session ii: neuroscience
Biomedical Campus of Albacete 8-10th October 2014 Organizer Asociación de Jóvenes Investigadores de Albacete ORGANIZING COMMITTEE Clara Mª Poveda Nicanor Morales Jennifer Mayordomo José Ramón Muñoz Cristina Parrado Francisco Sancho Javier Frontiñán Alicia Flores Sara Díaz Jesús García Leticia Serrano Jesús Ferre SCIENTIFIC COMMITTEES CRIB IDINE Victoriano Balandrón García Eduardo D. Martín Montiel Joaquín Calixto García Martínez José Daniel Aroca Aguilar María del Mar Arroyo Jiménez Rafael Luján Miras CLINICAL RESEARCH UNDERGRADUATE STUDENTS Antonio Salinas Sánchez Beatriz Domingo Moreno Eva García Martínez Alicia Mohedano Moriano María Martínez Serrano Elena Caminos Benito Cover letter Dear Colleagues, For yet another edition it is my pleasure to extend a warm welcome to all participants and distinguished speakers of the 10th Conference of Young Researchers, in Albacete. It is an exciting anniversary in which we must remember how this conference has evolved over the last 11 years. It began in a modest way held in one day where a small group of PhD students belonging to the School of Medicine in Albacete gathered together to discuss science and have also some fun. But nowadays, it has become a national conference symbol that offers an outstanding scientific programme and an amusing social schedule, without forgetting the important roots in research career: the young scientists. To celebrate this 10th anniversary we have prepared another innovative programme. It includes two plenary lectures from leading international researchers such as Professor Bengt Winblad (Centre for Alzheimer at the Karolinska Institute in Stockholm) and Marta Alonso (Center for Applied Medical Research, CIMA in Pamplona), as well as additional interesting roundtables and symposia, all of them addressing current fascinating issues such as Epigenetic, Translational research and Postdoctoral seeking plan. Furthermore, we have arranged different social events to better know each other and enjoy the city that willingly received us. And why not, let people the opportunity to win prizes in different contests organized. Good luck to all participants! Once again, we wish to thank all those who supported and helped to organize the conference. Finally, we earnestly hope that you will enjoy all aspects of the meeting as much as we usually do. Undoubtedly, this 10th Conference of Young Researchers will be a memorable experience! Enjoy yourself at the meeting! Best wishes, Clara Mª Poveda Rocamora President of the Asociación de Jóvenes Investigadores de Albacete Acknowledgement We would like to extentd our gratitude to all public and private entities which have contributed financially and logistically in performing these days. Sponsors Universidad de Castilla-La Mancha Vicerrectorado de Investigación y Política Científica Vicerrectorado de Transferencia y Relaciones con Empresas Facultad de Medicina de Albacete Facultad de Medicina de Ciudad Real Facultad de Farmacia de Albacete Departamento de Ciencias Médicas Departamento de Ciencia y Tecnología Agroforestal y Genética Ayuntamiento de Albacete Centro Regional de Investigaciones Biomédicas (CRIB) Asociación de Jóvenes Investigadores de Albacete Sociedad Española de Neurociencia (SENC) Instituto de Discapacidades Neurológicas (IDINE) The Company of Biologists Contributors Diputación de Albacete Colegio Oficial de Medicos de Albacete (COMA) Fundación A.M.A 15 16 INDEX INDEX................................................................................................................................................................................ 17 PROGRAMME ............................................................................................................................................. 19 ORAL COMMUNICATIONS......................................................................................................................... 27 SESSION I: CLINICAL RESEARCH ............................................................................................................................................ 29 SESSION I: NEUROSCIENCE .................................................................................................................................................. 30 SESSION I: BIOMEDICINE .................................................................................................................................................... 33 SESSION II: BIOMEDICINE ................................................................................................................................................... 35 SESSION II: NEUROSCIENCE ............................................................................................................................................... 38 SESSION III: BIOMEDICINE .................................................................................................................................................. 41 SESSION III: NEUROSCIENCE ................................................................................................................................................ 45 POSTERS COMMUNICATIONS ................................................................................................................... 47 SESSION I: CLINICAL RESEARCH ............................................................................................................................................ 49 SESSION I: NEUROSCIENCE .................................................................................................................................................. 54 SESSION II: BIOMEDICINE ................................................................................................................................................... 57 SESSION II: CLINICAL RESEARCH ........................................................................................................................................... 62 SESSION II: NEUROSCIENCE ................................................................................................................................................. 64 SESSION II: STUDENTS ........................................................................................................................................................ 67 SESSION III: BIOMEDICINE .................................................................................................................................................. 78 SESSION III: NEUROSCIENCE ................................................................................................................................................ 82 SESSION III: CLINICAL RESEARCH .......................................................................................................................................... 83 MAP ............................................................................................................................................................. 87 DATA NETWORK CONNECTION................................................................................................................88 NOTES .........................................................................................................................................................89 17 18 PROGRAMME 19 20 21 Speakers 22 WEDNESDAY 8TH OCTOBER 2014 13:00 Inauguration of the photo exhibition: InvestigArte Museo Municipal de Albacete (Antiguo Ayuntamiento, Plza. Altozano, s/n.) 16:00 Welcome reception and registration 16:30 Session I. Predoctoral TALKS Neoplasia maligna indiferenciada de aspecto embrionario compatible con meduloblastoma. R. SARABIA OCHOA Immumocitochemical analysis of ARC/ARG 3.1 and AMPA receptor GLUR2/3 in the auditory pathway of the rat. C. M POVEDA Localization of RGS7/Gβ5 complexes and their GABAB/GIRK signalling partners in the hippocampus. A. FAJARDO-SERRANO Caffeine as Synaptic Enhancer: Role of BDNF in the Hippocampal Long-Term Potentiation. J.J. BALLESTEROS Use of personal exposimeters to study the possible relationship between exposure to radiofrequency electromagnetic fields and non-specific symptoms. M.J. DABAD MORENO Effect of transcraneal magnetic fields on parietal cortex in humans. C. CARRASCO-LOPEZ 18:15 Session I. POSTER (P1 to P8) 19:15 WORKSHOP: How to get a postdoctoral position in a minute! Coach: Amparo María Millán Ocaña Meeting Point, Benjamín Palencia Building, (University Campus of Albacete) 21:00 “Becario Solidario” meeting “Tapas” in the city center THURSDAY 9TH OCTOBER 2014 9:00 Registration 9:30 Session II. Predoctoral TALKS SLFN11 epigenetic inactivation as a predictive biomarker of platinum-based therapy in ovarian cancer. V. NOGALES Fluorescence-based detection of olive (Olea europaea L) pollen allergen forms from different cultivars using a 2-D multiplex method. A. TORMO-MOLINA ADAR1 amplification contributes in non small cell lung cancer development. C. ANADÓN GALINDO Destino de células HIPSC injertadas en zona subventricular de ratas adultas sanas. C. DE LA ROSA-PRIETO 23 Forced exercise program for the study of the central nervous system maturation in rats. A. TOVAL Neuroanatomical changes in the limbic system in Parkinson’s disease. A. FLORESCUADRADO 11:00 Opening ceremony 12:00 Coffee Break 12:30 INAUGURAL CONFERENCE: How to develop a creative research center for Alzheimer disease research Profesor Bengt Winblad Karolinska Institutet. Center for Alzheimer Research. Stockholm, Sweden 14:00 Lunch Restaurant Doña Lola (Santa Quiteria 23, Albacete) 16:00 Roundtable: Translational research PhD. Luis Fernando Alguacil (Moderator) CEU San Pablo University, Madrid PhD. Carmen Ayuso Health Research Institute – Jiménez Díaz Foundation (IIS-FJD), Madrid PhD. Carlos de Cabo University General Hospital of Albacete (CHUA), Albacete PhD. Juan Luis Santiago University General Hospital of Ciudad Real (HGUCR). Ciudad Real 17:30 Session II. POSTER (P9 to P18 and S1 to S11) 18:15 SYMPOSIUM: Epigenetic, aging and cancer PhD. Mario Fraga (Moderator) «Epigenetics, aging and cancer» Spanish National Biotechnology Center (CNB-CSIC), Madrid PhD. María José Barrero «Histone variants, differentiation and cancer» Spanish National Cancer Research Centre (CNIO), Madrid PhD. Miguel Ángel Vidal «Regulación epigénetica y el sistema Polycomb» Biological Research Centre (CIB), Madrid 21:00 PERFORMATIVE LECTURE: Music & Brain: A healthy couple Guitar duo. “The Blue Olive” Ea! Teatro, (Nuestra Señora de Araceli, 1, Albacete) 22:00 OFFICIAL RECEPTION 24 FRIDAY 10TH OCTOBER 2014 09:00 Roundtable: Search a postdoctoral fellowship PhD. Ricardo Sánchez (Moderator) School of Medicine of Albacete (UCLM). Albacete PhD. Victoria González Editor in digital versions of GEO and Parenting. G+J Group. Madrid PhD. Paula Merino Karolinska Institutet. Center for Alzheimer Research. Stockholm, Sweden PhD. José Manuel Pérez Translational Research Unit (UIT), University General Hospital of Ciudad Real (HGUCR). Ciudad Real 10:30 Session III. Predoctoral TALKS Reducción del nivel del radical superoxido mitocondrial como estrategia terapeutica para el glioblastoma multiforme. J. FRONTIÑÁN RUBIO Marcadores pronósticos y predictivos de respuesta a la cirugía bariátrica. J.R. MUÑOZRODRÍGUEZ Los biobancos: diversidad de modelos, diversidad de muestras. A. ARRIAGA-ARAGÓN Células iniciadoras de tumores en cancer de colon. P. HONRUBIA-GÓMEZ El dextrano biotinado (BDA) como trazador neuroanatómico. J. MIRANDA ROSÓN Expresión de los genes causantes de distroglicanopatías en la retina de mamíferos y en la línea celular de fotorreceptores 661W. C. HARO MORENO 11:45 Session III. POSTER (P19 to P25) and Coffee Break 12:15 CLOSING CONFERENCE: Oncolytic adenovirus for the treatment of brain tumors: realities and challenges PhD. Marta Alonso Center for Applied Medical Research (CIMA). Pamplona 14:15 Closing lunch & Conference party Restaurant Salones Posada Real (Alcalde Conangla, 18, Albacete) 25 26 ORAL COMMUNICATIONS 27 28 SESSION I: CLINICAL RESEARCH NEOPLASIA MALIGNA INDIFERENCIADA DE ASPECTO EMBRIONARIO COMPATIBLE CON MEDULOBLASTOMA R. SARABIA OCHOA, N. Rojas Ferrer, R. Barbella Aponte, A. Canosa Fernández, C. Egoavil Rojas Hospital General de Albacete. Servicio de Anatomía Patológica. Albacete. España. [email protected] Resumen: Existen algunos tumores, que aunque de origen neuroectodérmico, expresan pocos o ningún marcador fenotípico de células maduras del SNC y se describen cómo lesiones mal definidas, indiferenciadas o embrionarias. El tumor más frecuente de estas características es el meduloblastoma. Puede expresar marcadores neuronales y gliales, pero a menudo el tumor es en gran medida indiferenciado. El meduloblastoma es un tumor altamente maligno del cerebelo y representa la neoplasia cerebral más común en niños entre 5-10 años. En adultos suelen ocurrir entre la tercera y cuarta década, siendo más frecuente en hombres ( 65%). Se cree que surgen por la transformación neoplásica de las células precursoras indiferenciadas presentes en la capa granular externa del cerebelo embrionario. Caso clínico: Presentamos el caso de una mujer de 39 años, sin antecedentes personales de interés, con cuadro clínico de cefalea de tipo opresiva froto-temporal bilateral, inestabilidad y vómitos de 2 semanas de evolución. En la exploración neurológica presenta nistagmo horizontal y vertical, con discreta limitación de la mirada superior del ojo derecho. El TAC craneal muestra una masa extraaxial en el ángulo pontocerebeloso derecho, ovoide de 42 mm de eje mayor, con borde interno irregular bilobulado en probable relación con infiltración del parénquima adyacente y edema perilesional. Condiciona efecto de masa sobre hemisferio cerebeloso ipsilateral y sobre la protuberancia. Se realiza exéresis parcial de la lesión. Para estudio anatomopatológico se reciben múltiples fragmentos de tejido blanquecinos amarillentos parduscos, irregulares, que en conjunto miden 3.8x3 cm. Al estudio microscópico se observa una neoplasia indiferenciada, monomorfa, muy celular que presenta un patrón de crecimiento difuso y que está compuesta por células de pequeño-mediano tamaño con núcleos hipercromáticos atípicos con frecuente amoldamiento y escaso citoplasma. No se identifican focos de células grandes, células rabdoide, rosetas, células ganglionares, calcificaciones ni focos de necrosis. En el estudio Inmunohistoquímico estas células expresan positividad para Sinaptofisina, Enolasa, INI-1, AGFA, Beta-catenina( membranosa focal, no nuclear) y PAX 5 (positividad débil y focal). Negatividad para CD99 y él índice proliferativo con Ki-67 de 15-20%. Se diagnostica cómo: Meduloblastoma variante clásica grado IV ( WHO). Discusión: Los meduloblastomas son tumores muy poco frecuentes en la población adulta y presentan algunas peculiaridades que los diferencian de los casos pediátricos como son, una localización preferentemente hemisférica (no en vermis), la ausencia de metástasis al diagnóstico y la ausencia de amplificación del MYC/MYC-N. En nuestro caso tanto el estudio morfológico como el perfil IHQ son compatibles con tumor embrionario tipo meduloblastoma, sin embrago la localización extracerebelosa es muy atípica para estos tumores, por lo que había que excluir otros tumores indiferenciados que pueden tener implantación dural. En este sentido, la negatividad para el marcador CD99 descarta razonablemente la posibilidad de un sarcoma de Ewing/PNET meníngeo. C: O1 29 SESSION I: NEUROSCIENCE IMMUMOCITOCHEMICAL ANALYSIS OF ARC/ARG 3.1 AND AMPA RECEPTOR GluR2/3 IN THE AUDITORY PATHWAY OF THE RAT C. M POVEDA 1, I. Plaza 2, M. Merchán2 and J. M. Juiz1 Universidad de Castilla-La Mancha, Facultad de Medicina-IDINE, Albacete, España. 2. Instituto de Neurociencias de Castilla y León, Universidad de Salamanca, Salamanca, España. 1. [email protected] Arc/Arg 3.1 (activity-regulated cytoskeletal protein/activity regulated gene 3.1) is an early immediate gene involved in AMPA receptors endocytosis and synaptic strength regulation. Combined experiments using patch clamp and western blot techniques has been demonstrated by deleting an endophiline 3 binding region of ARC/ARG 3.1 (which regulate synaptic clathrin activation), a decrease in GluR2/3 AMPA internalization in hipocampal cultured neurons (Rial-Verde et al., 2006). Also an interaction between the carboxiterminal tail of the AMPA GluR2 subunit with a clathrin adaptor complex was demonstrated after LTP induction, suggesting a role of this subunit in receptor endocytosis (Lee et al., 2002). In the auditory pathway it has been reported changes in Arc/Arg 3.1 expression after deafness or tinnitus, suggesting a role of this gene in plastic central responses to pathological conditions. Accordingly, an anatomical correlation of GluR2/3 and ARC/ARG 3.1 in auditory pathway neuronal types can be expected. To address this, we have studied alternative brain serial sections immunostained for ARC and GluR2/3 antibodies in adult rats, in order to look for neuronal types which contain both proteins. The animals were checked to have a normal hearing by Auditory Brainstem Response (ABR). In most auditory pathway nuclei, ARC immunostained sections shows a more defined labeling in dendrites but GluR2/3 is more evident in the neuronal bodies. Despite these differences, the main results of this study are that almost all well characterize auditory neuronal types show immunoreactivity for both antibodies. In particular in this work, most of the fast firing neuronal types, like root neurons, globular and spherical bushy cells, large stellate and Octopus neurons in the ventral cochlear nucleus (VCN) and fusiform and giant neurons in the dorsal cochlear nucleus (DCN) exhibit intense immunoreactivity for ARC and GluR2/3. Also in the superior olivary complex (SOC) all nuclei and its neuronal types, including the periolivary complex neurons were also labeled by both antibodies. Few immunoreactive neurons were seen both in the inferior colliculus (IC) and medial geniculate nucleus (MGB). Finally, lateral lemniscus nucleus shows light positive neurons in its ventral and dorsal side. The strongest immunoreaction for ARC and for GluR2/3 was observed in the auditory cortex (AC) but in layer VI immunopositive neurons was shown by ARC and not by GluR2/3 immunocytochemistry. C: O2 30 LOCALIZATION OF RGS7/Gβ5 COMPLEXES AND THEIR GABAB/GIRK SIGNALLING PARTNERS IN THE HIPPOCAMPUS A. FAJARDO-SERRANO1, K. Wickman2, K. Martemyanov3, R. Luján1 1Instituto de Investigación en Discapacidades Neurológicas (IDINE), Facultad de Medicina, Universidad de CastillaLa Mancha, Albacete, Spain 2Department of Pharmacology, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA 3Department of Neuroscience, The Scripps Research Institute, Jupiter, Florida,USA [email protected] G protein-coupled signalling is a major cellular mechanism for controlling excitability in central neurons. An integral part of G protein-coupled signalling pathway is the regulator of G-protein signalling (RGS) protein, which accelerates rates of G-protein deactivation. Among the six subfamilies of RGS proteins, the R7-RGS subfamily, formed by RGS6, 7, 9 and 11, heterodimerizes with the Gβ5 subunit of G proteins. RGS7/Gβ5 complexes selectively deactivate the Gi/o-class of G subunits that mediate the diverse actions of several GPCRs (G protein-coupled receptors), including GABAB receptors and their effectors G protein-coupled inwardly rectifying potassium (GIRK) channels. However, little information is available on the cellular and subcellular localization of RGS7 and Gβ5, and their spatial relation with GABAB receptors and GIRK channels. Using immunoelectron microscopy, RGS7 and Gβ5 were located in CA1 pyramidal cells at postsynaptic and presynaptic sites. Using quantitative approaches RGS7 and Gβ5 immunoparticles were detected both at intracellular sites (56% for RGS7 and 75% for Gβ5) and along the plasma membrane (44% for