un clima subtropical húmedo
semicálido. Se utilizó la información productiva y genealógica de un dialelo de dos razas entre Holstein
(HO) y Suizo Pardo (SP) un total de 200 vacas de las razas Holstein (n=64), Pardo Suizo (n=91) y sus
cruzas reciprocas HO/SP (29) y SP/HPO (25), las cuales fueron producidas con 106 sementales y 153
madres a través inseminación artificial y monta natural. Las 354 vacas evaluadas nacieron de 1997 a
2006 y parieron de 1998 a 2014. El manejo reproductivo se inició cuando las hembras alcanzaron
aproximadamente 350 kg. La detección de calores (estros) se realizó una hora (h) en la mañana (de
06:00 a 07:00 h) y otra h en la tarde (de 17:00 a 18:00 h), con el apoyo de un toro con pene desviado.
Las hembras en celo fueron inseminadas de la manera convencional. El diagnóstico de gestación se
realizó a partir de los 45 d posteriores a la última inseminación. Las vacas se mantuvieron en pastoreo
rotacional en potreros con zacate estrella de África (Cynodon plectostachyus). Los periodos de ocupación
de los potreros fueron de 2 a 3 d, y los periodos de descanso fueron de 35 a 40 d, dependiendo de la
época del año, con una carga animal de 2,5 unidades animal por hectárea al año. Durante la época de
sequía (noviembre a marzo), las vacas recibieron de 20 a 30 kg/animal/d de caña japonesa (Saccharum
sinense). Además, las vacas en lactancia recibieron durante el ordeño 3,5 kg de un alimento concentrado
comercial (16% de proteína cruda y 70% de total de nutrientes digestibles) al d, mientras que las vacas
secas recibieron 2 kg del mismo tipo de alimento al d. Las vacas se separaron de sus crías al tercer d
posparto, posteriormente se manejaron en tres lotes: 1) vacas del parto al quinto mes de lactancia, 2)
vacas del quinto mes de lactancia al secado y 3) vacas secas. Las vacas en producción ingresaron a la
sala de ordeño a partir del cuarto d posterior al parto. Se ordeñaron dos veces al día mediante
ordeñadora mecánica. El pesaje de la leche se realizó mecánicamente en cada ordeño con medidores
proporcionales tipo Waikato, los cuales estaban integrados a la ordeñadora mecánica. La producción total
de leche de cada día se obtuvo sumando la leche producida durante el primer ordeño a la producida
durante el segundo. Las vacas se secaron cuando tuvieron siete meses de gestación o su producción de
leche fue menor a 2 kg por d.
Características analizadas. Las características analizadas fueron: 1) producción total de leche por
lactancia (PTL, kg), definida como los kilogramos de leche producidos por vaca durante la lactancia; 2)
duración de la lactancia (DL), definida como el número de días transcurridos desde el parto hasta el
secado; 3) producción de leche por día (kg/d; PLD), calculada como PTL/DL; 4) producción de leche por
216
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
d interparto (PLI), definida como PTL/intervalo entre partos (kg/d interparto); 5) peso de la vaca al parto
(PP; kg).
Análisis estadísticos. Para el análisis de los datos se utilizó el procedimiento MIXED del paquete
estadístico SAS. Los modelos incluyeron los efectos fijos de raza del semental (HO y SP), raza de la
madre (HO y SP), año de parto (1997 a 2006), época de parto (1: Nov-feb; 2: mar-jun y 3: jul-oct) y la
interacción raza del semental * raza de la madre, con excepción del análisis de PLI que no incluyó el
número de parto. La opción DDFM=Satterth del procedimiento MIXED de SAS fue utilizada para calcular
los grados de libertad del denominador para las pruebas de los efectos fijos. Se utilizaron contrastes para
estimar la heterosis individual y las diferencias entre los efectos genéticos directos y los efectos genéticos
maternos de Suizo Pardo y Holstein con base en los modelos siguientes (Dickerson, 1969 y1973):
HO = μn + giHO + gMHO + gNHO
SP = μn + giSP + gMSP + gNSP
HOSP = μn + ½(giHO + giSP ) + gMSP + gNSP + hiHOSP
SPHO = μn + ½(giSP + giHO) + gMHO + gNHO + hiSPHO
En donde: HO y SP = son Holstein y Suizo Pardo; HOSP y SPHO = son cruzas recíprocas entre HO y
SP; μn = promedio de las razas puras involucradas en el cruzamiento dialelo; g iHO y giSP = desviación
debida al efecto directo promedio de los genes del individuo, provenientes de la raza G o C; g MHO y gMSP =
desviación debida a los efectos promedio, a través del ambiente materno, por genes de madres de raza
HO o SP; gNHO y gNSP = desviación debida a los efectos promedio, a través del ambiente materno de las
abuelas HO o SP, que puede afectar la habilidad materna de sus hijas; h iSPHO y hiHOSP = desviación
debida al incremento de la heterocigosis promedio de cruzas F 1 SPHO y HOSP. Para estimar las
diferencias entre los efectos genéticos directos de HO y SP, se utilizó el contraste (HO + HOSP - SP SPHO), mientras que con el contraste SPHO - HOSP se estimaron diferencias entre los efectos genéticos
maternos, asumiendo que gNHO - gNSP fue igual a cero. La heterosis individual se calculó mediante el
contraste [HOSP + SPHO - HO - SP] / 2.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En el Cuadro 1 se presentan los niveles de significancia para las características analizadas. El efecto de
raza de semental solo fue significativo para DL (P < 0.05), el año de parto lo fue para PTL y PLI; la época
de parto fue significativa para PTL, PLD y PP. La interacción Raza del Semental * Raza de la Madre fue
significativa (P < 0.05) para PTL, y PLI.
Cuadro 1. Niveles de significancia estadística para los efectos fijos considerados en los modelos para
producción total de leche por lactancia (PTL), duración de la lactancia (DL), producción de leche por día
(PLD), producción de leche por día interparto (PLI) y peso de la vaca al parto (PP).
Fuente de Variación
PTL
DL
PLD
PLI
PP
Raza del Semental
0.2047
0.0463
0.4335
0.8256
0.4608
Raza de la Madre
0.3657
0.2051
0.5727
0.9104
0.5875
Año de Parto
<.0001
0.3881
0.2407
<.0001
0.2309
Época de Parto
0.0205
0.4808
0.0102
0.1154
0.051
Número de Parto
<.0001
0.6359
<.0001
-
<.0001
Raza del Semental * Raza de la Madre
0.0393
0.0571
0.0004
0.0002
0.7977
217
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Las medias de cuadrados mínimos y errores estándar para las características bajo estudio se presentan
en el Cuadro 2. No se encontraron diferencias entre las razas puras y sus cruzas reciprocas para DL, y
PP. Para PTL las cruzas reciprocas y HO puro tuvieron mejor comportamiento que las SP (P < 0.05). En
contraste, para PLD las HO tuvieron significativamente menor comportamiento que las cruzas reciprocas
como consecuencia de una mayor DL para esta raza. Para PLI la cruza reciproca 1/2HO 1/2SP tuvo
mejor comportamiento (P < 0.01) que la SP. En contraste los resultados presentados por Heins (2007) de
varios estudios, muestran que las cruzas reciprocas de la cruza HO y SP fueron muy similares en la
producción de leche con respecto a las razas paternas.
Cuadro 2. Medias de cuadrados mínimos y errores estándar para producción total de leche por
lactancia (PTL, kg), duración de la lactancia (DL, d), producción de leche por día (PLD, kg/d),
producción de leche por día interparto (PLI, kg/d) y peso de la vaca al parto (PP; kg), por genotipo.
Genotipo
PTL
DL
PLD
PLI
PP
1/2HO 1/2SP
4128.22 ± 316.62ab
392.05 ± 23.25a
10.14 ± 0.59a
9.51 ± 0.57a
516.47 ± 12.70a
1/2SP 1/2HO
3333.78 ± 271.72a
311.30 ± 20.72a
10.34 ± 0.52a 8.39 ± 0.45ab 509.53 ± 10.99a
HO
4754.32 ± 958.24a
483.42 ± 72.08a
8.32 ± 1.74b
8.25 ± 1.99ab 547.01 ± 39.17a
SP
1861.85 ± 965.35b
221.27 ± 72.31a
9.41 ± 1.76ab
6.70 ± 1.99b
a,b
474.60 ± 39.35a
literales diferentes dentro de columna (P < 0.5)
Los estimadores de heterosis, efectos directos y maternos para las características bajo estudio se
presentan en el Cuadro 3. El contraste que prueba la heterosis fue significativo (P < 0.05) para PTL, PLD
y PLI, con una heterosis en porcentaje de 12.78, 15.54 y 19.9, respectivamente. Vargas y Romero
(2010) reporta un porcentaje de heterosis de 3% para PDL, menor al encontrado en este estudio. Los
efectos genéticos maternos y directos solo fueron importantes (P < 0.05) para.
Cuadro 3. Estimadores de heterosis, efectos maternos y directos para producción total de leche por
lactancia (PTL, kg), duración de la lactancia (DL, d), producción de leche por día (PLD, kg/d), producción
de leche por día interparto (PLI, kg/d) y peso de la vaca al parto (PP; kg).
Contraste Lineal
Heterosis
Maternos
Directos
a Efecto
PTL
422.92 ± 179.04a
794.44 ± 482.18
3686.91 ± 2052.12
DL
PLD
PLI
-0.67 ± 12.36 1.38 ± 0.33a 1.48 ± 0.32a
PP
2.19 ± 6.73
34.105a
-0.2 ± 0.89
1.11 ± 0.88
6.94 ± 18.78
342.90 ± 152.07a
-1.3 ± 3.73
2.67 ± 4.21
79.35 ± 83.14
80.75 ±
significativo (P < 0.5)
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
El cruzamiento entre animales Holstein y Suizo Pardo Puros en clima subtropical húmedo resultó en
incrementos en la producción total de leche por lactancia, producción de leche por día y en la producción
de leche por día interparto. La heterosis en porcentaje fue de 12.78, 15.54 y 19.90 para PTL, PLD y PLI,
respectivamente. Los efectos genéticos maternos y directos únicamente fueron importantes para DL
218
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DEL CERDO CRIOLLO MEXICANO: CARACTERIZACIÓN
FENOTÍPICA.
GENETIC DIVERSITY STUDY OF MEXICAN CREOLE PIG: PHENOTYPIC CHARACTERIZATION.
Valera JJD1*, Román PSI2, Durán AM1, Ruiz LFJ.2
1Facultad
de Ciencias Naturales. UAQ.2 Centro Nacional de Investigación en Fisiología y Mejoramiento
Animal. INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Para afrontar los retos de la alimentación de la población mundial y mantener un equilibrio social y
ambiental adecuado, las razas localmente adaptadas de animales jugarán un papel clave, y los esfuerzos
encaminados a su caracterización, conservación y mejora genética son cruciales (Revidatti et al., 2014).
Los cerdos criollos presentan potencialidades y bondades que hacen deseable su utilización; ya que
estos se reproducen y crecen en condiciones de manejo y medioambientales difíciles. Además de lo
anterior, éstos se pueden criar utilizando productos y subproductos agrícolas locales lo que permite tener
un menor costo de producción (Velázquez et al., 1998).
En México se reconocen tres razas de cerdos criollos (pelón mexicano, cuino y pata de mula o cáscate).
Estas razas tienen como principal característica la adaptación al medio ambiente local; lo que fue posible
por su rusticidad, tolerancia a altas temperaturas y resistencia a parasitosis externas (Lemus, 2008).
Las poblaciones animales nativos o criollos o localmente adaptadas de Latinoamérica y el Caribe han
sido reducidas, en parte a causa de la introducción de razas mejoradas para la producción intensiva;
entre otros factores. Como resultado, la crianza de cerdos criollos ha sido relegada a zonas apartadas del
país, tales como las montañas y regiones forestales (Lemus, 2010).
OBJETIVO
El objetivo fue describir la variabilidad fenotípica de características cuantitativas y cualitativas de la
población del cerdo criollo en México.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se recolectaron 317 muestras en 22 Estados de la República Mexicana a través de un muestreo de
oportunidad. Éstas se asignaron a una de las 4 poblaciones de estudio, las cuales son: pelón mexicano
(PM), cuino (CN), pata de Mula (ML), y cerdo cruza Indefinida (CX). Estas poblaciones fueron definidas
de acuerdo a las características fenotípicas de los animales y en este estudio solo se incluyeron 195
cerdos con una edad de al menos un año, de acuerdo a la metodología establecida en el manual
“Caracterización fenotípica de los recursos genéticos animales” (FAO,2012).Las variables zoometrícas
que se analizaron fueron: Longitud de la cabeza (LONGCAB), peso corporal (PESO), número de pezones
rudimentarios (PEZRUD) , número de pezones normales (PEZNORM), Longitud del cuerpo (LONCUE),
circunferencia pectoral (PECHO), altura a la cruz (ALTCRUZ) y ancho de pelvis (ANCHOPELV). Las
variables cualitativas relacionadas con el aspecto que se incluyeron fueron: forma del pelo (FORPEL),
longitud de pelo (LONGPEL), ausencia o presencia de colmillos (COLM), forma del hocico (FORHOC),
Color de mucosas (COLMUC), Color de pezuñas (COLPEZ), Posición de orejas (POSOREJ), Patrón
color de capa (PACOCAP), Tipo de color de capa (TICOCAP) y Temperamento (TEMP). Toda la
información se analizó a través del procedimiento MEAN y FREQ del programa SAS v.9.3 (2015).
RESULTADOS y DISCUSIÓN.
Del total de muestras, 121 correspondieron a cerdo de CX; 70 de PM; 2 de CN; y 2 de ML. Dentro de las
medidas zoometrícas se compararon los 4 grupos, obteniéndose resultados significativos (Cuadro 1). La
variable LONGCAB mostró un promedio general de 25.94±7.14, siendo el mayor (35.00±7.07), el del
grupo ML y el menor el del grupo CN (19.50±6.36). Dentro de la variable PESO, el promedio general fue
51.26±29.05, siendo el grupo ML el más pesado (67.50±45.96) y CX el más ligero (47.56±27.99).
PEZRUDM no se presentó en CN y ML, obteniéndose solo el promedio general de 0.67±1.56 para los
grupos CX (1.00±1.88) y PM (0.14±0.51). PEZNORM mostró un promedio total de 8.80±4.47, con un
219
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
valor mayor para el grupo CN (11.00±1.41) y un promedio mínimo para ML (5.00±7.07). LONGCPO
mostró un promedio total de 79.54±19.15, encontrándose el valor máximo en ML (99.50±3.53), y el valor
mínimo en el grupo CN (74.50±0.70). PECHO y ALTCRUZ no presentaron diferencias notables entre
grupos, mostrando un promedio general de 86.74±20.30 para PECHO y 58.27±12.82 para ALTCRUZ,
siendo ML la que presentó valores máximos para las 2 variables (97.00±21.21 y 64.50±10.60), mostrando
a CN como el grupo con los valores mínimos (81.00±12.72 y 51.50±9.19) respectivamente. Por último la
variable ANCHOPELVIS presentó un promedio general de 19.23±5.63, considerando a PM como el grupo
con un promedio mayor (20.55±5.22) y CN como los de promedio menor (16.50±3.53). Dentro del
segundo análisis solo se compararon los resultados del grupo CX y PM, descartando a los cerdos CN y
ML debido al bajo número de muestras obtenidas, y a la poca influencia de dichos datos. Los resultados
de descripción fenotípica se enlistan en el Cuadro 2 definiendo cada variable. FORPEL variedad recto
mostró un 71.7% en cerdos CX, y un 7.5% en PM, un 14.7 % perteneciente a variedad corto en CX,
siendo notable el 91% de PM. Solo un 1.5% de variedad rizado se presentó en PM y un 13.8% en CX.
LONGPEL patrón denso obtuvo un 52% en CX, seguido de un 35.7% para tipo largo, y un 12.2% para
variedad corto, la cual en CP obtuvo el valor total de un 100%. COLM mostró un 84.2% de presencia en
CX y un 50.7 % para PM, con una diferencia mínima de 1.4 % para ausencia de colmillos en PM, contra
un 68% de diferencia presente en CX. FORHOC variedad largo obtuvo los valores más significativos en
CX y PM, siendo más frecuente en PM con un 87.1% contra un 70.3% en CX. COLMUC mostró un 94.3%
en PM y 75.2% en CX para el patrón rosa. COLPEZ variedad negro mostró una mayor presentación en
PM con un 91.4%, siendo las otras variedades no significativas; solo un 3.9% se manifestó en CX,
aunque este grupo presento porcentajes iguales de 22.7% pertenecientes a variedades rosas,
manchadas, y blancas. POSOREJ variedad semierguida fue el que obtuvo valores máximos, presentando
diferencias mínimas entre CX y PM con 43.3% y 42.9% respectivamente. De igual manera se manifestó
un patrón similar en variedades erguida y caída con mínimas diferencias entre los 2 grupos. PACOCAP
variedad llano presentó un 72.5% en PM y un 50.4% en CX, seguido de un 43.7% perteneciente a
variedad manchado en CX. El patrón irregular fue de 26.1% en PM. TIPOCAP mostró a negro como la
variedad con índices mayores de presentación en CX y PM, siendo este último el más significativo con
un 71%. El patrón blanco y rojo obtuvo un grado de presentación en CX con un 21.4% y 18.5%
respectivamente. Por ultimo TEMP mostró a la variedad moderadamente manejable como la de mayor
presencia, con un 80.8% en PM y 64.7% en CX, seguido de un 17.3% en PM y 26.7% en CX referente a
patrón plácido y amable.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Los resultados aquí presentados sugieren a los grupos de cerdos PM, y CX similares en zoometría,
encontrándose entre el promedio, sin embargo los PM presentaron una pelvis más ancha. La variabilidad
zoometríca detectada puede atribuirse a diferencias en los sistemas de manejo y ambientes en los que
se desarrollaron las 4 poblaciones, al igual que el peso observado, que aunque presenta un mayor
promedio en cerdos ML, la variabilidad observada entre los grupos es notorio debido a los diversos
sistemas de alimentación, que incluyen tubérculos, raíces, frutas y desperdicios de cocina.
LITERATURA CITADA
Lemus, et al (2010).Rev. Comp. Prod. Vol.17. Pp. 89-98.
Lemus, C. (2008). Rev. Comp. Prod. Porcina. Vol.15. Pp.33-40.
Revidatti, et al (2014). J. Anim. Sci. Vol.92. Pp. 4823-4832.
Velázquez, et al (1998). Arch. Zootec. Vol. 47. Pp. 561-564
Cuadro 1. Estadísticas descriptivas de variables zoometrícas de cuatro poblaciones de cerdos criollos en México
CX
LONGCAB
PM
CN
ML
25.88±7.38
25.98±6.46
19.50±6.36
35.00±7.07
47.56±27.99
59.00±30.00
56.00±33.94
67.50±45.96
PEZRUDM
1.00±1.88
0.14±0.51
0.00±0.00
0.00±0.00
PEZNORM
9.37±3.72
7.86±5.42
11.00±1.41
5.00±7.07
LONGCPO
77.46±19.54
82.68±18.37
74.50±0.70
99.50±3.53
PECHO
81.58±18.88
95.40±20.06
81.00±12.72
97.00±21.21
PESO
220
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ALTCRUZ
56.47±13.48
61.37±11.24
51.50±9.19
64.50±10.60
ANCHOPELVIS
18.54±5.82
20.55±5.22
16.50±3.53
17.50±0.70
LONGCAB: longitud de cabeza; PESO; PEZRUDM: número de pezones rudimentarios; PEZNORM: número de
pezones normales; LONGCPO: longitud corporal; PECHO: circunferencia pectoral; ALTCRUZ: altura a cruz;
ANCHOPELVIS: ancho de pelvis.
Cuadro 2. Estadísticas descriptivas de variables cualitativas de cuatro poblaciones de cerdos criollos en México.
CX
FORPEL
LONGPEL
COLM
FORHOC
COLMUC
COLPEZ
POSOREJ
PACOCAP
TIPOCAP
TEMP
PM
RIZADO
13.8%
RECTO
CORTO
CN
ML
1.5%
0.0%
0.0%
71.7%
7.5%
100.0%
50.0%
14.7%
91.0%
0.0%
50.0%
LARGO
35.7%
0.0%
50.0%
0.0%
DENSO
52.0%
0.0%
50.0%
50.0%
ESCASO
12.2%
100.0%
0.0%
50.0%
PRESENTE
84.2%
50.7%
50.0%
100.0%
AUSENTE
15.8%
49.3%
50.0%
0.0%
LARGO Y FINO
70.3%
87.1%
50.0%
100.0%
CORTO Y CILINDRICO
29.7%
12.9%
50.0%
0.0%
ROSADA
75.2%
94.3%
100.0%
100.0%
BLANCA
8.6%
3.8%
0.0%
0.0%
OTRO
16.2%
1.9%
0.0%
0.0%
ROSADAS
22.7%
2.9%
0.0%
0.0%
MANCHADAS
22.7%
5.7%
0.0%
50.0%
NEGRAS
31.9%
91.4%
100.0%
50.0%
OTRO (BLANCAS)
22.7%
0.0%
0.0%
0.0%
ERGUIDAS
27.5%
27.1%
50.0%
50.0%
CAIDAS
29.2%
30.0%
0.0%
0.0%
SEMIERGUIDAS
43.3%
42.9%
50.0%
50.0%
LLANO
50.4%
72.5%
100.0%
50.0%
IRREGULAR
5.9%
26.1%
0.0%
0.0%
MANCHADO
43.7%
1.5%
0.0%
50.0%
BLANCO
21.4%
23.2%
0.0%
50.0%
NEGRO
35.0%
71.0%
50.0%
50.0%
8.7%
5.8%
50.0%
0.0%
ROJO
18.5%
0.0%
0.0%
0.0%
GRIS
6.8%
0.0%
0.0%
0.0%
OTRO (NARANJA, BERMEJO ETC)
9.7%
0.0%
0.0%
0.0%
PLÁCIDO Y AMABLE
26.7%
17.3%
100.0%
50.0%
MODERADAMENTE MANEJABLE
64.7%
80.8%
0.0%
50.0%
OSCURO
AGRESIVO
8.6%
1.9%
0.0%
0.0%
FORPEL: forma de pelo; LONGPEL: largo de pelo; COLM: presencia o ausencia de colmillo; FORHOC: forma de
hocico; COLMUC: color de mucosa; COLPEZ: color de pezuña; POSOREJ: posición de orejas; PACOCAP: patrón
de color de capa; TIPOCAP: tipo de color de capa; TEMP: temperamento.
221
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ESTUDIO DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DEL CERDO CRIOLLO MEXICANO: CARACTERIZACIÓN
GENÉTICA.
GENETIC DIVERSITY STUDY OF MEXICAN CREOLE PIG: CHARACTERIZATION GENETICS.
Valera JJD1, Román PSI2*, Durán AM1, Ruiz LFJ.2
1Facultad
de Ciencias Naturales. UAQ.2 Centro Nacional de Investigación en Fisiología y Mejoramiento
Animal. INIFAP.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
En Latinoamérica se ha identificado la existencia de diversidad de porcinos dentro y entre las razas
locales, estas razas han sido utilizadas en distintos sistemas de producción y en diversas condiciones
agroecológicas. Estos recursos genéticos se han perdido debido a la falta de valoración y la ausencia de
programas de conservación; lo que trae como consecuencia la erosión de la diversidad genética en estas
poblaciones. La pérdida de diversidad genética conlleva a la disminución de capacidades para mantener
y mejorar la producción (Llambi et al., 2011).
Los cerdos criollos o localmente adaptados tienen ventajas para la producción de carne en áreas rurales
de los países en desarrollo, entre las cuales se encuentran: tamaño, rusticidad, y bajo costo, además de
un capital para la explotación de la piara bajo (Lemus, 2008).
Recientemente, México ha impulsado el estudio de los recursos zoogenéticos, lo que ha permitido
conocer la necesidad de mantener la mayor cantidad de poblaciones poseedoras de cantidades grandes
de variantes genéticas, no sin antes ser caracterizadas fenotípicamente y genéticamente (Sierra et al.,
2004).
Dentro de las razas criollas mexicanas se definen 3 tipos: pelón mexicano, cuino y cáscate o pata de
mula, las cuales representan un importante reservorio de genes, obtenido a través de un largo proceso
de selección para la adaptación a las condiciones ambientales extremas (Lemus, 2010).
El desarrollo de ADN basado en marcadores moleculares en las dos últimas décadas ha revolucionado
las posibilidades de vigilar la diversidad genética de las poblaciones y así mismo abordar la biodiversidad
en ciertas razas (Groenen et al., 2003).
OBJETIVO
El objetivo del proyecto es describir la variabilidad genética mediante el análisis de información genómica
proveniente de la población del cerdo criollo mexicano.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se recolectó un total de 317 muestras en 22 Estados de la República Mexicana a través de un muestreo
de oportunidad. Las muestras fueron enviadas para obtener los genotipos a través del microarreglo
PorcineSNP60 v2 BeadChip (GeneSeek, Lincoln, NE). Estás se asignaron a una de las 4 poblaciones de
estudio, las cuales son: pelón mexicano (PM), con un total de 94 muestras, cuino (CN) con 4, pata de
mula (ML) con 4 muestras, y cerdo cruza Indefinida (CX) con 214 muestras. Se estimó la frecuencia del
alelo menor (MAF) y se realizó la prueba de Equilibrio de Hardy Weiberg (HWE) para los grupos CX y PM
utilizando el del programa PLINK 1.7. Las estadísticas por cromosoma fueron generadas mediante el
procedimiento MEANS del programa SAS v.9.3.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
222
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Se obtuvieron 44,244 polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) en 317 muestras de cerdos clasificadas
en 4 poblaciones (PM, CX, CN y ML). Se estimó el número de marcadores por cromosoma y frecuencias
alélicas de los cuatro grupos (Cuadro 1). Los resultados muestran que el grupo ML presentó el promedio
mayor de frecuencia del alelo menor (MAF) por cromosoma con un valor de 0.398±0.123 y un valor
menor de 0.308±0.106 en el cromosoma 17.El grupo CX muestra un MAF de 0.309±0.121, presente en
el cromosoma 7 como el valor más alto, siendo 0.269±0.131 el valor más bajo. Los cerdos PM mostraron
frecuencias alélicas con valores bajos en su totalidad de cromosomas, observándose en el cromosoma
17 (0.246±.0139), considerándose como el valor más bajo en la totalidad de los grupos y finalmente el
grupo CN presentó valores iguales (0.303±0.143) los cuales se localizaron en los cromosomas 2 y 4,
mostrándose el valor máximo en el cromosoma 12 de 0.330±0.149 y un valor mínimo de 0.282±0.134 en
el cromosoma 14. El cuadro 2, muestra el número de marcadores que no se encuentran en equilibrio de
Hardy Weiberg (HWE) para las 2 poblaciones de CX y PM, con una p de 0.001 respectivamente. Se
descartó a los grupos CN y ML en este segundo análisis debido al bajo número de muestras obtenidas.
Los resultados fueron los siguientes: El grupo CX mostró un total de 2858 marcadores en desequilibrio
con un 99.9% de confianza, considerándose al cromosoma 1 con un valor máximo de 272 marcadores y
al cromosoma 11 con un valor de 54 marcadores como un valor mínimo. Los cerdos PM presentaron
valores más bajos en su totalidad, encontrándose en el cromosoma 1 el rango máximo con 132
marcadores y en el cromosoma 11 con un total de 35.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
Los resultados de las frecuencias alélicas aquí presentados demuestran que los cerdos ML poseen una
mayor diversidad por cromosoma. En cambio, el grupo PM presentó los niveles de diversidad genética
más bajos. Paralelamente, el grupo PM mostró el menor número de marcadores que no estaban en
equilibrio de Hardy Weiberg, lo que podría resultar que dicha población se encuentra en un estado más
homogéneo, y a su vez está conservando su diversidad genética en comparación al grupo de cerdos de
cruza indefinida.
LITERATURA CITADA
Groenen, et al (2003). Arch. Zootec. Vol. 52. Pp. 145-155.
Lemus, C. (2008). Rev. Comp. Prod. Porcina, Vol.15. Pp.33-40.
Lemus, et al (2010).Rev. Comp. Prod. Vol.17. Pp. 89-98.
Llambi, et al (2011). Act. Iberoame. Conservación Aml. Vol. 1 Pp. 82-85.
Sierra, et al (2004).Biod. Porcina Iberoame. Vol.49. Pp.61-69.
CUADRO 1.- FRECUENCIAS ALÉLICAS POR CROMOSOMA EN CUATRO POBLACIONES DE
CERDOS CRIOLLOS EN MÉXICO.
Cromosoma
Número de
marcadores
CX
PM
CN
ML
1
4878
0.275±0.130
0.252±0.141
0.299±0.141
0.366±0.125
2
3039
0.274±0.129
0.264±0.138
0.303±0.143
0.379±0.125
3
2642
0.291±0.126
0.270±0.136
0.296±0.140
0.345±0.122
4
3113
0.284±0.129
0.279±0.134
0.303±0.143
0.366±0.125
5
2321
0.298±0.124
0.278±0.133
0.291±0.138
0.365±0.125
6
3023
0.294±0.124
0.256±0.136
0.304±0.143
0.391±0.124
7
2950
0.309±0.121
0.284±0.135
0.310±0.145
0.359±0.124
8
2586
0.302±0.123
0.284±0.133
0.297±0.141
0.379±0.125
223
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
9
2917
0.285±0.131
0.263±0.138
0.306±0.144
0.356±0.124
10
1471
0.280±0.130
0.258±0.145
0.301±0.142
0.369±0.125
11
1511
0.271±0.139
0.243±0.149
0.302±0.142
0.367±0.125
12
1320
0.281±0.127
0.259±0.136
0.330±0.149
0.335±0.119
13
3163
0.274±0.130
0.264±0.134
0.305±0.143
0.381±0.125
14
3049
0.285±0.123
0.266±0.142
0.282±0.134
0.384±0.125
15
2320
0.293±0.124
0.280±0.137
0.312±0.145
0.395±0.123
16
1528
0.287±0.126
0.269±0.140
0.286±0.136
0.369±0.125
17
1336
0.269±0.131
0.246±0.139
0.301±0.142
0.308±0.106
18
1077
0.293±0.128
0.265±0.139
0.290±0.138
0.398±0.123
Total
44244
PM: PELÓN MEXICANO; CN: CERDO CUINO; ML: PATA DE MULA O CÁSCATE; CX: CERDO CRUZA
INDEFINIDA.
CUADRO 2: NÚMERO DE MARCADORES NO EN EQUILIBRIO DE HARDY-WEIBERG POR
CROMOSOMA EN DOS POBLACIONES DE CERDOS CRIOLLOS EN MÉXICO.
Cromosoma
Número de
marcadores
CX
PM
Numero de marcadores en desequilibrio
1
4878
272
132
2
3039
213
98
3
2642
218
69
4
3113
212
143
5
2321
154
45
6
3023
187
66
7
2950
155
136
8
2586
240
95
9
2917
160
129
10
1471
98
46
11
1511
54
35
12
1320
114
105
13
3163
155
97
14
3049
174
116
15
2320
165
79
16
1528
101
51
17
1336
119
97
18
1077
67
38
Total
44244
2858
1442
PM: PELÓN MEXICANO; CN: CERDO CUINO; ML: PATA DE MULA O CÁSCATE; CX: CERDO CRUZA
INDEFINIDA.
224
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DEL MORFOTIPO Y EL HAPLOTIPO DE LAS ABEJAS MELÍFERAS SOBRE LA
PREVALENCIA DE LA VARROOSIS Y LOS NIVELES DE INFESTACIÓN DE VARROA
DESTRUCTOR.
EFFECT OF THE HONEY BEE MORPHOTYPE AND HAPLOTYPE ON THE PREVALENCE OF
VARROOSIS AND THE LEVELS OF INFESTATION OF VARROA DESTRUCTOR.
Arechavaleta VME1, García FC1, Ramírez RFJ1, Robles RCA1
INIFAP. CENID-Fisiología y Mejoramiento Animal1
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La apicultura es una actividad importante del sector pecuario de México, en el país existen 1,898,239
colmenas que son propiedad de 41,000 apicultores.1,2 La producción promedio de miel durante los
últimos cinco años ha sido de 57,564 toneladas anuales, de las cuales se han exportado 25,000
toneladas en promedio por año, lo anterior ubica a nuestro país en el tercer lugar como exportador y en el
sexto lugar como productor de miel a nivel mundial.
El principal problema que enfrenta la apicultura desde el punto de vista sanitario es la varroosis, esta
enfermedad es una parasitosis externa que afecta tanto a las abejas adultas como a la cría y es causada
por el ácaro Varroa destructor.
V. destructor se disemina en forma natural entre colonias y entre apiarios a través de zánganos y abejas
obreras infestadas que se introducen en colmenas diferentes a las suyas por deriva o pillaje, también
cuando abejas obreras infestadas entran en contacto con abejas de otras colonias durante el pecoreo.
Existen varios factores que influyen sobre la distribución de V. destructor y sobre los niveles de
infestación que puede alcanzar el ácaro en las colonias de abejas. Algunos estudios indican que las
colonias de abejas africanizadas mantienen niveles de infestación más bajos que las colonias de abejas
europeas.
OBJETIVO
Determinar el efecto que tiene el morfotipo y el haplotipo de las colonias de abejas sobre la prevalencia
de la varroosis y sobre los niveles de infestación de V. destructor.
MATERIAL Y MÉTODOS
El estudio se llevó a cabo en 214 apiarios que fueron seleccionados en forma aleatoria, y que son
propiedad de 96 unidades de producción apícola. En cada uno de los apiarios incluidos en el estudio se
seleccionó en forma aleatoria al 20% de las colonias de abejas. De cada una de las colonias
seleccionadas (n=1134) se obtuvo una muestra de aproximadamente 200 abejas obreras que fueron
recolectadas de uno de los bastidores centrales de la cámara de cría de las colmenas en frascos con
alcohol al 70%.
