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Instructivo para la Citometría Hemática
Código: I-CIRB-AADC-03
Revisión: 02
Página: 1 de 5
Fecha de emisión: 12-Octubre-2012
Fecha de modificación: 18 de Agosto
del 2015
1.- OBJETIVO
Establecer los procedimientos necesarios para realizar correctamente la Citometría Hemática Completa que
ayude a una buena orientación diagnóstica.
2.- ALCANCE
Aplica para la prueba de Citometria Hematica Completa de la muestra de los pacientes que acudan al AADC.
3.- DESCRIPCIÓN DE LA OPERACIÓN
PROCEDIMIENTO DE LA CITOMETRIA HEMATICA COMPLETA
1.-Realizar la lectura automatizada.
2.-Realizar el frotis o extendido sanguíneo.
3.-Realizar la tinción de reticulocitos.
4.-Conteo plaquetario en caso de requerirse.
A).-METODO AUTOMATIZADO
1.-Conectar el equipo, esperar que haga el autolavado hasta que diga LISTO.
2.-Aspirar los 3 controles (bajo, normal y alto.)
3.-Verificar los parámetros de cada control
4.-Mezclar bien y aspirar la muestra por el analizador (Sysmex KX21)
5.-Transferir el reporte automatizado en la bitácora de CH.
6.- Al término de pasar las muestras en el equipo se presiona el botón selección y luego standby
7.-Presionar el botón verde para activar el equipo si se desea seguir analizando muestras.
*APAGADO DIARIO:
1.-Presionar el botón Shudown
2.-Aspirar la solución de lavado (cloro puro).
3.-Esperar que complete todo el ciclo de limpieza
4.-Apagar el equipo.
B).-TINCIÓN DE WRIGHT (método de cubre objetos)
Es una tinción modificada del método de Romanosky, los colorantes ácidos se unen a los componentes
básicos de las células afines al citoplasma e inversamente los colorantes básicos son atraídos por los
componentes no ácidos, como el núcleo, es decir que esta tinción es la mezcla de un colorante ácido que es la
eosina y uno básico que es el azul de metileno, también llamados colorantes policromatófilos o neutros.
F-DGPLANEI-CC/GA-39/REV:01
Instructivo para la Citometría Hemática
Código: I-CIRB-AADC-03
Revisión: 02
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Fecha de emisión: 12-Octubre-2012
Fecha de modificación: 18 de Agosto
del 2015
Modo de preparación de la tinción de Wright.
Pesar 1.5gr de Wright (colorante) y diluirlo para 500 ml de metanol (frasco ámbar) mezclar continuamente para
disolver el colorante, tapar el matraz con papel aluminio para protegerlo de la luz.
1. Realizar el frotis o extendido sanguíneo ya sea de sangre periférica o medula ósea (M.O) dejar
secar.
2. Se colocan los frotis en forma horizontal sobre varillas de vidrio
3. Se fijan con metanol y dejar escurrir
4. Cubrir con colorante de Wright:
a. Para Sangre periférica: añadir el colorante y agua desionizada hasta la aparición de la
capa metálica, se espera 10 minutos aproximadamente.
b. Para M.O: añadir el colorante y agua desionizada hasta que aparece la capa metálica y
activar cronometro por 15 minutos.
5. Posteriormente se lava con agua corriente de la llave, se dejan secar al aire libre después
limpiar la parte posterior del frotis y observar al microscopio.
C).-TINCIÓN DE RETICULOCITOS
Introducción
La velocidad de la eritropoyesis se determina por el recuento de reticulocitos. Normalmente, menos del
1% de los glóbulos rojos (GR) más viejos son sustituidos por reticulocitos recién formados cada día.
Posteriormente el reticulocito tarda uno o dos días en transformarse en GR maduro (1 día en medula ósea y 1
día en sangre periférica). Por consiguiente, los reticulocitos constituyen el 0.5%-1.5% de todos los GR de una
muestra de sangre. Un recuento reticulocitario bajo en una persona que padece anemia podría ser indicativo de
una cierta incapacidad de la médula ósea para responder, quizá debido a un déficit nutricional, un déficit de
factor intrínseco o una leucemia. Un recuento reticulocitario elevado podría indicar una buena respuesta
medular a una perdida previa de sangre o hemolisis.
Material biológico: Aproximadamente 1 ml de sangre con EDTA
Reactivos (colorante para reticulocitos):
1 gr de Azul de cresil brillante,
100 ml de solución salina (NaCl 0.9%).