RGS7 and 25% for Gβ5). Of the immunoparticles detected along the plasma membrane in the stratum radiatum, most were detected at presynaptic sites (5%) in axon terminals, likely Schaffer´s collaterals, establishing excitatory synapses with spines. In dendritic spines, RGS7 and Gβ5 showed the same distribution relative to the glutamate release site, virtually identical to that of GIRK2 and GABAB1. These data suggest that RGS7 and Gβ5 form macromolecular complexes with GABAB receptors and GIRK channels, and supporting the idea: RGS7-Gβ5 complexes modulate GABAB receptor signalling through the deactivation of GIRK channels C: O3 31 CAFFEINE AS SYNAPTIC ENHANCER: ROLE OF BDNF IN THE HIPPOCAMPAL LONG-TERM POTENTIATION J.J. BALLESTEROS1, A. Zamora-Moratalla 1, E.D. Martín 1 1. Instituto de Investigación en Discapacidades Neurológicas (IDINE). Laboratory of Neurophysiology and Synaptic Plasticity. University of Castilla-La Mancha, School of Medicine, Albacete, Spain [email protected] Caffeine is one of the most consumed drugs in the world. Despite several years of research, the mechanisms of action of caffeine in the brain are still not totally clear. Previously, a new form of longterm potentiation (LTP) in the hippocampus was observed, as a result of caffeine administration at high doses, termed cafLTP. This new way of potentiation differed of the classic form of NMDA-dependent LTP since it appears to be independent of these receptors activity. Our objectives were to assess if caffeine, at consumption doses, improves the synaptic transmission and to discern the mechanisms involved in the process. Our studies were performed with hippocampal slices from mice for electrophysiological and biochemical experiments. We found that caffeine at 100μM evoked a longlasting increase of field excitatory postsynaptic potential (fEPSP) in a NMDA-independent manner (130.56% of basal fEPSP slope). We also found an increased level of Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) released to the extracellular medium (175.19% of basal levels). This fact led us to test the effect of caffeine in the hippocampus from heterozygous BDNF mice, which showed lower basal BDNF levels. In addition, the results showed a reduced level of potentiation (115.86% of basal fEPSP slope) compared with wildtype animals. Our work also confirms that BDNF exerted its activity through the TrkB receptor because the presence of TrkB-Fc blocked the cafLTP (106.50% of basal fEPSP slope). Examining the intracellular mechanisms involved, we found that both PI3K and PLC-γ inhibitors, Wortmannin and U73122, diminished the cafLTP (98.95% and 121.87% of basal fEPSP slope, respectively). Then, we tested the origin of the BDNF release and we found that it principally came from neuronal sources, because it was blocked in presence of Tetrodotoxine and Ryanodine (109.76% and 82.51% of basal BDNF levels, respectively). Since neither Tetrodotoxine nor Ryanodine abolished completely the BDNF from extracellular medium, we examined the effect of caffeine in hippocampus from knock-out mice for astrocytic IP3 receptor 2 to assess the role of astrocytes. Here, the presence of caffeine evoked lower fEPSP increments (111.61% of basal fEPSP) than in wildtype animals. We propose that caffeine at consumption doses produces an increase of BDNF liberation, principally from neuronal sources, which interacts with its receptor TrkB leading to long-term potentiation in CA1 synapses, through PI3K and PLC-γ intracellular pathways. The results also suggest that the astrocytic Ca2+ response is involved in the mechanisms of action of caffeine in the promotion of cafLTP at this level. C: O4 Grant: BFU2011-26339. Secretaría de Estado de Investigación, Desarrollo e Innovación, MINECO. 32 SESSION I: BIOMEDICINE USE OF PERSONAL EXPOSIMETERS TO STUDY THE POSSIBLE RELATIONSHIP BETWEEN EXPOSURE TO RADIOFREQUENCY ELECTROMAGNETIC FIELDS AND NON-SPECIFIC SYMPTOMS M.J. DABAD MORENO 1, A. Nájera López 2 University of Castilla-La Mancha, Albacete, Spain 2. University of Castilla-La Mancha, Department of Medical Sciences, Radiology and Physical Medicine, Albacete, Spain [email protected] 1. The use of technologies which involve radiofrequency electromagnetic fields (RF-EMF) has increased in the last decades. Concurrently, public concern about RF-EMF has grown and there are some individuals who attribute a wide range of non-specific symptoms (dermatological, vegetative and neurasthenic symptoms) to the exposure to RF-EMF. These reported symptoms are termed as idiopathic environmental intolerance attributed to electromagnetic fields or electromagnetic hypersensitivity. We propose a method for the study of this possible relationship using personal exposimeters that register 14 frequency bands from 88 MHz to 5.8 GHz. We designed an ecological study and carried out a search of potential participants. One volunteer carried an exposimeter (Satimo EME Spy 140) during 24 hours and a diary to write his location, activities and the beginning and ending of his symptoms along with the precise time of each change regarding them. Power flux density values from the collected data were below legal limits for public exposure (10 W/cm2 in Castilla-La Mancha). The signals which contributed the most to total exposure were those from mobile phone base stations. To study the relationship of actual RF-EMF exposure with non-specific symptoms, we excluded detection limits values (nondetects), coupling (out of band responses) and outliers. We also did not consider those bands whose proportion of valid values after data cleaning were below 2%. The bands finally included were GSMrx-DL, DCStx-UL, DCSrx-DL, DECT, UMTSrx-DL and WiFi-2G. Using SPSS® ver. 15 and Microsoft Excel® 2010, we first tested for normality using Shapiro-Wilk and Kolmogorov-Smirnov tests and afterwards we used three tests (Student’s t-test and two non-parametric methods, Mann-Whitney U test and Kruskal-Wallis test) to determine if the differences among populations were statistically significant. We compared the periods of time when the volunteer suffered his symptoms, which consisted of panic attacks, to the rest of the time when no symptoms appeared. We also considered, in a different analysis, values from 10 minutes before the onset of the symptoms to study a hypothetical latency between exposure to RF-EMF and symptoms. UMTSrx-DL band was the only one that had differences being statistically significant among the three periods of time when symptoms occurred and their respective periods of the day. In conclusion, we think that the method we propose to study the relationship between exposure to RF-EMF and the development of non-specific symptoms is suitable for its purpose, considering that the conduct of the study, the analyses and the interpretation of its outcomes have some problems that must be considered and solved. The main problems we dealt with were the lack of volunteers, compliance to the study protocol and the fact that if significant relationships were found, conclusive statements regarding the causality of symptoms should not be made, as they can be related by chance. C:O5 33 EFFECT OF TRANSCRANEAL MAGNETIC FIELDS ON PARIETAL CORTEX IN HUMANS. C. CARRASCO-LOPEZ1, Vanesa Soto1, Guglielmo Foffani1, Antonio Oliviero1 Hospital Nacional de Parapléjicos Grupo FENNSI, Toledo, España. [email protected] The effects of static magnetic fields (SMS) on the human motor cortex have been previously described, with a 30% reduction of cortical excitability . However, the influence of SMS on other cortical areas remains unknown, as well as the underlying physiological mechanism involved in this changes. The aim of this study was to evaluate the possible changes induced by SMS on the somatosensory cortex. We obtained SMS by using cylindrical neodymium magnets with a 6 cm diameter and 3 cm height applied for 20 min to the left parietal cortex. Here we show that transcranial application of a static magnetic field (120-200 mT at 2-3 cm from the magnet surface 6cm) over the human parietal cortex produces a focal increase in the power of alpha oscillations in underlying cortex. Moreover, we observe a improvement of a detection stimulus during and after 10 minutes of transcranial static fields. In conclusion. we observed changes in neurophysiological activity and behavior These results suggest that strong static magnetic fields modulate cortical somatosensory activity in humans and can be used as a new non invasive neuromodulation technique . C: O6 34 SESSION II: BIOMEDICINE SLFN11 EPIGENETIC INACTIVATION AS A PREDICTIVE BIOMARKER OF PLATINUM-BASED THERAPY IN OVARIAN CANCER V. NOGALES1, C. Moutinho1, A. Martinez-Cardús1, M. Esteller1. 1 Program of Epigenetic and Cancer Biology, Bellvitge Biomedical Research Institute, Barcelona, Spain. [email protected] One of the major problems of cancer chemotherapy is the pre-existence (primary resistance) or after drug exposition development (secondary resistance) of molecular mechanisms that allow cancer cells to avoid the inhibitory effect of the antitumor drug. Epigenetic silencing of gene expression by DNA hypermethylation is one of these mechanisms. Since this is a DNA mark it is highly stable and, therefore, easily detectable. Due to these features, the study of promoter CpG island hypermethylation in cancer results of high interest for the discovery of new predictive drugs response biomarkers. Schlafen11 (SLFN11) is a putative helicase which expression has been associated with sensitivity to different DNA damage drugs by several independents studies. Furthermore, mRNA SLFN11 levels has been shown to be very variable between different tumor samples and with a lower average in cancer than in normal tissue. Given that nothing had been described about the regulation system that could be altering the expression of SLFN11 in cancer, we decided to explore if it was being subject of promoter hypermethylation. With that purpose, we selected eight cancer cell lines to assess the methylation status of the promoter CpG island of SLFN11 and its effect on the gene expression. Afterwards, short hairpin (sh) silencing of SLFN11 and MTT assays were performed to determine the influence of SLFN11 expression lack in platinum drugs sensitivity. Finally, methylation status of SLFN11 promoter was analyzed on 45 ovarian cancers samples (stage II-IV), by using methylation specific PCR, in order to assess the possible use of it as a response predictive biomarker to platinum-based chemotherapy. Here in, we show that SLFN11 expression is frequently epigenetically silenced in cancer by promoter CpG island hypermethylation and that this silencing can results in an increase of resistance to platinum-agents. Moreover, we probed that the hypermethylation of SLFN11 promoter CpG island can be used as an easily detectable predictive biomarker of platinum- based therapy response in ovarian cancer C: O7 35 FLUORESCENCE-BASED DETECTION OF OLIVE (Olea europaea L) POLLEN ALLERGEN FORMS FROM DIFFERENT CULTIVARS USING A 2-D MULTIPLEX METHOD 1 1 A. TORMO-MOLINA , A.J. Castro , J.D. Alché 1 1 . Estación Experimental del Zaidín, Spanish National Research Council (CSIC), Department of Biochemistry, Cell and Molecular Biology of Plants, Granada, Spain. [email protected] The olive tree (Olea europaea L.) is a strategic crop species in Spain. To its great agronomical and social relevance, the olive adds up its high ecological value and the health benefits derived from olives and olive oil consumption. In parallel, olive pollen is a major health concern in those countries where this species is extensively cultivated. The molecular variability of pollen allergens constitutes a handicap for commercial extract standardization, which is the base of current diagnosis and vaccination procedures. In this work, we report a time- and plant material-saving multiplex detection method for the rapid and simultaneous analysis of olive pollen Ole e 1, Ole e 2 and Ole e 5 allergen forms on a single blot. The use of fluorescent probes and the increased resolution of 2-D blots avoided overlapping effects, and resulted in a more accurate identification of individual allergen forms compared with classical 1-D and colorimetric approaches. We identified sixteen, five and four different forms of Ole e 1, Ole e 2 and Ole e 5 allergens, respectively. Some of these allergenic protein forms were described for the first time in this work. Likewise, our data showed significant quantitative and qualitative differences in the allergenic content among varieties. Thus, 'Arbequina' pollen showed low and high levels of Ole e 1 and Ole e 5 allergens, respectively, while 'Lucio' pollen displayed the opposite pattern. In addition, the identity of some of the IgE-reactive proteins present in the serum of a patient allergic to olive pollen was also effortlessly determined in a single additional step. Interestingly, the IgE-binding protein profiles differed significantly between the two olive varieties tested. Regardless of the cultivar analyzed, the patient showed IgE-mediated reactivity to Ole e 1 but neither to Ole e 2 nor to Ole e 5 allergens. To conclude, this 2-D multiplex method might be a useful tool for standardization of allergen extracts and to design specific immunotherapy. This versatile method might be also extended to a higher number of olive allergens and cultivars, and is also applicable to other allergogenic plant species and sources. This work has been funded by ERDF-cofinanced projects AGL2008-00517AGR, BFU2011-22779 (MICINN), and P2010-AGR-6274, P2011-CVI-7487 (Junta de Andalucía). C: O8 36 ADAR1 AMPLIFICATION CONTRIBUTES IN NON SMALL CELL LUNG CANCER DEVELOPMENT C. ANADÓN GALINDO1, F. Setién Baranda1, M. Esteller1 1 Program of Epigenetic and Cancer Biology, Bellvitge Biomedical Research Institute, Barcelona, Spain. [email protected] Non-small-cell lung cancer (NSCLC) is the most prevalent subtype of lung cancer. This kind of tumor displays a large range of genetic and epigenetic alterations. One of the epigenetic processes that appear altered in this type of cancer is RNA editing. The most common class of RNA editing in mammals is adenosine to inosine (A-to-I) modification and it is performed by a highly conserved group of enzymes, the adenosine deaminase acting on RNA (ADAR) family. There are three ADARs proteins: ADAR1 and ADAR2, which are ubiquitously expressed, and ADAR3, which is only found in brain. Since inosine is recognized as a guanine in most of RNA related processes, this mechanism has the potential to change the transcriptome and, therefore, to alter essential cell functions. Furthermore, changes in coding sequences due to RNA editing could be involved in altered drug response. It is already known that this mechanism can be disrupted in different kind of diseases included cancer. Depending on the tumor type, hyper-editing or hypo-editing can be found because of the increase or decrease of ADAR protein, respectively. In this study we show that ADAR1 is amplified and consequently over-expressed in NSCLC cell lines. In order to investigate the role of this amplification, we performed two different approaches: ADAR1 short-hairpin silencing in different cell lines harboring ADAR1 amplification, and ADAR1 over-expression in cell lines with a normal gene dosage of this locus. Here in, we reported that ADAR1 amplification increases the capacity of proliferation, colony formation and invasion in vitro. Moreover, these results were validated in vivo using the same experimental approaches in mice. In addition, survival analyses of a cohort of lung cancer patients showed that this alteration significantly correlates with a shorter time to recurrence. All these results support that ADAR1 has a role in NSCLC tumorigenesis. It would be interesting to find new ADAR1 targets in order to explain the relationship between this gene amplification and the observed tumor phenotype. C: O9 37 SESSION II: NEUROSCIENCE DESTINO DE CÉLULAS HIPSC INJERTADAS EN ZONA SUBVENTRICULAR DE RATAS ADULTAS SANAS C. DE LA ROSA-PRIETO1 1. Universidad de Castilla-La Mancha, Departamento de Ciencias Médicas, Área de anatomía y embriología humana, Ciudad Real, Spain [email protected] La neurogénesis adulta es un hecho constatado en diversas zonas del cerebro de mamíferos, entre ellas la zona subventricular y la zona subgranular de giro dentado. En roedores, las células proliferativas de SVZ son capaces de generar al día unas 30.000 nuevas células, que migran mediante la cadena migratoria rostral hasta los bulbos olfativos. En adultos jóvenes, más del 50% sobreviven y se diferenciarán en interneuronas granulares y/o perigloremulares, confirmando que la neurogénesis adulta es proceso de renovación celular nada despreciable. De hecho, diversos estudios apoyan que una disminución de la neurogénesis en los bulbos olfativos, conlleva asociada una alteración de la discriminación olfativa y viceversa, sugiriendo un papel muy importante en el procesamiento de la información olfativa. Actualmente, el laboratorio sueco "Stem cells and restorative neurology", liderado por los doctores Zaal Kokaia y Olle Lindvall, está llevando a cabo isquemias en corteza de ratas adultas, logrando injertar con éxito progenitores corticales derivados de células madre pluripotenciales inducidas humanas (hiPSC) derivadas de fibroblastos que son capaces de integrarse y reparar la zona dañada, aportando incluso una recuperación funcional en estos animales. Además con la ventaja de que son muy fáciles de detectar mediante la utilización de marcadores de células humanas. En experimentos utilizando injertos de células fetales se ha observado que algunas de esas células son capaces de migrar a través de la RMS junto a los neuroblastos endógenos. Estas células incluso presentan la morfología bipolar típica de neuroblastos en migración y son positivas para doblecortina. Sin embargo, poco más se sabe sobre el efecto que puede tener este hecho en el proceso neurogénico que ocurre en los bulbos olfativos. Durante los 5 meses de estancia es dicho laboratorio, se ha profundizado ampliamente sobre este aspecto, con el objetivo principal de averiguar cómo se comportan y cuál es el destino de las células hIPSC humanas injertadas en la SVZ de ratas sanas adultas. Para abordar este estudio, se decidió utilizar ratas macho adultas: un primer grupo que fue sacrificado a las 2 semanas tras injertarle las células hIPSC, un segundo grupo que fue sacrificado a las 8 semanas tras la cirugía, y un último grupo de ratas "desnudas" (inmunodeprimidas) que fueron mantenidas durante 5 meses tras el injerto. Una vez obtenido el cerebro se realizaron diversas inmunofluorescencias para realizar conteos estereológicos. Los resultados indican que las células migran relativamente poco aunque sobreviven largos periodos de tiempo y muchas de ellas incluso se diferencian en neuronas. Sin embargo, de forma interesante, hemos observado que envían sus axones a través de la RMS hacia los bulbos olfativos siguiendo las señales endógenas. Este estudio arroja luz sobre el conmportamiento y las posibles aplicaciones de las células hIPSC en la terapia celular del futuro. C: O10 38 FORCED EXERCISE PROGRAM FOR THE STUDY OF THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM MATURATION IN RATS A. TOVAL1,2,3, E. De la Cruz-Sánchez2, J.G. Pallares2, N. Morales-Delgado1,3, A. Ayad1,3, L. Puelles1,3, J. L. Ferran1,2,3. 1. Department of Human Anatomy and Psychobiology, School of Medicine, University of Murcia, Murcia, Spain. 2. Functional Genoarchitecture group, University of Murcia, Murcia, Spain. 