Para determinar el morfotipo de las colonias se utilizó el método FABIS I (Fast Africanized Bee
Identification System), con algunas modificaciones. Se tomaron 10 abejas de cada muestra y se
colocaron sobre una toalla de papel para remover el exceso de alcohol. Utilizando un microscopio
estereoscópico se desprendió el ala anterior derecha a cada abeja con la ayuda de un bisturí y unas
pinzas, retirando el exceso de tejido para exponer la escotadura de la vena costal. Las 10 alas se
colocaron sobre cinta adhesiva y ésta se colocó entre dos cubreobjetos de 24 x 50 mm. Los
cubreobjetos se unieron con pegamento de contacto y se identificaron con el número de la colonia
correspondiente. Cada uno de los montajes se escaneó para generar una imagen digital, que se utilizó
para medir la longitud de cada ala utilizando el programa Motic Image Plus 2.0, las mediciones se
realizaron desde la escotadura de la vena costal hasta la porción más distal del ala. Se obtuvo el
225
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
promedio de la longitud de las 10 alas y utilizando este estimador se determinó el morfotipo de cada
colonia de abejas. Las colonias con un promedio ≥ 9.095 mm se clasificaron con morfotipo europeo, las
que obtuvieron un promedio ≤ 8.950 mm se clasificaron con morfotipo africanizado, y las colonias con un
promedio entre 8.951 y 9.094 mm con morfotipo intermedio o híbrido.
Para determinar el haplotipo de las colonias en: europeo del este, europeo del oeste y africano se extrajo
el ADN de una abeja de cada colonia y utilizando PCR se amplificaron dos regiones del ADN
mitocondrial, la región 2095-3123 del gen citocromo oxidasa I (COI) y la región 13479-14443 del gen
lsmRNA, los productos de la PCR se digirieron con la enzima de restricción HincII para la región
amplificada del gen COI y con la enzima EcoRI para la región amplificada del gen lsmRNA. Los
fragmentos de restricción generados se resolvieron en geles de agarosa al 1.2% y fueron visualizados
con luz ultravioleta después de ser teñidos con bromuro de etidio.
Para determinar el número de colonias infestadas y estimar el porcentaje de infestación de V. destructor
de cada colonia, se agitó el frasco que contenía la muestra de abejas en alcohol para desprender los
ácaros del cuerpo de las abejas, posteriormente se depositó el contenido del frasco en un recipiente de
fondo blanco y con la ayuda de unas pinzas de disección se separaron y contaron las abejas y los ácaros
presentes en la muestra.
Se estimó la prevalencia de la varroosis y el nivel de infestación promedio para cada morfotipo y
haplotipo de abejas. Se determinó si existen diferencias en la prevalencia de la varroosis entre
morfotipos y entre haplotipos, comparando la frecuencia de colonias positivas y negativas de cada grupo
utilizando una prueba de homogeneidad. Asimismo, se determinó si existen diferencias entre grupos en
los niveles de infestación del ácaro por medio de un análisis de varianza bajo un modelo aleatorio simple.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se determinó el morfotipo de las 1134 colonias, la frecuencia de colonias con morfotipo africanizado fue
0.28 (n=320), la frecuencia de colonias con morfotipo europeo fue 0.35 (n=396) y la frecuencia de
colonias con morfotipo híbrido o intermedio fue 0.37 (n=418). La distribución de colonias positivas y
negativas a varroosis fue homogénea para los tres morfotipos (Xi2=0.54; n=1134; P>0.05). La
prevalencia de varroosis estimada para las colonias de abejas con morfotipo africanizado fue 0.82, para
las colonias con morfotipo europeo fue 0.80 y para las colonias híbridas 0.79. No se detectaron
diferencias en el nivel de infestación promedio de V. destructor entre los diferentes morfotipos de abejas
(F=0.13; gl=2, 1131; P>0.05). El porcentaje de infestación de las colonias con morfotipo africanizado fue
de 3.36±0.26, el de las colonias con morfotipo europeo fue 4.09±0.24, y el porcentaje promedio de las
colonias con morfotipo híbrido o intermedio fue 3.83±0.23.
Se determinó el haplotipo de las 1134 colonias, la frecuencia de colonias con haplotipo europeo del este
fue 0.63 (n=718), la frecuencia de colonias con haplotipo africano fue 0.36 (n=404) y la frecuencia de
colonias con haplotipo europeo del oeste fue 0.01 (n=12). La distribución de colonias positivas y
negativas a varroosis fue homogénea para los tres haplotipos (Xi2=4.92; n=1134; P>0.05). La
prevalencia de varroosis estimada para las colonias de abejas con haplotipo europeo del este fue 0.78,
para las colonias con haplotipo africano fue 0.84 y para las colonias con haplotipo europeo del oeste fue
0.80. No se detectaron diferencias en el nivel de infestación promedio de V. destructor entre los
haplotipos (F=5.64; gl=2, 1131; P>0.05). El porcentaje de infestación de las colonias con haplotipo
europeo del este fue de 3.77±0.18, el de las colonias con haplotipo africano fue 3.85±0.24, y el porcentaje
promedio de las colonias con haplotipo europeo del oeste fue 2.89±1.39.
No se encontró que el morfotipo o el haplotipo de las abejas influyan sobre la prevalencia de la varroosis.
La prevalencia de la enfermedad fue similar para los tres morfotipos y para los tres haplotipos, lo que
sugiere que las colonias de abejas de los diferentes grupos son igual de susceptibles a la enfermedad y
tienen la misma probabilidad de ser infestadas por el ácaro.
Asimismo, se encontró que el morfotipo o el haplotipo de las abejas no tiene efecto sobre los niveles de
infestación de las colonias, los porcentajes de infestación promedio de las colonias de los tres morfotipos
y de los tres haplotipos fueron similares respectivamente, lo que sugiere que los diferentes grupos
genéticos son igual de susceptibles al crecimiento poblacional del ácaro. Estos resultados coinciden con
226
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
los resultados de Camazine (1986) y difieren de lo reportado en diversos estudios que indican que las
colonias de abejas africanizadas son más resistentes al crecimiento poblacional de V. destructor que las
colonias de abejas europeas y las colonias híbridas
Los estudios que se han llevado a cabo para comparar la susceptibilidad de los grupos raciales de abejas
a V. destructor se han realizado con un número relativamente pequeño de colonias (n=6-58) que se
manejaron bajo condiciones experimentales. A diferencia de estos estudios, el presente trabajo se
realizó en una población de 1134 colonias que se manejaron bajo las condiciones de manejo de las
diferentes unidades de producción incluidas en el estudio, lo que permite evaluar el comportamiento de la
varroosis a nivel de una población de colonias destinadas a la producción.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
El morfotipo y el haplotipo de las colonias de abejas no influyen sobre la prevalencia de la varroosis ni
sobre los porcentajes de infestación promedio de V. destructor en las colonias. La probabilidad de que
una colonia sea infestada por V. destructor es la misma para colonias con morfotipo africanizado, híbrido
o europeo y para colonias con haplotipo europeo del oeste, africano o europeo del este.
227
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Mejoramiento y recursos genéticos
COMPOSICION QUÍMICA MEDIANTE ESPECTROSCOPIA DEL FORRAJE DE LEGUMINOSAS
RECOLECTADAS EN EL SUR DE MÉXICO.
CHEMICAL COMPOSITION BY SPECTROSCOPY OF FORAGE LEGUMES FROM THE SOUTHERN
OF MEXICO.
1CENID
Basurto GR1, Jiménez GR2, Ramírez RE1, Mendez RJH3
FyMA-INIFAP; 2CE IGUALA-CIRPAS-INIFAP; 3Programa de Posgrado-MCPSA-UNAM.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Para los sistemas de pastoreo, las leguminosas se destacan por su alto contenido de proteína cruda, lo
cual es relevante ya que los pastos tropicales tienden a ser bajos o deficientes en proteína cruda a través
del ciclo de crecimiento. Bobadilla y Ramírez (2005) reportaron que Gliciridia sepium y Leucaena
leucephala pueden contener hasta 19 y 26% de proteína cruda, respectivamente. No obstante, debido a
su alto contenido proteínico de las leguminosas, pequeñas diferencias podrían ser de poca importancia
práctica. En contraste, diferencias en el contenido de fibra pueden ser importantes porque la energía
disponible de los forrajes está en función de la relación solubles celulares a fibra, como lo reportaron
Juárez et al. (2004) cuando analizaron variedades de leguminosas que variaban en 10 unidades
porcentuales de FDN, lo cual afectó el contenido de energía metabolizable y de proteína metabolizable
de leguminosas tropicales. Sin embargo, el alto costo de los análisis de proteína y fracciones de fibra
pueden limitar la evaluación de leguminosas. Para superar estas restricciones, se han evaluado otros
métodos analíticos, como es la espectroscopia de reflectancia en el cercano infrarrojo (NIRS, por sus
siglas en inglés), que han mostrado dar estimaciones rápidas, confiables y precisas. Así, el objetivo del
presente estudio fue valorar el uso de la espectroscopia de reflectancia en el cercano infrarrojo para
determinar el contenido de proteína cruda, las fracciones de fibra y la digestibilidad in vitro de
leguminosas tropicales recolectadas en el sur de México.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Se recolectaron 130 materiales de leguminosas en el sur de México y, posteriormente, se crecieron bajo
condiciones controladas (jardín experimental). Se muestrearon las hojas, se secaron y se enviaron al
CENID FyMA para su análisis. Las muestras fueron procesadas con un molino tipo Wiley (Arthur H
Tomas Corp., Filadelfia, PA), utilizando una criba de 1-mm, y se almacenaron en contenderos de
plásticos. En el laboratorio se analizaron para materia seca (MS), materia orgánica (MO), proteína cruda
(PC; Nx6.25), fibra detergente neutra (FDN) y fibra detergente ácida (FDA) de acuerdo a las
recomendaciones de Van Soest et al., 1991). La digestibilidad in vitro de la materia seca (DIVMS) se
determinó con el uso de bolsas filtrantes Ankom (Ankom Technology Corp., Macedon NY) y el inoculo se
obtuvo de dos borregos alimentados con una mezcla de forrajes (heno de alfalfa, heno de pastos nativos
y rastrojo de maíz) y concentrado (grano de sorgo, pasta de soya, melaza y minerales).
Para obtención de los espectros, se utilizó un espectrofotómetro FT-IR Nicolet 6700 (Thermo Fisher
Scientific, Inc) en el rango espectral entre 4000 a 9000 ondas cm -1. Los datos de reflectancia fueron
guardados como log (1/Reflectancia) en intervalos de 4 nm. Para el desarrollo de las calibraciones, se
utilizó el programa TQ Analyst v8.0. El tratamiento matemático de los datos incluyó el uso de un modelo
estadístico de cuadrados mínimos parciales modificados, la primera o segunda derivada y de los filtros de
Savitzky-Golay o el de Norris. La selección de las ecuaciones se basó en los siguientes estadísticos:
coeficiente de determinación de la calibración (R2cal), el error estándar de la calibración (SEC), el error
estándar de predicción (SEP) y en el error estándar de la validación cruzada (SECV). Además, para
determinar si la ecuación NIRS tenían buen poder de predicción, se estableció que el estadístico TASA
(SECV/DE) debería ser menor a 0.33.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los resultados de los análisis para materia orgánica, proteína cruda, digestibilidad de la MS y de las
fracciones de fibra se muestran el Cuadro 1. Se puede apreciar que el rango de los valores de las
variables analizadas es amplio. Por ejemplo, es notable el bajo contenido de dos muestras, un frijol
terciopelo y un Centrosema spp, con valores menores a 10.5% PC. En contraste, el rango del contenido
228
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
VII
Nutrición animal
Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
proteínico del resto de las muestras fue similar (12 a 21 % de PC) a lo reportado por Kirchhof et al. (2010)
para muestras de trébol, alfalfa y Lotus. En otro estudio (Bernadette et al., 2003), variedades de alfalfa
presentaron un rango para proteína cruda más estrecho (19.3 a 25.0% PC). Las muestras de este este
estudio presentan una gran variación. 19.3 a 25.0% MS.
Respecto a la FDN, el rango del presente estudio (Cuadro 1) es amplio (22.95 a 52.99% FDN). Esto
contrasta, con el rango (29.1 a 34.5% MS) reportado por Bernadette et al (2003). Aunque en este estudio
solo incluyó variedades de alfalfa. Los datos reportados aquí pueden estar reflejando la respuesta
genética de los materiales a su ambiente donde fueron colectados.
Cuadro 1. Estadística descriptiva de las variables analizadas para las leguminosas colectadas en el sur
de México.
Variable
N
Media
Mínimo
Máximo
DS
Materia orgánica, %
133
90.92
83.58
95.87
2.30
Proteína cruda, %
133
19.53
9.29
26.54
3.73
DIVMS, % MS
131
80.95
62.62
91.58
6.07
Fibra detergente neutra, %
133
35.18
22.95
52.99
6.68
Fibra detergente ácida, %
133
22.20
14.07
41.16
4.82
Los estadísticos de las calibraciones mediante espectroscopia para estimar el contenido de nutrientes y
digestibilidad de leguminosas se muestra en Cuadro 2. Aunque coeficientes de determinación de las
ecuaciones de calibración pueden ser considerados aceptables (R 2 >0.90). Exceptuando para la
calibración para proteína cruda, los errores estándar de la calibración cruzada y el estadístico TASA
mostraron que las calibraciones no tenían buen poder predicción. En estudios previos, la estimación de la
proteína cruda de los forrajes usualmente ha sido precisa, como en el presente estudio (Cuadro 1 y
Figura). Respecto a la materia orgánica, Lundberg et al. (2004) reportaron que la estimación mediante
NIRS para cenizas fue imprecisa para muestras de ensilajes de maíz y de leguminosa-pastos para la
estimación del contenido de energía digestible. En general, las estimaciones de DIVMS y las fracciones
de fibra tienden a ser bajas y con altos errores estándar de predicción (hasta 4.86) para forrajes y pastos
(Basurto et al., 2012). Es probable para mejorar las calibraciones se deben incluir un mayor número de
muestras.
229
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 2. Estadísticos para los grupos de calibración y de validación y de la ecuación de calibración
para estimar el contenido de nutrientes de leguminosas colectadas en el sur de México.
Análisis químico
NIRS
Materia orgánica (% MS)
Grupo
N
MEDIA
RANGO
DE
R2cal
SEC
SEP
SECV TASA
Calibración
86
90.83
85.34 – 95.06
2.03
0.91
0.61
Validación
45
91.13
83.58 – 95.87
2.75
1.35
0.97
0.42
Proteína cruda (% MS)
Calibración
85
17.43
8.82 – 24.78
3.38
0.97
0.57
Validación
43
19.45
10.46 – 23.33
3.05
0.89
1.00
0.26
DIVMS (% MS)
Calibración
86
80.24
62.62 – 90.17
6.48
0.90
2.00
Validación
41
82.53
72.49 – 89.25
4.33
2.09
3.51
0.58
FDN (% MS)
Calibración
89
36.55
22.95 – 52.99
6.59
0.93
1.68
Validación
44
32.14
24.02 – 43.86
5.79
4.35
4.12
0.62
FDA (% MS)
Calibración
89
22.22
14.92 – 35.82
4.78
0.94
1.17
Validación
43
21.73
14.07 – 31.47
4.02
2.95
3.28
0.68
CONCLUSIÓN.
La variabilidad observada en la composición química puede estar reflejando la variabilidad genética de
los materiales colectados como respuesta a las diferentes condiciones ambientales donde se
desarrollaron. En este estudio, solo el contenido de proteína cruda de los materiales fue con precisión
mediante espectroscopia. Esto contrasta con la baja precisión para estimar materia orgánica, DIVMS y
las fracciones de fibra.
IMPLICACIONES.
Es posible utilizar la espectroscopia para obtener rápidos y precisos valores de proteína de especies de
leguminosas rastreras o arbóreas.
REFERENCIAS CITADAS.
Basurto GR, Montoya FMD et al. (2012) Uso de la Espectroscopia en el Cercano Infrarrojo (NIRS) en la
Nutrición de Rumiantes. INIFAP; Publicación especial No.1: pp36.
Bernadette J, Françoise G, Jean-Claude E, and Christian H. Variation in protein degradability in dried
forage legumes. Anim. Res. 2003: 52:401-412.
Bobadilla HAR y Ramírez Al. Características nutrimentales de ocho arbóreas forrajeras nativas de la
República Mexicana. XLI Reunión Nacional de Investigación Pecuaria. Mérida, Morelos, 2005.
P168.
Juárez LFI, Montero LM, Alpirez MF, Contreras JJL y Canudas LEG. 2004. Valor nutritivo de leguminosas
tropicales para bovinos de doble propósito. XL Reunión Nacional de Investigación Pecuaria.
Mérida, Yucatán. p218.
Kirchhof S, Eisner I, Gierus M, and Südekum KH. 2010. Variation in the contents of crude protein fractions
of different forage legumes during the spring growth. Grass and Forage Sci 65:376-382.
Lundberg KM, Hoffman PC, Bauman LM, and Berzaghi P. Prediction of Forage Energy Content by Near
Infrared Reflectance Spectroscopy and Summative Equations. PAS. 2004; 20:262-269.
Los resultados son parte del proyecto fiscal “Recolección de recursos genéticos de leguminosas en
el Sur de México, composición química del forraje y características físicas del suelo donde
provienen".
230
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
ESTIMACION POR ESPECTROSCOPIA DEL CONTENIDO DE NUTRIENTES DIGESTIBLES
TOTALES DE CONCENTRADOS Y FORRAJES UTILIZADOS EN UNIDADES DE PRODUCCIÓN
LECHERA.
ESTIMATION BY SPECTROSCOPY OF THE CONTENT OF TOTAL DIGESTIBLE NUTRIENTS OF
CONCENTRATES AND FORAGES UTILIZED IN DAIRY PRODUCTION UNITS.
Bonilla CN1, Basurto GR2*, Arias CLE3, Ramírez RE2, Bonilla CJA4, Cristóbal CO5, Ibarra G AX5
de Posgrado-MCPSA-UNAM; 2CENID FyMA-INIFAP; 3CE Centro Altos de Jalisco-CIRPACINIFAP; 4CE Santiago Ixcuintla-CIRPAC-INIFAP, 5CE La Posta-CIRGO-INIFAP.
[email protected]
1Programa
INTRODUCCIÓN.
La producción animal se basa en la cantidad de energía que pueden obtener los animales de los
alimentos. Aunque el calor de combustión de los alimentos es fácilmente determinado en el laboratorio,
pero debido a la variación en su digestibilidad y metabolismo carece de valor práctico en la formulación
de raciones o en la valoración económica de los ingredientes (Weiss et al., 1992). Asimismo, la energía
digestible o el total de nutrientes digestibles (NDT) pueden ser determinados con exactitud con pruebas
de digestión in vivo, pero la determinación involucra una gran cantidad de trabajo, tiempo e
infraestructura que limita el número de ingredientes que pueden ser evaluados. Para superar estas
limitaciones, se han desarrollado ecuaciones o modelos sumativos para estimar los coeficientes de
digestibilidad con base en la composición química (Weiss et al., 1992). Estos modelos han sido
adoptados por NRC (2001) y CNCPS, sin embargo los procedimientos de laboratorio son aun lentos y
costosos.
No obstante, existen otros métodos analíticos, como es la espectroscopia de reflectancia en el cercano
infrarrojo (NIRS, por sus siglas en inglés), que han mostrado dar estimaciones rápidas, confiables y
precisas. Lundberg et al. (2004) determinaron que NIRS puede estimar la mayoría de los componentes
nutricionales del modelo sumativo de Weiss et al. (1992), excepto el contenido de minerales y la
digestibilidad de FDN, para la estimación de los NDT. Por lo anterior, el objetivo fue valorar el uso de
NIRS para predecir el contenido de los nutrientes digestibles totales de los ingredientes utilizados en
unidades de producción lechera de los sistemas doble propósito y familiar.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Se colectaron 203 muestras en total de 10 unidades de producción de leche de doble propósito del
estado de Veracruz y otras 10 unidades adicionales del sistema familiar del estado de Jalisco. El conjunto
incluyó muestras de concentrados comerciales (N=50), dietas completas (N=18), ingredientes
energéticos (N=6) y proteicos (N=10), forrajes (N=92) y otros (N=27). Las muestras colectadas fueron
secadas a 55 °C por 48 h, se molieron con una criba de 1 mm de diámetro y fueron enviadas al
laboratorio del CENID FyMA para la determinación de proteína cruda (PC), extracto etéreo (EE), cenizas
(CEN, 600°C x 4 h), fracciones de fibra (fibra detergente neutro (FDN), fibra detergente ácido (FDA),
lignina (LIG) y el nitrógeno ligado a FDN (FDNN) y FDA (FDAN) de acuerdo a Van Soest et al. 1991) y la
digestibilidad in vitro de acuerdo al manual de Ankom (Ankom Technology Corp., Macedon NY). El
inóculo del rumen se obtuvo de dos bovinos provistos de cánula en el rumen y alimentados con una dieta
estándar.
Para estimar los NDT de los ingredientes se utilizó el sistema sumativo propuesto por Weiss et al. (1992),
donde:
Contenido celular digestible: 0.98 (1000 – FDNN – PC – CEN - EE + IADIPC) +
Proteína digestible: exp[- 0.012 * FDAN]) +
Lípidos= 2.25*(EE-10) +
Fibra=0.75 (FDNN – LIG) (1- [LIG/ FDNN 0.67)Ajuste por la energía fecal =70
IADIPC= 0.7*ADIPC (g/ kg PC) para forrajes.
IADIPC= 0.4*ADIPC (g/ kg PC) para concentrados.
231
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Todos los valores son expresados en g/kg MS y
Para obtener los espectros, se utilizó un espectrofotómetro FT-IR Nicolet 6700 (Thermo Fisher Scientific,
Inc) en el rango espectral entre 4000 a 9000 ondas cm-1. Los datos de reflectancia fueron guardados
como log (1/Reflectancia) en intervalos de 4 nm. Para el desarrollo de las calibraciones, se utilizó el
programa TQ Analyst v8.0. El tratamiento matemático de los datos incluyó el uso de un modelo
estadístico de cuadrados mínimos parciales modificados, la primera o segunda derivada y de los filtros de
Savitzky-Golay o el de Norris. La selección de las ecuaciones se basó en los siguientes estadísticos:
coeficiente de determinación de la calibración (R2cal), el error estándar de la calibración (SEC), el error
estándar de predicción (SEP), el error estándar de la validación cruzada (SECV). Para evaluar el poder
de predicción de la ecuación NIRS, se basó en el estadístico TASA (SECV/desviación estándar de la
población muestral), el cual debe ser menor a 0.33 para considerar que la ecuación tienen buen poder de
predicción.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
En el Cuadro 1 se muestran los estadísticos para NDT de las muestras colectadas en establos de
producción de leche de los sistemas familiares del estado de Jalisco y de doble propósito en el estado de
Veracruz. Con base en los análisis químicos y el modelo de Weiss et al. (1992), hay una amplia variación
en el contenido de NDT de la población muestral.
Cuadro 1. Estadística descriptiva para el contenido de nutrientes digestibles totales de los ingredientes.
Variable
N
Media
Mínimo
Máximo
DS1
Nutrientes digestibles totales, g/kg
187
683.26
523.11
900.57
92.01
El modelo de Weiss et al. (1992) requiere la determinación de PC, Cenizas, FDN, FDA, FDN N, FDAN,
extracto etéreo y lignina. Con estos datos fue posible estimar el contenido de NDT y, entonces, generar la
calibración para estimar los NDT de los ingredientes.
En el Cuadro 2, se muestran los estadísticos las ecuaciones generadas para el grupo de calibración y de
validación. El coeficiente de determinación (R2=0.93) y los errores de calibración y de predicción son
bajos, indicando que los nutrientes digestibles totales pueden ser estimados con precisión.
Cuadro 2. Estadísticos para los grupos de calibración y de validación y de la ecuación de calibración
para estimar el contenido de nutrientes digestibles totales de los ingredientes utilizados en unidades
lecheras de doble propósito y familiares.
Análisis químico
NIRS
Nutrientes digestibles totales (g/kg)
Grupo
N
MEDIA
RANGO
DE
R2cal
SEC
SEP
SECV TASA
Calibración
127
673.6
532.1 – 900.6 93.78
0.93
25.1
Validación
60
697.4
537.0 – 895.5 87.19
27.1
28.5
0.31
En contraste, Lundberg et al. (2004) generaron calibraciones para cada componente del modelo sumativo
de Weiss et al. (1992) y, entonces calcular los NDT. Sin embargo, estos autores (Lundberg et al., 2004)
reportaron que las estimaciones para cenizas y la proteína cruda ligada a FDA eran imprecisas, por lo
que, se deberían utilizar los valores actuales de laboratorio para que la precisión de la estimación de NDT
no decayera significativamente. Probablemente, las dificultades analíticas y el bajo contenido de la
proteína ligada a fibra afecta su estimación mediante NIRS. En una revisión sobre el uso de NIRS en la
nutrición de rumiantes (Basurto et al., 2012), las predicciones para proteína cruda en FDA y FDN tienden
poco precisas.
En la figura se muestra la relación entre los valores estimados y los actuales para NDT del grupo de
validación, es decir, las muestras que no fueron incluidas en el desarrollo de la ecuación de calibración.
232
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CONCLUSIÓN
A pesar de la variabilidad del tipo de ingredientes colectados, se logró generar una calibración NIRS con
buen poder de predicción del contenido de los nutrientes digestibles totales, el cual puede ser utilizado
para hacer una estimación del valor energético de los ingredientes.
IMPLICACIONES
La determinación de los nutrientes digestibles totales involucra una gran cantidad de trabajo en el
laboratorio y de animales canulados en rumen, sin embargo la espectroscopia puede estimarlos con
precisión, lo cual puede ser de interés para laboratorios comerciales.
REFERENCIAS CITADAS.
Basurto GR, Montoya FMD et al. (2012) Uso de la Espectroscopia en el Cercano Infrarrojo (NIRS) en la
Nutrición de Rumiantes. INIFAP; Publicación especial No.1: pp36.
Lundberg KM, Hoffman PC, Bauman LM, and Berzaghi P. Prediction of Forage Energy Content by Near
Infrared Reflectance Spectroscopy and Summative Equations. PAS. 2004; 20:262-269.
NRC. 2001. Nutrient Requirements of Dairy Cattle. National Academy Press, Washington, D.C
Van Soest PJ, Robertson JB, and Lewis BA. Methods for dietary fiber, neutral detergent fiber, and
nonstarch polysaccharides in relation to animal nutrition. J Dairy Sci.1991; 74:3583-3597.
Weiss WP, Conrad HR, and St.Pierre NR. A theoretical-based model for predicting total digestible nutrient
values of forages and concentrates. Anim Feed Sci Techn.1992; 39:95-110.
Los resultados son parte del proyecto fiscal “Emisiones de metano, su relación con factores nutricionales
y genéticos y desarrollo de estrategias de mitigación en tres sistemas de producción de leche de bovino
en México” y forman parte de la tesis de maestría del primer autor.
233
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DE LA VITAMINA E EN LA FERMENTACIÓN RUMINAL Y DIGESTIÓN DE NUTRIENTES EN
NOVILLOS SUPLEMENTADOS CON ÁCIDO LINOLEICO CONJUGADO MICROENCAPSULADO.
EFFECT OF VITAMIN E ON RUMINAL FERMENTATION AND NUTRIENT DIGESTION IN CALVES
SUPPLEMENTED WITH MICROENCAPSULATED CONJUGATED LINOLEIC ACID.
Ramírez MM1,2*, Hernández MO2, Ramírez BJE2, Crosby GMM2 y Burgueño FJA3
1Colegio
de Postgraduados Campus Campeche; 2Colegio de Postgraduados Campus Montecillo, México;
Internacional de Mejoramiento del Maíz y Trigo, Texcoco, Estado de México, México.
3Centro
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La vitamina E pertenece al grupo de vitaminas liposolubles y es bien conocida por su actividad
antioxidante, así como por su capacidad para mejorar la función inmunológica y la calidad de la carne y
leche (Naziroğlu et al., 2002). A diferencia de otras vitaminas, como las del complejo B, la vitamina E no
es sintetizada por los microorganismos del rumen pero algunos de sus derivados, como el α-tocoferol
quinona y el α-tocoferol quinol, sí son sintetizados por Butyrivibrio fibrisolvens (Huges y Tove, 1982)
bacteria ruminal involucrada en la degradación de sustratos fibrosos. A la fecha, son escasos los estudios
disponibles sobre los efectos de la vitamina E a los largo del tubo digestivo pero se ha reportado que
afecta la actividad microbiana (Tagliapietra et al., 2013) y de protozoarios en el rumen, altera la
fermentación ruminal (Naziroğlu et al., 2002) y mejorar la digestibilidad de la celulosa en dietas con
aceites vegetales (Hino et al., 1993).
OBJETIVO.
Evaluar el efecto de la vitamina E en la fermentación ruminal y digestión de nutrientes en novillos
suplementados con ácido linoleico conjugado (CLA) microencapsulado.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El estudio se llevó a cabo en el Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo, Estado de México. Se
utilizaron cuatro novillos Holstein canulados ruminal y duodenalmente (PV inicial de 450 ± 93 kg),
asignados a cuatro tratamientos: testigo (dieta base + 50 g de CLA microencapsulado y tres dosis de
vitamina E (4000, 8000 y 12000 UI/novillo por día). 50 g de CLA microencapsulado aportaron 5 g de cada
uno de los dos principales isómeros del CLA, cis-9, trans-11, y trans-10, cis-12 (Lutrell Pure®, BASF,
Alemania; tamaño de partícula de 250 and 850 µm). Como fuente de vitamina E se usó DL- acetato de
tocoferol al 50% y óxido crómico como marcador para determinar la digestibilidad de nutrientes. El CLA
microencapsulado, la vitamina E, y el óxido crómico se colocaron directamente en el rumen. La dieta fue
la siguiente: maíz molido, 58.88%; alfalfa deshidratada, 18.24%; paja de avena, 13.68%; melaza, 5.39%;
pasta de soya, 1.49%; carbonato de calcio, 0.91%; urea, 0.75%; minerales traza, 0.50% (Composición:
CoCO3, 0.03; CuSo4, 1.04; FeSO4, 3.57; ZnO, 1.24; MnSO4, 1.07; KI, 0.052; NaCl, 92.998); y óxido de
magnesio, 0.16%. La composición de la dieta (base seca) fue: PC, 13.27%; FDN, 33.53%; FDA, 12.08%;
cenizas, 7.69%; ENm, 1.83 Mcal/kg; EMg, 1.19 Mcal/kg; Ca, 0.72% 3; P, 0.25%, Mg, 0.27%. El consumo
se restringió al 2.1% del PV de los animales al inicio del experimento, dividido en dos ingestas con 12
horas de intervalo (0700 and 1900). Cada uno de los cuatro períodos experimentales consistió en 10 días
de adaptación y cuatro días de muestreo. Se colectaron 750 mL de líquido duodenal y 400 g (base
húmeda) de heces en los días de muestreo como a continuación se describe: día 1, 0800 y 1400; día 2,
0950 y 1550; día 3, 1100 y 1700; día 4, 0650 y 1250. Las muestras de cada novillo dentro de cada
período de muestreo se mezclaron para obtener una muestra compuesta. La determinación de pH de
líquido ruminal se realizó en la muestra fresca. Se tomaron muestras de alimento dentro de cada período
experimental para su análisis bromatológico. Todas las muestras, excepto líquido ruminal, se analizaron
para materia seca, cenizas, N, FDN y FDA. A las muestras de líquido duodenal y heces se les determinó
cromo por espectrofotometría de absorción atómica. A las muestras de líquido ruminal se les determinó la
234
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
concentración de ácidos grasos volátiles (AGVs) por cromatografía de gases. Se utilizó un diseño en
Cuadro latino 4 x 4 y los resultados se analizaron utilizando el procedimiento PROC GLM del programa
SAS. El modelo estadístico fue el siguiente: Yijk = µ + Bi + Pj + Tk + Eijk; donde: Bi = efecto del novillo, i = 4,
Pj = efecto del período, j = 4, Tk = efecto del tratamiento, k = 4, Eijk = error experimental.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Las cantidades de acetato, propionato y AGVs totales disminuyeron cerca de 9% con la inclusión de
vitamina E (Cuadro 1) y, a pesar de no ser estadísticamente significativos, nuestros resultados son
similares a los reportados por Tagliapietra et al. (2013), quienes reportaron una reducción del 17% en el
total de AGVs por efecto de la vitamina E en incubaciones in vitro hechas con paja. Estos resultados
pueden indicar incremento en otros AGVs, como valerato (Hidiroglou y Lessard, 1976); no obstante,
Tagliapietra et al. (2013) no reportan cambios en éste. Debido a la importancia de los AGVs de cadena
ramificada para el crecimiento de las bacterias ruminales, sería interesante evaluarlos en investigaciones
futuras; contrariamente, Naziroğlu et al. (2002) reportaron incrementos en la cantidad de acetato,
propionato y AGVs totales. Por su parte, Hino et al. (1993) reportaron incrementos en la digestion ruminal
de celulosa y de FDN y FDA en estudios in vitro con α-tocoferol y β-caroteno en cultivos con grasa,
indicando que estos antioxidantes mejoran la digestión de la fibra al promover la actividad celulolítica de
las bacterias del rumen en presencia de lípidos, pero en nuestro estudio no hubo cambios en la digestión
ruminal por efecto de la vitamina E (Cuadro 2). El mecanismo por el cual la vitamina E podría incrementar
la digestión de la fibra en el rumen no es bien conocido, pero algunas hipótesis sugieren que mejora las
condiciones de las bacterias ruminales involucradas en la degradación de sustratos fibrosos,
particularmente de Butyrivibrio fibrisolvens (Huges y Tove, 1982); sin embargo, son escasos los reportes
sobre cómo la vitamina E afecta la digestión ruminal de nutrientes. Por otro lado, hubo una tendencia a
mejorar la digestión post-ruminal de la materia seca (6%; P<0.129) y materia orgánica (7%; P<0.086) en
los tratamientos con vitamina E (Cuadro 2), sugiriendo que esta vitamina podría afectar la digestión a
nivel intestinal lo cual es posible si consideramos que su absorción es similar a la de los lípidos ya que es
una vitamina liposoluble; desafortunadamente se ha realizado poca investigación en rumiantes pero una
posible explicación a dicho fenómeno es que la vitamina E tiene un efecto protector de la mucosa
gastrointestinal bajo condiciones de estrés.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
La vitamina E podría mejorar la digestión post-ruminal de la materia seca y materia orgánica en novillos
suplementados con CLA microencapsulado, probablemente al mejorar las condiciones gastrointestinales
al reducir la formación de radicales libres. Sería interesante investigar más profundamente el papel de la
vitamina E en la digestión de nutrientes al reducir el estrés oxidativo a lo largo del tubo digestivo, lo cual
podría tener implicaciones relevantes en el desempeño productivo del animal.