Preparación del reactivo Azul de Cresil brillante
Pesar 1gr de Azul de cresil brillante y añadir solución salina poco a poco. Mezclar bien hasta disolver.
Filtrar en un matraz de 100ml, y ajustar con solución salina c.b.p. 100 ml.
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Fecha de modificación: 18 de Agosto
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Método de la prueba
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Diluir partes iguales del colorante y sangre: 1 gota de sangre más 1 gota del reactivo.
Incubar 15 minutos a 37°C.
Realizar un extendido de sangre en un portaobjetos.
Contar 500 células y de esta cuenta (GR) sacar el porcentaje de reticulocitos.
Índice Reticulocitario:
IR= (Hto. Real/Hto. Ideal) x (% Retis / 1 + Fc)
D).- TÉCNICA DE CONTEO MANUAL DE PLAQUETAS
1. Se mezcla la sangre (tomada con EDTA) con suavidad durante 2 min. aprox.
2. Con la micropipeta de (GR) se aspira la sangre hasta la marca de 1.0 diluir hasta la marca de
101 con el Oxalato de Amonio al 1% (dilución 1:100)
3. Agitar vigorosamente por aprox. 1 minuto y dejar reposar mínimo 15 minutos de esta forma la
mezcla de la sangre y la hemólisis de los hematíes serán completados
4. Llenar la cámara de Newbauer con el contenido de las pipetas debidamente mezclado,
desechando las 3 primeras gotas de la micropipeta y la siguiente gota se pone en la cámara,
por un lado o en el canal.
5. Dejar reposar por 15 min. y en una cámara húmeda (caja de Petri con algodón húmedo) con
esto se facilita la sedimentación de las plaquetas y la cámara húmeda evita la evaporación del
líquido de la cámara de Newbauer.
6. Con ayuda del microscopio de contraste de fase se cuentan las plaquetas en la cuadricula
central destinada a la cuenta de GR (25 cuadros), calculando la cifra de plaquetas como sigue:
a. Plaquetas/mm³= # de plaquetas contadas por factor de dilución por factor de volumen
# De plaquetas contadas x 100
4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA
Código
Lugar de
almacenamiento
Nombre del documento
N/A
Manual de Operación Sixmex KX21 N
Laboratorio de AADC
N/A
Manual de Técnicas de Laboratorio de Hematología. 3ra. Ed.
Joan Lluis Vivas.
Laboratorio de AADC
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N/A
Capítulo de la Citometría Hemática. Libro Arguelles
Laboratorio de AADC
L-CIRB-AADC-02
Lineamiento para el manejo de Residuos Peligrosos Biológicos
Infecciosos (RPBI).
Laboratorio de AADC
P-CIRB-AADC-03
Procedimiento para realizar el análisis de muestras y entrega
de resultados.
Sherpoint
5.- CONTROL DE REGISTROS
Nombre del
registro
Lugar de
almacenamiento
Responsable de
su protección
Tiempo de
retención
Disposición de
los registros
Bitácora de
Citometría hemática
Laboratorio de
AADC
Química
1 año
Archivo muerto
Identificación
F-CIRBAADC-05
6.- GLOSARIO
6.1 .- SIGLAS
AADC.-Area de apoyo al diagnóstico clinico.
CH.-Citometria Hematica
6.2.-DEFINICIONES
Citometría Hematica.- Medición de células sanguíneas.
7.- CONTROL DE REVISIONES
Nivel de
revisión
01
Sección y/o
página
Todo el
documento
Sección 1
Descripción de la modificación y mejora
Se cambió el formato
Se modificó la redacción del objetivo
Fecha de modificación
18 de Enero del 2013
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Instructivo para la Citometría Hemática
02
Todo el
documento
Código: I-CIRB-AADC-03
Revisión: 02
Fecha de emisión: 12-Octubre-2012
Fecha de modificación: 18 de Agosto
del 2015
Se cambió el formato y se mejoró la redacción
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18 de Agosto del 2015
Nota: Ésta sección será utilizada a partir de la primera modificación a este documento. La revisión 00, se
mantendrá en blanco.
Elaboró
Revisó
Aprobó
QFB. Gabriela Alonzo Salomón
Técnico Académico
Dr. Jorge Zavala Castro
Director del CIR
Dr. Jorge Zavala Castro
Director del CIR
Las firmas avalan la responsabilidad de las personas que: elaboran el documento, revisan su
adecuación y aprueban para su implementación dentro del Sistema de Gestión de la Universidad
Autónoma de Yucatán.
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