3. Institute of Biomedical Research of Murcia – IMIB, Virgen de la Arrixaca University Hospital. University of Murcia, Murcia, Spain. [email protected] The neurobiology of exercise has been virtually absent from public health discourse, despite there are evidences suggesting that physical activity may contribute to promote mental health. Difficulties related to the use of animals in exercise protocols are one of the main obstacles to develop this type of studies. Only a few published works have found the way to obtain satisfactory and reliable responses from rodents during forced exercise; but with low physical demand for the animal and with the addition of aversive stimulus. The aim of this study was to obtain a feasible program of forced physical training in rats that avoid aversive stimulus, using motorized running wheels, for further study of the impact of physical exercise on the maturation of the central nervous system during adolescence. For this aim, we have used a sample of four groups of male Sprague-Dawley rats (n = 21), randomly separated into two groups: experimental (runners, n = 12) and control (non-runners, n = 9). Throughout adolescence (postnatal age of day 35 to day 45), the experimental group was subjected to a physical exercise program during 18 days, of which 8 were devoted to familiarization and 10 days for the main part of the forced training. A total of 30 sessions was established, morning and afternoon ones, in which both intensity and volume followed an upward progressive pattern. We evaluated the response to exercise, changes in the body weight of animals (as an indirect indicator of the variation in the rate of development), and the viability of the extraction and processing of central nervous system tissue. 100% of animals responded to the running familiarization period, whereas 68.3% of rodents completed the forced training plan scheduled. Only the other 31.7% left 2 days remaining to complete the program. The maximum distance a rat run during the experimental period was 14.1 km (for those that finish the entire training program); or a mean of 13.06 km (regard all the animals). The high speed reached was 20.7 m/min during 50 min (10 min running and 5 min resting time). We have not found differences in daily rat’s weight variation patterns, when comparing runners with the control group. Our program design responds successfully and exceeds the minimal expected running distances necessary to observe molecular changes in the central nervous system. We have obtained a successful and repeatable forced training program for rodents that will be the starting point for future analysis in the evaluation of the effects of exercise on the central nervous system. C: O11 Supported by grant from Mapfre foundation (17313). 39 NEUROANATOMICAL CHANGES IN THE LIMBIC SYSTEM IN PARKINSON’S DISEASE A.FLORES-CUADRADO, I. Ubeda-Banon, D. Saiz-Sanchez, C. De la Rosa-Prieto, A. Martinez-Marcos Universidad de Castilla La-Mancha, Laboratorio de Neuroplasticidad y Neurodegeneración, Departamento de Ciencias Médicas, Facultad de Medicina, CRIB, Ciudad Real, España. [email protected] Parkinson’s disease (PD) is the second most frequent neurodegenerative disorder, with a lifetime risk of developing the disease of 1.5%. Clinically, it is characterized by motor symptoms such as bradykinesia, rigidity and resting tremor due to the involvement of the nigro-striatal pathway. Nonmotor symptoms (e.g., dementia, visual hallucinations and emotional impairment) and the related areas (e.g., amygdala and hippocampus), however, are gaining interest. Neuropathologically, Lewy bodies (ubiquitin and α-synuclein aggregates) can be detected in particular brain areas in a predictable sequence of six neuropathological stages. Brainstem and olfactory structures are involved in stage I; the substantia nigra and the amygdala are involved in stage III; and, the hippocampal formation, in stage IV, prior to massive cortical spreading. Our group has been interested in the preclinical stages of PD (mainly olfactory impairment) and the sequence of brain areas involved in its progression. Therefore, the aim of this work has been to analyze the temporal distribution (16, 30, 43 and 56 weeks) of αsynuclein aggregates and involvement of interneurons subpopulations (calbindin, calretinin and somatostatin) in the basolateral (BLA), central (Ce) and cortical (Co) amygdaloid nuclei and hippocampus (DG, CA1, CA3(2)) in the A53T mice model of PD (n= 40) and control age-matched (n= 40). α-synuclein positive-cells were quantified using immunohistochemical procedures and ImageJ software and co-localization experiments under confocal microscopy. α-synuclein-positive cells were mainly concentrated in the BLA and Co amygdaloid nuclei with a non-significant increase over time from 16 to 30-43 weeks and a significant decrease thereafter. α-synuclein expression appears to increase at 30 weeks and it is especially abundant in the dentate gyrus as compared to the rest of hippocampus. Expression of interneuron markers showed a significant decrease with aging in control animals in the amygdala and hippocampus. When comparing their expression between control and transgenic mice, calretinin was lightly involved, but calbindin and somatostatin were significantly reduced at 43 weeks, particularly in the Co and Ce amygdaloid nuclei and granular layer and CA3(2) of hippocampus. These data on the α-synucleinopathy staging in amygdala and hippocampus could help to explain nonmotor symptoms as well as to understand the progression of Parkinson’s disease in the brain. Supported by grant BFU2010-15729. C: O12 40 SESSION III: BIOMEDICINE REDUCCIÓN DEL NIVEL DEL RADICAL SUPEROXIDO MITOCONDRIAL COMO ESTRATEGIA TERAPEUTICA PARA EL GLIOBLASTOMA MULTIFORME J. FRONTIÑÁN RUBIO 1, J.R. Peinado 1, M. V. Gómez-Almagro 2, M. Villar-Rayo3, A. Gil-Agudo4, R. M. Morera5, L. Pérez-Romasanta6, F. Javier Alcaín1 y M. Durán-Prado 1* 1 Facultad de Medicina, UCLM, Ciudad Real, España; 2 Instituto Regional de Investigación Científica Aplicada, UCLM, Ciudad Real, España; 3 Instituto de Investigación en Recursos Cinegéticos, UCLM, Ciudad Real, España; 4 Servicio de Radiofísica Hospitalaria y Protección Radiológica, Hospital General Universitario de Ciudad Real; 5 Servicio de Oncología Radioterápica, Hospital General Universitario de Ciudad Real, España; 6 Servicio de Oncología Radioterápica, Hospital Universitario de Salamanca, España [email protected] El glioblastoma multiforme (GBM) es el tumor cerebral primario más frecuente en adultos. Es altamente infiltrativo y resistente a las terapias citotóxicas, lo que hace que parte de las células escapen al control terapéutico y los pacientes sobrevivan un promedio de no más de 15 meses. Las células de GBM tienen un nivel muy elevado de radical superóxido (O2.-), generado como consecuencia de la disfunción mitocondrial propia de la mayoría de las células tumorales. El O2.- dismuta a H2O2 que en el citosol estabiliza al factor de transcripción HIF1-α favoreciendo el “switch” glicolítico, inicia procesos angiogénicos e inflamatorios, promueve la invasión de células tumorales y la evasión de la apoptosis. En esta comunicación, presentamos una nueva terapia experimental para el GBM. Utilizando el antioxidante lipofílico coenzima Q10 (CoQ) en modelos in vitro e in vivo de GBM, observamos un descenso en los niveles de O2.- y H2O2 y una reducción en el metabolismo glicolítico que impacta directamente sobre el crecimiento tumoral, la capacidad invasiva y procesos angiogénicos. En concreto, hemos comprobado, in vitro, que el tratamiento con CoQ reduce en más de un 50% el nivel de O2.- mitocondrial y de H2O2 citosólica en varias líneas de GBM humanas. Esta reducción en los niveles de O2.- y H2O2 lleva asociada una disminución paralela de los procesos de proliferación, migración e invasión celular. Por otra parte, hemos utilizado medios condicionados para ensayar el efecto de factores secretados por células de GBM, control y tratadas con CoQ, sobre el proceso angiogénico, in vitro. El tratamiento de células humanas de GBM con CoQ reduce el nivel del factor HIF1-α, por lo que cabe esperar un descenso en la producción y secreción de factores angiogénicos. De hecho, el medio condicionado obtenido de células de GBM tratadas con CoQ inhibe tanto la angiogénesis in vitro como la capacidad proliferativa y migratoria de células endoteliales humanas de cordón umbilical (HUVEC). Nuestros resultados indican que este efecto no es solo debido al descenso en la secreción de factores de crecimiento sino también a una reducción en el nivel de L-lactato extracelular, consecuencia de la inhibición parcial del metabolismo glicolítico. Hemos implantado células de GBM humanas de forma subcutánea y ortotópica en el cuerpo estriado de ratones inmunodeficientes. En estos modelos hemos observado cómo los ratones tratados con CoQ presentan tumores más pequeños que los tratados con vehículo y no se han detectado procesos de invasión celular. Este efecto parece estar íntimamente relacionado con una inhibición de la angiogénesis, de forma similar a los resultados obtenidos in vitro. En conjunto, nuestros resultados sugieren que el CoQ podría ser una molécula prometedora como coadyuvante para el tratamiento del GBM, ya que regula simultáneamente diversos aspectos patofisiológicos íntimamente ligados a la progresión de la patología. C: O13 41 MARCADORES PRONÓSTICOS Y PREDICTIVOS DE RESPUESTA A LA CIRUGÍA BARIÁTRICA J.R. MUÑOZ-RODRÍGUEZ1 1. Unidad de Investigación Traslacional, Hospital General Universitario de Ciudad Real, España [email protected] El objetivo de este estudio es evaluar la posible utilidad diagnóstica de diversos marcadores genéticos y bioquímicos en la obesidad mórbida, así como su valor pronóstico y predictivo de la respuesta personalizada a la cirugía bariátrica. Para el estudio bioquímico se seleccionaron 31 pacientes con obesidad mórbida (IMC >40 kg/m2) que fueron sometidos a cirugía bariátrica en el HGUCR y a los que se realizó un seguimiento de 12 meses. Se reclutó el mismo número de controles normopesos (IMC entre 18,5 y 24,9 kg/m2) entre el personal del hospital procurando que las proporciones de edad y sexo resultaran homogéneas. Para los estudios genéticos se aumentó el número de pacientes a 74 y el de controles a 57. Como marcadores genéticos se midieron polimorfismos de genes relacionados con obesidad y trastornos de la conducta alimentaria (Bdnf, Cart, Ucp2, Fto, Adra2B y Pparg). Como marcadores bioquímicos se midieron neuropéptidos (BDNF y CART), hormonas (grelina, leptina, adiponectina, insulina) y citoquinas proinflamatorias (IL-6 y TNFα). El estudio genético mostró diferencias significativas entre controles y pacientes en las frecuencias de los polimorfismos rs9939609 y rs9939973 del gen Fto y rs71824147 del gen Ucp2. Los niveles de IL-6 fueron superiores en pacientes respecto a los controles. Se detectó un descenso en BDNF un año después de la cirugía bariátrica en los pacientes intervenidos. El perfil hormonal, claramente distinto entre ambos grupos de inicio, se revirtió en los pacientes obesos intervenidos en lo que respecta a niveles de adiponectina, leptina e insulina. Los datos obtenidos, junto con otros estudios preclínicos y clínicos, sugieren que el análisis de los polimorfismos de Ucp2 y Fto, la citoquina IL-6, el perfil hormonal y el neuropéptido BDNF, pueden ser herramientas valiosas bien para definir diferentes endofenotipos de obesidad, bien para evaluar o predecir el resultado de los tratamientos contra la obesidad. Financiado por el Instituto de Salud Carlos III (FIS PI10/00440). Los autores agradecen a Dña Amelia González López su excelente asistencia técnica.C: O14 42 LOS BIOBANCOS: DIVERSIDAD DE MODELOS, DIVERSIDAD DE MUESTRAS A. ARRIAGA-ARAGÓN 1, M. Moreno-Górriz 1, S. Nam-Cha 1,2 1. Complejo Hospitalario Universitario de Albacete, Unidad Técnica de Biobanco, Albacete, España. 2. Complejo Hospitalario Universitario de Albacete, Servicio de Anatomía Patológica, Albacete, España [email protected] Los Biobancos, o Bancos de Muestras Biológicas, son, en el campo de la Biomedicina, el conjunto de colecciones de muestras de distinta naturaleza que pueden ser útiles para el desarrollo de la investigación en enfermedades o del estado de salud general de la población. La Comunidad Científica internacional se apoya para la investigación básica, traslacional, clínica, o epidemiológica, en colecciones de muestras humanas adquiridas para dichos fines con el consentimiento de los donantes. España es un país en el que la organización y la legislación aplicable a los Biobancos, desarrollada en un Real Decreto a partir de la Ley de Investigación Biomédica de 2007, y los protocolos consensuados desarrollados, han servido, en algunas cuestiones, como modelo en otros países de Europa, tanto para la organización de biobancos como para la gestión de muestras biológicas humanas con fines de investigación dentro o fuera del contexto de dichos biobancos. El Instituto de Salud Carlos III ha desarrollado a partir de 2010 programas para subvencionar la puesta en marcha de biobancos en los hospitales españoles, constituyendo una red con vocación de intercambio de muestras en proyectos colaborativos. En este contexto inició su andadura nuestro Biobanco. En paralelo, en distintas Comunidades se han puesto en marcha biobancos asociados a institutos de investigación y universidades, algunos de ellos pioneros en la gestión de muestras biológicas de distintos nodos de enfermedades o de muestras de donantes sanos para estudios poblacionales. En esta comunicación se pretende dar a conocer a la audiencia distintos modelos de biobanco nacionales y ejemplos de la diversidad de muestras que los mismos pueden gestionar, con el objetivo de proveer a los científicos de muestras de calidad acompañadas de una buena información biológica y clínica asociada. La gestión de dicha información se ve facilitada con las modernas plataformas informáticas hoy existentes, comunes a casi todos los modelos de biobancos; como ejemplo de esta gestión informática mostramos también en esta comunicación la que a diario realizamos en nuestro biobanco.C: O15 43 CÉLULAS INICIADORAS DE TUMORES EN CANCER DE COLON P. HONRUBIA-GÓMEZ1, C.B. Alvarez-Simón1, C. Gil-Gas1, S. Sabater2, J.L Sánchez Sánchez3, A.I. Ferrer Díaz4, J.M. García Bueno4, F. Sánchez-Sánchez1 y C. Ramírez Castillejo5. 1. Centro Regional de Investigaciones Biomédicas. Laboratorio de Células Madre Tumorales. Albacete. España. 2. Complejo Hospitalario Universitario de Albacete. Servicio de Radioterapia. Albacete. España. 3. Hospital Universitario de San Juan. Servicio de oncología. Alicante. España. 4. Complejo Hospitalario Universitario de Albacete. Servicio de Oncología. Albacete. España. 5. Instituto de Salud Carlos III. Unidad de NeuroOncología del Hospital 12 de Octubre. Madrid. España. [email protected] Desde hace menos de una década se viene postulando que las células iniciadoras de tumores (CIT) o Células Madre Tumorales (CMT) son las responsables de la aparición y expansión de la mayoría de los procesos neoplásicos. Su erradicación pasa por el estudio de su capacidad de autorrenovación, gracias a la cual son capaces de autoperpetuarse a la vez que dar lugar a una gran progenie de células que componen los tumores. En numerosos tipos de tumores se ha descrito hasta el momento la existencia de células madre tumorales. Uno de estos tipos de tumor es el adenocarcinoma colorrectal. La carcinogénesis colorrectal es un proceso multifactorial influenciado por factores ambientales, genéticos y epigenéticos. En este estudio se intenta localizar y caracterizar la población de células iniciadoras de tumores en pacientes con que sufren un carcinoma colorrectal. Para el estudio y caracterización de estas, se realiza una purificación y cultivo la población de células mononucleadas en sangre periférica, de pacientes con procesos neoplásicos avanzados de colon. Se ha descrito que entre esta población pueden estar nuestras céluals de interés. Posteriormente se realiza un análisis de marcadores de células tumorales circulantes en sangre: EpCam, BCRP y CD133. Estos marcadores han demostrado presentar una correlación entre su expresión diferencial en una pequeña población de estos pacientes, la evolución de los mismos y respuesta ante el tratamiento. Dicha correlación puede ayudar en la predicción de futuras recaídas del paciente, y la predicción del posible efecto del tratamiento, lo que complementaría las terapias actualmente empleadas en clínica. A día de hoy, el único marcador, de este estudio, validado clínicamente es la proteína Epcam, sin embargo, la sensibilidad de la técnica actual podría aumentar si se complementase con otros marcadores, como por ejemplo la proteína CD133 y BCRP1. Los marcadores de estudio están presentes en líneas de adenocarcinoma colorrectal, que contienen poblaciones de ciclo lento, característica relacionada con las CIT. Además se pretende estudiar el efecto que ejerce la proteína PEDF en la regulación de la autorrenovación de las células madre tumorales, se estudian, por tanto, los fenómenos de proliferación, perpetuación y la posible inactivación de estas células, así como el perfil de expresión génica del ciclo celular. Para ello, se utiliza la proteína PEDF y su extremo carboxilo en cultivos de líneas tumorales estables. Hemos comprobado que la proteína PEDF y su extremo carboxilo inducen un cambio en la expresión de los marcadores de estudio en las líneas tumorales. Además hemos observado una disminución en la resistencia a fármacos, aplicados en tratamientos antineoplásicos, tanto en las líneas celulares como en xenografts. Los datos también reflejan una disminución en la aparición de tumores con las células tratadas con la proteína PEDF. C: O16 44 SESSION III: NEUROSCIENCE EL DEXTRANO BIOTINADO (BDA) COMO TRAZADOR NEUROANATÓMICO J. MIRANDA ROSÓN1, M. Alvarez-Gómez 1, E. Marquez Legorreta1 1.