Cuadro 1. Efecto de la vitamina E en el pH y perfil de ácidos grasos volátiles en novillos suplementados
con CLA microencapsulado (media ± DE).
Vitamina E, UI/d
Variable
P
Testigo
4000
8000
12000
pH ruminal
5.96±0.16
5.98±0.33
6.04±0.45
5.90±0.47
0.83
AGVs, mol/100 mol
Acetato
70.37±6.69 64.47±10.32
64.27±5.59
65.54±8.16
0.70
Propionato
17.60±2.81
16.75±3.54
16.16±4.60
15.19±1.50
0.57
Butirato
8.35±1.23
6.60±1.44
7.00±0.65
8.05±2.16
0.17
Proporción
4.04±0.43
3.91±0.48
4.16±0.82
4.34±0.59
0.06
acetato:propionato
AGVs totales
96.31±9.72 87.82±14.60
87.42±10.04
88.78±10.64
0.72
AGVs, %
Acetato
73.14±1.10
73.53±1.91
73.73±2.91
73.81±1.99
0.88
Propionato
18.22±1.64
19.00±1.98
18.24±3.28
17.25±2.29
0.30
235
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Butirato
8.64±1.27
7.50±0.93
8.03±0.52
8.94±1.30
0.16
Cuadro 2. Efecto de la vitamina E en la digestión de nutrientes en novillos suplementados con CLA
microencapsulado (media ± DS).
Vitamina E, UI/d
Variable
P
Control
4000
8000
12000
Consumo, g/d
MS
9440
9440
9440
9440
-MO
7317
7317
7317
7317
-FDN
3165
3165
3165
3165
-FDA
1140
1140
1140
1140
-Digestión ruminal, %
MS
51.61±11.88
40.12±9.67
50.93±9.04
51.97±9.36
0.064
MO
56.10±10.73
46.14±9.11
54.34±9.17
54.84±8.32
0.089
FDN
57.31±13.80
44.94±9.34
51.61±9.79
54.03±19.01
0.115
FDA
50.91±16.13
48.01±9.50
45.53±15.25
51.79±19.40
0.155
Digestión post-ruminal, %
MS
62.88±7.99
67.62±7.02
66.65±7.52
65.71±5.13
0.129
MO
60.47±8.61
65.64±7.63
65.64±8.54
65.25±5.30
0.086
FDN
45.40±18.71
55.29±10.52
55.99±13.11
53.27±9.14
0.254
FDA
19.87±14.23
16.50±11.93
27.46±14.96
31.40±17.57
0.354
Digestión total, %
MS
82.64±2.80
81.06±2.10
84.05±1.85
83.57±3.74
0.114
MO
83.24±2.67
81.95±2.13
84.88±1.80
84.33±3.61
0.116
FDN
78.53±2.84
76.12±2.28
79.57±1.98
79.82±3.92
0.146
FDA
58.98±9.45
56.60±9.75
59.21±5.32
64.67±6.15
0.426
REFERENCIAS.
Hidiroglou, M.; Lessard, J.R., 1976: The effect of selenium or vitamin E supplementation on volatile fatty
acid content of rumen liquor in sheep fed a purified diet. International Journal for Vitamin and Nutrition
Research 46, 458-463.
Hino, T.; Andoh, N.; Ohgi, H., 1993: Effects of β-carotene and α-tocopherol on rumen bacteria in the
utilization of long chain fatty acids and cellulose. Journal of Dairy Science 76, 600-605.
Huges, P.E.; Tove, S.B., 1982: Ocurrence of α-tocopherolquinone and α-tocopherolquinol in
microorganisms. Journal of Bacteriology 151, 1397-1402.
Naziroğlu, M.; Güler, T.; Yüce, A., 2002: Effect of vitamin E on ruminal fermentation in vitro. Journal of
Veterinary Medicine Series A 49, 251-255.
Tagliapietra, F.; Cattani, M.; Hansen, H.H.; Bittante, G.; Schiavon, S., 2013: High doses of vitamin E and
vitamin C influence in vitro rumen microbial activity. Animal Feed Science and Technology 183, 210-214.
AGRADECIMIENTOS.
Agradecemos al CONACyT-México por la beca otorgada a la primera autora y a la compañía BASF por
proveer el CLA microencapsulado.
236
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CARACTERIZACIÓN NUTRICIONAL DE ARVENSES MEDIANTE LA TÉCNICA DE PRODUCCIÓN DE
GAS IN VITRO.
NUTRITIONAL CHARACTERIZATION OF WEED THROUGHOUT THE TECHNIQUE OF IN VITRO GAS
PRODUCTION.
González TVH*1, Yong AG2, Estrada FJG3, Yamasaki MA2 y Aviles NF4
Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Campo Experimental Saltillo; 2
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autónoma de Chiapas; 3 Instituto de Ciencias
Agropecuarias y Rurales. Universidad Autónoma del Estado de México; 4 Centro Universitario
Temascaltepec. Universidad Autónoma del Estado de México.
1 Instituto
[email protected]
INTRODUCCION.
Debido a los considerables niveles proteicos, naturaleza multipropósito, amplio margen de adaptación y
capacidad de producción, la biomasa de los árboles y arbustos puede contribuir a mejorar la calidad de la
dieta de los animales, satisfacer la demanda de alimentos en la época de sequía y estimular la aplicación
de técnicas de producción animal compatibles con el medio ambiente y los recursos naturales. Tal es el
caso de las arvenses (plantas que crecen dentro de los cultivos), que son ampliamente utilizadas para la
alimentación del ganado, este tipo de prácticas son comunes en los sistemas de producción campesinos
con recursos económicos limitados, por lo tanto su uso representa un ahorro considerable en la compra
de forrajes y una mejora en la alimentación del ganado. La formulación de raciones se realiza a partir del
conocimiento nutricional, principios fisiológicos, de composición y de costos que se tengan de los
ingredientes a ser utilizados. La digestibilidad de los ingredientes de la dieta, forrajes u otros
componentes puede ser estimada por métodos biológicos, in vivo, in situ e in vitro, el método in vitro es el
de más fácil manejo pues la mayor parte del procedimiento se realiza en el laboratorio.
OBJETIVOS.
Objetivo General: Caracterizar nutricionalmente arvenses del municipio de Tejupilco, estado de México.
Objetivos Específicos: 1) Realizar el análisis químico proximal de 30 especies de arvenses. 2) Determinar
la cinética de fermentación ruminal de 30 especies de arvenses por medio de la técnica de Producción de
Gas in vitro.
MATERIALES Y METODOS
El presente trabajo de investigación se realizó en el laboratorio de bromatología del Instituto de Ciencias
Agropecuarias y Rurales (ICAR), de la Universidad Autónoma del Estado de México (UAEMex), Toluca,
estado de México. Las plantas nativas fueron recolectadas en la comunidad de Rincón de Aguirre,
municipio de Tejupilco, ubicado al suroeste del Estado de México, entre los paralelos 18º45’30’’ y
19º04’32’’, meridianos 99º59’07’’ y 100º36’45”. Se tomaron en cuenta los resultados de los metabolitos
secundarios de las arvenses (fenoles totales, taninos fenólicos y taninos no fenólicos).
METODOLOGÍA
Análisis Químico Proximal: Se determinó el análisis químico proximal de las arvenses, el cual incluyó la
determinación de fibra detergente neutro (FND) y fibra detergente ácido (FAD), mediante el método Van
Soest et al. (1991). Se determinó la concentración de N por el método Kjeldahl (AOAC, 1990) y se
multiplicó por 6.25 para determinar su contenido de proteína cruda (PC).
Técnica de Producción de Gas In Vitro: Para determinar la cinética de fermentación ruminal se utilizó la
técnica de producción de gas in vitro de acuerdo al método propuesto por Theodorou et al. (1994). El
cálculo de la Digestibilidad de las Materia Seca (dMS) se realizó por diferencia de peso entre la muestra
237
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
inicial y la MS del residuo de producción de gas, mientras que para la Digestibilidad de la FDN (dFDN) se
calculó con la digestibilidad del contenido de la FDN de la muestra entre el contenido de FDN de la
muestra inicial (Pell y Shofield, 1993). El volumen de gas acumulado de cada botella se ajustó al modelo
matemático propuesto por Jessop y Herrero (1996): PG=a*(1-exp(-ca+t))+b*(1-exp(-cb*(t-lag)))*(t>lag)*-1.
Donde: PG es la producción acumulada de gas, a es la producción de gas a partir de la fermentación (ml)
de la fracción soluble de los carbohidratos, b es la producción potencial de gas (ml) a partir de la fracción
insoluble pero potencialmente degradable, ca es la tasa de fermentación de la fracción a, cb la tasa de
fermentación de la fracción b y lag es el tiempo en horas antes de iniciar la fermentación de la FDN. Para
el ajuste de las curvas de producción de gas se utilizó el programa Grafit v3.
Digestibilidad de la Materia Orgánica (dMO). Se estimó mediante la diferencia de los residuos de la
técnica de producción de gas in vitro en base seca menos el contenido de cenizas.
Energía Metabolizable (EM). El contenido de EM se calculó multiplicando la dMO X 0.0157 según la
AFRC (1996).
Análisis Estadístico. Los datos obtenidos se procesarón en hoja de cálculo Excel (Microsoft Excel,
2007) y se analizaron mediante el análisis de componentes principales (ACP), en el cual se tomó como
criterio los indicadores que presentan valores propios superiores a uno. Se aplicó un análisis de
conglomerados para la agrupación y selección de las arvenses utilizando como criterio la distancia
euclidiana, a partir de los resultados del ACP, y se determinaron los estadígrafos media y desviación
estándar para las variables analizadas, de esta forma se dispuso de grupos de especies que permitieran
hacer un análisis más sencillo de su comportamiento, se utilizó el programa Statgraphics Versión 16.1.15.
RESULTADOS Y DISCUSION.
Con los resultados obtenidos de la composición química, de la cinética de fermentación ruminal y los
compuestos fenólicos, se realizó un análisis Cluster, y se encontraron cinco grupos de arvenses con
características similares en relación a todas las variables. En el cuadro 1 se muestra la media y
desviación estándar de las características de los cinco grupos de arvenses. Las variables incluidas
fueron: a, b, lag, dMS, dMO, dFDN, EM, PC, FDN, FDA, Fenoles Totales (FT), Taninos Fenólicos (TF),
Taninos no Fenólicos (TnoF), y la variable para clasificación fue Arvenses. En cuanto a los parámetros de
fermentación estos fueron diferentes entre los grupos, como se puede observar, la fracción a más alta
(65.8) se encuentra en el grupo 3, lo que indica que las especies de este grupo cuentan con
carbohidratos solubles que podrían ser aprovechados por el animal, este grupo también cuenta con el
valor más bajo en la fracción b (151.2), lo que puede ser resultado de la cantidad de FDN (353.7) que
presentan, ya que es el grupo con el menor contenido de ésta. Ramírez et al., (2000) mencionan que el
principal factor que disminuye la digestibilidad de los forrajes, es el alto contenido de fibra (FDN) y bajo
contenido celular.
Domínguez et al., (2011) al evaluar forrajeras nativas para alimentación de venados y Pinto et al., (2009)
en un estudio con leñosas forrajeras tropicales, encontraron resultados similares a los presentados en
este trabajo en el grupo 3 en cuanto a PC y FDN, lo que podría indicar que estas especies representan
un importante potencial alimenticio para rumiantes domésticos (vacas, cabras y borregos) y silvestres
(venado cola blanca). En contraste, el grupo 5 cuenta con el valor más alto en FDN con 679.4 y el valor
más alto en la fracción b con 223.4, lo que indica que el alto porcentaje de lignificación de las plantas,
vuelve a la fracción b menos degradable para los microorganismos ruminales (Getachew et al., 2004). El
tiempo lag de los grupos comprende desde 4.5 hasta 8.1, lo que indica que el inicio de la fermentación de
la FDN tiene una variación de hasta 3.6 horas entre un grupo y otro. Martínez et al., (2011) realizaron un
estudio con diferentes especies de arvenses en las cuales encontraron diferentes concentraciones de
fenoles totales que van de 1.7 a 8.6%, concluyendo que estas concentraciones no tienen un efecto
directo sobre la fermentación ruminal, en este caso todos los grupos de arvenses presentados en este
trabajo se encuentran dentro de este rango, por lo que pueden ser utilizadas como alimento para
rumiantes.
238
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 1. Valores Medios (g kg-1 MS-1) y desviación estándar que describen la
composición química y los parámetros de la cinética de fermentación de producción de gas
in vitro de los grupos de arvenses.
Grupo 1
Variable
media
Desv
est
Grupo 2
media
Grupo 3
Desv
est
media
Desv
est
Grupo 4
media
Desv
est
Grupo 5
media
Desv
est
a
23.0
10.5
42.8
5.7
65.8
22.9
48.6
13.2
42.8
28.4
b
152.0
23.2
168.1
36.1
151.2
25.2
153.1
17.3
223.4
25.2
lag
4.5
1.2
7.3
2.0
6.3
2.0
6.0
2.7
8.1
4.6
PC
131.9
36.9
130.0
17.5
133.2
18.1
134.7
30.9
109.0
51.7
FDN
500.7
37.9
452.8
47.4
353.7
35.3
443.5
53.5
679.4
40.7
FDA
349.7
34.3
294.2
42.7
239.8
22.1
313.4
40.3
393.3
19.7
dMS
465.7
13.8
703.4
30.8
684.0
29.2
592.0
48.1
618.8
38.4
dMO
430.5
10.8
649.9
33.5
591.7
49.5
525.5
25.1
569.3
40.4
dFDN
299.9
35.5
599.6
49.8
463.7
13.1
431.6
43.0
492.3
52.4
EM*
6.8
0.2
10.2
0.5
9.3
0.8
8.2
0.4
8.9
0.6
FT**
6.5
1.0
4.3
0.7
4.8
0.9
6.8
2.5
5.1
2.5
TF**
6.3
1.1
4.1
0.8
4.6
0.8
6.6
2.5
4.9
2.4
TnoF**
2.6
2.7
0.2
0.2
0.5
0.9
1.0
1.4
0.3
0.3
CONCLUSIONES.
El Análisis Cluster presentó al grupo 3 formado por las arvenses Ipomea purpurea, Lagascea rubra,
Zornia reticulata, Tagetes subulata y Abutilon sp., con las mejores características en cuanto a su
contenido de PC, alta digestibilidad de MS, digestibilidad de MO y digestibilidad de la FDN, un alto valor
en la fracción a, y bajos porcentajes de FDN y FDA.
Aun cuando los 5 grupos de arvenses de manera general se diferenciaron en cuanto a sus características
químicas, digestibilidades, parámetros de fermentación y niveles de fenoles totales, se sugiere que
pueden ser utilizadas en la alimentación de rumiantes y que en combinación con otros alimentos poco
nutritivos pueden mejorar el aporte de PC y mejorar la cinética de fermentación.
239
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
UTILIZACIÓN DE DIFERENTES ENSILADOS DE CERDAZA EN RACIONES INTEGRALES PARA LA
ENGORDA DE BORREGOS. FASE II. COMPORTAMIENTO PRODUCTIVO.
UTILIZATION OF DIFFERENT SILAGE OF CERDAZA IN THE INTEGRALS RATIONS FOR THE
FATTENING OF SHEEP.PHASE II. PRODUCTIVE PERFORMANCE.
García PJE1*.
1 CBTa.
No. 105. La Estrella, Pénjamo. Gto. Méx.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Un aspecto fundamental de la crisis que se está viviendo en el sector agropecuario nacional y mundial, es
el deterioro de la sustentabilidad de los recursos que se utilizan y por lo tanto, es necesario establecer
soluciones para mitigar estos problemas. De la misma forma es necesario incrementar la rentabilidad y
competitividad de las empresas agropecuarias mediante el uso de los recursos locales para promover el
desarrollo rural sustentable y la seguridad alimentaria. Los desechos orgánicos en la mayoría de las
ocasiones se convierten en contaminantes del aíre, suelos y agua que provocan problemas a las granjas
y a la sociedad, como es el caso de las excretas producidas en los sistemas intensivos de producción. En
general las granjas porcinas tecnificadas están localizadas en regiones con bajos recursos acuíferos
como es el caso de los estados de Jalisco, Michoacán y Guanajuato lo que ha provocado grandes
problemas de contaminación ambiental (1). El reciclaje de excretas porcinas es una alternativa para
disminuir los costos de producción por concepto de alimentación animal y la contaminación ambiental, sin
embargo, el uso de excretas sin tratamientos adecuados y sin evaluación microbiológica, pueden
provocar importantes riesgos de transmisión de enfermedades en las mismas granjas porcinas y de
zoonosis en la población humana. El tratamiento biológico de las excretas denominado ensilaje en
microsilos prácticamente elimina los microorganismos patógenos (2) y ofrece un ensilado listo para ser
utilizado en forma eficiente y sustentable en la alimentación de rumiantes. El propósito de la investigación
fue evaluar dos ensilados de cerdaza y su efecto en la inclusión en raciones integrales para la engorda
de borregos Pelibuey en crecimiento, sobre el consumo de materia seca (MS), cambio de peso vivo y
conversión alimenticia.
OBJETIVO.
El propósito de la presente investigación fue evaluar dos tipos de ensilado de cerdaza y el efecto de su
inclusión en raciones integrales para la engorda de borregos, sobre el consumo de materia seca(MS)de
la ración integral, cambio de peso vivo y conversión alimenticia.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El experimento se realizó en el CBTa. No. 105, La Estrella, Pénjamo. Gto. Se utilizó un diseño
experimental completamente al azar con arreglo factorial de tratamientos 2x2 siendo el Factor A, el tipo
de ensilado y el Factor B el nivel de inclusión. Los cuatro tratamientos se caracterizaron como; T-1=
Tratamiento 1(E1, 30%): ensilado 1 y 30% de inclusión; T2= Tratamiento 2(E1, 50%): ensilado 1 y 50%
de inclusión; T3= Tratamiento 3(E2, 30%): ensilado 2 y 30% de inclusión y T4= Tratamiento 4(E2, 50%):
ensilado 2 y 50% de inclusión. Los tratamientos tuvieron tres repeticiones y se consideró como unidad
experimental a cada una de las corraletas que alojó a tres borregos. El ensilado 1(E1) se elaboró
mezclando 90% de cerdaza fresca y 10% de grano de sorgo molido y el ensilado 2(E2) con 80% de
cerdaza fresca, 10% de grano de sorgo molido y 10% de melaza en contenedores de plástico. Una vez
elaborados y sellados herméticamente los dos tipos de ensilaje de cerdaza se destaparon después de
24 h para liberar los gases producidos en la fermentación inicial e inmediatamente se volvieron a tapar
para continuar la fermentación anaeróbica durante 30 días. Las raciones integrales fueron balanceadas a
13% de proteína cruda y 2.4 Mcal de energía metabolizable por Kg de ración. Los diferentes tipos de
suplemento fueron elaborados con grano de sorgo molido, harina de soya, rastrojo de sorgo y minerales.
240
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Durante la prueba de comportamiento productivo los borregos recibieron un periodo de adaptación de 21
días a las raciones experimentales y 100 días para la engorda. El consumo de alimento se determinó por
diferencia entre ofrecido y rechazado y el cambio de peso vivo se registró cada 14 días con previo ayuno
de 12 h. La conversión alimenticia se determinó considerando la cantidad de alimento consumido y el
cambio de peso vivo al final de la prueba de engorda. Los resultados obtenidos se sometieron al análisis
de varianza y a la comparación de medias de Tukey(3).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Se encontró un efecto significativo (P<05) entre tratamientos para el tipo de ensilado y el nivel de
inclusión en las raciones integrales para la engorda de borregos, indicando que dichos factores tienen
efecto sobre el comportamiento productivo y que sus efectos no son independientes uno del otro. El
consumo de materia seca total por animal por día fue diferente(P<0.05) entre los tipos de ensilado de
cerdaza ofrecidos(E-1 y E-2), pues se incrementó dicho consumo de materia seca total en los borregos
que recibieron el ensilado de cerdaza elaborado con grano de sorgo molido y melaza(550.20 y 623.49
g/animal/día para E-1 y E-2, respectivamente) y cuando se ofreció en 30% del total de la ración integral,
pero se disminuyó al ofrecer el E-2( 570.80 y 510.30 g/animal/día, para E-1 y E-2, respectivamente) al
nivel de 50% del total de la ración integral. Cuadro 1.
Cuadro 1. Efecto del tipo de ensilado y del nivel de inclusión sobre el comportamiento
productivo de borregos Pelibuey.
Tipo de ensilado y nivel de inclusión.
Variables de respuesta.
Ensilado 1(E-1).
Ensilado 2(E-2).
30%
50%
30%
50%
Consumo MS total (g/animal/día).
550.20a
570.80b
623.40c
510.30d
Cambio de peso vivo (g/animal/día).
68.40a
67.30b
90.30c
56.20d
Conversión alimenticia.
8.04a
8.48b
6.90c
9.08d
Coeficiente de variación.
11.0
11.3
10.2
11.50
1
Valores de las medias con diferente letra y dentro de hileras son diferentes estadísticamente
(P<0.05).
Con relación al cambio de peso vivo y conversión alimenticia, se observaron diferencias significativas
(P<0.05), destacando mejores ganancias de peso en los borregos que consumieron el ensilado E-2 con
30% de inclusión. Los resultados observados en el presente estudio pudieron ser debidos a la respuesta
del animal por efecto del tipo de fermentación sufrida en la cerdaza(adición de grano de sorgo molido y
melaza) durante el proceso de conservación, generando ácidos grasos volátiles y otros productos de la
fermentación que probablemente estimularon el apetito de los borregos. En cuanto al nivel de inclusión
del tipo de ensilado en el total de la ración, se encontró diferencia significativa (P<0.05), pues se observó
mejores consumo de MS de la ración total, cambio de peso corporal y conversión alimenticia al ofrecer
menor cantidad de ensilado. Estos resultados son similares a los reportados por otros autores(4), pues se
afirma que la inclusión de ensilado de cerdaza en 30%, permite obtener ganancias de peso vivo promedio
de 150 g/animal/día, reducción del costo de alimentación y de cada Kg de peso vivo producido. De igual
forma se ha indicado(5), que el mejor consumo total de la ración integral en la alimentación animal, se
logra cuando el ensilado de cerdaza se incluye en 15-60% de la dieta y mezclando dicho ensilado con los
demás ingredientes.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
241
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Los consumos de materia seca total, el cambio de peso vivo y la conversión alimenticia fueron mejores
cuando los borregos consumieron el tipo de ensilado E-2 con un nivel de inclusión del 30% en la ración
integral. Estos resultados afirman categóricamente, que la utilización de ensilaje de cerdaza en la
ganadería regional permite mantener índices productivos aceptables en la engorda de borregos Pelibuey
y convertir un material contaminante en un alimento con valor agregado y de aceptable calidad
nutricional, promoviendo la utilización eficiente y sustentable de la cerdaza.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.
1. GALINDO-BARBOZA, A. J. y col. 2013. Ensilado de cerdaza. Una oportunidad para el manejo de la
bioseguridad y el microbismo en granjas porcícolas. Centro de Investigación Regional Pacifico Centro.
Campo Experimental Centro-Altos de Jalisco. INIFAP/SAGARPA.Tepatitlán de Morelos. Jalisco. México.
2. MARTINEZ-GAMBA, R., PRADAL-ROA, P., CASTREJON, P. E. HERRADORA, M., GALVAN, E. and
MERCADO, C. 2001. Persistence of Escherichia coli, Salmonella cholera suis, Aujeszquys Disease virus,
Blue Eye Disease virus in silages based on the solid fraction of pig faeces. J. of Appl. Microbial.91;
750.758.
3. SAS. 2000. Statistical Analysis System. Version 9.0-Windows. Institute Inc. N.C. USA.
4. GOMEZ, R. S. y col. 2005. Manejo y uso de excretas porcinas. II. Inclusión de ensilado de cerdaza en
la alimentación de corderos y toretes de engorda. Desplegable para productores. No. 6. INIFAPGGAVATT. Campo Experimental Bajío. México.
5. SALAZAR, G. G., GOMEZ, R. S., ESPINOZA, G. J. A y GONZALEZ, O. A. T. 2005. Manejo y uso de
excretas porcinas. I. Ensilado de cerdaza. Ingrediente en la alimentación de rumiantes. Desplegable para
productores. No. 5. INIFAP-GGAVATT. Campo Experimental Bajío. México.
RECONOCIMIENTOS.
A la Coordinación Sectorial para el Desarrollo Académico(CoSDAc) y Dirección General de Educación
Tecnológica Agropecuaria(DGETA), por el apoyo financiero ofrecido y el fomento a la formación
académica y científica temprana en los estudiantes de nivel medio superior.
242
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DE CLOSTRIDIUM PARAPUTRIFIUCUM EN LA PRODUCCIÓN RUMINAL DE METANO IN
VITRO.
EFFECT OF CLOSTRIDIUM PARAPUTRIFIUCUM ON IN VITRO RUMINAL METHANE PRODUCTION.
Ábrego GA1*, Cobos PMA2, Hernández SD2, Bárcena GR2
1Estudiante
Graduado, 2Programa de Ganadería, Colegio de Postgraduados, Montecillo, Texcoco, Estado
de México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La sustentabilidad de la producción ganadera ha sido debate de investigaciones recientes, el enfoque no
sólo cuestiona prácticas comunes como deforestación de bosques y erosión de pastizales, sino también
examina los efectos que provocan los gases efecto invernadero (principalmente metano) emitidos durante
el eructo, derivados de la fermentación entérica ruminal.
La ecología microbiana del rumen es sumamente compleja y la capacidad de este sistema para convertir
eficientemente los carbohidratos complejos en azúcares fermentables se debe en parte a la eliminación
de hidrógeno a través de la reducción de CO2 a metano por metanogénos. Disminuir las emisiones de
metano ruminal, sin alterar los parámetros productivos de los rumiantes e inocuidad alimentaria, es la
mejor estrategia para reducir los gases de efecto invernadero. Al respecto, las bacterias ruminales
acetogénicas normalmente se encuentran en el rumen y son de interés, porque pueden usar hidrógeno,
un intermediario esencial en la formación de metano (McAlliester y Newbold, 2008). Sin embargo, la
acetogénesis es mínima en el rumen, aunque está presente probablemente debido a la capacidad de las
bacterias para utilizar una diversidad de sustratos, además de CO2/H2 como fuente energética.
El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de Clostridium Paraputrificum aislada de fluido ruminal de
un ovino adulto, en un medio de cultivo selectivo anaerobio para bacterias acetogénicas en la producción
de metano y digestibilidad de la materia seca in vitro.
MATERIALES Y MÉTODOS.
La bacteria ruminal acetogénica Clostridium paraputrificum (Cp) fue aislada con la técnica (Cobos et al.,
2011) y Hungate (1969) de un ovino adulto alimentado con paja de avena y concentrado, se usó un
medio de cultivo anaerobio para bacterias acetogénicas a base de formato, cloranfenicol y fluido ruminal
clarificado. El cultivo puro de Cp se conservó liofilizado. Para estimar la digestibilidad in vitro de materia
seca (DIVMS) y producción de gas in vitro se usaron 15 viales serológicos de 100 mL como digestores a
cada uno se le adicionaron 2 g (tamaño de partícula ≤ 2.0 mm) de una dieta integral para ovinos en
crecimiento según los requerimientos del NRC (1985) formulada en base seca: maíz 18 %, sorgo (8-12
% PC) 13.8 %, pasta de soya 3.0 %, heno de alfalfa 10.0 %, rastrojo de maíz 40 %, gluten de maíz 10 %,
mezcla mineral 0.1 %, melaza 5.0 %, urea 0.1 %. Se agregó también 43 mL de medio anaerobio (Cobos
et al., 2011) los viales fueron sellados con tapones de plástico y casquillos de aluminio, por último se
esterilizaron por 15 min a 15 psi y 121ºC, posteriormente fueron inoculados. El inóculo de bacterias
ruminales (IBR) se extrajo de una vaca Holstein fistulada en rumen, alimentada en una pradera de alfalfa,
el fluido ruminal fue centrifugado a (4240 Xg) por 3 minutos y se determinó su concentración bacteriana
(8.45 x1010 bacterias mL-1) con un microscopio de contraste de fases a una magnificación de 100x y una
cámara Petroff-Hausser. La concentración de Cp fue de 1x106 bacterias mL-1. Las inoculaciones
(tratamientos) se realizaron con jeringas desechables estériles de la siguiente manera; a) 5 mL del
inóculo Cp, b) 2.5 mL del inóculo Cp + 2.5 mL del IBR y c) 5 mL del IBR. El tiempo total de incubación
fue de 72 h en baño maría a 39 °C. La producción de gas in vitro fue colectado en trampas de solución
salina (400 g de NaCl en 1 L de agua destilada, se ajustó el pH≤ 2 y se agregó 5 mL de indicador
anaranjado de metilo al 20 %). Después de 72 h de incubación en los digestores se estimó la DIVMS con
la técnica descrita por Cobos et al. (2011). La concentración de CH4 y CO2 del gas capturado en las
trampas de solución salina fue analizada en un cromatógrafo de gases (Clarus 500, PerkinElmer) usando
243
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
un detector de conductividad térmica (TCD) y una Columna empacada Porapak 80/100. Se utilizó Helio
como gas acarreador, 23.5 mL min-1; horno, 80°C; TCD, 130°C e inyección, 170°C.
La DIVMS, producción de gas in vitro, concentración de CH 4 y CO2 del gas capturado, se analizaron
mediante un diseño completamente al azar con los tres tratamientos descritos y cinco repeticiones. La
comparación de medias se realizó con la prueba Tukey (p≤0.05) con el procedimiento PROC GLM (SAS,
1998).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Aunque, la técnica de producción de gas in vitro es un sistema cerrado, se esperarían valores
ácidos de pH, el tratamiento IBR (Cuadro, 1) finalizó en un rango de pH normal en condiciones de
animales sanos, pero en los tratamientos inoculados con Cp disminuyeron (p<0.05), debido
probablemente a los metabolitos ácidos acumulados de las bacterias acetogénicas.
Cuadro 1. Efecto de C. Paraputrificum en la producción de gas in vitro y DIVMS a 72 h de
incubación
Variable
Tratamiento
EEM2
CP
CP + IBR
IBR
5.93 c
5.33 b
6.10 a
0.20
Biogas, mL
172.42a
76.60b
115.73b
13.78
CO2, mM/100 mM
93.42a
82.52b
82.62b
1.03
CH4, mM/100 mM
6.58a
17.48b
17.38b
1.03
a
72.95 a
2.81
pH1
DIVMS, g/100 g MS
a, b, c Literales
1pH
62.56 b
75.58
diferentes en la misma hilera difieren estadísticamente (p≤0.05).
inicial del medio de cultivo = 6.91. 2EEM= Error Estándar de la Media.
La mayor producción de gas se presentó en el inóculo Cp y no hubo diferencias significativas entre Cp +
IBR e IBR (76.60 vs 115.73 mL). La concentración de CO2 fue mayor (p<0.05) en el inoculo Cp axenico y
no mostró diferencias entre el cultivo de Cp + IBR e IBR. El inóculo Cp tuvo la concentración más baja de
CH4 y no se encontraron (p>0.05) diferencias entre CP + IBR e IBR, lo que confirma el dominio de
metanógenos en el ecosistema ruminal por la utilización de H 2 metabolico. El inóculo Cp tuvo una
producción elevada de gas (mL) al igual que el IBR, pero la interacción Cp + IBR representa una
disminución de 66 % de los gases generados comparado con el IBR. La DIVMS del tratamiento Cp fue
menor (p<0.05; Cuadro 1) al resto de los tratamientos; mientras que la digestibilidad en cocultivo Cp+IBR
fue similar (p>0.05) al tratamiento IBR.
CONCLUSIÓN.
El inóculo de la bacteria C. paraputrificum no demostró efectos en la producción de gas en cocultivo con
bacterias ruminales. La DIVMS indica un efecto positivo del inóculo de C. paraputrificum en cocultivo con
bacterias ruminales, sin embargo no tiene efectos sobre la concentración de CH 4.
LITERATURA CITADA.
Cobos, M.A., A. Ley de Coss, N.D. Ramírez, S. S. González and R. Ferrera Cerrato. 2011. Pediococcus
acidilactici isolated from the rumen of lambs with acidosis, 16S RNA identification and sensibility to
monensin and lasalocid. Res. in Vet. Sci. 1:26-30.
244
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Hungate, R.E. 1969. A roll tube method for cultivation strict anaerobes. In: Methods in Microbiology.
Norris, J.R. y D.W. Robins (Eds.), Academic Press Inc. New York, USA. pp. 117-132.
McAllister, T.A. and C.J. Newbold. 2008. Redirecting rumen fermentation to reduce methanogenesis.
Aust. J. Exp. Agri. 48(2): 7–13.
NRC (Nacional Research Council). 1985. Nutrient Requirements of sheep. 6th edition. Nacional Academy
Press. Washington D.C., E.U.A. pp. 45-46.
SAS Inc., 1998. SAS User’s Guide: Statistics, Version 6th Edition. SAS Inc. Cary, NC, USA.
245
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESPUESTA PRODUCTIVA DE LA GALLINA DE POSTURA ALIMENTADA CON DIETAS CON
DIFERENTE GRANULOMETRÍA.
PRODUCTIVE PERFORMANCE OF LAYING HENS FED WITH DIETS OF DIFFERENT PARTICLE
SIZE.
Galicia HO1*, Fuente MB1, Balderas GA1, Rosales ME2, Ávila GE1
1Centro
de Enseñanza, Investigación y Extensión en Producción Avícola-FMVZ-UNAM; 2DSM Nutricional
Products México S.A. de C.V.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Los ingredientes usados en la alimentación de las aves pasan por un proceso de molienda el cual
repercute en una mayor superficie de contacto para la acción de las enzimas digestivas y se utilicen los
nutrientes más eficientemente. Los métodos comúnmente utilizados para dicho fin son el molino de
martillos y el molino de rodillos. Estudios en pollo de engorda señalan el efecto benéfico de reducir o
incrementar la granulometría de la dieta, sobre el peso y conversión alimenticia, sin embargo, existen
pocas investigaciones de la respuesta productiva de la gallina de postura ligera con diferentes
granulometrías en la dieta empleando sorgo.
