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Jornadas JIC 2015
Aislamiento de Bocavirus Humano 1 en cultivo celular
1
Viale FA, 1Toigo D’Angelo AP, 1Velazquez MG, 1Bracciaforte RA, 1Ghietto LM, 1Adamo MP
1- Instituto de Virología "Dr. J. M. Vanella". FCM. UNC
Área: Básica
Resumen:
INTRODUCCIÓN: El Bocavirus humano 1 (HBoV1) es un parvovirus identificado en el año 2005,
a partir de muestras nasales de niños con infección del tracto respiratorio bajo. En estudios previos
en nuestro laboratorio se demostró la replicación viral en la línea celular CACO-2 con un medio de
cultivo suplementado con DEAE-dextrán.
OBJETIVOS: Implementar la línea celular VERO clon 76 para intentar aislamiento de HBoV1 y
comparar con resultados anteriores en CACO-2.
MATERIALES Y MÉTODOS: Se utilizaron cultivos de células VERO clon 76 para aislamiento
viral. El inóculo de virus se obtuvo a partir de muestras respiratorias. Los ensayos de infección y
cultivo se realizaron en 4 series: MEM estándar a 37°C y 33°C y MEM-DEAE-Dextrán a 37°C y
33°C. Los cultivos se monitorearon por microscopía durante 6 días postinfección para registrar
aparición de efecto citopático (ECP) mediante fotografía. En cada caso se tomaron muestras de
sobrenadantes y células de la monocapa, a partir de las cuales se realizó extracción de ácidos
nucleicos y posteriormente PCR para la detección de HBoV1. Los productos se visualizaron
mediante electroforesis en geles de poliacrilamida.
RESULTADOS: no se observó ECP en ninguna de las condiciones experimentales. Los resultados
de los ensayos de PCR muestran bandas específicas en los sobrenadantes de los cultivos en las 4
series, sin embargo no se detectaron monocapas positivas en ningunas de las condiciones
estudiadas.
CONCLUSIONES: En base a los resultados, no podemos decir que hay replicación de HBoV1 en
células VERO. Si bien se observa amplificación del genoma viral de las muestras de sobrenadante
de los cultivos inoculados, no hay evidencia concreta de replicación viral en células VERO ya que
no se detecta ADN en las células de la monocapa. Este trabajo evidencia la especificidad del virus
por las células CACO-2, en las que la replicación viral se demuestra por la detección del genoma
viral tanto en los sobrenadantes como en las monocapas de los cultivos infectados en presencia de
DEAE-dextrán. Probablemente esto se relacione con la expresión de proteínas receptoras en la
superficie celular y/o factores promotores de la división celular, base para futuros estudios de la
relación virus-célula.
Palabras Clave: Bocavirus Humano, aislamiento, cultivo celular, Vero, CACO-2
Revista de la Facultad de Ciencias Médicas 2015 Supl. (1): 142-3
Jornadas JIC 2015
Human Bocavirus 1 isolation in cell culture
1
Viale FA, 1Toigo D’Angelo AP, 1Velazquez MG, 1Bracciaforte RA, 1Ghietto LM, 1Adamo MP
1- Instituto de Virología "Dr. J. M. Vanella". FCM. UNC
Abstract:
INTRODUCTION: Human Bocavirus 1 (HBoV1) is a parvovirus identified in 2005, in nasal
samples obtained from children with lower respiratory tract infection. In previous studies we
showed viral replication in Caco-2 cell line when the culture medium is supplemented with DEAEdextran.
OBJECTIVES: To test Vero cells for isolation of HBoV1 and comparison with our findings in
Caco-2.
MATERIALS AND METHODS: Cultures of Vero cells clone 76 were used for viral isolation from
purified respiratory secretions. The culture conditions included standard MEM and DEAE-dextransupplemented MEM, both at 37°C and 33°C. Cultures were monitored by microscopy every 24 h
during 6 days post-infection to register appearance of cytopathic effect (CPE) by digital imaging.
Each day samples were taken from the supernatants and cell monolayers of all four series assayed.
Nucleic acid extraction and subsequent PCR was performed for detection of HBoV1. The products
were visualized by silver stained-polyacrylamide gel electrophoresis.
RESULTS: no CPE was observed in any of the experimental conditions. The test results show
specific PCR bands in culture supernatants of the 4 series; however no positive monolayers were
detected in any of the conditions studied.
CONCLUSIONS: On the basis of these results, we cannot prove HBoV1 replication in VERO cells.
While viral genome amplification is observed in the supernatant of inoculated cultures, no concrete
evidence of viral replication (such as DNA in the cells attached to the monolayer) was detected in
Vero cultures. This study provides evidence for the specificity of HBoV1 for Caco-2 cells, in which
viral replication was demonstrated by detection of viral genome in both supernatants and
monolayers of infected cultures in the presence of DEAE-dextran. This probably relates to the
expression of receptor proteins on the cell surface and/or cell replication promoters, evidencing the
need for future studies focusing on the virus-cell relationship.
Keywords: Human Bocavirus 1, isolation, cell culture, Vero, CACO-2
Revista de la Facultad de Ciencias Médicas 2015 Supl. (1): 142-3