-Instituto de Neurociencias de Castilla y León, Salamanca,España. Laboratorio de Neurohistología auditiva (INCYL) [email protected] Los modernos métodos y moléculas para trazar vías nerviosas contribuyen de manera sobresaliente al conocimiento de las conexiones entre núcleos del sistema nervioso central. Actualmente, disponemos de un gran arsenal de trazadores entre los que elegir para satisfacer nuestro interés experimental. Entre ellos, cabe destacar el dextrano biotinado (BDA), que ofrece grandes ventajas respecto a otros trazadores. El BDA es un polisacarido que posee una molécula de lisina a través de la cual se une mediante los fijadores aldehídos a las moléculas circundantes; también lleva una molécula de biotina (vitamina H), que facilita su detección histoquímica. El BDA es especialmente eficaz para trazar vías nerviosas en vivo, pero también es posible utilizarlo en rodajas frescas. Este trazador puede inyectarse tanto iontoforéticamente (lo que proporciona zonas de inyección pequeñas y precisas), como por presión, y puede así mismo aplicarse en forma de cristales o mediante agujas impregnadas en él. Otra de sus ventajas es el cómodo período postoperatorio que requiere (entre 7 y 15 días, dependiendo la longitud de la vía que se desee estudiar). Su revelado mediante el método de la avidina, biotina y peroxidasa (complejo ABC) y el cromógeno diaminobenzidina (DAB) es más sencillo que la detección inmunocitoquímica que requieren otros trazadores. Además, el BDA es compatible con la mayoría de las tinciones histoquímicas e inmunocitoquimicas, y su versatilidad permite combinarlo con otros métodos o trazadores para realizar estudios de marcado doble o triple, en el mismo experimento. Sin embargo, la principal ventaja del BDA es que marca con asombroso detalle los axones, los somas y las dendritas, incluidas las espinas dendríticas, por lo que la tinción que proporciona se ha comparado con la del método de Golgi. Además, es apto para el estudio ultraestructural de los elementos marcados. El BDA es claramente un trazador bidireccional, pues se transporta tanto en sentido anterógrado, como en sentido retrógrado. Por ello, constituye una herramienta sumamente útil para responder una gran variedad de preguntas. Por ejemplo, para averiguar qué núcleos son inervados por el núcleo “A”, podemos inyectar BDA en “A” y analizar la trayectoria y distribución de los axones marcados. Para saber qué núcleos inervan al núcleo “A”, podemos inyectar BDA en “A” y estudiar las neuronas marcadas retrógradamente. Junto a estas aplicaciones, que comparte con otros trazadores anterógrados o retrógrados, el BDA da lugar al denominado “transporte colateral”: el trazador inyectado en un núcleo concreto es captado por los axones que lo inervan y se transporta en sentido retrógrado hasta llegar a una bifurcación; en este punto, parte del trazador continúa retrógradamente hacia el soma, y otra parte se introduce en la colateral axónica, por la que viaja hasta llegar a las porciones más distales del axón. Utilizado con precaución, el transporte colateral es una estrategia muy eficaz para marcar selectivamente proyecciones que resultaría muy difícil estudiar por otros medios. C: O17 45 EXPRESIÓN DE LOS GENES CAUSANTES DE DISTROGLICANOPATÍAS EN LA RETINA DE MAMÍFEROS Y EN LA LÍNEA CELULAR DE FOTORRECEPTORES 661W C. HARO MORENO1 y M. L. Uribe Rios1 1Universidad de Alicante, Departamento de Fisiología, Genética y Microbiología, Grupo de Investigación Genética Humana y de Mamíferos, Alicante, España. [email protected] Las distroglicanopatías (DGPs) son distrofias neuromusculares genéticas raras que ofrecen una esperanza de vida corta y cuyos síntomas se extienden generalmente a la retina. Las más severas, que cursan con distrofia muscular con afectación cerebral y ocular, incluyen el síndrome de WalkerWarburg (WWS), la enfermedad de músculo-ojo-cerebro (MEB) y la distrofia muscular congénita de Fukuyama (FCMD). Se conocen tradicionalmente seis genes que codifican glicosiltransferasas demostradas o putativas implicadas directa o indirectamente en la O-glicosilación del α-distroglicano (α-DG), una glicoproteína implicada en la formación de la membrana basal y el establecimiento de las sinapsis en el sistema nervioso. Estos genes, POMT1, POMT2, POMGNT1, FKTN (fukutina), FKRP y LARGE, son responsables de aproximadamente el 60% de los casos conocidos de DGPs. El patrón de distribución y la función tanto de ellos como de sus productos proteicos aun no se hallan bien establecidos en el SNC, y en la retina de mamíferos su desconocimiento es total. Muy recientemente, se han identificado nuevos genes relacionados con DGPs, llegando la lista actual a 18 genes. Hemos evidenciado por RT-PCR la expresión de POMT1, POMT2, POMGNT1, FKTN, FKRP y LARGE a nivel de mRNA en la retina neural adulta de todas las especies de mamíferos estudiadas, desde roedores (rata y ratón) a primates (mono y humano), así como en la línea celular de fotorreceptores 661W. Además, hasta ahora hemos detectado mediante Western blotting la expresión de las proteínas POMT1, POMT2, POMGnT1 y fukutina en retinas de mono, vaca, rata y ratón, y en células 661W. Este análisis reveló, para algunas de estas proteínas, bandas adicionales a las que presentan el peso molecular esperado, que podrían originarse mediante corte-empalme alternativo del mRNA, o mediante modificación postraduccional de su producto proteico como puede ser glicosilación. Para nuestra línea de investigación, el uso de células 661W es de gran importancia puesto que se trata de la única línea celular de fotorreceptores de ratón disponible. Por ello, estamos analizando en dichas células el patrón de expresión de las proteínas POMT1, POMT2, POMGnT1, fukutina, FKRP y LARGE mediante Western blotting de las fracciones celulares citoplásmica y nuclear y su patrón de distribución intracelular mediante ensayos inmunocitoquímicos acoplados a Microscopía Confocal. Los resultados obtenidos sugieren un papel relevante de los genes y proteínas asociados a DGPs no sólo en el músculo y el cerebro, donde ya se ha descrito en parte su expresión, sino también en la glicosilación del α-DG en la retina de mamíferos adultos. Además, la expresión de algunos de estos genes en la retina podría estar regulada a nivel post-transcripcional. C: O18 46 POSTERS COMMUNICATIONS 47 48 SESSION I: CLINICAL RESEARCH AISLAMIENTO DE Escherichia coli CAPNOFÍLICO EN PACIENTE CON ÚLCERA TUMORAL. A. ESCUDERO-JIMÉNEZ, J. Bartolomé-Álvarez, J. I. Beltrán-Cifuentes, J. Galán-Ros, R. Haro-Blasco, MD. CrespoSánchez Servicio de Microbiologia y Parasitología, Complejo Hospitalario Universitario de Albacete, Albacete, España. [email protected] Objetivo: Descripción del aislamiento de una cepa de Escherichia coli capnófilico en paciente con úlcera tumoral crónica en la región frontal. Material y métodos: Revisión de la historia clínica del paciente así como de la bibliografía que hace referencia a cepas de E. coli capnofílico. Descripción del caso: Mujer de 87 años, institucionalizada en una residencia de monjas, para la que no se conoce alergia a medicamentos. Hace 75 años precisó la implantación de injertos cutáneos a consecuencia de un traumatismo y quemaduras secundarias en brazos, tórax, cuero cabelludo y parte del rostro, además de la amputación del antebrazo izquierdo y del quinto dedo de mano derecha. Presenta una prótesis ocular derecha por traumatismo desde hace 40 años y degeneración macular derecha asociada a la edad. En octubre de 2003 fue diagnosticada de un carcinoma epidermoide cutáneo de crecimiento lento en la región temporofrontal derecha que precisó de exéresis quirúrgica y cobertura mediante injerto cutáneo autólogo. Es reintervenida en 2007 para el desbridamiento de la zona injertada por úlceración y necrosis de la misma. Desde entonces a la paciente se le realizan curas periódicas de la lesión en su centro de salud y esta en seguimiento por la unidad de medicina paliativa desde abril de 2013. En septiembre de 2014 acude a una de la visitas para revisión y cura de la herida. La úlcera supura un líquido seroso y algo verdoso en alguna zona por lo que se recoge una muestra y se remite al laboratorio de microbiologia para su cultivo. En la tinción de gram se observa una flora mixta (bacilos gramnegativos y cocos grampositivos) escasa en presencia de leucocitos. Se realiza el procesamiento de la muestra utilizando medios generales (agar-sangre y agar-chocolate), que son incubados a 37ºC bajo una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono (5% CO2), y a su vez se siembra en un medio específico para bacilos gramnegativos (agar-MacConkey) que es incubado a 37ºC bajo una atmósfera aerobia normal. Como resultado se obtiene el crecimiento predominante una cepa de E. coli, que únicamente se recupera a partir de los medios incubados en presencia de CO2, y crecimiento escaso de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus. Discusión: E. coli es una bacteria anaerobia facultativa que se encuentra generalmente en el intestino de mamíferos como flora comensal. En determinadas situaciones causa infecciones intraintestinales (diarrea inflamatorioa y no inflamatoria) y extraintestinales, tales como infección urinaria, intraabdominal, bacteriemia, neumonía, meningitis y otras como puede ser la celulitis (1). Existe bibliografía acerca del hallazgo de este tipo de cepas de E.coli capnofílicas en muestras de orina y empiema con un significado clínico aunque no se conoce si el requerimiento de CO2 puede tener trascendencia alguna en su patogenicidad (2,3). No existen publicaciones que hablen de la relación de este tipo de cepas con infecciones de piel y tejidos blandos. A pesar de su baja frecuencia, hay que considerar este tipo de cepas en pacientes con sospecha de infección y cultivos negativos que no han sido incubados bajo una atmósfera enriquecida en CO2. C: P1 49 FASCITIS NECROTIZANTE POR CLOSTRIDIUM SEPTICUM EN PACIENTE INMUNODEPRIMIDO J. GALÁN ROS1; I. Beltrán Cifuentes1; J. Bartolomé Álvarez1; JA. De Ayala Fernández2; A. Escudero Jiménez1; MD. Crespo Sánchez1. Servicio de Microbiología1. Servicio de Medicina Interna2. Hospital General Universitario de Albacete, España. [email protected] INTRODUCCIÓN: La gangrena gaseosa se trata de una infección rápidamente progresiva de la piel y tejidos blandos, que suele asociarse con una importante toxicidad sistémica. Se presenta en pacientes que sufren un compromiso de su sistema inmunológico, como es el caso de este paciente en tratamiento crónico con corticoesteroides. Esta entidad clínica está producida por bacterias del género Clostridium, estando representado principalmente por dos especies: C. perfringens y C. septicum. CASO CLÍNICO: Varón de 58 años de edad que acudió al Servicio de Urgencias por presentar una lesión ampollosa y dolorosa en miembro inferior derecho (MID) tras golpearse con un motor de tractor. Se trata de un paciente fumador y bebedor, con antecedentes de diabetes mellitus tipo 2, hipertensión, hepatopatía alcohólica, pancitopenia de origen periférico con anemia refractaria asociada a sideroblastos en anillo, miocardiopatía dilatada por enolismo, fibrilación auricular, polimialgia reumática y diverticulosis en colon ascendente. A la exploración física, se encontraba consciente y orientado, con tendencia a la obnubilación y presentaba un pico febril de 39 ºC. Refería dolor muy intenso en miembro inferior derecho de forma espontánea y a la palpación superficial, además de presentar edemas e induración más allá del área eritomatosa. La lesión pre-tibial (abrasión de 2x3cm de diámetro) se encontraba rodeada de ampollas y flictenas con contenido serohemático junto a una tenue crepitación, de la cuales se tomaron muestras para su envío al Servicio de Microbiología. En el transcurso de 5 horas, el paciente mostró una hipotensión sostenida (TAS 75/TAD 40) y una gran progresión de las lesiones cutáneas, compatibles con una fascitis necrotizante por lo que se decidió su ingreso en UCI. Se inició soporte vasoactivo y antibioterápia de amplio espectro con meropenem, linezolid y clindamicina. Se contactó con el Servicio de Cirugía Vascular para la amputación supracondílea del MID. La tinción de Gram informó de la presencia de bacilos gram-positivos compatibles con Bacillus-Clostridium, con posterior crecimiento de Clostridium septicum en cultivo anaerobio. Tras cirugía y estabilización clínica pasó a planta de la Unidad de Enfermedades Infecciosas, donde se pauta tratamiento intravenoso con penicilina G más clindamicina durante 21 días junto a la terapia de cicatrización asistida por vacío (VAC), presentando una buena evolución clínica. DISCUSION: La gangrena gaseosa es un tipo de fascitis necrotizante que puede tener diferentes formas, tales como la exógena a consecuencia de un traumatismo y la endógena asociada a procesos malignos, como son el carcinoma de colon y las alteraciones hematológicas. En cuanto a la forma exógena se correlaciona principalmente con C. perfringens en el 80-90% de los casos, mientras que la forma endógena está causada fundamentalmente por C. septicum, y se correlaciona en un 85% con procesos malignos. La particularidad de nuestro caso reside en el hecho de ser una infección de origen exógeno producida por C. septicum. En nuestro paciente, a pesar de presentar factores predisponentes para el desarrollo de una infección endógena por C. septicum, parece claro que fue el traumatismo en el MID lo que produjo la infección y vía de entrada de Clostridium septicum. C: P2 50 PSEUDOANEURISMA AÓRTICO POR SALMONELLA ENTERITIDIS J. GALÁN ROS1; JA. De Ayala Fernández2; M. García Sánchez2; E. Molina Pacheco2; M. Melero Bascones2; E. Escribano Garaizábal1; A. Losa Palacios3; JE. Solís García del Pozo2 Servicio de Microbiología1. Servicio de Medicina Interna2 . Servicio de Radiodiagnóstico3 Hospital General Universitario de Albacete, España. [email protected] Introducción: Las bacteriemias por Salmonella no tifoidea (SNT) ocurren principalmente en pacientes que presentan factores de riesgo tales como, edades extremas, enfermedades crónicas o algún grado de inmunosupresión, siendo la infección endovascular una afectación poco frecuente y con una mortalidad cercana al 50%. Caso clínico: Mujer de 70 años que acude al Servicio de Urgencias en tres ocasiones, en un periodo de tiempo de un mes, por referir debilidad generalizada acompañada de una importante astenia y de mialgias generalizadas. Como antecedentes personales, destacan importantes factores de riesgo cardiovascular (hipertensión arterial, diabetes mellitus tipo 2, dislipemia y obesidad), cardiopatía isquémica crónica, infarto hermorrágico talámico sin secuelas, síndrome depresivo mayor, enfermedad de Alzheimer y enfermedad cerebrovascular. En su última visita al Servicio de Urgencias, persiste el deterioro del estado general acompañado en ésta ocasión de disfagia, disfonía y episodios de atragantamiento. Ante la persistencia de la clínica y la aparición de disfagia, finalmente se decide su ingreso en el Servicio de Medicina Interna. Ante la sospecha de una posible neoplasia esofágica se solicitó un estudio analítico, siendo la autoinmunidad y los marcadores tumorales normales. Para el estudio del cuadro de disfagia, se solicitaron una gastroscopia sin hallazgos de interés y un TAC toraco-abdomino-pélvico, el cual informó de un engrosamiento parietal focal de esófago y de un pseudoaneurisma en cayado aórtico. A la semana del ingreso, la paciente presentó episodios de diarrea y fiebre de 38ºC, por lo que se solicitó la extracción de hemocultivos y un estudio coprológico, aislándose Salmonella enteritidis en ambos. A pesar de recibir tratamiento antimicrobiano dirigido, presentó valores elevados de los reactantes de fase aguda (PCR: 304.5 mg/L, leucocitosis: 14000 mcl y VSG: 120 mm 1ºh) y persistencia de fiebre. Ante la sospecha de una posible infección endovascular, se solicitó un nuevo TAC, objetivándose una progresión del pseudoaneurisma en cayado aórtico. El ecocardiograma no mostró datos de endocarditis aunque sí informó de un derrame pericárdico moderadosevero. Con el diagnóstico de pseudoaneurisma micótico por Salmonella, se trasladó al Servicio de Cirugía Vascular, interviniéndose para la colocación de una prótesis endovascular torácica. Pasada una semana tras la intervención quirúrgica, la paciente comenzó con un deterioro del estado general acompañado de un cuadro de insuficiencia respiratoria aguda, secundaria a una neumonía nosocomial de origen broncoaspirativo. Tras el esfuerzo terapéutico la paciente finalmente falleció. Conclusiones: Las infecciones por SNT se manifiestan principalmente por cuadros de gastroenteritis aguda, generalmente de curso benigno y autolimitado. En ocasiones producen manifestaciones extraintestinales siendo las bacteriemias una complicación poco frecuente (1%-4%). Las cepas que con más frecuencia se aíslan son S. typhimurium, S. enteritidis, S. cholerasuis. El 10%-20% de las bacteriemias pueden dar lugar a infecciones localizadas, siendo las infecciones endovasculares (endocarditis, aortitis) una de las más importantes debido a su alta mortalidad (> 45%). El abordaje diagnóstico se realiza principalmente mediante la extracción de hemocultivos y pruebas de imagen, siendo el angio-TC la técnica de elección. Se recomienda como tratamiento, la cirugía precoz junto al uso de fluoroquinolonas. C: P3 51 TUMOR DE CÉLULAS DE SERTOLI-LEYDIG DEL OVARIO. PRESENTACIÓN DE UN CASO R. SARABIA O, JP. García, N. Rojas Ferrer, C. Egoavil R, A. Canosa F, R. Barbella A. Hospital General Universitario de Albacete. Servicio de Anatomía Patológica. Albacete. España. [email protected] Introducción: Los tumores de células de Sertoli-Leydig pertenecen al grupo de tumores derivados de los cordones sexuales y del estroma gonadal, son neoplasias infrecuentes y representan apenas el 0,5% de todas las neoplasias de la gónada femenina. Los tumores de ovario pueden ser funcionantes y no funcionantes, dentro de los funcionantes tenemos los que presentan actividad endocrina y producen androgenización, como es el caso de los tumores de células de Sertoli-Leydig, que tienen mayor incidencia en mujeres jóvenes entre los 20 y 30 años, pero puede presentarse en todas las edades. Caso clínico: Presentamos el caso de una mujer de 47 años de edad que consultó por aumento de vello facial y trastornos menstruales (ausencia de menstruación) desde hace 5 años. Antecedente de hipotiroidismo subclínico leve sin necesidad de tratamiento desde hace 6 meses, ciclos menstruales regulares, menopausia a los 42 años sin terapia de sustitución hormonal. En analítica realizada por aumento de vello, se detecta aumento de la Testosterona de 5.6 ng/ml (n: 0.084-0.481 ng/ml) TSH: 5.55mcUI/ml.(n: 0.27-4.2). Los niveles de LH, FSH, Prolactina, Estradiol y T4 libre fueron normales. Cuatro meses más tarde el nivel de testosterona aumentó a 5.8 ng/ml, el TC abdomino pélvico informa: Glándulas suprarrenales normales. Útero aumentado de tamaño con imagen en fondo uterino en relación con mioma submucoso de 3x2cm y una lesión sólida dependiente de anejo derecho de 4x3 cm. La ecografía ginecológica muestra, alteración en la vascularización del ovario derecho. Por todo lo anterior se interviene quirúrgicamente. Para estudio anatomopatológico se recibe ovario algo agrandado de 4x3x3 cm y un nódulo blanquecino bien delimitado de aspecto miomatoso de 3x2.2xcm. El diagnóstico anatomopatológico del ovario fue de tumor de Sertoli-Leydig ovárico (cordones sexuales) de diferenciación intermedia y el nódulo de leiomioma. Discusión:Ante un cuadro de virilización, es imprescindible hacer una evaluación completa, que incluya historia clínica y pruebas complementarias encaminadas a identificar la fuente productora de andrógenos Histológicamente los tumores de células de Sertoli-Leydig se clasifican en tres grupos dependiendo del grado de diferenciación. Cada uno con una significación pronostica progresivamente más desfavorable. Como en el caso que presentamos, la mayoría de tumores de las células de Sertoli-Leydig se presentan en estadio IA, la mayoría con la cápsula íntegra, con una diferenciación intermedia y en mujeres en edad reproductiva. Por ende es posible un manejo conservador, considerándose de elección la ooforectomía unilateral, sobre todo en pacientes jóvenes que desean conservar su fertilidad. C: P4 52 RABDOMIOMA DEL ADULTO CON DEGENERACION VACUOLAR. PRESENTACIÓN DE UN CASO R. SARABIA O, R. Barbella A, A. Canosa F, N. Rojas F, C. Egoavil R. Hospital General de Albacete. Servicio de Anatomía Patológica. Albacete. España. [email protected] Introducción: Los rabdomiomas son tumores benignos del músculo estriado que tienen una fuerte predilección por la región de cabeza y cuello en personas adultas. Son tumores muy poco frecuentes, representan apenas el 2% de todos los tumores del músculo esquelético. Ha existido controversia sobre si estos tumores representan verdaderas neoplasias o hamartomas, sin embrago la evidencia actual, incluida la confirmación citogenética de clonalidad y una asociación con alteraciones de la vía de señalización Hedgehog, tiende a favorecer la primera interpretación. Estos tumores se dividen en dos grandes grupos; rabdomiomas intracardiacos y extracardiacos. El tipo cardiaco suele estar asociado a anormalidades congénitas cómo la esclerosis tuberosa, adenomas sebáceos y angiomiolipomas renales. Los tipos extracardiacos comprenden 4 categorías clínicas y morfológicas bien definidas; el tipo genital, el tipo fetal, el tipo juvenil también llamado intermedio fetal y el tipo adulto. Estos tres últimos afectan la cabeza y cuello (1). Caso Clínico: Presentamos el caso de un varón de 58 años, con antecedentes personales de HTA no controlada, EPOC, obesidad mórbida y alergia a contrastes yodados. Acude a consulta del servicio de ORL por presentar episodios de atragantamiento, disfagia y molestias a la deglución de pocos meses de evolución. A la exploración física presenta; masa en pared posterolateral de hipofaringe izquierda. Se le realiza exéresis de la tumoración mediante cervicotomía. Para estudio anatomopatológico se reciben 2 fragmentos de tejido marronaceos parduscos que en conjunto miden 7.5 cm de diámetro máximo. El fragmento mayor lobulado, bien delimitado de consistencia blanda, de aspecto similar al músculo estriado, en el centro de la lesión se observa una zona fibrosa de aspecto cicatricial. No se identificó glándula salivar. Se incluyeron muestras representativas. Al estudio microscópico se observó una lesión de aspecto benigno circunscrita pero no encapsulada con patrones de crecimiento en nidos, lóbulos y sábana sin estroma interpuesto. Constituido por células grandes de citoplasma amplio eosinófilo vacuolado, debido a la acumulación de glucógeno dando origen a la característica “ spider cells, núcleo redondo u oval, central o periférico y pequeño nucleolo prominente. En el estudio inmunohistoquímico las células mostraron positividad con desmina, actina y miogenina. Fueron negativas con EMA, CKAE1/AE2, S100 y CD68. Con todos los datos antes descritos se informó cómo: Rabdomioma con degeración vacuolar Discusión: Los rabdomiomas de tipo adulto son raros, aparecen preferentemente en cavidad oral hipofaringe y laringe. Entre un 3-10% suelen ser multifocales; sincrónicos o metacrónicos. Suelen recurrir en un 40% aquellos casos incompletamente resecados. La degeneración maligna o comportamiento clínico agresivo, no está asociado con su recurrencia. El diagnóstico diferencial incluye; el tumor de células granulares, el paraganglioma el oncocitoma, la histiocitosis con deposito de cristales asociados a tumores citoplasmáticos y el hibernoma.C: P5 53 SESSION I: NEUROSCIENCE MEDIAL PREFRONTAL WHITE MATTER DAMAGE AND NEUROPSYCOLOGICAL IMPAIRMENT IN PRETERM CHILDREN M.CÓRCOLES-PARADA1, R.Giménez-Mateo1, A.Cuesta1, E.Pérez-Hernández2, F.Mansilla3, I.Onsurbe4, P.San-Román5, A.Martínez6, R.Insausti1, J.Clayden7, C.Clark7, M.Muñoz-López1. 