OBJETIVO.
Evaluar diferentes granulometrías en el alimento sobre el comportamiento productivo de gallinas de
postura Bovans White de primer ciclo.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Se utilizaron 300 gallinas de la estirpe Bovans White de 50 semanas de edad y 31 semanas en
producción, con un peso promedio inicial de 1 666 ± 145 g, alojadas en una caseta de ambiente natural
en jaulas tipo California de dos niveles con tres aves por jaula (600 cm 2 por ave). Las aves se
distribuyeron en un diseño completamente al azar en cinco tratamientos con cinco réplicas de 12 gallinas
cada una. El agua y alimento se proporcionaron ad libitum. Se utilizó una dieta con base en sorgo + pasta
de soya y granos secos de destilería, según la etapa productiva de acuerdo a las necesidades que
menciona el manual de la estirpe.
El sorgo se molió con molino de rodillos a un tamaño de partícula menor a 2 681 µm (SR), se utilizó un
molino con 24 martillos y que utiliza un motor de 20 hp tipo RGZ de marca SIEMENS, empleando mallas
de 2.5 mm, 3.5 mm y 4.5 mm para obtener granulometrías menores a 1 543µm (SM 2.5), 1 851 µm (SM
3.5) y 2 067 µm (SM 4.5). En el caso de la pasta de soya, se molió con un molino de martillos y las
mismas mallas usadas para el sorgo para obtener granulometrías menores a 923µm (PS 2.5), 961 µm
(PS 3.5) y 1 392 µm (PS 4.5); además se utilizó pasta de soya tal cual es enviada de las harineras con
una granulometría menor a 1 667µm (PSE). Los tratamientos utilizados fueron 1) SR + PSE con
granulometría en el alimento menor a 2 231 µm, 2) SM 4.5 + PS 4.5 con una granulometría en el alimento
menor a 1 652 µm, 3) SM 3.5 + PS 3.5 con granulometría en el alimento menor a 1 459 µm, 4) SM 2.5 +
PS 2.5 con granulometría menor a 1 194 µm y 5) SM 3.5 + PSE + 20% de grano entero con
granulometría menor a 1 897 µm. Durante las 10 semanas de experimentación se evaluaron
semanalmente el porcentaje de postura, consumo de alimento ave d -1 (g), conversión alimentaria (kg: kg),
peso de huevo (g) y masa de huevo ave d-1 (g). También se midió el porcentaje de huevo sucio, roto y en
fárfara (huevo sin cascarón).
A los resultados obtenidos del porcentaje de postura, peso promedio de huevo, consumo de alimento ave
d-1, conversión alimentaria y masa de huevo ave d-1, se les realizó un análisis de observaciones repetidas
en el tiempo. Para el caso de porcentaje de huevo sucio y roto, antes de realizarle el análisis se
transformaron a
y para el caso de huevo sin cascarón se transformó a
. La
comparación de las medias se realizó mediante la prueba de Tukey P<0.05
246
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los resultados obtenidos en 70 días de experimentación sobre el comportamiento productivo de las
gallinas Bovans White alimentadas con dietas con diferentes granulometrías a través del tiempo se
muestran en el Cuadro 1. Para la variable peso de huevo, se observó un incremento de 1 g a través de
las semanas de experimentación (P=0.0003). No se encontró un efecto del tiempo sobre las variables
porcentaje de postura, consumo de alimento ave d-1, conversión alimentaria y masa de huevo ave d-1, así
como en el porcentaje de huevo roto, sucio y fárfara (P>0.05).
En el Cuadro 2, se muestran los resultados promedio de la respuesta productiva de las gallinas Bovans
White alimentadas con dietas con diferentes tamaños de partícula en el alimento. El mayor porcentaje de
postura se observó en los tratamientos 3 (95.31%) y 4 (95.38%), mientras que el menor porcentaje fue el
del tratamiento 2 (93.46%); de forma intermedia se encontraron los tratamientos 1 (93.67%) y 5 (94.53%)
(P<0.05).El tratamiento con mayor peso de huevo fue con tamaño de partícula menor a 2 231 µm (62.6
g), y de forma intermedia los tratamientos con tamaño menor a 1 652 µm (62 g), 1 459 µm (62 g) y 1 194
µm (61.7 g). El empleo de la dieta con 20% de grano entero (tratamiento 5) mostró un efecto
negativo en las variables peso de huevo, consumo de alimento e índice de conversión. Los
resultados difieren de los reportados por Ruhnke et al (2015), los cuales no encontraron diferencia en el
comportamiento productivo, al comparar diferentes métodos de molienda y diferentes granulometrías sin
embargo estos autores emplearon gallinas semipesadas.
El menor consumo de alimento lo obtuvo el tratamiento 1 (107.6 g), de forma intermedia los tratamientos
2 (109.5 g), 3 (107.9 g) y 4 (108.9g), coinciden con los obtenidos por Safaa et al (2009), en los que se
presentan mayores consumos en gallinas alimentadas con granulometrías más grandes 1 411 µm vs 1
126 µm y 935 µm, Para el caso de índice de conversión el tratamiento con mayor índice de conversión
fue el tratamiento 5 (1.906), el menor índice de conversión lo obtuvo los tratamientos 3 (1.827) y 1
(1.836), de forma intermedia los tratamientos 2 (1.893) y 4 (1.853). Maclsaac y Anderson (2007) reporta
que no hay efecto sobre el porcentaje de postura, peso promedio de huevo, consumo de alimento ave d -1
e índice de conversión al comparar dos moliendas con mallas de 7 mm vs 5 mm. Cabe señalar que las
granulometrías usadas por los autores anteriormente citados son mayores a las utilizadas en este estudio
En el caso de masa de huevo ave d-1 y porcentaje de huevo sin cascarón (fárfara), sucio y roto no se
encontró efecto del tamaño de partícula del alimento sobre estas variables (P> 0.05).
Cuadro 1. Comportamiento productivo de la gallina Bovans White en diez
alimentadas con dietas con diferentes granulometrías.
Consumo
Masa de
Conversión
de
huevo
Postura
Peso de
alimentaria
Semana
alimento
ave d-1
(%)
huevo (g)
(kg: kg)
ave d-1 (g)
(g)
1
94.95
61.6
108.5
1.857
58.5
2
95.05
62.0
109.1
1.854
58.9
3
95.38
61.9
109.0
1.848
59.1
4
94.19
61.7
108.4
1.867
58.1
5
93.90
61.5
108.9
1.888
57.7
6
93.38
61.6
109.1
1.900
57.5
7
94.92
62.2
108.9
1.845
59.1
8
95.06
62.3
109.4
1.850
59.2
9
94.43
62.1
109.1
1.861
58.6
10
93.42
62.6
108.6
1.860
58.5
Prob.
NS
0.0003
NS
NS
NS
EEM
0.67
0.19
0.43
0.01
0.43
NS = No significativo (P>0.05)
EEM = Error estándar de la medio
semanas de producción,
Huevo (%)
Roto
Fárfara
Sucio
1.21
0.97
0.85
1.32
1.43
1.63
1.57
1.61
1.11
1.45
NS
0.37
0.06
0.10
0.10
0.10
0.32
0.45
0.05
0.26
0.76
0.42
NS
0.13
2.02
1.64
2.35
1.28
1.48
2.38
1.81
1.35
1.28
1.33
NS
0.34
247
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 2. Respuesta productiva de la gallina Bovans White alimentada con dietas con diferente
granulometría.
TPM
(µm)
Postura
(%)
2231
93.67ab
62.6a
107.6d
1.836c
2
1652
93.46b
62.0b
109.5ab
1.893ab
3
1459
95.31a
62.0b
107.9c
4
1194
95.38a
61.7bc
1897
94.53ab
61.5c
Tratamiento
Peso de Consumo
I.C.A
huevo(g) ave d-1 (g) (kg: kg)
Masa de
huevo
ave d-1
(g)
Huevo (%)
Roto
Sucio Fárfara
58.7
2.29
0.77
0.36
58.0
1.54
2.74
0.34
1.827c
59.1
0.66
0.99
0.23
108.9bc
1.853bc
58.8
0.62
1.67
0.15
110.7a
1.906a
58.1
1.47
2.29
0.23
EEM
0.47
0.13
0.31
0.01
0.3
0.264
EEM = Error estándar de la media
TPM = Tamaño de partícula del alimento menor a
I.C.A = Índice de conversión alimentaria
Diferente letra en misma columna son estadísticamente diferentes (P< 0.05; Tukey)
0.242
0.094
1
5
CONCLUSIONES.
De los resultados obtenidos bajo las condiciones experimentales empleadas se puede concluir que la
granulometría del alimento de postura no afectó la masa de huevo ave ave d -1, el porcentaje de huevo
roto, sucio y huevo sin cascarón en la gallina Bovans White de primer ciclo.
La granulometría más alta del alimento (2 231 µm) de postura mejoró el peso del huevo, disminuyó el
consumo de alimento y la conversión alimentaria.
La granulometría del alimento de postura con un rango de 1459 a 1194 µm mostró el mayor porcentaje
de postura
IMPLICACIÓN.
El empleo de una granulometría en el alimento de gallina de postura menor a 1459 µm y una
granulometría menor a 2231 µm puede mejorar los parámetros productivos de la gallina Bovans White de
50 a 60 semanas de edad sin afectar el porcentaje de huevo sin cascarón, roto y sucio.
REFERENCIAS.
Nir, I. (1994). Effect of Particle Size on Performance 1. Corn. Poultry Science, 73, 45-49.
Ruhnke, I., Röhe, I., Krämer, C., Goodarzi Boroojeni, F., Knorr, F., Mader, A., Zentek, J. (2015). The
effects of particle size, milling method, and thermal treatment of feed on performance, apparent ileal
digestibility, and pH of the digesta in laying hens. Poultry Science, 00, 1-8.
Safaa, H., Jiménez-Moreno, E., Valencia, D., Frikha, M., Serrano, M., y Mateos, G. (2009). Effect of main
cereal of the diet and particle size of the cereal on productive performance and egg quality of brown egglaying hens in early phase of production. Poultry Science, 88, 608-614.
248
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
SUSTITUCIÓN DE DL-METIONINA POR BETAÍNA ANHIDRA EN DIETAS DE GALLINAS DE
POSTURA DURANTE EL PRIMER CICLO DE PRODUCCIÓN.
REPLACEMENT OF DL-METHIONINE FOR ANHYDROUS BETAINE IN DIETS FOR LAYING HENS
DURING THE FIRST CYCLE OF PRODUCTION.
Castro CLE*1, Fuente MB1, Hernández VX3.
1Centro
de Enseñanza e Investigación y Extensión en Producción Avícola FMVZ-UNAM, 3Departamento
de Medicina y Zootecnia de Aves, FMVZ – UNAM
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En el año 2013 México se posicionó en el cuarto lugar a nivel mundial de producción de alimento
balanceado con 28.99 millones de toneladas métricas; el sector avícola es el principal demandante de
este producto, debido a que se destinaron 8.4 millones de toneladas para pollos de engorda y 6.1 para
alimento de gallinas en postura. Por su parte la producción de huevo en el mismo año fue de 2.5 millones
de toneladas de huevo, formando parte del 63% de la participación en la producción pecuaria del país. En
2014, las tendencias de la industria del alimento balanceado se vieron afectadas por eventos como
sequías generalizadas, fluctuaciones en el manejo de normativas para la importación, exportación,
zoonosis tales como la influenza aviar y elevados costos de las materias primas del alimento. Debido a la
limitada capacidad de producción de DL-metionina sintética en Estados Unidos de América, se observó
desabasto, provocando alta demanda e incremento en el costo de este ingrediente en la industria de
fabricación de alimento. La DL-metionina es necesaria para cubrir las necesidades de aminoácidos
azufrados en las dietas de las gallinas de postura. Sin este aminoácido no es posible cubrir las
necesidades de metionina + cistina con los ingredientes que se encuentran disponibles o se tendría que
incrementar el nivel de proteína, lo que elevaría los costos de producción. La información del empleo de
la betaína anhidra en dietas de pollo de engorda como sustitución de la DL-metionina es amplia; sin
embargo, está poco documentado su uso en gallinas de postura; así como el impacto en su
productividad, por lo que se planteó el presente trabajo.
OBJETIVO.
Evaluar diferentes niveles de inclusión de DL-Metionina sintética y Betaína anhidra sobre el
comportamiento productivo de la gallina de postura.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Se utilizaron 432 gallinas de la estirpe Bovans White con un peso promedio de 1623 ± 45.9 g, de 64
semanas de edad y 46 semanas en producción de huevo, alojadas en una caseta de ambiente natural
con jaulas dispuestas en un diseño piramidal. Las aves se distribuyeron en un diseño completamente al
azar en 9 tratamientos con 4 repeticiones de 12 gallinas cada una. Se emplearon dietas con base en
sorgo + pasta de soya que cubrieron las necesidades nutricionales de acuerdo con la etapa productiva y
recomendaciones de la casa genética, excepto en los niveles de aminoácidos azufrados digestibles. Los
tratamientos variaron de 0.427% de aminoácidos azufrados digestibles hasta 0.611% con incrementos de
0.046%. Lo que correspondió a una adición en la dieta basal de 25, 50, 75 y 100% de DL-metionina
sintética o betaína anhidra.
Los tratamientos fueron: 1) Dieta sin DL-metionina; 2) Dieta con 25% DL-metionina; 3) Dieta con 50% DLmetionina; 4) Dieta con 75% DL-metionina; 5) Dieta con 100% DL-metionina; 6) Dieta con 25% betaína
anhidra; 7) Dieta con 50% betaína anhidra; 8) Dieta con 75 betaína anhidra; 9) Dieta con 100% betaína
anhidra.Durante los 70 días de experimentación se llevaron registros semanales del porcentaje de
postura, consumo de alimento ave d-1 (g), conversión alimentaria (kg: kg), peso promedio de huevo (g) y
masa de huevo ave d-1 (g). A los datos obtenidos de las variables antes mencionadas de los tratamientos
249
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
1 al 5 se les realizó una regresión lineal simple para establecer una curva de respuesta de la DLmetionina con una significancia de P<0.05. Para conocer la equivalencia de betaína anhidra con DLmetionina se realizó mediante la fórmula:
X= (y-β0)/β1, dónde;
X=Equivalencia de betaína anhidra;
y= respuesta productiva
β0 y β1 = coeficientes de regresión obtenidos de la curva de respuesta de la DL-metionina.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Los resultados obtenidos durante diez semanas de experimentación con los diferentes niveles de
inclusión de DL-metionina mostraron un efecto lineal para el porcentaje de postura (88.68+0.056*% de
inclusión de DL-metionina; R2 0.40)(P<0.05), peso promedio de huevo (59.83+0.020*% de inclusión de
DL-metionina; R2 0.45)(P<0.05), masa de huevo ave d-1 (53.06+0.052*% de inclusión de DL-metionina; R2
0.57)(P<0.05) y conversión alimentaria (1.924-0.0018*% de inclusión de DL-metionina; R2 0.61),
(P<0.05). Para el consumo de alimento ave d-1, no se encontró una respuesta lineal con los diferentes
niveles de DL-metionina empleados (P>0.05). Para calcular la equivalencia de betaína anhidra con DLmetionina, se utilizaron los resultados promedio obtenidos de la respuesta productiva a los diferentes
niveles de betaína anhidra de porcentaje de postura (89.80%), peso del huevo (59.88 g), masa de huevo
ave d-1 (53.77 g) y conversión alimentaria (1.89 kg).
Al realizar la sustitución de DL-metionina por betaína anhidra se encontró para conversión alimentaria
15% (315 g de DL-metionina) (Figura 1), masa de huevo ave d-1 13.5% (283 g de DL-metionina) (Figura
2) porcentaje de producción 20% (315 g de DL-metionina)( Figura 3), y peso de huevo 2% (42 g de DLmetionina) (Figura 4).
Figura 2. Porcentaje de substitución de DLMetionina por Betaína anhidra en masa de
huevo ave d-1.
Figura 1. Porcentaje de substitución de DLMetionina por Betaína anhidra en Conversión
alimentaria.
250
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
El valor de sustitución de betaína en la producción
de huevo, masa de huevo ave d-1 y conversión
alimentaria, puede deberse a que la betaína
estimula a la pituitaria anterior para liberar las
hormonas FSH y LH (Zuou, 2001); además actúa
como agente lipotrófico en el hígado promoviendo la
movilización de lípidos a la yema de huevo hasta el
punto en donde los aminoácidos azufrados son
necesitados para la síntesis de proteína del huevo.
Aunque la betaína funge como donadora de grupos
metilo en reacciones de transmetilación para la síntesis de diversas sustancias como la carnitina y
cre
Figura 3 Porcentaje de DL-Metionina por
Figura 4. Porcentaje de sustitución de DLatin
a
Betaína
anhidra
en
porcentaje
de
Metionina por Betaína anhidra en peso de
(Kid
producción.
huevo
d et
al.,
1997). La metionina cumple otras funciones además de ser donadora de grupos metilo, siendo la de
mayor relevancia la formación de proteínas, efecto que se vio claramente en el peso del huevo en donde
solamente la betaína pudo sustituir a la metionina en un 2%, por ello es importante que no se desvié su
empleo para la formación de otros compuestos. Zou y Lou en 2002 observaron mejoras en la conversión
alimentaria en gallina de postura alimentadas con dietas adicionadas con betaína en las que no
substituyeron a la DL-metionina, esto fue explicado por una mejor utilización de los aminoácidos de la
dieta.
CONCLUSIONES.
De los resultados obtenidos bajo las condiciones experimental empleadas se concluye que los mejores
niveles de substitución de DL-metionina sintética por betaína anhidra fueron para conversión alimentaria
15%, porcentaje de producción 20%, masa de huevo ave/ día 13.5% y peso de huevo 2%.
IMPLICACIÓN.
La substitución del 15% de DL-metionina por betaína anhidra, no remplaza las funciones de DL-metionina
como aminoácido, pero al actuar como donador de grupos metilo, permite que este aminoácido lleve a
cabo las funciones de síntesis de proteína.
REFERENCIAS
Kidd, M., Ferket, P. & Garlich, J., 1997 World´s Poultry Science Journal.53: 125-139
Zou, X.T. Chinese J.Vet Sci 21:300-303
Zou, X.T.and Lu. J.J. 2002. Agric Sci China, 5: 325-330.
251
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
VALOR NUTRICIONAL DE MUÉRDAGO ENANO (ARCEUTHOBIUM GLOBOSUM WIENS) Y SU
VALOR NUTRITIVO EN OVINOS.
NUTRITIONAL VALUE OF DWARF MISTLETOE (ARCEUTHOBIUM GLOBOSUM WIENS) AND ITS
NUTRITIONAL VALUE FOR SHEEP.
1
1
2
1
1
Hernández LGB , Endara AAR , González RM , Martínez HJ , Estrada FJG *
1 Instituto
de Ciencias Agropecuarias y Rurales (ICAR); 2 Departamento de Nutrición animal. Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia (FMVZ); Universidad Autónoma del Estado de México. Instituto
Literario 100, Toluca, México
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El muérdago enano es una planta parásita que constituye la segunda causa de daño a los bosques de
coníferas de México y el segundo lugar de daño biológico después de los insectos descortezadores. En
los bosques de Pinus hartwegii del Área de Protección de Flora y Fauna Nevado de Toluca (APFFNT) la
incidencia de estas plantas se encuentra infestando un total estimado de 10,289 ha.
Diversos estudios se han enfocado en estudiar características de esta planta. Sin embargo, en ninguno
se muestra su valor nutricional y su potencial para ser utilizado como un forraje no convencional. En los
últimos años el interés por el uso de forrajes no convencionales ha ido en aumento, se ha demostrado
que el uso de este tipo de forrajes podría brindar una alternativa de energía o proteína en la alimentación
de rumiantes. El objetivo del trabajo fue evaluar el comportamiento productivo y la digestibilidad aparente
en ovinos alimentados con diferentes niveles de inclusión de muérdago enano (Arceuthobium globosum).
MATERIALES Y MÉTODOS.
Animales y Dietas. Se utilizaron 12 ovinos criollos de 6 meses de edad (24.6 ±3.4 kg de peso vivo),
distribuidos al azar en tres tratamientos, un tratamiento testigo (T0%) y dos niveles de inclusión de
muérdago enano (T15% y T30%), (Tabla 1). Cabe señalar que la colecta del muérdago enano se realizó
en áreas de infestación seleccionadas en los bosques de P. hartwegii del APFFNT y se mezclaron
plantas en todas sus etapas fenológicas.
Tabla 1. Inclusión de los ingredientes utilizados, composición química y contenido de taninos
condensados de las dietas experimentales (g/kg MS)
T0= Dieta control, T15=inclusión de muérdago al 15%, T30=inclusión de muérdago al 30%.
Ingrediente
Muérdago enano
Rastrojo de maíz
Heno de avena
Grano de maíz
Pasta de soya
Melaza
Minerales
Total
Inclusión de muérdago enano
T0%
T15%
0
150
210
90
230
200
340
340
170
170
30
30
20
20
1000
1000
T30%
300
0
140
335
175
30
20
1000
Composición química
Materia Seca
Materia Orgánica
Proteína Cruda
Fibra Detergente Neutro
Fibra Detergente acido
Carbohidratos Solubles
Taninos Condensados
931
862
141
352
150
68
0.4
950
886
141
496
193
75
34
948
882
138
421
175
65
15
252
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Manejo y mediciones en los animales. Se realizaron dos experimentos el primero evaluó el
comportamiento productivo y tuvo una duración de 67 d, siete días de adaptación a las dietas
experimentales y 60 d de evaluación. Los animales se mantuvieron en corraletas individuales
(1.20×1.20m). Las variables evaluadas fueron; ganancia diaria de peso (g/kg PV 0.75.día), realizando
mediciones cada 15 d y el consumo de materia seca (CMS g/kg PV 0.75.día). Al finalizar este periodo se
inicio el experimento 2 en el cual los animales se alojaron en jaulas metabólicas durante 7 d, se registró
el consumo de alimento y la excreción de heces, se tomó diariamente una submuestra (10%) y se
almacenó a -20°C para posteriores análisis. Durante los dos experimentos el alimento se proporcionó en
partes iguales a las 08:00 y 15:00 h y se ofreció agua ad libitum. El alimento ofrecido y rechazado se
pesó diariamente. La digestibilidad aparente de la materia seca (DMS), la materia orgánica (DMO), la
fibra detergente neutro (DFDN) y la fibra detergente ácido (DFAD) se estimaron utilizando la siguiente
ecuación:
Dx (g/kg) = x ingerida – x excretada en heces × 1000
x ingerida
Donde D es la digestibilidad (g/kg) y “x” es la MS, MO, FND y FAD en g/d
Análisis químico. El contenido de materia seca (MS) de los ingredientes, dietas, rechazos y heces se
determinó en un horno de aire forzado (60º C, 48 h). Se determinó la materia orgánica (MO), nitrógeno
total (N) por Kjeldahl, para el contenido de PC se multiplicó el N por 6.25. La fibra detergente neutro
(FDN) y la fibra detergente ácido (FDA) según Van Soest (1991) y se adicionó α-amilasa para FDN. La
FDN y FDA se expresaron sin ceniza residual. El análisis de carbohidratos solubles se llevó a cabo
mediante el método fenol-sulfúrico (Dubois et al., 1956). El contenido de taninos condensados se
determinó mediante la técnica de Butanol-HCI/Fe3+ (Makkar et al., 2007).
Diseño experimental y análisis de datos. En ambos experimentos se utilizó un diseño completamente
al azar con tres tratamientos y cuatro repeticiones, se utilizó el modelo: Y ij= μ + Ti + Eij. Donde: Yij=
Variable de repuesta, μ =Media general, Ti= Efecto tratamiento Eij= Error experimental. Para el
experimento uno el CMS y la GDP se analizaron mediante el procedimiento PROC MIXED (SAS 2002,
versión 9.0). Para el experimento dos, los datos obtenidos fueron analizados mediante un análisis de
varianza utilizando el procedimiento PROC GLM (SAS 2002, versión 9.0). Cuando se observaron
diferencias significativas se realizó una comparación de medias mediante la prueba de Tukey (P < 0.05).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
La concentración de taninos condensados en las dietas experimentales, es aportada en su totalidad por
el muérdago enano (Tabla 1). La mayor concentración se observó en T30. La inclusión de TC en la
alimentación de rumiantes ha demostrado tener efectos tanto positivos como negativos. El consumo MS
y MO (g/kg PV 0.75.día) fue similar entre tratamientos (P>0.05) (Tabla 2). El mayor consumo de FDN y
FAD fue para T30 (P<0.001). Esta inclusión de muérdago no alcanzó los niveles de 55 g CT kg-1 MS pues
en este punto el consumo voluntario puede verse reducido. Lo anterior indica que la inclusión de
muérdago enano, posiblemente no presenta un sabor astringente, característico de estos compuestos, la
cual puede generar una reducción en la ingesta de alimento (Makkar, 2003).
La GDP (g/kg PV 0.75.día) mostró diferencias (P<0.05) entre tratamientos, en los primeros 15 días y a los
60 días de evaluación, la mayor GDP se tuvo en T0. No se observaron diferencias entre T0 y T15
(P>0.05), por lo que se considera a T15 como el nivel óptimo de inclusión.
La digestibilidad aparente de la MS, MO y FAD decrecen (P<0.05) a medida que aumenta la inclusión de
muérdago enano. Lo anterior se debe al contenido de TC en el muérdago y al mayor porcentaje de
carbohidratos estructurales que aporta a la dieta. Los taninos pueden hacer que los componentes del
alimento sean menos digeribles al unirse a ellos. Así la digestibilidad de la proteína tiende a reducirse
más, pero la digestibilidad de los hidratos de carbono, almidón y la pared celular también pueden verse
afectados (Mueller-Harvey, 2006). Además, los taninos pueden impactar de manera negativa en la
adherencia de los microorganismos a los alimentos (Makkar, 2003).
253
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Tabla 2. Ganancia diaria de peso (g/kg PV 0.75.día), consumo de alimento (g/kg PV
0.75.día) y digestibilidad aparente (g/kg) en ovinos alimentados con diferentes niveles
de inclusión de muérdago enano.
Dietas
T0
Peso inicial (kg0.75)
10.1b
Medias de GDP (g/kg PV 0.75.día)
Día 15
25.3a
Día 30
8.9
Día 45
14.0
Día 60
12.8a
Conversión
alimenticia
5.3
Consumo (g/kg PV 0.75.día)
Materia Seca
88.8
MO
82.2
FDN
33.5c
FDA
14.3c
Digestibilidad (g/kg)
MS
737ª
MO
700ª
FDN
558
FAD
519a
T15
10.8ab
T30
12.1a
EEM
0.38
P
0.14
19.6ab
7.0
14.0
10.8ab
10.9b
12.43
11.2
10.3b
2.49
1.71
2.04
0.62
0.008
0.13
0.55
0.04
4.5
5.4
0.86
0.72
91.5
85.1
40.5b
16.9b
96.3
89.8
50.3a
19.5a
3.41
3.17
1.55
0.63
0.33
0.27
0.0001
0.0009
686b
654b
492
268b
660b
627b
491
139c
9.0
8.8
21.4
28.4
0.0006
0.0008
0.09
<0.0001
EEM= error estándar de la media, T0 = Dieta control, T15=Dieta con la inclusión de
muérdago al 15%, T30= Dieta con la inclusión de muérdago al 30%, MS=Materia seca,
MO= Materia orgánica, FDN= Fibra detergente neutro, FAD= Fibra detergente ácido.
Literales diferentes en la misma fila representan diferencias significativas (P<0.05)
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Los resultados obtenidos sugieren que las dietas de ovinos en crecimiento pueden complementarse
mediante la inclusión de muérdago enano hasta un 30%, sin verse comprometido su bienestar y su
respuesta productiva. La utilización de plantas parásitas como forraje en la alimentación de pequeños
rumiantes puede ayudar a disminuir el nivel de infestación de los árboles, brindando una alternativa
sustentable para el manejo de éste tipo de plantas en los bosques de alta montaña.
RECONOCIMIENTOS.
Se agradece a la UAEMex por el financiamiento otorgado a través del proyecto 3268/2011 CHT y a la
Posta Zootécnica de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Un especial agradecimiento a
Abraham Jiménez por su valiosa cooperación. El primer autor agradece al CONACYT por la beca
otorgada.
BIBLIOGRAFÍA.
Dubois M. et al 1956. Analytical Chemistry. 28: 350-356.
Makkar HPS. 2003. Small Ruminant Research. 49: 241-256.
Makkar HPS et al. 2007. University of Hohenheim, Stuttgart, Germany.
Mueller- Harvey I. 2006. Journal of the Science of Food and Agriculture. 86. 2010- 2037.
Van Soest PJ. et al. 1991. Journal of Dairy Science. 74: 3583-3597.
254
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESPUESTA PRODUCTIVA DEL CONEJO DE ENGORDA ALIMENTADO CON DOS ALIMENTOS
COMERCIALES ADICIONADOS CON PROPIL TIOSULFONATO.
PRODUCTIVE PERFORMANCE OF GROWING-FATTENING RABBIT FED WITH TWO COMMERCIAL
FEEDS SUPPLEMENTED WITH PROPYL THIOSULFONATE.
Méndez RS1, Nieves HV1, Cortés RS1, Loman ZE1, Fuentes EJA1, Vázquez GMC*1, Fuente MB1, Tirado
AFJ2, Ríos JFR3, Ávila GE1.
1Centro
de Enseñanza, Investigación y Extensión en Producción Avícola-FMVZ-UNAM; 2Asesor
Independiente; 3Pancosma México S.A. de C.V
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La alimentación de un animal en producción requiere un programa óptimo para obtener parámetros
productivos eficientes, durante mucho tiempo se han incluido diversos aditivos para cumplir este fin,
como los antibióticos promotores de crecimiento (APC), empleados a dosis bajas como una medida
preventiva contra infecciones bacterianas que afectan de manera importante la salud y productividad del
animal. La constante exposición a los APC, promueve la selección de una microbiota resistente a estos.
Sin embargo, en la actualidad existe una tendencia a la sustitución de los mismos por productos de
origen vegetal, que estimulan al sistema inmune para tener una mayor resistencia a las enfermedades
infecciosas, además de no afectar significativamente a la microbiota natural del animal, permitiéndonos
un desarrollo de la actividad sin riesgos a la población humana generado por el impacto que produce la
resistencia a los antibióticos. El Propil Tiosulfonato oxido (PTSO) es una molécula extraída de la
degradación de un compuesto del propiin de diversas especies de ajos y cebollas que mejoran la
resistencia a bacterias, virus y parásitos del género Eimeria y Cryptosporidium (Bravo y Lillehoj, 2013). La
mortalidad de los gazapos después del destete por diarrea, es un problema frecuente en las granjas
cunícolas la cual puede ocasionar una alta mortalidad en el período de engorda, por lo que se planteó el
presente estudio.
OBJETIVOS.
Evaluar la respuesta productiva (ganancia de peso, consumo de alimento, conversión alimentaria y
mortalidad), en conejos de engorda de raza Nueva Zelanda Blanco empleando diferentes dosis del
producto PTSO en dos alimentos comerciales.
MATERIALES Y MÉTODOS.
La investigación se realizó en el Centro de Enseñanza, Investigación y Extensión en Producción Avícola
(CEIEPAv) de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional Autónoma de
México, el cual se localiza en la calle Manuel M. López S/N en la colonia Santiago Zapotitlán de la
Delegación Tláhuac, Distrito Federal, a una altura de 2250 m.s.n.m., bajo condiciones de clima templado
húmedo Cw, siendo enero el mes más frío y mayo el más caluroso, su temperatura promedio anual es de
16°C y presenta una precipitación pluvial anual media de 747 mm.
Se emplearon 138 conejos de raza Nueva Zelanda Blanco, hembras y machos recién destetados, de 35
días de edad, provenientes del área de cunicultura, con un peso promedio de 899 ± 116 g. Los animales
se distribuyeron en un diseño de 3 bloques, al azar con un arreglo factorial 2x3, donde el primer factor
fueron los tipos de alimento comercial (P1 y M1) y el segundo factor fue la inclusión de PTSO en
diferentes dosis (0, 25 y 50 g/ton), cada tratamiento contó con 23 animales. Se utilizaron jaulas
americanas con bebedero automático de chupón y comedero tipo tolva en una nave de ambiente natural;
el agua y el alimento se proporcionaron a libertad.
Para la adición del PTSO “on Top” en el alimento se utilizó una mezcladora vertical de gusano con
capacidad de una tonelada y una peletizadora CAL.-PELLET 2298-Ya, se le adicionó como aglutinante
Nutribind Aquadry en una proporción de 3 kg/ton y se mezcló por 3 minutos para volver a peletizar el
255
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
alimento molido de las marcas P1 y M1 y obtener un pellet cilíndrico de 4-5 mm de diámetro y 6-7 mm de
longitud.
Los tratamientos empleados fueron:
T1. Alimento P1 + 0 g/ ton de PTSO
T2. Alimento P1 + 25 g / ton de PTSO
T3. Alimento P1 + 50 g / ton de PTSO
T4. Alimento M1 + 0 g/ ton de PTSO
T5. Alimento M1 + 25 g / ton de PTSO
T6. Alimento M1 + 50 g / ton de PTSO
El periodo experimental fue de 10 días, al inicio y al final del mismo se pesaron a todos los animales para
calcular la ganancia de peso, medir el consumo de alimento, calcular la conversión alimentaria y evaluar
la mortalidad por periodo.
A las variables antes mencionadas se les realizó un análisis con forme al diseño experimental empleado.