1 Human Neuroanatomy Laboratory, Medical School, University of Castilla-La Mancha, Albacete, Spain. 2 Developmental and Educational Psychology, Autonomous University, Madrid, Spain. 3 Radiology Service, University Hospital Complex of Albacete, Albacete, Spain. 4 Paediatric Neurology Service, University Hospital Complex of Albacete, Albacete, Spain. 5 Child Psychiatry Service, University Hospital Complex of Albacete, Albacete, Spain. 6 Neonatology Service, University Hospital Complex of Albacete, Albacete, Spain. 7 Institute of Child Health, University College London, London, United Kingdom. [email protected] The hippocampal memory system as well as the white matter (WM) is vulnerable to hypoxia/ischaemia (H/I). However, despite of the well-established connections of the hippocampal formation with the medial prefrontal cortex (mPFC), the consequences of H/I in this area and its neuropsychological implications in children born preterm, and therefore at risk of H/I, are still unclear. To explore this issue, diffusion MRI data from children born preterm (N=31) and controls (N=14) aged 8-16 years were acquired in an Optima MR 450 W General Electric 1.5T scanner and pre-processed using the FMRIB’s Diffusion Toolbox (FDT, FSL, FMRIB Software Library, Oxford, UK). Diffusion tensor imaging (DTI) data were registered to the non-diffusion-weighted (b=0) image to minimize image artefacts due to eddy currents distortions, and a mask was created in order to exclude non-brain voxels. Fractional anisotropy (FA), mean diffusivity (MD), axial diffusivity (AD) and radial diffusivity (RD) values were used as indicative of WM integrity and its maps were calculated by using the DTI-FIT in FSL. All subjects´ FA maps were aligned to the standard space FMRIB58. The average of all the data was thinned to create a ‘skeleton’ of WM representing the tracts common to all participants (threshold: FA>0.2). Each subjects’ aligned FA data were then projected onto this skeleton and the resulting data were fed into voxelwise cross-subjects analysis. The general linear model was used for group comparisons with age and gender as covariates. Statistical inference was carried out using threshold-free cluster enhancement (TFCE) with 5000 permutations, which provides p-values fully corrected for multiple comparisons across space. Changes were considered significant at p<0.05. To determine differences related to neuropsychological performance between patients and controls, a battery of standardized tests was administrated to both groups. Relative to controls, patients had widespread decreased FA in mPFC WM including areas 24, 32, 25, and 14; AD did not differ between groups, but patients had higher MD in some regions of the right hemisphere and higher RD in regions with lower FA values. The neuropsychological results indicated significant differences (ANOVA, p<0.05) between groups in total Intelligence Quotation (IQ), Verbal Comprehension, Perceptual Reasoning; Delayed Verbal Memory (history) Recall, Trail Making Test (attention); and in phonological fluency (language). These preliminary data show spatially widespread alterations in mPFC WM microstructure in children born preterm and hindered performance in neuropsychological tests. The next steps in this study are to investigate the relationship between the neuropsychological findings, especially those related with memory and attention, and the integrity of some of the main tracts, as the uncinate fasciculus (UF), by means of probabilistic tractography (TractoR, UCL). Funded by Health Research Fund, Carlos III Institute. Ref. Pl11/02860. C: P6 54 CROCETIN (FROM Crocus sativus L.) DECREASES RESISTIN CONCENTRATION DURING DIFFERENTIATION OF 3T3-L1 CELLS TO ADIPOCYTES M. CÓRCOLES*1, S. CÓRCOLES*1, FJ. MARTÍNEZ*2, V. García3, JR. Marín4, M. Burgos5, M. Carmona3, 6, E. Nava1, GL. Alonso3, S. Llorens1 1, Medical 2, School of Albacete, University of Castilla-La Mancha, Spain. Superior Technical School of Agronomic and Natural Environment Engineering, Polytechnic University of València, Spain. 3, School of Agricultural Engineering, Albacete, University of Castilla-La Mancha, Spain. 4, Regional Centre for Biomedical Research (CRIB), Albacete, University of Castilla-La Mancha, Spain. 5, Medical School and Health Sciences, University of Bretagne Occidentale, France. 6, Science and Technology Park, Albacete, Spain. *, Indicates the same contribution in the research [email protected] Adipocytes are the main cellular component of adipose tissues. Adipocytes play an important role in maintaining good health since they are insulin sensitive, store lipid, and secrete numerous cytokines (pro-inflammatory/pro-atherogenic) and adipokines (adiponectin, resistin) into the circulation. Adipocyte dysfunction is implicated in the progression of obesity, affecting expression/secretion of adipokines. Adiponectin exerts insulin sensitizing, anti-inflammatory and other beneficial effects. Low circulating levels of adiponectin is found in obese patients. Resistin, is a pro-inflammatory hormone that has been proposed to link obesity with insulin resistance and diabetes by antagonizing insulin action and correlation between resistin level and insulin resistance. It is highly expressed in omental and abdominal subcutaneous white fat. Crocetin (CCT) is a carotenoid found in the dried stigma of Crocus sativus L. This compound is a potent antioxidant possessing multiple pharmacological properties including anti-inflammatory, anti-atherosclerotic and anticarcinogenic activities. Our aim was to analyze the role of CCT on adiponectin and resistin concentration during differentiation adipocytes process. For this, several concentrations (5, 50 and 100µM) of CCT isolated from stigmas of saffron were tested during differentiation of 3T3-L1 preadipocytes into adipocytes. Two days after confluence (day 0, D0), cells were stimulated to differentiate by insulin, dexamethasone and IBMX, for 2 days (D2). Cells were then maintained with insulin medium for another 2 days (D4), followed with medium for 2 (D6) and 2 days more (D8). Stimulation of differentiation was carried out in presence of rosiglitazone 1µM. Not differentiation was carried out without insulin, dexamethasone and IBMX (D). The CCT was added at D0. Adipocyte morphology was obtained by phase-contrast photomicrograph at different stages of differentiation. Adiponectin and resistin concentrations were determined by enzyme-linked immunoabsorbent assay for quantitative measurement in culture supernatants from every stage of differentiation. Cell viability was assayed by MTT colorimetric test, at D8 by UV-vis spectroscopy. The concentration of adiponectin was not modified at any concentration of CCT. The concentration of resistin decreased with CCT 100μM at different stages of differentiation (D4, D6 and D8). On the other hand, CCT 50μM altered resistin concentration only at D6 while CCT 5μM did not affect resistin concentration at any stage. None of the concentrations used elicited cytotoxicity. We concluded that CCT did not affect adiponectin concentration. However, resistin concentration was modified by CCT and a correlation with concentration of CCT was observed. New studies of gene expression are necessary to analyze whether CCT alters resistin levels, involving transcription factors (CCAAT/enhancer-binding proteins, C/EBPs) during early (C/EBPβ and C/EBPδ) or terminal (C/EBPα and C/EBPγ) stages of adipocyte differentiation.C: P7 55 INFLUENCE OF CROCETIN ISOLATED FROM SAFFRON IN THE DIFFERENTIATION OF 3T3-L1 CELLS TO ADIPOCYTES S. CÓRCOLES*1, FJ. MARTÍNEZ*2, M. CÓRCOLES*1, V. García3, JR. Marín4, M. Burgos5, M. Carmona3, 6, E. Nava1, GL. Alonso3, S. Llorens1 1, 2, Medical School of Albacete, University of Castilla-La Mancha, Spain. Superior Technical School of Agronomic and Natural Environment Engineering, Polytechnic University of València, Spain. 3, School of Agricultural Engineering, Albacete, University of Castilla-La Mancha, Spain. 4, Regional Centre for Biomedical Research (CRIB), Albacete, University of Castilla-La Mancha, Spain. 5, Medical School and Health Sciences, University of Bretagne Occidentale, France. 6, Science and Technology Park, Albacete, Spain. *, Indicates the same contribution in the research [email protected] Adipocyte differentiation (adipogenesis) is an important process for cellular function. However, pathological adipogenesis confers abnormal expression of adipocytokines and an increased number and size of adipocytes due to lipid accumulation. This process is involved in the development of obesity. There is a growing interest in searching therapeutic approaches coming from natural products, for prevention and treatment of obesity with few adverse effects. Thus, we focused this study in the possible adipogenic differentiation-inhibitory effect of crocetin, a bioactive compound derived from saffron. For this, several concentrations (5, 50 and 100µM) of crocetin were tested during differentiation of 3T3L1 preadipocytes into adipocytes. Two days after confluence (day 0, D0), cells were stimulated to differentiate by insulin, dexamethasone and IBMX, for 2 days (D2). Cells were then maintained with insulin medium for another 2 days (D4), followed with medium for 4 days (D8). The crocetin was added at D0, to observe influence on adipogenesis. Adipocyte morphology was studied by phase-contrast photomicrography at different stages of differentiation. Lipid accumulation was visualized and quantified by fluorescence microscopy using the Nile red dye and the cell viability was assayed by MTT test, at D8. Our results shown that crocetin 50 and 100µM, but not 5µM, reduced intracellular lipids in 23, 21 and 7%, respectively. For this, we calculate the percentage of intracellular lipids relative to cellular viability for each concentration of crocetin. None of the concentrations used elicited cytotoxicity. We conclude that crocetin 50µM exerts maximum anti-adipogenic effect in 3T3-L1 adipocytes, since the reductions exerted by 50 and 100µM were not statistically different. Future analysis will focus on finding the concentration of crocetin that could exert the same maximum inhibitory effect, limiting the range from 5-50µM. All motivated on the design of strategies for prevention and treatment of obesity based on natural products, as crocetin supplements. C: P8 56 SESSION II: BIOMEDICINE AUTOPHAGY AS A CYTOPROTECTIVE RESPONSE TO ETHANOL-INDUCED DAMAGE IN RETINAL PIGMENT EPITHELIAL CELLS L. BONET-PONCE,1, M. Flores-Bellver1, JM. Barcia1, N. Martinez-Gil1, S. Saez-Atienzar3,1, J. Sancho-Pelluz1, J. Jordan3, MF. Galindo2, FJ. Romero1 1Dpt Physiology, Universidad Catolica de Valencia, Valencia, Spain, 2Unidad de Neuropsicofarmacología Traslacional, Complejo Hospitalario Universitario de Albacete, Albacete, Spain, 3Grupo de Neurofarmacología, Universidad de Castilla-La Mancha, Albacete, Spain [email protected] Retinal Pigment Epithelium (RPE) plays a crucial role in the physiology and pathophysiology of the retina due to its location and metabolism. Oxidative damagehas been demonstrated as a pathogenic mechanism in several retinal diseases, and reactive oxygen species are certainly important by-products of ethanol (EtOH)metabolism. Under EtOH exposure, autophagy has been shown to exert a protective effect in different cellular and animal models. Thus we challenged a widely accepted model of human RPE cells (ARPE-19 cells) with 80, 200, 400 and 600 mM EtOH. 24 h after EtOH addition, we found out that EtOH treatment increased GFP-LC3 puncta, starting at 80 mM. LC3-II conversion by western blot was also detected after EtOH treatment, in a concentration dependent-manner. Interestingly, using both the mRFP-GFP-LC3 plasmid and the lysosome inhibitor chloroquine, we observed and increase in autophagy flux, in a concentration-dependent manner. Mitochondrial morphology seemed to be clearly altered under EtOH exposure, leading to an apparent increase in mitochondrial fission. Consequently we noticed that mitocondrial autophagy is increased, in a concentration-dependent manner. In fact, we clearly demonstrated that mitochondrial ROS stimulates autophagy. An increase in 2',7'dichlorofluorescein fluorescence and accumulation of lipid peroxidation products, such as 4-hydroxynonenal (4-HNE), among others, were confirmed. The characterization of these structures confirmed their nature as aggresomes. Furthermore, we observed that autophagy efficiently degrades 4-HNE aggresomes. Finally, after autophagy inhibition, we noticed an over 2 fold increase in cell death, only in EtOH-treated cells. Hence, our data strongly suggest that autophagy plays a cytoprotective role in ARPE19 cells under EtOH damage, by degrading fragmented mitochondria and 4-HNE aggresomes. Herein, we describe the central implication of autophagy in human RPE cells upon oxidative stress induced by EtOH, with possible implications for other conditions and diseases. C: P9 57 IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF ADHESINS INVOLVED IN HOST-PATHOGEN INTERACTIONS AND VIRULENCE OF THE PATHOGENIC YEAST C. GLABRATA ALBERT D. DE BOER1, Emilia Gómez Molero1, Ana E. Moreno Martínez1, Antonio Mas2 & Piet W.J. de Groot1 1Laboratorium for Medical Mycology and 2Molecular Virology, Regional Center for Biomedical Research, University of Castilla–La Mancha, Albacete, Spain [email protected] Candida glabrata is a frequent cause of mucosal and life-threatening bloodstream infections in immunocompromised individuals. The cell wall of C. glabrata, consisting of a network of stress-bearing polysaccharides and an external layer of glycoproteins, plays an important role in the host-pathogen interactions that underlie the establishment of infections. Adhesion of yeast cells to host surfaces or abiotic medical materials is the first step in this process and is mediated by cell wall-localized adhesins. In the recent past, we have developed bioinformatic and mass spectrometric methodology to identify covalently-bound cell wall proteins. In a bioinformatics approach, we showed that Candida glabrata contains an exceptionally large number of at least 66 genes encoding adhesin-like GPI proteins, many of which are located in (sub)telomeric regions. These putative adhesin proteins are divided into different subfamilies, one of which is the well-studied family of Epa lectins. Mass spectrometric analysis of C. glabrata cells grown to stationary phase or in vitro biofilms identified novel adhesin-like proteins, and expression analysis showed that their genes are expressed in biofilm-embedded cells. This suggests that these proteins may be important virulence determinants of C. glabrata. Current work in our laboratory is aimed at studying the expression and wall incorporation of novel adhesins in a set of hyperadherent clinical C. glabrata isolates in order to elucidate their relation to adhesion and other virulence-related properties. We are also studying the regulation and perform functional characterizations of these novel adhesins through the use of heterologous expression systems. Proteomics studies of isolates with hyperadherence phenotypes identified novel wall adhesins that have not been encountered in laboratory strains thus these provide valuable research targets towards developing novel strategies for treatment and prevention of fungal disease. This work is sponsored by MINECO grant SAF2013-47570-P. C: P10 58 EVALUACIÓN DE LA TOXICIDAD DE SORAFENIB EN MODELOS DE CARCINOMA RENAL Ortega.Marta1, L. Serrano-Oviedo1, R. PASCUAL SERRA1, F. J. Cimas1, J. García Cano1, E. García Gil1, A. L. Alcaráz Sanabria1, G. Mondéjar Parreño1, R. Sánchez Prieto1. 1. Laboratorio de Oncología Molecular, Centro Regional de Investigaciones Biomédicas (CRIB), Facultad de Medicina de Albacete, Universidad de Castilla-La Mancha (UCLM), Albacete, España. [email protected] Sorafenib es un inhibidor multiquinasas que se desarrolló originalmente como un inhibidor de Raf-1. Posteriormente se observó su función inhibidora de otras quinasas como VEGF-R (vascular endothelial growth factor receptor) y PDEG-R (platelet derived growth factor receptor). Sus acciones terapéuticas fundamentales son reducir la angiogénesis y moderar la proliferación celular. Su uso ha sido aprobado para el tratamiento del carcinoma hepatocelular (HCC), en el angiosarcoma, en tumores del estroma gastrointestinal (GIST) en cáncer de tiroides y en el carcinoma avanzado de células renales (CCR) en los que ha fracasado la terapia previa con interferón-α o interleukina-2 (IL-2) o que se consideran inapropiados para dicha terapia. Mediante el uso de líneas celulares derivadas de carcinoma renal, ACHN y 786-O. Técnicas para estudiar la viabilidad ( MTT ) y la inducción de apoptosis (ensayos de caspasas 3 y 7). Western blot para valorar la inducción de autofagia y el uso de inhibidores de rutas de señalización celular, hemos querido evaluar la toxicidad, los mecanismos de muerte celular y las vías de señalización asociadas al tratamiento con Sorafenib. Nuestros resultados muestran por un lado que el mecanismo de muerte en estos modelos experimentales es independiente de caspasa y puede correlacionarse con autofagia y que el mecanismo de acción de Sorafenib es independiente de la vía Erk1/2 y dependiente de la ruta PI3K/AKT. Por tanto, los datos obtenidos en la respuesta que desencadena Sorafenib en las distintas líneas celulares derivadas de carcinoma de riñón abre nuevas vías para el tratamiento de esta enfermedad basadas en la inhibición de la ruta PI3K/AKT.C: P11 59 LA DISMINUCIÓN CENTRAL DE S-RESISTINA MEJORA LA RESPUESTA CENTRAL A LA LEPTINA M. RODRÍGUEZ 1, C. Pintado1, N. Gallardo1, A. Andrés1, E. Moltó1 y C. Arribas1 1. Área de Bioquímica, Centro Regional de Investigaciones Biomédicas (CRIB). Facultad de Ciencias Ambientales y Bioquímica y Facultad de Químicas, UCLM [email protected] S-resistina es una isoforma no secretada de resistina generada por splicing alternativo en tejido adiposo blanco de ratas Wistar que presenta localización preferentemente nuclear. Al analizar la presencia de esta isoforma en diferentes tejidos, comprobamos que se expresa abundantemente en hipotálamo. Con el fin de averiguar el papel de esta isoforma en este importante centro de control, hemos generado un RNAi específico para el mRNA de s-resistina que se ha inyectado intracerebroventricularmente a ratas Wistar de 3 y 24 meses. De esta manera, hemos estudiado los efectos de la disminución de la expresión de s-resistina a nivel central sobre la señal de leptina a nivel hipotalámico. Para ello, hemos analizado la expresión de determinados genes implicados en la respuesta a dicha hormona en el hipotálamo. Nuestros resultados sugieren que, posiblemente, s-resistina potencie las alteraciones moleculares que conllevan la aparición de la resistencia central a la leptina.C: P12 60 LA INHIBICIÓN DE LRRK2 MEDIANTE GSK2578215A ACTIVA LA AUTOFAGIA COMO CONSECUENCIA DEL ROS MITOCONDRIAL LIBERADO TRAS FISIONAR LA MITOCONDRIA S. SAEZ-ATIENZAR1,2,3, L. Bonet-Ponce1, C. da Casa2, J. blesa1, F. Romero1, J. Jordan3, M. Galindo2; 1Dpt Physiology, Universidad Catolica de Valencia, Valencia, Spain, 2Unidad de Neuropsicofarmacología Traslacional, Complejo Hospitalario Universitario de Albacete, Albacete, Spain, 3Grupo de Neurofarmacología, Universidad de Castilla-La Mancha, Albacete, Spain [email protected] La Enfermedad de Parkinson (EP) es el desorden motor de mayor incidencia en la población mundial. La etiologia de EP es desconocida; sin embargo, se conocen factores genéticos y ambientales que contribuyen al desarrollo de EP. Este es el caso de una kinasa, LRRK2. Aunque poco se sabe de su función biológica, recientemente se ha descubierto mutaciones en LRRK2 que conllevan a su sobreactividad en casos de parkinsonismo familiar y esporádico . Por este motivo hemos centrado nuestro estudio en la inhibición farmacológica de LRRK2 ya que resulta una prometedora diana terapeutica. Hemos usado el 2-arylmethyloxy-5-subtitutent-N-arylbenzamide, GSK257815A, a la concentración 1nM en un modelo celular dopaminérgico, la linea celular SH-SY5Y. La inhibición de la kinasa induce fisión mitocondrial mediada por Drp-1, como paso previo a la autofagia, cuyo flujo se encuentra alterado debido a la incorrecta fusión autofagosoma-lisosoma. Usando fármacos inhibidores de la autofagia hemos podido concluir que el papel de este proceso es protector frente a la toxicidad inducida por GSK2578215A. La inhibición de la kinasa induce la formación de estrés oxidativo, que hemos medido cuantificando los niveles de 4-hydroxy-2-nonenal (4-HNE). Usando el antioxidante MitoQ, los niveles de 4-HNE descienden , lo que a su vez reduce la autofagia a niveles basales, situando estas especies como segundos mensajeros entre las alteraciones mitocondrial y la autofagia.C: P13 61 SESSION II: CLINICAL RESEARCH ESTUDIO CLÍNICO Y EPIDEMIOLÓGICO DE LA BACTERIEMIA POR Campylobacter sp. I. BELTRÁN-CIFUENTES, A. Escudero-Jiménez, J. Galán-Ros, E. Escribano-Garaizábal, R. Haro-Blasco, MD. CrespoSánchez. Servicio de Microbiologia y Parasitología. Complejo Hospitalario Universitario de Albacete, Albacete, España. [email protected] Objetivo: La bacteriemia por Campylobacter es poco frecuente. El objetivo de nuestro estudio fue conocer las características clínicas y epidemiológicas de la bacteriemia por Campylobacter en nuestro área sanitaria. Material y método: Se revisaron retrospectivamente las historias clínicas de los pacientes atendidos en nuestro hospital que presentaron un hemocultivo positivo para Campylobacter sp entre marzo de 1997 y septiembre de 2014. De cada paciente se recogieron datos demográficos y clínicos: edad, sexo, mes de aparición de los síntomas, enfermedad de base, síntomas, tratamiento antimicrobiano, desenlace y sensibilidad antibiótica de las cepas aisladas. Los hemocultivos se procesaron mediante un sistema automático de monitorización continua (Bact/Alert, BioMerieux). La identificación se realizó mediante métodos convencionales o mediante técnicas de espectrofotometría de masas (MALDI-TOF MS), y el estudio de sensibilidad mediante el método estándar de difusión en agar. Resultados: Se incluyeron en el estudio 7 episodios de bacteriemia por Campylobacter sp (6 por C. jejuni y uno por Campylobacter sp) en 7 pacientes. Cinco eran varones y 2 mujeres. La edad mediana fue de 64 años (intervalo: 32 a 85 años). Un caso se produjo en 1997, otro en 2003, dos en 2013 y tres en 2014. Un caso ocurrió en mayo, dos en junio, uno en julio y tres en agosto. Todas las cepas fueron sensibles a eritromicina y sólo una a ciprofloxacino. El estudio clínico se realizó en 6 pacientes, ya que no se tuvo acceso a la historia clínica del primero. Cuatro pacientes refirieron fiebre al ingreso y tres síntomas gatrointestinales (vómitos, diarrea, dolor abdominal). En tres pacientes se documentó tratamiento específico con eritromicina o azitromicina, con buena evolución. Todos los pacientes presentaron alguna enfermedad de base: hepatopatía crónica (n=3), insuficiencia renal crónica (n=2), neoplasia (n=2), obesidad mórbida (n=1), LES (n=1). Dos pacientes fallecieron aunque la muerte no se relacionó directamente con la bacteriemia. Conclusiones: La bacteriemia por Campylobacter puede ocurrir asociada o no a gastroenteritis y presenta un pico estacional. La mayoría tuvo un desenlace favorable a pesar de las enfermedades subyacentes. La mayoría de los casos se han acumulado en los dos últimos años. C: P14 62 ¿TIENEN LOS NIÑOS PRETÉRMINO MÁS RIESGO DE PRESENTAR DIFICULTADES NEUROCOGNITIVAS? R. GIMÉNEZ MATEO1, M. Córcoles-Parada1, A. Cuesta1, E. Pérez-Hernández2, I. Onsurbe1, A. Martínez1, P. San Román1, F. Mansilla1, M. Muñoz1 1Facultad de Medicina de Albacete, UCLM. España de Psicología de Madrid, UAM. España 2Facultad [email protected] INTRODUCCIÓN: Cada vez es mayor el número de niños pretérmino (≤32 semanas de gestación) con bajo o extremo bajo peso (≤1500gr) que sobreviven al periodo neonatal gracias a los adelantos médicos. El sistema nervioso de estos niños es vulnerable y pueden aparecer dificultades neurológicas y/o cognitivas que afecten a la integración social y laboral adecuada del niño en la edad adulta. El objetivo del presente trabajo es determinar la incidencia de déficits neurocognitivos en un cohorte de niños nacidos pretérmino en el Complejo Hospitalario Universitario de Albacete entre los años 1997-2003, que ahora tienen entre 8 y 16 años de edad y son susceptibles de evaluación neuropsicológica..Estudios previos muestran que a pesar de que niños nacidos muy pretérmino y con extremo bajo peso se perciben a sí mismos subjetivamente como saludables, presentan menor estatura, peso, puntuaciones más bajas en los test de inteligencia, alteraciones morfológicas en el cerebro y más problemas cognitivos que controles de la misma edad (Halli et al., 2010). METODOLOGÍA: Muestra: La muestra está formada por un cohorte de niños prematuros de riesgo reclutado del total de pacientes nacidos o derivados al nacer en el Complejo Hospitalario Universitario de Albacete (CHUAB) durante el periodo comprendido entre el 1 de Enero de 1997 al 31 de diciembre de 2003 que en el momento de la evaluación tenían entre 8 y 16 años de edad. De un total de 101 niños participaron voluntariamente 39 niños. Como grupo control contamos con un total de 17 niños. Procedimiento: El protocolo de evaluación neuropsicológica está compuesto por: Wechsler Intelligence Scale for Children, Wechsler, 2003 (WISC); Rivermead Behavioral Memory Test, Wilson, 1985 (RBMT); Test of Memory and Learning, Reynolds and Bigler, 1994 (TOMAL); Conner´s Continuos Performance Test, Conner´s, 1994 (CPT-II); Stroop Color and Word Test, Golden, 1978 (STROOP). Análisis estadístico: Primero se ha realizado una ANOVA. Posteriormente, con aquellas variables significativas, hemos realizado una prueba X2, categorizando previamente las variables de interés. RESULTADOS: Entre los datos obtenidos más relevantes tras realizar el análisis estadístico: se encontraron diferencias significativas en el CI Total (no significativo a nivel de X 2), así como en los subíndices de Comprensión Verbal y Razonamiento Perceptivo (23.1% del total de pacientes frente a 0% de controles). También se encontraron diferencias significativas a nivel atencional medido con el CPT-II (26.3% del total de pacientes frente a ningún control). CONCLUSIONES: Aquellos niños nacidos prematuramente (≤ 32 semanas; y con bajo peso al nacer (≤ 1500 gr) tienen más riesgo de presentar complicaciones neurocognitivas en edad escolar. Presentan con más frecuencia CI más bajos, y concretamente dificultades en el subíndice razonamiento perceptivo. Además es más probable que presenten problemas atencionales. Sin embargo, la muestra de niños pretérmino estudiada, no poseen un riesgo más elevado que los controles en cuanto a presentar dificultades en funciones ejecutivas y de memoria. C: P15 63 SESSION II: NEUROSCIENCE LA DISMINUCIÓN DE LOS RECEPTORES A2A DE ADENOSINA EN ESTRIADO ASOCIADA A ALTERACIONES EN ESCALAS DE VALORACIÓN CLÍNICA DE ESQUIZOFRENIA SUGIERE UN POSIBLE SUBGRUPO MOLECULAR DE LA ENFERMEDAD S. DÍAZ-SÁNCHEZ1, I. Villar-Menéndez2, M. Blanch2, J.L.Albasanz1, T. Pereira-Veiga2, A. Monje3, L. M. Planchat3, I. Ferrer2, M. Barrachina2, M. Martín1 1. Facultad de Ciencias y Tecnologías Químicas / Facultad de Medicina de Ciudad Real, Universidad de Castilla-La Mancha, Ciudad Real. 2. Instituto de Investigación Biomédica de Bellvitge. IDIBELL. Hospitalet de Llobregat, 3. Banco de Tejidos Neurológicos-Parque Sanitario Sant Joan de Déu, CIBERSAM, Sant Boi de Llobregat [email protected] La Esquizofrenia (SZ) es una enfermedad de origen desconocido. Existen evidencias de que no es una única enfermedad puesto que hay pacientes con claras diferencias en cuanto a sintomatología, biomarcadores y curso de enfermedad. Se presenta generalmente un estado hiperdopaminérgico con elevada actividad de los receptores D2 de dopamina, aunque el estado hipodopaminérgico también ha sido propuesto. Sin embargo, existe una teoría reciente que implica la hipofunción de la señalización de la adenosina en su fisiopatología. La adenosina es un nucleósido que actúa como neuromodulador y neuroprotector en el SNC. Sus efectos están mediados por la unión a diferentes receptores, fundamentalmente de tipo A1 y A2A. Los A1 inhiben la adenilato ciclasa a través de proteínas Gi/o y los A2A activan dicha actividad enzimática, a través de la proteínas Gs. En el presente trabajo se analiza el estado de ambos receptores en muestras postmorten de putamen de pacientes con SZ, mediante ensayos de unión de radioligando, Western-Blot y PCR a tiempo real. Los resultados muestran que aproximadamente la mitad de los pacientes presentan unos niveles reducidos de A2A, mientras que los A1 se preservan. Por otro lado, se muestra cómo la metilación de DNA juega un papel en los niveles patológicos de A2A puesto que se observó un incremento en 5-metilcitosina en la región 5´UTR del gen ADORA2A en los pacientes que presentaban bajos niveles de A2A. Por último, se observa una importante correlación entre los niveles de expresión del gen A2A y las alteraciones motoras analizadas con las escalas de valoración clínica PANSS, AIMS y SAS, sugiriendo la existencia de un subgrupo de pacientes de SZ con fenotipo motor alterado que presentan una mayor afectación de A2A. Estos resultados implican a los receptores de adenosina en dicha patología y sugieren dichos receptores como una posible nueva diana terapéutica. C: P16 64 TARGETS OF AMYLOID-BETA IN THE RODENT HIPPOCAMPUS: GirK AND KCNQ CHANNELS J. MAYORDOMO-CAVA1, Juan D. Navarro-López1, Agnès Gruart2, José M. Delgado-Garcia2, Javier Yajeya3, Lydia Jiménez-Díaz1 1Neurophysiology & Behavior Lab, CRIB, School of Medicine of Ciudad Real, University of Castilla-La Mancha, Ciudad Real, Spain. 2Division of Neurosciences, Pablo de Olavide University, Seville, Spain. 3Dpt. of Physiology & Pharmacology, University of Salamanca, Salamanca, Spain. [email protected] Early stage of Alzheimer Disease (AD) is characterized by a synaptic dysfunction state induced by soluble amyloid-β peptide (Aβ) which impairs the balance between excitatory and inhibitory neurotransmission in learning and memory related regions such as hippocampus. Recently, several mechanisms of loss-of-function of sodium or potassium channels which control neuronal excitability have been proposed to contribute to the alteration in AD hippocampal inhibitory neurotransmission, and subsequent network hyperactivity and hypersynchrony. Because the hippocampus has been related to cognitive deficits in AD, the main aim of the present study was to determine the putative Aβ molecular targets in this region, as well as behavioural changes induced by Aβ intracerebroventricular injection in behaving mice. Quantitative Real-Time PCR (qPCR) was performed to analyze the expression pattern of 17 genes related with excitatory and inhibitory neurotransmission in compliance with the MIQE (Minimum Information for Publication of qPCR Experiments) guidelines. In order to make a correct interpretation of gene expression data, three putative reference genes, Actb, Gapdh and Ppia were investigated and ranked according to their expression stability by BestKeeper and NormFinder algorithms. To study the effects of hippocampal Aβ injection in behaving mice, open field test was performed. Our results indicate that Aβ modulates the expression of GirK and KCNQ potassium channels in the hippocampus, which could contribute to the excitatory/inhibitory hippocampal neurotransmission imbalance that causes aberrant network activity and early cognitive impairment found in AD models. In addition, preliminary data of behaving experiments showed differences in this test for Aβ-treated animals making our behavioral model an interesting tool to study GirK and KCNQ role in early AD. Acknowledgement: Spanish MINECO (BFU2011-22740, MHE2011-00118). C: P17 65 PREFRONTAL CHANGES OF PARVALBUMIN EXPRESSION PRODUCED BY FORCED EXERCISE DURING ADOLESCENCE IN RODENTS N. MORALES-DELGADO1,2,3, A. Toval1,2,3, E. De la Cruz-Sánchez2, J.G. Pallares2, A. Ayad1, L. Puelles1,3, J. L. Ferran1,2,3. 1. Department of Human Anatomy and Psychobiology, School of Medicine, University of Murcia, Murcia, Spain. 2. Functional Genoarchitecture group, University of Murcia, Murcia, Spain. 3. Institute of Biomedical Research of Murcia – IMIB, Virgen de la Arrixaca University Hospital. University of Murcia, Murcia, Spain. [email protected] The prefrontal cortex (PFC) belongs to a group of cortical regions that undergo important structural and functional remodeling during adolescence, a transitional window to adulthood in which a refinement of mature cognitive abilities (e.g. working memory and decision making) takes place. This maturation can be measured determining the normal development of individual GABAergic components in the PFC. In addition, emerging studies have characterized the distribution, morphology and the number of local GABAergic interneurons in the PFC based on the protein expression of three calcium-binding proteins: parvalbumin (PVALB), calretinin (CR) and calbindin (CB). Since it has been demonstrated that physical activity improves brain health and cognitive function, it may be expected that forced physical training during adolescence has a particular impact on the maturation of prefrontal GABAergic circuitry. To address this issue, we employed in situ hybridization to analyze the Pvalb gene expression pattern in the prefrontal region of 12 male Sprague-Dawley rats, divided into forced wheelrunning exercise (n = 6) and sedentary (n = 6) groups. During the adolescence period (postnatal days 35-45), the experimental group was exposed to a forced training program during 18 days, with a total of 30 sessions (morning and afternoon). Animals were sacrificed to obtain the brains after three days of completing the training. In addition, the brain sections were processed for all protocol steps at the same time and under the same conditions (reagent volume, box chamber, etc); finally they were also revealed for 8 hours. Our preliminary results detected an increased reaction signal of Pvalb mRNA in two regions of the PFC corresponding to the medial (infralimbic, prelimbic, cingulate) and dorsolateral (motor, somatosensory), as well as in other two multisensory integration areas of experimental rats: somatosensory cortex and reticular prethalamic nucleus (also involved in motor regulation). We did not detect any differences in the number of cells between runners and non-runners rats. In conclusion, our preliminary data suggest that the forced exercise through adolescence increases the level of rat parvalbumin mRNA (calcium sensor) in specific brain areas including the PFC, although the number of cells seems to be conserved. These findings, while preliminary, may be attributable to the functional maturation of PVALB interneurons in trained rats that endure through adulthood. Further experiments need to be developed (e.g. real time PCR) to demonstrate whether the level of PVALB mRNA changes and consequently its protein expression. Supported by Mapfre foundation Grant (17313). C: P18 66 SESSION II: STUDENTS EFECTO DEL COENZIMA Q SOBRE PROCESOS CLAVE ASOCIADOS A LA PATOLOGÍA DEL GLIOBLASTOMA MULTIFORME, IN VITRO A. B. AGARRABEITIA1*, E. GUTIÉRREZ GUTIÉRREZ1*, A. JIMÉNEZ1*, J. Frontiñán-Rubio2,3, J. R. Peinado2,3, F. J. Alcaín2,3 y M. Durán-Prado2,3# * Todos los autores han contribuido por igual. 1 Estudiantes del IV Curso de Iniciación a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad-Real. 2 Grupo de Estrés Oxidativo y Neurodegeneración, Departamento de Ciencias Médicas, Facultad de Medicina de Ciudad Real, Universidad de Castilla-La Mancha, Ciudad Real, España 3 Centro Regional de Investigaciones Biomédicas, Universidad de Castilla-La Mancha, España [email protected] Las células de GBM tienen un nivel incrementado de radical superóxido (O2.-), que, en parte, es responsable de varias características de la patología, como son una elevada capacidad invasiva y la resistencia a la radio y quimioterapia. Estudios previos realizados por miembros del Grupo de Estrés Oxidativo y Neurodegeneración de la Facultad de Medicina de Ciudad Real (comunicación de Javier Frontiñán-Rubio), indican que la reducción en el nivel de O2.- con el antioxidante lipofílico CoQ, es capaz de regular negativamente algunos de estos procesos. En concreto, el tratamiento con CoQ bloquea la polarización del citoesqueleto de actina, impidiendo la migración direccional e invasión de células de GBM cultivadas in vitro. Por otra parte, las células de GBM tratadas con CoQ son más sensibles al efecto de la radioterapia que las células control, lo que podría ser debido a un descenso paralelo en algunas enzimas antioxidantes. Además, las células de GBM resisten el estrés producido por el quimioterápico temozolomida (TMZ), mediante la inducción de un mecanismo de autofagia “protectora”. Este último proceso, asociado a un nivel elevado de O2.-, permite a las células de GBM evadir la apoptosis e incluso volver a entrar en ciclo cuando el TMZ es eliminado y las condiciones del entorno vuelven a ser favorables. Según estos datos previos, los objetivos planteados para este trabajo fueron, 1) analizar el efecto del CoQ sobre la capacidad de las células de GBM para degradar el sustrato, 2) estudiar el efecto del CoQ sobre el nivel de catalasa y 3) determinar el efecto de los tratamientos con TMZ y CoQ sobre el nivel de autofagia. Nuestros resultados, preliminares, indican que el tratamiento con CoQ reduce en más de un 60% la capacidad de las células de GBM U251 de degradar gelatina, in vitro, sugiriendo que la reducción de O2.- no sólo impide la polarización del citoesqueleto de actina, sino que además disminuye la capacidad invasiva mediante otros mecanismos en estudio. Además, la actividad catalasa se redujo en un 50% al tratar con el antioxidante, lo que permite explicar la mayor sensibilidad de estas células a la radioterapia. Por último, observamos que el quimioterápico TMZ, incrementa el nivel de autofagia en un 75% respecto a células control. Este incremento fue bloqueado completamente en células tratadas con CoQ. En resumen, nuestros resultados indican que el CoQ regula procesos clave para la progresión del GBM, in vitro. Aunque son necesarios más experimentos, su efecto inhibitorio sobre la capacidad celular de degradar el sustrato, la actividad catalasa y la autofagia inducida por TMZ, la hace una molécula idónea en futuras terapias combinadas. C: S1 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de primer curso del grado de Medicina. 