La comparación de medias se realizó mediante la prueba de Tukey con una significancia de P<0.05
empleándose el paquete computacional SPSS versión 17.0. La mortalidad se evaluó mediante el análisis
unilateral de la varianza por jerarquías de Kruskal- Wallis y la comparación de los datos a través de los
valores tabulados de ji- cuadrada con k-1 grados de libertad.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
En el Cuadro 1 se muestran los resultados obtenidos en el periodo experimental, en el cual, no se
encontró diferencia estadísticamente significativa entre los alimentos (P>0.05). Estos resultados muestran
que los dos alimentos comerciales cubrieron las necesidades nutricionales de los conejos. Con respecto
a las diferentes dosis de PTSO para las variables consumo de alimento, ganancia de peso y conversión
alimentaria; no fueron afectadas (P>0.05), mostrando que el PTSO empleado hasta una dosis de 50 g/ton
de alimento no mostró efecto negativo para los conejos en el periodo estudiado. Además, en el Cuadro
1, se puede observar la mortalidad por tipo de alimento y por dosis de PTSO, no encontrándose
diferencia entre los dos tipos de alimento empleados en la prueba (P>0.05); sin embargo, la incorporación
de los dos niveles de PTSO (25 y 50 g/ton.), presentó una tendencia a disminuir la mortalidad con
respecto al tratamiento testigo (13.04% vs 4.34% y 2.17% respectivamente) (p<0.09). Esto puede
deberse a que el PTSO tiene actividad antibacterial y antiinflamatoria (Foskolos et al., 2015), así como
que estimuló la respuesta inmune en el colon distal lo que ocasiono que los animales mostraran menor
frecuencia de diarrea (Wlodarska et al., 2015).
Cuadro 1. Resultados promedio en diez días de experimentación sobre la adición de PTSO en
alimentos comerciales.
Consumo de
Conversión
Ganancia de peso
Mortalidad
Alimento
alimento por
alimentaria
(g)
(%)
periodo (g)
(kg : kg)
M1
345.4
744.3
2..154
5.79
P1
349.6
734.1
2.099
7.24
EEM
13.31
16.98
0.079
19.9
Dosis de PTSO
0 g/ton
345
703.7
2.039
13.04ª
25 g/ton
362.5
766.9
2.115
4.34ab
50g/ton
334.4
749.3
2.240
2.17b
EEM
13.31
16.98
0.079
0.08
No se encontraron diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)
EEM = Error estándar de la media
Diferente literal en columna indica diferencia estadística significativa (P<0.09; Χ 2)
256
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CONCLUSIONES.
De los resultados obtenidos, bajo las condiciones experimentales empleadas, se concluye que la adición
de PTSO no mostró efecto negativo sobre los parámetros productivos (ganancia de peso, consumo de
alimento y conversión alimentaria) en conejos de engorda raza Nueva Zelanda Blanco, pero tuvo efecto
con una disminución de la mortalidad de los gazapos con una dosis de 50g/ton de alimento.
IMPLICACIONES.
El empleo de PTSO como un promotor de crecimiento no antibiótico a una dosis de 50g/ton de alimento
para reducir la mortalidad de los gazapos recién destetados, permite incrementar el número de animales
que pueden llegar al final del ciclo productivo.
REFERENCIAS.
Wlodarska, M., Willing, B. P., Bravo, D. M., & Finlay, B. B. (2015). Phytonutrient diet supplementation
promotes beneficial Clostridia species and intestinal mucus secretion resulting in protection against
enteric infection. Scientific reports, 5.
Foskolos, A., Siurana, A., Rodriquez-Prado, M., Ferret, A., Bravo, D., & Calsamiglia, S. (2015). The
effects of a garlic oil chemical compound, propyl-propane thiosulfonate, on ruminal fermentation and fatty
acid outflow in a dual-flow continuous culture system. Journal of dairy science.
Bravo, D y Lillehoj, H. (2013). Use of dialkyl-thiosulfinate and/or thiosulfonate to improve the resistance of
an animal infected by a pathogen. [consultado el 28 de agosto de 2015]. Disponible en
http://www.google.com/patents/WO2013124441A1?cl=en
257
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
VALIDACIÓN DE UN GLUCÓMETRO COMERCIAL DE USO HUMANO PARA DETERMINAR
GLUCOSA EN CERDOS.
VALIDATION OF A COMERCIAL GLUCOSE METER FOR HUMAN USE FOR DETERMINED GLUCOSE
IN PIGS.
Pérez SRE1*, Ortiz RR2 y Ordaz OG3
1Facultad
de Agrobiología “Presidente Juárez”-UMSNH; 2FMVZ-UMSNH; 3IIAF-UMSNH
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La glucosa es la principal molécula que interviene en el aporte directo de energía para llevar a cabo los
procesos fisiológicos. Por ello, determinar los niveles de este monosacárido en el organismo, constituye
un proceso fundamental para el metabolismo energético y en consecuencia, para los procesos que
mantienen la vida (Deepthi et al., 2015). Actualmente, con las modificaciones en el estilo de vida de las
personas, la alteración de la glucemia se ha convertido en una de las patologías metabólicas más
frecuentes; por lo que, el monitoreo de la glucosa es un suceso cotidiano. Al ser la glucosa esencial en la
regulación de procesos fisiológica como patológica en la mayoría de los organismos, los cerdos no están
exentos en presenta variaciones de los niveles de glucemia en cada etapa fisiológica o patológica por la
que transitan. Sin embargo, determinar la glucemia en los sistemas de producción porcina se dificulta,
principalmente por el procedimiento que conlleva su análisis, el manejo zootécnico de los animales para
la toma de muestra y el costo del estudio. En medicina humana la implementación de glucómetros para la
medición de la glucemia permite obtener los siguientes beneficios: rapidez, evita la extracción de
repetidas muestras sanguíneas, volumen mínimo de muestra (0.6 µL) y reduce la inversión económica
(Castaño et al., 2012); características estas, que reducen los inconvenientes en la determinación de
glucemia en cerdos. Por lo tanto, los glucómetros desarrollados para el uso humano pudieran servir para
uso en animales, principalmente en el cerdo ya que este presenta similitudes fisiológicas con el humano.
Por ello, el objetivo fue valorar la precisión analítica del glucómetro® para determinar su potencial en la
aplicación de los cerdos.
MATERIALES Y MÉTODOS.
La investigación se llevó a cabo en la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia (FMVZ)-UMSNH,
ubicada en el km 9.5 de la carretera Morelia-Zinapecuaro, municipio de Tarimbaro, Michoacán, México.
Se utilizaron 20 cerdas hibridas (York x Landrace x Pietrain) en etapa de finalización (89.1 ± 5.6 kg)
pertenecientes al sector de cerdos de la FMVZ-UMSNH. En las cuales se determinó el nivel de glucosa
por dos métodos (M): M1 o método enzimático colorimétrico (n=20), en el cual se requirieron de 5 ml de
sangre/cerda extraída de la vena yugular para procesarse mediante el método enzimático colorimétrico y
M2 o glucómetro para uso humano (n=20), con el cual se requirió de 0.6 µL de sangre/cerda obtenida a
través de punción de la vena auricular posterior. En M1, cada muestra sanguínea fue extraída con una
jeringa de 5 ml de capacidad con aguja hipodérmica calibre 20, una vez extraídos los 5 ml de sangre se
depositaron en tubos BD Vacuatainer® para suero con activador de coagulación. Cada muestra fue
almacenada a 4°C hasta su análisis (4 h después de obtener la muestra). El proceso para la
determinación de glucosa por el método enzimático colorimétrico requirió primeramente extraer el
coágulo formado en los tubos, para posteriormente centrifugar el sobrenadante a 3500 RPM por 10
minutos para obtener el suero. Posteriormente, se procedió de acuerdo a las instrucciones del fabricante
del kit para la determinación de glucosa (Clonatest Glucose MR®). En M2, la muestra de sangre (0.6 µL)
se depositó en la tira reactiva con la que cuenta el glucómetro (Accu-Chek Performa®) y se realizó la
medición de glucosa.
Los procedimientos para determinar la glucosa pre-pandrial en los animales se llevaron a cabo a las 8:00
h, tanto en M1 como en M2. Obtenidos los valores de glucemia, por ambos métodos, se procedió con el
análisis estadístico de acuerdo con los criterios del Clinical and Laboratory Standards Institute -CLSI(2014), apartado EP9-A2. Además, se emplearon dos procedimientos estadísticos en la evaluación de la
258
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
concordancia entre ambos métodos: 1) El análisis de Bland-Altman y, 2) el coeficiente de correlación de
concordancia (CCC) de Lin. Para dichos análisis se empleó el paquete estadístico SAS®.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
No se encontró diferencia (P > 0.05) entre las medias de ambos métodos analizados: 76.4 vs 77.1 mg/dL
de glucosa para M1 y M2, respectivamente. El intervalo de confianza (IC) de las muestras fue de 70.2 a
82.5 mg/dL y 71.5 a 82.9 mg/dL de glucosa para M1 y M2, respectivamente. El coeficiente de variación
(CV) de la diferencia entre ambos métodos fue de 1.6%. Skeie et al. (2001) determinaron que para validar
un método alternativo, como fiable, su CV no debe superar el 5%. Así mismo, para que un glucómetro
sea fiable, 60% de sus resultados debe de estar dentro del IC ±10%. Por lo que, el glucómetro evaluado
es confiable ya que cumplió con los criterios antes estipulados (CV igual a 1.6% y un IC igual a ±10%).
Las diferencias en la medición de glucosa por ambos métodos dieron como resultado: 2.5 mg/dL para
valores mínimo, 1.0 mg/dL para máximos y 0.7 mg/dL de glucosa para la media aritmética. Estos valores
fueron menores a 5.4 mg/dL de glucosa. Por lo cual, se sugiere que el glucómetro de uso humano
también se puede utilizar para determinar niveles de glucosa en cerdos. Esto de acuerdo con el CLIA
(2014), quien establece que para especificaciones de calidad para glucemia, los valores obtenidos no
deben superar el 10% de variabilidad o 5.4 mg/dL de glucosa, con respecto a los valores obtenidos por el
método convencional.
El análisis estadístico (Kolmogorov-Smienow) determinó que, los valores de la glucemia de M1 y M2
(aunque en el primero se requiere únicamente de suero y en el segundo de plasma y suero), siguieron
una distribución normal (P = 0.121 para M1 y P = 0.177 para M2); así mismo, no se encontró ningún valor
atípico (outlier) mayor a una desviación estándar; es decir, los valores (límite inferior y superior) fueron
menores a -13.53 y 12.07 mg/dL. Además, se encontró una distribución lineal con dispersión constante
en ambos métodos, cuyo coeficiente de correlación de Pearson fue de 0.99 y un coeficiente de
determinación (R2) de 0.97 (P < 0.05). Lo que indica que el método analítico mantuvo la proporción entre
la concentración del analito y su respuesta.
Castaño et al. (2012) determinaron, que una curva de calibración debe presentar una correlación de
Pearson ≥0.99, aunque, para el caso de trazas se admite un valor igual a 0.99. No obstante, la FAO
(2007) indica que el mejor indicador para establecer la linealidad en la validación de un método analítico
es el estimador t Student para coeficiente de correlación de Pearson (tr); al respecto, los resultados
mostraron que tr fue significativo estadísticamente (P = 0.05). En contraste a este método se encuentra el
coeficiente de correlación de concordancia (CCC) de Lin. Coeficiente que califica la asociación entre los
métodos evaluados en: “casi” perfecta para valores >0.99, sustancial de 0.95 a 0.99, moderado de 0.90 a
0.94 y, pobre <0.90. En la presente investigación se encontró una CCC igual a 0.95; valor que
corresponde a un nivel de concordancia sustancial, lo que sugiere que el glucómetro de uso humano es
un método alternativo eficaz para la medición de glucosa en cerdos. Al cumplirse con los criterios de las
diferentes correlaciones (correlación de Pearson, tr o CCC) se utilizó la regresión lineal para comprobar la
linealidad de las técnicas de medición evaluadas, ello de acuerdo con las indicaciones de la FAO (2007).
Al respecto se encontraron los siguientes valores para los coeficiente de regresión lineal: β0=5.9171 y
β1=0.9321, ambos significativos (P<0.05).
La prueba final y de mayor objetividad es la aplicación del método estadístico de Bland-Altman a valores
de glucosa obtenidos por ambos métodos; dicho método, permite evaluar si la diferencia tiene o no
alguna relevancia desde un punto de vista clínico. Los resultados de este análisis determino un sesgo
sistemático de -0.73 mg/dL de glucosa. Lo que significó que los valores se encontraron dentro de los
límites de concordancia (-13.53 y 12.07 mg/dL de glucosa), es decir, ninguno de los puntos se encontró
fuera de la banda media de las diferencias a ± 1.96 desviación estándar y, en consecuencia, el análisis
de Bland-Altman mostró que la diferencia entre M1 y M2 fue constante en todos los niveles de la
glucemia. Puesto que, las diferencias (P > 0.05) mínimas observadas entre el M1 y M2, probablemente
fueron debido a que en M1 se evalúa sangre total y en M2 suero sanguíneo, lo cual puede presentar una
variación ≤15% misma que es aceptable.
259
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CONCLUSIONES.
El glucómetro para uso humano es un dispositivo adecuado para monitorear la glucemia en cerdos. La
validación del glucómetro para determinar glucosa en cerdos facilita la medición, reduce el estrés en la
toma de muestras de sangre y minimiza el costo en la determinación de glucosa si se compara con los
métodos convencionales o de laboratorio.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Castaño, M., Fernández, J., Robles, J., Márquez, T. 2012. Validación de un glucómetro en una unidad de
cuidados intensivos. Endocrinol Nutr. 59(1):28-34.
CLIA: Requeriments for Analytical Quality. 2014 Disponible en: https://www.westgard.com/qualityrequirements.htm.
Deepthi, Rao., Lily, Sunio., Yun-Jia, Lo., Ved, Gossain. 2015. Comparison of the Adherence to the
American Diabetes Association Guidelines of Diabetes Care in Primary Care and Subspecialty Clinics.
Journal of Diabetes & Metabolic Disorders 14:35.
FAO: Organización de las naciones unidas para la agricultura y la alimentación. 2007. Producción y
manejo de datos de composición química de alimentos en nutrición. Instituto de nutrición y tecnología de
los alimentos. Universidad de Chile.
Skeie, S., Thue, G., Sandberg, S. 2001. Patient-derived quality specification for instruments used in selfmonitoring of blood glucose. Clin Chem. 47:67-73.
260
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
PRODUCCION DE GAS IN VITRO DE ALIMENTOS PARA GANADO LECHERO EN LOS ALTOS DE
JALISCO.
IN VITRO GAS PRODUCTION OF FEEDSTUFFS FOR DAIRY CATTLE AT LOS ALTOS DE JALISCO.
Bonilla CJA1*, Arias CLE2, Villarreal RJH2, Rodríguez HK3, Núñez HG3, Basurto GR4
1C.E. Santiago Ixcuíntla; 2C.E. Centro-Altos de Jalisco; 3C.E. La Laguna; 4CENIDFMA-INIFAP
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El conocimiento integral del valor nutritivo de los alimentos para el ganado lechero es fundamental para
diseñar dietas más eficientes tanto desde el punto de vista biológico, como económico y ambiental. La
integración de información de composición química, digestibilidad y producción de gas in vitro,
proporciona un perfil más completo de los alimentos que el que se obtiene con un solo tipo de análisis. El
estudio de la producción de gas in vitro proporciona información de la cinética de fermentación y de la
degradación del alimento en el rumen, lo cual permite estimar el contenido energético y pronosticar el
aprovechamiento del alimento (Fondevila y Barrios, 2001). El sistema de producción de leche que
predominan en la región “Los Altos de Jalisco”, es del tipo semi-tecnificado familiar, en el cual el pastoreo
es restringido y la dieta del ganado se complementa con ingredientes producidos y/o adquiridos (Martínez
y Hernández, 2012). El objetivo fue cuantificar la producción de gas in vitro de alimentos e ingredientes
utilizados en ganado lechero en la región Los Altos de Jalisco, para complementar la información de su
valor nutritivo y determinar posibles relaciones del tipo de alimento con la emisión de gases de efecto
invernadero.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Se obtuvieron muestras de 56 alimentos utilizados en ganado lechero en 10 establos ubicados en la
región denominada “Los Altos de Jalisco”, en los municipios de Tepatitlán, Valle de Guadalupe y San
Ignacio, en el estado de Jalisco, México. Las muestras se clasificaron en cuatro grupos y 10 tipos. Los
grupos fueron: Forrajes (F) (n=27), Concentrados (C) (n=17), Ración total mezclada (RTM) (n=6), e
Ingredientes varios (IV) (n=6). Los tipos fueron: pastos (n=6), alfalfa (n=1), pajas (n=4), rastrojo sin maíz
(n=6), rastrojo con maíz (n=6), ensilados (n=4), concentrados (n=17), RTM (n=6), granos (n=4) y pastas
(n=2). Las muestras fueron secadas durante 72 hrs a 60°C, se molieron con criba de 1 mm, y se les
determinó: A) Composición química (CQ): materia seca, cenizas, nitrógeno y fracciones de fibra; B)
Digestibilidad in vitro de la materia seca a 48 h (DIVMS); C) Producción de gas in vitro (PGiv) hasta 72 h
(PGiv72h). Esta última se realizó con base en la técnica de Menke y Steingass (1988), modificada por
Theodorou et al., (1994), con el sistema automatizado de producción de gas (ANKOM RF 2012). El inóculo
ruminal se obtuvo de dos bovinos provistos de cánula ruminal permanente, que consumieron una dieta
con base en pastoreo además de 2.5 kg d-1 de concentrado comercial con 18% de proteína cruda. Para
describir la cinética de la producción de gas se usó el software denominado Neway desarrollado por
Chen (1995), el cual se fundamenta en el modelo propuesto por Ørskov y McDonald (1979): Pt = a + b(1e-ct), donde: Pt = Producción total de gas al tiempo t, mL; a = Gas derivado de la fracción soluble
rápidamente fermentable, mL; b = Gas resultante de la fracción insoluble pero lentamente fermentable,
mL; a + b = Extensión potencial de la producción de gas, mL; c = Tasa constante de producción de gas,
% h-1; e = Base del logaritmo natural. Los datos se sometieron a compararon de medias por la prueba de
Tukey a un  de 0.05, de acuerdo a un diseño completamente al azar, utilizando el paquete estadístico
SAS v. 9.2.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
En el Cuadro 1 se muestra la producción de gas in vitro (PGiv) de los cuatro grupos de alimentos en ocho
tiempos, desde las 3 (PGiv3h) hasta las 72 h (PGiv72h), que corresponden a los tiempos comúnmente
reportados en la literatura. Sin embargo, es importante analizar la cinética de la PGiv a través del tiempo
y no solo la producción acumulada ó total a 72 h, ya que como lo señala Williams (2000): la técnica de
producción de gas mide la cinética de fermentación de un determinado sustrato con una determinada
población microbiana, por lo que es una simulación razonable de lo que ocurre en el rumen, lo cual
constituye una herramienta útil para la evaluación de alimentos para rumiantes. En la Figura 1 se
muestran las curvas de PGiv desde la primera hasta las 72 h. La PGiv3h y PGiv6h fueron menores
261
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
(P<0.05) en los forrajes que en los concentrados, ración total mezclada (RTM) e ingredientes varios (IV),
mientras que a las 12 h la RTM compartió la menor PGiv de los forrajes con respecto a los concentrados
sin ser diferente (P>0.05) de los IV. Este comportamiento de las curvas permaneció en la PGiv18h pero a
las 24 h fueron similares (P>0.05) forrajes, RTM e IV, siendo éstos últimos similares a los concentrados.
La PGiv36h tuvo un comportamiento similar al de las 12 y 18 h. A las 48 h el patrón de diferencias fue igual
al observado a las 24 h, aunque los valores de forrajes y RTM se invirtieron. A las 72 h los concentrados
difirieron (P<0.05) de forrajes y de RTM pero no de IV, los cuales a su vez fueron similares a forrajes y a
RTM.
Cuadro 1. Producción de gas in vitro a las 3, 6, 12, 18, 24, 36, 48 y 72 h de cuatro grupos de
alimentos para rumiantes, mL g-1 MS.
Tipo
3h
6h
12 h
18 h
24 h
36 h
48 h
72 h
F
10.3b
20.8 b
50.2c
76.3c
93.7b
115.3c
128.4b
137.8bc
C
25.1a
53.3 a
113.5a
136.0a
146.3a
156.2a
158.8a
157.2a
RTM
17.9a
38.3 a
75.3bc
94.7bc
105.7b
118.7bc
122.8b
122.2c
IV
19.9a
49.2 a
105.7ab
127.2ab
138.2ab
150.0 ab
153.8ab
150.8abc
EEM
1.2
2.5
4.9
5.0
4.7
4.1
3.6
3.1
F: Forrajes, C: Concentrados, RTM: Ración total mezclada, IV: Ingredientes varios, EEM:
Error estándar de la media. Distintas literales por columna son diferentes (P<0.05).
En el Cuadro 2 se muestran los valores de producción de gas in vitro (PGiv) de los 10 tipos de alimentos
en ocho tiempos, desde las 3 (PGiv3h) hasta las 72 h (PGiv72h), y en la Figura 2 se muestran las curvas de
PGiv de estos mismos alimentos desde una hasta 72 h. En las primeras etapas de la fermentación
(PGiv3h y PGiv6h) la diferencia (P<0.05) extrema se observó entre concentrados vs pastos y rastrojo sin
maíz, habiendo una serie de similitudes intermedias entre los demás tipos, las cuales fueron cambiando a
través del tiempo. A partir de las 6 y hasta las 48 h, la mayor (P<0.05) PGiv se observó en concentrados
y granos aunque sin diferencia (P>0.05) entre ambos vs pastas proteicas y alfalfa. Los curvas de
ensilados, rastrojo con maíz y alfalfa tendieron a ser similares (P>0.05) a las de concentrados y granos a
través del tiempo. La curva de RTM por el contrario, tendió a separarse (P<0.05) de éstos últimos tipos a
partir de las 18 h para ser similar a la de tipos con menor PGiv. A las 72 h los granos encabezaron el
valor de PGiv compartiendo similitud (P>0.05) con ensilados, concentrados, rastrojo c/m, alfalfa, pastos y
pastas proteicas, observándose diferencia entre éstos vs rastrojo s/m, RTM y pajas, siendo a su vez
éstos últimos similares a pastas proteicas, pastos y alfalfa. Estas diferencias en los patrones de
fermentación se deben probablemente a diferencias en la disponibilidad de los nutrientes para la
actividad microbiana (Juárez et al., 2009) y constituyen información que puede ser de utilidad para el
diseño de programas de alimentación basados en estos alimentos, a efecto de lograr mejor sincronía en
la fermentación de la dieta que se ofrece a bovinos productores de leche.
Cuadro 2. Producción de gas in
rumiantes, mL g-1 MS.
Tipo
3h
6h
Pastos
10.6bc
22.9cdef
Alfalfa
11.5abc
30.8 abcde
vitro a 3, 6, 12, 18, 24, 36, 48 y 72 h de 10 tipos de alimentos para
12 h
57.8bc
72.9 abc
18 h
82.6bc
104.9 ab
24 h
98.6 bc
125.2 ab
36 h
118.3 bc
136.0 abc
48 h
129.2abc
141.8 abc
72 h
133.7abcd
144.5
abcd
Pajas
R s/m
R c/m
E
C
RTM
G
P
11.8 abc
2.6c
15.0ab
12.2abc
25.1a
17.9ab
17.6ab
24.4ab
18.3 cdef
5.8f
28.1bcde
29.0bcde
53.3a
38.3abc
49.4ab
48.8abc
31.0cd
19.2 d
69.2 bc
70.2 bc
113.5a
75.3 ab
116.0 a
85.0 ab
47.8cd
42.4 d
100.6ab
102.5 ab
136.0 a
94.7 b
139.2 a
103.2 ab
63.4cd
60.8 d
118.0ab
121.6 ab
146.3 a
105.7 bc
149.4 a
115.8 abc
86.4c
86.6 c
137.9 ab
143.4 ab
156.2 a
118.7 bc
161.8 a
126.6 abc
102.3c
107.2 c
148.1 ab
152.5 ab
158.8 a
122.8 bc
165.3 a
130.7 abc
EEM
1.2
2.5
4.9
5.0
4.7
4.1
3.5
114.0d
126.00cd
154.4abc
158.8a
157.2ab
122.2 cd
161.5 a
129.3
abcd
3.1
262
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
180
180
160
160
140
140
120
120
ml g -1 MS
ml g -1 MS
R s/m: Rastrojo sin maíz, R c/m: Rastrojo con maíz, E: Ensilados, C: Concentrados, RTM: Ración total
mezclada, G: Granos, P: Pastas proteicas, EEM: Error estándar de la media. Distintas literales por
columna son diferentes (P<0.05).
100
80
100
80
60
60
40
40
20
20
0
0
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 71
Forrajes
Concentrados
RTM
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 71
horas
horas
IV
Figura 1. Curvas de producción de gas in vitro de
cuatro grupos de alimentos para rumiantes.
Pastos
Alfalfa
Pajas
Rast. s/m
Rast c/m
Ensilados
Concentrados
RTM
Granos
Pastas
Figura 2. Curvas de producción de gas in vitro de
10 tipos de alimentos para rumiantes.
Con respecto a los indicadores de la cinética de PGiv, se observó una diferencia importante en la fracción
c (tasa constante de producción de gas) obtenida con el modelo Pt = a + b(1-e-ct) vs la obtenida con un
modelo alternativo (polinomial) que proporciona el comando “agregar línea de tendencia” de Excel. En el
caso de forrajes, el primer modelo estimó una c de 3.99% h-1, mientras que el modelo polinomial permite
obtener una curva que corresponde a la tasa fraccional de producción de gas (TFPG) y que es variable a
través del tiempo, lo cual se muestra en la Figura 3.
6
y = -1E-09x 6 + 4E-07x5 - 5E-05x 4 + 0.0031x3 - 0.0928x2 + 1.1592x - 0.1096
R² = 0.9561
5
ml h-1
4
3
2
1
0
1
3
5
7
9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 71 73
horas
Forrajes
Polinómica (Forrajes)
Figura 3. Tasa fraccional de producción de gas in vitro de forrajes y curva ajustada.
CONCLUSIONES.
La producción de gas in vitro a 72 h fue mayor en alimentos concentrados, seguida por ingredientes
varios, forrajes, y por último raciones totales mezcladas. Si bien se requieren estudios adicionales para
determinar la composición del biogás producido, al parecer éstas últimas pudieran contribuir a reducir la
emisión de gases de efecto invernadero por los rumiantes en este sistema de producción. Tanto la tasa
fraccional de producción de gas, como la curva de PGiv, deben ajustarse de manera individual para cada
tipo de alimento a fin de obtener información específica de cada uno de éstos.
FINANCIAMIENTO.
Proyecto INIFAP Núm. en SIGI 0504831979 “Emisiones de metano, su relación con factores nutricionales
y genéticos y desarrollo de estrategias de mitigación en tres sistemas de producción de leche de bovino
en México”.
263
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DEL PORCENTAJE DE ENSILADO DE MAÍZ EN LA DIETA SOBRE LA PRODUCCIÓN Y
CALIDAD DE LECHE DE CABRAS.
EFFECT OF THE PERCENTAGE OF CORN SILAGE ON THE PRODUCTION AND QUALITY OF MILK
GOATS.
Meraz RE1*, Rodríguez GJA1, Gaspar SD1, Villagrán VB1, Domínguez HYM1, Ángeles CS2.
1Centro
de Enseñanza, Investigación y Extensión en Producción Animal en Altiplano. FMVZ-UNAM.
Tequisquiapan, Querétaro; 2 Departamento de Nutrición Animal y Bioquímica. FMVZ-UNAM.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Algunas compañías comercializadoras y/o procesadoras de leche de cabra aceptan este producto con
mayor contenido de grasa, de ahí la importancia de utilizar dietas con alto contenido de fibra, la cual
incrementa el contenido de grasa, sin embargo, la producción de leche disminuye (Del Toro et al., 2014).
El maíz es un cultivo forrajero de alta calidad que posee buena digestibilidad y palatabilidad, que se
utiliza principalmente como ensilado, con alto contenido de energía para rumiantes productores de leche.
Debido a que existe poca información disponible sobre la utilización de ensilado de maíz en la
alimentación de cabras lecheras, el objetivo de este estudio fue evaluar la producción y calidad de leche
de cabras alimentadas con diferentes porcentajes de ensilado de maíz en la dieta.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El experimento se realizó en el área de Caprinos del Centro de Enseñanza, Investigación y Extensión en
Producción Animal en Altiplano (CEIEPAA) de la FMVZ-UNAM, ubicado en el Municipio de
Tequisquiapan, Querétaro, tuvo una duración de 49 días, del 10 febrero al 1 de abril de 2014. Se
utilizaron 57 cabras de la raza Alpina (PVi, 52 ± 1.3 kg) en el segundo tercio de lactación. Las cabras se
identificaron y asignaron al azar a cada uno de los tratamientos. Los animales se alojaron en tres corrales
con 19 cabras por grupo, recibieron agua limpia y fresca a libre acceso. El contenido de MS del ensilado
fue de 31 %. Las cabras se alimentaron diariamente a las 07:00 AM con ensilado de maíz según al
tratamiento al que correspondían y la mitad de heno de alfalfa; de 10.00 AM a 16:00 PM se sacaban a
pastorear en praderas mixtas (60 % leguminosa: 40 % gramíneas) de alfalfa (Medicago sativa), Orchard
grass (Dactylis glomerata), Ryegrass perenne (Lolium perenne) y Bromo (Bromus catharticus) donde
también contaron con agua limpia y fresca a libre acceso. Después del pastoreo recibieron el resto de
heno de alfalfa en corral y a todas las cabras se proporcionaron 600 g de alimento balanceado comercial
con 21 % de PC. El consumo de Materia Seca (MS) se estimó midiendo el alimento ofrecido y por la
mañana siguiente el rechazo en corral y en pradera. Las cabras se pesaron al inicio, mitad y final del
experimento después de ser ordeñadas y antes de ser alimentadas. Las cabras se ordeñaron diariamente
solo por la mañana con ordeñadora mecánica tipo carrusel a las 06:00 AM, la producción de leche se
midió de manera individual diariamente durante todo el estudio y semanalmente se colectaron 50mL de
leche de cada cabra y se analizaron para contenido de grasa, proteína, lactosa y solidos no grasos por
medio de espectroscopia de infrarrojo (MILKOSCAN™), los análisis se realizaron en el Laboratorio de
Ciencia de la Leche de la USEDICO del CEIEPAA. Las variables de estudio se analizaron como un
diseño completamente al azar utilizando el peso vivo inicial como covariable y los tratamientos (T) fueron:
T1 = 10 % ensilado de maíz + 40 % heno de alfalfa + 50 % pastoreo en pradera mixta; T2 = 20 %
ensilado de maíz + 30 % heno de alfalfa + 50 % pastoreo en pradera mixta; T3 = 30 % ensilado de maíz
+ 20 % heno de alfalfa + 50 % pastoreo en pradera mixta. Los datos se analizaron usando el
procedimiento GLM (SAS, 2004). Las medias se compararon con la prueba de Tukey (p≤ 0.05; Steel et
al., 1997).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
264
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Las medias de mínimos cuadrados de las variables de respuesta se presentan en el Cuadro 1. El peso
vivo promedio al inicio y final del experimento fue similar entre tratamientos. Todas las cabras tendieron a
incrementar peso durante toda la fase experimental.
Cuadro 1. Producción y calidad de leche de cabras alimentadas con diferentes porcentajes de
ensilado de maíz en la dieta.
Tratamientos
Variables
1
2
3
EEM
Pr˃F
Peso vivo inicial, kg
51.15ª
53.22ª 52.75ª 1.6114
0.6376
Peso vivo final, kg
55.45ª
57.45ª 56.36ª 1.5854
0.6744
Consumo de MS, kg/cabra/d-1
2.21ª
1.74ª
2.14ª
0.3168
0.5344
Producción de leche, L/cabra/d-1
1.54ª
1.36ab
1.27b
0.0820
0.0432
Grasa, %
3.80ª
3.82a
4.29b
0.0459
0.0208
Proteína, %
2.93a
3.01ª
2.98ª
0.0273
0.2074
Lactosa, %
4.48ª
4.50ª
4.47ª
0.0363
0.8309
Solidos no grasos, %
8.13a
8.26a
8.18a
0.0710
0.4524
a, b medias con distinta literal dentro de hilera son diferentes (P˂0.05).
EEM = error estándar de la media
No hubo diferencias en el consumo de materia seca (P˃0.05) entre los diferentes porcentajes de ensilado
de maíz. Los valores estimados de consumo de materia seca son mayores a los reportados por Del Toro
et al., 2014. Las diferencias en producción de leche fueron significativas (P˂0.05) entre tratamientos,
disminuyendo a manera que se incrementó la cantidad de ensilado en la dieta, estos resultados son
similares a los reportados por Abedo et al., 2013.Existieron diferencias estadísticas (P˂0.05) en
porcentaje de grasa en leche, observándose mayor cantidad de grasa cuando se proporcionó 30 % de
ensilado, estudios realizados por otros investigadores no encontraron diferencias estadísticas pero se
observa una tendencia a ser mayor la cantidad en grasa cuando se proporciona mayor cantidad de
ensilado en la dieta (Abedo et al., 2013; Del Toro et al., 2014). No se encontraron diferencias estadísticas
(P˃0.05) para porcentaje de proteína, lactosa y sólidos no grasos en leche entre tratamientos.
CONCLUSIONES.
Bajo las condiciones en que se desarrolló este estudio se concluye que el porcentaje de inclusión de
ensilado de maíz no afecto el consumo de materia seca y los porcentajes de proteína, lactosa y sólidos
no grasos en leche. Cuando se incrementó la cantidad de ensilado de maíz en la dieta disminuyo la
producción de leche, pero se aumentó la grasa.
IMPLICACIONES.
Existe poca información disponible sobre alimentación de cabras con ensilado de maíz, por lo que los
resultados obtenidos en este estudio permitirán tomar decisiones importantes en unidades de producción
de leche de cabra, si se desea incrementar la cantidad de grasa, implicará una disminución en la
producción de leche.
REFERENCIAS
Abedo, A.A., Y.H. Hafez. E.L. Khalifa, K. Mohamed, O.A. El-Zolaky. 2013. Milk yield and composition of
dairy Zaraibi goats fed microbial inoculated corn silage. Egyp. Jour. of Sheep and Goat Sci. 8(1):141–151.
Del Toro, P.S., Tovar L.I., Jaimes J.J. 2014. Efecto del nivel de ensilado de maíz en la dieta sobre el
consumo y digestibilidad de la materia seca, la producción y composición química de la leche en cabras
en lactación avanzada. Asoc. Mex. Prod. Anim. Mérida, Yucatán. 190-193.
SAS. System for Windows. 2004. SAS Inst. Inc. Cary North Carolina. USA.
Steel, R.G.D., J.H. Torrie, D.A. Dickey. 1997. Principles and procedures of statistics. A biometrical
approach. 3rd Ed. McGraw Hill Book Co. New York. 165 p.
265
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
COMPORTAMIENTO PRODUCTIVO DE CORDEROS LACTANTES ALIMENTADOS CON DOS
CONCENTRADOS.
PRODUCTIVE PERFORMANCE OF SUCKLING LAMBS FEEDING WITH TWO CONCENTRATES.
Cuevas CMA1, Reyes RJA1*, Hernández-Bautista J1, Salinas RT1, Palacios OA1.
1Escuela
de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma Benito Juárez de Oaxaca.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En la actualidad la producción ovina en México atraviesa por un momento crítico debido a los altos costos
de los alimentos comerciales, es por ello que aunque el cordero se venda a un precio justo, el ingreso no
alcanza a cubrir el costo de producción. Es necesario formular raciones para los ovinos con insumos
regionales, que sean de fácil alcance para los productores; pero asegurando que cubran las necesidades
nutrimentales de los corderos y de tal forma que se obtenga una respuesta igual o mejor a la alcanzada
con alimentos comerciales. En el periodo de lactancia la leche es el alimento fundamental para el
crecimiento de los corderos y determina la tasa de crecimiento, de manera normal la leche mantiene un
pico de producción hasta la tercera semana de vida y después desciende. Cuando la lactancia se alarga
y a los corderos no se les suplementa, los vientres presentan deficiencias nutricionales que limitan su
fertilidad, prolificidad, producción láctea e incrementan los porcentajes de mortalidad perinatal; además
disminuyen el peso al nacimiento y la ganancia diaria de peso (De Lucas, 2008). El creep-feeding resulta
una modalidad de suplementación que se aplica solamente a los corderos lactantes, donde tienen acceso
a un alimento especial que les permite mejorar la velocidad de crecimiento, eficiencia de conversión y
destetar a edades tempranas (entre 50 y 60 días de edad). Con el manejo de la jaula de exclusión los
vientres logran obtener tres partos en dos años, acortando el ciclo productivo de cada oveja; además de
mejorar el comportamiento de los corderos en la engorda posterior (Carreras, 2012). El objetivo de
estudio fue determinar el comportamiento productivo de corderos Dorper, criados en corraletas de
exclusión ofreciendo un alimento de marca comercial y una ración de bajo costo elabora en rancho.
MATERIAL Y MÉTODOS.
El estudio se realizó en la unidad de producción ovina denominada “Rancho los Tres Reyes” ubicado en
la región Mixteca en el municipio de Villa de Tamazulapam del Progreso, Oaxaca, entre las coordenadas
17°40’ latitud norte y 96°33’ longitud oeste, a una altura de 2000 msnm. El clima que predomina es
templado (INEGI, 2013). Se utilizaron 19 corderos Dorper, nacidos de parto sencillo con un peso
promedio al nacimiento de 3.93 kg. A los 10 días de edad, se estableció un diseño completamente
aleatorizado formando dos tratamientos. Los animales del tratamiento uno (n=9) se alimentaron ad libitum
con una fórmula comercial (LAMB TECH) con 20 % de PC y 6 % de FC. En el Tratamiento dos, los
animales (n=10) consumieron una ración formulada con 20.79 % PC, 2.7 Mcal EM/ kg y 5.41 % FC, la
cual fue elaborada con maíz quebrado (53.87 %), pasta de soya 29.06 %, alfalfa molida 15.10 % y sal
mineral 1.97 %. Durante el estudio Los datos fueron analizados estadísticamente a través de un modelo
completamente aleatorizado, en donde el factor de estudio fue el tipo de alimento ofrecido en el creep
feeding; el peso vivo al nacimiento se usó como covariable.
En el cuadro 1 se presentan los promedios de consumo de materia seca, ganancia diaria de peso y
conversión alimenticia de corderos lactantes alimentados en corraleta de exclusión con dos tipos de
concentrado. En la etapa de iniciación existió un mayor (P<0.05) consumo alimenticio en los corderos
suplementados con alimento comercial (0.051 kg) que el alimento elaborado (0.039 kg). Sin embargo, en
la etapa de finalización y total no existió diferencia (P>0.05) en el consumo. Al respecto, Duarte y
Palcastre (2000), determinaron un consumo diario de alimento de 0.339 kg en corderos lactantes de la
cruza Hampshire-Pelibuey y raza Pelibuey. Posiblemente lo que pudo favorecer para que los animales
266
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
consumieran más alimento comercial se debió a la alta palatabilidad y sus aditivos que contiene. Los
promedios de ganancia diaria de peso (GDP) no fueron (P>0.05) afectados por el tipo de alimento
ofrecido, en ninguna de las dos etapas evaluados ni en los promedios totales, teniendo un promedio
general de 0.277 kg de ganancia diaria de peso. Estos resultados son superiores a los reportados por
Hinojosa-Cuellar et al. (2008) en donde registraron ganancias diarias de peso pre-destete de 0.160 kg en
corderos de las razas Pelibuey, Dorper, Katahdin y sus cruces manejados en estabulación y
suplementados con alimento comercial con 18 % de PC. Lucas et al. (2003) reportaron ganancias diarias
de peso de 271 g pre-destete para corderos de la raza Columbia bajo un sistema de pastoreo, en
praderas de alfalfa (Medicago sativa) y pastos Orchard (Dactylis glomerata). La conversión alimenticia fue
mayor (P<0.05) en la etapa de inicio para los animales que consumieron alimento comercial (0.281
kg/kg). En la etapa de finalización y total no se encontró diferencia (P>0.05) en la conversión alimenticia.
Duarte y Pelcastre (2000), obtuvieron conversiones promedio de 1.45 en corderos de la raza Pelibuey y
una cruza de Hampshire-Pelibuey, destetados a los 80 días.
Es factible elaborar un alimento de bajo costo con insumos de la región obteniendo el mismo
comportamiento productivo que nos brinda un alimento de marca comercial.
IMPLICACIONES.
La utilización de alimento elaborado con ingredientes de la región reduce el costo de dicho concepto
hasta en un 45 %, sin que el comportamiento productivo de los corderos disminuya; de esta forma, se
destetan corderos más pesados en menor tiempo y adaptados para iniciar la engorda.
Carreras H. Hugo (2012) Suplementación del rodeo de cría (Creep feeding). http://www.produccionanimal.com.ar/informacion_tecnica/cria_amamantamiento/21-Suplementacion.pdf.
Duarte V. F. y Pelcastre, O.A. (2000) Efecto de la suplementación pre destete a corderos en condiciones
tropicales http://www.lrrd.org/lrrd12/3/duar123a.htm.
Hinojosa-Cuéllar (2008) Crecimiento prenatal y pre destete en corderos Pelibuey, Dorper, Katahdin y sus
cruces en el sureste de México. Revista Científica
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0798-22592009000500013&script=sci_arttext
INEGI (Instituto Nacional de Estadística y
sistemas/mexicocifras/datos-geograficos/20/20540.pdf
Geografía)
(2013).
http://www3.inegi.org.mx/
De Lucas, T. J; Zarco, Q. L. A; González, P. E; Tortora, P. J; Villa, G. A; Vásquez, P. C. (2003)
Crecimiento pre destete de corderos en sistemas intensivos de pastoreo y manejo reproductivo en el
altiplano central de México. http://www.ejournal.unam.mx/rvm/vol34-03/RVM34302.pdf
De
Lucas,
T.
J;
(2008)
Preparación
de
las
ovejas
al
empadre
y
http://www.asmexcriadoresdeovinos.org/sistema/pdf/reproduccion/preparaciondelasovejas.pdf
parto.
Cuadro 1. Promedios (± error estándar) de consumo de alimento, ganancia diaria de
peso y conversión alimenticia de corderos lactantes alimentados con dos concentrados.
Alimento
Consumo,
ms/día
Alimento comercial
Alimento elaborado
P
kg
267
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Iniciación
0.051 ± 0.003
0.039 ± 0.003
0.019
Finalización
0.412 ± 0.021
0.417 ± 0.020
NS
Total
0.268 ± 0.014
0.266 ± 0.013
NS
Iniciación
0.182 ± 0.017
0.195 ± 0.017
NS
Finalización
0.348 ± 0.027
0.329 ± 0.026
NS
Total
0.281 ± 0.018
0.275 ± 0.017
NS
Ganancia de peso, kg/día
Conversión alimenticia, kg de ms/kg
Iniciación
0.281 ± 0.020
0.202 ± 0.019
0.013
Finalización
1.391 ± 0.144
1.276 ± 0.137
NS
Total
0.973 ± 0.063
0.983 ± 0.060
NS
268
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
PARÁMETROS DE FERMENTACIÓN DE ENSILADO DE FRUTOS DE CIRIÁN (CRESCENTIA ALATA)
Y DINÁMICA DE CONSUMO EN CAPRINOS.
SILAGE FERMENTATION PARAMETERS FRUIT OF CIRIÁN (CRESCENTIA ALATA) AND INTAKE
DYNAMICS IN GOATS.
Rojas HS*, Olivares PJ, Quiroz CF, López GV, Hernández YE.
U. A. Medicina Veterinaria y Zootecnia Cd. Altamirano, Gro, Universidad Autónoma de Guerrero.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En el estado de Guerrero existen especies de árboles nativos que permanecen con follaje y frutos
durante la época seca, que pueden utilizarse para la alimentación animal, entre estos el Cirián
(Crescentia alata), su fruto puede ser utilizado como complemento proteico y energético en la
alimentación animal (Rojas et al., 2012), lo cual no ocurre, entre otras razones por la falta de información.
Sin embargo, la alimentación puede ser un problema serio cuando por causa de la sequía escasea el
forraje, por esa razón, se fomenta la conservación de los frutos (C. alata) por medio de la técnica del
ensilado.
OBJETIVO.
Evaluar los parámetros de fermentación y la dinámica de consumo de ensilados de frutos de Cirián en
caprinos.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Ubicación del área de estudio. El presente estudio se realizó en la comunidad de los limones, en el
Mpio. de Pungarabato, Guerrero. Se localiza en la Región de la Tierra Caliente. Situado a 18° 20’ 30” de
latitud Norte y a 100° 39’ 18” de longitud Oeste.
Procesamiento de frutos de C. alata y planta de maíz (PM). Los frutos maduros fueron deshidratados
15 días al sol. Posteriormente se les extrajo la pulpa más semilla, para ser molidos en un molino de
martillos. La PM se cosechó en etapa masoso-lechoso, y fue procesado en una picadora de forraje en
trozos de 1 a 3 cm.
Elaboración de ensilados de C. alata y PM. Los dos materiales fueron mezclados y distribuidos en los
siguientes tratamientos: T1: Cirián 100%, T2: Cirián 25% + 75% Planta de Maíz (PM), T3: Cirián 50% +
50% PM, T4: Cirián 75% + 25% PM, una vez terminado el mezclado, se vertió en bolsas de platico con
capacidad para 5 kg (microsilos), según el tratamiento, se compactaron, sellaron y fueron almacenados a
temperatura ambiente. Se elaboraron 63 microsilos de cada tratamiento, los cuales se identificaron para
su evaluación diaria durante un periodo de 21 días. Las variables evaluadas fueron temperatura,
contenido de MS (AOAC, 2000) y cinética de pH.
Dinámica de consumo. Se utilizaron 6 cabras adultas (33.6 + 1.5 kg) criollas, alojadas en corrales
individuales (1 X 1.20 m.), con un bebedero y comederos, donde se colocaron los tratamientos y la dieta
basal (rastrojo de maíz). El experimento tuvo una duración de 25 días, 10 días de adaptación al encierro
y 15 días de evaluación. En el período de evaluación, a cada animal se le proporcionó 300 g de cada uno
de los ensilados, ofrecidos a las 07:00 h por 25 minutos. El rastrojo de maíz y agua se proporcionaron ad
libitum. Diariamente se midió el consumo de cada tratamiento y se determinó la dinámica de consumo.
Diseño experimental. En la temperatura, la MS y pH de los microsilos se utilizó un diseño
completamente al azar con un arreglo factorial 4x21 para comparar efectos de tratamientos (Factor A),
los días (Factor B) y su interacción (A*B). En la dinámica de consumo se utilizó un diseño completamente
al azar con un arreglo factorial 4x15 para comparar efectos de tratamientos (Factor A), los días (Factor B)
y su interacción (A*B).
269
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Análisis estadístico. Los datos se analizarán por modelos lineales generales y la prueba de Tukey para
comparación de medias.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Temperatura. En la gráfica 1 se observa como los cuatro tratamientos muestran una evolución similar
(P=0.4411) en la temperatura en los 21 días. Al inicio de la evaluación se cumple con la fase aeróbica
que contempla los primeros días, donde, la formación de ATP es limitada y la mayoría de la energía se
pierde en forma de calor, tal como se muestra en este estudio, posteriormente desciende (P<0.0001) sin
encontrar mohos ni levaduras durante la evaluación, lo que nos permite deducir que el proceso de
fermentación se realizó adecuadamente. No existió interacción entre tratamientos y días (P=0.5048).
Grafica 1. Temperatura promedio
ensilados de fruto de C. alata
de
los
Grafica 2. Contenido de materia seca de los
ensilados de fruto de C. alata
T1: Cirián 100%, T2: Cirián 25% + 75% rastrojo de
maíz, T3: Cirián 50% + 50% rastrojo de maíz, T4:
Cirián 75% + 25% rastrojo de maíz.
T1: Cirián 100%, T2: Cirián 25% + 75% rastrojo de
maíz, T3: Cirián 50% + 50% rastrojo de maíz, T4:
Cirián 75% + 25% rastrojo de maíz.
abc
abc
Tratamientos con diferentes literales son
estadísticamente diferentes, Prueba de Tukey
Tratamientos con diferentes literales son
estadísticamente diferentes, Prueba de Tukey.
Contenido de materia seca. Existen diferencias significativas (P<0.0001) entre T1 y los tratamientos T2,
T3 y T4 (Gráfica 2). El contenido de MS varió conforme transcurrieron los días (P<0.0001), el contenido
inicial de MS para los cuatro tratamientos fue de 29.3%, al final de la evaluación el promedio de MS fue
de 24.8%. Mientras que no se encontró interacción (P=0.802) entre tratamientos y días de evaluación.
Los tratamientos perdieron un promedio de 4.5%, esto es indicio de un buen proceso fermentativo, ya
que, es aceptado como bueno una pérdida de hasta el 5% de la MS total.
pH. T1 presento mayor valor de pH (P<0.0001). Al inicio de la evaluación se obtuvo un pH promedio de
4.6 % para los cuatro tratamientos y al final de la evaluación disminuyo a 3.9 % (Gráfica 3), no
observándose diferencias (P=0.0744) entre los días de evaluación. Los valores de pH se mantuvieron en
un valor por debajo de 4.2 valores que se considera aceptable en un proceso de ensilado.
Dinámica de consumo. El consumo de los ensilados fue diferente entre los tratamientos (P<0.0001),
iniciando con 70 g en promedio y se incrementó (P<0.0040) conforme transcurrieron los días de
evaluación, siendo mayor para T1 con 197 g (Grafica 4), observando variaciones en el consumo, esto
demuestras que las cabras son capaces de equilibrar su dieta en base al contenido de nutrientes en los
alimentos ofrecidos (Goetsch et al., 2010). El consumo general del ensilado fue ascendente, indicando
que la palatabilidad es buena, lo que hace que estos ensilados sean una opción atractiva y potencial para
la alimentación animal (García et al., 2009; Kumara et al., 2009).
270
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Grafica 3. Porcentaje de pH de los ensilados de
Cirián y maíz
Grafica 4. Dinámica de consumo de ensilado de
Cirián por tratamiento.
T1: Cirián 100%, T2: Cirián 25% + 75% rastrojo
de maíz, T3: Cirián 50% + 50% rastrojo de maíz,
T4: Cirián 75% + 25% rastrojo de maíz.
T1: Cirián 100%, T2: Cirián 25% + 75% rastrojo de
maíz, T3: Cirián 50% + 50% rastrojo de maíz, T4:
Cirián 75% + 25% rastrojo de maíz.
abc
abc
Tratamientos con diferentes literales son
estadísticamente diferentes, Prueba de Tukey
Tratamientos con diferentes literales son
estadísticamente diferentes, Prueba de Tukey.
CONCLUSIONES.
El uso de frutos de C. alata para la elaboración de ensilados mezclado con planta de maíz puede ser una
alternativa para utilizar los recursos locales en la alimentación de caprinos en la región de Tierra Caliente
del estado de Guerrero.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
AOAC. 2000. Official methods of analysis 17th ed. Association of Offician Analytical Chemist. Arlington,
VA. USA.
García, WLR., Goni, CS., Olguín, LPA., Díaz, SG., Arriaga, JCM., 2009. Huizache (Acacia farnesiana)
whole pods (flesh and seeds) as an alternative feed for sheep in Mexico. Trop. Anim. Health Prod.
41:1615-1621.
Goetsch, AL., Gipson, TA., Askar, AR. and Puchala, R. 2010. Feeding behavior of goats. J. Anim. Sci. 88:
361-373.
Kumara, MMBP, Krebs, GL., McCafferty, P., Gunaratne, LHP. 2009. Chemical composition, biological
effects of tannin and in vitro nutritive value of selected browse species grown in the West Australian
Mediterranean environment. Anim. Feed Sci. Technol. 153:203-215.
Rojas, HS., Aviles, NF., Castelan, OO., Garcia, MA., Olivares, PJ., Valencia, AMT. 2012. Chemical
Composition, in vitro digestibility of foliage Guazuma ulmifolia and Crescentia alata and its use in feeding
lambs. Pak. J. Nutr. 11:1139-1145.
271
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DESARROLLO DE BEBIDAS A BASE DE LACTOSUERO UTILIZANDO EDULCORANTES
NATURALES Y SINTÉTICOS.
DEVELOPMENT OF DRINKS BASED ON SWEET WHEY USING NATURAL AND SYNTHETIC
SWEETNERS.
Medina CG*, Ramírez-Pérez AH1, Ramírez OJC1, Talamantes GJM1
1Departamento
de Nutrición Animal y Bioquímica, FMVZ-UNAM
[email protected];
INTRODUCCIÓN
A través de los años se han realizado numerosos esfuerzos para transformar grandes volúmenes de
suero generado como subproducto de la industria del queso en productos aptos para el consumo
humano. En México, el principal destino del lactosuero es su eliminación al aire libre, ya que su
procesamiento industrial resulta costoso. El suero de leche constituye aproximadamente del 85 al 90 %
del volumen de leche utilizada para la transformación en queso y conserva aproximadamente el 55 % de
los nutrientes de la leche. El suero líquido se compone de: lactosa, agua, proteínas, minerales y una
cantidad mínima de grasa (5, 93, 0.85, 0.53 y 0.36 %, respectivamente). Las proteínas del suero tienen
un alto valor biológico superior a otras proteínas como las de huevo, soya y las caseínas de la leche. Sin
embargo, en la mayoría de las unidades de producción, el lactosuero es eliminado al aire libre, lo que lo
convierte en una fuente de contaminación importante. Sin embargo, el alto contenido de aminoácidos
esenciales de cadena ramificada (isoleucina, leucina y valina), en el lactosuero; así como las
concentraciones de minerales, lo hace un alimento valioso.
OBJETIVO.
En el presente trabajo se planteó utilizar el lactosuero dulce de origen bovino y caprino para desarrollar
una bebida de bajo aporte calórico utilizando edulcorantes naturales y sintéticos que permita aprovechar
este subproducto de la industria quesera y así contribuir a disminuir el impacto ambiental que produce su
eliminación al medio ambiente.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se recolectó el lactosuero dulce de bovino y caprino, generado en el Centro de Enseñanza Práctica e
Investigación en Producción y Salud Animal (CEPIPSA), de la FMVZ-UNAM. En el Laboratorio de
Toxicología del Departamento de Nutrición Animal y Bioquímica, se homogeneizaron, descremaron y
caracterizaron (pH, acidez, sólidos totales (Método I, 925.23 AOAC), las cenizas (945.46 AOAC), la
proteína total (Método Kjeldhal 2001.11 AOAC), los carbohidratos reductores (DNS, C,Nielsen, 2003) y la
grasa (Método Gerber)), ambos lactosueros. Ulteriormente se desarrolló la formulación utilizando el
lactosuero deslactosado utilizando una beta galactosidasa, pulpa de mango y diferentes edulcorantes
sacarosa, miel, estevioles y sucralosa, después se analizó la composición (pH, acidez, humedad, ceniza,
proteína, carbohidratos, lípidos y fibra dietaria) y el aporte energético de cada una de las formulaciones y
se desarrollaron sus etiquetas de información nutrimental. Finalmente se realizó una prueba de vida de
anaquel acelerada a cuatro diferentes temperaturas 4º, 25º, 37º y 45ºC por cinco días para determinar el
tiempo de consumo preferente de cada formulación. Todas las cuantificaciones físico-químicas de los
diferentes tratamientos se realizaron por triplicado. Los resultados fueron analizados por ANOVA
incluyendo al edulcorante como efecto y se realizó la prueba de Tukey para diferencia de medias. La
significancia utilizada fue de P<0.05. Para determinar la vida de anaquel se dio seguimiento a la
concentración de ácido láctico, pH y vitamina C, a las cuatro formulaciones de los distintos edulcorantes,
se utilizaron un modelo de degradación cinética de primer orden, y la ecuación de Arrhenius para indicar
el número de días de vida útil de las bebidas.
RESULTADOS
Se observaron diferencias (P<0.05) en la composición de lactosuero bovino y caprino en la cantidad de
cenizas (0.56 y 0.16 g/100 g, respectivamente) y de carbohidratos reductores (2.57 y 3.04 g/100 g,
respectivamente). En tanto, en la cantidad de proteínas no se observaron diferencias (P>0.05). No se
272
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
detectó material lipídico debido al proceso de descremado. La formulación con la que se elaboraron las
diferentes bebidas tuvo una composición de lactosuero (54 %), agua (13.5 %), pulpa de mango (27 %) y
estabilizante (0.07 %). No se observaron diferencias (P>0.05) en el contenido de sólidos, pero si en los
carbohidratos y aporte energético debido al uso de edulcorantes. Siendo el endulzado con estevioles el
de menor (P<0.05) aporte energético, el cual se presenta en el cuadro 1. Donde sacarosa y miel fueron
las que reportaron un contenido más elevado mientras que sucralosa y estevia fueron los de menor
aporte. La vida de anaquel fue de 7 días para los edulcorantes sucralosa y estevia mientras que para miel
y sacarosa fue de 4 días.
Cuadro1. Información nutrimental de bebida de mango a base de lactosuero dulce deslactosado.
Valor promedio por 250 mL.
Edulcorantes
Componentes
Sacarosa
Miel
Esteviol
Sucralosa
Contenido energético
742.4 (163.6)
677.2 (162.0)
364.5 (87.2)
429.7 (102.8)
KJ (kcal)
Proteínas (g)
1.9
1.9
1.9
1.9
Grasas (lípidos) (g)
0.0
0.0
0.0
0.0
Carbohidratos (g)
45.9
45.5
26.8
30.7
Azúcares (g)
39.0
38.6
19.9
23.8
Fibra dietética (g)
6.9
6.9
6.9
6.9
Sodio (mg)
1.6
1.8
3.8
1.2
CONCLUSIONES.
El proceso de deslactosado de los lacto sueros dulces bovino y caprino fue satisfactorio utilizando una
beta galactosidasa. Se demostró la utilidad de ambos lactosueros como principal ingrediente en el
desarrollo de la formulación obteniendo una bebida apta para consumo humano con valor nutrimental
aceptable, de acuerdo a la información de la etiqueta. La vida de anaquel más amplia fue para los
edulcorantes sucralosa y estevioles. Sin embargo, debe continuarse la experimentación para desarrollar
productos con mayor vida de anaquel.
IMPLICACIONES.
Se propuso una aplicación a uno de los desechos más importantes de la industria de lacteos
transformándolo en una bebida nutritiva para consumo humano que al ser deslactosada puede ser
consumida por toda la población y además al tener proteínas de suero puede proporcionar un valor
agregado. Desarrollar bebidas de este tipo, pero con menor contenido calórico ayudaría a mejorar el
estado nutricional de los consumidores, y a disminuir el impacto ambiental que genera la eliminación del
lactosuero al ambiente. Por ello, se debe continuar buscando alternativas de uso a este subproducto.
RECONOCIMIENTOS.
Dirección general de Personal Académico. UNAM. PAPIIT IT201013.
Proyecto financiado por DGAPA-UNAM. PAPIIT IT201013
REFERENCIAS.
Gad, A.S., Emam, W.H., Mohamed, G.F., Sayd, A.F. 2013. Utilization whey in production of functional
healthy beverage “Wheymango beverages”. Am J Food Tech, 8, 133-148.
AOAC International. 2012. Official methods of analysis of AOAC International. Gaithersburg, USA.
273
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTO DEL PROTEINATO DE COBRE EN EL CRECIMIENTO, CALIDAD DE CANAL Y CARNE Y
COMPOSICIÓN DE FIBRAS DEL LONGISSIMUS THORACIS DE CERDOS PELÓN MEXICANO.
EFFECT OF THE COPPER PROTEINATE IN THE GROWTH, CARCASS AND MEAT QUALITY AND
COMPOSITION OF FIBERS OF THE LONGISSIMUS THORACIS OF THE MEXICAN HAIRLESS PIGS.
Colín-Álvarez M1, Domínguez-Vara IA1*, Montes de Oca-Jiménez R2
de Nutrición Animal; 2Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal,
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Campus
Universitario El Cerrillo, Toluca, Estado de México, 50090
1Departamento
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El cobre participa en múltiples funciones bioquímicas (Davis y Mertz, 1987); como ion metálico, cataliza la
peroxidación de lípidos (Apte y Morrisey, 1987), y es cofactor de la enzima citocromo oxidasa en la
cadena respiratoria productora de ATP (Lim y Paik, 2006). La adición de altas dosis de Cu en la dieta de
cerdos (>200 mg kg-1 MS) aumenta los AG instaurados (Amer y Elliot, 1973). Los cerdos requieren 25
mg Cu kg-1 MS (NRC, 2012), pero suplementar 250 mg kg-1 (CuSO4) mejora su crecimiento (Cromwell et
al., 1989). El cerdo Pelón Mexicano derivó de cerdos mediterráneos que originaron las variedades
célticas e ibéricas; la raza conserva rasgos genéticos (loci S0355, S0215 y SW632) del cerdo Ibérico
Español (Canul et al., 2005), tiene lento crecimiento, pobre conversión alimenticia, abundante grasa
subcutánea y poca masa muscular; actualmente está en riesgo de extinción (FAO, 2000; Méndez et al.,
2002); su carne tiene excelente sabor, por la grasa dorsal depositada (72.2% AG insaturados) (Montiel et
al., 1997; Lemus et al., 2002). El músculo esquelético histoquímicamente tiene tres tipos de fibras: i)
fibras lentas-oxidativas o tipo I (β-rojas), ii) rápidas oxidativas-glucolíticas o tipo IIA (α-rojas), y iii) rápidasglucolíticas o tipo IIB (α-blancas) (Brooke y Kaiser, 1970a). La composición fibrilar y el tamaño de los
miositos influyen en el metabolismo post mortem, determinan el curso bioquímico del músculo, en su
transformación en carne (Fiedler et al., 2003). Por lo tanto, la variación del tipo de fibra muscular explica,
en parte, la variación de las características de calidad de la carne (Essen-Gustavsson et al., 1994).
OBJETIVO.
Evaluar 0, 75, 150 y 225 mg Cu kg-1 MS, proteinato de Cu, en dieta de cerdos Pelón Mexicano en el
crecimiento, características de la canal, calidad de la carne y composición de fibras musculares.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Crecimiento. Veinte cerdos machos castrados, 5/tratamiento, de la raza Pelón Mexicano (62±5.2 kg PV y
120±4 días de edad), se alojaron y alimentaron ad libitum durante 46-d en corrales de 2.5 x 3 m, con
bebedero y comedero automáticos, más 15-d de adaptación a una dieta basal (DB) que cubrió sus
requerimientos nutricionales (NRC, 2012). Los cerdos se pesaron y asignaron a los tratamientos bajo un
diseño experimental completamente aleatorizado. T1=DB (15 mg Cu kg-1 MS), T2=DB+75 mg Cu kg-1
MS, T3=DB+125 mg Cu kg-1 MS, T4=DB+225 mg Cu kg-1 MS. El Cu (proteinato de cobre) se suplementó
a través de la premezcla (Bioplex Cu, Alltech, Inc., Nicholasville, KY) que contiene 1000 mg de Cu kg-1.
Los cerdos, se pesaron cada 15-d, al finalizar la prueba de crecimiento se transportaron (25 km) al rastro
municipal de Toluca y se sacrificaron por métodos humanitarios (NOM-033-ZOO-1995) bajo las normas
del rastro.
Evaluación de canales. Se registró su peso 15 minutos post sacrificio y evisceración. Dentro de los 30m post sacrificio, se hizo un corte transversal en la canal, a nivel de la última costilla, se obtuvo una
porción de longissimus thoracis, y se midió el área de ojo de chuleta por planimetría. La grasa dorsal
(GD) se midió en la línea media de la media canal derecha, a nivel de la 10ª costilla. La pérdida por goteo
se midió según Honikel (1998).
274
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Calidad de la carne. El pH y la temperatura se midieron, en tres puntos, a 45 minutos, 24 y 48 h post
sacrificio en el músculo longissimus thoracis a nivel de la última costilla con potenciómetro (Oakton,
Vernon Hills, IL, USA) (Honikel, 1997). El color se midió con un colorímetro calibrado (Minolta
Chromameter CR-300 Osaka, Japan), a 24 y 48 h postmortem, en cinco zonas homogéneas
representativas, libres de grasa intramuscular y sangre, seleccionadas al azar, para lo cual se extrajo una
porción del longissimus thoracis a nivel de la última costilla, según la American Meat Science Association
(Hunt et al., 1991; AMSA, 1992). Se determinaron las coordenadas de: luminosidad (L*), rojizo (a*,
rojo±verde) y amarillento (b*, amarillo±azúl). El índice croma (C*), que refiere la claridad o vivacidad del
color, y el ángulo matíz (h), se estimaron con las ecuaciones: C*=(a*2+ b*2 )½; h=tan-1 (b*/a*).
Análisis histoquímico. Dentro de 45 min post mortem, a nivel de la última costilla, se tomaron 5
muestras de 1 cm3 en corte paralelo al paquete miofibrilar del longissimus thoracis. Las muestras se
colocaron en alcohol 2Metil Butano enfriado con nitrógeno líquido, después se congelaron y conservaron
a -80 °C hasta su análisis. Se cortaron 10 secciones seriadas transversales del músculo (10 μm) en un
criostato (CM1800 Leica, Germany) a -20 oC y se colocaron en portaobjetos de vidrio. Las secciones
fueron teñidas por la reacción histoquímica de la actividad enzimática de la adenosin trifosfatasa
miosínica (mATPasa) después de preincubación ácida (pH 4.6) (Brooke y Keiser, 1970b), combinando el
análisis con la tinción de la nicotinamida adenin dinucleótido (reducida) tetrazolium reductasa (NADH-TR)
(Gil et al., 2001), para demostrar la actividad metabólica de las fibras. Con las secciones teñidas se midió
el número de fibras por mm 2 y el área de cada tipo de fibras según Brooke y Kaiser (1970b), usando el
sistema de análisis de imágenes Sigma Scan Pro (Ver. 4 for Windows, Systat Software Inc, USA). Por
cada muestra, se evaluaron mínimo 300 fibras (1500 por cerdo).
Análisis estadístico. Se usó diseño completamente al azar, 5/cerdos/tratamiento, con un modelo mixto
(SAS, 2002) que incluyó cerdo (aleatorio), nivel de Cu (fijo) y residual (cerdos dentro de tratamiento). Las
variables de crecimiento con el mismo modelo incluyeron efectos de tiempo (medidas repetidas) e
interacción tiempo con dosis de Cu. Para evaluar los efectos lineal y cuadrático del nivel de Cu
(tratamientos) se realizó un análisis de polinomios (SAS, 2002).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Crecimiento. El Cu aumentó cuadráticamente (P<0.05) la ganancia de peso y el peso final, pero redujo
linealmente (P<0.05) el consumo y la conversión alimenticia. Smith y Henman (2000) informaron que 40
mg de Cu kg-1 MS, como proteinato de Cu, aumentaron la ganancia de peso y el consumo de alimento de
cerdos. Braude (1967) observó, en 17 experimentos, que los cerdos con 250 mg de Cu kg -1 MS, como
CuSO4, mejoraron su ganancia de peso y conversión de alimento que con 125 mg de Cu. En el presente
estudio, el Cu mejoró, en las tres dosis, la eficiencia de uso del alimento, en particular los cerdos con 75
mg de Cu, con ahorro de alimento de 31.6% con respecto al control.
Calidad de canales y carne. El Cu aumentó cuadráticamente (P<0.05) el peso de la canal, en contraste,
la grasa dorsal y la pérdida por goteo bajaron linealmente (P<0.05) por efecto del Cu. El pH de la canal
aumento linealmente (P<0.05) y la temperatura bajó linealmente (P<0.05) por efecto del Cu; el Cu afectó
cuadráticamente (P<0.05) los índices de coloración b y h a 48 h; y el índice h aumento linealmente
(P<0.05) a 24 h por efecto del Cu dietario. No hubo efecto del Cu (P<0.05) en el rendimiento de la canal y
área de ojo de la chuleta. Lemus et al. (2002) informaron que el rendimiento de canal de cerdos Pelón
Mexicano fue de 44.2%, valor inferior al promedio (59.4%) del presente estudio. En contraste, Serra et al.