67 IMPACTO DE UNA INTERVENCIÓN EN EL ÍNDICE DE CONTAMINACIÓN DE LOS HEMOCULTIVOS M.P. ALMODÓVAR RIVERA1; S. Illescas Fernández-Bermejo1,2 ; J.C. González Rodrígue 2; M.D. Romero Aguilera 2, 1: Facultad 2:Servicio de Medicina de Ciudad Real, Universidad de Castilla-La Mancha, Ciudad Real, España. de Microbiología, Hospital General Universitario de Ciudad Real, Ciudad Real, España. [email protected] Introducción: El diagnóstico de los pacientes con bacteriemia/fungemia permite un tratamiento antimicrobiano dirigido. La contaminación de las botellas de hemocultivos puede llevar a falsos diagnósticos y tratamientos antibióticos innecesarios, con riesgo de toxicidad farmacológica, selección de resistencias, e incremento de costes. Además contaminantes de rápido crecimiento pueden enmascarar la presencia de los auténticos responsables del cuadro clínico. La contaminación de muestras supone un incremento de costes: realización de pruebas y sobrecarga de trabajo. Así, la reducción de la contaminación al índice recomendado, menor a 3%, no solo implicaría una mejora en el tratamiento del paciente, sino una mayor eficiencia en el uso de recursos. Objetivo: Reducir el índice de hemocultivos contaminados y medir el impacto de una intervención informativa. Material y métodos: Revisamos los resultados de los hemocultivos recibidos en Microbiología del Hospital General Universitario de Ciudad Real en el mes de mayo de 2014, y los recibidos entre 19 de junio y el 20 de julio. Se consideró que las botella de hemocultivo se habían contaminado cuando se aislaron en una única muestra microorganismos que forman parte de la microbiota de la piel (Staphylococcus coagulasa negativa, Bacillus spp, Propionibacterium acnes, Corynebacteriun spp,..) La intervención se realizó el día 18 de junio, mediante: Carta informativa dirigida al personal de enfermería, difundida a través de la dirección y subdirección de Enfermería en la que se recordaba la importancia de este tipo de muestras y la repercusión de la contaminación de los hemocultivos. Se indicaba tasa de contaminación de mayo y recordatorio de medidas adecuadas de toma de muestra Reunión con Pediatría. Para el análisis de datos se utilizó Epidat 3.1. y SPSS 19.0 Resultados: Los resultados obtenidos fueron los siguientes: En el caso de las botellas pediátricas: observamos un aumento del índice de contaminación tras la intervención, seguido de una reducción. El indice del último periodo estudiado es menor al inicial, pero la diferencia no es estadísticamente significativa Y en las botellas adultas: Los datos obtenidos nos muestran que no existen diferencias estadísticamente significativas entre el antes y el después de la intervención. C: S2 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de primer curso del grado de Medicina. 68 INTRODUCCIÓN AL ESTUDIO MORFOFUNCIONAL DEL HIPOCAMPO Y OTRAS REGIONES CEREBRALES DEL RATÓN O. CABAÑAS TENDERO1, L. Jiménez Díaz1, JD. Navarro López1, FJ. Sancho Bielsa1 1. Universidad de Castilla-La Mancha, Facultad de Medicina de Ciudad Real/Centro Regional de Investigaciones Biomédicas, Laboratorio de Neurofisiología y comportamiento, Ciudad Real, España. [email protected] Introducción: El hipocampo es una estructura del cerebro que forma parte del sistema límbico y de la arquicorteza. Localizado en la parte medial de los lóbulos temporales, juega un papel vital en los procesos de la memoria, aprendizaje y comportamiento. Estructuralmente está formado por el asta de Amonn y el giro dentado. El asta de Amonn se divide a su vez en cuatro regiones: CA1, CA2, CA3 y CA4, que se diferencian entre sí por tamaño y número de células nerviosas. Las últimas investigaciones han demostrado su afectación en fases tempranas de la enfermedad de Alzheimer. Es por esto que su estudio resulta de gran interés, ya que la identificación de las alteraciones que en él se producen podría permitir un diagnóstico temprano de dicha enfermedad. Material: Material neurológico post-mortem y material neurológico vivo procedente de ratones pertenecientes al Laboratorio de Neurofisiología y Comportamiento, de la Facultad de Medicina de Ciudad Real. Métodos: tinción de Nissl, inmunohistoquímica con anticuerpos antiparvaalbúmina, registro electrofisiológico, fotografiado, observación y obtención de conclusiones. Resultados obtenidos: observación e identificación detallada de las diferentes regiones del hipocampo, núcleos cerebelosos, núcleos del tronco del encéfalo, colículos mesencefálicos, neuronas piramidales parvaalbúmina positivas. Interpretación del registro electrofisiológico obtenido. C: S3 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de primer curso del grado de Medicina. 69 FRECUENCIAS ALÉLICAS DE LOS ANTÍGENOS DE HISTOCOMPATIBILIDAD EN CASTILLA-LA MANCHA M. CÓRDOBA GARCÍA-RAYO, E. Fernández Grande, M. Ruiz, JM. Urra 1. Inmunología. Laboratorio. Hospital General Universitario de Ciudad Real, España. [email protected] Introducción: Las moléculas del complejo principal de histocompatibilidad en humanos (HLA) se codifican en el brazo corto del cromosoma 6. Sus principales genes se definen como HLA de clase I (A, B y C) y de clase II (-DR, -DQ y -DP). Cada uno de estos genes posee un elevado polimorfismo alélico en las diferentes poblaciones. Objetivo: El objetivo del estudio es describir las frecuencias alélicas de los antígenos de histocompatibilidad de la población de Castilla-La Mancha y compararla con la población española. Metodología: Se estudiaron los antígenos HLA en donantes voluntarios de médula ósea procedentes de Castilla La-Mancha: 467 pacientes para locus A, 465 pacientes para locus B, 47 pacientes para locus C y 519 pacientes para locus DRB1. Los HLA se determinaron por RSSO (Reverse Sequence-Specific Oligonucleotide) a partir de la amplificación de dos exones de los antígenos A, B, C y un exón del antígeno DRB1. La comparación de frecuencias alélicas entre las dos poblaciones se realizó mediante el test estadístico chi-cuadrado de Pearson. Resultados: En el presente trabajo, presentamos las frecuencias de todos los alelos HLA para los locus A, B y DRB1 en la población de Castilla–La Mancha. Al comparar estas frecuencias con una muestra publicada de la población mediterránea, se observan diferencias significativas (p<0.05) para los siguientes alelos: Alelos HLA A*02 A*26 A*29 DRB1*11 DRB1*13 C-LM 0.46 0.06 0.14 0,14 0,12 España 0,58 0,01 0,22 0,10 0,18 Para el resto de alelos no se encontraron diferencias significativas. Conclusiones: Se presenta el primer trabajo con la descripción de las frecuencias de los alelos HLA en la población de Castilla-La Mancha. Se describen las diferencias para determinados alelos entre la población de Castilla-La Mancha y la descrita en la bibliografía para población española. Bibliografía: Allelic and haplotypic HLA frequency distribution in Spanis hematopoietic patients. Implications for unrelated donor searching A. Balas, F. García-Sánchez & J. L. Vicario Tissue Antigens 2010 77, 45–53 C: S4 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de primer curso del grado de Medicina. 70 THE ROLE OF OBSESSION IN SELF-ESTEEM AND WELL-BEING A. DE HARO 1, D. Díaz1, M. Stavraki1, A. Cancela2, P. Briñol2 1Universidad de Castilla- La Mancha; 2 Universidad Autónoma de Madrid [email protected] How does metacognition influence self-esteem in an obsessive context? Checking is a very common compulsion (make sure whether an act has been performed properly). Obsessive-compulsive patients often display reduced metacognitive confidence (MC). This research aims to explore the relationship between MC and self-steem, in people who are high vs. low in obsessive cognitive style. In the study design two independent variables were analysed: Direction of thoughts (positive vs. negative) and Obsessive cognitive style (High vs Low). As the dependant variable self-steem was screened with the Rosemberg Self-steem Scale (6 items, =.819). The procedure taken was to manipulate direction of thoughts, manipulate obsessive cognitive style (checking vs. non-checking), self-steem report and debriefing. Results indicate that: The direction of thoughts significantly influences self-esteem only for those who are high in checking. We argue that this is due to double doubt, which makes people high in checking feel more confident of their thoughts. C: S5 (IMPORTANT: This poster is an undergraduate work made at the context of the “IV Programa de Introducción a la Investigación” offered by UCLM Ciudad Real – Facultad de Medicina) 71 VIABILIDAD CELULAR IN VITRO Y TÉCNICAS INMUNOHISTOLÓGICAS EN CEREBRO COMPLETO P. JIMÉNEZ FERRER*1, G.M. GARCÍA-JIMÉNEZ*1, J.L. Albasanz2, I. Ballesteros-Yáñez2, M.Martín2 1. Alumnas 1º Medicina, Curso Introducción a la Investigación, Facultad de Medicina de Ciudad Real, UCLM, Ciudad Real, España. 2 . Dpto de Química Inorgánica, Orgánica y Bioquímica, Facultad de Medicina de Ciudad Real, CRIB, UCLM, Ciudad Real, España. *Ambas autoras han colaborado por igual en la realización de este trabajo. [email protected] [email protected] Resumen: Como estudiantes del primer curso del Grado de Medicina participamos en un Programa de Introducción a la Investigación en el área de Bioquímica y Biología Molecular con el objetivo de conocer cómo es el día a día en un laboratorio y, de paso, aprender las técnicas que en él se manejan. En el cerebro existen distintos tipos celulares con distinta vulnerabilidad a sustancias químicas endógenas y exógenas. Los efectos en el cerebro de algunas de esas sustancias químicas son objeto de estudio en el Grupo de Neuroquímica de Ciudad Real. Entre esas sustancias se encuentran la cafeína, que es antagonista de receptores de adenosina y el glutamato, que es el principal neurotransmisor excitador del cerebro pero que se puede comportar como neurotóxico cuando se encuentra en cantidades elevadas. Uno de los propósitos de este trabajo fue realizar un estudio de viabilidad celular en cultivos tratados con cafeína y glutamato. Para ello, descongelamos las células, realizamos un contaje para posteriormente plaquearlas en su medio correspondiente a la densidad adecuada y, tras los tratamientos realizar un estudio de la viabilidad celular. Gracias a ello aprendimos el manejo de una línea celular de glioblastoma, la preparación de todas las disoluciones y medios necesarios para la realización de los experimentos y el estudio de viabilidad celular mediante la técnica del MTT. Otro de los objetivos fue realizar una visualización microscópica de preparaciones de cerebro de rata. Para ello, tras anestesiar a las ratas y perfundirlas se les extrajo el cerebro. Se obtuvieron rodajas de 100 micras con el vibratomo. Para la descripción microanatómica de los tipos celulares y regiones cerebrales sensibles a estas sustancias usamos técnicas histoquímicas e inmunohistoquímicas usando anticuerpos específicos frente a NeuN y GFAP para distinguir células neuronales y de glía. Finalmente las preparaciones se observaron al microscopio. Con motivo de nuestra estancia también fuimos partícipes aunque no responsables de todo el proceso llevado a cabo para hacer inyecciones intracelulares. C: S6 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de primer curso de grado de Medicina. 72 AFECTACIÓN DIFERENCIAL EN HEMISFERIOS CEREBRALES EN LA ENFERMEDAD DE PARKINSON: ESTUDIO DEL SISTEMA OLFATIVO HUMANO ROSTRAL MC. MARTÍN-ALBO1, M. Mora-Loro1, A. Rojas-Sánchez1, A. Martínez-Marcos1, D. Saiz-Sánchez1, A. FloresCuadrado1, C. De la Rosa-Prieto1, I. Úbeda-Bañón1 1. Universidad de Castilla-La Mancha, Facultad de Medicina de Ciudad Real/Centro Regional de Investigaciones Biomédicas, Laboratorio de Neuroplasticidad y Neurodegeneración, Ciudad Real, España. [email protected] Introducción: La enfermedad de Parkinson (EP) es la segunda enfermedad neurodegenerativa más prevalente. Está incluida en el grupo de las sinucleinopatías (caracterizadas por inclusiones citoplasmáticas de α-sinucleína). Alrededor del 95 % de los casos de EP son de origen idiopático, el 5% restante tiene causas genéticas conocidas. Caracterizada por síntomas motores (temblor de reposo, rigidez y bradicinesia) a partir de los que se realiza el diagnóstico clínico; el síntoma más frecuente al inicio de la EP es el temblor, cuya aparición es ASIMÉTRICA Y UNILATERAL. Recientemente se han descubierto síntomas no motores (periodo prodrómico) que anteceden a los motores en años e incluso décadas, entre ellos la hiposmia (pérdida de olfato), transtornos de conducta durante el sueño, apatía, depresión. Neuropatológicamente la EP es una proteinopatía, en la que se generan agregados: cuerpos y neuritas de Lewy a partir de ubiquitina y α-sinucleína. Estos agregados aparecen de forma temporal y predecible, en distintas zonas del sistema nervioso, de acuerdo a una secuencia neuropatológica de seis estadios, comenzando en estructuras olfativas. Braak y colaboradores han descrito 6 fases en la EP, en la fase 1 está afectado el bulbo olfatorio, en la fase 3 estaría afectada la sustancia negra, causa de los trastornos motores. Objetivos: 1. Estudiar la afectación diferencial en el bulbo olfativo humano derecho e izquierdo en posibles estadios tempranos de la EP, para ello se cuantificará y analizará la expresión de α-sinucleína en el bulbo derecho e izquierdo de un mismo caso, no diagnosticado de EP, pero que presenta depósitos de α-sinucleína. 2. Estudiar la distribución diferencial de calretinina en bulbo olfativo y pedúnculo olfativo derechos e izquierdos en casos control y en estadios tempranos de la EP. 3. Analizar las diferencias de vulnerabilidad de la calretinina frente a la α-sinucleína entre bulbo olfativo derecho e izquierdo en estadios tempranos de la EP. Material: Material neurológico post-mortem procedente de los donantes de la Facultad de Medicina de Ciudad Real. Métodos: tinción de Nissl, doble inmunofluorescencia, fotografiado, cuantificación y análisis estadístico. Resultados obtenidos: 1.La expresión de calretinina en pedúnculo olfativo derecho e izquierdo de pacientes controles no muestra diferencias apreciables. 2.La expresión de calretinina en bulbo olfativo derecho e izquierdo en estadios tempranos de la EP parece ser asimétrica. 3.Los niveles de calretinina en bulbo olfativo descienden en estadios tempranos de la EP. 4.Los datos muestran que la afectación por αsinucleína en bulbo olfativo humano derecho e izquierdo en estadios tempranos de la EP es asimétrica. 5.La vulnerabilidad frente a la α-sinucleína de las células que expresan calretinina es asimétrica en el bulbo olfativo en estadios tempranos de la EP. C: S7 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de primer curso del grado de Medicina. 73 ALFA-SINUCLEÍNA EN EL HIPOCAMPO HUMANO M. MORA-LORO, Mc. Martín-Albo, A. Rojas-Sánchez, C. De la Rosa-Prieto, I. Úbeda-Bañón, D. Saiz-Sánchez, A. Martínez-Marcos, A. Flores-Cuadrado Universidad de Castilla-La Mancha, Facultad de Medicina de Ciudad Real/Centro Regional de Investigaciones Biomédicas, Laboratorio de Neuroplasticidad y Neurodegeneración, Ciudad Real, España. [email protected] Introducción: Las sinucleinopatías incluyen una serie de trastornos neurodegenerativos que se caracterizan histológicamente por depósitos anormales de α-sinucleína (cuerpos y neuritas de Lewy) en las neuronas o células gliales. Entre ellas destacan: la enfermedad de Alzheimer, la atrofia multisistémica y la enfermedad de Parkinson. La enfermedad del Parkinson (EP) es una enfermedad neurodegenerativa de carácter idiopático que ocupa el segundo lugar entre las enfermedades neurodegenerativas de mayor prevalencia. Se caracteriza por la degeneración y la pérdida de hasta el 70% de las neuronas dopaminérgicas de la sustancia negra del cerebro. La pérdida de la dopamina produce patrones anormales de activación nerviosa dentro del cerebro que causa deterioro en el movimiento, dando lugar a los síntomas motores característicos de la EP como son el temblor en reposo, la rigidez y la bradicinesia. Estos síntomas son utilizados para el diagnóstico clínico. Sin embargo, existen a su vez síntomas no motores asociados que nos pueden servir para determinar el curso clínico de la enfermedad, en función de las áreas implicadas y la proporción de depósitos de αsinucleína presentes en las mismas. Entre ellos destacan la disfunción olfativa, el estreñimiento, trastornos del sueño, apatía, depresión y problemas cognitivos como la demencia. Neuropatológicamente, Braak y colaboradores describieron una secuencia neuropatológica de 6 estadios en la EP: en la fase 1 están afectados el bulbo olfatorio y el núcleo dorsal motor del nervio vago, en la fase 3 estaría afectada la sustancia negra y la amígdala central y en la fase 4 el hipocampo, área de estudio de esta investigación. Objetivos: 1. Estudio de la citoarquitectura del hipocampo, capas que lo constituyen. 2. Estudio de la expresión diferencial de la α-sinucleína en las distintas capas del giro dentado y en CA3, CA2 y CA1. Material: Material neurológico post-mortem procedente de los donantes de la Facultad de Medicina de Ciudad Real. Métodos: tinción de Nissl, inmunohistoquímica, fotografías con microscopio de luz transmitida, recuento celular con ImageJ y análisis estadístico con el programa SPSS. Resultados obtenidos: No se observa expresión de α-sinucleína en el grupo control independientemente de la zona estudiada en el hipocampo (giro dentado, CA3, CA2 y CA1). Se infirieron diferencias en la expresión media del número total de cuerpos de Lewy en función de la zona analizada en el hipocampo del paciente con EP: mayor expresión en CA2 y CA3. No obstante, no se observaron diferencias en la expresión media del número total de neuritas entre las distintas zonas del hipocampo del paciente con EP. C: S8 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de primer curso del grado de Medicina. 74 TÉCNICAS DE LABORATORIO UTILIZADAS EN LA BÚSQUEDA DE MARCADORES DE RESPUESTA A CIRUGÍA BARIÁTRICA A. RUIZ-SANTAQUITERIA1; J.M.Pérez-Ortiz2; J.R.Muñoz-Rodríguez2 1. 2. Facultad de Medicina de Ciudad Real (Universidad de Castilla-La Mancha), España Unidad de Investigación Traslacional (UIT), Hospital General Universitario de Ciudad Real, España [email protected] La obesidad es una enfermedad que no sólo está asociada con un aumento en la morbilidad, la mortalidad y la reducción de la esperanza de vida, sino que también conduce a un aumento en la incidencia de la diabetes, la hipertensión y la dislipidemia (Zhibo Gai et al, Biochim Biophys Acta, 2014). Por ello, se ha evaluado el potencial diagnóstico y el valor predictivo de respuesta de una serie de marcadores bioquímicos y genéticos en pacientes obesos mórbidos sometidos a cirugía bariátrica en el Hospital General Universitario de Ciudad Real y en controles normopesos. Algunos de estos biomarcadores son citoquinas y neuropéptidos que desempeñan un papel relevante como moléculas neuroinflamatorias en el SNC y provocan alteraciones del comportamiento basadas en la capacidad de respuesta y recompensa (Burger and Stice, Curr Drug Abuse Rev 4: 182-189, 2011). Las técnicas utilizadas en el proyecto y llevadas a cabo durante el programa de prácticas fueron: aislamiento de DNA, PCR (Polymerase Chain Reaction), electroforesis en gel de agarosa, HRM (High Resolution Melting) y ELISA (Enzyme-Linked-Immunosorbent Assay). C: S9 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de 1er curso del Grado de Medicina. 