(1998) observaron valores mayores en el rendimiento de canal de cerdos Ibéricos y Landrace (78.6 y
72.4%). Castell y Bowland (1968) no encontraron diferencia (P>0.05) en el ojo de la chuleta al aumentar
el Cu (CuSO4) de 125 a 200 mg kg-1 MS. La grasa dorsal fue menor en los cerdos con 225 mg de Cu,
respecto al testigo se redujo 13.7%. Castell et al. (1975) indicaron que cerdos suplementados con altas
dosis de CuSO4 en la dieta, redujeron la grasa dorsal, con mayor contenido de ácidos grasos insaturados
como el palmitoléico (16:1) y oléico (18:1) y redujeron el palmítico (16:0) y esteárico (18:0).
Análisis histoquímico. El Cu redujo linealmente (P<0.05) el número, composición y área relativa
ocupada de las fibras tipo I; el Cu también afectó cuadráticamente (P<0.05), el número y el área
promedio de las fibras tipo IIB. El análisis histoquímico muestra, en los cuatro tratamientos, la distribución
típica de las fibras musculares de contracción rápida glucolítica del musculo longissimus thoracis del
275
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
cerdo, con fibras tipo IIB en mayor número que las fibras tipo I y IIA. Los resultados coinciden con los
obtenidos por Lefaucheur et al. (1991) en el longissimus thoracis de cerdos adultos de líneas comerciales
cuya área de las fibras aumentó en el orden del tipo IIA, I y IIB; en otra línea de cerdos comerciales Ryu y
Kim (2006) informaron que las fibras aumentaron en el orden I, IIA y IIB. En los cerdos con 150 y 225 mg
Cu se redujo el número de fibras tipo I pero aumentó el tipo IIB; los cerdos control tuvieron más
proporción de fibras tipo I que los cerdos con Cu. El área promedio de las fibras I y IIA fue mayor en los
cerdos con 150 y 225 mg Cu.
CONCLUSIÓN.
El Cu mejoró el crecimiento y el peso de la canal; redujo la grasa dorsal y la pérdida de agua, pero
aumentó el pH de la carne en 45 min post mortem; modificó la composición de los tipos de fibras
musculares I, IIA y IIB del longissimus thoracis.
AGRADECIMIENTOS.
A la UAEM, CONACyT y SEP, por financiar la investigación; al Departamento de Anatomía, Facultad de
Veterinaria, Universidad de Murcia, España, por la asesoría en histoquímica.
276
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESPUESTA PRODUCTIVA Y CARACTERÍSTICAS DE LA CANAL DE OVINOS DE PELO
SUPLEMENTADOS CON DOS NIVELES DE ACEITE DE SOYA EN LA DIETA.
GROWTH PERFORMANCE AND CARCASS CHARACTERISTICS OF HAIRLESS SHEEP
SUPPLEMENTED WITH TWO LEVELS OF SOYBEAN OIL IN DIET.
Martínez SPF1*, Bórquez GJL1, Domínguez VIA1, Rojo RR2, Mariezcurrena BMA1, Cruz VP1, Morales AE1
1Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia Universidad Autónoma del Estado de México;
2Centro Universitario UAEM Temascaltepec
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
El uso de aceites y grasas en la nutrición y alimentación animal puede tener efectos benéficos en la
respuesta productiva y características de la canal ya que son fuente de energía, mejoran la palatabilidad,
textura de la dieta y reducen el polvo. Además, pueden influir en los depósitos y grasa de cobertura de la
canal en ovinos, jugosidad y terneza de la carne. Niveles de 3 % MS de la dieta se recomiendan para
obtener el máximo de beneficios de la energía de las grasa o aceites en dietas altas en fibra; en dietas
bajas en fibra, hasta 6 % MS de la dieta puede tener mínimos efectos en la utilización de otros
componentes de la ración (Hess et al., 2008). Niveles (3 y 6% MS) de grasa o aceite en la dieta no
parece afectar la respuesta productiva de ovinos; sin embargo, con 6 % de grasas saponificadas de
girasol se encontró que corderos Merino mostraron menor digestibilidad de la fibra, menor relación
acetato-propionato y menor peso de la canal fría, sin afectar el consumo de MS y la ganancia de peso
(Blanco et al., 2014). Meale et al. (2015) no encontraron efecto de la suplementación con 2% de aceite
de canola, girasol o lino en consumo, crecimiento y características de la canal de corderos.
OBJETIVO.
Evaluar la respuesta productiva y características de la canal de tres genotipos de ovinos de pelo
suplementados con aceite de soya en la dieta.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Se utilizaron 30 corderos machos enteros de tres genotipos (Kathadin, Dorper y Pelibuey; 21.7±2.5 kg
PV), con alrededor de 3 meses de edad. Se alojaron en corraletas individuales bajo techo provistas de
comedero y bebedero. Los ovinos recibieron una dieta basal (DB) a la que se agregó aceite de soya (0 y
3% MS) para tener dietas isonitrogenadas (14.39 % PC) e isoenergéticas (1.75 Mcal ENm kg -1 MS) para
corderos en crecimiento (NRC, 2007). El diseño fue Completamente al Azar con arreglo factorial de
tratamientos (2x3; dos niveles de aceite y tres genotipos). Se hizo análisis de varianza y la comparación
de medias con la prueba de Tukey (SAS, 2003). Se hizo análisis de covarianza donde el peso inicial de
los animales se consideró como covariable. El modelo estadístico fue el siguiente (Steel et al., 1997).
Yijk=M+Ti+β (Xij- ..)+ GENj+ACk+GEN*AC(jk)+Eijk
Donde:
Yijk=Variable de respuesta
M=Media general
Ti=Efecto de tratamientos
β =Coeficiente de regresión
Xij=Variable independiente o covariable
..=Media general de la covariable
GENj=Efecto del genotipo
ACk=Efecto del nivel de aceite
GEN*AC(jk)=Efecto de la interacción genotipo*nivel de aceite
Eijk=Error experimental
277
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
No hubo efecto (P>0.05) de peso inicial de los animales sobre las variables estudiadas. Kathadin con DB
sin aceite, mostró mayor (P<0.05) ganancia de peso que Pelibuey con 3 % de aceite en la dieta (181 vs
141 g/d). No hubo efecto (P>0.05) del genotipo, nivel de aceite ni su interacción sobre consumo de
materia seca y conversión alimenticia. El peso de la canal caliente y fría fue mayor (P<0.05) en Dorper sin
aceite que con aceite en la dieta (19.9 vs 17.76; 18.98 vs 17.06 kg). No hubo diferencias (P>0.05) en
peso final, peso al sacrificio, merma, rendimiento comercial y verdadero. Kathadin mostró mayor (P<0.05)
perdida por oreo que Dorper (1.22 vs 0.070 kg) con 3 % aceite. Hubo mayor (P<0.05) peso de la canal
caliente (19.90 vs 17.76 kg) y fría (18.98 vs 17.06 kg) en la raza Dorper sin aceite en la dieta. Hubo efecto
(P=0.0282) de la interacción genotipo*nivel de aceite sobre el peso de la canal caliente en Dorper y
Pelibuey. No se encontraron efectos (P>0.05) del genotipo, nivel de aceite ni su interacción sobre longitud
de la canal, longitud de la pierna, ancho de grupa, ancho mayor y menor de tórax, área del ojo de la
chuleta y grasa dorsal. Dorper mostró mayor contenido de materia seca (P=0.0691) en la carne que
Kathadin (37.68 vs 33.21 %). Dorper con y sin aceite y Pelibuey sin aceite mostraron menor pH 24 h post
matanza (P<0.01) que Kathadin sin aceite; no se encontraron diferencias (P>0.05) en proteína cruda,
cenizas, pH 0 h, temperatura, fuerza de corte, luminosidad (L*), rojizo (a*), amarillento (b*); tampoco hubo
efecto de la interacción genotipo*nivel de aceite en estas variables. Resultados similares en respuesta
productiva y características de la canal de ovinos fueron encontrados por Hess et al. (2008), Blanco et al.
(2014) y Meale et al. (2015).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
Se concluye que la suplementación con aceite vegetal (3% MS) en corderos tuvo mayor efecto en las
características de la canal que en la respuesta productiva.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Blanco, C., Giráldez, F.J., Prieto, N., Morán, L., Andrés, S., Benavides, J., Tejido, M.L. and Bodas, R.
2014. Effects of dietary inclusion of sunflower soap stocks on nutrient digestibility, growth performance,
and ruminal and blood metabolites of light fattening lambs. Journal of Animal Science. 92 (9):4086-4094.
Hess, B.W., Moss G.E. and Rule D.C. 2008. A decade of developments in the area of fat supplementation
research with beef cattle and sheep. Journal of Animal Science. 86:14 suppl: E188-E204.
Meale, S.J., Chaves, A.V., He, M.L., Guan, L.L. and McAllister, T.A. 2015. Effects of various dietary lipid
additives on lamb performance, carcass characteristics, adipose tissue fatty acid composition, and wool
characteristics. Journal of Animal Science. 93 (6): 3110-3120.
NRC. 2007. Nutrient requirements of small ruminants. Sheep, goats, cervids, and new world camelids.
National Research Council. Washington, D.C. 292 p.
Steel, R.G.D., Torrie, J.H. and Dickey, D.A. 1997. Principles and procedures of statistics a biometrical
approach. 3ª ed. McGraw-Hill. USA. 666 p.
278
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
COMPARACIÓN EN LA COMPOSICIÓN NUTRICIONAL Y COLOR DE LA CARNE DE CONEJOS
ALIMENTADOS CON DIETAS A BASE DE PASTA DE SOYA Y PASTA DE CANOLA.
A COMPARISON ON THE NUTRITIONAL COMPOSITION AND MEAT COLOR IN RABBITS FED DIETS
BASED ON SOYBEAN MEAL AND CANOLA MEAL.
Gómez MA1*, Sánchez TJE1, Domínguez VIA1, Morales AE1, Mariezcurrena BA1, Borquez GJL1, García
BL1, Gómez MA2
1Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Campus
Universitario “El Cerrillo”;
2 Teazistli Agencia de Servicios Empresariales S. A de C.V., Metepec, Estado de México.
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
Los altos costos en los insumos que se utilizan en las explotaciones de conejos están orillando a las
empresas productores de alimento a buscar nuevas alternativas que les permitan disminuir los costos de
alimentación. La PS y PC son dos ingredientes proteicos que se utilizan en la alimentación animal y
además se pueden utilizar para incluirlos en las dietas de conejos y sustituir parcialmente la proteína
cruda existentes en otros ingredientes como la alfalfa. La carne de conejo es un alimento con niveles
altos de proteína, siendo esta de alta calidad nutritiva por el tipo de aminoácidos que la constituyen,
además, su grasa contiene ácidos grasos esenciales. La composición de grasa es baja y los niveles de
colesterol son bajos comparados con otras especies, además de ser rica en vitaminas y minerales
(Guernebleich, 2001). Sin embargo, estas características son desconocidas por la mayoría de los
consumidores, especialmente en países o lugares donde por tradición se consumen otras especies. El
objetivo del presente estudio fue evaluar la composición nutricional y el color de la carne en conejos en la
etapa de finalización, alimentados con dietas a base de pastas de soya y pasta canola.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Se utilizaron 42 conejos (30 machos y 12 hembras) de la raza Nueva Zelanda (1050±50 g. PV) alojados
en jaulas individuales, el experimento tuvo una duración de 35 días en los cuales se les ofreció la dieta
asignada y agua a libre acceso. La dieta a base de PS contenía: 50% heno de alfalfa, 14.4 % de maíz,
12 % de PS, 12% de salvado, 9.8% de heno de avena y 2.3% de premezcla de vitaminas y minerales. La
dieta a base de PC contenía: 49.5% heno de alfalfa, 17.9 % de maíz, 12.2 % de PC, 13.1% de salvado,
4.9 % de heno de avena y 2.3% de premezcla de vitaminas y minerales. La dieta a base de PS + PC
contenía: 49.6% heno de alfalfa, 17.2 % de maíz, 5.8 % de PS, 5.6 % de PC, 9.2 % de salvado, 9.9 % de
heno de avena y 2.3% de premezcla de vitaminas y minerales. Los conejos se asignaron aleatoriamente
a tres tratamientos (14 conejos por tratamiento). Al concluir con la fase de finalización los animales fueron
y sacrificados, se tomó una muestra del musculo longissimus dorsi, evaluándose el color, para lo cual se
utilizó un equipo Minolta Croma meter CR-400 (Minolta Co., Ltd., Japón) usando fuente de luz D65 y para
medir 8 mm de diámetro en el área de la superficie, iluminación difusa y 0 ° ángulo de visión.,
posteriormente se preparó la muestra para realizar el análisis de la composición nutricional de la carne de
conejo incluyendo: materia seca, cenizas, extracto etéreo y proteína cruda (AOAC, 2006). Se usó un
diseño completamente al azar donde los datos recabados fueron procesados con análisis de varianza
según el procedimiento de modelo lineal general con ayuda del programa estadístico SAS (2002).La
comparación de medias se realizó por prueba de Tuke. Los niveles de significancia y tendencia fueron p≤
0.05 para cada tratamiento.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
En la tabla 1 y 2 se muestran la composición nutricional y color de la carne de conejo, en la cual se
observa que el contenido de materia seca es menor (P<0.05), en la carne de conejo que consumieron la
dieta a base de PS comparada con la carne de conejo que consumieron dietas a base de PC y PS+PC
279
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
(28.5% vs 30.2 y 30.1%, respectivamente). Con respecto al porcentaje de extracto etéreo fue menor
(P<0.05), en la carne de conejo que consumieron la dieta de PS+PC en 1.3% comparado con la carne de
conejo que consumieron la dieta de PC. El porcentaje de proteína cruda, cenizas, pH 45 min y pH 24
horas, fue similar (P>0.05) en la carne de conejo que consumieron las tres dietas experimentales. En
cuanto al color de la carne (L * a *, b * C * Ho), la fuente proteica adicionada a las dietas en este estudio
no afecto (P>0.05).Malavé et al., 2012 realizaron un trabajo para evaluar la composición bromatológica
de la carne de conejos suplementados con mataratón y cachaza de palma aceitera, y obtuvieron que la
humedad se encuentra en un porcentaje promedio de 71.77, por encima de lo obtenido en este
experimento (70.4 % promedio), esto puede deberse a la composición de las dietas que utilizaron (follaje
de mataratón y cachaza de palma aceitera) y a la raza de animales que se utilizaron. En cuanto al
porcentaje de cenizas presentes en la carne de conejo Malave et al., 2012 presenta un valor de 1.62
mientras que Simonová, 2010 presento valores entre 1.07 y 1.43% Las cenizas presentes en la carne de
conejo representan el contenido relativo de minerales que pueden incluir cualquiera de los iones
esenciales para la alimentación de los humanos; haciendo posible decir, que la carnes de conejo de la
presente investigación tienen un aporte nutricional suficiente con respecto al suministro de minerales. Los
resultados obtenidos para el contenido de proteínas en el presente estudio, son similares a los reportados
por Simonová et al, 2010. En cuanto al contenido de extracto etéreo, los valores reportados en la
presente investigación se encuentran en un rango entre 2.8 y 4.1% y son menores a los porcentajes
reportados por Malavé et al., 2012 (6.48 y 7.23%); esto podría ser debido a que en su investigación
utilizaron una mezcla de solventes cloroformo/metanol 2:1, haciendo posible extraer a los lípidos
compuestos con fragmentos polares, tales como fosfolípidos, además de los lípidos no polares o neutros,
que incluyen triglicéridos y esteres de colesterol. La mayoría de investigaciones relacionadas con el color
en la carne se realizan en las especies pecuarias de mayor consumo. Algunos autores sugieren que las
medidas de color en la carne de conejo se obtengan de los músculos de mayor importancia comercial
(longissimus dorsi y bíceps femoral. Ramírez, (2004), reporta un valor de L* 54.9, a* 2,84 y b* 0,21 para
carne de conejo, en el presente estudio los resultados de L* y a* son similares, sin embargo, los valores
para b* son muy diferentes, la diferencia puede deberse a las diferentes razas utilizadas en ambos
trabajos. Al comparar el color de la carne de conejo, con otros animales como el cerdo, en el mismo
músculo (longissimus dorsi), se observa que el color L*(luminosidad), a* (verde-rojo) y b* (azul-amarillo,)
son superiores al de la carne de conejo, con valores promedio de 57.0, 7.44 y 15.9 respectivamente
(Norman et al., 2003).
CONCLUSIÓN.
Los resultados del presente trabajo muestran que la utilización de pasta de canola en dietas para conejos
en finalización incrementa el contenido de materia seca y lípidos en la carne de conejo. En cuanto a la
fuente proteica adicionada a las dietas en este estudio no tuvo ningún efecto sobre el color en la carne de
conejo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Malavé, A., Cordova L., Garcia A., Mendez J. (2013). Composición bromatológica de la carne de conejos
suplementados con mataratón y cachaza de palma aceitera. Rev.MVZ Córdoba 18(2):3452-3458.
Norman, J.L., Berg E.P., Heymann, H., Lorenze, C.L. (2003). Pork loin relative to sensory and
instrumental tenderness and consumer acceptance. Meat Science, 65, 927-933.
Ramírez, J. 2004. Características bioquímicas del musculo, calidad de la carne, y de la grasa de los
conejos seleccionados por velocidad de crecimiento. Tesis Doctoral. Universidad Autónoma de
Barcelona. España.
SAS. Institute, Inc. 2002. SAS User´s guide: Sstatistics, Statisical. (Versión 8 Ed). Cary, north Carolina,
Simonová M, Chrastinová L, Mojto J, Lauková A, Szabóová R, Rafay J. 2010. Quality of rabbit meat and
phyto additives. Czech J Food Sci; 28(3):161-167.
280
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Tabla 1. Composición nutricional de la carne de conejo, alimentados con dietas a base de pasta
de soya y pasta de canola.
DIETAS
VARIABLE
VALOR
P<0.05
PS1
PC2
PS+ PC3
Materia Seca (%)
28.5b
30.2a
30.1a
0.043
Proteína cruda (%)
21.6
20.9
21.4
0.543
Lípidos (%)
2.9b
4.1a
2.8b
0.031
Cenizas (%)
1.2
1.2
1.23
0.957
pH45
6.7
6.6
6.6
0.529
5.9
5.9
5.9
0.544
pH24
1
Dieta a base de pasta de soya.
soya + pasta de canola.
2
Dieta a base de pasta de canola.
3
DE
Dieta a base de pasta de
Tabla 2. Color de la carne de conejo, alimentados con dietas a base de pasta de soya y pasta
de canola.
DIETAS
VARIABLE
VALOR
P<0.05
PS
PC
PS+PC
L*
55.72
55.77
56.83
0.687
a*
2.3
2.98
2.69
0.319
b*
3.34
3.45
4.05
0.879
C*
4.14
4.67
4.71
0.428
Ho
54.75
50.27
51.84
0.654
1
2
DE
3
Dieta a base de pasta de soya. Dieta a base de pasta de canola. Dieta a base de pasta de
soya + pasta de canola
AGRADECIMIENTOS.
Por el financiamiento de este proyecto al Grupo Produce Estado de México y a la Red de Investigación
en Sistemas de Producción de Leche Bovina en Climas Árido y Templado y en Ciencia de la Carne de
Especies Pecuarias.
281
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
DIGESTIBILIDAD ILEAL ESTANDARIZADA DE AMINOÁCIDOS EN PASTA DE CANOLA Y PASTA
DE SOYA EN CERDOS EN FINALIZACIÓN.
STANDARIZED ILEAL DIGESTIBILITY OF AMINO ACIDS IN SOYBEAN MEAL AND CANOLA MEAL IN
FINISHING PIGS.
Sánchez TJE1*, Domínguez VIA1, Hernández YJL2, Cervantes RM3, Morales AE1, García BML1
1Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Campus
Universitario “El Cerrillo”, Toluca, Estado de México; 2Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
de la Universidad Autónoma del Estado de Tlaxcala; 3Instituto de Ciencias Agrícolas de la
Universidad Autónoma de Baja California
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
La alimentación eficiente de los cerdos representa una de las prácticas más importantes de una empresa
porcina, de ella dependen tanto los rendimientos productivos de los cerdos, como la rentabilidad de la
granja; representando esta aproximadamente el 75% de los costos totales de producción; por esta razón,
es importante conocer aspectos relacionados con la biodisponibilidad y digestibilidad de los nutrientes de
los insumos que se suministran a los cerdos en sus diferentes etapas de producción. (García-Contreras
et al., 2012). La digestibilidad de la proteína y los aminoácidos incluye una hidrólisis enzimática y la
fermentación microbiana de las proteínas que fueron ingeridas en el alimento para su posterior absorción
en el lumen gastrointestinal (Fuller, 2003). Los valores de digestibilidad ileal de aminoácidos puede ser
expresados como digestibilidad ileal estadarizada (DIE) (Martínez et al., 2006). La pasta de soya es la
fuente proteica más utilizada en la alimentación animal, sin embargo, existen otros ingredientes de origen
proteico como la pasta de canola que pueden sustituir parcial o total a la pasta de soya. El objetivo del
presente trabajo es determinar la digestibilidad ileal estandarizada de aminoácidos en la pasta de soya y
pasta de canola en cerdos en finalización.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Tres dietas (a base de pasta de soya, pasta de canola y libre de nitrógeno) se evaluaron en tres periodos
experimentales con 6 cerdos, machos castrados (peso vivo inicial 75±1.2 kg), del genotipo Landrace X
Pietrain X Duroc. Los cerdos fueron canulados en ileon distal (Sauer et al. (1983); Cervantes et al. (2000).
Los cerdos se alojaron individualmente en jaulas metabólicas (1.2 X 1.2 m X 0.9 m de alto),
permitiéndoles libre movimiento. Cada jaula contenia un comedero tipo tolva y bebedero tipo chupón el
cual ofreció agua fresca durante toda la fase experimental. La alimentación de los cerdos se fijó en 2.8
veces el requerimiento de mantenimiento estimado de energía (2.8 × 110 kcal of DE/kg of PV0.75 (NRC,
2012), dividiéndolo en dos comidas de igual proporción a las 8:00 y 15:00 hrs. Cada periodo experimental
consistió de siete días, de los cuales cinco días fueron de adaptación a la dieta experimental seguido de dos
días de colección de contenido ileal. El contenido ileal se conservó en un congelador a una temperatura de 20oC; posteriormente se descongelaron, homogenizaron, se liofilizaron para su posterior molienda para
analizar el contenido de aminoácidos (AOAC, 2006) El óxido crómico presente en las dietas y en el
contenido ileal se determinó por espectrofotometría. Los cálculos de digestibilidad ileal estandarizada se
estimaron utilizando los valores de óxido crómico obtenidos. La pérdida basal de aminoácidos ileales
endógenos (Iend) de aminoácidos (g/kg de MS consumida) se calculó por la ecuación de la dieta libre de
nitrógeno (Stein et al., 2007). Los datos se analizaron utilizando el procedimiento MIXED de SAS (2002),
como un Cuadro Latino repetido 3 X 3. Cada cerdo se consideró como unidad experimental. El análisis
de varianza determino diferencias entre dietas. Las medias se separaron por PDIFF. Para probar las
hipótesis, una P<0.05 se consideró significante (Steel y Torrie, 1997).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
282
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
En la Tabla 1 y 2 se muestran la digestibilidad ileal estandarizada y el contenido (%) ileal estandarizada
de aminoácidos en la pasta de soya y pasta de canola. Arginina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina,
Fenilalanina, Treonina y Valina tuvieron valores mayores (P<0.05) de digestibilidad ileal estandarizada en
la pasta de soya comparados con la pasta de canola, mientras que metionina tuvo mayor (P<0.05)
digestibilidad en la pasta de canola. En el contenido de digestibilidad ileal estandarizada todos los
aminoácidos tuvieron valores altos (P<0.05) de digestibilidad en la pasta de soya, excepto en metionina.
Stein et al., (2001), realizo estudios de digestibilidad estandarizada en diversos ingredientes y obtuvo valores
diferentes en la pasta de soya a los encontrados en el presente estudio; con respecto a Lisina, Treonina y
Metionina las digestibilidad ileal estandarizada fue de 91.4, 85.4 y 89.7 %, respectivamente siendo mayores
en un 6.22 y 10.16 % con respecto a Lisina y Treonina, y similar en Metionina. Con respecto a la dieta de
pasta de canola, Stein et al. (2001) obtuvo mayor digestibilidad ileal estandarizada en todos los aminoácidos
comparados con el presente estudio excepto en metionina que fue mayor en un 3.6 % que la digestibilidad
en el presente trabajo. La digestibilidad de los nutrientes y principalmente de aminoácidos depende del
contenido de fibra que exista en el ingrediente. En el contenido de digestibilidad ileal estandarizada entre los
dos ingredientes se obtuvo una mayor digestibilidad en la pasta de soya comparado con la pasta de canola.
Ambos ingredientes son de origen proteico, y además, ambos son producto del proceso de la extracción de
aceite, por lo cual, durante el proceso de extracción de aceite puede existir sobrecalentamiento que dañe a la
estructura de los aminoácidos y afectar así su digestibilidad.
CONCLUSIÓN.
Los valores de digestibilidad ileal estandarizada y de digestibilidad fueron mayores en todos los aminoácidos
en la pasta de soya, excepto en metionina que fue más digestible en la pasta de canola.
Tabla 1. Digestibilidad ileal estandarizada de aminoácidos en pastas de soya y pasta de canola.
Dietas
Valor de P
Variable
EEM1
Pasta de soya
Pasta de canola
% de AA esenciales
Arginina
89.45ª
87.07b
0.979
0.039
Histidina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
Treonina
Valina
Total
1 Error estándar Medio
85.11a
84.51ª
84.08a
85.18ª
86.69b
84.22ª
75.24ª
79.35ª
80.82a
84.37a
78.99b
81.25b
78.86b
90.30ª
82.02b
71.63b
75.06b
79.66ª
1.151
1.022
0.970
1.040
1.039
1.027
1.280
1.093
1.302
0.361
0.005
0.019
0.001
0.001
0.015
0.001
0.001
0.171
283
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Tabla 2. Contenido (%) de la digestibilidad ileal estandarizada en pastas de soya y pasta de
canola.
Dietas
Valor de P
Variable
EEM1
Pasta de soya
Pasta de canola
% de AA Esenciales
Arginina
Histidina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
Treonina
Valina
Total
1 error estándar Medio
3.39ª
2.26b
0.314
0.001
1.19ª
2.03a
3.40ª
2.78ª
0.53b
2.25ª
1.52ª
2.00a
39.75a
1.00b
0.016
0.019
0.033
0.030
0.007
0.021
0.025
0.026
0.597
0.001
0.001
0.001
0.001
0.001
0.001
0.001
0.001
0.001
1.35b
2.50b
1.92b
0.62a
1.44b
1.33b
1.67b
29.81b
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Steel, R.G.D., and J.H. Torrie. 1997. Principles and procedures of statistics: A biometrical approach. 3rd
ed. McGraw-Hill, New York.
García-Contreras, A.C., De Loera Ortega Y.G., Yagüe A.P., Guevara González, J. A., García, A.C.
(2012). Alimentación Practica del Cerdo. Revista Complutense de Ciencias Veterinarias. 6(1):21-50.
Fuller, M. (2003). AA bioavailability-A brief history. Pages 183-198 in Digestive Physiology in Pigs. Proc.
9th Intl. Symp. Vol. 1. R. O. Ball, ed. Univ. Alberta, Alberta, Canadá.
Martínez, A.O., Martínez, V.M.E. (2006). Proteínas y péptidos en nutrición enteral. Nutrición Hospitalaria.
21:1-14.
Stein, H.H., S.W. Kim, T.T. Nielsen and R.A. Easter. (2001). Standarized ileal protein and amino acid
digestibility by growing pigs and sows. J. Anim. Sci. 79:2113-2122.
284
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
CARACTERÍSTICAS DE LA CANAL Y COLOR EN CARNE DE CERDOS ALIMENTADOS CON
DIETAS BAJAS EN PROTEÍNA CON DIFERENTES NIVELES DE LISINA.
CARCASS CHARACTERISTICS AND MEAT COLOR IN PIGS FED LOW PROTEIN DIETS WITH
DIFFERENT LEVELS OF LYSINE.
Contreras DCA1*, Sánchez TJE1, Domínguez VIA1, Morales AE1, Mariezcurrena BMA1, Yañez HJL2,
Cervantes RM3, Crespo LG.4
de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México “El Cerrillo”,
Toluca, Estado de México;2Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma de
Tlaxcala; 3Instituto de Ciencias Agrícolas de la Universidad Autónoma de Baja California; 4 Laboratorios
Lapisa.
1Facultad
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En la actualidad, la calidad del producto porcino no es solamente exigencia local o nacional sino a nivel
mundial, para esto es necesario ser más eficientes y competir con productos de calidad. Para mejorar la
rentabilidad y disminuir las emisiones contaminantes de la porcicultura se debe incrementar la eficiencia
de utilización de los nutrientes; una posibilidad es la reducción de la proteína cruda (PC) en las dietas sin
afectar la respuesta productiva. Así, puede haber más energía disponible para síntesis de tejido adiposo,
y mayor grosor de la grasa dorsal, aunque la ganancia de peso, la conversión alimenticia y la ganancia
de carne magra sean similares en cerdos alimentados con dietas estándar o con menos proteína cruda.
Reducir la proteína cruda de la dieta se traducirá en una disminución en el exceso de aminoácidos y
síntesis consecutiva y la excreción de urea en la orina lo que también contribuye a reducir la producción
de calor de cerdos. En consecuencia, la reducción de proteína cruda mejorará la eficiencia de utilización
de la energía metabolizable, con consecutivo aumento en la disponibilidad la energía neta. Lisina y
treonina cristalinas pueden reemplazar completamente a la pasta de soya en dietas a base de trigo para
cerdos en crecimiento sin afectar su comportamiento productivo. Otros reportes muestran una
disminución en el comportamiento y un aumento en la grasa dorsal cuando el contenido de proteína se
reduce en más de cuatro puntos porcentuales en dietas a base de maíz-pasta de soya y sorgo-pasta de
soya (Buenabad et al 20014). El objetivo de este estudio fue evaluar las dietas bajas en proteína con
diferentes niveles de lisina en las características morfométricas de la canal.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Se utilizaron 30 cerdos (15 machos y 15 hembras Landrace-Duroc) con un peso vivo inicial promedio de
63.01 kg, los cuales se alojaron en jaulas individuales. El experimento tuvo una duración de 35 días en
los cuales se les ofreció la dieta asignada y agua a libre acceso. La dieta T1 contenía 84% de maíz,
13.90% de pasta de soya y 2.10% de premezcla de vitaminas y minerales. T2 contenía 76.50% de maíz,
19.70% de pasta de canola, 1.90% de aceite vegetal y 1.90% de premezcla de vitaminas y minerales. T3
contenía 91.90% de maíz, 6.00% de pasta de canola y 2.19% de premezcla de vitaminas y minerales. T4
y T5 fueron similares a T3 con la inclusión de 0.12% y 0.24% de lisina sintética respectivamente. Los
cerdos se asignaron aleatoriamente a cinco tratamientos (6 cerdos por tratamiento); al concluir con la
fase de finalización los animales fueron sacrificados y se obtuvieron los siguientes datos: peso vivo al
sacrificio, peso de la canal caliente, peso canal fría, perímetro de la grupa, perímetro torácico, longitud de
pierna, longitud de la canal, perímetro de la pierna y grosor de la grasa dorsal. Posterior a la realización
de las mediciones se obtuvo una muestra del musculo longisimus dorsi entre 6th y la 7th vértebra lumbar
para medir L* (luminosidad) a* (verde-rojo) b* (azul-amarillo) H* (tono métrico) y C*(croma) para lo cual
se utilizó un equipo Minolta Croma meter CR-400 (Minolta Co., Ltd., Japón). Se usó un diseño
completamente al azar (Steel et al., 1997). Se realizó un análisis de varianza realizando el procedimiento
GLM del SAS (2002). La comparación de medias se realizó por prueba de Tukey (P<0.05).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
En los cuadros 1 y 2 se muestran los resultados en relación al efecto de los niveles de proteína cruda y
lisina en las características de la canal y color en la carne de cerdos en finalización. No hubo efecto en
285
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
relación a las dietas ofrecidas (P>0.05) en peso vivo al sacrificio, peso de la canal caliente, peso canal
fría, longitud de la canal, perímetro de la grupa, ancho de la grupa, perímetro torácico, longitud de pierna,
longitud interna de la costilla y perímetro de la pierna. (Flores et al 2009) comparo el peso al sacrificio
sobre las características de la canal obteniendo un peso de la canal de 68.6 kg de animales que fueron
sacrificados de 95 kg. Estos datos son similares a los obtenidos en el presente trabajo. Con respecto al
grosor de la grasa dorsal se observó que las dietas que consumieron los cerdos que contenían niveles
bajos de proteína cruda incremento (P<0.05) el crecimiento de grasa dorsal. (Zhang et al 2008) midió las
características de la canal en cerdos alimentados con dietas bajas en lisina encontrando mayor
deposición de grasa dorsal estos resultados son similares a los T3-T5. Con relación al color en la carne
de cerdo alimentados con los tratamientos antes mencionados (T1-T5) no mostraron efecto (P>0.05) los
diferentes niveles de proteína cruda y lisina en el musculo longisimus dorsi de los animales en
tratamiento. (Pospissil et al 2013) realizo un estudio con una línea genética seleccionada por mayor
ganancia de peso y marmoleo en la carne y encontró datos menores en L*, a*, b* comparado a los
resultados obtenidos en el presente trabajo. La diferencia puede ser debido a la genética utilizada en
ambos trabajos.
CONCLUSIÓNCerdos alimentados con dietas bajas en proteína incrementa el grosor de la grasa dorsal sin afectar las
características morfometricas de la canal. Con respecto al color cerdos alimentados con dietas bajas en
proteína y diferentes niveles de lisina no afecta el color de la carne
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
Buenabad, C.L. Castillo, L.G.; Arce, V.N.; Cota, M.M; Araiza, P.B.A.; Morales, T.A.; Cervantes, R.M.
Dietas bajas en proteína adicionadas con aminoácidos libres: comportamiento y expresión de
transportadores de aminoácidos en cerdos. 2014,Tropical and Subtropical Agroecosystems.17. 271-275.
Flores,R.C., R.M.Leal, G.A.Rodas, M.J.Aranguren, B.R.Roman, R.J.Ruiz. 2009. Efecto de la condición
sexual y pesos al sacrificio sobre las características de la canal y la calidad de la carne de cerdo.RCFCV.