75 TERAPIA INDIVIDUALIZADA CONTRA CÉLULAS MADRE TUMORALES OVÁRICAS EN ENFERMAS CON CÁNCER DE OVARIO M. SÁNCHEZ CAMBRONERO1, D. Padilla Valverde2, P. Villarejo Campos2, E. García Santos2, J. Martín Fernández2 1. 2. UCLM, Facultad de Medicina, Ciudad Real, España Hospital Universitario General de Ciudad Real servicio de Cirugía, Ciudad Real, España [email protected] Las células madre tumorales son extremadamente resistentes a fármacos quimioterápicos. En contacto con estos quimioterápicos las células tumorales troncales no proliferan, permaneciendo en un estado de latencia. Tras finalizar el tratamiento quimioterápico, estas células vuelven a su actividad enormemente proliferativa, permitiendo la recidiva de la enfermedad. El uso conjunto de hipertermia con la quimioterapia intraabdominal consigue un doble efecto beneficioso. Por un lado, efecto citotóxico directo del calor sobre las células tumorales y por otro, un aumento de la penetrabilidad en peritoneo de los quimioterápicos y pared visceral. Para intentar erradicar las células troncales tumorales hemos desarrollado un programa de terapia individualizada en enfermas con cáncer de ovario avanzado mediante el aislamiento, diagnóstico y tratamiento de células troncales tumorales ováricas CD133 + CD44+ tras cirugía citorreductora y quimiohipertermia intraabdominal cerrada con recirculación de CO2. C: S10 Este trabajo ha sido realizado en el IV Programa de Introducción a la Investigación de la Facultad de Medicina de Ciudad Real para alumnos de primer curso del grado de Medicina. 76 CHARACTERISATION OF THE REDOX STATE OF CRYPTIC CYSTEINES IN TITIN C. SUAY-CORREDERA 1, E. Herrero-Galán 2, E. Bonzón-Kulichenko 3, J.Vázquez 3, J.Alegre-Cebollada 2 1. 2. University of Valencia, Biochemistry and Biomedicine Student, Valencia, Spain CNIC (Centro Nacional de Investigaciones Cardiovaculares), Department of Vascular Biology and Inflammation, Madrid, Spain 3. CNIC (Centro Nacional de Investigaciones Cardiovaculares), Service of Proteomics, Madrid, Spain [email protected] Titin is a large sarcomeric protein which determines heart muscle passive elasticity and plays a role in left ventricle relaxation during diastole. This protein is especially important for a proper heart activity as it modifies muscular elasticity according to physiological needs: in a long term, several titin isotypes with different elastic properties are made by alternative splicing; however, in the short term (as during a heart beat) titin modifies its length thanks to unfolding/refolding of its inmunoglubulin (Ig) domains and extension/recoil of its unstructured domains. According to this, unfolding of Ig domains implies a lower titin stiffness. The study of the unfolding/refolding kinetics of Ig domains is crucial for the determination of the mechanical properties of the muscle and their alteration in different heart diseases. During unfolding, different residues can be modified, what will affect the mechanical properties of titin. For instance, cryptic cysteines buried inside Ig domains could be interacting through disulfide bonds while these remain folded but the unfolding of titin can expose those cysteines to different post-translational modifications, which could affect the elastic properties of the protein. The creation of a map of post-translational modifications in the sequence of titin during extension of the heart muscle would be useful in the understanding of the modification of the elastic properties of the protein. The first step towards the creation of this map should be the description of the redox state of these cysteines to see whether disulfide bonds exist in these domains in vivo and how they can be affected during the unfolding of Ig domains. C: S11 77 SESSION III: BIOMEDICINE BASES MOLECULARES DE LA RADIO SENSIBILIDAD MEDIADA POR E1A 1 1 1 1 1 FRANCISCO J. CIMAS María Llanos Valero , Laura Arias , Pedro Melgar-Rojas , Elena García-Gil , Juan Luis 1 1 1 1 Callejas-Valera , Jesús García Cano , Leticia Serrano-Oviedo , Miguel Ángel de la Cruz-Morcillo , Raquel Pascual2 1 Serra1, Marta Ortega-Muelas1 Isabel Sánchez-Pérez , Ricardo Sánchez-Prieto ,* 1Laboratorio 2 de oncología Molecular; Centro Regional de Investigaciones Biomédicas; University of Castile-La Mancha; Albacete, Spain. Department of Biochemistry; School of Medicine; Universidad Autónoma de Madrid; Madrid, Spain and Biomedical Research Institute of Madrid; Madrid CSIC/UAM; Madrid, Spain [email protected] El glioblastoma multiforme es el tumor primario del sistema nervioso central más común. Su tratamiento principal es la combinación de quimioterapia y radioterapia; por lo que se planteó si el gen E1a podría jugar un papel terapéutico como radiosensibilizante. E1a es un gen adenoviral que ha demostrado tener un comportamiento como supresor de tumores en función del contexto celular en que se expresa. Se infectaron células de la línea celular U87-MG derivadas de glioblastoma radioresistente con lentivirus portadores del gen E1a y se evaluó su sensibilidad a radiación así como las posibles dianas que posibilitarían éste mecanismo, comparándose con el comportamiento de otras líneas celulares de glioblastoma. A la vista de los resultados, se ha propuesto un modelo de cómo efectivamente E1a sería capaz de producir radiosensibilidad a través de la acción de Chk1 mediante la estabilización de c-Myc, lo que abre nuevas posibilidades terapéuticas y arroja luz sobre el papel de c-Myc en la actividad biológica de E1a. C: P19 78 EL 5-FLUOROURACILO AUMENTA LA SENSIBILIDAD DE LAS CÉLULAS DE CÁNCER DE COLON HCT116 FRENTE A RADIACIÓN A TRAVÉS DE p38 MAPK GARCÍA–CANO, J1; de la Cruz–Morcillo, MA 1; Valero, MLL 1; Cimas, F.J. 1; Serrano–Oviedo, L 1; Pascual –Serra, R1; Ortega–Muelas, M1; Arias – González, L 1; Callejas – Valera, JL 1; García – Gil, E 1; Sánchez – Prieto, R. 1 1Laboratorio de Oncología Molecular, Centro Regional de Investigaciones Biomédicas (CRIB) Unidad de Biomedicina (CSIC-UCLM), Facultad de Medicina, Universidad de Castilla – La Mancha (UCLM). Albacete, España. [email protected] , [email protected] El 5 - Fluorouracilo (5FU) es uno de los fármacos quimioterapéuticos más utilizados en el tratamiento del cáncer colorrectal. Juntamente con la quimioterapia, la radioterapia es una herramienta muy útil para el tratamiento de este tipo de cánceres. En este trabajo, demostramos, en el modelo HCT116, que la combinación de 5FU con radiación mejora los resultados del tratamiento reduciendo la viabilidad de las células tratadas. Además, nuestros resultados indican que esta radiosensibilización tiene lugar a través de la ruta de señalización de p38 ya que el inhibidor SB203580, específico de esta kinasa, revertía el efecto radiosensibilizador del 5FU. Según nuestros experimentos, este efecto es independiente de la señalización de p53. Sin embargo, su reversión inhibiendo p38 depende de un contexto en el que p53 no se encuentre mutada ni delecionada. C: P20 . 79 HYPO- AND HYPERMORPHIC FOXC1 MUTATIONS IN DOMINANT PRIMARY CONGENITAL GLAUCOMA MEDINA-TRILLO C.1,2, Ferre-Fernández J.1,2, Aroca-Aguilar J.D1,2, Morales L2,3, Méndez-Hernández C-D2,3, Ayuso C4, García-Feijoo J.2,3, Escribano.J.1,2 1Human Genetics Laboratory. Medical School. Castilla-La Mancha University, Albacete. Spain. Research Network on Age-Realted Ocular Pathology, Visual and Life Quality. RETICS. Carlos III Health Institute, Madrid. Spain. 3Ophthalmology Service. San Carlos Hospital Research Institute. Complutense University of Madrid. Spain. 4Ophthalmology Service. Jiménez Díaz Fundation, CIBERER, Madrid. Spain. 2Cooperative [email protected] Purpose: Primary congenital glaucoma is the commonest childhood glaucoma and it is produced by developmental abnormalities of the anterior segment of the eye. Autosomal-recessive inheritance is well documented in this disease, mainly due to CYP1B1 mutations, but dominant cases have also been reported. FOXC1 gene encodes a member of the FOX class of transcription factors, which are involved in the regulation of ocular development. Mutations in this gene cause a spectrum of autosomal dominant and ocular anterior eye segment defects, including Axenfeld-Rieger syndrome, with increased glaucoma risk and varying degrees of iris or extra-ocular abnormalities. Our main purpose in this work has been to evaluate the role of FOXC1 sequence variations in dominant primary congenital glaucoma. Methods: Eleven probands diagnosed with primary congenital glaucoma, generally before 3 years, were recruited at the Ophthalmology Department of “Hospital Clínico San Carlos” (Madrid, Spain). The presence of FOXC1 variants was determined by automatic Sanger Sequencing. The identified FOXC1 variants were cloned into the expression vector pcDNA3.1 (-). Transcriptional activity of the identified variants, transiently expressed in the HEK-293T human cell line, was assessed by luciferase assays. Results: Three dominant probands carried three different coding heterozygous FOXC1 mutations. All these mutations were associated with bilateral glaucoma and variable disease onset ranging from 1 to 30 years in the index cases. The functional study showed that two of the identified mutations increased the transcriptional activity, (ranging approximately from 160% to almost 200%) and were classified as hypermorphic variants. In contrast, the activity of the remaining variant was only 20% compared to the wild-type protein, showing that it is a hypomorphic allele. Conclusions: Rare coding FOXC1variations of are present in 27.3% of the studied families, diagnosed with dominant PCG. These results provide strong evidence for the role of FOXC1 hypo- and hypermorphic variants in primary congenital glaucoma with variable age onset. C: P21 80 EVALUATION OF INDUCIBLE LENTIVIRAL EXPRESSION SYSTEMS BASED ON TET-ON TECHNOLOGY IN HCT116 CELL LINE R. PASCUAL SERRA1, F. J. Cimas1, M. Ortega Muelas1, J. García Cano1, L. Serrano-Oviedo1, E. García Gil1, A. L. Alcaráz Sanabria1, G. Mondéjar Parreño1, R. Sánchez Prieto1 1. Laboratorio de Oncología Molecular, Centro Regional de Investigaciones Biomédicas (CRIB), Facultad de Medicina de Albacete, Universidad de Castilla-La Mancha (UCLM), Albacete, España. [email protected] The need for expression systems not involving constitutive expression has become a major requirement in most experimental approaches for studies in cell culture and in vivo. The objective of this project was to set up a Tet-On expression system based on lentiviral vectors and evaluate its functionality in cell culture. For this purpose, the HCT116 cell line, with tumorigenic capacity, was used. HCT116 cell line with stable expression of rtTA was generated by infection with a lentivirus expressing the inducible reverse tetracycline transactivator (rtTA). Then, this line was infected with a second lentivirus carrying VENUS under a tetracycline inducible promoter. Once generated the line with the two vectors, its inducibility was evaluated by exposure to doxycycline. The rtTA expression was assessed by qRT-PCR and the VENUS expression was evaluated by fluorescence microscopy, western blot and flow cytometry. The reasons of choosing VENUS were that it is a safe and easy detection protein (by microscopy, cytometry and western blot). This project has allowed evaluating the potential of this type of system and will be the basis for studies of genes with biological interest, such as those encoding cell signalling proteins (MAPK, AKT) or autophagy proteins. C: P22 81 SESSION III: NEUROSCIENCE AUTOPHAGY MODULATION AND DEGRADATION IN NEURONS: ROLE IN AD MICE MODELS I. BENITO-CUESTA1, F. Wandosell1, 2. 2. Centro 1. Centro de Biología Molecular Severo Ochoa (CBMSO-UAM), Madrid, Spain. de Investigación Biomédica en Red sobre Enfermedades Neurodegenerativas (CIBERNED), Madrid, Spain. [email protected] Autophagy is a constitutive and important process in neurons which, as postmitotic cells, cannot dilute harmful organelles or excess/toxic proteins through cell division. They may require a delicate balance between the formation and clearance of autophagic vesicles (AVs), remaining at low levels to maintain the homeostasis. This process appears to be damper in some neurodegenerative diseases such as Alzheimer (AD) or Parkinson diseases. In AD some data revealed that AVs accumulate within dystrophic neurites, suggesting a progressive dysfunction of macroautophagy and a failed maturation to lysosomes. However, there is some controversy about the role of autophagy in AD as it has been described as a degradative route for Aβ peptide but also as responsible for its production. The interest of our group is to analyse more deeply this process in normal neuronal function and in transgenic mice B6.Cg-Tg (APPSwe, PSEN1dE9)/J; denoted as APP/PS1), a well-known AD model. Thus, our data suggests that some degradation systems may be saturated in extracts obtained from AD patients and in the AD mouse model (APP/PS1). We have analysed the well-established inductor of autophagy in cell lines rapamycin, even though there is some controversy about its effect in neurons. We have observed a slight increase in autophagy flux and degradation in neuronal systems induced by rapamycin, as well as a decrease of the Aβ levels secreted by cultured neurons from APP/PS1 mice, suggesting that rapamycin would have a possible therapeutic role of modulating autophagy in the disease. However, based on our in vivo data, we couldn’t appreciate a significant reduction in Aβ levels (1-40 or 1-42) in APP/PS1 mice when treated with rapamycin for two months. C: P23 . 82 SESSION III: CLINICAL RESEARCH DESCRIPCIÓN GENOTÍPICA DE LOS VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO EN EL ÁREA DE SALUD II DE LA REGIÓN DE MURCIA J. GALÁN ROS; AL. Martín Rodríguez; A. Buendía Alcaraz; S. Soto García; C. Bernal Mañas; A. García Andreo; I. Molina Martínez; M. Navarrete Lendínez. Servicio de Anatomía Patológica. Área de Patología Molecular. Hospital General Universitario Santa Lucía de Cartagena, Murcia, España. [email protected] Introducción y objetivos En los últimos años se ha determinado que la infección por el virus del Papiloma Humano es la principal causa de cáncer de cuello de útero y de neoplasia cervical intraepitelial. La infección por el virus del papiloma humano (VPH) es una de las infecciones de transmisión sexual más frecuente en nuestro medio. Se han encontrado asociados a la mucosa anogenital hasta cincuenta genotipos diferentes de VPH. La prevalencia media en España es del 8-9%. El objetivo del presente estudio es conocer la frecuencia de infección por VPH en mujeres que presentan lesiones citológicas y describir los genotipos de VPH más frecuentes en nuestro medio. Material y métodos Estudio retrospectivo de pacientes con algún resultado positivo para VPH, durante el periodo 2010 – 2013. La detección del VPH se realizó en pacientes con diferentes diagnósticos citológicos, tales como lesiones de significado incierto (ASCUS) y lesiones escamosas intraepiteliales de bajo y alto riesgo (LSIL y HSIL), pacientes con cribados previos positivos sin evidencia de lesión citológica y control de tratamiento. Durante el periodo de estudio se procesaron 2.738 muestras. Del total de muestras, en 2.061 se realizó la detección y genotipado de VPH mediante la técnica hibridación reversa en microarrays de baja densidad Clart® HPV (Genomica). Resultados De las 2061 muestras analizadas, un total de 1.165 (56.5%) fueron positivas para algún VPH y 896 (43.5 %) fueron negativas. De las muestras positivas para VPH, en 576 (49,44 %) muestras se detectó un único genotipo, mientras que en 589 (50,55 %) se documentaron coinfecciones. Del total de positivos, en un 83,94% de los casos se detectó algún genotipo de alto riesgo y en un 44,37% se detectó alguno de bajo riesgo. Los genotipos de alto riesgo más frecuentes fueron: VPH 16 (27 %), VPH 31 (12.5 %), VPH 51 (10.90 %), VPH 58 (8.4 %), VPH 66 (7.8 %), VPH 68 (6.3 %) y VPH 59 (6.3 %). El genotipo VPH 18 se encontró sólo en el 5,3 % de los casos. Los genotipos de bajo riesgo más frecuentes fueron VPH 6 (13,4 %) y VPH 84 (5,8 %). Conclusiones Como cabía esperar, en pacientes de origen clínico, la presencia de genotipos de alto riesgo es alto si se compara con pacientes derivados de un programa de cribado. Como evidencia este estudio, el VPH 18 no fue el segundo genotipo más frecuente tras el VPH 16. El VPH 16 resultó el genotipo más frecuentemente detectado. La coinfección de varios genotipos virales fue un hallazgo destacable en este estudio. C: P24 83 INFECCIONES POR EL VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO (VPH) DE ALTO Y BAJO RIESGO EN LESIONES DE DIFERENTE GRADO DE ALTERACIÓN HISTOLÓGICA J. GALÁN ROS; AL. Martín Rodríguez; A. Buendía Alcaraz; S. Soto García; C. Bernal Mañas; A. García Andreo; I. Molina Martínez; D.Torres Moreno. Servicio de Anatomía Patológica. Área de Patología Molecular. Hospital General Universitario Santa Lucía de Cartagena, Murcia, España. [email protected] Introducción y objetivos: El virus del papiloma humano es el principal causante de cáncer de cuello de útero en mujeres y es considerado un agente viral productor de enfermedades de transmisión sexual. Actualmente, el cáncer de cuello de útero, es la tercera causa de incidencia y cuarta causa de muerte en mujeres en todo el mundo y es responsable del 5,2% de todos los tumores en humanos, por ello, el conocimiento de su oncogénesis es altamente interesante y necesario. Nuestro objetivo ha sido analizar la frecuencia de las infecciones por el VPH de alto y bajo riesgo en lesiones de significado dudoso (ASCUS) o lesiones pre-neoplásicas (HSIL, LSIL). Material y métodos: Se ha realizado un estudio retrospectivo de 2395 citologías liquidas (Kit Lab Pack for PrepStain) durante el periodo de tiempo 2010-2013. Se analizaron 1794 muestras mediante una técnica de PCR- múltiple y posterior hibridación con sondas de captura específicas de cada virus a través de microarrays de baja densidad (CLART ® HPV2, Genómica), que detecta 35 genotipos de alto y bajo riesgo del Virus del Papiloma Humano (VPH). Los resultados se clasificaron en función del tipo de lesión: lesiones de significado incierto (ASCUS) y lesiones escamosas intraepiteliales de bajo y alto riesgo (LSIL y HSIL), Las variables a estudio fueron: clasificación patológica, VPH alto riesgo (+), VPH bajo riesgo (+) o VPH alto y bajo riesgo (coinfecciones). El análisis estadístico se llevo a cabo mediante el estadístico Chi-cuadrado. Resultados: De un total de 1794 citologías, 1012 fueron positivas (VPH alto riesgo o VPH bajo riesgo o VPH alto y bajo riesgo). Del total de las citología positivas (1012), fueron clasificadas previamente en 301 normales, 196 ASCUS, 144 HSIL, 348 LSIL y el resto no concluyentes. Del total de las coinfecciones (29,8%) por el VPH de alto y bajo riesgo, se clasificaron en 85 normales, 59 ASCUS, 38 HSIL y 115 LSIL. En cuanto al análisis descriptivo por infección exclusiva de alto riesgo (58,7%), se clasificaron previamente como 171 normales, 106 ASCUS, 105 HSIL y 197 LSIL. Las infecciones exclusivas de VPH de bajo riesgo (11,5%), se describieron previamente como 45 normales, 31 ASCUS, 1 HSIL y 36 LSIL. En los resultados estadísticos, el grado de lesión mostró una asociación estadísticamente significativas (p < 0.05) con el tipo de VPH detectado. Conclusiones: El cribado del VPH de alto riesgo y su genotipado, resulta fundamental en los protocolos ginecológicos de diagnóstico y tratamiento. Los métodos de biología molecular (PCR e Hibridación) son adecuados para el diagnóstico de VPH. Como demuestra éste estudio, se descarta la utilidad clínica de la determinación de VPH de bajo riesgo por su escasa implicación en lesiones prenoepláscias, por ello se recomienda que la mayor parte del cribado, se realice sólo con VPH de alto riesgo y genotipado (VPH 16 y 18). C: P25 84 85 86 MAP 87 DATA NETWORK CONNECTION Name (SSID): uclm-eventos Network authentication:WPA Data Encryption: TKIP Password: wdmXrGeL 88 NOTES 89 90
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