19:165-172.
Pospissil G.C.A., S.R.Vicente. C.V.Souza. P.M.E.S. Gomes. Z. M.Gilberto. H.Silveira. K.T.Hiroshi.
C.L.G.Santos. 20013. Ractopamine levels on performance, carcass characteristicsand quality ofpig meat.
Revista Brasileira de Zootecnia. 42: 325-333.
Steel, R.G.D., and J.H. Torrie. 1997. Principles and procedures of statistics: A biometrical approach. 3rd
ed. McGraw-Hill, New York.
Zhang, J.Y.J., X.Z. Fengna Li, J.N.Bing Dong., 2008. Effects of lower dietary lysine and energy contento
n carcassvcharacteristics and meat quality in growing-finishing pigs. Asian-aust.J.Anim.Sci.21:1785-1793.
Tabla 1. Características de la canal en cerdos alimentados con dietas bajas en proteína adicionadas
con diferentes niveles de lisina.
Valor P
Tratamientos
T1
T2
T3
T4
T5
EEM1
Peso vivo sacrificio
98.96
92.25
102.60
100.01
95.98
3.70
0.3613
Peso canal caliente
69.60
61.58
72.50
70.50
66.40
2.88
0.1041
Peso canal fría
66.72
58.47
66.68
68.41
63.97
2.92
0.1668
Perímetro grupa
102.07
99.24
102.83
100.83
100.83
1.63
0.5992
Ancho grupa
30.76
32.09
33.00
29.66
32.33
1.61
0.6068
Perímetro torácico
102.32
96.49
101.00
101.33
99.16
2.29
0.4248
Longitud pierna
45.52
43.19
46.33
46.00
45.00
2.21
0.8709
Longitud Canal
84.78
90.62
93.83
88.16
91.33
6.98
0.9133
Perímetro Pierna
71.84
67.17
70.66
69.66
69.66
1.18
0.1126
Grasa Dorsal(mm)
7.80b
6.25b
10.77a
11.42a
10.25a
0.52
<.0001
1 Error Estándar Medio
286
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Tabla 2. Color de la carne de cerdos
diferentes niveles de lisina.
Color
T1
T2
L*
53.57
56.65
a*
8.33
7.08
b*
9.61
12.34
C*
11.05
13.33
o
H
50.61
59.83
1Error
alimentados con dietas bajas en proteína adicionadas con
T3
56.47
7.93
10.55
11.86
51.96
T4
50.90
8.06
9.95
12.65
52.88
T5
54.25
9.39
10.62
12.48
50.74
EEM1
1.63
1.27
0.66
0.73
2.48
Valor P
0.1171
0.7920
0.1074
0.3220
0.0939
Estándar Medio
AGRADECIMIENTOS.
Al laboratorio Lapisa por el financiamiento parcial a este proyecto.
287
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Nutrición animal
INFLUENCIA DEL CROMO QUELADO COMO ADITIVO ALIMENTICIO EN DIETAS DE CRECIMIENTO
FINALIZACIÓN PARA GANADO DE ENGORDA.
INFLUENCE OF CHELATED CHROMIUM AS A FOOD ADDITIVE IN GROWING–FINISHING DIETS
FOR FEEDLOT CATTLE.
Sánchez MB1*, Camargo GMA2, Plascencia JA2, Ware AR2 y Zinn AR4
CENID FyMA-INIFAP1; UABC, Mexicali, BC, Mexico2; Varied Industries Corporation, Mason City, IA3;
University of California, Davis, CA, USA4
[email protected]
INTRODUCCIÓN.
En la industria ganadera es necesario aumentar la eficiencia de ganancia, en particular durante la fase de
finalización, cuando el costo de ganancia es más alto, por lo cual, el uso de aditivos es necesario, sin
embargo algunos restringen la comercialización de los productos, aunque el uso de dichos aditivos se ha
verificado, por lo tanto se ha realizado un esfuerzo para promover el uso de alternativas más "orgánicas",
entre éstas, los minerales quelados y levaduras han mostrado buenos resultados (Pallauf y Müller, 2006).
El Cromo (Cr) es un nutriente esencial en la alimentación animal que potencia la unión de la insulina a los
receptores. El cromo inorgánico se absorbe pobremente en animales y humanos (0,4 hasta 3%). Sin
embargo, la absorción de suplementos de Cr mejora cuando este es quelado, y se ha observado que con
su uso en la recepción de becerros reduce el cortisol plasmático, mejorando la ganancia de peso,
eficiencia alimenticia, respuesta inmune, y reduce la morbilidad en comparación con los animales no
suplementados. De igual forma la suplementación de cromo quelado tuvo efectos moduladores sobre la
composición de la ganancia de peso en rumiantes en finalización (Estrada-Angulo et al., 2013).
OBJETIVO.
Determinar el nivel de Cr adicionado a dietas altas en energía que posea efectos moduladores de
crecimiento, utilizando como referencia, el impacto sobre el desempeño productivo y la retención de
energía consumida.
MATERIALES Y METODOS.
El experimento se realizó en el Desert Research Center of the University of California Davis, localizado en
Imperial Valley, California (32° 47’ 31” N y 115° 33’ 47”W) durante el periodo de abril a Octubre. Se
utilizaron cuarenta novillos cruzados (245 ± 0.95 kg) alimentados durante 222 días con una dieta a base
maíz hojuelado (Cuadro 1) adicionada con 0 o 0.4 g/kg de cromo enriquecido con una levadura
hidrolizada enzimáticamente (Cr-EHY 0.3 g/kg de TruMax plus 0.1 g/kg de Cr quelado) sobre el
crecimiento, retención de energía de la dieta, a partir del peso vivo mermado (PV * 0.96) y el promedio de
ganancia diaria de peso (GDP, kg) observado durante la prueba utilizando al corral como unidad
experimental y la formula cuadrática: x = (-b±(b2- 4ac)0.5)/2c, donde x = NEm, a = -0.41EM, b = 0.877 EM +
0.41 CMS + EG, and c = - 0.877 CMS, donde EM = 0.077W 0.75, CMS= consumo de materia seca
observado (kg/d), EG =ADG1.097 × 0.0557W 0.75 (NRC 1984). La NEg fue derivada de NEm por la ecuación:
NEg = 0.877 NEm – 0.41 (Zinn et al. 2008) y las características de la canal. Todos los novillos fueron
sacrificados el mismo día en un rastro tipo inspección federal y se tomó el peso de la canal caliente
(PCC). Después de 48 h de enfriamiento se realizaron las siguientes mediciones: 1) área del musculo
longissimus (LM); 2) grasa subcutánea; 3) grasa pélvica, renal y cardíaca (PRC) y 4) grado de
marmoleo (USDA 1997), se estimó el índice de temperatura y humedad “THI” (Hahn 1999). El
crecimiento (ganancia, eficiencia de ganancia, y retención de energía) y los datos de la canal fueron
analizados como un diseño de bloques completos al azar. La unidad experimental fue el corral. Se utilizó
el procedimiento MIXED de SAS (SAS Institute 2004) para todas las variables. Los efectos fijos fueron los
tratamientos y el corral el componente aleatorio. Los contrastes fueron considerados significativos cuando
el valor de P fue ≤0.05, y tendencias cuando el valor de P fue > 0.05 y ≤ 0.10.
288
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
VIII
Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Salud
animal, diagnóstico, control y epidemiología
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
El THI máximo fue de 72 en el día 213 de 222 días de estudio (el THI promedio = 75.24). En el Cuadro 2
se observa que durante los primeros 112 días, Cr-EHY incrementó la ganancia diaria (GDP) (7%, P =
0.03). Este efecto fue debido a la tendencia (P = 0.07) en el incremento del consumo de materia seca. No
se observó efecto (P≥0.70) de tratamiento en la eficiencia de ganancia y energía neta (NE). Ponce et al.
(2012) observaron efectos positivos al suplementar 14g/d de Cr-EHY en la recepción, ellos atribuyen el
efecto a la respuesta de la mircroflora ruminal y a una mejora del epitelio intestinal. Bernhard et al. (2012)
observaron un incremento lineal en la GDP y eficiencia de ganancia en respuesta a la suplementación
con 0.1, 0.2 o 0.3 mg Cr/ kg de alimento. Consistente con el presente estudio, Swanson et al. (2000) no
observaron efectos al suplementar Cr-EHY en la GDP, al igual que en la eficiencia de ganancia en
novillos alimentados con ensilaje de maíz. Así mismo en el Cuadro 3 podemos observar que no existieron
efectos (P≥0.11) en el peso de la canal, grado de marmoleo, PRC, sin embargo la suplementación con
Cr-EHY tendió a disminuir el espesor de la grasa en la canal (10%, P = 0.09), e incremento el área del
musculo longissimus (7%, P < 0.01) y el porcentaje de rendimiento al deshuese de los cortes primarios
(2%, P = 0.07).
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES.
La suplementación con Cr-EHY puede tener efectos benéficos en el consumo y la ganancia diaria de
peso particularmente durante la recepción y fase de crecimiento. De igual forma parece tener un efecto
modulador en las características de la canal, mejorando la musculatura y reduciendo la grasa externa.
Por lo tanto la suplementación con Cr tiene un efecto sobre la calidad de la canal y puede mejorar el CMS
con respecto a la GDP en el ganado de engorda durante los periodos de altas temperaturas ambientales.
Cuadro1. Formulación de las dietas experimentales
Fase
1
(días en engorda)
28-d
Ingrediente (% MS)
Maíz hojueleado
36.72
DDGS
20.00
Alfalfa, heno
20.00
Sudan, heno
12.00
Sebo
2.00
Melaza
8.00
2
7-d
3
7-d
4
Ultimos180-d
46.05
20.00
10.00
12.00
2.00
8.00
52.66
20.00
5.00
12.00
2.00
6.00
58.15
20.00
00.00
12.00
2.30
5.00
Urea
0.45
0.65
0.75
0.85
Minerales
0.73
1.20
1.49
1.60
Oxido de magnesio
0.10
0.10
0.10
0.10
EN de mantenimiento, Mcal/kg
1.97
2.06
2.12
2.18
EN de ganancia, Mcal/kg
1.32
1.40
1.46
1.52
Proteína Cruda, %
16.12
15.57
15.37
15.11
FDN, %
23.68
20.59
19.22
17.75
Extracto Etéreo, %
6.19
6.31
6.45
6.83
Calcio, %
0.79
0.81
0.82
0.78
Fosforo, %
0.48
0.49
0.50
0.50
Composición de Nutrientes (MS)
289
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro 2. Efecto de Cr-EHY sobre comportamiento productivo en novillos en etapa de finalización
Nivel de Cr-EHYa, g/cabeza/d
0
3(500 ppb)
EEM
P valor
Peso I
243.7
245.9
0.47
0.97
112 d
428.9
444.5
1.95
0.02
Final
559.9
576.4
12.61
0.42
GDP, kg/d
1-112 d
1.65
1.77
0.02
0.03
112-222 d
1.19
1.2
0.10
0.96
1-222 d
1.42
1.49
0.06
0.49
CMS, kg/d
1-112 d
8
8.5
0.13
0.07
112-222 d
8.4
8.54
0.20
0.65
1-222 d
8.2
8.52
0.13
0.17
GDP/CMS(kg/kg)
1-112 d
0.207
0.209
0.003
0.70
112-222 d
0.142
0.14
0.009
0.91
1-222 d
0.174
0.175
0.004
0.88
Alimento NE, Mcal/Kg
1-112 d NEm
2.04
2.04
0.02
0.97
1-112 d NEg
1.38
1.38
0.02
0.97
112-222 d NEm
2.16
2.18
0.06
0.84
112-222 d NEg
1.48
1.5
0.06
0.84
1-222 d NEm
2.09
2.1
0.03
0.91
1-222 d NEg
1.42
1.43
0.03
0.91
a TruMax-Cr, Vi-COR, Mason City, Iowa.
Cuadro 3. Efecto de Cr-EHY 500 ppb sobre las características de la canal.
Cr-EHY, g/cabeza/d
0
3 (500 ppb)
Peso de la canal, kg
369.5
375.7
Porcentaje de rendimiento, %
65.6
65.2
PRC, %
2.55
2.69
Cobertura de la grasa dorsal, cm
1.4
1.26
Área del ojo de la costilla, cm 2
78.2
83.9
Grado de marmoleo
5.21
5.49
Rendimiento al corte, %
48.4
49.2
EEM
6.38
0.60
0.04
0.04
0.68
0.43
0.20
P valor
0.54
0.45
0.11
0.09
<0.01
0.69
0.07
BIBLIOGRAFIA.
1. Hahn GL. 1999. Dynamic responses of cattle to thermal heat loads. J. Dairy Sci. 82 (Suppl.2): 10–20.
2. Pallauf J, Muller AS. 2006. Inorganic feed additives. In: Mosenthin R, Zentek J, Zebrowska T, editors.
Biology of Nutrition in Growing Animals. Vol. 4. Elsevier. Philadelphia, PA.
3. USDA. 1997. Official United States standars for grades of carcass beef. United States Department of
Agriculture.
4. Ponce CH, Schutz JS, Elrod CC, Anele UY, Galyean ML. 2012. Effects of dietary supplementation of a
yeast product on performance and morbidity of newly received beef heifers. Prof. Anim. Sci. 28:618-622.
5. Zinn RA, Barreras A, Owens FN, Plascencia A. 2008. Performance by feedlot steers and heifers: ADG,
mature weight, DMI and dietary energetics. J. Anim. Sci. 86:1-10.
290
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
EFECTOS DE LA SUPLEMENTACIÓN DE CROMO METIONINA SOBRE LAS CARACTERÍSTICAS DE
LA CANAL EN BORREGOS.
EFFECTS OF CHROMIUM METHIONINE SUPPLEMENTATION ON THE CARCASS
CHARACTERISTICS IN LAMBS.
Sánchez MB1*, Aguilar HA2, López SMA2, Barreras SA2, Estrada AA3, Monge NFJ2, Torrentera NG2
Plascencia JA2, Zinn AR4
CENID FyMA-INIFAP1; UABC, Mexicali, BC, Mexico2; UAS Culiacán, México3, University of California,
Davis, CA, USA4
[email protected]
INTRODUCCIÓN
Una de las metas principales en la industria ganadera es incrementar la eficiencia en las fases finales de
la engorda. Por lo cual el uso de moduladores de crecimiento (Hormonas y agentes beta-agonistas) se
hace indispensable. La preocupación sobre el potencial de impacto por el uso de estos promotores de
crecimiento ha sido de gran interés, en cuanto a la búsqueda de alternativas seguras que modulen el
crecimiento, en este sentido el uso de minerales quelados ha mostrado avances interesantes en especies
no rumiantes. Es así que la suplementación con Cromo (Cr); como Cr propionato o Cr metionina, ha
mostrado un incremento en el porcentaje de rendimiento muscular y una disminución en el porcentaje de
grasa de la canal en cerdos y aves. En rumiantes los requerimientos de Cr no han sido claramente
establecidos ya sea como mineral o suplemento y la información disponible es limitada.
OBJETIVO
Evaluar los efectos de la suplementación de diferentes niveles de cromo metionina, en dietas de
finalización sobre las características de la canal y composición del musculo longissimus (LM).
MATERIAL Y METODOS
Se utilizaron veinticuatro borregos machos Pelibuey x Dorper (24.94 ± 0.94 kg) los cuales fueron
asignados en corrales colectivos de 16m 2 con bebederos automáticos y comederos en línea de 1.2m
(seis borregos por tratamiento). Se utilizó una dieta de finalización formulada con lo siguiente (MS):
61.2% maíz molido, 14.5% harina de soya, 12.6% heno de sudan, 7.7% melaza de caña, 2.5% de
premezcla mineral y 1.5% de zeolita. La composición calculada de la dieta basal en base seca fue la
siguiente: Proteína cruda, 17 g/kg; energía metabolizable, 12.09 MJ/kg; extracto etéreo, 29 g/kg; calcio,
98 g/kg; y fosforo 36 g/kg. Los borregos fueron adaptados a las instalaciones y dieta basal durante 14
días antes del inicio del experimento. Los tratamientos fueron: 1) 0.00 mg Cr/Cabeza/día, 2) 0.60 mg
Cr/Cabeza/día, 3) 1.20 mg Cr/Cabeza/día, and 4) 1.80 mg Cr/Cabeza/día. La fuente de Cr fue Cr
metionina (Microplex, Zinpro Corp., USA). El alimento fresco fue provisto dos veces al día a las 08:00 y
14:00 horas en una proporción 40:60 durante 56 días. Las dosis de Cr fueron pesadas usando una
balanza de precisión (Modelo AS612, Ohaus, USA). Para asegurar el consumo total de Cr, se les
administro diariamente, por la mañana, la dosis por animal, mezclada con 30g de salvado de trigo en
comederos individuales. Para determinar las características de la canal y composición química del ML
iniciales, se sacrificaron cuatro borregos representativos al inicio del experimento. Los borregos fueron
pesados de manera individual en la mañana (07:00 h) antes del sacrificio. Se tomó el peso de la canal
(PCC) de todos los borregos al momento del sacrificio. Después de que las canales fueron enfriadas
(rango de -2 a 2°C) durante 48-h las siguientes mediciones fueron registradas: 1) Longitud de la canal; 2)
profundidad del tórax; 3) longitud de la pierna; 4) espesor de la grasa dorsal; 5) área del LM; 6) grasa
pélvica renal; 7) perímetro del tórax y 8) circunferencia de la pierna. Estimación del grado de USDA
(1982). Para las evaluaciones en la concentración de proteína muscular y grasa, se tomaron muestras del
LM (12ª costilla) de cada canal. Las muestras de LM fueron sometidas a los siguientes análisis acorde
con los procedimientos de la AOAC (2000): materia seca (método 930.15), nitrógeno Kjeldahl (método
291
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
984.13), y extracto etéreo (método 920.39). El experimento fue analizado utilizando los procedimientos
MIXED de SAS para un diseño completamente al azar. Los tratamientos fueron considerados como
efectos fijos y el animal como efecto aleatorio. Los efectos de los tratamientos fueron probados de forma
lineal cuadrática y cubica. Las comparaciones se consideraron significativas cuando el valor de P ≤ 0.05
y como tendencia cuando el valor de P >0.05 y ≤0.10.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los efectos de los tratamientos en el crecimiento características de la canal y composición química del
LM se muestran en el cuadro. El promedio de la composición química del LM en los cuatro borregos
sacrificados al inicio del experimento fue 22.71 ± 0.98% y 1.46 ± 0.15% para proteína y grasa,
respectivamente. Esto concuerda con reportes previos en los cuales sacrificaron borregos con pesos
ligeros. Después de 56 días de engorda, el grupo control incremento en 11.9% la grasa en el LM. La
deposición de grasa está altamente correlacionada con la densidad energética de la dieta, el nivel de
consumo, y los días de alimentación. No se observaron efectos de los tratamientos para las variables de
peso de la canal caliente, rendimiento de la canal y medidas en la morfología de la canal. Lo cual
concuerda con lo reportado por, Estrada-Angulo et al, 2013. Sin embargo, en ese mismo estudio ellos
reportan un efecto positivo de la suplementación con Cr en el promedio de ganancia diaria, eficiencia
alimenticia en borregos alimentados con una dieta a base de maíz. Contrario con lo observado en el
presente estudio, donde no se observaron efectos de tratamiento en el consumo de materia seca,
ganancia de peso, eficiencia alimenticia y peso final, que promediaron 35.24 ± 1.01 kg. La
suplementación con Cr tendió a disminuir (lineal, P = 0.09) la grasa pélvica renal, además disminuyo
linealmente el espesor de la grasa dorsal (P = 0.01) lo suficiente para mejorar el grado de rendimiento de
1.82 a 1.42 sin tener efecto sobre las demás variables medidas. La concentración de grasa en el LM
disminuyo de forma lineal (P < 0.01) cuando el nivel de Cr se incrementó, pero la concentración de
proteína se mantuvo constante (P ≥ 0.41) y la relación grasa proteína, en el LM incremento (P < 0.01). El
cromo aparentemente potencia la acción de la insulina mediante la mejora de su unión a los receptores
de las células diana, lo que contribuye a un mayor crecimiento de tejido magro. Sin embargo en el caso
de los rumiantes existe más resistencia a la insulina que los no rumiantes, lo cual podría explicar la
ausencia de los efectos en el crecimiento y en la canal de algunos estudios.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
La suplementación de Cr metionina tiene un efecto modulador sobre la grasa de la canal y la respuesta
máxima a la suplementación fue con la dosis de 1.80 mg Cr/cabeza.
292
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
Cuadro. Efecto de los tratamientos sobre las características y composición de la canal
P valor
Cr-metionina (mg/cabeza/día)
EEM
Lineal
Cuadráti
co
Cubico
24.54
2. 04
0.86
0.92
0.92
0.799
0.846
0.040
0.76
0.42
0.86
4.78
4.61
4.61
0.45
0.75
0.99
0.87
35.40
35.03
35.18
35.36
2.21
0.99
0.91
0.96
Peso de la Canal (kg)
19.85
19.61
20.21
20.03
1.49
0.87
0.98
0.81
Porcentaje de rendimiento
56.01
56.04
57.41
56.68
0.47
0.13
0.43
0.13
Peso de la canal fría (kg)
19.63
19.31
19.84
19.71
1.42
0.86
0.98
0.81
Longitud de la canal (cm)
56.50
56.00
55.50
55.50
1.98
0.70
0.91
0.95
Longitud de pierna (cm)
25.40
24.60
23.50
23.80
1.20
0.28
0.65
0.76
Circunferencia de la pierna
(cm)
41.10
41.30
41.60
42.60
0.78
0.19
0.61
0.86
Perímetro de tórax (cm)
64.40
65.80
65.20
65.40
2.03
0.79
0.77
0.76
Profundidad de tórax (cm)
32.40
32.20
32.20
31.70
1.30
0.72
0.91
0.91
13.73
13.74
14.43
13.92
0.34
0.43
0.46
0.24
Espesor de la grasa (cm)
0.36
0.30
0.26
0.26
0.02
0.01
0.18
0.84
Grasa pélvica renal (%)
3.01
2.86
2.86
2.42
0.22
0.09
0.66
0.56
Grado de rendimiento*
1.82
1.58
1.42
1.42
0.08
<0.01
0.18
0.83
Proteína
21.13
21.34
21.22
20.85
0.34
0.54
0.41
0.96
Grasa
11.92
11.45
9.35
9.93
0.43
0.01
0.25
0.04
Proteína/grasa
1.78
1.89
2.27
2.10
0.08
<0.01
0.11
0.03
0.00
0.60
1.20
1.80
5
5
5
5
Peso Inicial (kg)
25.10
24.97
25.09
Consumo de MS(kg)
0.825
0.805
Eficiencia
4.77
Peso al sacrificio (kg)
Replicas
Área LM
(cm2)
LM composición (%)
*Grado de rendimiento= (espesor de la grasa × 10) + 0.4 (USDA), donde 1 = más deseable (mínima
proporción de grasa y más proporción muscular); 5 = menos deseable (mayor proporción de grasa y poco
musculo).
293
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
INFLUENCIA DE LA MACERACIÓN MECÁNICA DE LA PAJA DE TRIGO SOBRE LAS
CARACTERÍSTICAS DE DIGESTIÓN EN DIETAS DE FINALIZACIÓN PARA BOVINOS.
INFLUENCE OF MECHANICAL MACERATION ON WHEAT STRAW ON CHARACTERISTICS OF
DIGESTION IN FINISHING DIETS FOR FEEDLOT CATTLE.
Serrano PJG1, Sánchez MB2*, Alvarez EG1, Aguirre OJ3, González VVM1, Lemus FC3, López SMA1,
Mendoza MGD4, Plascencia JA1, Stuart JR5, Zinn RA6
UABC, Mexicali, BC1; CENID FyMA-INIFAP2; UAN, Tepic, Nayarit3; UAM-X, DF4; ICA, Habana, Cuba5;
UC, DAVIS, CA, USA6
[email protected]
INTRODUCCIÓN
El proceso de maceración está diseñado para simular el proceso de masticación. El mecanismo
comprende dos juegos de rodillos corrugados opuestos, presionados entre sí con fuerza hidráulica,
girando a diferentes velocidades que aplastan y desgarran la fibra produciendo cambios en la integridad
estructural y de la densidad de la fracción fibrosa del forraje para permitir un mayor acceso de las
enzimas fibrolíticas y una mayor tasa de pasaje ruminal. Estos cambios han resultado en la mejora del
valor nutrimental de la paja de arroz que ha sido incluida en dietas para ganado en crecimiento y
finalización, vacas secas y en producción. Sin embargo, no existen informes del efecto de la maceración
sobre otras fuentes de pajas. El uso de paja está limitado en las dietas de crecimiento-finalización como
resultado de su pobre valor nutrimental y de sus efectos asociativos negativos cuando son utilizadas en la
formulación.
OBJETIVO
El objetivo de este experimento fue evaluar el efecto de la maceración de la paja de trigo sobre las
características de digestión en novillos alimentados con una dieta de crecimiento y finalización con 21%
de forraje.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron cuatro novillos Holstein (142 ± 3 kg) habilitados con cánulas en rumen y en duodeno
proximal en un diseño de cuadrado Latino 4 x 4 con el fin de evaluar el proceso de macerado de la paja
de trigo sobre las características de digestión y función ruminal. Las dieta basal (DB) formulada (BMS) en
base a maíz amarillo hojueleado, complementada con 21% de alguno de los siguientes forrajes: 1) heno
de sudán molido (HS), 2) paja de trigo (MOL), 3) paja de trigo macerada a 600 psi (MAC600) y 4) paja de
trigo macerada a 900 psi (MAC900). La preparación del macerado se realizó pasando la paja,
previamente humectada mediante la adición 10% de agua (v/p), por una sola ocasión a través de los
rodillos corrugados (46 x 61 cm). Todos los forrajes fueron molidos en malla de 3.81 cm. Se añadió
0.40% de óxido crómico como marcador inerte para cálculo del flujo a duodeno y de excreción fecal de
materia seca (MS). El consumo (BMS) se ajustó al 2.2% del peso vivo, ofreciéndose en forma diaria en
dos porciones iguales a las 0800 y 2000 h. El experimento consistió en cuatro períodos experimentales
de 14 días (10 para adaptación a la dieta y 4 para colección de muestras). Durante el periodo de
colección de muestras, las muestras duodenales (700 mL/d) y fecales (200 g base fresca) se tomaron a
cada novillo dos veces al día en los siguientes horarios: día 1) 1200 y 1800 h; día 2) 1050 y 1450 h; día 3)
0900 y 1500 h; día 4) 0750 y 1350 h. Las muestras de cada novillo, en cada periodo de colección, se
mezclaron con el propósito de formar una muestra compuesta misma que se congeló a -20° C para
análisis posteriores. El último día, del último periodo experimental se tomó una alícuota de líquido ruminal
para aislamiento de bacterias ruminales por centrifugación diferencial. A las 4 h posconsumo (1200 h), en
el último día de cada periodo, se determinó el pH (Orion 261S, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) del
contenido ruminal de una muestra obtenida (± 500 mL) de cada novillo mediante el uso de una bomba de
vacío (Cole Parmer Instrument, Vernon Hill, IL). Las muestras generadas se sujetaron a todos, o parte de
294
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
los siguientes análisis: Materia seca (MS; estufa desecando a 105°C, hasta peso constante), cenizas, N
Kjeldahl y nitrógeno amoniacal de acuerdo con lo estipulado por la AOAC (1984), energía bruta (EB)
(utilizando una bomba calorimétrica 33 adiabática modelo 1271; Parr Instrument Co., Moline, IL), purinas
(Zinn y Owens, 1986), óxido crómico (Hill y Anderson, 1958), almidón (Zinn, 1990) y fibra detergente
neutra (FDN) (Goering y Van Soest, 1970; corregida para cenizas insolubles). La cantidad de materia
orgánica microbiana (MOM), así como el nitrógeno microbiano (NM) que fluye a duodeno se calculó con
base en los análisis de las bacterias aisladas en el fluido ruminal así como en las muestras obtenidas de
duodeno, usando purinas como marcadores microbianos (Zinn y Owens, 1986). La materia orgánica
fermentada (MOF) en rumen será calculada de acuerdo a la cantidad de MO consumida y las
proporciones de MO microbiano y MO total determinadas en duodeno (Plascencia et al., 1999). El N
consumido que escapa de la digestión ruminal (proteína de escape) se consideró como el equivalente al
total de N que ingresa al duodeno menos la suma de las cantidades de N amoniacal y N microbiano que
fluyen al duodeno. Los datos fueron analizados como un diseño de cuadrado Latino 4x4 de acuerdo al
siguiente modelo: Yijkl= μ + Bi + Aj (i) + Pk + ζl + Eijkl en el cual, Bi representa el bloque, Aj (i) es el
novillo dentro del bloque, Pk es el periodo, ζl el tratamiento y Eijkl es el error residual. Los efectos de los
tratamientos se contrastaron de la siguiente manera: 1) HS vs. MOL, 2) HS vs. MAC, 3) MOL vs. MAC y
4) MAC600 vs. MAC900. Se consideró diferencia significativa cuando P≤0.05.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El contenido de PC del heno de sudán fue de 7.8%, mientras que la paja de trigo fue de 2.4%. La
maceración de la paja de arroz se reflejó en una ligera reducción del contenido de nitrógeno (14%) sin
cambios en el contenido de la FDN, FDA o cenizas. Agbossamey et al., (2000). Observaron una
disminución en la composición de la fracción nitrogenada y un aumento en la fracción fibrosa después de
que el material fue sometido al proceso de maceración. Como resultado de la distinta composición
química entre el heno de sudan (HS) y la paja molida (MOL), el consumo de FDN fue menor (7.6%,
P<0.01) y el consumo de N fue mayor (7.6%, P<0.01) para HS. No existió diferencia (P≥0.39) en la
digestión ruminal de MO, o del almidón entre HS y MOL. Aun y cuando se observó un mayor (14%,
P=0.11) digestión ruminal para la FDN en los tratamientos HS, este no fue significativo. La digestión
ruminal del N alimenticio fue menor (19.1%, P=0.01) para HS, sin embargo, no existió diferencia (P≥ 0.08)
en el flujo a duodeno de NM, eficiencia microbiana o eficiencia de N. No existió diferencia (P> 0.08) en la
tasa de digestión posruminal de las fracciones evaluadas, sin embargo, la tasa de digestión posruminal
de FDN tendió a ser menor (P=0.07) para MOL comparado con SH. El efecto “compensatorio” en la
digestión posruminal de la FDN es común observarse cuando se valoran forrajes de distinta composición
fisicoquímica. López-Soto et al. (2006) observaron el mismo efecto compensatorio en la digestión de la
FDN (17.3 vs. 9.5%, para heno de sudan y paja de arroz respectivamente) cuando compararon paja de
arroz molida contra heno de sudan en dietas que contuvieron 40% de forraje. Tal como se esperaba, la
digestión en tracto total de la MO (2.7%), FDN (23.9%) y ED (3.4%) fue mayor (P≤0.01) para HS
comparado con MOL. De igual manera la digestión de N tendió (P=0.06) a ser mayor (4.2%) apara HS.
Los consumos de MO, N, FDN, almidón y EB fueron muy similares (P>0.79) entre los tratamientos MOL y
MAC. No hubo diferencia (P>0.20) en la digestión ruminal de MO, N, FDN, NM o eficiencia de N entre
MOL y MAC. La tasa de pasaje está supeditada, en gran medida, al potencial de hidratación de la fibra y
al tamaño de la partícula. Posiblemente este efecto pueda estar supeditado al nivel de inclusión de la
paja. La maceración de la paja incrementó notablemente (P≤0.04) la digestión posruminal y de tracto total
de la MO (8.6 y 3.8%), FDN (76 y 27.9%) y del N (5.1 y 5.2%), así como la ED (P < 0.01, 4.5%) de la
dieta. Considerando el contenido de ED del HS en 2.46 Mcal/kg (NRC, 1996) la maceración incrementó
28% la ED de la paja de trigo (1.91 y 2.65 Mcal/kg para MOL y MAC, respectivamente). Lo anterior
corrobora que la respuesta al macerado es mayor para la paja de trigo comparada con la paja de arroz y
fortalece la hipótesis de que los forrajes de baja calidad respondan de manera distinta al proceso de
macerado. Es recomendable realizar más estudios para seguir evaluando las respuestas al macerado de
distintas fuentes y calidades de forraje.
CONCLUSIONES E IMPLICACIONES
La maceración mejora el valor de energía digestible de la paja de trigo hasta un nivel similar al del heno
de sudan. Lo anterior, por una mejor tasa de digestión y paso de las fracciones de FDN lo que resulta en
una mayor digestión de MO en tracto total. El incrementar la intensidad de procesado, de 600 a 900 psi,
no representó ventajas sobre las variables evaluadas.
295
LI RNIP. Toluca de Lerdo, Edo. de Méx.
Sección: Salud animal, diagnóstico, control y epidemiología
Reunión Nacional de Investigación Pecuaria Memoria. Año 1. Núm.1. Vol. 1. Nov. 2015.
RESPUESTA PRODUCTIVA Y EFICIENCIA EN LA SINTESIS DE PROTEINA MICROBIANA EN EL
RUMEN EN VACAS LECHERAS A PASTOREO ROTACIONAL Y SUPLEMENTADAS CON ENSILAJE
DE MAIZ.
EFFECT OF INCREASING OF PASTURE ALLOWANCE AND MAIZE SILAGE ON ANIMAL
PERFORMANCE AND THE EFFICIENCY OF THE MICROBIAL PROTEIN SYNTHESIS IN THE RUMEN
OF DAIRY COWS.
Ruiz-Albarrán M1*, Wittwer F2, Noro M3, Balocchi OA4, Pulido RG1
1Instituto
UACh.
de Ciencia Animal, Universidad Austral de Chile, 2Instituto de Ciencias Clínicas Veterinarias,
Federal do Pampa, Uruguaiana-RS, Bras, 4Inst. Prod.Animal, Universidad Austral,
Valdivia, Chile. DID-UACH, *Fondecyt 1100513.
3Universidade
[email protected]
INTRODUCCIÓN
La mayor productividad en vacas lecheras se logra cuando se maximiza la eficiencia en la síntesis de
proteína microbiana (ESPM) en el rume